JPS59143587A - 固定化微生物菌体包括体の製造法 - Google Patents
固定化微生物菌体包括体の製造法Info
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- JPS59143587A JPS59143587A JP1851583A JP1851583A JPS59143587A JP S59143587 A JPS59143587 A JP S59143587A JP 1851583 A JP1851583 A JP 1851583A JP 1851583 A JP1851583 A JP 1851583A JP S59143587 A JPS59143587 A JP S59143587A
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- Japan
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- microbial cell
- gel
- glycol diacrylate
- immobilized microbial
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は固定化微生物菌体の製造法に関するものである
。
。
近年、微生物菌体の各種固定化技術により、長期間の連
続発酵法が検討されている。
続発酵法が検討されている。
微生物菌体の固定化法に関しては、種々の方法が提案さ
れており、例えば寒天、アルギン酸力ルンウムーアルミ
ニウムへ′−力ラギーナン、ポリアクリルアミド、光架
橋性樹脂、セルロース、トリアセテート、コンニャク等
の微細格子中に包括させて、固定化する方法がある。
れており、例えば寒天、アルギン酸力ルンウムーアルミ
ニウムへ′−力ラギーナン、ポリアクリルアミド、光架
橋性樹脂、セルロース、トリアセテート、コンニャク等
の微細格子中に包括させて、固定化する方法がある。
しかじな、がら、これら包括体の多くは、その強度が不
充分であり、連続発酵中に、随時破壊してゆき、微生物
菌体の流失が認められ、長期間の連続発酵には不適当で
あるとνＡう欠点を有している。
充分であり、連続発酵中に、随時破壊してゆき、微生物
菌体の流失が認められ、長期間の連続発酵には不適当で
あるとνＡう欠点を有している。
又、機械的強度が充分であると報告されているアル−ギ
ン酸カル／ウムーアルミニウム、Ｋ−カラギーナン、光
架橋性樹脂等についても他の欠点を有している。
ン酸カル／ウムーアルミニウム、Ｋ−カラギーナン、光
架橋性樹脂等についても他の欠点を有している。
つまり、アルギン酸カル／ウムーアルミニウム包括体で
はその強度を一定に保つ為には、流入液中にはカルノウ
ムイオン又はアルミニウムイオンの存在が必要であり、
上記金属イオンを添加しない場合には、一定期間をおい
て、カル／ウムイオン、アルミニウムイオンでイオン交
換処理を行わねばならないという繁雑さがある。同様に
に一カラギーナンも流入液中にゲル化剤を添加しなけれ
ばならない。
はその強度を一定に保つ為には、流入液中にはカルノウ
ムイオン又はアルミニウムイオンの存在が必要であり、
上記金属イオンを添加しない場合には、一定期間をおい
て、カル／ウムイオン、アルミニウムイオンでイオン交
換処理を行わねばならないという繁雑さがある。同様に
に一カラギーナンも流入液中にゲル化剤を添加しなけれ
ばならない。
又、光架橋性樹脂に関しては、プレポリ−ｔ−である光
架橋性樹脂を製造する事自体が多段階の反応を必要とし
、繁雑である点や、有用なゲルを得る為には、プレポリ
マーの濃度とせねばならない点等、工程的にも経済的に
も欠点を有してしｙる。
架橋性樹脂を製造する事自体が多段階の反応を必要とし
、繁雑である点や、有用なゲルを得る為には、プレポリ
マーの濃度とせねばならない点等、工程的にも経済的に
も欠点を有してしｙる。
上述した欠点を有する従来の包括体の改良ができ得れば
、それに寄与する利益の大なる事は明らかである。
、それに寄与する利益の大なる事は明らかである。
そこで本発明者等は以上の欠点を克服すべく以下の点に
留意して研究を行った。
留意して研究を行った。
１ 安価で容易に入手できる七ツマ−を用い、低濃度で
簡革に製造可能である事。
簡革に製造可能である事。
２ 強度的に充分連続的に使用可能で強度を保つための
事後処理を必要としない事。
事後処理を必要としない事。
３ 包括体内部及び表面で微生物菌体の増殖が良好であ
る事。
る事。
この結果」二記３点を充分に満足しうる理想的な包括体
の製造法をここに見い出すに至った。
の製造法をここに見い出すに至った。
すなわち、本発明は固定化微生物菌体を製造するにおい
てヒドロキンエチルアクリレート（以下ｒＨＥＡＪと略
記）と主鎖の平均分子３．がｉ、ｏ ｏ ｏ〜５．００
０からなるポリエチレングリコールジアクリレート（以
下ｒ ＰＥＧＡ −１，０００−５，０００Ｊと略記）
のモル比率が０７〜４．０ ＝になるよう調整し、且っ
ＨＥＡの濃度が３〜５％になるよう調整して架橋させる
ことを特徴とする固定化微生物菌体包括体の製造法に関
するものである。
てヒドロキンエチルアクリレート（以下ｒＨＥＡＪと略
記）と主鎖の平均分子３．がｉ、ｏ ｏ ｏ〜５．００
０からなるポリエチレングリコールジアクリレート（以
下ｒ ＰＥＧＡ −１，０００−５，０００Ｊと略記）
のモル比率が０７〜４．０ ＝になるよう調整し、且っ
ＨＥＡの濃度が３〜５％になるよう調整して架橋させる
ことを特徴とする固定化微生物菌体包括体の製造法に関
するものである。
以ド、本発明を具体的に説明する。
１） Ｅ Ｃ） Ａ、ＰＰＧＡの主鎖の平均分子量は約
１，０００−５，０００程度のものが使用されるが以下
に記す事由により平均分子量約３．０００程度のものを
使用する場合最も強度的に有用な包括包括体は、連続使
用に耐え、且つ包括体内部での微生物菌体の増殖が良好
である事が条件とされる為ある一定の強度が必要である
。
１，０００−５，０００程度のものが使用されるが以下
に記す事由により平均分子量約３．０００程度のものを
使用する場合最も強度的に有用な包括包括体は、連続使
用に耐え、且つ包括体内部での微生物菌体の増殖が良好
である事が条件とされる為ある一定の強度が必要である
。
つまり、包括体内部で微生物菌体が増殖する場合、包括
体が変形に対し、多大な圧力を要すると増殖が抑えられ
、良好な増殖は望めないし、リアククー内部で包括体の
一部に多大なる圧力がかかるとその一部が破壊する恐れ
が充分にある。
体が変形に対し、多大な圧力を要すると増殖が抑えられ
、良好な増殖は望めないし、リアククー内部で包括体の
一部に多大なる圧力がかかるとその一部が破壊する恐れ
が充分にある。
故に理想的な包括体は圧力に対し変形の自由度が大きく
、ゲルの一部にかかった圧力を全体に分散させる様な緩
衝作用があり、しかも全体の強度が充分大きくなければ
ならない。
、ゲルの一部にかかった圧力を全体に分散させる様な緩
衝作用があり、しかも全体の強度が充分大きくなければ
ならない。
包括体の変形自由度や全体の強度は、モノマー量、ＨＥ
Ａに対するＰＥＧＡ、ＰＰＧＡのモル比率、ＰＥＧＡ
、ＰＰＧＡの主鎖の分子量（長さ）により左右される。
Ａに対するＰＥＧＡ、ＰＰＧＡのモル比率、ＰＥＧＡ
、ＰＰＧＡの主鎖の分子量（長さ）により左右される。
ここで有用なゲルを得る為に最も重要な事はＨＥＡに対
するＰＥＧＡ、−ＰＰＧＡのモル比率で、その分子量に
多少は変化を受けるが、その比率はほぼ一定しており０
７〜４０％である。
するＰＥＧＡ、−ＰＰＧＡのモル比率で、その分子量に
多少は変化を受けるが、その比率はほぼ一定しており０
７〜４０％である。
次に重要なことは、ＨＥＡの濃度であり、ＨＥＡの濃度
が上昇するに従い、ゲルはガラス状となり、変形自由度
が小さくなる為、３〜５％溶液が最も適当である。
が上昇するに従い、ゲルはガラス状となり、変形自由度
が小さくなる為、３〜５％溶液が最も適当である。
しかしながらＨＥ Ａの濃度を３〜５％とした場合、先
に記したモル比率で架橋剤を投入し重合を起こすと、Ｐ
ＥＧＡ・Ｐ Ｐ Ｇ Ａの主鎖の平均分子量が約１，０
００〜ｓ、ｏ ｏ ｏ以外ではゲル化が起こらず、又起
っても使用に耐え得るものではなく、平均分子量約３，
０００の場合最も有用なゲルが得られる。
に記したモル比率で架橋剤を投入し重合を起こすと、Ｐ
ＥＧＡ・Ｐ Ｐ Ｇ Ａの主鎖の平均分子量が約１，０
００〜ｓ、ｏ ｏ ｏ以外ではゲル化が起こらず、又起
っても使用に耐え得るものではなく、平均分子量約３，
０００の場合最も有用なゲルが得られる。
ＨＥＡとＰＥＧＡ及びＪ−Ｉ Ｅ ＡとＰＰＧＡの共重
合体を形成させる際、重合開始剤及び重合促進剤を加え
るが、重合開始剤としては、微生物菌体に影響の少ない
ものが適当であり、低温で重合ｉｉＪ能なしドックス開
始剤を用いる事が適当である。
合体を形成させる際、重合開始剤及び重合促進剤を加え
るが、重合開始剤としては、微生物菌体に影響の少ない
ものが適当であり、低温で重合ｉｉＪ能なしドックス開
始剤を用いる事が適当である。
例を示すと次のものがある。
酸化剤としては過硫酸塩（過硫酸カリウム、過硫酸アン
モニウム等）、過酸化水素、ピドロペルオキンド（ｔ−
ブチルヒドロペルオキ／Ｉ等）。
モニウム等）、過酸化水素、ピドロペルオキンド（ｔ−
ブチルヒドロペルオキ／Ｉ等）。
還元剤としては、無機還元剤（Ｆｅ５０＋ 、ＮａＨ３
Ｏ＋ 。
Ｏ＋ 。
Ｎａ１ＳＯａ ’Ｓ）あるいは有機還元剤（アルコール
、アミン、修酸等）が組合わせて使用可能である。
、アミン、修酸等）が組合わせて使用可能である。
又、上記の重合開始剤で重合は可能であるが、重合速度
を早める為に、リホフラビン及び３−ジメチルアミノプ
ロピオニトリルを添加する事により、短時間で重合反応
が完了する１゜上述の重合開始剤及び促進剤は微生物菌
体にとって無害ではないが、その添加量を低濃度としだ
湯治、後述する実施例２で分かる様に、特に問題ではな
く、製造した包括体を２・３回洗うことにより未反応の
七ツマ−及び重合開始剤・促進剤を洗い流すことができ
る。
を早める為に、リホフラビン及び３−ジメチルアミノプ
ロピオニトリルを添加する事により、短時間で重合反応
が完了する１゜上述の重合開始剤及び促進剤は微生物菌
体にとって無害ではないが、その添加量を低濃度としだ
湯治、後述する実施例２で分かる様に、特に問題ではな
く、製造した包括体を２・３回洗うことにより未反応の
七ツマ−及び重合開始剤・促進剤を洗い流すことができ
る。
本発明に於て、固定化される微生物菌体の生育及び活動
には、それぞれ固有の至適Ｐ Ｉ−１領域が存在する。
には、それぞれ固有の至適Ｐ Ｉ−１領域が存在する。
従って固定化する際、適当な緩衝液を用いて固定化する
事は可能であるが、ＰＨにより重合度及び重合速度に変
化が出てくる為、中性付近で反応を行うことが好ましい
。重合反応完了後、反応液のＰｌ−１を菌体の至適Ｐｉ
−１領域とする事は、本包括体にとって何の支障もきた
さない。
事は可能であるが、ＰＨにより重合度及び重合速度に変
化が出てくる為、中性付近で反応を行うことが好ましい
。重合反応完了後、反応液のＰｌ−１を菌体の至適Ｐｉ
−１領域とする事は、本包括体にとって何の支障もきた
さない。
又、重合反応完了後の本包括体は酸・アルカリの他に、
熱・有機溶媒にも安定であるため、全ての微生物菌体を
固定化することが可能である。
熱・有機溶媒にも安定であるため、全ての微生物菌体を
固定化することが可能である。
この様な菌体の代表例を挙げると、アスペルギルス（Ａ
ｓ−ｐｅｒｇｉ ｌ １ｕｓ）属、リゾプス（Ｒｈｉｚ
ｏｐｕｓ）属等のかび類／ニードモナズ（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ ）属、アセトバクター（Ａ−ｃｅ＋ｏｂａ
ｃｔｅ）属、ストレプトマイセス（Ｓ＋ｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ）属、エンエリンア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）
属等の細菌サンカルマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属等の酵母
を示すことができる。
ｓ−ｐｅｒｇｉ ｌ １ｕｓ）属、リゾプス（Ｒｈｉｚ
ｏｐｕｓ）属等のかび類／ニードモナズ（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ ）属、アセトバクター（Ａ−ｃｅ＋ｏｂａ
ｃｔｅ）属、ストレプトマイセス（Ｓ＋ｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ）属、エンエリンア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）
属等の細菌サンカルマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属等の酵母
を示すことができる。
微生物菌体としては、凍結乾燥菌体、液体培養液及び遠
心分離機等を使用して得る事のできる液体培養濃縮液等
、いずれも使用することができる。
心分離機等を使用して得る事のできる液体培養濃縮液等
、いずれも使用することができる。
微生物菌体の添加ｍ−は、本包括体内で良好な微生物菌
体の増殖が認められる為、低濃度の菌体量でも充分であ
り、例えば酵母の場合固定化時点での酵母濃度が１ｄ中
１０’個のオーダーでも２日間の培養でｌ Ｉｌｔ中１
０”個のオーダーとなり、菌体の固定化量には特に制限
はない。
体の増殖が認められる為、低濃度の菌体量でも充分であ
り、例えば酵母の場合固定化時点での酵母濃度が１ｄ中
１０’個のオーダーでも２日間の培養でｌ Ｉｌｔ中１
０”個のオーダーとなり、菌体の固定化量には特に制限
はない。
以ド、実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例１ モノマー昂及び架橋剤分子量のゲルに対する
影響ゲルの形成は下記表１に示すＰＥＧＡとＨＥ Ａの
量に、ＰＨ７，０１） ７酸緩衝液を最終濃度で０．０
１Ｍ、 重合開始剤として重亜硫酸ナトリウムと過硫
酸カリウムを最終濃度で各々］ｍＭ、重合促進剤として
リボフラビンと３−ジメチルア５ノブロビオニトリルを
最終濃度で各々０．１ ｍＭ 、１．０＋ｎ Ｍ加え窒
素ガス置換下で温にて１ｏ分間ゲル化を行った。
影響ゲルの形成は下記表１に示すＰＥＧＡとＨＥ Ａの
量に、ＰＨ７，０１） ７酸緩衝液を最終濃度で０．０
１Ｍ、 重合開始剤として重亜硫酸ナトリウムと過硫
酸カリウムを最終濃度で各々］ｍＭ、重合促進剤として
リボフラビンと３−ジメチルア５ノブロビオニトリルを
最終濃度で各々０．１ ｍＭ 、１．０＋ｎ Ｍ加え窒
素ガス置換下で温にて１ｏ分間ゲル化を行った。
形成したゲルはその変形自由度を測定するムロ１で示す
様に直径１５＋ｕ＋長さ２０Ｍの円柱状ゲル１に幅ＩＱ
＋ｓのステルスブロ、り２により圧力を加え、グルが破
壊する時点でのへの幅を測定し、＜１５−Ａ）二１５Ｘ
１００ をそのゲルの変形自由度率とした。
様に直径１５＋ｕ＋長さ２０Ｍの円柱状ゲル１に幅ＩＱ
＋ｓのステルスブロ、り２により圧力を加え、グルが破
壊する時点でのへの幅を測定し、＜１５−Ａ）二１５Ｘ
１００ をそのゲルの変形自由度率とした。
次にゲルの強度を測定するために図２で示す様に直径１
５朋長さ２０闘の円柱状ゲル１を５間幅をあけた厚さ３
Ｂのステンレス板３の上に乗せ、ゲルに水系４をかけ水
系の先に重り５をつけその重りを可変動とし、グルが水
系により切断される点の重りと水系の合計質量を測定し
ゲル強度とした。
５朋長さ２０闘の円柱状ゲル１を５間幅をあけた厚さ３
Ｂのステンレス板３の上に乗せ、ゲルに水系４をかけ水
系の先に重り５をつけその重りを可変動とし、グルが水
系により切断される点の重りと水系の合計質量を測定し
ゲル強度とした。
表 １
表１からも明らかなように、Ｉ−Ｉ Ｅ Ａ濃度が３〜
５％、ＰＥＧＡ主鎖分子量が約１，０００−５，０００
．ＨＥＡに対するＰ Ｅ ＧＡ −１，，０００〜５，
００００モル比率が０７〜４０％のものが変形自由度率
、強度ともに優れていることが認められた。
５％、ＰＥＧＡ主鎖分子量が約１，０００−５，０００
．ＨＥＡに対するＰ Ｅ ＧＡ −１，，０００〜５，
００００モル比率が０７〜４０％のものが変形自由度率
、強度ともに優れていることが認められた。
実施例２ 重合開始剤及び促進剤の酵母に対する影響
実醸造用酵Ｈｊ （す、カロマイセスセレビ
ゼア発研１号）を２４時間液体培地で培養後、遠心分離
で集菌し、０９％食塩水溶液で懸濁。この操作を２回繰
り回した後、重亜硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、３
−ツメチア；ノブロピオニトリルを以下に表示した濃度
となる様加え、３７℃１時開放Ｕ後、常法に従い、メチ
ン／ブルーで染色し、ヘマト−メーターを用いてメチレ
ンブルー染色率（酵母死滅率）を測定した。
実醸造用酵Ｈｊ （す、カロマイセスセレビ
ゼア発研１号）を２４時間液体培地で培養後、遠心分離
で集菌し、０９％食塩水溶液で懸濁。この操作を２回繰
り回した後、重亜硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、３
−ツメチア；ノブロピオニトリルを以下に表示した濃度
となる様加え、３７℃１時開放Ｕ後、常法に従い、メチ
ン／ブルーで染色し、ヘマト−メーターを用いてメチレ
ンブルー染色率（酵母死滅率）を測定した。
結果は下表の通りである。
表の結果より分かる様に、重亜硫酸ナトリウム、過硫酸
カリウム、３−ンメチルアミノブロピオニトリルの添加
量を各々１．０ ｍＭとなる様にすると無添加の場合と
比較して、数バーセントの死滅率しか示さなかった。
カリウム、３−ンメチルアミノブロピオニトリルの添加
量を各々１．０ ｍＭとなる様にすると無添加の場合と
比較して、数バーセントの死滅率しか示さなかった。
流側３ 酵母の固定化
培地組成
グルコース １００ ｌ、＃イ
ースト・エキストラクト １．５ Ｐ／ＡＮＨ
４Ｃ１２，５ｆ／ＩＩ Ｋ＋ ＨＰ ０４ ５．５ Ｐ
／ ＡＭｇＳＯ＜ ・７Ｈ２００，２５Ｊ’／ＡＮａ
Ｃ’ｌ １．ＯＰ／ＬＣａ
Ｃ１２０，０ＩＰ／Ａ Ｐ Ｈ５，０１，ＯＭ リン酸緩衝液 １０ ＩＩｌ／ＬＨＢ
Ａ１．ＯＬ、ＰＥＧＡ−３，０００４００Ｍｙ、ＰＨ７
，０・０．１ Ｍリン酸緩衝液２ｍｌ １．０ｍＭリ
ボフラビン水溶液２１１１！に水を加え、全容を１，５
ｍＪとしたものをミリポアフィルタ−（ポアサイズ０２
２μｍ）で濾過し、無菌溶液としたものに上記培養液に
て２４時間純粋培養した醸造用酵母（サツカロマイセス
・セレビゼ７発研１号）培養液（液中にはｌ Ｋ１当り
２．０Ｘ１０８個の酵母が存在）を無菌生理食塩水で１
０倍希釈したものを２１ＩＪ加えた。得られた１７１４
’の溶液中に溶存する酸素を除くため、無菌窒素ガスに
より５分間ガス置換させた後２０ ＋ｎＭ重亜硫酸ナト
リウム水溶液、２０ｍＭ過硫酸カリウム水溶液２０ ｍ
Ｍ ３−アミノプロピオニトリル水溶液を各４１ｍ１加
え、酸素ガスが混入しない様に無菌窒素ガスを吹きつけ
なか・ら室温にて１０分間ゲル化を行った。
ースト・エキストラクト １．５ Ｐ／ＡＮＨ
４Ｃ１２，５ｆ／ＩＩ Ｋ＋ ＨＰ ０４ ５．５ Ｐ
／ ＡＭｇＳＯ＜ ・７Ｈ２００，２５Ｊ’／ＡＮａ
Ｃ’ｌ １．ＯＰ／ＬＣａ
Ｃ１２０，０ＩＰ／Ａ Ｐ Ｈ５，０１，ＯＭ リン酸緩衝液 １０ ＩＩｌ／ＬＨＢ
Ａ１．ＯＬ、ＰＥＧＡ−３，０００４００Ｍｙ、ＰＨ７
，０・０．１ Ｍリン酸緩衝液２ｍｌ １．０ｍＭリ
ボフラビン水溶液２１１１！に水を加え、全容を１，５
ｍＪとしたものをミリポアフィルタ−（ポアサイズ０２
２μｍ）で濾過し、無菌溶液としたものに上記培養液に
て２４時間純粋培養した醸造用酵母（サツカロマイセス
・セレビゼ７発研１号）培養液（液中にはｌ Ｋ１当り
２．０Ｘ１０８個の酵母が存在）を無菌生理食塩水で１
０倍希釈したものを２１ＩＪ加えた。得られた１７１４
’の溶液中に溶存する酸素を除くため、無菌窒素ガスに
より５分間ガス置換させた後２０ ＋ｎＭ重亜硫酸ナト
リウム水溶液、２０ｍＭ過硫酸カリウム水溶液２０ ｍ
Ｍ ３−アミノプロピオニトリル水溶液を各４１ｍ１加
え、酸素ガスが混入しない様に無菌窒素ガスを吹きつけ
なか・ら室温にて１０分間ゲル化を行った。
ゲル化終了後、無菌条件下で１辺２咽の立方形にゲルを
切断し、約２００ｍ１の滅菌処理した生理食塩水に入れ
１０分間振とう後、ガラスフィルターにより諏過、この
操作を２回縁ゝり回した後、前記培養液２００１ＩＡ！
中にて３０℃３日間静置培養させた。
切断し、約２００ｍ１の滅菌処理した生理食塩水に入れ
１０分間振とう後、ガラスフィルターにより諏過、この
操作を２回縁ゝり回した後、前記培養液２００１ＩＡ！
中にて３０℃３日間静置培養させた。
培養後１日では透明なゲル中に多数の小白点が認められ
２日後では白点が大きくなり、白点の数も増大した。
２日後では白点が大きくなり、白点の数も増大した。
３日後は２日後の状態と差異は認められず、ゲルは最初
の約２倍に膨張していたが、ゲルの破壊は全く見られな
かった。
の約２倍に膨張していたが、ゲルの破壊は全く見られな
かった。
次にこの増殖酵母ゲルを用いてバッチ式の連続発酵を行
った。前記の培養液２００ｍ１に得られた増殖酵母ゲル
全量を加え、２４時間毎に培地を取り換え、９日間反応
を行った。
った。前記の培養液２００ｍ１に得られた増殖酵母ゲル
全量を加え、２４時間毎に培地を取り換え、９日間反応
を行った。
分析はソモギ変法により、グルコースの定量を、ガスク
ロマトグラフィーによりエタノールの定量を、重量法（
こより発生した炭酸ガスの定量を行った。
ロマトグラフィーによりエタノールの定量を、重量法（
こより発生した炭酸ガスの定量を行った。
発生した炭酸ガス量を経時的に測定すること（こより、
１回の発酵は約８時間で終了することが認められた。
１回の発酵は約８時間で終了することが認められた。
９日間を通じて残糖は２．３１７／ｌＩｌ と安定し
ており、消費されたグルコースからエタノールの変換率
も８３〜９０％という値で経時的な低下は見られなかっ
た（図３）。
ており、消費されたグルコースからエタノールの変換率
も８３〜９０％という値で経時的な低下は見られなかっ
た（図３）。
実施例４ 細菌及びかびの固定化
酢酸菌用培地組成
ゲルコール ３０ Ｐ／Ａエタノー
ル ４０／／Ａ酢 酸
１ ｏｔ／Ａペプトン
１ｏＰ／ＡＫＩ ＨＰＯ４１，ＯＰ／Ａ ＣａＨＰＯ４１，Ｏｊ？／Ａ ＭｇｓＯ＋・７Ｈ，０１，ｏＰ／Ａ カビ用培地組成 グルコース １００ ＩＰ／Ａペプト
ン １ｏＰ／１３ＫＮＯｓ
２．０！／Ａ（ＮＨ４’） Ｈ，Ｐｏ、
２．０ ！／ＡＭ ｇ Ｓ ０４・７Ｈ
，００，５Ｐ／Ａｃ ａｃ ＋ 、
ｏ−１，Ｐ／ Ｊ’実施例３と同様の操作にて酢酸
菌（アセトバクター属１菌株）とかび（アスペルギルス
・アワモリ−バリアント・ツメウスＡＦ−１）を固定化
した。
ル ４０／／Ａ酢 酸
１ ｏｔ／Ａペプトン
１ｏＰ／ＡＫＩ ＨＰＯ４１，ＯＰ／Ａ ＣａＨＰＯ４１，Ｏｊ？／Ａ ＭｇｓＯ＋・７Ｈ，０１，ｏＰ／Ａ カビ用培地組成 グルコース １００ ＩＰ／Ａペプト
ン １ｏＰ／１３ＫＮＯｓ
２．０！／Ａ（ＮＨ４’） Ｈ，Ｐｏ、
２．０ ！／ＡＭ ｇ Ｓ ０４・７Ｈ
，００，５Ｐ／Ａｃ ａｃ ＋ 、
ｏ−１，Ｐ／ Ｊ’実施例３と同様の操作にて酢酸
菌（アセトバクター属１菌株）とかび（アスペルギルス
・アワモリ−バリアント・ツメウスＡＦ−１）を固定化
した。
酢酸菌は、ゲル化時点の生菌数を約１．０Ｘ１０６とな
る様調整し、かびは胞子を適当量加えた。
る様調整し、かびは胞子を適当量加えた。
得られたゲル各々ｌＯ！を前記の専用培地２００ｍ１に
加え、３日間振とう培養を行ったところ、酢酸菌包括ゲ
ル及びかひ包括ゲル共に白くにごり、良好な増殖を示し
た。
加え、３日間振とう培養を行ったところ、酢酸菌包括ゲ
ル及びかひ包括ゲル共に白くにごり、良好な増殖を示し
た。
この場合もゲルの破壊は殆ど認められなかった。
図】は圧力によるゲルの変形自由度率の測定図を示し、
図２はゲルの強度の測定図を示している。 １ ゲル ２ ・ステンレスブロック
３ ステ／レス板４−水系ｓ ・・重り Ａ−
・ ・ステンレスプロ、り間隔図３は増殖酵母ゲルを用
いて行ったバッチ式連続発酵で／の残糖値と消費グルコ
ースからのエタノール変換率を示し、縦軸に残糖値（’
ｆ／ｍｌ ） 、変換率（％）、横軸に処理日数を示す
。 図 １
図２はゲルの強度の測定図を示している。 １ ゲル ２ ・ステンレスブロック
３ ステ／レス板４−水系ｓ ・・重り Ａ−
・ ・ステンレスプロ、り間隔図３は増殖酵母ゲルを用
いて行ったバッチ式連続発酵で／の残糖値と消費グルコ
ースからのエタノール変換率を示し、縦軸に残糖値（’
ｆ／ｍｌ ） 、変換率（％）、横軸に処理日数を示す
。 図 １
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 固定化微生物菌体包括体を製造するにおいて、ヒドロキ
ンエチルアクリレートと、主鎖の平均分子量が約１．Ｑ
ＯＯ〜ｓ、ｏ ｏ 。 からなるポリエチレングリコールジアクリレートもしく
はポリプロピレングリコールジアクリレートとのモル比
率力０７〜４０％になるよう調整し且つヒドロキシエチ
ルアクリレートの濃度が３〜５％になるよう調整して架
橋させることを特徴とする固定化微生物菌体包括体の製
造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1851583A JPS59143587A (ja) | 1983-02-07 | 1983-02-07 | 固定化微生物菌体包括体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1851583A JPS59143587A (ja) | 1983-02-07 | 1983-02-07 | 固定化微生物菌体包括体の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59143587A true JPS59143587A (ja) | 1984-08-17 |
| JPS6215197B2 JPS6215197B2 (ja) | 1987-04-06 |
Family
ID=11973759
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1851583A Granted JPS59143587A (ja) | 1983-02-07 | 1983-02-07 | 固定化微生物菌体包括体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59143587A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8030041B2 (en) | 2005-06-06 | 2011-10-04 | Hitachi Plant Technologies, Ltd. | Process for producing pellets entrapping and immobilizing microorganisms |
-
1983
- 1983-02-07 JP JP1851583A patent/JPS59143587A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8030041B2 (en) | 2005-06-06 | 2011-10-04 | Hitachi Plant Technologies, Ltd. | Process for producing pellets entrapping and immobilizing microorganisms |
| US8227238B2 (en) | 2005-06-06 | 2012-07-24 | Hitachi Plant Technologies, Ltd. | Apparatus for producing pellets containing entrapped and immobilized microorganisms |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6215197B2 (ja) | 1987-04-06 |
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