JPS5867630A - 抗ヒト成長ホルモン抗体の製造法 - Google Patents
抗ヒト成長ホルモン抗体の製造法Info
- Publication number
- JPS5867630A JPS5867630A JP16608081A JP16608081A JPS5867630A JP S5867630 A JPS5867630 A JP S5867630A JP 16608081 A JP16608081 A JP 16608081A JP 16608081 A JP16608081 A JP 16608081A JP S5867630 A JPS5867630 A JP S5867630A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- cells
- hgh
- mouse
- igm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は生細胞によるHGHに特異的な抗体の産生、さ
らに詳しくは融合細胞(ハイブリドーマ)による抗HG
H抗体の産生に関する。
らに詳しくは融合細胞(ハイブリドーマ)による抗HG
H抗体の産生に関する。
一般に免疫処置された動物から得られる抗体(特異免疫
グロブリン)は他の免疫グロブリンとの混合物であり、
その中から必要な抗体のみを分離することは困難、場合
によっては不可能である。はとんどの場合抗体の純度が
増大するにつれて特異抗体としての価値も高まる0ζう
した理由から抗体産生細胞またはその前駆細胞と連続的
に分裂増殖が可能な癌細胞を融合させこれら両方の細胞
の特性を有している均質な細胞集団を得ようとする試み
が検討されてきた。
グロブリン)は他の免疫グロブリンとの混合物であり、
その中から必要な抗体のみを分離することは困難、場合
によっては不可能である。はとんどの場合抗体の純度が
増大するにつれて特異抗体としての価値も高まる0ζう
した理由から抗体産生細胞またはその前駆細胞と連続的
に分裂増殖が可能な癌細胞を融合させこれら両方の細胞
の特性を有している均質な細胞集団を得ようとする試み
が検討されてきた。
融合に#i分化経路が同一の細胞、九七えは感性骨髄腫
B細胞(ミエローマ細胞)と正常リンパ系B細胞(抗原
でプライムした動物より得たひ臓細胞々ど)が用いられ
る( G、Kohler・t ml。
B細胞(ミエローマ細胞)と正常リンパ系B細胞(抗原
でプライムした動物より得たひ臓細胞々ど)が用いられ
る( G、Kohler・t ml。
8omatle Ce1l G@neticm、 3
、303 (/り77) )、o得られた雑種細胞の一
部はこれらを生じた両方の親の好ましい特質を有してい
る。すなわちハイブリドーマと呼ばれるこの雑種細胞は
抗体産生細胞と同様に特異抗体を合成し、かつミエロー
マ細胞と同様に連続的に分裂増殖する能力を有する。こ
れら、2種類の性質の組合わせによシハイブリドーマは
均一で特異性の高い単りq−ン性抗体を連続的に産生ず
ることができる。
、303 (/り77) )、o得られた雑種細胞の一
部はこれらを生じた両方の親の好ましい特質を有してい
る。すなわちハイブリドーマと呼ばれるこの雑種細胞は
抗体産生細胞と同様に特異抗体を合成し、かつミエロー
マ細胞と同様に連続的に分裂増殖する能力を有する。こ
れら、2種類の性質の組合わせによシハイブリドーマは
均一で特異性の高い単りq−ン性抗体を連続的に産生ず
ることができる。
本発明はバイプリドーマによるIgMクラス抗HG’H
抗体の製造法を提供する本のである@すなわち本発明は
、動物をヒト成長ホルモン(以下RGHと称す)で免疫
し、該動物からの抗ヒト成長ホルモン抗体(以下抗HG
H抗体と称す)産生細胞とミエローマ細胞によυ融合細
胞(ハイブリドーマ)を形成させ、該ハイブリドーマを
クローン化し、ついで抗1gM抗体に対し反応性を有す
る抗HGH抗体を産生ずるクローンを選択し培養するこ
とからなる、IgMクラス抗HGH抗体の製造法である
。
抗体の製造法を提供する本のである@すなわち本発明は
、動物をヒト成長ホルモン(以下RGHと称す)で免疫
し、該動物からの抗ヒト成長ホルモン抗体(以下抗HG
H抗体と称す)産生細胞とミエローマ細胞によυ融合細
胞(ハイブリドーマ)を形成させ、該ハイブリドーマを
クローン化し、ついで抗1gM抗体に対し反応性を有す
る抗HGH抗体を産生ずるクローンを選択し培養するこ
とからなる、IgMクラス抗HGH抗体の製造法である
。
以下に本発明方法を具体的に説明する。
マウス、ラット、ウサギ、モルモット等の動物を腹腔内
、皮下、静脈内投与等の方法によシHCJで免疫する。
、皮下、静脈内投与等の方法によシHCJで免疫する。
免疫の際、免疫増強のためFreund comple
t@adjuvant (フロイント コンプリート
アジ具バント)を併用してもよい。該動物からひ臓、リ
ンパ節等をとシ出し抗HGH抗体産生細胞の懸濁液を調
製する。一方マウス、ラット、ヒト等由来のHGPRT
(ヒポキサンチン。
t@adjuvant (フロイント コンプリート
アジ具バント)を併用してもよい。該動物からひ臓、リ
ンパ節等をとシ出し抗HGH抗体産生細胞の懸濁液を調
製する。一方マウス、ラット、ヒト等由来のHGPRT
(ヒポキサンチン。
グアニン、ホスフォリボシルトランスフェラーゼ)ある
いはTK(チミジンキナーゼ)欠損鳳エローマ細胞を1
nマ1tro培養し懸濁液を調製する。該抗HGH抗体
産生細胞と#ミエローマ細胞はポリエチレングリコール
あるいはHVJ (センダイウィルス)等によシ融合せ
しめる。抗体産生細胞とミエローマ細胞の組合せに%k
f)Ill限けないが、同一動物種由来の細胞を用いる
のが好ましい。次いでHAT (ヒポキサンチン、アミ
ノプテリン、チミジン)培地で培養する仁とにより抗H
GH抗体産生細胞とミエローマ細胞からなる融合細胞の
みを選択的に増殖させる。さらにlbnJHng di
lution (すayティング ダイ9゜−シ冒ン)
あるいはコロニー形成法等の方法によシフローン化を行
ない、抗IgM抗体と反応性の有無を調べる。抗IgM
抗体との反応性は0uehterlany法等の沈降反
応あるいはradi。
いはTK(チミジンキナーゼ)欠損鳳エローマ細胞を1
nマ1tro培養し懸濁液を調製する。該抗HGH抗体
産生細胞と#ミエローマ細胞はポリエチレングリコール
あるいはHVJ (センダイウィルス)等によシ融合せ
しめる。抗体産生細胞とミエローマ細胞の組合せに%k
f)Ill限けないが、同一動物種由来の細胞を用いる
のが好ましい。次いでHAT (ヒポキサンチン、アミ
ノプテリン、チミジン)培地で培養する仁とにより抗H
GH抗体産生細胞とミエローマ細胞からなる融合細胞の
みを選択的に増殖させる。さらにlbnJHng di
lution (すayティング ダイ9゜−シ冒ン)
あるいはコロニー形成法等の方法によシフローン化を行
ない、抗IgM抗体と反応性の有無を調べる。抗IgM
抗体との反応性は0uehterlany法等の沈降反
応あるいはradi。
imnunoaamay (ラジオ イムノアッセイ)
勢によシ、抗HGH抗体産生性蝶radlo 1rai
unoaasay 。
勢によシ、抗HGH抗体産生性蝶radlo 1rai
unoaasay 。
enzyme Irrnunoass暑y(エンザイム
イムノアッセイ)、あるいはHGH感作血球またはH
GI(愚作うf−クス等の凝集反応等によシーベること
ができる。
イムノアッセイ)、あるいはHGH感作血球またはH
GI(愚作うf−クス等の凝集反応等によシーベること
ができる。
IgM抗体と反応性を有する抗HGH抗体産生クローン
を増殖させる。該クローンはIn vllママ培養する
ことが可能であシ、In vitro培養では培養上清
から、1nviマ0培養では該クローンを注射した動物
の腹水、血清等からIgMクラス抗HGH抗体を採取す
ることができる。
を増殖させる。該クローンはIn vllママ培養する
ことが可能であシ、In vitro培養では培養上清
から、1nviマ0培養では該クローンを注射した動物
の腹水、血清等からIgMクラス抗HGH抗体を採取す
ることができる。
従来法で得た抗HGH抗体、すなわちHGHで免疫処置
された動物より得た抗体に比べ、ハイブリドーマにより
産生される単クローン性抗体は特異抗体とによシ高い価
値をも′つ。ハイブリドーマによる単りローン性抗)I
GH抗体は血中ヒト成長ホルモンの測定、あるいは脳下
画体からのヒト成長ホルモンの抽出n羨、遺伝子組換え
による培養物からの該ホルモンの抽出精製等に用いるこ
とができ、従来法で得た抗HGH抗体よりも利用価値が
高いものである0 今までにJ、 1yanyiら(Mo1ecular
Immunole、 /7九J7 (/910) )、
P、Gh Bundemenら(J、CIinsEnd
oerlnolMnCabol、、 J / 、 /&
7J(/?j#)による抗11Gii抗体産生イ ハルブリドーマの報告があるが1本発明のように工gM
り、ラス抗体量生性のものは知られていない、 IgM
クラス抗体は、他のクラスの抗体にくスの抗体にくらべ
極めて高い反応性を示しくτ。
された動物より得た抗体に比べ、ハイブリドーマにより
産生される単クローン性抗体は特異抗体とによシ高い価
値をも′つ。ハイブリドーマによる単りローン性抗)I
GH抗体は血中ヒト成長ホルモンの測定、あるいは脳下
画体からのヒト成長ホルモンの抽出n羨、遺伝子組換え
による培養物からの該ホルモンの抽出精製等に用いるこ
とができ、従来法で得た抗HGH抗体よりも利用価値が
高いものである0 今までにJ、 1yanyiら(Mo1ecular
Immunole、 /7九J7 (/910) )、
P、Gh Bundemenら(J、CIinsEnd
oerlnolMnCabol、、 J / 、 /&
7J(/?j#)による抗11Gii抗体産生イ ハルブリドーマの報告があるが1本発明のように工gM
り、ラス抗体量生性のものは知られていない、 IgM
クラス抗体は、他のクラスの抗体にくスの抗体にくらべ
極めて高い反応性を示しくτ。
KLshimoto at al、 S、工mmuno
1.s 154 、 jj&(/97/l J、0no
uaat al−Pr0Q、800.1)CpsBIQ
laM@d+# J/ * 300(/9441 な
ど)。
1.s 154 、 jj&(/97/l J、0no
uaat al−Pr0Q、800.1)CpsBIQ
laM@d+# J/ * 300(/9441 な
ど)。
血中ヒト成長ホルモンの測定法畔への応用に広く有用で
ある。また、同様に抗原との結合部位を多くもつことか
ら抗原精製用のりガントとしても有用である。
ある。また、同様に抗原との結合部位を多くもつことか
ら抗原精製用のりガントとしても有用である。
以下に、H()11であらかじめ免疫されたmxaAy
マウスのひ臓細胞とm々マウスのlエローマ細胞との融
合によりIgMクラス抗HGH抗体書生産生へリドーマ
のセルラインを調製する方法を本発明方法の一例として
示す。
マウスのひ臓細胞とm々マウスのlエローマ細胞との融
合によりIgMクラス抗HGH抗体書生産生へリドーマ
のセルラインを調製する方法を本発明方法の一例として
示す。
(荀 融合のためのび繊細胞の調製
融合のためのひIIIJIIMIIを調製するためKH
G!Iを数回マウスに注射し、最後のブースターより3
〜4I日後にひ臓を採取する。採取したひ臓はMICM
(jLニマムエッセンシャル培地)中で懸濁液とする
。
G!Iを数回マウスに注射し、最後のブースターより3
〜4I日後にひ臓を採取する。採取したひ臓はMICM
(jLニマムエッセンシャル培地)中で懸濁液とする
。
(Is) 融合のためのミエローマ細胞の調製MOP
O−λ/ラインに由来しHGPRτを欠如するBAIA
/ll 1工ローマ細胞PJlC&Agffσ/ (M
arguLliss*% ml、Ool+1 日p
rlng Harbor 8%p、(4utnt、B
iol 、、、1/ 。
O−λ/ラインに由来しHGPRτを欠如するBAIA
/ll 1工ローマ細胞PJlC&Agffσ/ (M
arguLliss*% ml、Ool+1 日p
rlng Harbor 8%p、(4utnt、B
iol 、、、1/ 。
7f/(/974+1 をRE’MI 144tO培
地(10−牛脂児血清含)で継代しておく。
地(10−牛脂児血清含)で継代しておく。
(0) バイプリドーマの生成
に凶ミエローマ細胞とHGIi感作BALa10マウス
より得られたひ臓細胞との混合物をポリエチレングリコ
ール中に懸濁して融合させる。融合細胞はRPMI/4
Qθ培地(/θ慢牛脂児血清含IK移し、培養用プレー
トに分注、融合の翌日よりHムτ選択培地を加える。
より得られたひ臓細胞との混合物をポリエチレングリコ
ール中に懸濁して融合させる。融合細胞はRPMI/4
Qθ培地(/θ慢牛脂児血清含IK移し、培養用プレー
トに分注、融合の翌日よりHムτ選択培地を加える。
(11) 特異抗体のアッセイ9およびクローニング
増殖のみられたwall (ウェル)の培養上清にりい
て抗HGH抗体産生の有無を調べる。
増殖のみられたwall (ウェル)の培養上清にりい
て抗HGH抗体産生の有無を調べる。
抗体を産生ずるW・ilが見つかれば、そのwall中
のバイプリドーマを11millng dilutlo
n 等の方法によりクローン化する。増−殖のみられ
たw@l lについて再度抗体書生の有無を調ベクロー
ンを分離する。
のバイプリドーマを11millng dilutlo
n 等の方法によりクローン化する。増−殖のみられ
たw@l lについて再度抗体書生の有無を調ベクロー
ンを分離する。
(e) バイプリドーマのl!l vlマOの増殖分
離したクローンを培養用フラスコで増殖させ、 70′
y個の細胞を肱−々マウスの腹腔内に注射する。腹部に
肥大が見られた時点で腹水を採取する。
離したクローンを培養用フラスコで増殖させ、 70′
y個の細胞を肱−々マウスの腹腔内に注射する。腹部に
肥大が見られた時点で腹水を採取する。
(f) 腹水の精製
xgMクラス抗体はゲルろ適法により精製す為のが一般
的である(F16611!l @t al、、Bioa
hla+、Biophyg。
的である(F16611!l @t al、、Bioa
hla+、Biophyg。
ムat龜、 43. ダθJ(/?AJll。
以下に実施例により本発明の詳細な説明するが1本発明
がこれにより限定されるものではないことはいう!でも
ない。
がこれにより限定されるものではないことはいう!でも
ない。
実施例1
U〕kxxされたH G H10ρ#Vと:IFr@u
nd aomp1ms*注射してプライムを行ない、さ
らに同量のHGHを数回静脈内に注射してブースターを
行なった。最後のブースターより4日後にマウスよりひ
臓を採取し単細胞懸濁液を調製した。赤血球細胞はθ、
t3優MH,OL中で37℃7分間イン本、ベートすb
ことによシ破壊させ、生ずる細胞懸濁液は血清不含MI
IMで洗浄した。この懸濁液よりlθ8個の細胞をと抄
、すでに培養を行なっていたマウス邂エローマ細胞/θ
1個と混合しs:ooxtで遠心し、融合のために血清
不含のMIIM中で希釈した4(j憾n/v+ポリエチ
レングリフ−を−≦0θθ中に再懸濁すせた。j分間室
温で放電後MIIIMで希釈し再トに分注した。融合の
翌日より1〜3日おきに培地の半量をL1選択培地で交
換したところ約−週間後にいくつかのW・11で増殖が
艶られ、マウスひ臓細胞とマウスミエローマ細ヨ穀舊H
肚嘘 μン増殖の見られたWθ11の培養上清について、ラテ
ックス凝集法により抗HGH抗体活性を検定した。コン
トロールにはウサギ抗ヒト成長ホルモン抗血清を用い九
〇検定の結果、特に抗体活性の強いvola中のへイブ
リドーマについてllmiting dilution
によるクローニングを行った。この際、RAIJB10
マウスより採取し九胞腺細胞をfo@Kler 1ay
er (フィーダー レイヤー)として用いた。
nd aomp1ms*注射してプライムを行ない、さ
らに同量のHGHを数回静脈内に注射してブースターを
行なった。最後のブースターより4日後にマウスよりひ
臓を採取し単細胞懸濁液を調製した。赤血球細胞はθ、
t3優MH,OL中で37℃7分間イン本、ベートすb
ことによシ破壊させ、生ずる細胞懸濁液は血清不含MI
IMで洗浄した。この懸濁液よりlθ8個の細胞をと抄
、すでに培養を行なっていたマウス邂エローマ細胞/θ
1個と混合しs:ooxtで遠心し、融合のために血清
不含のMIIM中で希釈した4(j憾n/v+ポリエチ
レングリフ−を−≦0θθ中に再懸濁すせた。j分間室
温で放電後MIIIMで希釈し再トに分注した。融合の
翌日より1〜3日おきに培地の半量をL1選択培地で交
換したところ約−週間後にいくつかのW・11で増殖が
艶られ、マウスひ臓細胞とマウスミエローマ細ヨ穀舊H
肚嘘 μン増殖の見られたWθ11の培養上清について、ラテ
ックス凝集法により抗HGH抗体活性を検定した。コン
トロールにはウサギ抗ヒト成長ホルモン抗血清を用い九
〇検定の結果、特に抗体活性の強いvola中のへイブ
リドーマについてllmiting dilution
によるクローニングを行った。この際、RAIJB10
マウスより採取し九胞腺細胞をfo@Kler 1ay
er (フィーダー レイヤー)として用いた。
培地を2〜3日おきに半量交換しつつ培養を続けたとこ
ろ、約λ週間後に増殖が見られ、培養上清中の抗HGH
抗体活性を検定した結果、−0個の抗HGH抗体産生性
クローンを分離し九〇曇慕鼻止 Gノ分離したクローンを組織培養用フラスコで増殖さ、
せた後、/θ7側の細胞をBALO/ Oマウスの腹腔
内に注射した0注射後約−週間で腹部の著しい肥大がみ
られ、腹水を採堆し九。
ろ、約λ週間後に増殖が見られ、培養上清中の抗HGH
抗体活性を検定した結果、−0個の抗HGH抗体産生性
クローンを分離し九〇曇慕鼻止 Gノ分離したクローンを組織培養用フラスコで増殖さ、
せた後、/θ7側の細胞をBALO/ Oマウスの腹腔
内に注射した0注射後約−週間で腹部の著しい肥大がみ
られ、腹水を採堆し九。
cノ採取した腹水に同量の飽和硫安を加え、生じた沈殿
を遠心して集めθ、/!; M Na0j!を含む0.
02M ’rris HC!flバッフy−(pHに。
を遠心して集めθ、/!; M Na0j!を含む0.
02M ’rris HC!flバッフy−(pHに。
θ)に溶解し、−夜回バッファーに対し透析した後、生
じた沈殿を除いて同バッファーで平衝化したカラムに添
加した(カラムは内径λ−46n %高さ36m)。
じた沈殿を除いて同バッファーで平衝化したカラムに添
加した(カラムは内径λ−46n %高さ36m)。
添加後、同バッファーで溶出し、採取した溶出液の各両
分について蛋白量と抗体活性を測定したところ、抗HG
H抗体活性はvoid volumeに溶出された蛋白
画分に集中した。このvoηvO1(至)に溶出された
蛋白を還元条件下8D8−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動で分析したところ、分子量約7万と約2万3千に相
当する一つのバンドが検出された。前者がIgMクラス
抗体の■鎖の分子量、後者が1414の分子量に相当す
ることから、vola vQl−に抗HG’H抗体活性
を有するIgMクラス抗体が存在することが確認された
。
分について蛋白量と抗体活性を測定したところ、抗HG
H抗体活性はvoid volumeに溶出された蛋白
画分に集中した。このvoηvO1(至)に溶出された
蛋白を還元条件下8D8−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動で分析したところ、分子量約7万と約2万3千に相
当する一つのバンドが検出された。前者がIgMクラス
抗体の■鎖の分子量、後者が1414の分子量に相当す
ることから、vola vQl−に抗HG’H抗体活性
を有するIgMクラス抗体が存在することが確認された
。
4齢11負日ぺ
(に)寒天中に穴をあけ抗原と抗体を対しさせる方法(
0uabterlony法)Kよシフローン培養土楕中
の抗HGH抗体のクラス讐調べた。中央の穴に培養上清
を硫安で濃縮した液、周囲のSつの穴に抗マウスエgM
s抗マウスIgGts抗マウス”g”he抗マウスIg
G2b、抗マウスニー3を入れ37℃で一夜放置したと
ころ、抗マウスIgMと培養上清との間にだけ沈降帯が
形成され、へイブリドーマから産生されている抗HGH
抗体は1gMクラスであることがわかった。
0uabterlony法)Kよシフローン培養土楕中
の抗HGH抗体のクラス讐調べた。中央の穴に培養上清
を硫安で濃縮した液、周囲のSつの穴に抗マウスエgM
s抗マウスIgGts抗マウス”g”he抗マウスIg
G2b、抗マウスニー3を入れ37℃で一夜放置したと
ころ、抗マウスIgMと培養上清との間にだけ沈降帯が
形成され、へイブリドーマから産生されている抗HGH
抗体は1gMクラスであることがわかった。
身羞遥i
C,t)クローン培養上清中の抗体価を経時的に検定し
九0表1に示すようK IIQ’f!に対する反応性に
何ら変化は見られなかった。
九0表1に示すようK IIQ’f!に対する反応性に
何ら変化は見られなかった。
表/、クローン培讐上清中O抗体価
りローニング後経過日数 抗HG用売体釧76週
、126 11讃11分 (γ)IgMクラス抗HGH抗体産生クローンの一つ(
クローン719と称す)Kついてカリオロジー分析を行
なった。表2に示すようKP3XuムgざU/親細胞は
約110個の染色体を含有し、BALBloひ臓細胞は
90個の染色体を含有するが、クローン7Bデ中の染色
体数は約/4tOであυ、クローン7B?がミエローマ
細胞とひ臓細施の/:/に融合し九九イブリドーマであ
ることが確認された。
、126 11讃11分 (γ)IgMクラス抗HGH抗体産生クローンの一つ(
クローン719と称す)Kついてカリオロジー分析を行
なった。表2に示すようKP3XuムgざU/親細胞は
約110個の染色体を含有し、BALBloひ臓細胞は
90個の染色体を含有するが、クローン7Bデ中の染色
体数は約/4tOであυ、クローン7B?がミエローマ
細胞とひ臓細施の/:/に融合し九九イブリドーマであ
ることが確認された。
表コ、親シよびハイブリドーマ中の染色体数細胞
細胞あたシの染色体数 PJXJAgJ’U/ 〜/10※BAI4/
Cひ臓細胞 ダθ クローン7M9 〜1llo※※コ個のメタセ
ンター性のマーカー染色体を含む手続補正書(自発) 特許庁長官 島 1)春 樹 殿 ■、事件の表示 昭和56年 特許願第 166080 号2、発明の
名称 抗ヒト成長ホルモン抗体の製造法 3 補正をする者 事件との関係 特許比11人 住 所 大阪市東区北浜5丁目IFa地名称 (20
9)住友化学工業株式会社代表者 土 方
武 4、代理人 住 所 大阪市東区北浜5丁目1゛囁地住友化学工業
株式会社内 氏名 弁理士(614@)木村勝装 置+061220−3404 6、補正の内容 (1)明細書第4頁第2〜8行に「(以下HGHと称す
)」とあるを削除する。
細胞あたシの染色体数 PJXJAgJ’U/ 〜/10※BAI4/
Cひ臓細胞 ダθ クローン7M9 〜1llo※※コ個のメタセ
ンター性のマーカー染色体を含む手続補正書(自発) 特許庁長官 島 1)春 樹 殿 ■、事件の表示 昭和56年 特許願第 166080 号2、発明の
名称 抗ヒト成長ホルモン抗体の製造法 3 補正をする者 事件との関係 特許比11人 住 所 大阪市東区北浜5丁目IFa地名称 (20
9)住友化学工業株式会社代表者 土 方
武 4、代理人 住 所 大阪市東区北浜5丁目1゛囁地住友化学工業
株式会社内 氏名 弁理士(614@)木村勝装 置+061220−3404 6、補正の内容 (1)明細書第4頁第2〜8行に「(以下HGHと称す
)」とあるを削除する。
(2)同第4頁第4行に「(以下EIGH抗体と称す)
」とあるを削除する。
」とあるを削除する。
(3) 同第5頁1!14〜15行に「抗IgM抗体
と反応性の有無を調べる。」とあるを 「抗IgM抗体と反応性を有する抗HGH抗体の産生の
有無を調べる。」と訂正する。
と反応性の有無を調べる。」とあるを 「抗IgM抗体と反応性を有する抗HGH抗体の産生の
有無を調べる。」と訂正する。
(4) 同第6頁第12行に「特異抗体とにより高い
」とあるを、「特異抗体としてより高い」と訂正す芯。
」とあるを、「特異抗体としてより高い」と訂正す芯。
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 (1)動物をヒト成長ホルモン(以下HGHと称す)で
免疫し、該動物からの抗ヒト成長ホルモン抗体(以下抗
HGH抗体と称す)産生細胞とミエローマ細胞により融
合細胞(ハイブリドーマ)を形成させ、骸へイブリドー
マをクローン化し、次いで抗IgM抗体に対し反応性を
有する抗HGH抗体を産生ずるクローンを選択し培養す
ることからなゐIgMクラス抗HGH抗体の製造法。 Q #抗HGH抗体産生細胞がひ臓細胞及びリンパ節細
胞よシ成り立つ群よシ選択し九細胞である特許請求の範
囲第(1)項記載の方法。 (匈 骸ひ臓がマウスのひ臓で該ミエローマがマウスミ
エローマである特許請求の範H第−礒記載の方法。 (9)骸マウスがBALB/c マウスである特許請
求の範囲第0項記載の方法。 (支)該ミエローマ細胞がMOPC−,2/ラインに由
来するPJXAJAglrUIである特許請求の範囲第
(ジまたは(ト)項記載の方法。 (6) 抗1gM抗体が抗マウスIgM抗体である特
許請求の範囲第(ジ、(ロ)または(イ)記載の方法。 (7)#ハイブリドーマをin vitroで培養する
特許請求の範囲第(1)、u、 (Jl、(9)、G!
:)または(6)項記載の方法。 (イ)該ハイブリドーマを組織適合性のおる動物に注射
しin vlvoで培養する特許請求の範囲第(1)、
−1(5′)、(鉤、(、f)または(4項記載の方法
0
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP16608081A JPS5867630A (ja) | 1981-10-16 | 1981-10-16 | 抗ヒト成長ホルモン抗体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP16608081A JPS5867630A (ja) | 1981-10-16 | 1981-10-16 | 抗ヒト成長ホルモン抗体の製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5867630A true JPS5867630A (ja) | 1983-04-22 |
Family
ID=15824603
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP16608081A Pending JPS5867630A (ja) | 1981-10-16 | 1981-10-16 | 抗ヒト成長ホルモン抗体の製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5867630A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60172934A (ja) * | 1984-02-17 | 1985-09-06 | Kachiku Eisei Shikenjo | 免疫グロブリンの製造法 |
-
1981
- 1981-10-16 JP JP16608081A patent/JPS5867630A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60172934A (ja) * | 1984-02-17 | 1985-09-06 | Kachiku Eisei Shikenjo | 免疫グロブリンの製造法 |
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