JPS59116228A - 血液凝固第８因子脂肪小体製剤の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、血液凝固第１因子（以下、Ｆ−■と略記する
）を取り込んでなる脂肪小体製剤の改良製造法に関する
。

Ｆ−■は、抗血友病因子とも呼ばれ、血漿蛋白の１棟（
約２００万の分子量をもつ複合蛋霞）であり、他の血液
映画因子とともに、血液トロンボッラス千ンの生成にあ
ずかっており、トー鴇の先天的な欠乏病は皿友病人とし
て知られている。このため、Ｆ−１１はこれら疾病の治
療に広く用いられている。

本発明者らは先にＦ−■を脂肪小体中に収り込んでなる
脂肪小体製剤を開発したが（特開昭５６−１２７３０７
号明細書参照）、この製剤／″ｉ経口投与ｏｒ能で、し
かも血中内活性の持続性を有するものであるから非ぎに
付和な製剤であるが、脂肪小体中へのＦ−■の収り込み
率を高めることによって当該製剤はさらにすぐれたもの
となる。

そこで本発明者らＩ／′ｉＦ　−）ｉの脂肪小体中への
取り込み率をきらに高めるために種々研究を重ねてきた
ところ脂肪小体形成時の条件を選ぶことによって、Ｆ−
■の脂肪小体への収り込みが弁材に増大することを見出
した。

本発明は、かかる知見に基ついて完成されたものであり
、血液凝固第１因子含有脂肪小外製酌の製造方法におい
て、ｌＦｒ質薄膜を形成し、この薄膜の懸濁液にカルシ
ウムイオン全添加して凝集さぞ、凍結し、その後解凍し
た後、血液凝固第１１因子を加え、さらにキレート剤を
添加して脂肪小体を形成きせることからなる血Ｑ凝固第
１１因子含何８旨肪小体製Ｍの製法に関する。

不発［力にて使用されるＦ−１量ｍはそれ自体はもとよ
り人に投与口Ｊ能なものであり、かつ少なくともフィブ
リノクンの除去を行ったＦ−■含有物であってもよい。

又、ヒトに投与するものにあってはヒト由来のＦ−■含
有物であることが好ましい。

従来、Ｆ−■は皿漿から分離することによって製造され
、その方法としては、たとえばポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）分画法（米国特許第３６５２５３０号明細書
参照）、水酸化アルミニウムへの吸着を利用した方法（
米国特計第４１７０６３９号明細＠参照）、陰イオン父
換体に夾雑物を吸着除去する方法（特開昭５２−１２５
６０９号明細書が照）等があけられる。なおこれらの方
法による場合には上述の蛋白質が混入して米るため少な
くともこの夾雑蛋白の一つであるフィブリノケンの除去
を行ったＦ−■含有物全使用することか好ましい。

次に脂肪小体の形成のために用いる脂質は、無毒の生理
的に許容され、そして代謝され得る脂質であるならＡり
：、いずれも本発明製剤を製造するのに用いられる。脂
質としては、リン脂肯が代表的であり、好−ましくに、
レシチン（ホスファ−ｆ−シルコリン）ト、ホスファチ
ジルセリンの混合物がもちいられ、その比率は１０５〜
１．５である。

脂質から脂肪小体の製造の概略は、次の通りである。即
ち、適当な脂質の溶成から溶媒を溜去し、脂質の薄膜を
作り、ｐＨ６〜８の緩衝ｉ等を加えて教しく振とうし、
好壕しくは超音阪処理金行ない、脂質全均一分散させて
脂質薄膜懸濁液を調製する。

この懸濁液にＣａ塩を、好Ｊしくは終濃度１０〜３０ｍ
Δ１になるように加えて、例えば３０〜４０°Ｃで３０
分〜９０分け１３４インキニーベートし、凝集させる。

脂質粒子を集め、−５０〜−９０℃で一担保結させ、そ
の後解凍して、これに例えＩ−ｆ、脂質重量ｌ　ｍｇＫ
対して０．１−１００車位の割合でド−ｖ！［を加えて
脂肪小体中へのＦ−［のとり込みをおこなわぐる。っそ
の後、好１しくに終４１０〜３０７７１　Ｎｉになるよ
う（てキレート斉り（例えばＩ：、Ｌ）１’Ａ）を添加
し、Ｃａ−１升をキレート結合させる。

七、妃の処理に上り面径が約０．０″’１−　Ｌμの範
囲のＦ−胃を含む粒子を提供でき、要すればさらに分−
ｒふるい処理及び夾雑物又は遊離物を除去するためのイ
オシク換体処理をおこなうこともでよる。

かくして得られたＦ−市脂肪小俸製剤はリン脂西−１ｍ
７あたり０５！−Ｐ、位以上のＦ−１瞑を舌付しており
、しかもその粒子径は、均一であり、きわめて微小であ
ることから医療製剤として好捷しいものである２、 Ｆ−■を収りこんだ脂肪小体は沈澱物として回収するこ
とかできる。例えば、脂肪小体全含仙する媒体を超遠心
処理し、脂肪小体を沈澱として１凸収することかでさる
。このものは、次いで要すれば生理的に許容される水溶
液で洗浄し、ペレット状、懸濁状製剤として調製する。

製剤化は医薬品のＲＪ！！法において広く公知の方法に
準する６、又木製剤は、敵状製剤を凍結させた後、納圧
下で乾燥させ、凍結乾燥製剤としても提供きれる。

本則は、一般的に経口薬として１東１月され、その投与
量は成人の場合、Ｆ−１１の５〜２００車位／ｈ／回の
量において投与さノする。小イ＜１は、プール及びロビ
ンソンの方法（フリディツシュ　ジャーナル　オグ　ヘ
マトロジイ、５、Ｉ７．１９５９）による。所用時は、
生理的にｄ［谷さね、る水溶液によりて〆解又は稀釈し
て用いられるのが一般的であるか、製剤上の工夫によっ
て錠剤化、カプセル化、腸溶性カプセル化してもよい。

なお、す」細書中、Ｆ−鴇のｉ脂肪小体中への収り込み
率の測定は調製されたリポソームをトリトンＸ−１００
処坤し、それを水〆ＷＫ懸濁させ、遠心後上清を回収し
、水溶液中の［−唱の量を測定することによっておこな
った。

Ｆ−）１量は、ＡＦＴＴ法（Ｐｏｏｌ　ａｎｄ　Ｒｏｂ
ｉｎｓｏｎグリティッシュ　シて−ナル　オプ　ヘマト
ロシイ、５．１７．１９５９１で測定した。

実施例 ホスファチジルセリン’＆２５ｒ（ｖ・／ｖ　）　含！
ｊ　Ｔる大豆レシチン２５２を５００−のクロロホルム
溶液中に溶解し次いで、減圧乾燥し、容器中に脂質フィ
ルムを形成した。これに２０７７１ｋｉ）リス酢酸緩慟
准（ｐＨ７，３１ｆ含１００ｍＭ　　ＮａＣ６：Ｑ、１
ｍＭ　ＥＤ１’Ａ）５１を添加して懸濁ｉを得た。その
後ｏ　’ｃで超音改処理（３５０Ｗ）１施し、Ｓｍａｌ
ｌｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ　Ｖｅｓｉｃｌｅｓ　（スモ
ールユニラメラベ°シクル）を調製した。この懸濁＃Ｋ
　ｌ　００　ｍＭｃａｃｔ２を終濃度２０ｍＭになるよ
うに加えて、３７°Ｃで１時間インキユベートシ、凝集
させた。

その後、３５００ｒｐｍ、１０分間の遠心で、粒子を集
め一８０°Ｃで凍結した。再び解凍後５０　Ｕ／ｍ／！
のＦ−■１ｔを加えて３７゛ｃで１０分間加湿し、粒子
にＦ−１１を結合させた。その後、終濃度１５ｒｎＭに
なるようにｌＯＯｍＭＥＤＴＡ　ｐＨ７，Ｏｆ添加し、
Ｃａ＋＋をキレート結合させた。３７°Ｃで３０分間イ
ンキュベートした後、３５０００ｒｐｍで３０分間遠心
して脂肪小体を集めた。得られた脂肪小体に内含のＦ−
１％活性は、３２　Ｕ／７であ捷だ脂肪小体を構成して
いるリン唐箕の量は、６４．２η／ゴ　であった。パぽ
肪小体の〜粒子径はコウルターカウンターによる測定に
よると平均０．５μｍであった。このものは約１〜１０
゛Ｃで保存し、要時稀釈して医薬として供与することが
できる。

特許出願人　株式会社ミ　トリ十字 代理人弁理士高島　−

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 血液凝固第１因子合有脂肪小体製剤の製造方法において
   、脂質薄膜を形成し、この薄膜のＭ、濁液にカルシウム
   イオンを添加して凝集きぜ、凍結し、その後解凍した後
   血液凝固第−因子を加え、さらにキレート剤を添加して
   、脂肪小体を形成させるこさからなる血液凝固第１因子
   含有脂肪小体製剤の製法。