JPS58500064A - １α，２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ↓３ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 以下に説明する本発明は、デパートメント・オブ・ヘルス・アンド拳ヒユーマン ・サービスの研究助成金もしくは賞金に基づき行われた研究活動においてなされ たものである。

本発明は新規なビタミンＤ化合物に関する。

より詳しくは、本発明は１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のフッ素化誘導 体に関する。

ビタミンＤは、動物及び人間のカルシウム及びリン物質代謝を制御することが知 られている。そして、いままだビタミンＤの生理学的活性は、そのビタミンのヒ ドロキシル化形への物質代謝に依ることも一般的に受容されている。したがって 、ビタミンＤ３は生体中でヒドロキシル化されて２５−ヒドロキシビタミンＤ３ になり、次いで、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３に転換させられるので ある。そして、腸内のカルシウム及びリンの輸送と骨ミネラルの流通化を促進す ることによりカルシウム及びリンのホメオスタシスを規制すると考えられている のは、特に後者の化合物である。

生物学的活性のため、これらビタミンＤのヒドロキシル化形は、種々の骨の病気 の治療用に用途な見出される重要な医薬製品である。これに加えて、ある種の高 度に効能のあるフッ素化ビタミンＤ誘導体を含む、多くの、非天然の、これらの ヒドロキシル化ビタミンＤ代謝物質の類縁体が近年調製されている。

発明の背景 ビタミンＤ代謝物質、類縁体及びそれらの調製、応用忙ついては、特許その他の 文献などの資料中に論議されており、例えば、米国特許第３，５６５，９２４号 （２５−ヒドロキシコレカルシフェロール）　、１ｉ１３，６９７，５５９号（ １，２５−ヒドロキシコレカルシフェロール）、同３，７４１，９９６号（１α −ヒドロキシコレカルシフェロール）及び同３，９０７，８４３号（１α−ヒド ロキシエルゴカルシフェロール）があげられる。フッ素化ビタミンＤ誘導体及び そのような化合物の調製方法は米国特許第４，１９６，１３３号（２４，２４− ジフルオロ−２５−ヒドロキシビタミンＤ、）、同第４，２０１，８８１号（２ ４，２４−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）及び同４，１ ８８，３４５号、４，２２９，３５７号、４，２２９，３５８号、４，２２６． ７８７号、４，２２４，２３０号の主題である。

非常に高い生物学的活性を示す、新規なビタミンＤ３誘導体がここに見い出され た。この生成物は、２β−フルオロ〜１α−ヒドロキシビタミンＤ３の酵素ヒド ロキシル化によって容易に調製でき、１α、２５−ジヒドロキシ−２β−フルオ ロビタミンＤ３とその１−．３−及び２５−アシル化物として特徴付けられる。

これらの化合物は、部会長（次式によって表わされ、ここで式中、それぞれのＲ ，Ｒ１及びＲ２は水素及び１から約６個の炭素原子のアシル基から選ばれる。そ の高度め生物学的有効性のために１本発明の化合物は骨の病気の治療用としての 用途を見い出すであろう。

発明を実施するための最良の形態 １．２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ３は、１α−ヒドロキシ− ２β−フルオロビタミンＤ。

から出発し、その化合物の２５位の炭素における酵素的とドロ“キシル化を生体 外で行うことによって容易に調製できる。

１α−ヒドロキシ−２／−フルオロビタミンＤ３ノヒドロキシル化は、この化合 物をビタミンＤ欠陥を有するラットの肝臓組織から調製されたホモジネートと装 置すること罠より行うことができる。この出発物質のｌα−ヒドロキシ−２β− フルオロビタミンＤ３はオーシダらの合成法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔ ｔｅｒｓ　、　２１１７５５〜１７５６　（１９８０））により得ることができ 、２５−ヒドロキシ類縁体に次の手順で転換することができる。

雄の乳離れさせたラットにビタミンＤ欠乏の食餌（スダら、Ｊ、　Ｎｕｔｒ、１ ００．１０４９〜１０５２．１９７０）全１ケ月間与える。次にそれらを殺し、 その肝臓を取り出し、２０チ（Ｗ／ｖ）ホモジネートを、水冷の、０．２５Ｍの スクロースを含む０．１　Ｍ　ＩＪン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）中で調製した。

温ｔ　ｋ、１２５　ｒｎＬエルレンマイヤーヲ乏スコ中Ｋ１ｇの肝臓組織から徴 した肝臓ホモジネートのアリコートを１０ｍ１の装置媒体で、濃度で示される次 の物質からなるものの中に懸濁して行った。０．１２５Ｍスクロース、５０ｍＭ 　リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）、２２゜４ｍＭグｋ　：ｆｆ　−ス−５−ホス フェート、２０　ｍＭ　ＡＴＰ　。

１６０ｍＭニコチンアミド、２５ｍＭサクシネート、０、４　ｍＭ　ＮＡＤＰ　 、５　ｍＭ　ＭｇＣｌ２．０．１Ｍ　ＫＣｌ、１０βｇＮ、Ｎ’−ジフェニルー ｐ−フェニレンジアミン及び０．５単位のグルコース−６−ホスフニートーテハ イドロジエナーゼからなる。反応は、１０βｇの１α−ヒドロキシ−２β−フル オロビタミンＤ３を２５μｔの９５％エタノール中に溶解したものを添加して開 始させる。

混合物をｌＯＯ振動／分で３７℃で２時間振盪下釦装置する。メタノール２０ｍ ｔとクロロボルム１０ｍｔを加えて反応を停止する。さらにクロロポルム１０ｍ ｔと水６ｍｔを添加したのち有機相を分離し、蒸発処理を行い、次いで目的の１ ．２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ３を含有する残留物をクロマ トグラフィ精製に付する。

残留物を１　ｍｌのＣＨＣＬ３：ヘキサ７（６５：３５）中に溶解させ、これを 、同じ溶剤でパックされ平衡化されたセファデックスＬＨ−２０カラム（０，７ Ｘ１４α）にかける。このカラムを同じ溶剤３６ｍｔで溶離させる。最初の１１ ｍｔを投棄し、次の２５ｍｔを収集し蒸発させる。

その残留物をヘキサン中の１（ＥＪ　２−グロバノール液中に溶解し、高速液体 クロマトグラフィー（モデルＡＬＣ／Ｇ　ＰＣ２０４高速液体クロマトグラフ、 クオーターズ　アソシエイツ、メトフォード、マサチューセッツ）Ｋ付す。この 高速液体クロマトグラフィーはシーパックス−８ＩＬカラム（４，６ｓｍＸ　２ ５１：ＩＩり　（デュポン社、ウィルミントン、プラウエア）を用い、１，００ ０　ｐｓｉの圧力下で流速２”ｔ／ｍｉｎとなるように操作して行う。収集した 生成物を、さらに、逆相カラム（リッチロソルプＲＰ−１８；４．６ｍＸ２５ｍ ｉイー、メルック、ダルムスタット西独）を用い、１，３００ｐａｉの圧力で操 作する高速液体クロマトグラフィーで精製した。混合溶剤Ｈ２０：メタノール（ ２２ニア８）で溶離した生成物を収集し、蒸発させ、シーパックス−８ＩＬカラ ムとして、上述のものを用い、上記と同様の条件下で再度クロマトグラフィに付 した。再循環を２度行い、精製物質を物理的同定用に得る。

この化合物はビタミンＤの典型的な、２６５ｎｍにおける最大吸収と２２８ｎｍ Ｋおける最小吸収を持つことが９５チエタノール中におけるベックマンモデル２ ４記録スペクトロメーターで決定された。これらのデータは５．６−シス−トリ エン発色団の存在を示す。

この生成物の質量分析によれば１．２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミ ンＤ３について要求されるｍ／ｅ４３４　Ｋおける分子イオンと１ないし２分子 の水の脱離を表わすｍ／ｅ４１６と３９８におけるフラグメントイオンを含む。

全ステロイド側鎖の損失（Ｃ１７／Ｃ２０結合の開裂はｍ／ｅ３０５の開裂片を 生じ、これは、水１分子ないし２分子の脱離によってｍ／ｅ２８７と２６９のピ ークを立ち上がらせる。このスペクトルはまたｍ／ｅ１７０（環Ａ＋Ｃ６＋Ｃ７ ）におけるまさに特徴的な開裂片を示し、それは水の脱離によってｍ／ｅ１５２ におけるピークを与える。一方、別のＨＦの脱離はｍ／。

１５０におけるピークを与える。さらに加えて、このスペクトルは、Ｃ２４／Ｃ ２５結合の開裂から生じ、イオ７　（（ＣＨ３）２Ｃ＝　ＯＨＫ対応するｍ／６ ５９　ｉｃおけル目立ッた開裂片ピークを示す。前記イオンの存在は２５−ヒド ロキシル化ビタミンＤ化合物に特徴的なことであり、それ故、２５−ヒドロキシ 基が得られた生成物中に存在することを確認させる。これらのデータは、１α− ヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ、の酵素的ヒドロキシル化によって得ら れた生成物は１α、２５−ジヒドロキシ−２β〜フルオロビタミンＤ３であるこ とを立証している。

前述のビタミンＤ誘導体、１α、２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミン Ｄ３は適当な溶剤又は溶剤系例えばエタノールからの再結晶によって容易に結晶 形で得られる。１α、２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ３のアシ ル化誘導体はこの技術分野においてよく知られている如く、その化合物をアシル アンヒドリド又はアシルハライドによるアシル化することによって調製できる。

このようにして１α、２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ３をピリ ジン中無水酢酸と室温で反応させて１，３−ジアセテート誘導体を得るが、昇温 下（６０〜１００℃）の反応では対応の１．３．２５−　）リアセチル化化合物 を生じる。さらに１このトリアジル誘導体のアシル基のあるものを選択的に加水 分解して他の部分的アシル化生成物を得ることも可能である。例えば、１α、２ ５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ、−２５−モノアセテートを塩基 性加水分解（ＫＯＨ／ＭｅＯＨ１３０〜５０°、１〜２　ｈｒ　）は、Ｃ−１及 びＣ−３に異なるアシル基を導入するためにアシル化することができる。このよ うＫ、アシル化及び／又は加水分解反応の組合せＫより、種々の部分又は完全ア シル化誘導体であってアシル基が同じ又は異なるものが得られることは明らかで ある。

生物学的活性 この新規類縁体の生物学的活性は、ラットの生体分析によって立証することがで きる。雄の乳離れさせたラットに低カルシウムビタミンＤ−欠陥食餌（Ｊ、　Ｎ ｕｔｒ。

１００．１０４５〜１０５２．１９７０　）を３週間食べさせた。それからそれ をそれぞれ５〜６匹のラットからなる３グループに分ける。コントロールのグル ープのラットには０．０５ｍｔの９５チエタノールを頚静脈的注射によって与え る。第２のグループのラットには１α、２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビ タミンＤ３（１α、２５−（０Ｈ）２−２β−Ｆ−Ｄ３）を０．０５ｍｔの９５ チエタノールに溶解したものを６５０　ｐ　ｍｏｌｅの量同様の方法によって投 与し、第３のグループのラフ）Ｋは、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ １α、　２　ｓ　−（ＯＨ）２Ｄ３　）の６５０ｐｍｏｈ量を比較の目的で注射 した。投与２４時間後、腸カルシウム輸送と骨カルシウム流動化（血清カルシウ ム濃度の上昇によって測定）に対するテスト化合物（１）作用をマーチンとデル −力の分析手法（Ａｍ、Ｊ。

Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２１６．　１３５１〜１３５９　（１９６９））及びタナ力 らの手法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１４．３２９３〜３２９６　（１９７５ ））によってそれぞれ決定し、次の結果を得た。

１α、　２５−（ＯＨ）ｚ−２β−Ｆ−Ｄ３の生物学的活性Ｅｔｏｎ（コントロ ール）３．４±１．０”−’　４．３十０．１ｄ１α、　２５−（０Ｈ）２−２ β−Ｆ’−Ｄ、６．０±０．６ｂ５．１±０．４゜ｌα、２５−（０Ｈ）２Ｄ３ 　５．３±０．９ｃ　５．］ｆＯ，３゜来平均の標準偏差 差の有意性：　ａからｂ　Ｐ＜０．００１ａからｃ　ｐ＜ｏ、ｏｉ ｄからｅ　ｐ（０，００１ 上記のデータは１．２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロ−ビタミンＤ３は腸内 及び骨中のいずれにおいても活性であること、さらＫ、この新規化合物は、既知 のビタミンＤ３活性代謝物質の中では最も活性なものと考えられる１α、２５− ジヒドロキシビタミンＤ３と少な（とも同じ程度の効力を有することを示してい る。

１．２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ。

は無菌の非経口的溶液として注射又は静脈内に、経口投薬として消化管によって 、又は生薬として容易に投与される。１日０．１βｇ〜約２．５μｇの投与量が ビタミンＤ様活性の特性である生理学的カルシウムバランス応答を得るのに有効 であると考えられ、維持投与量は約０．１βｇ〜０．５μｇが好適である。この 化合物の投与形は、この分野における周知の非毒性の医薬的に受容できる担体と 組合わせること罠よって調製できる。そのような担体は液体又は固体でもよく、 例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ビーナツツオイル、オリー ブ油、ゴマ油、水などが用いられる。もし固体の担体が用いられるなら、この発 明の化合物の投薬形は、タブレット、カプセル、粉末、トローチ又は菱形錠剤と なる。もし液体担体を用いるなら、ソフトゼラチンカプセル、シロップ又は懸濁 液、エマルジ曹ン又は溶液が投薬形となるであろう。この投薬形はまた、保存剤 、安定化剤、湿潤又は乳化剤、溶解促進剤などの補助剤を含んでいてもよい。そ れはまた、他の治療的に有効な物質を含んでいてもよい。

投与量の範囲を示したが受容者に対する個別の投与量は治療する病気の特定の状 態、特別の場合にめらる最終結果及びそのよ５な医薬剤の治療的用途において当 業者に知られる他のファクターによって違ってくるであろうということは理解さ れるべきである。

田Ｂａ調査報告

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. １．　次式で表わされる化合物。 （式中Ｒ，Ｒ，及びＲ２の各々は水素及び１〜約６個の炭素原子を有するアシル 基からなる群から選ばれるものである。）
2. ２．１α、２５−ジヒドロキシ−２β−フルオロビタミンＤ３゜ ３、結晶形である請求の範囲第２項記載の化合物。