JPS59146599A - バクテリアの存在を調べる方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 病院の微生物学研究所に於ては、患者の体液、特に血液
中にバクテリアか存在することを調べることが通常行な
われている。ブロス（ｂｒｏｔｈ）を入れたビン（所謂
「血液培養ビン」）を用し）ることが昔から行なわれて
εす、と利用のコ゛ム栓を通して少：ｉｌ・の血液を注
入し、史にこのヒ゛ンを３７″Ｃで保ｒｌｉＡ　Ｌ／、
バクテリアの培養を調べるため（こ毎日、培養孜中の故
かな濁りを観察するのである。該方法に於ては、微生’
ｌ’／Ｊによっては最低３日力）ら２０日の日数を要す
る一方、その結果は大部分の試料か陰性となるため、非
常に報われな（入力法である。

培養が始まった試料の入ったビンを出来るだけ早く発見
して少ｔｉｋのブロスを取り出し、従来の方法によって
’：；１　／、ＩＥ、＠の存在を確認するのである。陽
性の試料か入ったビンをより早く選択して取り出すこと
かてき些ば、大きな前進となるであろう。

この必要性に応えるべく、バクテリアの培養をｋだべる
仕事を機械化やオートメーション化する試みが行なわれ
ている。バクテリアの培α中に生じる種々の切理的パラ
メータの変化をモニターすることにより、バクテリアの
培養を調べる装置ｉ５ｉは小側され人手することかでき
る。これらパラメータの）５施例として棉電率とインピ
ーダンスの変化が・ｉげられる。

他に、マイクロスケール上の代謝産物をｉｉｌ・ｊ定す
るＺ　Ｆｍかあり、表示されたグルコースとアミノ・便
から分離し１こ　Ｃの量を測定する。これら様（洋１］
、−変化を調べるに：工信号を増幅するための（ｕ　＋
、ｒ。

ｆｊ電子装置コ、を必要とする。必要とする設も１°Ｉ
Ｉは高：；ＩＨであるし、所６ｉ１「ブランクボックス
」を徴生゛面学に取り入れることは必すしも良いことで
はないと一般；こは考えられている。

本発明はバクテリアの培養によって生じる圧力の変化を
検出することを原理とするものである。

従って本発明に於てはバクテリアの培養によって圧力が
変化する培養基を調製することか必要となる。望ましい
実施例に於て、本発明はどんなα子装置も必要とするこ
とな（、圧力の変化を視覚で認識することのできるｍ〕
単な注射器装置を提供するものである。

本発明は試料中のバクテリアの培養を調べる方法を提供
するものであって、田封された容器の中にバクテリアの
存在しない培養基を入れ、その培に基の中に試料を装入
し、試料中のバクテリアが培養したことを表わした容器
内の圧力変化を観察するものである。

本発明は史に、バクテリアの存在を調べる装置；″−提
１ノ（するものであって、該装置はバクテリアの１、・
”　”　’Ｈ’　Ｊ７’（養〕Ｉｋを容れたｇ閉容器、
試料を容器に装入するための手段、及び容器内の圧力変
化を検出するだめの手段とから構成されている。

本発明の方法と装置は次の如く種々の適用か可７１亡で
ある。

１ａ）　　上記の通り、試料中にバクテリアが存在する
ことを調べること。試料として血液又はりに等の他の体
液を用いることができる。その他、牛乳や他の飲料も試
料に用いることかできる。圧力変化によって試料中にバ
クテリアが存在することを知ることかできる。

（ｂ）　　Ｂ’ｊ生物が抗菌剤（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ
ｉａｌ　ａｇｅｎｔ　）に対して敏感１こ反応する７１
１）否かを決めること。この場合、微生物及び抗１衣？
ｌ’ｌＪを両方共密ｉｌｌされた容器の中に入れ、圧力
変化によって微生窃か反応しないことを知ることかでき
る。

（Ｃ）試料中に抗菌剤が存在することを調べること。

この場合、圧力変化によって抗ｉ＆４剤か存在しないこ
とを知ることかできる。

（ｄ）　　存在する微生窃又は抗菌剤か何であるかをｕ
ｉｌｉ認すること。

以下の記載は主として１γＪ記ｔａ＋を対ゑとしている
。

密閉容器の種類又は性質は重要ｆＳことでない。

容器は便宜上、計等で突き通ずこと力１１丁能て目一つ
オートクレーブ処理がＩ＋Ｊ能１ｊ≦閉只て甜閉された
プラスチック若しくはガラス製のビン又は蘂ひんを用い
ている。容器のブイズは、試料を入れた後その内部のい
７：１）１ｊる圧力の変化（バクテリアの培をの結果に
よる）をも容易に検出することのできるように」−ｊ＄
ボスペース十分小さなものとしている。

培庁は好気性又は嫌気性のどちらの条件でも行うことが
できる。微生窃か存在することを確実に検出するためｌ
こ、同一の試料を両方の条件で培養する必要性かしばし
ば生じる。

もしバクテリアの培養がガスを発生せず或はガスを吸収
せずに行なわれるのであれば、圧力変化は生しｒ、ｆい
であろうし、本発明の方法及び装置を用いることはでき
ない。

従って、バクテリアの培養には必す圧力変化を１′：′
−うという１」；Ｊ提のもとにバクテリアの培６：Ｍを
調裏する。バクテリアのＪ８養は、酸化作用によるより
はむしろ発酵作用によって行なわれ、ガスが発生して圧
力増加するのか望ましい。

全てのバクテリアに対してこれらのｈ（、Ｑを満足させ
る・１’ｆ；　ａ　）ｉｋを調製することは多分可能で
はないか、一般的に遭遇する病原体バクテリアの全てに
対して培近基を調製することは出来る。必要に応じ、試
料中に存在すると考えられる異なったｔ！ｒｉ類のバク
テリアを検出するために、異なる培養話を調製すること
もできる。

下記の原理を用いること（こより、バクテリアが存在す
ると２４７２ｉｉケ＋ｔｉＪの）１゛て往によってＩ：
ｉＬ液サンプルからバクテリアか分スＷされて圧力増ノ
１」すせることのできる；ｔ゛τ養ノ占を１．！１°１
ｊ　ツｌすることかてさる。

バクテリアは好気性生別、嫌気性生物又は寄生の嫌気性
生物いずれでもＬ：Ｊ　Ｌ　）。４婬丞は通常の八木構
成要素（ペプチド、アミノ！没、仄水１’Ｌ　’ｌ’＞
Ｊ　＋　　ｂ的な培づε要素）（こ加え、次のものを含
んでいる。

＋ａＪ　　ピルビン７ナトリウム（Ｓｏｄｉｕ＋ｎ　ｐ
ｙｒ＝＋ｖａＬｅ　）。

これはエネルギー源となり、カタラーセ反応；、＝関わ
りどんな超酸化吻をも分解する。

ｔｂｌ　　メナジオンと琥珀酸ナトリウム。これらはバ
クテロイデス（幾気性感グ５に１５いて重要な病原体）
の培養に重要であって特定の微生窃の培養を速やかに行
なわしめるための代−ＡＩ　Ｌ吻の実施例である。

（Ｃ１硝酸カリウム。これを用いることによって嫌気性
条件の微生物は窒素その他関連ガスを発生し、全体の圧
力は正圧になる。これはプソイドモナス菌について特に
１■を要である。プソイドモナス宋は好気性条件におい
てよく培養されるが上部スペースｖ１俊素を沃い果たし
てしりつと負ｊ王に、−ってしまう。

１、（１：　　ゼラチン。これは（九ｆ＋ｉｉ体（ａｎ
ｔ　ｉ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙａｇｃｌｌｔｓ）
のどんｆｉ　ＩＩＪ性効果も消す役割を果たす。

□、（゛）　　チオグリコール酸ナトリウム（５ｏｄｉ
ｕｍｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ　）及びジ−チオト
レイトール（ｄｉ−ｔｈｉｏｔｌ＋ｒｅｉｔｏｌ　）。

これらは溶液の酸化還元１Ｌ・（Ｌ　（］＜Ｐ　／こレ
ベル（！１ｉｊｊ且好気性生吻の培養にとって１（り１
ｊ市１ｌｌ）（’Ｑ還元状！ざを供給する）に下ける。

ｉｆ）　　屯次設ナトリウム。これは培養基内の培養刺
激剤として二重化炭素を供給する。全ての目的にかｆＪ
う実施例として次のものを処方することがでさる（単位
は７／ｌ）。

リン酸塩緩衝剤　　　　０．２８８ 大豆トリプトン液　　　１０．０ ペプトンゼラチン　　１００ イーストＩＭ′４抽出吻　　　５０ 肉抽出物　　　　　５０ グルコース　　　　　１．０ 塩化ナトリウム　　　８０ Ｌ−アルギニン　　　１０ ピルビン酸ナトリウム　　　　　　１０メナンオン　　
　　　０．００５ ゼラチン　　　　１０ チオグリコーノ暖ナトリウム　　　０５ＪＭ酸ンステイ
７　　０４ 重炭酸ナトリウム　　０４ 塩化アンモニウム　　　ｏ、ｏｏｓ ジ−チオトレイトール　　　０．２ 硫酸アデニン　　　０．０１ 琥工白酸ナトリウム　　　０．０１ ｉｉ！’ｌ　を便カリウム　　　２０ （−浦掟マグ不ンウム　　　０．００Ｂスルホン故ポリ
アイ、トールナトリウム　０，３（ＳＯｄｉｔｒｎ　ｐ
ｏｌｙａｎｅｔｈｏｌ　　５ｕｌｐｈｏｎａｔｅ）ｐＨ
７，０ 理論とはどんな種類の圧力インジケータ装置を用いても
、バクテリアの培養によって生じる容器内の圧力増加を
検出することかできる。例えば、ビンの密閉具に皮下注
射用針を突き刺し、該針に連繋した圧カドランスデュー
サを用いて圧力変化を電子的に測定することができる。

或は又、皮下注射用針に対してコイル状に平たく巻いた
一ｒ：ｒを用い、視覚を通じて圧力変化を検知すること
もでさる。この場合、圧力が増加すると巻いた伐−か解
けるようになっている。

もう１つの圧力インジケータ装置として、ビンの１ぞｉ
：ｆｉ見に皮下注射用針を欠き刺し、該針齋こ連繋した
注射２：；が７％けられる。圧力か増加するとピストン
か作動し／リンダーを持ち上けるのである。

シリング−か＋４ｉち−ヒけられると、ピストン下方の
７リングー内の容積には容器からのガスで充満すること
になる。然し乍ら、望ましい実施例に於て皮下ｄミ射用
針は容器内の液体の表面下まで伸び−でおり、圧力が増
加すると液体は押し上げられてシリンダー内に入るため
、分析用に必要な試料を注射″／：；の中に自動的に供
給することかできる。この場合、／リングー内を化１動
するピストンに代えてＵ射器内の液体上部にフロートを
配Ｖｉｉｉ　Ｌ、１亥フロートをインジケータとして用
いることもでさる。

以下、図面１こ示す天泥例に八ついて７２発１ｊ＞Ｊを
只Ｇ；：的１こ説明する。

第１図１こ於て、ガラスビンＪＯ：　：：計等を又き刺
すことか一１能で且つオートクレーブ処理かｒ＋１能’
１ｆｎ１（′ｊ只（１２：によってδ、２閉され、５　
Ｑ　ｒｒ、ｌ　５：）バクテリア培６　）Ａか入れられ
ており、この措ｊ　／：！、の中に；まバクテリアを含
んでいると考えられる）ｊどλのサノブルか入れられて
いる。皮下庄−ｊ；ｉ４　ｆ；：　ノ！Ｊノグー１６、
ピストン４１８）及び皮下注射針Ａ、から１１′１′、
ｌ戊すｚｔている。

／リングー：こはバクテリアの７ノルターか取すイ・［
けられた側に小さな排気−１２２・（ｔ、；７！示せす
）か設ニブられている。ピストンはむ・１２０を介して
マーカ一式・と繋かっＣおり、辰マーカー（″！ピスト
ンか不啼太用状！古にあるときはｌｊｔ’：　ｌ−１：
：が：部’２８：　ｌこ修：まる。マーカーは視覚にて
容易に認系てきるように赤色に６色されている。フサに
応して、位置決ｙ）装置（図示せず）を栓（１ｚの］二
に配ｊｉｆｉ　シ、皮下江射器を確実にビン１１０！　
、Ｊ二部の中心部に配置することもできる。皮下仕割針
２０）は活閉具ｉ１２＋を点適してビ刈１ｑの中へ挿入
され、その先号１．１は液体議の表置Ｆとプｊるよう１
こしている。バクテリアの培６かビンの中で行１ｊわれ
ると　、Ｊ二ｍ空間−にノＪ５・・てガスか冗ｌｔシ、
このガス１こよって液体は針の上へ持ち上けられ、皮下
注射％１↓の、３１１の力へ送られる。次竜こ、ピスト
ン１」秒か持ち」−けられてマーカー−６、・かンリン
ダー：、１６１の上部から呂６つ、ら、マーカーを視覚
で認識することかでさる。

ヒンノ）中て発生ずるガスか多すきる場合は、排気ｂｌ
　？２，２　ｒｒ７己・：１基ｊしであるル）ら、ピス
トンか７リンダーよＳノ７モひｊ！するのを；ツノくこ
とかてきる。グ］、気機構ニーｔ、ヅと４−ｉ、する１
・ＩＬ発性品・］芹吻か蓄積することによって／１．シ
るとん／Ｌ　ｊノ牲の影響をも防ぐことにもなる。

１視示５れγニビンは、多数の他のビンと一緒に培促か
行ζわれている。Ｂ常の検五に於いては、研究所所員は
マーカー３１を観察するたけでそのビンにバクテリアか
存在することを知ることかできゐ。

次に注射器を取り出し、既に採取された試料（２）を分
析（こ供することができる。

試料（３１）は注射器の中で１週間又はある場合にはそ
れ以上長く生きているが、ビンの検で「は少なくとも毎
日性なうことか望ましく、試料は分析を行なうために出
来るだけ早く取り出すことか申ましい０ 第２ａ図及び第２ｂ図に示す装置は、圧力か増加してビ
ンから強制的【こ送り出された液体・ｊ）を保持するた
めの密閉容器以外は第１図（こ示した装置と同様である
。すなわち、ピストンがシリング−内をｆ；り動するの
ではなく、上部か開口した容器内に屈曲自在なダイアフ
ラムか配Ｘ＋ｒｉｉされている。第２ａ図及び第２ｂ図
の装置はバクテリアの居ない培養基の損失をできるだけ
避けることかできる利点かある。両園）こ於いて同し部
品には同じ符号か伺されている。

第２ａ図及び第２ｂ図に於て、ガラスビン・、１０）は
針を突き！ｉｌすことが１ｉＪ能でオートクレーブ処理
がｉ＋Ｊ能な密閉４，４．４７．によって密封され、ビ
ンの中には５０ｒｒｌｌのバクテリア培養基ｔ１４１が
入れられており、この培養基の中にはバクテリアか含ま
れていると思われる血液のサンプルか入れられている。

圧力インジケータ装置は容器部をｖｌｏｌｌえており、
該容器は上Ｊ１１，１と下’！：ｈｉが開口し、水平方
向に伸ひる屈曲自在なダイアフラムによって２つに分割
されている。

屈曲性のダイヤフラム困の」二には軸＋２４１を支持す
るディスク１４０）か載仕られ、軸−４）の上端部（よ
容器部の上部に設けられた開１」部、１４１に緩く嵌ま
っている。

軸・２・ｐには一方向ロツク（４６）が設けられており
、該ロックによって軸は開Ｌ１部１４４）から容易に上
方へ通過することかできるか、−４ｊ−開１」部を通っ
てしまうと（出発的にＩＪＩ　ＩＪ部から下方へ落ちる
ことのないようにしている。軸はの上端部は容易に視覚
で認識できるように赤色に着色している。容器伽）の下
端部（こは皮下注射用針課）を配９１ｈシている。

Ｘｉ′Ｊ２ａ図に示されているように、皮下注射用針Ｎ
２０）は密閉具＋］２１を貫通し、針の先端はビン中の
液体の表向（４））より下方にくるまでビン（１０）の
中に挿入している。ディスク（４０）は軸の最下端部近
傍に設けられ、４：Ｊ、２１．）か１ｊｉｊ　Ｊ　’＋
ｕ　４４ｉからあまり突出しないようにして′、）る。

”ｆｓ　２　ｂ図ｉこ示されているように、バクテリア
の培谷：マビンの・やで行ｔｊわれ、」二３空ｌＵｊ　
・３Ｚにガスが発生−１こ２１．：こよって液体、３４
）が計の上へ持ち上げられて４谷！・の下部に送り込ま
れる。次にこのガスによってダイアフラムｔｉｔか■げ
られディスク１１０）を持ち上げるため、！・ｊ＋　１
２４！のＥ　ｌｉｊ部はＩＪｔｌ　１」部、４・１・か
ら視見によっでｉ、Ｓめることかでごろ。

１００図に示されているように、圧力インジケータ２置
をビンπλら取り外し、ｚ、、ｔ　、２１・の上シ、−
１：゛鄭：こＪ圧力をｊ：：４えることによって戒１不
謳１：；ワ下ｌｆ射ｔ＋　１Ｆノ０１を通ってＩ！１．
４秒の中へ入れられ、乞；るＪＵ（、５０ｔこ１尺する
ことかできる。軸外には手で、１−π力を加えることに
よって一方向ロツク（１６）の向きを変える。

第３図に於て、ガラスビン印）は）１を突き刺すことか
可能で且つオートクレーブ処理か可能ｆｊ、ぞ閉貝）１
２によって゛ど封されており、ボ：チ°ローＬ　ｊ、２
）１ま適所にて部付：ナリング・５４）で支持さ２ｔて
いる。ビンの内容：１トは５９ＣＣであって、培タブロ
ス３８−と血液５−の混合物を含りｊ゛シてし）る。そ
の池の試料を調べることかできるのは勿：命である。

圧力変化を検知する手段は、一般的には円筒状の容器Ｗ
を備えており、１咳容器は軸方向の小さな孔のを除いて
その上；１ｆ：　部は閉じており、その下端Ｂ　Ｓは・
前方向の、！ｌ！結呉ｆ坊と皮下注射針（口を除いて閉
じている。谷／ｎ’ｉ　：／ｉ）の上端部の外側にはイ
、ジ反が設けられ、該ネジにはキャップ１６Ｇ）か取り
付けられている。このキャップは孔・王の上方に載置し
た疎水性の故生吻、（」フィルターのを９１【１え軸方
向の小さな徘完・」ｌ７ｃＴｆ−設けている。

容器；の下−、’Ｌ１：　：Ｍ≦には円【二Ｊ状のスカ
ート部（７２Ｉを留１えて二ｔす１．該スカート部の一
＋ｈｉ部（こは内向きにリブ（７４１を形成している。

図示する如く、皮下注射針（口は１ぞ閉具５Ｚを貴通し
、リブ・、７りは締付はリングＱの下方てイｒｉＩＷ　
”Ｉ能に支持され、容器部）はビン６０１１こ固定され
る。

８４　Ｕ’；！はプラスチック利料から形成されており
、ラインｑωより上部は透明又は半透明とし、ラインＣ
１６）より上部は不透明としている。

容器１．５６）の容量は２０　ｔｎｌである。針（口の
長さは約１２〜１５ｒｎｌの液体が針を通ってビン１５
ａ）から容器缶へ入った後は針の下端部がビンの液面よ
り上になる長さに設定される。その後はガスのみが容器
郁）に流れ込む。これは液体が容器の中に入り過ぎ、あ
ふれ出る危険性を防ぐものである。

血液培養装置として使用する場合は、栄養ブロスの入っ
たビンのを思考のところへ運ひ、５ｍｌの血液を入れる
。これには２通りの方法かありどちらを選んでもよい。

１つの方法は微生物か存在しないエヤーベント付の針を
、もう１本の血液針を装入する前に密閉具■から挿入す
るのである。

もう１つの方法は、ビンの内部を減圧状態にコントロー
ル維持し、ビンの内部を２０ｒｎｌの血液の入っている
注射器に繋いだ時、−）！：際には患者の血管と直接繋
がった吋に、５　ｎＪの血液が採取され、ビンの内部は
大気圧状態におかれる。

ビンは研究所へ運び、ぎ閉具１５２）を殺菌剤で消毒し
針（色を挿入する。次に装置を好ましくは撹拌しながら
３７℃にて培養するのである。この温度上昇によって＋
１）期膨張が行なわれ、少量の液体が針ｔ［ｉＺを通っ
て容器缶へと送られるのであるが、この液体はライン命
より下方であって、容器の不透明部分で隠れている♂そ
の後、装置は定期的な検査に供される。容器１５Ｇ）の
液面がライン（刑より上がり試料中にバクテリアが存在
することを示すと、キャップωを取り外し、穴■を通し
てループ又は消甫済みの綿棒によって液体を採取する。

試料は顕徴税試験、直ＩＪＦ’抗生吻質感知試験に供し
たり、二次培養することができる。

次に本発明の天鳳例を示す。

実、・）ｉ　例　１ 一連のビンを準備し、各々には前述の記載の如く調製し
たバクテリアの培養拭５０．Ｊを入れ、針を突き刺すこ
とのできる密・閉呉で密封し、滅菌処理した。夫々のビ
ンには異なるバクテリアを含んだ試料を入れ、密閉具に
突き刺した皮下注射針に収り付けられた圧カドランスデ
ューサを用い、各ビンの、圧力を測定した。

ビンは次に１８時１田培養し、圧力を再び測定、した。

イぴられた結果は次のと３９である。

（任意単位）　（任意単位） （Ｎｃ＋５ｓｅｒ＋ａ　ｍｅｒ＋＋ｎｇ＋ｔｉｄｉｓ）
（任意単位）　　（任意単位） Ｊ、：す巳ヅ」２ −ｊ士のビンを躯υ：＋ｊ　Ｌ、各々には＋’ｚ７１述
の記載に従って、Ｊｌ’ｌ’、　’Ａ’Ｊしたバクテリ
アの培養基４５．ｎｔを入れ、針を突き＊１］すことの
できる密閉具で完封し、次に滅菌した。人々のビンには
異なる微生物を微：辻含有した血液サンプル５−を入れ
る。比較するための標ａｌ、Ｉ−ビンを併せて専、備し
、打準ビンの中（こは微生物か存在しない血〜液を同量
だけ入れる。

＼ゝ、 第１図に示す如く、排気孔のの上に棒ｔｌａｌを備えた
圧力インジケータ装置を、密〜１呉の中に突き刺し、各
々のビンの中へ（１［１人するのである。次にビンを培
養器の中に入れ、一定時間（３０分間）おいて平衡させ
た後、装置の基部に同けて棒的を押圧し圧力装置を密封
した。所定の時間出１　：・：Ａにて容器を観察し、石
仏したプランジャーか飛び出ずことを視覚にて観察した
。

試験結果は次のとおりである。

Ａ　　標σｌ（試料（ｆｆｎ液のみ）　　　５日間、認
きワられすＢ　　大１］シ１菌　　　　　　　　　　　
１３．Ｒｊ間

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係る装置の断面図である。 ′１Ｓ２３図、第２ｂｌズ及び第２Ｃ図は他の実施例の
・装置の断面図である。第３図は史に他の実施例の装置
の断面図である。 １１（１・・・ガラスビン　　　（１２）・・・密閉具
（挿・・・バクテリア−培養基 化・・・シリンダー　　　＋Ｉ８１・・・ピストン：２
０）・・・皮ドｔ］−射針 出４ゾＪ人　オクソイド　リミテッド Ｆｌｏ、２ａ　　　　　Ｆｌｏ、２ｂ ’４Ｂ Ｆｔｏ、２ｃ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　密閉容器の甲に入れた滅゛菌したバクテリア増＆　
   ｔ＝の中に試料を装入し、試料中でバクテリアが培養し
   たことを表わす容器内の圧力な化を観察することから構
   成されることを持家とするバクテリアの４在を調べる方
   法。 ■　バクテリアの培５　ｉ’５はペプチド、アミノ酸。 炭水化物及び一般的を培ｄ要素を含有°するとともに、
   史（こ （１）　　追加の工坏ルギー訝として供され、カタラー
   ゼ反応に寄与して一切の一故化物を分解するピルビン、
   吸ナトリウム、 ｆｂ）　　バタテロイデス属を培養するためのメナジオ
   ンと琥珀殴ナトリウム、 （Ｃ）　　ｍ生吻に消費され、嫌気性条件にてり素を発
   生させるための硝酸カリウム、 （ｄ）　　抗袖体のもたらす一切の毒性効果を消すだめ
   のゼラチン、 （ｅ）　　溶液中の酸化還元°題位Ｅｈを低いレベルに
   還元するためのチオグリコール酸ナトリウムとジチオト
   レイＩ・−ル、 （ｆ）　　二酸化炭素を供給するための重炭酸ナトリウ
   ム、 のうち少なくとも１種を含有している特許請求の範囲力
   １項に記載の方法。 ■　密閉容器は、針を貫通させることのできる密閉エー
   ジと、該心閉具を貫通した皮下注射針を備えるビンであ
   って、皮下注射針の中を液体か通過することによって圧
   力変化を１Ｉｊｌ！察することかできる竹！Ｆ請求の軸
   間Ｓ１項又は第２項に記載の方法。 ■　圧力増加によって液体の一部が針の中に押し込まれ
   ビンの中から出ていった彼、その液体は収り出されて次
   なる分析に供される特許請求の範囲第３項に記載の方法
   。 ■　滅菌したバクテリア培養基を含有している密閉容器
   と、試料を容器の中に装入するための手段と、容器内の
   圧力変化を検出するための手段とから構成されることを
   特徴とするバクテリアの存在を調べる装置。 ■　容器は、針を貫通させることのできる密閉具で密封
   されたビンである特許請求の範囲第５項に記載の装置。 ■　皮下注射針は密閉具を貫通しており、第２の容器が
   皮下注射針の出口と繋かつている特許請求の範囲第６項
   に記載の装ｒｌｆｔ　。 ■　圧力変化を検出する月二段は、液体かビンから′Ｓ
   ２の容器の中へ進入することを観察するための手段を備
   えている特許請求の範囲第７項に記載の装置。 ■　第２の容器は、ビンの中の圧力変化に応答して移動
   することのできるピストンを備えている特許請求の範囲
   第７　、ｉＪ″ｊ又はイＳ８．ＩＪ′Ｊに記載の装置。 ［相］　第２の８器は透明又は半透明の財貨から形成さ
   れ、一端部には皮下注射針か繋かり、池喘部に設けられ
   た開口部は疎水性の微生物フィルターを配ｔ＋ｉｉｉ　
   シたキャップで通常は田封されており、皮下注射針はビ
   ンの密閉具を貫通し、その開口＜１．１部は液面より下
   方の位置まで挿入されて０る特許；１ツ求の範囲第８項
   番こ記載の装置。