JPS59107262A

JPS59107262A - 抗ストレプトリジンｏを検知する組成物およびその検出方法

Info

Publication number: JPS59107262A
Application number: JP58210684A
Authority: JP
Inventors: ロ−レンス・ハウエル・グリ−ン; ジヨン・ウオルタ−・ロバ−ツ
Original assignee: American Home Products Corp
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 1982-11-08
Filing date: 1983-11-08
Publication date: 1984-06-21
Also published as: NZ206079A; IE55289B1; DK510183A; US4554248A; EP0108612A1; GR79499B; ATE26489T1; EP0108612B1; AU2090983A; IE832497L; ZA838071B; DE3370868D1; CA1215303A; AU560383B2; DK510183D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ストレプトリジンＯ（以下、ＳＯという）は、大多数の
Ａ群連鎖球菌により産生される溶血性蛋白である。ＳＯ
の１つの特性はその抗原性で、通常、Ａ群連鎖球菌の感
染に応じて抗ストレプ）　ＩＪリジン（以下、ＡＳＯと
いう）の産生を伴なう。

ＡＳＯはＳＯに結合してＳＯ溶血活性を阻止するが、感
染に応じて産生されるＡＳＯの量は、ＳＯを阻止するの
に必要とされる量を超過することがありうる。さらに、
しばしば、繰返し感染は過敏な免疫反応およびＡＳＯの
過剰な産生を引き起こす。ＡＳＯはまたＭ型蛋白にも結
合するため、第２の免疫反応を生じ、その続発症として
は、ある種の心臓および腎臓組織の変性または破壊が挙
げられ、これは、リウマチ熱または急性糸球体腎炎を招
くことがある。

また、ＳＯ溶血活性は酸化状態では中和または破壊され
ることがよく知られている。ＳＯ抗原が商業上容易に入
手されること、並びに、ＳＯおよびＡＳＯの前記特性か
ら、患者のＡＳＯ力価の測定およびモニタリングが実用
的な、有効な診断手段となっている。

商業上容易に入手できるＡＳＯ力価測定用キ゛ントの大
部分はランフおよびランドール法（ｔｈｅＲａｎｔｚ　
　ａｎｄ　Ｒａｎｄａｌｌ　　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ
　　Ｐｒｏｃ。

Ｓｅｃ、　Ｅｘｐ、　ＢｉｏｌｌＭｅｄ、　（Ｎ、　Ｙ
、）　５９．２２（１９４５））　　に基づいている。

該方法では、技師に数−の血液を採取し、それを処理し
て血清にすることを要求している。ついで、該血清を希
釈し、３７℃にてＳＯと共にインキュベートする。

１５分間の初回インキュベーションの後、５％洗浄ウサ
ギ、ヒツジ、あるいはヒトの０型赤血球（ＲＢ　Ｃ）の
一定量を加え、該試料を再度インキュベートする。との
試験管が溶血したＲＢＣを含有するのかを観察すること
により、ＡＳＯ力価を約４５分後番こ測定する。該方法
は非常に時間を費やし、冗長なものである。また、該方
法では、幾つかの工程においてピペット操作の誤差が発
生しやすく、不正確な結果を招く。さらに、該方法では
技師が遠心裁、インキュベーター、および洗浄した５％
ＲＢＣの新鮮な供給を取扱わなけれはならない。

さらに新しい方法が、リツキイら（Ｒｉｃｃｉ　ｅｔａ
ｌ、、　ｊ’ｌ　Ｃ１１ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂ、、　Ｖｏ
ｌ、８．　ｎｏ、　３゜２６３〜２６７（１９７８）お
よび１９７９年４月１０日発行の米国特許第４１４８６
０９号に記載されている。クツキイ法では、ＳＯを酸化
によって化学的に変換してジスルフィド結合を形成させ
、該分子の溶血活性を化学的に不活性化する。

該酸化ＳＯをＡＳＯを含有しうる血液試料とともにイン
キュベートした後、該ＳＯを還元物質で再び化学的に変
換してＳＯ溶血活性を回復させる。

つきに、全ての反応しうるＡＳＯを結合するに必要な量
以上のＳＯが、血液試料中の赤血球を自由に溶血する。

これらのＡＳＯ力価測定試験のほとんど番こおし）で測
定値はトッド（Ｔｏｄｄ　）単位で表現される。

すなわち、ＳＯの１トッド単位（’ｒ　ｕ　）は、食塩
水中、５％赤血球１−を３７℃、１時間で完全に溶血す
るのに必要なＳＯの量として便宜的に定義されている。

これに相関して、ＡＳＯのＩＴＵは２．５ＴｕのＳＯに
結合するＡＳＯの量として定義されている。しかし、ト
ッド単位を使うか、または、ＳＯ溶血活性とそのＡＳＯ
との結合能力に相関した他の便宜的な単位を使うかは、
かかる表現または測定が正常人および感染患者で観察さ
れたＡＳＯ力価と関連しているかきり、選択１の問題で
ある。

本明細書で用いる「溶血活性」なる語は、自球を溶解す
るＳＯの能力として使用し定義され、また、「溶血能力
」なる語は溶血活性の量および、ＳＯが有するＡＳＯに
対する結合能力の１迂に関連して用いられ、４定義され
る。

本発明は未知の血液試料、通常、ヒトの血液の抗ストレ
プトリジン０（ＡＳＯ）力価を定性的または定量的に測
定する試薬として有効なストレプトリゾン０（ＳＯ）の
組成物を提供するものである。本発明の組成物は、ＳＯ
が溶血活性を有するｐ　Ｉ−Ｉ範囲よりも実質的に外側
のｐＨを有するＳＯ簀液からなる。有利なことに、本発
明組成物は凍結乾燥、真空乾燥または他の公知の方法に
よって得られる乾燥形態で用いられる。

本発明の利点は、ＳＯの溶血活性がｐＨ感受性を有する
という新たな知見に基く。すなわち、処理後のＳＯの溶
血能力Ｇこ実質的な影響を及ぼしたり、あるいは減少さ
せたりすることなく該組成物のｐＨをＳＯの溶血活性範
囲外に調整することによって、ＳＯの溶血活性を可逆的
に中和もしくは不活性化できることが判明した。その結
果、ＳＯ含有組成物のＰＩＩをＳＯの溶血活性範囲内に
再ひ調整したとき、該組成物中のＳＯの溶血能力が回復
もしくは再活性化される。したがって、他の態様では、
本発明はＳＯ組成物もしくは溶液のｐＨをＳＯか溶血活
性を有するｐＨ範囲外に調整する工程からなる、ＳＯの
溶血能力を可逆的に不活性化する方法を包含する。

本発明のさらにもう１つの態様は、全面であるかその血
清であるかにかかわらす血液試料中のＡＳＯ力価または
その濃度を測定する方法に関する。

一般に、該方法はまず第１に少なくとも１つの溶血され
ていない血液の試料を少なくとも１つの所定量のＳＯと
混合することからなる。混合は非溶血性溶液中で行なわ
れるが、そのｐｔｌはＳＯの溶血活性範囲外で、かつ、
該方法で用いるＳＯは既知の溶血能力を有する。

第２工程では、血液試料中のいかなるＡＳＯをも該ＳＯ
と反応（結合）させるのに充分な時間各溶液をインキュ
ベートする。その後、結合していないＳＯの溶血活性を
、各インキュベート溶液のｐＨをＳＯの溶血活性範囲内
に調整することによって回復（再活性化）させ、それに
より、ＡＳＯとの反応に必要な量を超える遊離（未結合
）の５０は血液、つまり血球を溶解することができる。

該方法の最終段階は各溶液中の溶血の有無を検出するこ
とからなる。

本発明の一態様は、ＳＯの溶血活性範囲外のｐＨすなわ
ち約４．８〜約９．０以外、より好ましくは約４．６か
ら約９．５〜９．６以外のｐＨのＳＯを含有する組成物
に関する。本発明組成物の有用性は、溶液であるか乾燥
形態であるか番こかかわらず、ＳＯの溶血活性が可逆的
にｐＨ感受性であるという知見に基づく。したがって、
該組成物は、ＡＳＯの検出または測定に、あるいはＡ群
連鎖球菌に対してＡＳＯ抗体を産生ずる病状や感染の経
過または病状や感染番と対する治療法の効果をモニター
するのに試薬として使用することができる。

何ら特定の理論に拘束されるものではないが、溶血活性
はある一定のｐＨ範囲において最も好ましく、該ｐＨを
かかる至適ｐＨ域外に調整したときは、溶血活性は、Ｓ
Ｏの（溶面的）活性部位の配置における累進的なｐＨ誘
導変化を受けるものと考えられる。また、該ｐＨをＳＯ
の溶血活性範囲外のｐＨに調整するとＳＯの溶血活性を
全体的に抑制することができるが、かかる調整はＡＳＯ
へのＳＯ結合または反応部位に影響を及ぼすものではな
く、また、調整されたＳＯの溶血活性を破壊したり永久
的に不活性化するものでもなし）。

本発明の組成物および方法のもう１つの利点は、本発明
の利用にあたって血液からの血清の分離または補体から
の血清の除去を要しないことである。

本発明の方法はかかる分離フラクションを利用してもよ
いが、該方法はわずかの試料を用いて全血について行な
う場合に最も有利である。

本発明の組成物は、その活性がＳＯの溶血活性範囲外の
ｐＨへの前記ｐＨ調整によって可逆的番こ不活性化され
ているＳＯの他の溶血性的に活性な形態を用いるもので
ある。更に詳しくは、本発明の組成物および方法は、溶
血性的に活性な、還元された形態のＳＯを利用するもの
である。

ＳＯの該溶血活性形態を得るには多くの経路があるが、
次の方法が有利に用いられる。凍結保存されているスト
レプトコッカス・ピオゲネス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ
ｕｓ　　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　）タイプＩ（Ａ群）の溶血
性株を解凍し、血液を５％含有する寒天平板上に画線塗
布し、３７℃にて１８〜２４時間インキュベートする。

この第１平板から得られるコロニーを第２平板上に画線
塗布し、同じ条件でインキュベートする。その後、第２
平板から得られる数個のコロニーを用いてトツドーヘウ
イツ）　（Ｔｏｄｄ　−Ｈｅｗｉ　ｔ　Ｌ　（ＴＨ）　
）ブロス１０　ｍｌ＋ｃ接種し、３７℃にて１８〜２４
時間インキュベートする。インキュベーション後、該第
１のＴＨ懸濁液１．０−をＴＨブロス１０−を含む第２
の試験管内に接種し、インキュベートし、ついで第２の
試験管から得た１ｍｌをＴＨブロス１００−を有する第
３の容器内に接種する。その後、最終インキュベート懸
濁液１００−をＴＨブロス１０／中に接種し、全ての菌
が沈降するまで３７℃、ついで５℃にてインキュベート
し、その後に接菌を沖去する。ＳＯを含有する沖液はｐ
Ｈを約６．７５に調整した後、凍結保存することができ
る。使用前に、該ｒ液中のＳＯを還元し、ＳＯ調製中に
酸化により損失してしまう可能性のあるＳＯ溶血活性を
回復させ、保持する。ＳＯを還元するには公知の他の還
元剤を用いてもよいが、システィンが好ましい還元剤で
ある。

本発明方法を行なう１態様によれば、１またはそれ以上
の所定量の溶血活性形態のＳＯを、ＳＯの溶血活性範囲
外のｐＨを有する非溶血性溶液中で少なくとも１つの溶
血されていない血液試料と混合してもよい。別法として
、溶血活性ＳＯを含有する沖液または溶液のｐＨをＳＯ
の溶血活性範囲外のｐＨ１好ましくはｐＨ約９．４以上
、最も好ましくはｐＨ約９．５〜９．６以上に調整して
本発明の組成物を得る。該調整には、水酸化ナトリウム
または水酸化カリウムなどの塩基性物質および／または
緩衝剤が用いられる。ｐＨを調整した（不活性化された
）ＳＯは凍結保存してもよいが、本発明の方法を行なう
他の態様においては、該ＳＯを、直ちに、少なくとも１
つの溶血していない血液試料と混合し、それにより混合
した溶液のｐＨを５ｏの溶血活性範囲外に保持すること
により、適当な１以上の稀釈物に用いることが好まｌ−
い。

最も好ましくは、溶血的に活性な（還元された）ＳＯを
含むｒ液（溶液）の所定の１以上の量または希釈物を１
以上の試験容器内で直接真空乾燥するか、あるいは乾燥
し、ついで１またはそれ以上の試験容器に入れる。乾燥
形態の本発明組成物は室温で安定であるが、冷却条件下
での保管によりさらに長期の安定性が得られる。前記の
ごとく、本発明で用いる溶血的に活性なＳＯは既知の、
あるいは前もって定められた溶血能力を有する。

すなわち、本発明は、（ａｌ　　少なくとも１つの溶血されていない血液試料
を、既知の溶血能力を有する少なくとも１つの所定量の
ＳＯと、該ＳＯの溶血活性範囲外のｐ　Ｈを有する非溶
血性溶液中で混合し、ｆｂ）　　各溶液を約Ｏ〜５０℃の温度にて血液試料中
のすべてのＡＳＯが該ＳＯと反応するのに充分な時間イ
ンキュベートし、ｆｃｌ　　各インキュベート溶液のｐＨを約４．８〜約
９．０のｐＨ内に調整することによって該ＳＯの溶血活
性を復活させ、それにより該ＡＳＯと反応するのに必要
な量を超過した遊離のＳ（／で血液を溶血させ、ついて（ｄ）　　各溶液中の溶血の有無を検出する、工程力）
らなることを特徴とする血液試料中の抗ストレプトリジ
ン０（ＡＳＯ）力価を測定する方法を提供するものであ
る。

ＡＳＯ力価を測定するための本発明の方法はかなり融通
性があり、種々の有利な経路を与えることができる。例
えば、本発明の組成物は、溶液または乾燥形態番ごて直
接用いてもよく、あるｔ＋）ｃｉ、ＳＯを血液試料と共
に、あるいはなしでＳＯの溶血活性範囲外のｐＨで非溶
血性溶液中へ導入、混合することにより間接的に用いて
よい。同様に、溶液または乾燥形態の該ＳＯを血液試料
中番こ加えてもよいし、血液試料を該ＳＯ中に加えても
よｌ／１゜本発明方法はさらに、等量または段階的番こ
異なる容量の血液試料に適用でき、あるいは、等濃度ま
たは段階的に異なる濃度の液状または乾燥状態のＳＯに
も適用できる。また、前記の本発明方法＋１、ＳＯが溶
血活性を有するｐＨ範囲の外側のいずれかの側での溶血
活性の不活性化または抑制にも適用できる。しかし、該
ＳＯのｐＨが上昇しまたは、保持されたとき、すなわち
、約９以上、より好ましくは約９．４以上、より好まし
くは約９．４以上、最も好ましくは約９．５〜９．６以
上に上昇、維持された結果不活性化が生じたとき、本発
明は最も有利に行なわれる。酸性側においては、同様に
、好ましいｐＨは５以下、より好ましくは、４．８以下
、最も好ましくは４．６以下である。

血液または血清試料の特定量または特定希釈を該ＳＯと
混合した後、得られる溶液を該試料中のＡＳＯが該ＳＯ
と反応または結合するの番こ十分な時間インキュベート
する。より長いインキュベーション時間および１分程度
の短いインキュベーション時間も許容しうるが、本発明
では約１〜約１０分間が十分なことがわかった。インキ
ュベーション温度は約り℃〜約５０℃の範囲であってよ
いが、・　　好ましくは室温（１８〜２１℃）程度〜５
０℃、最も好ましくは約２０〜２５℃である。

該ｐＨ域のどちら側が、該ＳＯ溶血活性の抑制あるいは
可逆的不活性化に用いられたかによって、酸性物質かま
たは塩基性物質のいずれかが、より好ましくは緩衝物質
が、該インキュベート溶液のｐＨを溶血活性範囲内に調
整してＳＯ溶血活性を回復させるのに使用される。また
、溶血活性を回復させる工程では、システィンのような
還元性物質を緩衝物質またはそれ自身還元性の緩衝剤と
共に用いる方法を適用するのが有利である。このような
方法によって、酸化に対する心配もなくまた、最初の還
元形態のＳＯの使用の必要もなくなる。

使用できるその他の緩衝剤には亜硫酸、リン酸、チオ硫
酸またはチオ亜硫酸のナトリウム塩および／またはカリ
ウム塩；イミダゾール；クエン酸塩；２−Ｎ−モルホリ
ノエタンスルホン酸塩などが挙げられる。

すなわち、ｐＨは４．８〜９．０の範囲内に調整される
が、完全な溶血能は、約６〜８の範囲内、とりわけ約６
．５〜約７．０の範囲内で最も回復する。

いったん活性が回復すると、試料中に存在するＡＳＯと
結合もしくは反応しなかった過剰のｓｏが試料中に存在
する血球を溶血し始める。

いったん溶血活性が回復すると、血球の溶解はすぐに始
まるが、少なくとも１〜２分がら約１゜分間待つか、あ
るいは該溶液をインキュベートした後、各溶液の溶解の
有無を検出するのが最もよい。一般に、検出前の待機あ
るいはインキュベートに推奨される時間は、ＡＳＯの定
性的試験が必要か、定量的試験が必要かにより異なる。

前者の場合においては、典型的には、唯一の血液試料を
ＳＯの１つの量に対して試験するので、より少ない時間
で有効である。後者の場合では、１個以上の試験が１度
に行なわれ、そのため、検出前のインキュベーション時
間はより好ましくは少なくとも５〜１０分以上の範囲を
とるべきである。

都合の良いことに、溶血はインキュベーション後、直ち
に検出することができる。しかし、誤りやまぎられしい
結果を避けるために、ＳＯ溶血活性を回復させるインキ
ュベーション後、約２０分以内、より好ましくは約１ｏ
分または約１５分以内に溶血の有無を検出することが望
ましい。要約すると、溶血の有無は通常、ＳＯ溶血活性
を回復させるｐＨ調整後、約１〜３０分以内に行なわれ
、より好ましい時間は、前記の種々の待機（インキュベ
ーション）および検出時間の合計に及ぶ。

溶血が生じると溶液は透明となり、溶血が生じなかった
り、また、不完全な溶血であるときは溶液中の濁りの存
在によって明らかとなる。実用的には陽性および陰性の
対照群を用いるのが望ましいが、必らずしも必要という
わけではない。

以上のように、血液試料中のＡＳＯ力価を測定する本発
明方法は、容易に得られる、例えば耳、踵または指の穿
刺による全血の少量の試料を用いて行なうのが最も都合
よく、かつ、好ましい。抗凝結剤または抗凝結化された
血液は、血液試料を直ちに希釈して使用するような試験
の場合には必要ではない。例えば、血液４０μｌを生理
食塩水２．０ｍｌで希釈し、該希釈血液を１試験容器に
、あるいは同量づつ一連の試験容器に分注してもよい。

対照群は別として、各試験容器に段階的に異なった容量
の本発明組成物を入れておく。該試料を各試験容器内で
該ＳＯと混合させ、得られた溶液をインキュベートする
。その後、各インキュベート溶液のｐＨを６〜８の範囲
内に調整し、溶血の有無を検知する。

Claims

【特許請求の範囲】（１）約４．８〜約９．０の範囲外のｐＨを有するスト
レプトリジンＯの溶液からなる試薬組成物。（２）約４．６〜約９．５ないし９．６の範囲外のｐＨ
を有する前記第（１）項の組成物。（３）少なくとも約９．５〜９．６のｐＨを有する前記
第（１）項の組成物。（４）乾燥状態である前記第（１）項の組成物。（５）乾燥状態である前記第（３）項の組成物。（６）　　ストレプトリジン０溶液のＰＨＧストレプト
リジンＯが溶血活性を有するｐ　Ｉ−Ｉ範囲外のｐＩＩ
に調整する工程からなるストレプトリジンＯの溶血能力
を可逆的に不活性化する方法。＋７１　　Ｐ　Ｈを約４．８〜約９．５の範囲外のｐｌ
ｆに調整する前記第（６）項の方法。＋８＋　　ｆａ）　　少なくとも１つの溶血していない
血液または血清試料を、少なくとも１つの所定量の、既
知の溶血能力を有するストレプトリジンＯと、その溶血
活性範囲外のｐＨを有する非溶血性溶液中で混合し、（ｂ）　　各溶液を温度約Ｏ〜５０℃にて試料中のいか
なる抗ストレプトリジンＯもストレプトリジンＯと反応
するに充分な時間インキュベートし、ｆｃ）　　各インキュベートされた溶液のｐＨを約４．
８〜約９．０のｐＨ範囲内に調整することによりストレ
プトリジンＯの溶血活性を回復させて、抗ストレプトリ
ジンＯとの反応に必要な量を超える遊離のストレプトリ
ジンＯによる溶血を生じさせ、ついで、ｆｄ）　　各溶液中における溶血の有無を検出する゛、
工程からなる血液試料中の抗ストレプトリジン０力価の
測定方法。（９）工程ｆａ）が、（イ）　ストーブｌ−ＩＪジンＯの溶血活性範囲外のｐ
Ｈを有する少なくとも１つのストレプトリジン０の溶液
を調製し、ついて、の（ロ）　一定容ｆｉＬの各ストレプトリジン！芦液を血
液試料と混合し、これにより、混合された溶液のｐＨを
ストレプトリジンＯの溶血活性範囲外に保持する、工程からなる前記第（８）項の方法。（１α　工程（ａ）が、（イ）溶液中でストレプｌ−ＩＪリジンの溶血活性範囲
外のｐＨを有する少なくとも１つのストレプ）　ＩＪリ
ジンの乾燥試料を調製し、ついで、（ロ）　ストレプト
リジンＯの各試料を溶血していない血液試料と非溶血溶
液中で混合し、これにより混合溶液のｐＨをストレプト
リジンＯの溶血活性範囲外に保持する、工程からなる前記第（８）項の方法。（１１）　　工程（ａ）が、（イ）血液試料を非溶血溶液中において希釈し、（ロ）
等量および段階的に容量を変えた血液試料溶液からなる
群より選ばれた所定量の血液試料を各試験容器列に導入
し、ついで、（ハ）血液試料を入れた各試験容器に、等濃度および段
階的に一度を変えたストレプトリジン０からなる群より
ｉばれたｐＨにより溶血的に不活性化された所定量のス
トレプトリジンＯを添加、混合し、これによって各試験容器中の混合溶液のｐＨをストレプ
トリジンＯの溶血活性範囲外に保持する、工程からなる前記第（８）項の方法。（１２工程（ａｌが、（イ）等濃度および段階的に異なる濃度のストレプトリ
ジンＯからなる群より選ばれたｐＨにより溶血的に不活
性とされた乾燥量のストレプトリジンＯを各一連の試験
容器に導入し、（ロ）血液試料を非溶血性溶液中で希釈
し、ついで、（ハ）　ストレプトリジンＯを入れた各試験容器中に等
量および段階的に容量の異なった溶血していない血液試
料溶液からなる群より選ばれた一定量の血液試料を添加
、混合し、これによって、各試験容器中の混合溶液のｐ
ＨをストレプトリジンＯの溶血活性範囲外に保持する、
工程からなる前記第（８）項の方法。＋１３１　　ｆａ）　　血液試料のストレプトリジンＯ
との混合が、少なくとも約９．４のｐＨで行なわれ、ｆ
ｂ）　　各混合された溶液が、室温から約５０℃の範囲
内の温度でインキュベートされ、かつ、ｆｃ）　　各イ
ンキュベートされた溶液が、約６〜約８のｐＨ範囲内に
調整される前記第（８）項の方法。（１４１ｔａ＋　　血液試料のストレプトリジンＯとの
混合が、少なくとも約９．５〜９．６のｐＨにて行なわ
れ、（ロ　各混合溶液が約２０〜２５℃にてインキュベート
され、かつ、（Ｃ）各インキュベートされた溶液が、約６．５〜約７
．０のｐＨ範囲に調整される前記第（８）項の方法。（１５１ｆａ）　　溶血していない血液試料を非溶血性
溶液で希釈し、（ｂ）　　等量の希釈した血液を、複数の、各々、予め
測定された溶血能力を有し、かつ、溶液状態で少なくと
も約９．４のｐＨを呈する溶血約１こ不活性化されたス
トレプトリジンＯの乾燥試料を各段階的な量含む試験容
器に導入し、（ｃ）　　希釈された血液の各試料をスト
レプ）　ＩＪリジンと混合し、（ｄ）　　各混合した溶液をほぼ室温（１８〜２１℃）
から約５０℃の温度範囲で、約１〜１０分間インキュベ
ートし、（ｅ）　　各インキュベートされた溶液のｐＨを約６〜
約８のｐＨ範囲に調整し、つ（１で、ｆｆ）　　各溶液
のｐＨを調整後、約５〜約２５分にて各インキュベート
し、溶液中の溶血の有無を検出する、工程からなる血液試料中の抗ストレプトリジンＯ力価測
定方法。＋１６）　　（ａ）　　溶血していない血液を非溶血性
溶液で系列的に希釈し、（ｂ）　　等量の系列的に希釈した血液試料を、複数の
各々、予め測定された溶血能力を有し、かつ、溶液状態
で少なくとも約９．４のｐＨを呈する溶血的に不活性化
されたストレプトリジン０の乾燥試料を等置台む試験容
器に導入し、ｔｃ）系列的に希釈された血液の各試料を
ストレプトリジン０と混合し、ｆｄ）　　各混合した溶液をほぼ室温（１８〜２１℃）
から約５０℃の温度範囲で、約１〜１０分間インキュベ
ートし、ｔｅｌ　　各インキュベートされた溶液のｐＨを約６〜
約８のｐＨ範囲に調整し、ついで、（［）前記各溶液の
ｐＨを調整後、約２〜約２０分にて各インキュベートし
、溶液中の溶血の有無を検出する、工程からなる血清試料中の抗ストレプ）　ＩＪリジン力
価測定方法。（１７）　　下記の（イ）および（ロ）の工程からなる
ことを特徴とするＡ群ストレプトコッカス感染より生ず
る病状または感染経過のモニタリング方法：（イ）同一
検体から該病状または感染の経過における異なった時に
採取した血液試料中の抗ストレプトリジンＯを測定する
工程であって、該測定は、下記の（ａ）−（ｄ）の工程
力）らなる、（ａ）少なくとも１つの溶血してむ１な０
血液または血清を少なくともじの所定量のストレプトリ
ジンＯと、公知の溶血能力を有するストレプトリジンＯ
の溶血活性範囲外のｐＨを有する非溶血性溶液中で混合
する工程、　　　１（ｂ）各溶液を温度約Ｏ〜５０℃を
ごて試料中のむ１かなる抗ストレプトリジン０もストレ
プト１ノジンＯと反応するに充分な時間インキュベート
すること、（ｃ）各インキュベートされた溶液のｐＩ−Ｉ　ヲ約４
゜８〜約９．０のｐＨ範囲内に調整すること番こよりス
トレプトリジンＯの溶血活性を回復させて、これにより
抗ストレプトリジンＯとの反応に必要な量を越える遊離
のストレプト１ノジンＯが全て血液を溶解する工程、お
よび（ｄ）各溶液中における溶血の有無を検出する工程
、並びに（ロ）検体より得られた抗ストレプトリジンＯ力価にお
ける連続的な測定値の変化により決定を行なう工程以上の工程よりなる方法であって、これによって測定さ
れた抗ストレプｌ−ＩＪリジンの増加が前記病状または
感染の進行を示し、かつ、測定された抗ストレプトリジ
ンＯの減少が前記病状の後退または治癒を示す方法。