JPS5931007B2 - 電気泳動用支持体片の脱色方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＰ紙、セルロースアセテートフィルム等の電気
泳動用支持体片の脱色方法に関するものである。

電気泳動法は血清等の体液の蛋白成分の分離定量法とし
て臨床検査の分野で盛んに用いられている方法である。

分析のプロセスは、Ｐ紙、セルロースアセテートフィル
ム等の支持体片に塗布された血清を泳動分離させ、次い
で支持体片上で分離された成分を染色し、更に支持体片
の血清成分以外の部分を脱色し、その後各成分の光学的
密度を濃度計で定量測定するという順序で行なわれる。
このような分析プロセスに対して電気泳動学会では標準
操作法を制定している。従来このような電気泳動法によ
る分析は総て人手で行なつている。

すなわち、血清を泳動分離させた支持体片を染色液中に
浸して染色し、次いで脱色液中に浸して分離成分以外の
部分を脱色するプロセスを人手で行なつている。しかし
、電気泳動法が広＜用いられるようになつて＜るのに伴
なつて検体数が増大し、特に研究所、大病院では一日に
非常に多くの検体の定量測定を行なう必要が生じてきた
。このために、人員の確保が必要となると共に比較的単
純な操作を多数回繰返すことによる人的誤差が生ずる可
能性が生じてきた。従つて、上述した分析操作を自動的
に行なう自動染色処理装置が望まれるようになつた。従
来の用手法による染色および脱色は各支持体片に対して
常に新しい染色液および脱色液を用いているので、これ
をそのまま自動化すると多量の染色液および脱色液が必
要となり、分析コストが高くなると共に染色液および脱
色液のための貯蔵スペースが大きく必要となり、装置が
大形となるといつた欠点が生ずる。

一方、染色液および脱色液の使用量を少なくすると、従
来の標準操作法の条件を満足できないものとなり、所要
の信頼度が得られないという欠点が生ずる。本発明者は
、このような欠点を除去し、電気泳動法における支持体
片の染色、脱色を標準操作法に準じて自動的に行なうこ
とができ、しかも染色液、脱色液の使用量を少なくする
ために染色を終つた各支持体片に、少なくとも１回脱色
液を変えながら複数回脱色液を供給して脱色する方法を
開発した。

このような脱色方法では、支持体片の搬送経路に沿つて
複数の脱色位置を設け、上流側の脱色位置で使用した脱
色液を下流側の脱色位置に供給するようにしているが、
そのために各脱色位置において脱色液の注入、排出を行
なわなければならない。

これは各脱色位置に対して各別のポンプを設けて行なう
こともできるが、ポンプの台数が多くなり、装置が複雑
で大形になると共に高価となる。また総ての脱色位置に
対して一台のポンプを設け、同時に注入や排出を行なう
こともできるが、この場合には大形のポンプが必要とな
ると共に脱色液間の混合が生ずる惧れがある。本発明の
目的は土述した欠点を除去し、一台の小形のポンプで、
脱色液間の混合を生ずることなく、複数の脱色位置での
脱色液の注入、排出を効率良く行なうことができる脱色
方法を提供しようとするものである。

本発明は、電気泳動法により成分を分離させ、染色液に
より染色した順次の支持体片を脱色するに当たり、順次
の支持体片を複数ｎ個所の脱色位置を経て一定の間隔Ｐ
で搬送し、それぞれ弁を介して各脱色位置の脱色液注入
部に連結された一台の脱色液吸排装置を、支持体片を前
記の間隔Ｐだけ搬送する毎に、前記弁を順次に切換えな
がらｎ回繰返して駆動して支持体片の搬送方向に見て下
流側の脱色位置で使用された脱色液を上流側の脱色位置
へ順次供給することを特徴とするものである。

次に図面を参照して本発明を詳細に説明する。

第１図は本発明の脱色方法を適用した自動染色処理装置
の一例の構成を線図的に示すものである。本例では、支
持体片１を、電気泳動法の中で現在最も広く用いられて
いるセルロースアセテートフイルムとする。第１図に示
すように、電気泳動分離された支持体片１を多数収納し
、かつ順次に１個ずつ送り出すことができる供給ラツク
２を設ける。各支持体片１は第２図に示すように、セル
ロースアセテートフイルム１ａの両側縁にプラスチツク
枠１ｂ，１ｃを取り付けた構造とする。供給ラツク２の
近傍に連続的に移動する無終端チエーン３を設ける。供
給ラツク２から送り出される順次の支持体片１はこのチ
エーン３の各区画内に装填され、プレート４上を順次に
矢印で示すように右方に送られる。このプレート４は第
３図に示すように両側縁４ａ，４ｂを僅かに突出させた
浅い樋状とする。従つて順次の支持体片１の枠１ｂ，１
ｃがこのプレート４の突縁４ａ，４ｂ上に乗つかつて案
内されることになる。プレート４は染色区間Ｓと、脱色
区間Ｄとを有している。

第３図はプレート４の染色区間Ｓを示し、この区間ＳＶ
ｃ卦いてプレート４には染色液注入孔ＳＩと、染色液流
出孔Ｓ１′とを形成する。

脱色区間Ｄに卦いても、同様の構造の注入孔と流出孔と
の組を５組Ｄｌ，Ｄｌ′；Ｄ２，Ｄ２′；・・・；Ｄ５
，Ｄ５２（第１図参照）設ける。第１図に示すように、
これらを支持体片１の移動方向に順次に配置する。また
プレート４の表面には注入孔Ｓ１と連通する条溝４ｃを
形成する。支持体片１が染色液注入孔Ｓ，の位置にくる
と、弁Ｂ１を閉じ、弁Ｂ２を開き、ポンプＰ１を働らか
せて、染色液槽Ｃ。

内の染色液を一定惜吸引する。次に弁Ｂ２を閉じ、弁Ｂ
１を開いてポンプＰ，を働かせ、吸引した一定惜の染色
液をプレート４の染色液注入孔Ｓ１から注入し、条溝４
ｃ内に充満させる。支持体片１とプレート４との間の間
隔は小さいから、注入孔Ｓ１から注入された染色液は毛
細管現象で支持体片１とプレート４との間に広がり、支
持体片１の全面に染色液が被着することになる。この染
色液は、その粘性｝よび表面張力によつて、支持体片１
とプレート４との間に保持されたま＼支持体片１の移動
に伴なつて移動し、染色液流出孔Ｓ１′の位置に達する
。支持体片１がＳ，からＳ，′まで移動する時間を、１
分３０秒〜３分の間の適当な時間に定め、この時間中に
規定の染色処理が行なわれるようにする。流出孔Ｓ１′
の位置に達すると染色液は流出孔Ｓ１′を経て流下し、
染色液槽Ｃ。中に戻る。このようにして染色液は循環し
ながら、順次の支持体片１を染色することになる。この
ように同一の染色液を多数の支持体片の染色に使用する
ことができるので、染色液の使用量は少なくて済み、染
色液槽ＣＯを容積の小さいものとすることができると共
に処理コストを下げることができる。染色液としては、
ホンソー３Ｒを６Ｃ！）のトリクロル酢酸水溶液に０．
４〜０．８％に溶解したものを用いる。プレート４の脱
色区間Ｄでは本発明の脱色方法による脱色操作が行なわ
れ、支持体片上に分離された血清成分以外の部分は脱色
される。本発明の脱色方法に卦いては、複数、例えば５
個の脱色液槽Ｃ１〜Ｃ５を設け、これら液槽中の脱色液
を１台のポンプＰ２によつて吸排し、順次の脱色位置で
順次の支持体片１に脱色液を被着し得るようにする。す
なわち、或る支持体片１に注目した場合、これが第１の
脱色液注入孔Ｄ，の位置にあるとき、弁Ｅ２を開いてポ
ンプＰ２を作動させ、第１の脱色液槽Ｃ１から一定験の
脱色液を吸引する。この場合、他の弁ｅ１ツｆ１ ？Ｆ
２ラｇ１ ？Ｇ２ツＨｌ，ｈ２，ｉｌ，ｉ２は総て閉じ
ている。次に弁ｅ１を開き、弁Ｅ２を閉じてポンプＰ２
を駆動し、脱色液注入孔Ｄ，から脱色液を注入する。注
入後弁ｅ１を閉じる。上述した染色区間Ｓにおけるのと
同様に、脱色液は毛細管現象により支持体片１とプレー
ト４との間に充満し、更に支持体片１と一緒に脱色液流
出孔Ｄ１′の位置まで移動し、ここから流出する。この
流出される脱色液は染色液により著しく汚染されている
から廃棄する。この支持体片１が第２の脱色液注入孔Ｄ
２の位置に来ると、弁Ｆ２を開き、ポンプＰ２を再び駆
動し、脱色液槽Ｃ２から一定量の脱色液を吸引する。次
に弁Ｆ２を閉じ、弁ｆ１を開いて吸引した脱色液を第２
脱色液注入孔Ｄ２を経て支持体片１とプレート４との間
に注入する。注入後弁ｆ１を閉じる。支持体片１が第２
の脱色液流出孔Ｄ２′の位置に来ると、支持体片１とプ
レート４との間に保持した脱色液を流出孔Ｄ２′を経て
流出させる。この脱色液は第１の脱色液槽Ｃ１に戻す。
以下、支持体片１が第３，第４，第５の脱色液注入孔Ｄ
３，Ｄ４，Ｄ５の位置に来たときに第３，第４，第５の
脱色液槽Ｃ３，Ｃ４，Ｃ５から脱色液を注入し、第３，
第４，第５の流出孔Ｄ３′，Ｄ４′，Ｄ５′を経て流出
させ、第２，第３，第４の脱色液槽Ｃ２，Ｃ３，Ｃ４に
戻す。第５の脱色液槽Ｃ５には新たな脱色液を補給する
ようにする。このように構成することにより、順次の脱
色液槽Ｃ１〜Ｃ５には染色液で汚染される程度の少ない
脱色液が収容されているため、きわめて少量の脱色液で
理想的な脱色操作が行なわれる。また、最終の脱色は新
鮮な脱色液で行なわれるので、染色液が支持体片に残存
することがなくなり、完全な脱色ができる。脱色液とし
ては、１〜３％の酢酸水溶液を用いる。

また支持体片１がＤ１からＤ１′，Ｄ２からＤ２′・・
・Ｄ５からＤ５′まで移動する時間が１〜２分となるよ
うにする。第１図の区間Ｋは加熱区間であり、ヒーター
５により加熱した空気を支持体片１に送り、乾燥する。

このようにして、染色，脱色，乾燥処理の終つた支持体
片１はプレート４の右端でプレート４から落下し、収納
ラツク６内に収納される。第１図において、染色液槽Ｃ
。内に収容された染色液はその量が徐々に減少すると共
に染色効果が低下する。従つて、例えばカウンターによ
つて検体数をカウントし、所定の検体数だけ処理した後
に、染色液を補給するか交替する必要がある。また第５
の脱色液槽Ｃ５内の脱色液も処理が進むにつれて減少す
るから、所定の検体数だけ処理した後に脱色液を補給す
るか交替する必要がある。第１図に訃いては、符号７で
示すプロツクがこのような機能を有するものである。第
４図は１台のポンプＰ２によつて脱色液の注入を行なう
場合、同時刻に弁の動作が重ならないようにするための
タイミングを示す線図である。

順次の支持体片１の移送間隔をＰとし、順次の脱色液注
入孔と流出孔との間隔ＤｌＤｌ′−Ｄ２Ｄ２′−Ｄ３Ｄ
３′＝Ｄ４Ｄ４′−Ｄ５Ｄ５′＝ｑとし、順次の脱色液
注入孔の間隔をＤｌＤ２＝１１ ，Ｄ２Ｄ３＝１２，Ｄ
３Ｄ４＝１３，Ｄ４Ｄ５＝１４とするとき、１１＝１２
二１３＝１４＝Ｍｐ＋−Ｐ ｎ のような位置関係をもたせることによつて弁が同時に開
くことを阻止することができる。

ここにＭ，ｎは正数であつて、ｍは支持体片１の移動速
度、装置の寸法等の設計要素によつて適当な値に選定さ
れ、ｎは脱色液注入孔の個数によつて定められる。電気
泳動学会によつて制定された標準操作法によれば、脱色
液を５回変える方法が推奨されているので、その場合に
は、ｎ＝５とすればよい。第１図｝よび第４図はｎ＝５
の例であり、支持体片群が右方へ移送されるものであり
、支持体片１−１に脱色液が注入された後、支持体片群
が百ｐたけ右方へ移動すると、支持体片１−２に脱色液
が注入される。更に百ｐだけ移動して支持体片１−３に
脱色液が注入される。

以下、支持体片がＳｐたけ移動する毎に支持体片１−３
，１−４，１−５に脱色液が注入される。更に−５Ｐだ
け移動すると、脱色液注入孔Ｄ１の位置に来る支持体片
１−１＊に脱色液が注入され、以下−５Ｐだけ移動する
毎に支持体片１−２＊，１−３＊，１−４＊，１−５＊
に脱色液が注入される。このように脱色液の注入タイミ
ングをずらすことにより、１台の比較的小型のポンプを
用いることができ、この場合、脱色液間の混合も起らな
い。これに対し総ての脱色液の注入を１台のポンプによ
り同時に行なうとすると大型のポンプが必要になると共
に脱色液の混合が起る惧れがある。上述したように、本
発明の脱色方法によれば、１台の小型の吸排ポンプによ
つて複数の脱色位置に対して脱色液を注入、排出するこ
とができ、しかも脱色液間の混合も防止することができ
る。

また、上流側の脱色位置で使用した脱色液を下流側の脱
色位置へ供給することができるので、使用する脱色液の
量を少なくすることができる。また、順次の支持体片に
対する脱色作用を均一とすることができると共に最終脱
色位置では新鮮な脱色液で脱色を行なうので支持体片上
に染色液が残存することがなく、完全な脱色が可能とな
る。土述したように本発明の脱色方法によれば少量の脱
色液を用いて電気泳動学会で推奨している標準操作法と
同等の良好な脱色を行なうことができ、したがつて処理
コストを低減することができる。

また、脱色液の使用量が少ないのでこれらの保守管理が
簡単となると共に貯蔵スペースを少なくすることができ
、したがつて装置全体を小形かつ簡単とすることができ
、安価とすることができる。しかも良好な脱色を高い信
頼度で自動的に行なうこともできるので、省力化、処理
能率の向上、誤差の低減等の利点も得られる。本発明は
上述した例にのみ限定されるものではなく、幾多の変更
を加え得ること勿論である。

例えば上述した例ではチエーン３を用いたが、ベルトそ
の他の適当な移送機構を用いることもできる。またチエ
ーン、ベルト等は必らずしも連続的に送る必要はなく、
間欠的に送ることもできる。また、上述の例では、染色
処理した支持体片１を収納ラツク６に落し込むようにし
たが、順次の染色処理した支持体片１を濃度計に直接送
り込んで光学的密度を測定して定量分析するようにする
こともできる。この場合には電気泳動法による分析定量
を行なう自動測定装置が得られる。更に染色液、脱色液
注入、流出機構も上述した例だけに限定されるものでは
なく、他の任意の注入、流出機構を用いることができる
。また上述した例では支持体片１には１検体分のフイル
ム１ａを収納したが複数の検体のフイルムを同時に収納
することもできる。またフイルム１ａは上述したように
枠１ｂ，１ｃで両側縁を挾んた構造とする必要はなく、
例えばブラスチツクケース内に収納することもできる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の脱色方法を適用した自動染色処理装置
の一例の構成を示す線図、第２図は第１図に示す自動染
色処理装置に用いる支持体片の構成を示す斜視図、第３
図は第１図に示す自動染色処理装置のプレートの構造を
示す斜視図、第４図は本発明の脱色方法に訃ける脱色操
作を示す線図である。 １・・・支持体片、２・・・供給ラツク、３・・・無終
端チエーン、４・・・プレート、５・・・ヒーター ６
・・・収納ラツク、Ｓ・・・染色区間、Ｄ・・・脱色区
間、Ｋ・・・乾燥区間、Ｐ１・・・染色液供給ポンプ、
Ｐ２・・・脱色液供給ポンプ、ＣＯ・・・染色液槽、Ｃ
１〜Ｃ５・・・脱色液槽。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 電気泳動法により成分を分離させ、染色液により染
   色した順次の支持体片を脱色するに当たり、順次の支持
   体片を複数ｎ個所の脱色位置を経て一定の間隔Ｐで搬送
   し、それぞれ弁を介して各脱色位置の脱色液注入部に連
   結された一台の脱色液吸排装置を、支持体片を前記の間
   隔Ｐだけ搬送する毎に、前記弁を順次切換えながらｎ回
   繰返して駆動して支持体片の搬送方向に見て、下流側の
   脱色位置で使用した脱色液を上流側の脱色位置に順次供
   給することを特徴とする電気泳動用支持体片の脱色方法
   。