JPS5830668A - 癌関連糖側鎖の定量法及び癌の診断法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は鴫乳動物の体液中の癌関連ｍｉ１鎖（以下、Ｔ
ＡＧと称する）、すなわち、未分化細胞、特に７１１優
や癌細胞の増殖に伴って増加するガラクトース−（β１
→３又は−β１→４）−Ｎ−アセチルグル；サミン末端
又はガラクトース−（β１→３又はβ１→４）−Ｎ−ア
セチルガラクトナンン末端を肩する糖蛋白、纏ベプタイ
ド、婁脂質又は（及び）ＩＩＩを含むＴＡＧを定量する
方法並びにこのＴＡＧを定量することによって癌を、＃
断する方法に関する。

従来、癌を診断する方法として、癌患者において％異的
に産生される轡異糖歳白を一定する方法が行われている
。仁の方法は主としてそＯ壷白部分の抗原性を利用する
方法で、例えばαｌ−フェトプロティンの測定による酸
発生肝癌の診断、あるいはＣＥＡの＄ｌｌｊ定による消
化器系、籍に直ｌＩｋ勅の診断等が知られている〔医学
のあゆみ；１０６巻、５号、第５±＃１％系、２３５〜
２５０頁（１９７８年）〕。しかし、これらの方法は瘤
の種類が比較的限られている欠点があ抄、広範な棟如の
癌の診断法が望まれている。

ところで、これまで、崩関連ＩＩ餉鎖のＳ残基結合特異
性を利用する尚の診断法については、未だ知られていま
い。

本発稠者は、舶患者の体液中には、未分化細胞（３：と
じて癌細胞）によって産生され体液中に放出されるＴＡ
Ｇが存在すること、しか屯これは分化細胞（主として正
常細胞）によって放生され体液中に放出される糖構造と
はそ０１！鑓部分の構造、長さ、構成糖残基にかなりの
違いを有していることに着目し、鋭意研究をｌね九結果
、このＴＡＧはガラクトース−（β１→３又はβ１→４
）−Ｎ−アセチルゲルコサ電ン末端又はガラクトース−
（β１→ｓ又はｐｘ→４）−Ｎ−アセチルガラクトサミ
ン木端を有するＳ嶽白、纏ペプタイド、１１Ｍ！！質又
は（及び）Ｉｍ＠を含み、このＴＡＧはレクチンと特異
的に結合すること、従って体液中ｔ）　ＴＡＧをレクチ
ンと反応せしめてこれを軸足することによりＷ１ｉｔｔ
＋胞の有無、増殖度合、消長等を知り、これによって癌
を―断することこができることを見出し、本発明を完成
し友。

従って、本発明は、体液中のＴＡＧ　を−合法又Ｆｉサ
ンドイッチ法で測定する方法、並びにこれによって癌を
診断する方法を提供するものである。

本発明の目的は次に示す何れかの方法によって達成され
る。

■　測定しようとする体液中０ＴＡＧ（以下、測定物質
と称する）と、一定量の不溶化されたＴＡＧ又はＴＡＧ
様物質（以下、不溶化ＴＡＧ　、不溶化ＴＡＧ様物質と
称する）とを、標識剤で―臓されたレクチン（以下、Ｉ
Ｉｆｉ＆レクチンと称する）の一定量と競合反応させ、
次いで不溶化ＴＡＧ又は不溶化ＴＡＧ様物質とｓｉ繊レ
クチンとの結合体及び非結合標識レクチンを分離し、そ
の何れか一方の標識剤活性を測定して測定物質を定量す
る。

（２１）軸足物質と一定量の１ｓ識剤で標識されたＴＡ
Ｇ又ＨＴＡＧ様物質（以下、標識ＴＡＧ、標臓ＴＡＧ　
ｌ！動物質称する）を、一定量のレクチン又は不溶化さ
れたレクチン（以下、不溶化レクチンと称する）と競合
反応させ、次いで標＊　ＴＡＧ又は４Ｉ賊ＴムＧ様物質
とレクチン又は不溶化レクチンとの結合体及び非結合標
＠　ＴＡＧ又は纏織ＴＡＧ様物質を分離し、その何れか
一方の標識剤活性を測定して測定物質を定量する。

■　軸足物質と不溶化レクチンとを反応させてＴＡＧ−
不溶化レクチン複合体を形成させ、この修合体に標識レ
クチンの一定量を反応させ、次いで被合体と標識レクチ
ンの結合体及び非結合標識レクチンを盆離し、その何れ
か一方の標識剤活性を測定して測定物質を定量する。

本発明で使用される体液としては各棟の体液が使用でき
、例えに血液、細胞組減液、リンパ液、脚本、腹水、羊
水、角波、尿、膵液、髄液、ｌ！Ｉ！液等が挙けられる
が、就中特に血液を血ｆＩＩｔたけ血漿として使用する
のが好ましい。定量に用いられる体液の量は１〜１〇−
一度好ましくは２〜５−程匪採埴すれによい。

この体液は、更に精製して、糖蛋白、糖ペプチド、糖脂
質又は（及び）糖類等の糖側鎖を含んだ物質を分離して
使用してもよい。

体液からｍｗ鎖を多く含んだ物質を得る方法としては、
既に公知の糖側鎖の抽出又は分離手段、例えば塩析、沈
澱、抽出、遠心分離、透析、分子−法、酵素の失活ある
いはこれらを適宜組合せる方法が使用される。更に詳細
には、例えば血清又は血漿にスルホサリチル酸、トリク
ロロ酢酸、懺酸亜鉛を添加するか、加熱彼沈赦物を１去
する方法によってアルブミン、免疫グロブリン等を除去
し、次いでこ−れを透析することによって当該分画を１
１１＃する。

本発明の定量法において、採取された体液のうち、血液
以外のものはそのまま被検試料（以下「試料」と略記）
として用いることができるが、試料が変性することを防
止し、かつレクチンとの反応を促進させる丸めに、保ｍ
ｆｉ白として、牛血清アルブミン（ＢＳＡ　）等の低級
楯含有物をもった蛋白を加えて屯よい。

史に試料からアルブミンや免疫グロブリン等を除去した
後、適尚量の保ＩＩ蛋白を加えるのがよい結果を与える
場合がある。また特に、血液の場合は公知の血清採取法
によって得られ友血清、あるいはヘパリン、Ｅｌ）ＴＡ
、クエン緻等の抗凝固剤を用いる血漿採堆法によって得
られ良皿漿を試料として用いることができるが、特にヘ
パリンを抗凝固剤として用いて採取１ｉ１１１Ｌ九血漿
を試料とするのが好ましい。ま九、上記試料は、腹水症
尋のＴＡＧレベルが相対的に高い場合には、必要ならは
適当な緩衝液で希釈してもよい。

まえ、本発明で使用されるレクチンは、ガラクトース−
（β１→３又はβ１→４）−Ｎ−アセチルグルスサミン
又はガラクトース−（β１→３又はβ１→４）−Ｎ−ア
セチルガラクトナミンと特異的に結合するも１０　（Ｊ
、Ｂ。

Ｃ，２５０，８５１８〜８５２３（１９７５）；　Ｂｉ
ｏｅｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、６２
　＊　１４４（１９７５）　；　Ｚ、Ｉｍｍｕｎｉｔａ
＠ｔｓｆｏｒｃＬ　１３８゜４２３〜４３Ｂ　（１９６
９）　；Ｂｒ、Ｊ、ＦａＰ。

Ｐａｔｈｏｌ、２７．２２８〜ｇ３６（１９４６）；　
Ｐｒｏｓ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、８ｅｉ、　ＵＳＡｓ　
７５　、　？Ｊａ　５　ｅ２２１５〜２２１９　（１９
７ｇ　）　；　Ｂｉｏｅｈｅｍ−１１ｔｒ７１３−１９
６〜２０４（１９７４）；Ｃａｒｂ＠ｈｙｄｒａｔ＠Ｒ
＠ｓ＠ａｅｈ　＃　５１　ｅ　１０７　％　１１８、　
　　□ （１９７６））、例えばビーナツツレクチン、ひまの央
（Ｒｌｃｌｎｕｓ　Ｃｏｎｍｕｕｉｍ　）レクチン等が
挙けられる。

レクチン標識物質としては、谷種酵累、各櫨螢光物質及
び各種放射性物質等を事けることができる。酵素として
は、例えばグルコアミラーゼ、グルコースオキシダーゼ
、パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガ
ラクトオキシダーゼ又はヘムオクタペプチド等の酵素の
活性フラグメント等が：螢光物質としては、例えｔｉフ
ルオレセイン、フルオレセインスイッチオシアネート、
！−ダミン、ダンジルクロライド（すなわち、５−ジメ
チル゛アミノ−１−す７タレンスルフオニルクロライド
等）等が：放射性物質としては、例えｉｊ、１１１１％
１ｌｌｉ等の放射性ヨウ素う放射性トリチウム等が挙け
られる。

本発明において、ＴＡＧ様物質とは、ガラクトース−（
β１→３又はβ１→４）−Ｎ−７セチルダルコサミン、
ガラクトース−（β１→３又はβ１→４）−Ｎ−アセチ
ルガラクトサンン又は該糖鎖を末端に有する糖誘導体を
指体する。このようなＩＩ鰐導体としては、例えｉ＋′
［生化学データブックＩＪ、日本化学会編、東京化学−
人発行、１９７９牛１１月２６日発行、第５０３〜５１
０頁に記載のヒト冑ムチンの糖蛋白、ブタ胃粘膜の硫酸
化糖蛋白の末端７コースを除去し九糖蛋白、ヒトＩｇＧ
のｓｆｉ日又はそのアジア−ｅ導体、ウシＩｇＧＯ糖蛋
白、プタチロダａプリン糖鎖Ｂの糖蛋白のアシアロ誘導
体、オボムコイドのβ−サブユニットの糖蛋白、ヒトＩ
ｌｌの糖蛋白Ｈ−１又はそのアジア−誘導体、ヒトＩｇ
Ｅの糖蛋白Ｂ−２、Ｂ−３及びヒト１ｇ人１の糖蛋白量
−Ｃのアジア−誘導体、ヒトＩｇＡ１の糖蛋白１１−Ｂ
、Ｉｔ−Ａのアシアロ誘導体、ヒトトランスフェリンの
糖蛋白のアジア−Ｉ導体、牛フェツインＯｓｔ蛋白のア
シアロ誘導体、ウサギ肝細胞原形質膜のアシアロ糖蛋白
のとり込みに関与する糖蛋白の脱アシアロ体、ヒト鰺血
球膜の＊蛋白のアジア票訪導体、ブタ胃粘膜硫酸化１１
！白、ヒトα１敗性糖蛋白のアシアロ誘導体、グリコフ
ォリンのアジア−ａ導体、Ｔ−抗原等の糖蛋白又は糖ペ
プチド；及び四文献の第８４０〜８４１頁に記載のアシ
アロＧＭｔ＝Ａに、牛の赤血球等の糖脂質が挙けらする
。就中、牛フェツインの糖蛋白のアジア−誘導体、ブタ
胃粘膜の硫酸化糖蛋白、ヒト冑粘膜硫酸化糖弧白又はヒ
トαｌ酸性糖蛋白のアシアロ酵導体が好ましい。

不済化ＴＡＧ、不溶化ＴＡＧ様物質及び不溶化レクチン
は、ＴＡＧ％ＴＡＧ　ＩＩ物質又はレクチンに年齢性担
体を化学的又は物理的に反応させることによ抄製造され
る。不溶性担体としては、セルロース粉末、セファテッ
クス、セファロース、ポリスチレン、１紙、カルボキミ
メチルセルロース、イオン交換樹脂、テキストラン、プ
ラスチックフィルム、プラスチックチューブ、ナイロン
、ガラスピーズ、絹、ポリアミン−メチルビニルエーテ
ル−マレイン欧共夏合体、アンノ酸共１合物、エチレン
−マレイン酸共重金物等が挙けられる。不溶化は、共有
結合法としてのジアゾ法、ペプチド伝（−アミド鋳導体
法、カルポキシク■リド情脂法、カルボジイミド樹脂法
、無水マレイン＃１！銹導体法、インシアナート誘導体
法、失化シアン活性化多棚体法、七ルロースカルボナー
ト篩導体法、−合試薬を使用する方法）、アルキル化法
、栄ｆｌＩｆＩｌ：薬による重体結合法（架−橋試薬と
してグルグルアルデヒド、ヘキサメチレンイソシアナー
ト等を川伝る）、Ｕｇｉ反応による担体結合法等の化学
的反応；あるいはイオン交換樹脂のよう１に担体を用い
るイオン結合法；カラスビーズ等の多孔性ガラスを担体
として用いる物理的軟着法によって行われる。この中で
、共有結合法の臭化シアン活性化多塘体法及び果倫ＫＩ
ＩＩ＆による担体結合法が好ましい。臭化シアン活性化
多糖体性によれば、ＴＡＧ等に対して臭化シアン活性化
担体ｌＯ〜１０００倍量を用いて、適当な溶媒中０〜４
０℃、好ましくは２０〜３０℃で２〜４時間反応させる
仁とによって不溶化ＴＡＧ　。

不溶化ＴＡＧ様物質、不溶化レクチンを得ることができ
る。

ま九、不溶化ＴＡＧ等は、放射性重合法によっても製造
することができる。すなわち、ＴＡＧ等を富む１合一単
量体の水性分散液をｗＩ４製し、これに光又は電離性放
射−を照射して該単量体を重合してＴＡＧ等の１合体マ
トリックスを調製する。そして、この水性分散液をＩＩ
ＩＩｌ製する中波として、疎水性の東合性単量体巨〕を
水溶性１合体（Ｂ）　０．１〜５重量重量Ｘ溶水溶液散
させる、あるいは疎水性の重合性単量体［Ａ］と親水性
の重合性単量体（Ｃ）との混合物を３〜２０重量％の食
塩水溶液に分散させる、あるいは疎水性の重合性単量体
［Ａ］を界面活性剤ＣＤ）０．０１〜５Ｘ１％含む水溶
液に分散させる、あるいは、重合性単量体（Ｃ）を単独
で水溶液に分散させる。この上うにして得られ要分散液
に光または電離性放射線を照射する時、分散質として存
在する重合性単量体は重合してＴＡＧ等の重合マトリッ
クスを形成する。必要ならば適当な手段で、シート状又
は粒状に形成することができる。ここで疎水性の重合性
単量体匡〕の具体例としては、グリシジルメタクリレー
ト、エチレングリコールジメタクリレート、ジエチレン
グリコールジメタクリレート、トリエチレングリ；−ル
ジメタクリレート、トリメチロールプロ／くントリメタ
クリレート、ポリエチレングリコール２００ジメタクリ
レート、ジプロピレングリコールジメタクリレート、１
．４−ブチレングリコールジメタクリレート、１．６−
ヘキサンゲリコールジメタクリレート、メトキノジ１チ
レングリプールジメタクリレート、メチルメタクリレー
ト、エチルメタクリレート、ブナルメタクリレートもし
くはそれらのアクリレートがある。一般的には水に不溶
の単量体で光もしくは放射＊＊射によって重合する物質
であればそＯ種１１ｉ輪問わない。

親水性の重合性単量体〔Ｃ〕の具体例としては２−ヒド
ロキシエチルメタクリレート、メトキシテトラエチレン
グリコールメタクリレート、メトキシポリエチレングリ
コール４００メタクリレート、メトキシポリエチレング
リコール１０００メタクリレート、ポリエチレンクリコ
ール４００ジメタクリレート、ポリエチレンクリコール
６００ジメタクリレート、メタクリル酸、アクリルアミ
ド、Ｎ−ビニル−２−ピロリドンもしくはそれらのアク
リレートがある。一般的には水に可溶な単重体で、かつ
光もしくは放射線照射によって重合する智賀′Ｃあれば
その樵顛は問わない。

水幡性の重合物ＣＢ）の具体例としては、ポリビニルビ
四リドン、ポリメタクリル酸、ポリアクリル龍、ポリビ
ニルアルコール、ヒト０ロキシプロピルセル賞−ス、ア
ラビアゴム、などを例示することができる。

界面活性剤ＣＤ）の具体例としてはラウリル硫酸ソーダ
、オレイン駿カリ、オレイン酸ソーダ、ソルビタンモノ
ラウレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタン
モノオレエート、プロピレングリコールモノラウレート
、オレイン酸、ドデシルベンゼンスルフォン敵ソーダ塩
などを例示することができる。しかし、それらのミセル
の中に重合性単量体もしくは重合性単重体中に溶解して
いるＴＡＧ等がとりこまれるならば、その種類は全く問
わないＯ 放射性物質線繊ＴＡＧ、同標鐵ＴムＧ様物質及び同ｌ１
ｌＩＩＩレクチンは、上に２ＴムＧ等に例えば−ｌｌ＆
ｉ％１ｍムＩ等の放射性ヨードを導入することによって
喪透される。放射性ヨードの導入は、通常のヨード化法
、例えばりａラミンＴを用いる酸化的ヨード化法（Ｎａ
ｔｕｒｅ　１９４　ｓ　４９５頁（１９６２）、Ｂｉｏ
ａｈ＠ｍ、Ｊ、　８９　、１１４頁（１９６３））によ
って行われる。すなわち、過轟な溶媒、例えばｐＨ６〜
８の酸９ＩＩ液、好ましくは０．２Ｍリン＃ｌ嶽衡ＩＩ
　（ｐＨ７）中で、クロラミンＴＯ存在下、室温付近に
て５〜６０秒行われる。使用される放射性ヨード及びり
關ラミンＴは、上記ＴＡＧ等に含まれるチロシフ分子１
ナノモルに対し、大々１〜５ンリキエーリー、１０〜１
００ナノモルが好ましい。

このようにしてｗ誠され丸棒ＩＩＩ　ＴＡＧ等は通常の
方法で単＃１棺製し、必要ならば凍結乾燥ゝして保存し
ておく。

酵素確ＩＩ！　ＴＡＧ　、同４１織ＴＡＧ様物質及び−
標識レクチンは通常のカップリング法、例えばＢ　、Ｆ
　ＪｋＬＬＡＭＪＲら〔ムｅｔａ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ
ｌ　、５ｕｐＰ１゜１６８．２０６（１９７２））及び
Ｍ、Ｈ。

ＫＡＲＯＬら（Ｐｒｏｅ、Ｎａｔ、Ａ＠ａｄ、Ｓｃｉ、
ＵＳＡ、　５７　ｅ７１３（１９６７））の公知の方法
によって製造される。すなわち、　ＴＡＧ等と酵素をＮ
ａｌ０ａ等の酸化剤の存在下、ｐＨ４−６の緩衝液、例
えｌｄ　１　ｍＭ　Ｉｎ　ｇ１２緩衝液（ｐＨ４，４）
中で、富温付近で２〜５時間反応させ、次いでＮａＢＨ
４等で慮元することによって行われる。酵素はＴＡＧ等
１等身モルして１〜３モル量用いる。

酸化剤はＴＡＧ等の１００〜３００倍峰ル、還元剤は皺
化剤の１〜２倍モルが好塘しい。

螢光物質標識ＴＡＧ　ｓ同橡識ＴＡＧ様物質及び同Ｗ＊
レクチンは、公知の螢光物質、例えばフルオレツセイン
イソチオシアネー）　（ＦＩＴＣ）、二 テトラメチローダンンインチオシアネート（ＲＩＴＣ）
等を、ｐｎ　６〜８の水又は生理食塩水中、０〜室温、
好ましくは室温にて、ＴＡＧ等と０．５〜３時間反応さ
せる（螢光抗体法、医化学実験法−座、Ｎｎ４．２６３
〜２７Ｇ員）。

使用する螢光・物質のｋはＴＡＧ等の１０００重量が好
ましい。

次に、本発明の競合法及びサンドイツチ法による測定法
をｍ明する。

両方法と吃に、反応は過当な溶媒中、４５℃以下、好ま
しくは４〜４０’Ｃ１ＩＫ好ましくは２０〜４０℃の温
度で行われる。該溶媒として社、ＴＡＧ％ＴＡＧ　ＩＩ
物質とレクチンの反応に愚杉響・を与えないもの、例え
ば水、生埴食埴水、０．１〜０．３ＭＩＪスー塩瞭緩塩
液緩衝液？７．５）、０．１Ｍリン除緩衡液（ｐＨ’ｑ
７．４）等のｐＨが６〜７．８の緩衝液が好ましい。反
応時間は５〜４０時間、好ましくＦｉｉｓ〜２５時間で
行われる。

反応によって住成し＊　ＴＡＧ　（ＴＡＧ　様物質）−
レクチン結合体と未反応レクチン又はＴＡＧ（ＴＡＧ様
−ｊ（）との分離は自体公知の方法によって行われる。

すなわち、不溶化ＴＡＧ（ＴＡＧ様物質）、不溶化レク
チンを使用したときは、同相と液相會分離（遠心分離、
ｆ別、デカンテーション）スればよく、他の場合には、
クロマト法、電気泳動法、塩析法、分画法、透析法、ゲ
ル口過、吸着済等、もしくはこれらの方法を組合せ良友
法、あるいは練大ゲル、アガロースゲル又はポリアクリ
ルアミドゲルを用いる分離法（不発明者；ｗｂ昭５４−
５９：１８８号）も利用できる。

斯くして分−されたものの欅織剤活性は、その４ｍ１１
１１剤の麺類によって適宜適訳される。

例えば酵素の場合には、比色分析糸、発光分析系あるい
は螢光分析系の適当な酵素基質を選び、必要ならは色寓
、発光剤又は発色剤を用いて＃素活性を測定することに
よ抄、ま九４ｓ繊剤が螢光物質であれ＃ｉ七の螢光強度
を、放射性物質であればその放射＊を測定することによ
り、反応又、Ｆｉ’未反応のＴＡＧ、　ＴＡＧ様物質又
はレクチン量を測定し、これから測定物質量を求めるこ
とができる。

叙上の如く本発明によれば体液中のＴＡＧを有利に足置
できる。そしてこのＴＡＧ量を知ることにより初期から
末期の何れの癌も診断することができ、特に癌の早期発
見に極めて有用である。さらに本発明方法は５ｉｌｌ鎖
を測定しているので、従来の主として蛍白部分を測定し
九抗体利用系（α１−フエトプ四ナイン、ＣＥム等）よ
り広い［囲で、何れの癌、例えに両部、乳癌、結＆ｌＩ
＃ｈ％直腸勅、卵果砺、口腔崩、舌勅、＠頭痛、前立腺
癌、脂肪両膝、恋社黒色腫、子宮婚、ｌ＃原発肉腫等の
勅の＃新法にも利用できる。

ま九本発明方法によるＴＡＧ量の測定は尚疾患に対して
峙＾的であり、瘤以外の疾患、例えに１冑炎、腸炎、潰
瘍、すい炎、糖尿病、ネフロージス、膀胱貞、尿管結石
症、胆のう炎、胆石、膠原病、脳軟化症、卒中、狭心症
、６緘機能不全、心筋梗塞、高血圧、動脈兼、うつ病、
アレルギー性鼻炎、紫斑病、肺炎、肺気腫、気管支炎、
喘息、急・慢性肝炎等とは交差しない特徴を肩する。

籍に本発明方法は、再現性に優れ、高い摺度で体液中の
ＴＡＧ　ｔ”　１１定することができ、挺に操作が簡便
である特徴を有する。

更にまた、本発明によれば、ガラクトース−（βｌ→３
又はβ１→４）−Ｎ−アセチルグルコサミン又はガラク
トース−（β１→３又はβ１→４）−Ｎ−アセチルガラ
ク）ｔｔン及び該糖鎖を末端に有するｍ＠、棚ペプタイ
ド、糖蛋白、糖脂質、塘テルペン、糖ステシイド等ＯＩ
Ｉｗｊ導体を定“ｌすることもできる。

以下実施例を挙けて説明する。

実施例１ （１）　　ペルオキシダーゼの活性化：ベルオキシダー
−ＩＩ／（西洋わさび）５ＷＩｇを０．３Ｍ縦縦木水素
ナトリウム水溶液１−溶解した。これＫ　Ｏ，Ｉ　Ｍフ
ルオロジニトｐベンゼンエタノール溶液０．１ｍｇを加
え、室温で１時間静かに攪拌後、０．０６　Ｍ　Ｍａｒ
０４ｍ　１１１　ｍｌ　を加え室温で３０分間靜がに攪
拌した。更ＫＯ，１６Ｍエチレングリコールｌ−を加え
室温で１時間静かに攪拌し喪。次いで０．０１Ｍ炭績−
炭敵水素ナトリウム緩衝液（ＰＨ９，５）を用いて４℃
で一昼夜透析した。

（Ｉｌｌ　　レクチンのペルオキシダーゼ４１１ｉ１１
１ｆｆｉ（レクチン・・ペルオキシダーゼ）： ■　ビーナツツレクチン５岬を（：）で得良活性化ペル
オキシダーゼ３ｓｆＫ溶がし、評がに攪拌しながら室温
で２〜３時間反応させ友。これにＮＪＬＨＨ４５”ｆを
加え、４℃で３時間反応させた。次いでこの溶液を０．
１Ｍ）！７スー塩酸綾爾液（ｐＨ７，４）に対して一昼
夜透析し、セファデックスＧ１５０グルカラムクｐマド
グラフイー１出液；０．ＩＭ）リス−塩＃に嶽衝［、Ｐ
Ｈ７，４）でケル０過を行った。各分画をＯＤｍｓ会、
０Ｄａｏｓで測定し、ｏＩ）１ｓｅとＯＤ４＠ｌの１な
るピークを集めた。

■　■で得喪レクチンーペルオキシダーゼ２゜―をガラ
クトースーアガｐ−ス（ＡＧＡＬＡｃＴＯＰＹＲＡＮＯ
８ＹＬ　　ＡＧＡＲＯ８Ｅ■；　Ｐ、Ｌ、Ｌａｂｌ、Ｌ
ＪａＡ　）に付し、生理食塩水２ｏｏｓｇで洗浄した。

０．５ＭＯ″＞クトースを含む０．２　Ｍ食塩水にて溶
出し％　ＯＤｓ・・とＯＤ４・畠の重なる最初の１０ｓ
ｄを集めた。この分−を生理食塩水に対して一昼夜透析
して精製レクチン−ペルオキシダーゼｔ−得た。飯日量
をＬｏｗｒＦ法ＣＪ、ｂｌｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍ、
、Ｖｏｌ　１９３　、２６５頁（１９５１））で一足し
たところ約１ｑであった。これは、凍結乾燥した。

（Ｉｌｌ）　　不溶化レクチンの製造法（ＰＮＡ−アガ
ロースの製造Ｖ：）： ＣＮＢｒ−活性化アガロース１５Ｐを３ｔ。

０．００１Ｎ塩酸にＪＩｉ濁し、３０分間靜装し良後ガ
ラスフィルター上で、０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム（ｐ
Ｈｇ、５）ｔｚで洗浄した。全体で約５０−の容量−の
活性化アガロースが得られた。

これを０．１Ｍ炭酸水嵩ナトリウム（ｐＨ８，５）２０
Ｇ−にＳ淘し、ピーナツレクチン（以下ＰＮＡと略称す
る）５０ｑを含む０．０１Ｍりンー塩１ｉｋ衝ｔ（ｐＨ
７，７）ｓ−を加え、室温で時々攪拌しながら２時間反
応させ喪。反応後、反応液をガラスフィルター上で洗浄
し、反応物を１モルのモノエタノールアミン溶１［２０
０ｓａｇ（ｐＨ８，５）に加え、室温にて２時間反応し
た。次いで、ガラスフィルター上で洗浄し喪。

洗浄法としては、０．１Ｍ１ｍｍ価液（０，５ＭＮｈＣ
，Ｌを富む）１ｔと０．１Ｍホウ酸緩＠箪（０，５ＭＮ
ａＣ１ｔｔむ）１ｚで交互に３回洗浄した。

Ｏｗｌ　　ＴＡＧ様物質の製造法： ■　０．０５Ｍりン鍛塩緩衝［（ＰＨ７，０）　１００
ｍｇＫブタ冑粘＊ｉｉ＊化糖蛋白（以下ＰＧＭと略称す
る）ｉ　ｒＶｒｍ濁し、Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ２に溶液を滴
下してｐＨｌｌＫｌｌｇｋした。室温で３０分間攪拌後
、３０ＧＯｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄をＩＮＨ
ＣｔｉｌｌｔでｐＨ７，０に調整し、再び３０００ｒｐ
ｍで１０分間遠心分離した。上澄を０、０１　Ｍリン酸
塩緩衝ＩＥ（ＰＨ７，０）１０４に対して終夜透析して
精ｍｌ　ＴＡＧ様物質（ｆｆ製ＰＧＭ　）を得た。

ｔｇ　　１１１ＰＧＭ１００ＰｔＪｉ留水１　ｊ中Ｋｍ
、ｔ、−夜装置した。これを暮留水に対して一夜透析し
良後、遠心分離（１００，０００）Ｘ１時間）し、上置
をと抄、凍結乾燥して精製ＰＧＭ約５５Ｐを得九。

（ｖ）　　Ｉｌｇ　ａｌｌ　ＴＡＧ様物質の製造法：（
＆）　　酢素による標識（ＰＧＭ−ペルオキシダーゼ）
４１１のワサビのペルオキシダーゼ（１（ＲＰＯ）（０
，１μＭ）を蒸留水！−に溶解し喪。こねに０、１　Ｍ
　ＮａＩＯ４０，２−を加えて：！ｍｌにて２０分分間
拌し、１ｍＭ酔酸緩衝ｔ（ＰＨ４，４）に対して−Ｊｉ
ＴＬ＆析して未反応のＮａｌ０ａを除去し喪。この透析
反応１［Ｋｏ、２Ｍ疑酸水票塩緩衝液（ｐＨ９，５）を
約６０　Ｐａｔ嶺縦加えてｐＨ９、ＯＫ調整した。次い
で、ただちに０．ＯＩＭ漬酸水酸水塩緩責液（ｐＨ９，
５）Ｋ＃解し九ＰＧＭ（１０１１９７ｄ）Ｏ，＠−を加
えて室温で２時間混合し、４岬／−のＮａＢＨ＠蒸留水
溶蒸留水溶−０加え、４℃で２時間静置し良。東に０．
０１Ｍりン酸ＩＩｋ術液（ｐＨ７，２）　Ｋ対して一昼
夜透析後、セファデックスＧ−２００（１，５Ｘ１５０
ａｇ）にて溶出して精製ＰＧＭ　−ペルオキシダーゼ（
ＰＧＭ　−ＰＯＸ　）を得九。

ゲル溶出液は各々５−ずつ集め、各溶出液はＯＤｍｓ・
、ＯＤ４・１で吸収を測定し友。

（ｂ）　　アイソトープにょる機織（■皇Ｉ−ＰＧＭ）
：１１１ＪでクロランンＴを用いる酸化的ヨード化法に
てＰＧＭを標識する。

ＰＧＭ　１０　Ｐｔを０．２Ｍリン酸緩衝［（ｐＨ７，
０）５０μｍに棲解し、これＫｌｊリキニーリーｔ）　
Ｎａ”’　Ｉ　Ｃ無担体：　Ｎ、に、Ｎ　）　１０　ｐ
ｔとｌａ５をンＴ５０ｐｔ／１００ｐｔＯ，２ＭＩ）ン
ｆＩｔ壌緩衝液を加え１．室温で３０秒間混合後、Ｎａ
ｔ８ｓＯｉ　　ｌ　　０　０　　ＰＰ　／　　１　０　
０　　ｔｔＬ　　Ｏ，２Ｍ　　リ　ンー虻塩緩衝箪を加
え混合し、次いでＮａ”’Ｉｔｌキ加えて混合した。更
に得られ＆１”Ｉ　−ＰＧＭをセファデックＸＱ−１５
（）（ＩＸ３０５１）にて梢製し九。このようにしてＩ
ｉ＃製されたｌｌｌ　ｌ−ＰＧＭはｔｈｌは１〜２μＣ
１／　Ｐｔの放射性を有していた。

（ｖｉ）　　定量法 １０　Ｘ　７５　ｍｍのガラス管を用いて、前記（ｖ）
　テ得うれり１１暴Ｉ　−ＰＧＭ（１００ｎ？０．１７
μＣに２．４ＸｌＯ’ｃＰｍ）（３，１ｍｓ前記（−で
祷られた桔製砿準ＰＧＭ　（０，１ｎ７ｍ１．０．２１
１ｔ／ｍｌ、Ｏ−０−５Ｐｆ７、工ｐｔ／ｌ、　　２．
ｓ　ｐｆｆ／−１５／Ｊ）／ｄ、１０ｐ）／ｓｇ）０．
１ｓｄ、ＰＮＡ　（１Ｇ　１１ｔ／ｄ　）　０．１　ｍ
＞ｊび０．０５Ｍすｙ緻峨賛液（（Ｊ、１５　ＭＮａＣ
ｊ、　　０．１Ｘ　ＢＳＡ。

０、０２　Ｘ　ＮａＮｍ　）　０．２−を１合し、２５
℃でｌ時間インキエペートした。反応終了後、ＰＮＡに
結合した”’Ｉ　−ＰＧＭとＰＮＡＫ結合していない轟
”ｉＩ　−ＰＧＭＫ抗ＰＮＡ家兎血清（Ｅ、Ｙ。

ｘａｂＢａｔｅｒｙ社製：１０倍希釈液）ｏ、１−を加
えて２５℃で１時間イン今ユベートした後４℃、３０Ｇ
Ｏｒｐｍで３０分間遠心分離した。沈渣（ＰＮＡに結合
し九１冨ＩＩ−ＰＧＭ）のカウントを針側して標準曲線
を作成した（嬉１図）。

この結果から明らかな様に、通常Ｘ　Ｂｏｕｎｄ（Ｂ／
Ｔ）ｔｉＡｔ２Ｇ　〜２５％で、５０Ｘ阻−Ｗ軍は０．
６声ｔ／−であった。

←１か　不溶化ＴＡＧ様物質の調製： 過剰量のＰＧＭを０．０１ＭＩＪン酸塩緩衝液（ＰＨ７
，０）１０Ｇ−に加えて、−濁箪を調製した。このもの
ｉｃ　Ｑ、　ＯＩ　Ｎ　Ｎａ０１１渉淑を加えてｐＨを
約１１に１ｌｌｉｌ贅し、３０ＧＯｒｐｍで２０分間遠
心分離し上澄を回収し喪。この上澄にｏ、　ｏ　ａ　Ｎ
　ｋｆｃＬ　ｋ　ｍ　下しテｐＨ１７，０ＫＩＩＩＩＩ
ｉし、豊ひ３０００ｒＰｍで２０分１’＆ｌＩ遠心を行
表っ良。

上澄Ｖｒ０．０１Ｍリン酸塩緩衝［（ｐＨ７，０）に対
して透析したものをＰＧＭ溶液とじ九。このものの糖及
び飯白含量は、槍について社フェノールｉｉｍ法でグル
コースを標準としてヘキソースが５〜’Ｉｅ／ｗｔ、蛋
白はＢ８ムを確率として測定した結果１〜２ｗｑ／−で
あり、以下の放射−重合（ＲＩＰ　）　Ｋ供する。

放射−東合扛単量体としてヒドーキシエチルメメクリレ
ー）　（ＨＥ１１１Ａ　）と上記ＰＧＭ溶液を３８：６
７の割合で１合し、１５Ｘ１５〜２０ａｚのガラス管に
入れ、急ｉｌｌ　Ｋ　−７０’Ｃ以下に凍結した。次い
で１×ｌＯ・ｒｉｄ　ｔ）　ｒ　＠照射を行ない単量体
を重合した。各々の固定化されたＰＧＭ材料はこの重合
体の禅を１０〜ずつ切って１秋ずつのディスクとした。

（２）不溶化ＴＡＧ様物質の製造法： ■　ＣＮＢｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファリマレア
社製）１０（乾燥重量）を３ｔの０．０ＯＩＮ塩酸にｍ
ｅｅｔ、、、ｇｏ分ｍ靜を後、ａラスフィルター上で０
．１　Ｍ炭酸水素ナトリクム（ｐＨ８，５）ｚｚで洗浄
すると、約５０−容量の活性化セファ一−スが得られた
。これを０．１Ｍ＊歳水素ナトリクム（ｐＨ８，５）　
２００ｓｇＫＪ１１濁し、ＰＧＭＳ　０ｑｔｔｔｒ０．
０１ＭＩＪ　ン敞塩緩衝液（ｐＨ７，７）５ｗＪを加え
て、富温で時々攪拌しながら２時間反応させえ。反応終
了後、反応液をガラスフィルター上で洗浄し、反応物を
ＩＭのモノエタノールアミン＃液（ＰＨ８，５）２００
−に加え、室温にて２時間反応し九。次いでガラスフィ
ルター上で洗浄した。洗浄法としては０．１ＭＦｌＩ緩
衝１１１（０，５Ｍ　ＮａＣ１を含む）ＩＡと０．１Ｍ
ホウ酸緩衝濠（０，５Ｍ　ＮａＣｊ　ｔ　ｔむ）１４で
交互に３回行う。

（＠　　ホリＪ　？　ｖ　ｙビーズ（＠　径６．４　ｙ
ｍｍ　；Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　Ｐｌａｓｔｉｃ　Ｃｏ、
Ｌｔｄ、ＵＳＡ　）　１万個を希釈しぇｗ　？　Ｖ％７
■〔、イオｙ＠）、原液０．５−／１を蒸留水〕でよく
洗浄し、ＩＩ！Ｋ１１ｌｌ水で洗浄し友。次いでこれを
０．５Ｍ苛性ソーダ水溶液中に３日間浸漬し良後、洗液
がｐＨ約６に表るまで蒸留水で洗浄した。ｌ０Ｎ−荀性
ソーダ水溶液でｐＨ４，５に一整し九５０ｍＭ−軒酸緩
衝液の３５Ｗ／マ％ＰＧＭ溶液２．５ｔに上で洗浄し九
ビーズ１万個を加え、約１゜ｒｐｍで２４時間攪拌した
。ビーズをｆ”Ｍｌｌ、これ會亀貿水でよく洗浄し友（
８１Ｘ４）。

これをグルタルアルデヒドｌｖ／マ％の５０ｍＭ−リン
酸ナトリウム酸１１ｉｔ（ｐＨ７）２．５ｔに加え、１
０ｒｐｍで２時間攪拌した。ビーズをｉｌ’４ｊＬ、、
前記と同様にして蒸留水でよく洗浄した。このビーズ１
万個をＩＭ−グリシンの５０ｍＭ−リン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ２，０）・２．５１に加え、１０　ｒｐＨで
２時間攪拌し友。ビーズをＰ取し、□蒸留水でよく洗浄
し、３７℃で一夜乾燥してＰＧＭ−ビーズを得え。

このビーズの表面糖を０ｒａｉｎｏｌ−硫酸法ＣＭ、５
ｅｈｂ ３０９．１４５（１９５７））で測定したところ、２．
７±０．２μＰ　ＰＧＭ　／ビーズであつ友。

−被検試料の―製： 担癌患者、他の疾病患者及び健康人より、ヘパリン（５
００単位）処理し良注射器で５−の血ａｔ採取し、２０
００ｒ陣で１０分間遠６分ｍ健、七の上清をとり被検試
料とじ九。

実施例２ 競合法管用いる方法： ディスク（前記（ｖｍ）で−襞した不含化ＴＡＧ＠ｅｔ
！ＩＪＮ）１枚をＰＮムの結合し良ペルオキシダーゼ（
−１１（ａｔ）のψでｌｌ製し友−繊レクチン）５０μ
を及び試料（前記＆４の被検試料）２００μｔに入れ、
２５℃で２０４閤インキエペートした。そのディスクｔ
　ＰＨ１で洗浄し食塩水２．０−に入れ、ペルオキシダ
ーゼ物質０．５−を添加して２５℃で１時間インキュベ
ートした。次いで３Ｎ塩［１，０−を添加し、４９２ｎ
ｍで鉄光度を醐定し友。同時に前記試料を各１１鎖度の
標準物質（ＰＧＭ　）に変えて吸装置を側足して検量−
を作成した（第２図）。

更にこの検量Ｉｌを使用して前記（財）で得た被検試料
中のＴＡＧを求めた結果を第３１１！ｉｉ及び謳４図に
示す。

第３図及び第４図から明らかなように健康人と各種担癌
患者のＴＡＧレベルＫＪＩｉｌ著な差が見られた。

実施例３ サンドイツチ法を用いる方法： １μｆｅｄ−１０μｔ／−のＰＧＭを溶解した０、０５
Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）　１００ｐｔに前記（
ｉｌｉ）　ｆ　ｉｌｉ製し九ＰＮＡ−７１ｊ　ａ　−ｘ
２００　ｐｆを加え、２５℃で攪拌下、１時間インキュ
ベートし友。次いで０．０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７
，０）で３回洗浄後、実施例１（跪）の■テ＠喪ペルオ
キシダーゼで１ｓ敵したＰＮＡ６μ？及び０．０５Ｍリ
ン酸塩緩衝ｆｆ１（ｐ）ｆ７．０）１００　Ｐｔを〃■
え、攪拌しながら２５℃で１時間インキュベートした。

３．００Ｏｒｐｍで１０分間遠心分離した後、沈渣を回
収し、０．０５Ｍ　ＩＪン敏基塩緩衝液ｐＨ７，０）で
３回洗浄し、４９２　ｎｍで銖光簾を測定した。その結
果を第５図に示す。

実施例４ −合法を用いる方ｆｒ： 試料（ｍ紀（−の被検試料）１００μｔを試＃ｉ″ｍに
とり、最終劇［０，２２Ｗ／マ％ゼラチン、５　ｍＭ　
−ＣａＣｔｌ、５　ｍＭ　−ＭｇＣｔｓの０．３　Ｍ　
）リスー塩鍍緩衝液（ｐＨ７，４）　ｓ　ｏ　ｏ　ｐｔ
を加える。これにＰＧＭ−ビーズ（前記（Ｖｉｉｌ）の
■で調製し九不溶化ＴＡＧ様物質）１個を加え、更にレ
クチ／−ペルオキシダーゼ（前記（１）の■でｌｌ１ｌ
ｌ製した凍結乾ｌ１１標識しクチ／１ｗｔ／上記トリス
−塩酸緩衝液１４）１００μｔを加え、攪拌し九後２５
℃で２４時間インキエペー）した。アスピレータ−で反
応液を吸引除去し、生理食塩水２ｍｇ’）加え、ビーズ
を洗浄し、洗浄徹を吸引除去した。この操作を３回縁や
返し友。

０−フェニレンジアンン６０ｑに０．２　Ｍ　−マクレ
ビン緩衝液（ｐＨ＆８）２０ｓｇを加えて浴解し、更に
最終濃度０．０２　ｖ／マ％の迅へを加えて攪拌して、
発色試薬を調製した。

試験管に生理食塩水２ｖ＃を及び上記発色試薬５００　
ｐｔを加え、次いで上記ビーズを入れて、室温で３０分
間インキュベートした。３Ｎ−塩酸１−を加えて酵素反
応を停止させ、４９２ｎｍで吸光度を測定した。

同様にして、前記試薬の代りに各種濃度の襟亭物簀（Ｐ
ＧＭ　）を用いて吸光度を測定して検菫紐を作成した（
繭６図）。

この検量−を使用して、（財）で得た試料中のＴＡＧを
測定した結果は萬７図のとおりである。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の競合法による棒準曲−１第２図は競合
法の検量線、第３図は同法によ＃）＃Ｊ定し−ｆｃ健康
人のＴＡＧ蓄、第４図は同法により測定しｆｃ癌思者の
ＴＡＧ童、第５図はサンドインチ法の検１１線、第６図
はポリスチレンビーズを用′いる塘合床による標準曲線
、第７図は、同法により測定した（ａ）　Ｉ！！康人、
（ｂ）　ｍ　３１者、（ｃ）！以外の患者のＴＡＧ首を
示す。 以上 第　１１ ・ １４１進行癌１１ 、　　　１ 〃２．１ 〃　　３ 〃　４　　　　　　　　　　　　　・　　　　　　　　
　１両早期癌１０Ｉ 〃２１ 〃　３　　　　　　　　　　　　　　　・　　　　　　
１艮道癌１ 〃　２　　　　　　　　　　　　　　　　　・　　１〃
３Ｉ 肝癌】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　Ｉ腎癌１１ メラノーマ１　　　　　　　　　　　　　　・　　　　
　　　　　１墨 １１＠ｌ脈５１１１　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　・　　　１骨髄１１１３　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 肺癌１１ ・ 〃２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
°　　　１〃　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１　・乳癌
１１ 膵臓癌１１ 直腸癌１１ 卵巣癌１１ 子宮癌ｌ＠Ｉ １　　　　１０　　　．１０２１０３１０’ＰＧＭの−
＼キソース換算値（ピコモル／−）３１３　　１２５　
　　５００ ＰＧＭのヘキノース換其櫃 （ｎｍｏｌ／脳）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　一定しようとする体液中のＴＡＧと、一定量
   の不溶化ＴＡＧ又は不溶化ＴＡＧ様物質とを、標識レク
   チンの一定量と鯛合反応させ、次いで不溶化ＴＡＧ又は
   不溶化ＴＡＧ様物質と標識レクチンとの結合体及び非結
   合レクチンを分離し、その何れか一方のｓｉｔ剤活性を
   測定することを特徴とする癌関連糖側鎖の定量法。 （２）　　ＴＡＧ様物質が、ガラクトース−（−１→３
   又祉β１→４）−Ｎ−アセチルグルーサ２ン、ガラクト
   ース−（−１→３又は−１→４）−＼ Ｎ−アセチルガラクトサミン又は該糖鎖を末端に有する
   Ｓ誘導体である特許請求の範囲菖１項記載の定量法。 （３）　　ｉ！ｌ織レクチンが、酵素、螢光物質又は放
   射性物質で標識し九レクチンである特許請求の範咄篇１
   項記載の定量法。 （４）　　体液が、血液、細胞組域液、リンパ液、脚本
   、腹水、羊水、両液、尿、膵液、髄液又は輪液である特
   許請求の範囲臨１項紀Ｉｃの定量法。 （５）　　（１４１ｊ定しようとする体・蓼中のＴＡＧ
   と一定量の纏ＩＩ　ＴＡＧ又は纏戯ＴＡＧ橡物質を、一
   定量のレクチン又は不溶化レクチンと虜合、反応させ、
   次いで標識ＴＡＧ又は１１１１１　ＴＡＧ様物質とレク
   チン又は不溶化レクチンとの結合体及び非結合標識ＴＡ
   Ｇ又は＠　１ｉｌＴＡＧ　４ｍ物質を分離し、その何れ
   か一方のＩ！１織剤活剤活性１定することを特徴とする
   癌関連糖側鎖の定量法〇 （ａＪ　　ＴＡＧ様物質が、ガラクトース−（β１→３
   又ハβ１→４）−Ｎ−アセチルゲルコサＺン、ガラクト
   ース−（７１１→３又はβ１→４）−Ｎ−アセチルグル
   ク）ＩＭン又紘＃纏鎖を末端に有する糖誘導体である特
   許請求の範ｌｉ８！第５項記載の定Ｉｌｋ法。 （７）　　ｌｌ１ｌ　ＴＡＧ又はＩＩｌ織ＴムＧ像物質
   が、酵素、螢光物質又は放射性物質でｌ１ｇ臓しえもの
   である籍ｌｌＦＦ−請求の範囲菖５項記載の定量法。 （Ｍ）一体液が、血液、細胞Ｉｊｉｉｋ液、リンパ液、
   膨水、縦木、羊水、冑ｔ１尿、膵液、髄液又はＳｔであ
   る特許請求の範ａＳＳ項記載の定量法。 ＜９）　　ＩＩＩ定しようとする体液中のＴＡＧと不溶
   化レクチンとを反応させてＴＡＧ−不溶化レクチン複合
   体を形成させ、この複合体に＊＊レクチンの一定量を反
   応させ、次いで被合体と襟漱レクチンの結合体及び非結
   合ＩＩ歇レクチンを分離し、その何れか一方の標識剤活
   性を一定する仁とを特徴とする癌関連ｌ１Ｉ１１１１鎖
   の定量法。 ＱＱ　　標識レクチンが、酵素、螢光物質又は放射性物
   質で１ｌｌｌｉｋしたレクチンである脣許讃求のｍｍｔ
   ｌＥ９項記＊ｔｏ定菫法。 仏υ　体液が、血液、細胞組域液、リンパ液、膨水、腹
   水、羊水、胃液、尿、膵液、髄液又は唾液である特許請
   求の範８第９項記載の定量法。 ａ２　　体液中の癌関連糖側鎖レベルを測定し、健厭人
   の１該レベルと被検者のそれとを比較することをｑ＃像
   とする癌の診断法。