JPS5889179A - 細胞培養床 - Google Patents
細胞培養床Info
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- JPS5889179A JPS5889179A JP18694781A JP18694781A JPS5889179A JP S5889179 A JPS5889179 A JP S5889179A JP 18694781 A JP18694781 A JP 18694781A JP 18694781 A JP18694781 A JP 18694781A JP S5889179 A JPS5889179 A JP S5889179A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
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- Cell Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、哺乳類動物を始めとする生物の細胞を培養す
るために使用される細胞培養床Ｋｌｌするものである。
るために使用される細胞培養床Ｋｌｌするものである。
最近においてＦ！生物の細胞の勝々の条件下におけ−る
反応その他の特性の研究或ψは特定の細胞株（２） の活動による化１物の研究か活発に行なわれており、特
ＫＭ人工的ＫＦｉ合威不用能な或ψは合成が極めて困ｌ
Ｉな物質を、特定Ｏ細胞の活動を利用して製造すること
か多方面において検討されている。
反応その他の特性の研究或ψは特定の細胞株（２） の活動による化１物の研究か活発に行なわれており、特
ＫＭ人工的ＫＦｉ合威不用能な或ψは合成が極めて困ｌ
Ｉな物質を、特定Ｏ細胞の活動を利用して製造すること
か多方面において検討されている。
そのような物＠Ｃ，具体例としては、例えばインターフ
ェロン、ホルモン、リン７オカイン、その仲を挙けるこ
とができる・ 細胞の培養は、通常細胞を培養床に植込み或いは接秒し
たものを例えｄ培地中に詐き、当該細胞株に適応した環
境条件下でインキュベージロンするととれよって一行な
われるか、ＩＩＩｋの制約があって所期の細胞培養を行
なうことに相当に固着である。その障害のうちの大きな
ものとして培養床の間ｌｌＩ力・ある。
ェロン、ホルモン、リン７オカイン、その仲を挙けるこ
とができる・ 細胞の培養は、通常細胞を培養床に植込み或いは接秒し
たものを例えｄ培地中に詐き、当該細胞株に適応した環
境条件下でインキュベージロンするととれよって一行な
われるか、ＩＩＩｋの制約があって所期の細胞培養を行
なうことに相当に固着である。その障害のうちの大きな
ものとして培養床の間ｌｌＩ力・ある。
即ち、正常２倍体細胞株等Ｃ接着依存性細Ｗ！は、培養
床に接着して単層で増殖するものであるので、培養収量
は使用される培養床已吠態、特にその接着性の良否によ
って大きく左右される。従来においては、多糖類Ｃ・高
分子物質、成る柚の合成重合体が培養床またはその材料
として用いられている（３） が、必ずしも良好な結果を得ることができな−ため、新
規で有用な細Ｍ培養床またはその材料の出現が強く望ま
れて−る・ 以上の如き背景下にお−て、本発明者らは新規な細胞培
養床を求めて鋭意研究を重ねた結果、スチレンとスルフ
ォン化スチレンとの共重合体若しくけスルフォン化ポリ
スチレンが接着依存性細胞に対し大きヴ接着性を有する
ことを見出し・この知見ＫＭいて本発明を完成したもの
である。
床に接着して単層で増殖するものであるので、培養収量
は使用される培養床已吠態、特にその接着性の良否によ
って大きく左右される。従来においては、多糖類Ｃ・高
分子物質、成る柚の合成重合体が培養床またはその材料
として用いられている（３） が、必ずしも良好な結果を得ることができな−ため、新
規で有用な細Ｍ培養床またはその材料の出現が強く望ま
れて−る・ 以上の如き背景下にお−て、本発明者らは新規な細胞培
養床を求めて鋭意研究を重ねた結果、スチレンとスルフ
ォン化スチレンとの共重合体若しくけスルフォン化ポリ
スチレンが接着依存性細胞に対し大きヴ接着性を有する
ことを見出し・この知見ＫＭいて本発明を完成したもの
である。
本発明の主たる目的は、高−効率で細胞培養を行なうこ
とのできる新規な細胞培養床を提供するにある。
とのできる新規な細胞培養床を提供するにある。
本発明の他の目的は、高埴培養収量で細胞培養を行なう
ことのできる細胞培養床を提供するＫあるＯ 本発明の特徴とするところは、スチレンとスルフォン化
スチレンとの共重合体若しくはスルフォン化ポリスチレ
ンによ多、細胞培養床の表面を形成せしめる点にある。
ことのできる細胞培養床を提供するＫあるＯ 本発明の特徴とするところは、スチレンとスルフォン化
スチレンとの共重合体若しくはスルフォン化ポリスチレ
ンによ多、細胞培養床の表面を形成せしめる点にある。
以下本発明について具体的に説明する。
（４）
本発明においては、スチレンとｐ−スルフォン化スチレ
ンとを共重合せしｔて得られる共重合体Ｃ以下、「Ｓ共
重合体」という。）、若しくけスチレンを重合せしめて
得られるポリスチレンをスルフォン化剤によりスルフォ
ン化して得られるスルフォン化ポリスチレンにより細胞
培養床を構成せしめ一或≠は前記Ｓ共重合体若しくはス
ルフォン化ポリスチレンよ〕成る表面層を、細胞培養床
用１に体の表面に形成して細胞培養床とする。
ンとを共重合せしｔて得られる共重合体Ｃ以下、「Ｓ共
重合体」という。）、若しくけスチレンを重合せしめて
得られるポリスチレンをスルフォン化剤によりスルフォ
ン化して得られるスルフォン化ポリスチレンにより細胞
培養床を構成せしめ一或≠は前記Ｓ共重合体若しくはス
ルフォン化ポリスチレンよ〕成る表面層を、細胞培養床
用１に体の表面に形成して細胞培養床とする。
例えけ第１図に示すように、シャーレ或いはペトリ皿等
のガラス器より成る面状基体１０表面に、前記Ｓ共重合
体若しくはスルフォン化ポリスチレンより成る表面Ｎ２
′に一形成し、以って平面培養に供される培−養床を構
成せしめる０この場合において、表面層２を形成するた
めの方法としては任意の手段を利用することができるが
、最も簡単には、前記Ｓ共重合体若しく−は誠ルフオン
化ポリスチレンの揮発性溶゛剤による溶液１創記基体１
０表面上に滴下しｆＣ後当該表面上において展開せしめ
、溶剤を揮発蒸散せしめる方法を利用することができ（
５） るＯ 或ψｊ−１１！２図に示すように、従来にお−て培養床
として有効な微粒子担体の材料である例えばアクリルア
１ド系重合体または多糖顯高分子物質略の微粒子より成
る微粒子状基体１１０外表面に、前記Ｓ共重合体基り、
＜けスルフォン化ポリスチレンよ構成る表面層１２を
形成する◎ここで前記微粒子状基体１１−とじて社、培
養する″′細胞の増殖を阻害するような毒性を有しない
ものであれば任意のものを用いることができるが、そＯ
粒径ｔ！１０〜”５００４ｍ４特Ｋ ５０〜ｌＯＯ＊ｍ
の範囲内であることが好ま−しい。そして微粒子状基体
１１の表面に前記表面層１２を形成するためＫＦｉ種々
の方法を利用することができ、例えば前記Ｓ共重合体若
しくはスルフォン化ポリスチレンの溶液中に微粒子状基
体を浸漬して乾燥せしめる溶解法、或いは前記８共重合
体若しくはスルフォン化ポリスチレンを加熱溶融せしめ
た洛中に微粒子状基体を浸漬する溶融法等を簡便な方法
として挙けることができる。
のガラス器より成る面状基体１０表面に、前記Ｓ共重合
体若しくはスルフォン化ポリスチレンより成る表面Ｎ２
′に一形成し、以って平面培養に供される培−養床を構
成せしめる０この場合において、表面層２を形成するた
めの方法としては任意の手段を利用することができるが
、最も簡単には、前記Ｓ共重合体若しく−は誠ルフオン
化ポリスチレンの揮発性溶゛剤による溶液１創記基体１
０表面上に滴下しｆＣ後当該表面上において展開せしめ
、溶剤を揮発蒸散せしめる方法を利用することができ（
５） るＯ 或ψｊ−１１！２図に示すように、従来にお−て培養床
として有効な微粒子担体の材料である例えばアクリルア
１ド系重合体または多糖顯高分子物質略の微粒子より成
る微粒子状基体１１０外表面に、前記Ｓ共重合体基り、
＜けスルフォン化ポリスチレンよ構成る表面層１２を
形成する◎ここで前記微粒子状基体１１−とじて社、培
養する″′細胞の増殖を阻害するような毒性を有しない
ものであれば任意のものを用いることができるが、そＯ
粒径ｔ！１０〜”５００４ｍ４特Ｋ ５０〜ｌＯＯ＊ｍ
の範囲内であることが好ま−しい。そして微粒子状基体
１１の表面に前記表面層１２を形成するためＫＦｉ種々
の方法を利用することができ、例えば前記Ｓ共重合体若
しくはスルフォン化ポリスチレンの溶液中に微粒子状基
体を浸漬して乾燥せしめる溶解法、或いは前記８共重合
体若しくはスルフォン化ポリスチレンを加熱溶融せしめ
た洛中に微粒子状基体を浸漬する溶融法等を簡便な方法
として挙けることができる。
既述の面状基体１に表面層２を形成して成る事（６）
発明！１１１艶培養床は、実験室塾−における規模で実
施する上で便利に用いる゛ことができ、−また微粒子状
基体１１に表面層１２を形毅ＬＴ成る本発明細胞培養床
は、その容積に対して表面積が極ｔて大きいため細胞培
養に有効な面積かスきく得られ、従って単層で増殖する
接着依存性細胞の培養を工穿的規模で実施する上で極め
て鳴動である。
施する上で便利に用いる゛ことができ、−また微粒子状
基体１１に表面層１２を形毅ＬＴ成る本発明細胞培養床
は、その容積に対して表面積が極ｔて大きいため細胞培
養に有効な面積かスきく得られ、従って単層で増殖する
接着依存性細胞の培養を工穿的規模で実施する上で極め
て鳴動である。
以上の例に限らず、本発明においては、細胞の培養床と
して有効な形態の基体の表面に既述と同様の表面層を設
けて構成することもでき、この場合をも含めて、前記Ｓ
共重合体若しくはスルフォン化ポリスチレンよ構成る表
面層の厚さは任意であり、例えば当該表面層が単分子膜
より成るものであっても有効である・この厚さか人きく
なっても側段作用効果に大差はない。従って、前記表面
層の形成に際してＩＩ′ｉ基体の表面の・全面に表面層
が形毅されるようにすることが釣ましいが、部分的に形
成されている場合であっても勿論有効である。
して有効な形態の基体の表面に既述と同様の表面層を設
けて構成することもでき、この場合をも含めて、前記Ｓ
共重合体若しくはスルフォン化ポリスチレンよ構成る表
面層の厚さは任意であり、例えば当該表面層が単分子膜
より成るものであっても有効である・この厚さか人きく
なっても側段作用効果に大差はない。従って、前記表面
層の形成に際してＩＩ′ｉ基体の表面の・全面に表面層
が形毅されるようにすることが釣ましいが、部分的に形
成されている場合であっても勿論有効である。
−また以上のように、適当なＭｇ２の表面に前記表面層
を形成するＩｍ鮫に限られず、例えば前配Ｓ共（７） 重合体老しくはスルフォン化ポリスチレンそのものを材
質として面状或いＦｉ徽粒子状の培養床を構成ゼしめる
ことも可能である・ 本発明において用いることのできる８共重合体は、例え
ば、スチレンとｐ−スルフォン化スチレンとの混合溶液
に重合触媒を加えて熱重合せしめる方法により製造する
ことができ、スチレンとｐ−スルフォン化スチレンとの
割合を変えるこ七によ）、種々のスルフォン基導入率の
Ｓ共重合体が得られる。
を形成するＩｍ鮫に限られず、例えば前配Ｓ共（７） 重合体老しくはスルフォン化ポリスチレンそのものを材
質として面状或いＦｉ徽粒子状の培養床を構成ゼしめる
ことも可能である・ 本発明において用いることのできる８共重合体は、例え
ば、スチレンとｐ−スルフォン化スチレンとの混合溶液
に重合触媒を加えて熱重合せしめる方法により製造する
ことができ、スチレンとｐ−スルフォン化スチレンとの
割合を変えるこ七によ）、種々のスルフォン基導入率の
Ｓ共重合体が得られる。
また、スルフォン、化ポリスチレンは公知の方法によっ
て得ることができ、例えば次のようにして好ましいもの
を製造することができる。即ち、数平均分子量に対する
重量平均分子量の比の値が１．１以下で平均分子量が２
０万程度のポリスチレンを、室温下において、ジクロル
エタンＫＩＮせしめ、以ってポリスチレン溶液を作る。
て得ることができ、例えば次のようにして好ましいもの
を製造することができる。即ち、数平均分子量に対する
重量平均分子量の比の値が１．１以下で平均分子量が２
０万程度のポリスチレンを、室温下において、ジクロル
エタンＫＩＮせしめ、以ってポリスチレン溶液を作る。
ここに用いるジクロルエタン中には、触媒であるトリエ
チルリン酸を予め溶解させておく、このポリスチレン溶
液を、温度−３０℃に保った液状のｒ型無水（８） 硫酸中に滴下して加え、その後放置して温度を室温まで
昇温させ、以ってポリスチレンをスルフォン化させるこ
とによってスルフォン化ポリスチレンを得る◎ここにお
いて、用いるジクロルエタンの量はポリスチレンＩｇＫ
対して約１０ｍＡ程度で）、ればよく、）リエチルリン
ｒｌＤＫ対する無水硫酸のモルＪｔは１〜３の範囲、ま
たポリスチレンに対する無水硫ｌ！ｃモル比ｔｌＥ７０
．１４〜５の範囲とすればよい。そしてポリスチレンに
対する無水硫酸の割合を変えることによって、得られる
スルフォン化ポリスチレンのスルフォン仕度、即ちポリ
スチレンにおｔ−ｔルスル７オン基が導入されたベンゼ
ン環の全ベンゼン票に苅する割合を制御することができ
る。
チルリン酸を予め溶解させておく、このポリスチレン溶
液を、温度−３０℃に保った液状のｒ型無水（８） 硫酸中に滴下して加え、その後放置して温度を室温まで
昇温させ、以ってポリスチレンをスルフォン化させるこ
とによってスルフォン化ポリスチレンを得る◎ここにお
いて、用いるジクロルエタンの量はポリスチレンＩｇＫ
対して約１０ｍＡ程度で）、ればよく、）リエチルリン
ｒｌＤＫ対する無水硫酸のモルＪｔは１〜３の範囲、ま
たポリスチレンに対する無水硫ｌ！ｃモル比ｔｌＥ７０
．１４〜５の範囲とすればよい。そしてポリスチレンに
対する無水硫酸の割合を変えることによって、得られる
スルフォン化ポリスチレンのスルフォン仕度、即ちポリ
スチレンにおｔ−ｔルスル７オン基が導入されたベンゼ
ン環の全ベンゼン票に苅する割合を制御することができ
る。
本発明細胞培養床は以上のようなｌｌＩ鱗であって、そ
の細胞の増殖が行ηわれる表面ヵｌｉＪ配Ｓ共重合体若
しくはスルフォン化ポリスチレンによす形ｃされている
ため、後述する実験例の結果がら明がなように、細胞の
接着性が化〈て増殖が円滑に進行し、従って所期の細胞
の培養、特に単層で増殖（９） する接着依存性細胞の培養を高い効率で行シうことがで
きる。そして微粒子状の本発明細胞培養床によれば、大
きな細胞培養面積を得ることがてきるので、上述の高い
効率の培養が達ψされることと相俟って、極めて大きな
培養収量を得ることが可能とな）、工業的規模で細胞の
培養を実施することが可能となる。
の細胞の増殖が行ηわれる表面ヵｌｉＪ配Ｓ共重合体若
しくはスルフォン化ポリスチレンによす形ｃされている
ため、後述する実験例の結果がら明がなように、細胞の
接着性が化〈て増殖が円滑に進行し、従って所期の細胞
の培養、特に単層で増殖（９） する接着依存性細胞の培養を高い効率で行シうことがで
きる。そして微粒子状の本発明細胞培養床によれば、大
きな細胞培養面積を得ることがてきるので、上述の高い
効率の培養が達ψされることと相俟って、極めて大きな
培養収量を得ることが可能とな）、工業的規模で細胞の
培養を実施することが可能となる。
本発明細胞培養床け１々のｓｓｍの培１１に供して土建
の利益が得られる。ここに細胞の稼ＩＩＩまたは細胞株
は特に限定されるものではないが、その例を挙けると、
例えにハムスター肺細胞Ｖ−７９、と）胎児肺細胞ＭＲ
Ｃ５、チンパンジー肝繊維芽細胞、ヒト包皮細胞、ニワ
トリ胎児繊維芽細胞その他がある。
の利益が得られる。ここに細胞の稼ＩＩＩまたは細胞株
は特に限定されるものではないが、その例を挙けると、
例えにハムスター肺細胞Ｖ−７９、と）胎児肺細胞ＭＲ
Ｃ５、チンパンジー肝繊維芽細胞、ヒト包皮細胞、ニワ
トリ胎児繊維芽細胞その他がある。
本発明における上述の効果が得られる理由の一つとして
Ｓ共重合体若しくはスルフォン化ポリスチレンのスルフ
ォン基によって親水性を帯有することが指摘されるが、
単にポリスチレンが新水性を帯有すればそれで良好な細
胞培養床材料となるものでけな一〇これは、スルフォン
基の導入割合（１０） が大きくなるに従ってその特性か向上するものではない
こと、及びスルフォン基の代シにカルボキシル基を導入
してポリスチレンに＆水性を帯有せしめても良好な細胞
培養床材料は得られないことからも判断される〇 以下本発明の作用効果を確認するために行なった実験に
ついて説明する。
Ｓ共重合体若しくはスルフォン化ポリスチレンのスルフ
ォン基によって親水性を帯有することが指摘されるが、
単にポリスチレンが新水性を帯有すればそれで良好な細
胞培養床材料となるものでけな一〇これは、スルフォン
基の導入割合（１０） が大きくなるに従ってその特性か向上するものではない
こと、及びスルフォン基の代シにカルボキシル基を導入
してポリスチレンに＆水性を帯有せしめても良好な細胞
培養床材料は得られないことからも判断される〇 以下本発明の作用効果を確認するために行なった実験に
ついて説明する。
実験例１
スチレンと、その組成比がモル％で０．４．１．８．２
．５．５．０．６．５ 及び９．９となるｍ合のｐ−
スルフォン化スチレンとを共重合せしめて、互にスルフ
ォン基の導入割合の異なる合計６種のＳ共重合体を作シ
、これらを試料としてその各々をベンゼンＫｌｅｅ当ｋ
） ５ ｍｇ （Ｄ ＩＪ合で溶解せしめ、得られた試
料溶液を直径３５闘のガラスシャーレの底面に滴下して
展開せしめ、温度１００℃で２４時間真空乾燥してＳ共
重合体の５薄層を形成し、以って合計６１１の本発明細
胞培養床を作った。なお、ｐ−スルフォン化スチレンを
９．９モル％となる割合で用−たＳ共重合体については
、溶剤として、ペンゼ（１１） ンとエチルアルコールとの割合が９：１の混合溶剤を用
いた◎ 前記６種の細胞培養床を２４時間高温で殺菌処理した後
、別途培養してお−たチャイニーズ八人スター肺由来の
細胞株ｖ−７９を０．２５％のトリプシン溶液によって
遊離の細胞として植込み、１０５ｇ牛脂児自清含有のイ
ーグルＭＥＭ培地を用い、炭酸ガス５襲と空気９５％の
ガス雰囲気のインキュベーター中におりて、温度３７℃
で細胞培養を行なった・ 培養時間が１２０分間に達したときにシャーレをインキ
ュベーターから取〕出し、培地を除き、リン酸緩衝生理
食塩水で洗浄後プｐナーゼＥＤＴム溶液を各シャーレに
１ ｗｍＬ加えることによル、培養床表面に接着してい
た細胞を遊離させ、血球計算盤を用−て細胞数を測定し
た。そしてｐ−スルフォン化スチレンの組成比と、接着
して―た細胞数の全細胞数に対する割合との関係を求め
た。結果は第３図に示す通〕である。
．５．５．０．６．５ 及び９．９となるｍ合のｐ−
スルフォン化スチレンとを共重合せしめて、互にスルフ
ォン基の導入割合の異なる合計６種のＳ共重合体を作シ
、これらを試料としてその各々をベンゼンＫｌｅｅ当ｋ
） ５ ｍｇ （Ｄ ＩＪ合で溶解せしめ、得られた試
料溶液を直径３５闘のガラスシャーレの底面に滴下して
展開せしめ、温度１００℃で２４時間真空乾燥してＳ共
重合体の５薄層を形成し、以って合計６１１の本発明細
胞培養床を作った。なお、ｐ−スルフォン化スチレンを
９．９モル％となる割合で用−たＳ共重合体については
、溶剤として、ペンゼ（１１） ンとエチルアルコールとの割合が９：１の混合溶剤を用
いた◎ 前記６種の細胞培養床を２４時間高温で殺菌処理した後
、別途培養してお−たチャイニーズ八人スター肺由来の
細胞株ｖ−７９を０．２５％のトリプシン溶液によって
遊離の細胞として植込み、１０５ｇ牛脂児自清含有のイ
ーグルＭＥＭ培地を用い、炭酸ガス５襲と空気９５％の
ガス雰囲気のインキュベーター中におりて、温度３７℃
で細胞培養を行なった・ 培養時間が１２０分間に達したときにシャーレをインキ
ュベーターから取〕出し、培地を除き、リン酸緩衝生理
食塩水で洗浄後プｐナーゼＥＤＴム溶液を各シャーレに
１ ｗｍＬ加えることによル、培養床表面に接着してい
た細胞を遊離させ、血球計算盤を用−て細胞数を測定し
た。そしてｐ−スルフォン化スチレンの組成比と、接着
して―た細胞数の全細胞数に対する割合との関係を求め
た。結果は第３図に示す通〕である。
この図の結果から、本発明細胞培養床によれば（１２）
接着する細胞の割合が大きく、良好で高い効率の細胞培
養が行なわれることが明かである。併せて、ｐ−スルフ
ォン化スチレンの紐砂比か直くなるに従って接着細胞の
割合が大−に＄大することが明かである。
養が行なわれることが明かである。併せて、ｐ−スルフ
ォン化スチレンの紐砂比か直くなるに従って接着細胞の
割合が大−に＄大することが明かである。
実験例２
実験例１と同様にして培養時間、を３日間とし、接着し
て−る細胞数を測定し、ｐ−スルフォン化スチレンの組
成比と、接着細胞数との関係を求めた。結果Ｆｉ第４図
に示す通ルである。
て−る細胞数を測定し、ｐ−スルフォン化スチレンの組
成比と、接着細胞数との関係を求めた。結果Ｆｉ第４図
に示す通ルである。
この図の結果がら、本発明細胞培養床によれば、大きな
培養収量が得られること、及びその培養収量ｈｐ−スル
フォン化スチレンの組成比が６５モル％のものまではそ
の組成比が高くなるに従って増加することが明力である
。
培養収量が得られること、及びその培養収量ｈｐ−スル
フォン化スチレンの組成比が６５モル％のものまではそ
の組成比が高くなるに従って増加することが明力である
。
実験例３
既述の方法に従い、無水硫酷の割合を変えてポリスチレ
ンをスルフォン化させて、スルフォン化度がモル弧で１
．１３．２５．３０，４２．９１及び９８の合計７種の
スルフォン化ポリスチレンを作シ、（１３） これらを試料としたほかは実験例ＩＫおけると同様にし
て本発明細胞培養床を作シ、同様の培養実験を行なった
。なおスルフォン化度が１３モル襲以上の試料につφて
はベンゼン−エチルアルコール混合溶剤を用いた。そし
て培養時間１２０分間経過後における接着細胞数の全細
胞’ＩｋＫ対する割合と、スルフォン化ポリスチレンの
スルフォン化度との関係を求めた。結果は第５図に示す
通９である。
ンをスルフォン化させて、スルフォン化度がモル弧で１
．１３．２５．３０，４２．９１及び９８の合計７種の
スルフォン化ポリスチレンを作シ、（１３） これらを試料としたほかは実験例ＩＫおけると同様にし
て本発明細胞培養床を作シ、同様の培養実験を行なった
。なおスルフォン化度が１３モル襲以上の試料につφて
はベンゼン−エチルアルコール混合溶剤を用いた。そし
て培養時間１２０分間経過後における接着細胞数の全細
胞’ＩｋＫ対する割合と、スルフォン化ポリスチレンの
スルフォン化度との関係を求めた。結果は第５図に示す
通９である。
この図の結果から、スルフォン化度が３０−以下、特に
約２０弧程度のスルフォン化ポリスチレンによれけ接着
細胞数の割合が極めて大きいことが明かである・そして
スルフォン化度があまシ高くなると接着細胞数の割合が
低下するようになるので、スルフォン化度Ｆｉｓｏ％以
下であるものが好ましいことが判断される。
約２０弧程度のスルフォン化ポリスチレンによれけ接着
細胞数の割合が極めて大きいことが明かである・そして
スルフォン化度があまシ高くなると接着細胞数の割合が
低下するようになるので、スルフォン化度Ｆｉｓｏ％以
下であるものが好ましいことが判断される。
以上述べた各実験例の結果から、本発明にお−て用いる
８共重杏体、若しくはスルフォン化がリスチレンは、そ
のスチレン単位のベンゼン環の５０弧以下のものがスル
フォン基を有することが好ましく１４） く、２０％程度のベンゼン環かスルフォン基を有すると
特に良好な培養を行ない得ることが理解される◎ 実験例４ 実験例３におけやスルフォン化度２５モル％のスルフォ
ン化ポリスチレンの溶液中に、平均粒径７０μｍの架橋
デキストランよ多床る微粒子を浸漬して引き上け、温度
１００℃で乾燥せしめ、以って前１徽粒子の表面にスル
フォン化ポリスチレンの薄層を形成して本発明細胞培養
床を作った。これを加熱殺菌処理した後培養タンク内に
入れ、実験例１にお社ると同様の細胞株を、同様の培地
を用い同様の雰囲気条件下で３日間に亘って培養した。
８共重杏体、若しくはスルフォン化がリスチレンは、そ
のスチレン単位のベンゼン環の５０弧以下のものがスル
フォン基を有することが好ましく１４） く、２０％程度のベンゼン環かスルフォン基を有すると
特に良好な培養を行ない得ることが理解される◎ 実験例４ 実験例３におけやスルフォン化度２５モル％のスルフォ
ン化ポリスチレンの溶液中に、平均粒径７０μｍの架橋
デキストランよ多床る微粒子を浸漬して引き上け、温度
１００℃で乾燥せしめ、以って前１徽粒子の表面にスル
フォン化ポリスチレンの薄層を形成して本発明細胞培養
床を作った。これを加熱殺菌処理した後培養タンク内に
入れ、実験例１にお社ると同様の細胞株を、同様の培地
を用い同様の雰囲気条件下で３日間に亘って培養した。
一方、スルフォン什ポリスチレンＣ鍔層を形成しない微
粒子をその１１比較用細胞培養床として用いた行かは全
く同様にして細胞培養を行なったが、本発明による細胞
培養床を用いた場合の培養収量は、比較用培養収量の約
１５倍であった。
粒子をその１１比較用細胞培養床として用いた行かは全
く同様にして細胞培養を行なったが、本発明による細胞
培養床を用いた場合の培養収量は、比較用培養収量の約
１５倍であった。
第１図及び第２図は本発明ＭＪｌ胞培養床の−例及（１
５） び他の例につψての説明用断面図、第３図〜第５０は本
発明細胞培養床によ）行なった細胞培養゛集験の結果を
示す説明用線図である・ １・・・面吠基体 １１・・・微粒子状基体２
．１２−・・表面層 １１開’５５８−８９１７９ ＜’５）第 １図 第２図 Ｐ−又ルフィ’、ｆｕチレ〉 Ｐ−λルフｖＸＬスナレ〉 第５０ スルフィン化度
５） び他の例につψての説明用断面図、第３図〜第５０は本
発明細胞培養床によ）行なった細胞培養゛集験の結果を
示す説明用線図である・ １・・・面吠基体 １１・・・微粒子状基体２
．１２−・・表面層 １１開’５５８−８９１７９ ＜’５）第 １図 第２図 Ｐ−又ルフィ’、ｆｕチレ〉 Ｐ−λルフｖＸＬスナレ〉 第５０ スルフィン化度
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｌ）スチレンとスルフォン化スチレンとの共重合体若し
くけスルフォン化ポリスチレンによルその表面が形１さ
れてψることを特徴とするｓｉｔ培養床。 ２）基体と、この基体のｌｌ１ｉを被ａｔ−するよう形
成した、スチレンとスルフォン化スチレンとの共重合体
若しくはスルフォン化ポリスチレンより成る表面膜とよ
ル成ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記駅の細
胞培養床。 ３）前記基体がｌ１粒子であることを特徴とする特許請
求の範囲第２項記撃の細胞培養床。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18694781A JPS5889179A (ja) | 1981-11-24 | 1981-11-24 | 細胞培養床 |
| EP19820306271 EP0080384B1 (en) | 1981-11-24 | 1982-11-24 | A bed for culturing biological cells and a culture method employing said bed |
| DE8282306271T DE3265897D1 (en) | 1981-11-24 | 1982-11-24 | A bed for culturing biological cells and a culture method employing said bed |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18694781A JPS5889179A (ja) | 1981-11-24 | 1981-11-24 | 細胞培養床 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5889179A true JPS5889179A (ja) | 1983-05-27 |
Family
ID=16197504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18694781A Pending JPS5889179A (ja) | 1981-11-24 | 1981-11-24 | 細胞培養床 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0080384B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5889179A (ja) |
| DE (1) | DE3265897D1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4952506A (en) * | 1986-04-28 | 1990-08-28 | Rohm And Haas Company | Immobilization of nonanchorage-dependent cells |
| WO1990002145A1 (en) * | 1988-08-22 | 1990-03-08 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Acid treated polyacrylic acid grafted fluorocarbon polymer surface for cell attachment |
| JPH04501806A (ja) * | 1989-05-23 | 1992-04-02 | ユニシン・ファイバーテック・コーポレーション | 基質依存性細胞の増殖促進方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1525022A (en) * | 1975-05-21 | 1978-09-20 | Beecham Group Ltd | Cell culture method |
| US4024020A (en) * | 1975-12-15 | 1977-05-17 | Monsanto Company | Method of cell culture on polyacrylonitrile surface |
| JPS5642584A (en) * | 1979-09-18 | 1981-04-20 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Cell cultivation method |
-
1981
- 1981-11-24 JP JP18694781A patent/JPS5889179A/ja active Pending
-
1982
- 1982-11-24 DE DE8282306271T patent/DE3265897D1/de not_active Expired
- 1982-11-24 EP EP19820306271 patent/EP0080384B1/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3265897D1 (en) | 1985-10-03 |
| EP0080384A1 (en) | 1983-06-01 |
| EP0080384B1 (en) | 1985-08-28 |
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