JPS58164513A - 肺表面活性物質及びその調製法 - Google Patents
肺表面活性物質及びその調製法Info
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- JPS58164513A JPS58164513A JP57046404A JP4640482A JPS58164513A JP S58164513 A JPS58164513 A JP S58164513A JP 57046404 A JP57046404 A JP 57046404A JP 4640482 A JP4640482 A JP 4640482A JP S58164513 A JPS58164513 A JP S58164513A
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- lung
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- pulmonary surfactant
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は動物由来Ｃヒトを除く）の蛋白質を実質的に＠
まない肺表面活性物質及びその調製法に関する。
まない肺表面活性物質及びその調製法に関する。
動物の肺胞には、肺表面活性物質と称するリン脂質を主
成分とする生理活性物質が存在する。
成分とする生理活性物質が存在する。
これは肺胞の内壁を覆い、肺胞上皮保護作用を有すると
共に、動物が呼吸機能を維持する上に重要な生理的機能
を有している。即ち、肺表面活性物質は、呼気時、吸気
時における肺胞内面の表面張力な変化させると云った特
異な表ｍ活性を有しており、肺胞相互間の安定性に寄与
して、抗無気肺作用な示すと云われている。肺表面活性
物質については、従来櫨々の―−について多くの研究が
なされ、その全懇が明らかにされつ工ある。即ち、この
活性物質は、その成分としてリン脂質、中性脂質、蛋白
質等を含み、主成分はリン脂質の一つであるジベルｉト
イルレシチンであることが知られている。
共に、動物が呼吸機能を維持する上に重要な生理的機能
を有している。即ち、肺表面活性物質は、呼気時、吸気
時における肺胞内面の表面張力な変化させると云った特
異な表ｍ活性を有しており、肺胞相互間の安定性に寄与
して、抗無気肺作用な示すと云われている。肺表面活性
物質については、従来櫨々の―−について多くの研究が
なされ、その全懇が明らかにされつ工ある。即ち、この
活性物質は、その成分としてリン脂質、中性脂質、蛋白
質等を含み、主成分はリン脂質の一つであるジベルｉト
イルレシチンであることが知られている。
蝋近、藤原らは午肺より抽出した活性物質に、により活
性の高い肺表面活性物質を得、これを用いて新生児呼吸
窮迫症候群（ＩＲＤ＆）Ｋ＠気道的に補光療法を行って
良好な結果を得たことを報告している（小児科臨床、錆
Ｓ！巻、第γ号。
性の高い肺表面活性物質を得、これを用いて新生児呼吸
窮迫症候群（ＩＲＤ＆）Ｋ＠気道的に補光療法を行って
良好な結果を得たことを報告している（小児科臨床、錆
Ｓ！巻、第γ号。
第１３４ｓ頁）、また、小林らは豚の肺洗浄液より活性
物質を分離、更に活性を高める為ｋＣ＆０を共存させた
肺表面活性物質をＡｌ＃Ｌ、ＩＲＤ８の補充療法を行い
成功している（日本界面医学会雑誌、第１ｚ巻、第１号
（口＋５１）Ｌこれらの方法に′Ｍいては天然の卸表ｔ
ｉ活性物質からＦｏｌｃｈの方法、即ちりａロホルム−
メタノール場合溶剤等で有機溶剤可ＳＳを抽出する方法
により脂質部を抽出して、牛や豚に由来する異種蛋白質
を除去しているもの〜、その除去は完全ではなく、１〜
５％前後の異種蛋白の１人が−められている。また天然
より得られた締嵌Ｗ１ｆ８性物質の中には、通常の血清
蛋白とは異る肺固有の蛋白の存在がＫｉｎｇらによって
も認められ℃いるＣ Ｋｌｎｇら＊ Ａｍ、 Ｊ、 Ｐ
ｈｙｍｌｅｌ 、 ＃ ２ｆ１４ 。
物質を分離、更に活性を高める為ｋＣ＆０を共存させた
肺表面活性物質をＡｌ＃Ｌ、ＩＲＤ８の補充療法を行い
成功している（日本界面医学会雑誌、第１ｚ巻、第１号
（口＋５１）Ｌこれらの方法に′Ｍいては天然の卸表ｔ
ｉ活性物質からＦｏｌｃｈの方法、即ちりａロホルム−
メタノール場合溶剤等で有機溶剤可ＳＳを抽出する方法
により脂質部を抽出して、牛や豚に由来する異種蛋白質
を除去しているもの〜、その除去は完全ではなく、１〜
５％前後の異種蛋白の１人が−められている。また天然
より得られた締嵌Ｗ１ｆ８性物質の中には、通常の血清
蛋白とは異る肺固有の蛋白の存在がＫｉｎｇらによって
も認められ℃いるＣ Ｋｌｎｇら＊ Ａｍ、 Ｊ、 Ｐ
ｈｙｍｌｅｌ 、 ＃ ２ｆ１４ 。
７１１１〜？１１５１ １１１７１：Ｆ＠ｄ、Ｐｒｏｃ
、１ ８８１２２８ａ〜１２４１．１９７４）。
、１ ８８１２２８ａ〜１２４１．１９７４）。
これは分子量がｓ ｉ、ｏ ｏ ｏで、疎水性のアｌノ
酸を多量に含む脂溶性蛋白であることが知られている。
酸を多量に含む脂溶性蛋白であることが知られている。
このような事実からして、上鮎の如く、天然の肺表面活
性物質からＦｏｌｅｈの方法により有機溶剤可溶部を抽
出することにより肺表面活性物質を調製することは、必
要なリン脂質、中性脂質等のみならず肺固有の蛋白も抽
出され、その混入は逸れないと考えられる。そして動物
由来の蛋白の混入は、抗原性をＱ現し、アナ７ラキシー
等の副作用が惹起される可能性があり、肺表面活性物質
の医薬品化を考えた場合、これらは好ましくない。
性物質からＦｏｌｅｈの方法により有機溶剤可溶部を抽
出することにより肺表面活性物質を調製することは、必
要なリン脂質、中性脂質等のみならず肺固有の蛋白も抽
出され、その混入は逸れないと考えられる。そして動物
由来の蛋白の混入は、抗原性をＱ現し、アナ７ラキシー
等の副作用が惹起される可能性があり、肺表面活性物質
の医薬品化を考えた場合、これらは好ましくない。
実際、稜述の参考ガに示す如く、哺乳−物の肺より分離
した締嵌ｒ＊ｉ活性物質からＦｏｌｅｈの方法により抽
出９槓製された脂質１ｉ１ｉＫは、冨〜１〜の動物由来
の蛋白質が混入していた。
した締嵌ｒ＊ｉ活性物質からＦｏｌｅｈの方法により抽
出９槓製された脂質１ｉ１ｉＫは、冨〜１〜の動物由来
の蛋白質が混入していた。
本発明看らは、高い表＊活性を有する肺表面活性物質を
得るべく、出来るだけ天然の膣表面ｔ８性吻質に近い組
成を基本組成とした、しかも異種蛋白な実質的に含まな
い一表面活性物質に関し鋭意研究を行なった。その結果
、動物由来の蛋白質の選択的除去は活性炭勢の吸着剤に
よる処理ＫＬって行なうことができるが、かかる処ＩＩ
ＩＡによって表面活性の低下が謔められる場合もあり、
必ずしも高活性のものが得られないということが判明し
た０本発明考らは！ＭＫ検討を続けた姑来、前述の如く
して得られた実質的に蛋白質を含まない肺表面活性物質
から、中性脂質とコレステロールを除去ないし減少させ
れば肺表面活性物質は粉末化できること、そしてこの粉
末状のものは、天然のものあるいは更にＦｏｌｃｂの方
法で抽出・精製されただけのものとほぼ同等の高い表面
活性を有することを知見し本発明に到達した。
得るべく、出来るだけ天然の膣表面ｔ８性吻質に近い組
成を基本組成とした、しかも異種蛋白な実質的に含まな
い一表面活性物質に関し鋭意研究を行なった。その結果
、動物由来の蛋白質の選択的除去は活性炭勢の吸着剤に
よる処理ＫＬって行なうことができるが、かかる処ＩＩ
ＩＡによって表面活性の低下が謔められる場合もあり、
必ずしも高活性のものが得られないということが判明し
た０本発明考らは！ＭＫ検討を続けた姑来、前述の如く
して得られた実質的に蛋白質を含まない肺表面活性物質
から、中性脂質とコレステロールを除去ないし減少させ
れば肺表面活性物質は粉末化できること、そしてこの粉
末状のものは、天然のものあるいは更にＦｏｌｃｂの方
法で抽出・精製されただけのものとほぼ同等の高い表面
活性を有することを知見し本発明に到達した。
即ち、本発明は、全体の８０重量う以上がリン脂質から
なり、実質的Ｋ１１ｉ白質を含まない粉末状の肺表面活
性物質である。そして、かかる粉末状の肺表面活性物質
は、哺乳−物の肺組織の抽出液あるいは肺洗浄液より分
Ｓ−積属して得られる線表Ｗ活性−質を、リン脂質可溶
性の有機溶剤に溶解し、得られた溶液を吸着剤Ｋｌｌ触
させることにより蛋白質を吸着除去し、その後、この溶
液にリン脂質不溶性又は離溶性の有機溶剤を添加混合し
て実質的に蛋白質を含まない肺表面活性物質を沈殿させ
、この沈殿を分堆し乾燥することによって調製すること
ができる。
なり、実質的Ｋ１１ｉ白質を含まない粉末状の肺表面活
性物質である。そして、かかる粉末状の肺表面活性物質
は、哺乳−物の肺組織の抽出液あるいは肺洗浄液より分
Ｓ−積属して得られる線表Ｗ活性−質を、リン脂質可溶
性の有機溶剤に溶解し、得られた溶液を吸着剤Ｋｌｌ触
させることにより蛋白質を吸着除去し、その後、この溶
液にリン脂質不溶性又は離溶性の有機溶剤を添加混合し
て実質的に蛋白質を含まない肺表面活性物質を沈殿させ
、この沈殿を分堆し乾燥することによって調製すること
ができる。
本発明において哺乳動物の肺組織の抽出液あるいは肺洗
浄液より分離精側して得られる肺表面活性物質とは、牛
、馬、豚、羊等の肺組織の抽出液あるいは肺洗浄液から
、例えば、遠心分離等の方法で分離・精製されるいわゆ
る天然の肺表面活性物質、あるいはこの天然の肺表面活
性物質を、例えば、Ｆｏｌ＠ｈの方法で更に抽出−精製
し【得られるより蛋白質含量の少ない脂質部等を意味す
る。
浄液より分離精側して得られる肺表面活性物質とは、牛
、馬、豚、羊等の肺組織の抽出液あるいは肺洗浄液から
、例えば、遠心分離等の方法で分離・精製されるいわゆ
る天然の肺表面活性物質、あるいはこの天然の肺表面活
性物質を、例えば、Ｆｏｌ＠ｈの方法で更に抽出−精製
し【得られるより蛋白質含量の少ない脂質部等を意味す
る。
本発明においては、前記の如き肺表面活性物質を、例え
ば、クロロホルム、塩化メチレン。
ば、クロロホルム、塩化メチレン。
四塩化炭素、テトラヒドロフラン、ジエチルエしくは濃
度がｔ−ｉｏ％（Ｗ／Ｖ）となる様に溶解する。そして
、得られた溶液Ｋｆｆｉ性炭やシリカゲル等の吸着剤を
添加し、好ましくは０〜３０℃で１０分〜３時間攪拌し
、その後、蛋白質を吸着した吸着剤を１通等により除く
、用いる吸着剤の量はリン脂質に対しｌ・００〜４００
重量％が適当である。
度がｔ−ｉｏ％（Ｗ／Ｖ）となる様に溶解する。そして
、得られた溶液Ｋｆｆｉ性炭やシリカゲル等の吸着剤を
添加し、好ましくは０〜３０℃で１０分〜３時間攪拌し
、その後、蛋白質を吸着した吸着剤を１通等により除く
、用いる吸着剤の量はリン脂質に対しｌ・００〜４００
重量％が適当である。
得られたＰ液あるいは濃縮したＰ液に、酢酸エチルやア
セトン等のリン脂質不溶性又はｔｍｓ性の有機溶剤を添
加混合し、実質的に蛋白質を含まない肺表面活性物質を
沈殿させる。必要に応じてこれらの操作は繰り返しても
よい。場合によっては、ｆ液を蒸発乾固し、固形状の締
嵌Ｉｊｉ活性物質を得、更にこれをクロロホルム、塩化
メチレン等の有機溶剤に溶かし直してから前記の沈殿操
作を行なってもよい。かかる沈殿操作によって、肺表面
活性物質中の中性脂質とフレステルールは除去ないし減
少させられる。この中性脂質とコレステルールを除去な
いし減少させる操作の後に、前述の蛋白質を吸着除去す
る操作を行なっても本発明の目的は達成することができ
る。
セトン等のリン脂質不溶性又はｔｍｓ性の有機溶剤を添
加混合し、実質的に蛋白質を含まない肺表面活性物質を
沈殿させる。必要に応じてこれらの操作は繰り返しても
よい。場合によっては、ｆ液を蒸発乾固し、固形状の締
嵌Ｉｊｉ活性物質を得、更にこれをクロロホルム、塩化
メチレン等の有機溶剤に溶かし直してから前記の沈殿操
作を行なってもよい。かかる沈殿操作によって、肺表面
活性物質中の中性脂質とフレステルールは除去ないし減
少させられる。この中性脂質とコレステルールを除去な
いし減少させる操作の後に、前述の蛋白質を吸着除去す
る操作を行なっても本発明の目的は達成することができ
る。
次に、沈殿は濾過あるいは遠心分離等で分取し、その後
、例えば減圧下に乾燥され、粉末状の肺表面活性物質と
なる。かくして得られた肺表面活性物質は、その８０重
量襲以上がリン脂質からなり、蛋白質の含量は０．５重
量繁以下である。リン脂質の主要成分はホス７アチジル
コリンとホス７アジルグυセロールであり、前者は全リ
ン脂質の６ｓ〜９０重量シを占め、後者は３〜Ｉｓ重量
％な占め【いる、ホスファチジルコリンの６５〜５ｏｌ
ｌｉｌｉ％がパルミチン酸を在要成分とする飽和側肪酸
残基を２儒有するホスファチジルコリンである。中性脂
質はＳ重量％以下で、コレステー−ルはほとんど會まれ
ていない。
、例えば減圧下に乾燥され、粉末状の肺表面活性物質と
なる。かくして得られた肺表面活性物質は、その８０重
量襲以上がリン脂質からなり、蛋白質の含量は０．５重
量繁以下である。リン脂質の主要成分はホス７アチジル
コリンとホス７アジルグυセロールであり、前者は全リ
ン脂質の６ｓ〜９０重量シを占め、後者は３〜Ｉｓ重量
％な占め【いる、ホスファチジルコリンの６５〜５ｏｌ
ｌｉｌｉ％がパルミチン酸を在要成分とする飽和側肪酸
残基を２儒有するホスファチジルコリンである。中性脂
質はＳ重量％以下で、コレステー−ルはほとんど會まれ
ていない。
本発明の肺表面活性物質の表面活性は４１４の改良型ウ
イルヘルミーバランスで測定すると、第１図に示すよう
な肺表面活性物質の時異なヒステリレスループを描き、
最小表面張力は１０ｄｙｎｅ／ｃｍ以下、最大１１Ｉ面
張力は４５〜６０ｄｙｎ＊／１であった。安定性の指標
であるスタビリテイインデックスは１．８以上であった
。
イルヘルミーバランスで測定すると、第１図に示すよう
な肺表面活性物質の時異なヒステリレスループを描き、
最小表面張力は１０ｄｙｎｅ／ｃｍ以下、最大１１Ｉ面
張力は４５〜６０ｄｙｎ＊／１であった。安定性の指標
であるスタビリテイインデックスは１．８以上であった
。
本発明の肺表面活性物質は粉末状であるので、そのまへ
粉末剤として吸入等の方法により、呼吸窮迫症候群等の
治療に使用することができる。
粉末剤として吸入等の方法により、呼吸窮迫症候群等の
治療に使用することができる。
また、表面活性に障害にならない医学的に杵容される粉
末状物質、例えばアミノ酸や着を、賦形剤あるいは保存
剤として使用することもできる。
末状物質、例えばアミノ酸や着を、賦形剤あるいは保存
剤として使用することもできる。
以下、参考例及び実施例により本発明を詳述する。なお
、本発＠において、各種の分析・測定は以下の如き方法
で行なったものである。
、本発＠において、各種の分析・測定は以下の如き方法
で行なったものである。
リン脂質は、 ＢａｒｔｌＩｔｔ法でリン含量を求め、
リン脂質成分の分子量を主成分のホスファチジルコリン
ジパルミトイルのそれで代表し、得られたリン含量の値
に７３４／！ＩＩを乗じたものをリンＪｊｌｔ質含菫と
した。中性脂質、総コレステロール、貴水化物は酵素と
の反応を利用した日立７Ｇ＋Ｓ型自動分析装置で分析し
、算出した。蛋白質の測定はＬｏｗｒｙ法に準じた方法
により行い、牛血清、アルブミンによる検量−にて算出
或いは有無の検出を行った。リン脂質の各成分は、常法
によりシリカゲルの二次元薄層クロマトグラフィーによ
り各成分を分−し、次に分離された各スポットを分取、
抽出してＢａｒｔｌｌＩｔ法でリンを定量し、前記の方
法で算出した。
リン脂質成分の分子量を主成分のホスファチジルコリン
ジパルミトイルのそれで代表し、得られたリン含量の値
に７３４／！ＩＩを乗じたものをリンＪｊｌｔ質含菫と
した。中性脂質、総コレステロール、貴水化物は酵素と
の反応を利用した日立７Ｇ＋Ｓ型自動分析装置で分析し
、算出した。蛋白質の測定はＬｏｗｒｙ法に準じた方法
により行い、牛血清、アルブミンによる検量−にて算出
或いは有無の検出を行った。リン脂質の各成分は、常法
によりシリカゲルの二次元薄層クロマトグラフィーによ
り各成分を分−し、次に分離された各スポットを分取、
抽出してＢａｒｔｌｌＩｔ法でリンを定量し、前記の方
法で算出した。
肺表面活性物質の表面張力の測定とスタビリテイインデ
ックスの算出は以下の如き方法で行なった。
ックスの算出は以下の如き方法で行なった。
測定には７コマ社製のウイルヘル１−バランスを使用し
、このテフロン水槽に生湯食塩水を５Ｃ＋＋ｊ入れ、そ
の上に粉末上の被検賦料戚いは分散液状の被検試料の重
量を靜かにのせた。そして、Ｏ，Ｓサイクル７分の速度
で液体の表面積を４０ｍ１から１ｌａｄの間で連続的に
サイクリングさせ、ｘ−ｙレコーダで第１図に示した如
き表面積−表面張力ダイアグラ人を記録した。ｔイクリ
ング開始後ｉ〜＠＠目で一定に収束したヒステリレスル
ープから最小表面張力（ｒ ａｋｉｎ ）の櫨と轍大表
面張力（ｒ ｗａｘ ）の値及び安定性の指標であるス
タビリテイ・インデックス（８，１）を下記式から求め
た。
、このテフロン水槽に生湯食塩水を５Ｃ＋＋ｊ入れ、そ
の上に粉末上の被検賦料戚いは分散液状の被検試料の重
量を靜かにのせた。そして、Ｏ，Ｓサイクル７分の速度
で液体の表面積を４０ｍ１から１ｌａｄの間で連続的に
サイクリングさせ、ｘ−ｙレコーダで第１図に示した如
き表面積−表面張力ダイアグラ人を記録した。ｔイクリ
ング開始後ｉ〜＠＠目で一定に収束したヒステリレスル
ープから最小表面張力（ｒ ａｋｉｎ ）の櫨と轍大表
面張力（ｒ ｗａｘ ）の値及び安定性の指標であるス
タビリテイ・インデックス（８，１）を下記式から求め
た。
参考例及び夷總例中の％はすべて重量基準である。
参考例
Ｍ、Ｅ、Ａｂｒａｍｓの方法（Ｊ、Ａｐｐｌ 、Ｐｈｙ
ｓｉｏｌ、 ２１ 。
ｓｉｏｌ、 ２１ 。
７１８−４２０ ）に基ぎ、下記に示す方法で１ｍ！１
面活性物質を分離した。即ち、牛の肺臓２ｋｌｌを細切
し、生湯食塩水５１を用いてホモジナイザーでホモジナ
イズレ、ガーゼにてｆ遇して抽出液を得た。次ｉｃ１０
００ｒｐｍＸ３Ｇ分の低連遠心分離で行ない上清をとり
、得られた上清を７００ Ｏｒｐｍの高速回転で１時間
遠心分鐘し、沈渣を得た。予め冷却ｌＩＩ製した飽和食
塩水（比１１２１）に沈渣を分散し、７０００ ｒｐＢ
Ｘ３１０分間の達心分−を行い、上層の白い薄層を分
取した。この白い薄層部を冷ｍａｉ習水で透析し、凍結
乾燥を行うことにより天然の肺表面活性物質を得た。
面活性物質を分離した。即ち、牛の肺臓２ｋｌｌを細切
し、生湯食塩水５１を用いてホモジナイザーでホモジナ
イズレ、ガーゼにてｆ遇して抽出液を得た。次ｉｃ１０
００ｒｐｍＸ３Ｇ分の低連遠心分離で行ない上清をとり
、得られた上清を７００ Ｏｒｐｍの高速回転で１時間
遠心分鐘し、沈渣を得た。予め冷却ｌＩＩ製した飽和食
塩水（比１１２１）に沈渣を分散し、７０００ ｒｐＢ
Ｘ３１０分間の達心分−を行い、上層の白い薄層を分
取した。この白い薄層部を冷ｍａｉ習水で透析し、凍結
乾燥を行うことにより天然の肺表面活性物質を得た。
次にＦｅｔｃｈの方法に準じて、クー−ホルム／メタノ
ール（ｚ：１マ／ｖ ）混合溶媒に得られ恢然の肺表面
活性物質を溶解し、０．１％の食塩水に接触静置するこ
とにより、脂質部を得た。この脂質部の表面活性及びＬ
ｏｖｒｙ法による蛋白質含量の測定結果は！Ｉｌｌ！に
示す如くであり１表面活性は高いが、約１聾の蛋白が含
有されていた。またこの脂質部をＳＯ２で可溶化し、ポ
リアクリルアイドゲルデスク電気泳動分析を通常の方法
で行ったところ、移動度０．１１のどころに単一バンド
が１められた。これは標準として同時に行った免疫グロ
ブリンのし鎖、Ｈ鎖の移馳度より、分子量は約３１ｓ、
０００と推定された。
ール（ｚ：１マ／ｖ ）混合溶媒に得られ恢然の肺表面
活性物質を溶解し、０．１％の食塩水に接触静置するこ
とにより、脂質部を得た。この脂質部の表面活性及びＬ
ｏｖｒｙ法による蛋白質含量の測定結果は！Ｉｌｌ！に
示す如くであり１表面活性は高いが、約１聾の蛋白が含
有されていた。またこの脂質部をＳＯ２で可溶化し、ポ
リアクリルアイドゲルデスク電気泳動分析を通常の方法
で行ったところ、移動度０．１１のどころに単一バンド
が１められた。これは標準として同時に行った免疫グロ
ブリンのし鎖、Ｈ鎖の移馳度より、分子量は約３１ｓ、
０００と推定された。
実施例１
参考例と同様の方法で得られた肺表面活性物質の脂質部
（Ｆｏｌｃｈの方法で精製したもの）（１，８％の蛋白
を含む）１．Ｏｊをクロロホルム１０ａｊ［溶解した。
（Ｆｏｌｃｈの方法で精製したもの）（１，８％の蛋白
を含む）１．Ｏｊをクロロホルム１０ａｊ［溶解した。
これに粉末活性炭ｊＯＪｌを加え、室温、窒素雰囲気下
に約３０分攪拌し、活性炭を１通により除き、Ｐ液をロ
ータリーエバポレーターで室温、減圧下に蒸発乾固した
。
に約３０分攪拌し、活性炭を１通により除き、Ｐ液をロ
ータリーエバポレーターで室温、減圧下に蒸発乾固した
。
ｖ！に高真空下乾燥し、白黄色固形物７００１１を得た
。このもの〜表面活性は第１表に示した。
。このもの〜表面活性は第１表に示した。
蛋白含量は測定限界の５μＱ／ｄ以下であり実質的に含
まれていなかった。
まれていなかった。
次に得られた固形物５００ををクロロホルム２、ＢＩＬ
ＩＩＩＣ溶解し、これｅ’ｃ７（！トン１２ｓａｔを添
加し、攪拌して白色沈澱を生成せしめ、ａｏｏ。
ＩＩＩＣ溶解し、これｅ’ｃ７（！トン１２ｓａｔを添
加し、攪拌して白色沈澱を生成せしめ、ａｏｏ。
ｒｐｍで１０分間の遠心分離を行ない白色沈澱物を得た
。その後、２１ＳＩＩｊのりＩ：ｌｐホルムに溶解し、
アセトン１２．５１１ｊを添加することによる再沈化操
作３回繰返し行い、乾燥して白色粉末状物質２５０ｍｌ
１を得た。このもの瓦表面活性は第１表に示した如くで
あった。５Ｄ８−デスク電気泳動分析は、検体１．０％
を含む１０％８０８浴液３ＩＯμノをポリアクリルアミ
ドゲルに重層することにより行ったが、クーＴジープｖ
１１１アントブルーで染色の結果、何のバンド４−めら
れなかった。またＬｏｖｒｙ法により蛋白含量を一定し
た結果測定限界の５ｓｌｉ／−以下であった。
。その後、２１ＳＩＩｊのりＩ：ｌｐホルムに溶解し、
アセトン１２．５１１ｊを添加することによる再沈化操
作３回繰返し行い、乾燥して白色粉末状物質２５０ｍｌ
１を得た。このもの瓦表面活性は第１表に示した如くで
あった。５Ｄ８−デスク電気泳動分析は、検体１．０％
を含む１０％８０８浴液３ＩＯμノをポリアクリルアミ
ドゲルに重層することにより行ったが、クーＴジープｖ
１１１アントブルーで染色の結果、何のバンド４−めら
れなかった。またＬｏｖｒｙ法により蛋白含量を一定し
た結果測定限界の５ｓｌｉ／−以下であった。
縞１表から明らかな如く、除蛋白し更に１１車化したも
のは、除蛋白だけのものに比べ、最小表面張力が小さく
なりかつスタビリテイ・インデックスは高くなっており
、表面活性が鳥くなっている。
のは、除蛋白だけのものに比べ、最小表面張力が小さく
なりかつスタビリテイ・インデックスは高くなっており
、表面活性が鳥くなっている。
なお、本機ｌ／ｌＡｌ１で得られた本発明の肺表面活性
物質の組成は、以下の通りであった。
物質の組成は、以下の通りであった。
また、本発明の肺表面活性資質の電性毒性試験な、６週
令のｄｄ−系マウスの腹腔内投与で検討したが、所見で
は何んの異常も−められず、Ｌ Ｄ ６０１１［はａｌ
ｌ／ｋ１以上であった。
令のｄｄ−系マウスの腹腔内投与で検討したが、所見で
は何んの異常も−められず、Ｌ Ｄ ６０１１［はａｌ
ｌ／ｋ１以上であった。
ｉＪ！織例２
豚の肺ｐｉＡ１ｋＩＩより、実地例１と同様な方法で肺
表面活性物質の脂質部１゜２．９を得た。このものを５
−のクロロホルムに溶解し、過燭ア七トンを添加して白
色沈殿物な得た０本操作をＶ＠總例１と同ｌｌＡ３１ｇ
１行い、白色沈澱物を得た０次にこのもの５ｏｏａｌＩ
＋をクロロホルム３ｏ−に溶解し、これに粉末状活性炭
１．０９を加え、窒素雰囲気下に憲温で１時間攪拌した
。濾過により活性炭除去後、乾燥して白色粉末体ａｓｏ
ｑを得た。このもの〜表Ｉｆ活性は第１表に示した通り
であり、蛋白片量は５Ｂｌｉ／ｄ以下であった。
表面活性物質の脂質部１゜２．９を得た。このものを５
−のクロロホルムに溶解し、過燭ア七トンを添加して白
色沈殿物な得た０本操作をＶ＠總例１と同ｌｌＡ３１ｇ
１行い、白色沈澱物を得た０次にこのもの５ｏｏａｌＩ
＋をクロロホルム３ｏ−に溶解し、これに粉末状活性炭
１．０９を加え、窒素雰囲気下に憲温で１時間攪拌した
。濾過により活性炭除去後、乾燥して白色粉末体ａｓｏ
ｑを得た。このもの〜表Ｉｆ活性は第１表に示した通り
であり、蛋白片量は５Ｂｌｉ／ｄ以下であった。
実施例３
参考例の方法に従って牛膝組織より得た、天然の肺表面
活性物質（Ｐｏ１ｃｈの方法で槽ｍ＊のもの）の表１１
ｉｆ活性及び厳白含量は第１表に示した如くであった。
活性物質（Ｐｏ１ｃｈの方法で槽ｍ＊のもの）の表１１
ｉｆ活性及び厳白含量は第１表に示した如くであった。
この締嵌ｍｇ性吻質１０ｊを４０Ｊ１７のクローホルム
＜ＳＳした。なおこの際不溶物は濾過により鹸いた。得
られたりａｍホルム溶液に活性炭２．Ｏ１ｉ／を添加し
、皇温で２Ｉ１間攪拌した。
＜ＳＳした。なおこの際不溶物は濾過により鹸いた。得
られたりａｍホルム溶液に活性炭２．Ｏ１ｉ／を添加し
、皇温で２Ｉ１間攪拌した。
Ｐ４により活性炭除去後、りＤＥＩホルム留去によりＩ
Ｉ Ｓ−ａ ｄ １１Ｃ潰鐘した。過剰の酢酸エチルエ
ステルを添加し、白い沈殿物な得た。再度少産のクロロ
ホルムにＳ解し、酢酸エチルエステルにて沈殿させ［７
して白色粉末状物質４１１０ダを得た。
Ｉ Ｓ−ａ ｄ １１Ｃ潰鐘した。過剰の酢酸エチルエ
ステルを添加し、白い沈殿物な得た。再度少産のクロロ
ホルムにＳ解し、酢酸エチルエステルにて沈殿させ［７
して白色粉末状物質４１１０ダを得た。
このもの五表′ｗＪ活性は第１表に示した如く非常に＾
く、蛋白含蓄は５μ７７／Ｉ以下であった。
く、蛋白含蓄は５μ７７／Ｉ以下であった。
実施Ｈ４
肱の摘出肺に生壇賞埴水を注入して、腑欠階液２１を得
た。５００ ｒｐｍＸ２０分間の低遣瀘心で細胞−分１
＊き、６．００ＯｒｐＨ１Ｘ１時間で、白黄色の沈渣を
得た８次に沈渣を飽和食塩水に分散し、比重１，１７の
分散液を調製して、ｔ、ｏ ｏ 。
た。５００ ｒｐｍＸ２０分間の低遣瀘心で細胞−分１
＊き、６．００ＯｒｐＨ１Ｘ１時間で、白黄色の沈渣を
得た８次に沈渣を飽和食塩水に分散し、比重１，１７の
分散液を調製して、ｔ、ｏ ｏ 。
ｒｐｍ Ｘ １時間の遠心分画な行った。分離した上層
の白色ｊ−を取り、過剰の７七トンに分散して、アセト
ン可溶部な除去しクロロホルム−メタノール２対１の混
合溶媒に溶かし、Ｆｏｌｅｈらの方法に準じて、脂質部
を３２０雫な得た。
の白色ｊ−を取り、過剰の７七トンに分散して、アセト
ン可溶部な除去しクロロホルム−メタノール２対１の混
合溶媒に溶かし、Ｆｏｌｅｈらの方法に準じて、脂質部
を３２０雫な得た。
得られた脂質部をクロロホルム２０−に溶解し、粉末活
性炭５ＱＯＩｖを添加、３０分攪拌した。濾過により活
性炭除去後、乾燥して白黄色物２００■を得た。このも
の〜表面活性は第１表に示した如くであり、ｆ白含量は
検出限界ｂμＪｊ／ａｔであった。
性炭５ＱＯＩｖを添加、３０分攪拌した。濾過により活
性炭除去後、乾燥して白黄色物２００■を得た。このも
の〜表面活性は第１表に示した如くであり、ｆ白含量は
検出限界ｂμＪｊ／ａｔであった。
第１表
第１図は、肺表面活性物質の表面積−表面張力ダイアグ
ラムを示す。 ＩＴｌ＃ α′
ラムを示す。 ＩＴｌ＃ α′
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 Ｌ 全体の８０重量弊以上がリン脂質からなり、実質的
に蛋白質を含まない粉末状の締嵌ｌ１ｆｔＡ性物質。 １ リン脂質の主要成分がホスファチジルコリンとホス
７アチジルグリセーールであり、前者は食リン脂質の６
ｂ〜會Ｏ重量襲を占め、後者はＳ〜ＩＳ重量シを占める
、特許請求の範囲第４項記載の肺表面活性物質。 λ ホス７７チジルコ曽ンの６ｓ〜９０重量％がパルミ
チン酸を主要成分とする飽和脂肪酸残基を２個有するホ
ス７アチンル２ｖンである、特許請求の範囲第３項記載
の肺表面活性物質。 未 哺乳−物の肺組織の抽出液あるいは騰洗浄液より分
離、槽頴して得られる肺＃１ＩｉＩｉｉ活性物質を、リ
ン脂質ｅｑｓ性の有機溶剤に溶解し、得られた溶液を吸
着剤に接触させるととにより蛋白質を吸着除去し、その
４１該嬉液にリン脂質不溶性又は５ｉｔｓ性の有機溶剤
を添加混合して実質的に蛋白質を含まない肺表面活性物
質を沈ｗＩｓせ、該沈殿を公職し乾燥することからなる
粉末状の肺表面活性物質のｗＩｌ法。 ＩＬＴＩ＆着剤が活性炭又はシリカゲルである、特許請
求の範囲第４項記載の肺表面活性物質の１製法。 ｔＶリン質可溶性の有４１溶剤がクーロホルム。 塩化メチレン、ｌｉ塩化炭素、テトラヒドロフラン、ジ
エチルエーテル又はこれらの混合物である、特許請求の
範囲第４項記載の肺表面活性物質の調製法。 ７、リン脂質不溶性又は―溶性の有機溶剤がア七トン、
酢酸エチル、メチルエチルケトン。 ベンゼン又はこれらの温合物である。４１１杵請求の範
Ｓ第４項記載の肺表面活性物質の調製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57046404A JPS58164513A (ja) | 1982-03-25 | 1982-03-25 | 肺表面活性物質及びその調製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57046404A JPS58164513A (ja) | 1982-03-25 | 1982-03-25 | 肺表面活性物質及びその調製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58164513A true JPS58164513A (ja) | 1983-09-29 |
Family
ID=12746210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57046404A Pending JPS58164513A (ja) | 1982-03-25 | 1982-03-25 | 肺表面活性物質及びその調製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58164513A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4861756A (en) * | 1988-03-08 | 1989-08-29 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Synthetic pulmonary surfactant |
| WO1991017766A1 (en) * | 1990-05-18 | 1991-11-28 | Tokyo Tanabe Company Limited | Remedy for asthma |
| EP0521398A2 (de) * | 1991-07-05 | 1993-01-07 | Rhone-Poulenc Rorer | Phospholipidische Zusammensetzung |
| WO1999027920A3 (en) * | 1997-12-03 | 1999-09-10 | Britannia Pharmaceuticals Ltd | Use of phospholipids for the manufacture of a medicament for the treatment of asthma |
| US6719960B1 (en) * | 1998-04-03 | 2004-04-13 | Britannia Pharmaceuticals Ltd. | Use of phospholipids for the manufacture of a medicament for the prevention of adhesions |
| US6824761B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-11-30 | Britannia Pharmaceuticals Limited | Anti-asthmatic combinations comprising surface active phospholipids |
-
1982
- 1982-03-25 JP JP57046404A patent/JPS58164513A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4861756A (en) * | 1988-03-08 | 1989-08-29 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Synthetic pulmonary surfactant |
| WO1991017766A1 (en) * | 1990-05-18 | 1991-11-28 | Tokyo Tanabe Company Limited | Remedy for asthma |
| EP0521398A2 (de) * | 1991-07-05 | 1993-01-07 | Rhone-Poulenc Rorer | Phospholipidische Zusammensetzung |
| WO1999027920A3 (en) * | 1997-12-03 | 1999-09-10 | Britannia Pharmaceuticals Ltd | Use of phospholipids for the manufacture of a medicament for the treatment of asthma |
| US6482391B1 (en) | 1997-12-03 | 2002-11-19 | Britannia Pharmaceuticals Limited | Medicaments for asthma treatment |
| US6719960B1 (en) * | 1998-04-03 | 2004-04-13 | Britannia Pharmaceuticals Ltd. | Use of phospholipids for the manufacture of a medicament for the prevention of adhesions |
| US7273604B2 (en) | 1998-11-26 | 2007-09-25 | Britannia Pharmaceuticals Limited | Anti-asthmatic combinations comprising surface active phospholipids |
| US6824761B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-11-30 | Britannia Pharmaceuticals Limited | Anti-asthmatic combinations comprising surface active phospholipids |
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