JPS5886458A - 酵素免疫測定法 - Google Patents
酵素免疫測定法Info
- Publication number
- JPS5886458A JPS5886458A JP18564681A JP18564681A JPS5886458A JP S5886458 A JPS5886458 A JP S5886458A JP 18564681 A JP18564681 A JP 18564681A JP 18564681 A JP18564681 A JP 18564681A JP S5886458 A JPS5886458 A JP S5886458A
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- enzyme
- ans
- contg
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、酵素免疫測定法における新規な定量方法に関
し、更に詳しくは新規な発光反応による定量方法に関す
る。
し、更に詳しくは新規な発光反応による定量方法に関す
る。
抗原抗体反応を利用して、生体内の微量の物質管定量す
る方法としては、螢光免疫側定法(yxム)、放射免疫
測定法(RIム)、酵素免疫測定法(mエム)など種々
の方法が使用されていた。なかでも高感度で定量できる
Rrムが広(使用されていた。しかしながら、同位元素
標識化合物に不安定なものが多いこと、人体に対する危
険性お1ひ環境汚染の立場からそoIRn扱いが厳しく
廃秦が困難であることなど、問題点が多い。そこで最近
になり、安全性に問題がなく実験室の制約もなく、また
測定に使用てれる物質も比較的安定で保存でき、操作も
比較的容易であるI工Aが注目さnえ。とくに、標識と
して使用される酵素の活性の測定において、Rエム に
匹敵する高感度の測定法、即ち像光反応や発光反応管利
用する方法が開発されるに到9、更に重要視されてき喪
。その中でも、発光反応を利用し良方法がより感度が高
い、。
る方法としては、螢光免疫側定法(yxム)、放射免疫
測定法(RIム)、酵素免疫測定法(mエム)など種々
の方法が使用されていた。なかでも高感度で定量できる
Rrムが広(使用されていた。しかしながら、同位元素
標識化合物に不安定なものが多いこと、人体に対する危
険性お1ひ環境汚染の立場からそoIRn扱いが厳しく
廃秦が困難であることなど、問題点が多い。そこで最近
になり、安全性に問題がなく実験室の制約もなく、また
測定に使用てれる物質も比較的安定で保存でき、操作も
比較的容易であるI工Aが注目さnえ。とくに、標識と
して使用される酵素の活性の測定において、Rエム に
匹敵する高感度の測定法、即ち像光反応や発光反応管利
用する方法が開発されるに到9、更に重要視されてき喪
。その中でも、発光反応を利用し良方法がより感度が高
い、。
従来、発光反応管利用したlエムには、発光物質として
ルイノール、インルイノールなどが利用されている。一
方、生体成分は通常他の蛋肉質と結合している場合が多
り、$−7エリノー1−ナツメレンスルフオン酸(ムH
a)によってこの曽會を切った後に測定が行なわnるこ
とが多い。儒見#ftイロキシン(〒4)のIgAにお
いて、twG(tイロイド・パインディング・グロブリ
ン)ブロッカ−としてム舅8が用いられるが、洗St−
繰返してもAl1が残り、仁の微量に残存するムMeの
九めに酵票活性測定か訪書される。
ルイノール、インルイノールなどが利用されている。一
方、生体成分は通常他の蛋肉質と結合している場合が多
り、$−7エリノー1−ナツメレンスルフオン酸(ムH
a)によってこの曽會を切った後に測定が行なわnるこ
とが多い。儒見#ftイロキシン(〒4)のIgAにお
いて、twG(tイロイド・パインディング・グロブリ
ン)ブロッカ−としてム舅8が用いられるが、洗St−
繰返してもAl1が残り、仁の微量に残存するムMeの
九めに酵票活性測定か訪書される。
本発明者は、このよりなムMEの影響をカバーするよう
な発光物質について種々研究したとζろ、上記ムIII
自身がバーオキジオギザレート発光法[アナリテイカ・
キミカ・アク爽IT@21頁(11F−年)コの発光物
質としても優れた結果を与えることを見い出して本発明
管なした。
な発光物質について種々研究したとζろ、上記ムIII
自身がバーオキジオギザレート発光法[アナリテイカ・
キミカ・アク爽IT@21頁(11F−年)コの発光物
質としても優れた結果を与えることを見い出して本発明
管なした。
本発明に係る酵素免疫測定の方法は、標識に使用された
酵素によって発生した過酸化水素をパーオキジオギザレ
ート発光法によって測定する方法において、発光物質と
してム夏Sを使用することを特徴とするものである。
酵素によって発生した過酸化水素をパーオキジオギザレ
ート発光法によって測定する方法において、発光物質と
してム夏Sを使用することを特徴とするものである。
本発明に係る測定方法は、酵素反応によって生じた過酸
化水素を含む溶液に、ANliおよびオギザレートの夫
々の溶液を加え、反応混合液よりの光量音測定すること
に工って害鳥に実施される。
化水素を含む溶液に、ANliおよびオギザレートの夫
々の溶液を加え、反応混合液よりの光量音測定すること
に工って害鳥に実施される。
上記の方法において使用さnる過酸化水素を含む溶液と
は、**酵索として過酸化水素を生成する各種のすキシ
ダーゼ例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオ
キシダーゼ、コレステロールオキシダーゼなどを使用し
九通常の酵素免疫法の測定システムによって得も】−一
酸化水素を含む反応液である。ムMt3は中性または塩
基性の緩11111 S49 K l5it @〜I4
程度の緩価液例えばバルビッール緩衝液の溶液として使
用され、通常血清アルブインが添加さnる。オギVレー
トとしては好ましくはビス(2,4@−1すIロロフエ
轟ル)オギずし一ト(T OPO)が使用域れ、それら
社有機溶媒例えば酢酸エチル溶液として使用域れる。
は、**酵索として過酸化水素を生成する各種のすキシ
ダーゼ例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオ
キシダーゼ、コレステロールオキシダーゼなどを使用し
九通常の酵素免疫法の測定システムによって得も】−一
酸化水素を含む反応液である。ムMt3は中性または塩
基性の緩11111 S49 K l5it @〜I4
程度の緩価液例えばバルビッール緩衝液の溶液として使
用され、通常血清アルブインが添加さnる。オギVレー
トとしては好ましくはビス(2,4@−1すIロロフエ
轟ル)オギずし一ト(T OPO)が使用域れ、それら
社有機溶媒例えば酢酸エチル溶液として使用域れる。
本発@に係る方法社、通常lエムの対象とされる物質に
対して適用することができる。例えばサイロキシン(テ
、)、トリ画一ドサイロニン(2M)、エストリオール
、グログステロン、コルチゾール、インシ具リン、HP
I1%HOG%丁sHα−フェトプロティン、カルチノ
エンプリオ抗HCONム)、ツエリチン、β2−ぜクロ
グロプリ’、HB@AI 、XIgCk N IgM
% IgA、xgmなどの定量に%使用することがで
きる。
対して適用することができる。例えばサイロキシン(テ
、)、トリ画一ドサイロニン(2M)、エストリオール
、グログステロン、コルチゾール、インシ具リン、HP
I1%HOG%丁sHα−フェトプロティン、カルチノ
エンプリオ抗HCONム)、ツエリチン、β2−ぜクロ
グロプリ’、HB@AI 、XIgCk N IgM
% IgA、xgmなどの定量に%使用することがで
きる。
次に、二抗体固相法による〒4の測定に適用し水実施例
tあげて本発明の方法を具体的に説明するが、本発明の
方法はこれによって限定されるtのではカい。
tあげて本発明の方法を具体的に説明するが、本発明の
方法はこれによって限定されるtのではカい。
参考例1 抗プイロキシン血清の調製
カルボシイイド法により、サイロキシンを牛血清アルブ
ミン(B日ム)に結合し、常法に1リウナギへの免疫に
より抗体を産生させた(タリエカル・ケイストリー 2
0巻10号1111頁1−14年)。
ミン(B日ム)に結合し、常法に1リウナギへの免疫に
より抗体を産生させた(タリエカル・ケイストリー 2
0巻10号1111頁1−14年)。
参考例2 フィロキシンーグルコースオキシダーぞ結合
物の調製 10−用ナス型コルベンにサイロキシン遊離酸sMfI
tss*ジメチルホルムアイド 1−に、溶解し、グル
コースオキシダーゼ 1・Vt含む水溶液1−を加え、
攪拌し、1−グルタルアルデヒド溶液rL21−を加え
、室温で2時間反応する。得らnた結合物はa、O5M
IJン酸緩衝液(ga、e)に透析し、〒7opa1カ
ラムクc1マドグラフィーにより精製した。
物の調製 10−用ナス型コルベンにサイロキシン遊離酸sMfI
tss*ジメチルホルムアイド 1−に、溶解し、グル
コースオキシダーゼ 1・Vt含む水溶液1−を加え、
攪拌し、1−グルタルアルデヒド溶液rL21−を加え
、室温で2時間反応する。得らnた結合物はa、O5M
IJン酸緩衝液(ga、e)に透析し、〒7opa1カ
ラムクc1マドグラフィーにより精製した。
爽施例 フィロキシンの酵素免疫測定法1、 イムノア
ッセイ ポリスチレンチューブ(1ox7@■)に012Mバに
ビI−ル緩11液(XJHIl、1.a21Bsム含有
)て希釈しえ抗すイ四キシン血清(X 4011 )溶
液11−1試料(ナイロキシン=101〜■鳳Jl/I
LIIIIJ)水溶液11−、プイロキシンーグルコー
スオ中シダーゼ曽合物(xl@0)浴液11−を加え、
次いで精製された家兎のIg()を結合させた七ツァロ
ーズゲル管使用し次アフィエティ1wxマドグラフィー
により精製した抗家1@ xga山羊XgG tPココ
−ィングしたビーズ(ボ9スチレシ製2・φX−曽歯車
形)1債を加え、!<411拌L%4℃で一夜放置して
反応させる。
ッセイ ポリスチレンチューブ(1ox7@■)に012Mバに
ビI−ル緩11液(XJHIl、1.a21Bsム含有
)て希釈しえ抗すイ四キシン血清(X 4011 )溶
液11−1試料(ナイロキシン=101〜■鳳Jl/I
LIIIIJ)水溶液11−、プイロキシンーグルコー
スオ中シダーゼ曽合物(xl@0)浴液11−を加え、
次いで精製された家兎のIg()を結合させた七ツァロ
ーズゲル管使用し次アフィエティ1wxマドグラフィー
により精製した抗家1@ xga山羊XgG tPココ
−ィングしたビーズ(ボ9スチレシ製2・φX−曽歯車
形)1債を加え、!<411拌L%4℃で一夜放置して
反応させる。
屓応液を微開除去後、生坦食埴水2jI7t−加えて洗
浄し、吸引除去を行なう1.この操作をさらに1回繰返
した螢、酢酸緩衝液(0,01M 、 pH5,@)に
溶解した&1Mグルコース溶1120 m11711)
、t、寓温で3時間反応させる。
浄し、吸引除去を行なう1.この操作をさらに1回繰返
した螢、酢酸緩衝液(0,01M 、 pH5,@)に
溶解した&1Mグルコース溶1120 m11711)
、t、寓温で3時間反応させる。
生成した過酸化水素はムIs −TOPO系による発光
反応によ〕測定する。
反応によ〕測定する。
1、化学発光法
ガラスチェーブ(10φX T 5 wm )に反応溶
液(生成した過酸化水素) 100μtX62Mバルビ
タール緩衝液(pH1o ) K O,02%AMIE
I、 L1*B8ムを含むムMB溶液10aJJt1酢
酸エチルに溶解したTOPOS mM溶液200μ/を
加え、Photoncounter (浜松テレビ社製
HTv−aT@T)により測定した。測定結果が第1図
に示名nている。
液(生成した過酸化水素) 100μtX62Mバルビ
タール緩衝液(pH1o ) K O,02%AMIE
I、 L1*B8ムを含むムMB溶液10aJJt1酢
酸エチルに溶解したTOPOS mM溶液200μ/を
加え、Photoncounter (浜松テレビ社製
HTv−aT@T)により測定した。測定結果が第1図
に示名nている。
IL!l1lWIIJの簡単な説明
第1図はテ、の検量線であり、横軸は試料テ。
の量、縦軸はT4の添加に伴なう発光強度の相対値を示
す。BoFi T4無添加のときの発光強度であり、B
はT4を添加したときの発光強度である。
す。BoFi T4無添加のときの発光強度であり、B
はT4を添加したときの発光強度である。
特許出願人 三共株式会社
代理人弁理士 樫 出 □庄 治
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1)@−に使用さnた酵素によって発生し九過酸化水嵩
をパーオキシオギダレート発光法によってa+*する方
法KjlPいて、発光物質として一轡ア墨9ノー1−ナ
フタレンスルフォン酸tI!周すゐことt41徽とする
酵素免疫測定法。 りパーオキシオギ望し−ト発光法においてオギダレート
としてビス(λ4.@−ト91c10フエ墨ル)オギ望
レートを使用する特許請求の範S墜1項記l!O方法。 3) 標識に11!!用6れる酵素がダルコースオキシ
メーゼ″e6Jb41許請求の範囲第1項乃至第2項記
me、isi。 4)一定量れる対象が生体内に存在する低分子化合物お
よび高分子化合物の中より選択された一種である特許請
求の範囲第1項乃至第3項記載の方法。 S)測定される対象がサイロキシンである特許請求の範
囲第1項乃至第3項記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP18564681A JPS5886458A (ja) | 1981-11-19 | 1981-11-19 | 酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP18564681A JPS5886458A (ja) | 1981-11-19 | 1981-11-19 | 酵素免疫測定法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5886458A true JPS5886458A (ja) | 1983-05-24 |
JPH0153422B2 JPH0153422B2 (ja) | 1989-11-14 |
Family
ID=16174407
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP18564681A Granted JPS5886458A (ja) | 1981-11-19 | 1981-11-19 | 酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5886458A (ja) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5737261A (en) * | 1980-08-15 | 1982-03-01 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | Measuring method of physiological active substance |
-
1981
- 1981-11-19 JP JP18564681A patent/JPS5886458A/ja active Granted
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5737261A (en) * | 1980-08-15 | 1982-03-01 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | Measuring method of physiological active substance |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0153422B2 (ja) | 1989-11-14 |
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