JPS5810695B2 - 自動染色処理方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は自動染色処理方法、特にｐ紙、セルロースアセ
テートフィルム等の電気泳動用支持体片の自動染色処理
方法に関するものである。

電気泳動法は血清等の体液の蛋白成分の分離定量法とし
て臨床検査の分野で盛んに用いられている方法である。

分析のプロセスは、Ｆ紙、セルロースアセテートフィル
ム等の支持体片に塗布された血清を泳動分離させ、次い
で支持体片上で分離された成分を染色し、更に支持体片
の血清成分以外の部分を脱色し、その後各成分の光学的
密度を濃度計で定量測定するという順序で行なわれる。

このような分析プロセスに対して電気泳動学会では標準
操作法を制定している。

従来このような電気泳動法による分析は総て人手で行な
っている。

すなわち、血清を泳動分離させた支持体片を染色液中に
浸して染色し、次いで脱色液中に浸して分離成分以外の
部分を脱色するプロセスを人手で行なっている。

しかし、電気泳動法が広く用いられるようになってくる
のに伴なって検体数が増大し、特に研究所、大病院では
一日こ非常に多くの検体の定量測定を行なう必要が生じ
てきた。

このために、人員の確保が必要となると共に比較的単純
な操作を多数回繰返すことによる人的誤差が生ずる可能
性が生じてきた。

従って、上述した分析操作を自動的に行なう自動染色処
理装置が望まれるようになった。

従来の用手法による染色および脱色は各支持体片に対し
て常に新しい染色液および脱色液を用いているので、こ
れをそのまま自動化すると多量の染色液および脱色液が
必要となり、分析コストが高くなると共に染色液および
脱色液のための貯蔵スペースが大きく必要となり、装置
が大形となるといった欠点が生ずる。

一方、染色液および脱色液の使用量を少なくすると、従
来の標準操作法の条件を満足できないものとなり、所要
の信頼度が得られないという欠点が生ずる。

本発明の目的は、このような欠点を除去し、電気泳動法
における支持体片の染色、脱色を標準操作法に準じて自
動的に行なうことができ、しかも染色液、脱色液の使用
量を少なくすることができ、廉価な自動染色処理方法を
提供せんとするものである。

本発明の自動染色処理方法は、電気泳動法により成分を
分離させた複数の支持体片を順次に自動的に染色し、脱
色するに当たり、同一の染色液を複数の支持体片に対し
て繰返し用いながら、各支持体片に染色液を供給して染
色する工程と、染色を終った各支持体片を、前回使用し
た脱色液で脱色した後、新しい脱色液で脱色する工程を
含む複数回の脱色工程とを具えることを特徴とするもの
である。

次に図面を参照して本発明の詳細な説明する。

第１図は本発明自動染色処理方法を実施する装置の一例
の構成を線図的に示すものである。

本例では、支持体片１を、電気泳動法の中で現在最も広
く用いられているセルロースアセテートフィル。

ムとする。

第１図に示すように、電気泳動分離された支持体片１を
多数収納し、かつ順次に１個づつ送り出すことができる
供給ラック２を設ける。

各支持体片１は第２図に示すように、セルロースアセテ
ートフィルム１ａの両側縁にプラスチック４枠ｌｂ、Ｉ
ｃを取り付けた構造とする。

供給ラック２の近傍に連続的に移動する無終端チェーン
３を設ける。

供給ラック２から送り出される順次の支持体片１はこの
チェーン３の各区画内に装填され、プレート４上を順次
に矢印で示すように右方に送られる。

このプレート４は第３図に示すように両側縁４ａ、４ｂ
を僅かに突出させた浅い樋状とする。

従って順次の支持体片１の枠１ｂ、ｌｃがこのプレート
４の突縁４ａ、４ｂ上に乗っかって案内されることにな
る。

プレート４は染色区間Ｓと、脱色区間りとを有している
。

第３図はプレート４の染色区間Ｓを示し、この区間Ｓに
おいてプレー１４には染色液注入孔Ｓ１と染色液流出孔
８１′とを形成する。

脱色区間りにお。いても、同様の構造の注入孔と流出孔
との組を５組Ｄ１．ＤにＤ２．Ｄ月・・・Ｄ５．Ｄ；（
第１図参照）設ける。

第１図に示すように、これらを支持体片１の移動方向に
順次に配置する。

またプレート４の表面には注入孔Ｓ１と連通ずる条溝４
ｃを形成。

する。

支持体片１が染色液注入孔Ｓ１の位置にくると、弁Ｂ１
を閉じ、弁Ｂ２を開き、ポンプＰ１を働らかせて、染色
液槽Ｃ６内の染色液を一定量吸引する。

次に弁Ｂ２を閉じ、弁Ｂ１を開いてポンプＰ１を働かせ
、吸引した一定量の染色液をプレート４の染色液注入孔
Ｓ１から注入し、条溝４ｃ内に充満させる。

支持体片１とプレート４との間の間隔は小さいから、注
入孔Ｓ１から注入された染色液は毛細管現象で支持体片
１とプレート４との間に広がり、支持体片１の全面に染
色液が被着することになる。

この染色液は、その粘性および表面張力によって、支持
体片１とプレート４との間に保持されたまＸ支持体片１
の移動に伴なって移動し、染色液流出孔８１′の位置に
達する。

支持体片１が８１から８１′まで移動する時間を、１分
３０秒〜３分の間の適当な時間に定め、この時間中に規
定の染色処理が行なわれるようにする。

流出孔８１′の位置に達すると染色液は流出孔Ｓ′１を
経て流下し、染色液槽Ｃ６中に戻る。

このようにして染色液は循環しながら、順次の支持体片
１を染色することになる。

このように同一の染色液を多数の支持体片の染色に使用
することができるので、染色液の使用量は少なくて済み
、染色液槽Ｃｏを、容積の小さいものとすることができ
ると共に処理コストを下げることができる。

染色液としては、ポンプ−３Ｒを６％のトリクロル酢酸
水溶液に０．４〜０．８％に溶解したものを用いる。

プレート４の脱色区間りでは脱色操作が行なわれ、支持
体片上に分離された血清成分以外の部分は脱色される。

本例装置では、５個の脱色液槽Ｃ１〜Ｃ５を設け、これ
ら液槽中の脱色液を１台のポンプＰ２によって吸排し、
順次の脱色位置で順次の支持体片１に脱色液を被着し得
るようにする。

すなわち、成る支持体片１に注目した場合、これが第１
の脱色液注入孔Ｄ１の位置にあるとき、弁ｅ２を開いて
ポンプＰ２を作動させ、第１の脱色液槽Ｃ１から一定量
の脱色液を吸引する。

この場合、他の弁ｅ１．ｆ１．ｆ２２ｇ１２ｇ２．ｈ１
．ｈ２，１０゜１２は総て閉じている。

次に弁ｅ１を開き、弁ｅ２を閉じてポンプＰ２を駆動し
、脱色液注入孔Ｄ１から脱色液を注入する。

注入後弁ｅ１を閉じる。上述した染色区間Ｓにおけるの
と同様に、脱色液は毛細管現象により支持体片１とプレ
ー１へ４との間に充満し、更に支持体片１と一緒に脱色
液流出孔Ｄ０′の位置まで移動し、ここから流出する。

この流出される脱色液は染色液により著しく汚染されて
いるから廃棄する。

この支持体片１が第２の脱色液注入孔Ｄ２の位置に来る
と、弁ｆ２を開き、ポンプＰ２を再び駆動し、脱色液槽
Ｃ２から一定量の脱出液を吸引する。

次に弁ｆ２を閉じ、弁ｆ１を開いて吸引した脱色液を第
２脱色液注入孔Ｄ２を経て支持体片１とプレート４との
間に注入する。

注人後弁ｆ１を閉じる。

支持体片１が第２の脱色液流出孔Ｄ２′の位置に来ると
、支持体片１とプレート４との間に保持した脱色液を流
出孔Ｄ２′を経て流出させる。

この脱色液は第１の脱色液槽Ｃ１に戻す。

以下、支持体片１が第３、第４、第５の脱色液注入孔Ｄ
３．Ｄ４．Ｄ５の位置に来たときに第３、第４、第５の
脱色液槽Ｃ３，Ｃ４，Ｃ５から脱色液を注入し、第３、
第４、第５の流出孔Ｄ３′。

Ｄ４’、Ｄ５’を経て流出させ、第２、第３、第４の脱
色液槽Ｃ２，Ｃ３，Ｃ４に戻す。

第５の脱色液槽Ｃ５には新たな脱色液を補給するように
する。

このように構成することにより、順次の脱色液槽Ｃ１〜
Ｃ５には染色液で汚染される程度の少ない脱色液が収容
されているため、きわめて少量の脱色液で理想的な脱色
操作が行なわれる。

脱色液としては、１〜３％の酢酸水溶液を用いる。

また支持体片１がＤｌからＤ１′、Ｄ２からＤ２′・・
・Ｄ５からＤ５′まで移動する時間が１〜２分となるよ
うにする。

第１図の区間には加熱区間であり、ヒーター５により加
熱した空気を支持体片１に送り、乾燥する。

このようにして、染色、脱色、乾燥処理の終った支持体
片１はプレート４の右端でプレート４から落下し、収納
ランク６内に収納される。

第１図において、染色液槽Ｃ０内に収容された染色液は
その量が徐々に減少すると共に染色効果が低下する。

従って、例えばカウンターによって検体数をカウントし
、所定の検体数だけ処理した後に、染色液を補給するか
交替する必要がある。

また第５の脱色液槽Ｃ５内の脱色液も処理が進むにつれ
て減少するから、所定の検体数だけ処理した後に脱色液
を補給するか交替する必要がある。

第１図においては、符号７で示すブロックがこのような
機能を有するものである。

第４図は１台のポンプＰ２によって脱色液の注入を行な
う場合、同時刻に弁の動作が重ならないようにするため
のタイミングを示す線図である。

順次の支持体片１の移送間隔をｐとし、順次の脱色液注
入孔と流出孔との間隔Ｄ１Ｄ１′−Ｄ２Ｄ２′−Ｄ３Ｄ
３′＝Ｄ４Ｄ４′−Ｄ５Ｄ５′−ｑとし、順次の脱色液
注入孔の間隔をＤＩＤ２−４１．Ｄ２Ｄ３＝ム２．Ｄ３
Ｄ４−４３．Ｄ４Ｄ、＝４．とするとき、 ４１＝４２＝ｇ３＝１４＝ｍｐ＋１／ｎｐのような位置
関係をもたせることによって弁が同時こ開くことを阻止
することができる。

ここにｍ。ｎは正数であって、ｍは支持体片１の移動速
度、装置の寸法等の設計要素によって適当な値に選定さ
れ、ｎは脱色液注入孔の個数によって定められる。

電気泳動学会によって制定された標準操作法によれば、
脱色液を５回変える方法が推奨されてしるので、その場
合には、ｎ−５とすればよい。

第１図および第４図はｎ＝５の例であり、支持体片群が
右方へ移送されるものであり、支持体片１−１に脱色液
が注入された後、支持体片群が１１５ｐだけ右方へ移動
すると、支持体片１−２に脱色液が注入される。

更に１１５ｐだけ移動して支持体片１−３に脱色液が注
入される。

以下、支持体片が１１５ｐだけ移動する毎に支持体片１
−３，１−４．１−５に、脱色液が注入される。

更に１１５ｐだけ移動すると、脱色液注入孔Ｄ１の位置
に来る支持体片１−〆＊に脱色液が注入され、以下１１
５ｐだけ移動する毎こ支持体片１−２米、１−３搭、１
−４米、１−５米に脱色液が注入される。

このように、脱色液の注入タイミングをずらすことによ
り、１台の比較的小型のポンプを用いることができ、こ
の場合、脱色液間の混合も起らない。

これに対し総ての脱色液の注入を１台のポンプにより同
時に行なうとすると大型のポンプが必要になると共に脱
色液の混合が起る惧れがある。

上述したように本発明の自動染色処理方法によれば少量
の染色液および脱色液を用いて電気泳動学会で推奨して
いる標準操作法さ同等の良好な染色および脱色を行なう
ことができ、したがって処理コストを低減することがで
きる。

また、本発明の方法を実姉する自動染色処理装置こよれ
ば、染色液および脱色液の使用量が少ないのでこれらの
保守管理が簡単となると共に貯蔵スペースを少なくする
ことができ、したがって装置全体を小形かつ簡単とする
ことができ、安価とすることができる。

しかも良好な脱色および染色を高い信頼度で自動的に行
なうことができるので、省力化、処理能率の向上、誤差
の低減等の利点も得られる。

本発明は上述した例にのみ限定されるものではなく、幾
多の変更を加え得ること勿論である。

例えば上述した例ではチェーン３を用いたが、ベルトそ
の他の適当な移送機構を用いることもできる。

またチェーン、ベルト等は必らずしも連続的に送る必要
はなく、間欠的に送ることもできる。

また、上述の例では、染色処理した支持体片１を収納ラ
ック６に落し込むようにしたが、順次の染色処理した支
持体片１を濃度計に直接送り込んで光学的密度を測定し
て定量分析するようにすることもできる。

この場合には電気泳動法による分析定量を行なう自動測
定装置が得られる。

更に上述した例では１台のポンプによって５回の脱色液
注入を行なうようにしたが、例えば５個のポンプを設け
ることもできる。

この場合にはこれら５個のポンプを同時に駆動すること
ができる。

また染色液、脱色液注入、流出機構も上述した例だけに
限定されるものではなく、他の任意の注入、流出機構を
用いることができる。

また上述した例では支持体片１には１検体分のフィルム
１ａを収納したが複数の検体のフィルムを同時に収納す
ることもできる。

またフィルム１ａは上述したように枠１ｂ、１ｃで両側
縁を狭んだ構造とする必要はなく、例えばプラスチック
ケース内に収納することもできる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明自動染色処理方法を実施する装置の一例
の構成を示す線図、第２図は第１図に示す自動染色処理
装置に用いる支持体片の構成を示す斜視図、第３図は第
１図に示す自動染色処理装置のプレートの構造を示す斜
視図、第４図は第１図に示す自動染色処理装置における
脱色操作を示す線図である。 １・・・・・・支持体片、２・・・・・・供給ラック、
３・・・・・・無終端チェーン、４・・・・・・プレー
ト、５・・・・・・ヒーター、６・・・・・・収納ラッ
ク、Ｓ・・・・・・染色区間、Ｄ・・・・・・脱色区間
、Ｋ・・・・・・乾燥区間、Ｐ、・・・・・・染色液供
給ポンプ、Ｐ２・・・・・・脱色液供給ポンプ、Ｃｏ・
・・・・・染色液槽、Ｃ１〜Ｃ５・・・・・・脱色液槽
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 電気泳動法により成分を分離させた複数の支持体片
   を順次に自動的に染色し、脱色するに当たり、 同一の染色液を複数の支持体片に対して繰返し用いなが
   ら、各支持体片に染色液を供給して染色する工程と、 染色を終った各支持体片を、前回使用した脱色液で脱色
   した後、新しい脱色液で脱色する工程を含む複数回の脱
   色工程とを具えることを特徴とする自動染色処理方法。