JPS5828276A - ボルデテラ・プロンヒセブティカ感染症生菌ワクチン用改良原株の作出法および生菌ワクチン - Google Patents
ボルデテラ・プロンヒセブティカ感染症生菌ワクチン用改良原株の作出法および生菌ワクチンInfo
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はボルデテラ・ブロンヒセプテイ力感染症生菌ワ
クチン用の改良原株の作出法、さらに詳しくは、高い免
疫原性を有しかつ安全性の優れたボルデテラ・ブロンヒ
セプテイ力感染症生菌ワクチンの製造に適した改良され
た性質を有するボルデテラ・ブロンヒセプテイ力感染症
生菌ワクチン用改良原株工相菌の作出法ならびにその生
菌ワクチンに関する。
クチン用の改良原株の作出法、さらに詳しくは、高い免
疫原性を有しかつ安全性の優れたボルデテラ・ブロンヒ
セプテイ力感染症生菌ワクチンの製造に適した改良され
た性質を有するボルデテラ・ブロンヒセプテイ力感染症
生菌ワクチン用改良原株工相菌の作出法ならびにその生
菌ワクチンに関する。
ボルデテラ・ブロンヒセプテイ力（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌ
ａｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）は、豚、犬、兎、モ
ルモット、マウスなどの各種動物に感染して呼吸器疾患
を惹起することが知られており、とくに豚の幼今期にお
いて本菌に感染した場合、萎縮性鼻炎を起し甲介骨萎縮
をきたし、発育遅延、飼料効率の低下をもたらすため、
畜産経営上大きな問題となっている。このような感染症
の予防のために、近年、豚萎縮性鼻炎用死菌ワクチンが
提供されているが充分な効果をあげるまでにはいたって
いない。
ａｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）は、豚、犬、兎、モ
ルモット、マウスなどの各種動物に感染して呼吸器疾患
を惹起することが知られており、とくに豚の幼今期にお
いて本菌に感染した場合、萎縮性鼻炎を起し甲介骨萎縮
をきたし、発育遅延、飼料効率の低下をもたらすため、
畜産経営上大きな問題となっている。このような感染症
の予防のために、近年、豚萎縮性鼻炎用死菌ワクチンが
提供されているが充分な効果をあげるまでにはいたって
いない。
本発明者は、先に、ボルデテラ・ブロンヒセプテイ力の
野外株、とくに萎縮性鼻炎に罹っている豚の鼻腔内より
採取した野外株（以下、単にＳ１株という）より、ボル
デテラ・ブロンヒセプテイ力感染症に対する生菌ワクチ
ンの製造に適した原株の作出法を開発した（特公昭５５
−４７６１２号、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍ
ｕｎｉｔｙ、第２２巻、第２号、３１８〜３２１頁（１
９７８年１１月）を参照）。すなわち、Ｓ１株を血液寒
天培地で培養後、ニトロソグアニジンで処理し、遠心操
作を繰返したのち洗浄し、その菌液を血液寒天培地にて
培養し、その発育集落について、レプリカ法により、３
２°Ｃでは発育するが３４°Ｃ〜３７°Ｃおよびそれ以
上では発育しない温度感受性変異株（以下、【。
野外株、とくに萎縮性鼻炎に罹っている豚の鼻腔内より
採取した野外株（以下、単にＳ１株という）より、ボル
デテラ・ブロンヒセプテイ力感染症に対する生菌ワクチ
ンの製造に適した原株の作出法を開発した（特公昭５５
−４７６１２号、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍ
ｕｎｉｔｙ、第２２巻、第２号、３１８〜３２１頁（１
９７８年１１月）を参照）。すなわち、Ｓ１株を血液寒
天培地で培養後、ニトロソグアニジンで処理し、遠心操
作を繰返したのち洗浄し、その菌液を血液寒天培地にて
培養し、その発育集落について、レプリカ法により、３
２°Ｃでは発育するが３４°Ｃ〜３７°Ｃおよびそれ以
上では発育しない温度感受性変異株（以下、【。
−５３４株という）をえた。
このｔ６− ｓ ３４株は免疫原性を存する一方病原性
が弱くボルデテラ・ブロンヒセブテイ力感染症に対する
生菌ワクチン用原株として有用ではあるが、産業的に生
菌ワクチンとして用いるにＣす安全性に若干問題がある
ほか、製造や野外応用に際し野外株や病原株とのｉｎ
ｖｉｔｒｏ鑑別または検定上などにおいても不充分であ
るなどの難点がある。
が弱くボルデテラ・ブロンヒセブテイ力感染症に対する
生菌ワクチン用原株として有用ではあるが、産業的に生
菌ワクチンとして用いるにＣす安全性に若干問題がある
ほか、製造や野外応用に際し野外株や病原株とのｉｎ
ｖｉｔｒｏ鑑別または検定上などにおいても不充分であ
るなどの難点がある。
本発明者は、さらに改良された性状を有する原株をえる
ために、該ｔｓ−ｓ３４株にみられる温度感受性のほか
に、さらに他の特異的で安定な遺伝標識を賦与すること
ができれば野外株との区別をより一層明確にでき、ワク
チン株としての検定をより確実にし、生菌ワクチンの工
業的製法に有利であると考え、種々研究を重ねた結果、
ボルデテラ・ブロンヒセプテイ力菌株の培養菌液に、好
ましくは複数の、変異誘起方法を適用して複数の遺伝標
識を持った変異株を分離し、さらにこの分離菌について
血液寒天培地上で長期間培養し、その小集落のものを釣
菌、培養する操作を繰返すことにより、ボルデテラ・ブ
ロンヒセプテイ力感染症生菌ワクチン製造用に適した改
良菌株をえることに成功し、本発明を完成した。
ために、該ｔｓ−ｓ３４株にみられる温度感受性のほか
に、さらに他の特異的で安定な遺伝標識を賦与すること
ができれば野外株との区別をより一層明確にでき、ワク
チン株としての検定をより確実にし、生菌ワクチンの工
業的製法に有利であると考え、種々研究を重ねた結果、
ボルデテラ・ブロンヒセプテイ力菌株の培養菌液に、好
ましくは複数の、変異誘起方法を適用して複数の遺伝標
識を持った変異株を分離し、さらにこの分離菌について
血液寒天培地上で長期間培養し、その小集落のものを釣
菌、培養する操作を繰返すことにより、ボルデテラ・ブ
ロンヒセプテイ力感染症生菌ワクチン製造用に適した改
良菌株をえることに成功し、本発明を完成した。
本発明によれば、ボルデテラ・ブロンヒセプテイ力菌株
の培養菌液、好ましくは、該菌株を血液寒天培地で、通
常６〜２４時間、培養してえられる対数増殖期の培養菌
液に、好ましくは複数の、変異誘起方法を適用し、その
菌液を数回遠心し、洗浄後、血液寒天培地で培養し、そ
の発育集落より、少なくとも温度感受性および尿素分解
能陰性の突然変異株（以下、Ｉｓ −５３４・Ｕ−株と
いう）をえる。このものは、特異的抗原である莢膜抗原
を喪失し、生菌ワクチンとしては不適当な非溶血性の■
生菌であるため、これを血液寒天培地にて長期間培養し
、比較的小集落のものを釣菌し、培養して増菌させる方
法を繰返すことにより、弱溶血性集落の■生菌を経て、
最後に莢膜抗原を完備した溶血性のｔｓ−’ｓ３４・Ｕ
−株工相菌かえられる。
の培養菌液、好ましくは、該菌株を血液寒天培地で、通
常６〜２４時間、培養してえられる対数増殖期の培養菌
液に、好ましくは複数の、変異誘起方法を適用し、その
菌液を数回遠心し、洗浄後、血液寒天培地で培養し、そ
の発育集落より、少なくとも温度感受性および尿素分解
能陰性の突然変異株（以下、Ｉｓ −５３４・Ｕ−株と
いう）をえる。このものは、特異的抗原である莢膜抗原
を喪失し、生菌ワクチンとしては不適当な非溶血性の■
生菌であるため、これを血液寒天培地にて長期間培養し
、比較的小集落のものを釣菌し、培養して増菌させる方
法を繰返すことにより、弱溶血性集落の■生菌を経て、
最後に莢膜抗原を完備した溶血性のｔｓ−’ｓ３４・Ｕ
−株工相菌かえられる。
上記の方法で用いられる出発菌株は、ボルデテラ・ブロ
ンヒセプテイ力菌の野外株、たとえばＳ１株であっても
よく、あるいはそれに前記文献に記載したような方法に
より温度感受性を賦与したｔｓ−ｓ３４株であってもよ
い。出発菌株として野外株を用いた場合には、前記文献
に記載の方法により変異誘起手段により温度感受性変異
菌株とし、しかるのちにさらに変異誘起手段を適用して
尿素分解能陰性の変異菌株に導いてもよく、あるいは野
外株に変異誘起手段により尿素分解能陰性の遺伝標識を
与え、しかるのちに温度感受性を賦与することもできる
。しかし実用的観点からはさきに温度感受性を一賦与し
たｔｓ−５３４株を用いるのが有利である。
ンヒセプテイ力菌の野外株、たとえばＳ１株であっても
よく、あるいはそれに前記文献に記載したような方法に
より温度感受性を賦与したｔｓ−ｓ３４株であってもよ
い。出発菌株として野外株を用いた場合には、前記文献
に記載の方法により変異誘起手段により温度感受性変異
菌株とし、しかるのちにさらに変異誘起手段を適用して
尿素分解能陰性の変異菌株に導いてもよく、あるいは野
外株に変異誘起手段により尿素分解能陰性の遺伝標識を
与え、しかるのちに温度感受性を賦与することもできる
。しかし実用的観点からはさきに温度感受性を一賦与し
たｔｓ−５３４株を用いるのが有利である。
このようにしてえられるｊｓ−５３４・Ｕ−株Ｉ相菌は
、後記のように、温度感受性に加えて尿素分解能陰性、
さらには血液寒天培地上での集落形成に３〜４日を要す
る遅発前件などの染色体性遺伝標識を備え、しかも生菌
ワクチン原株として必須の莢膜抗原を完備し、安全性も
高くかつ免疫原性においてｔｓ−８３４株よりも優れて
いるため、ボルデテラ・ブロンヒセプティ力感染症用生
菌ワクチンの製造に適している。
、後記のように、温度感受性に加えて尿素分解能陰性、
さらには血液寒天培地上での集落形成に３〜４日を要す
る遅発前件などの染色体性遺伝標識を備え、しかも生菌
ワクチン原株として必須の莢膜抗原を完備し、安全性も
高くかつ免疫原性においてｔｓ−８３４株よりも優れて
いるため、ボルデテラ・ブロンヒセプティ力感染症用生
菌ワクチンの製造に適している。
つぎに、本発明のｊｓ −Ｓ ３４・Ｕ−株工相菌の作
出法についてさらに詳しく説明する（便宜上、出発菌株
としてＩｓ −８３４株を用いた場合について説明する
）。
出法についてさらに詳しく説明する（便宜上、出発菌株
としてＩｓ −８３４株を用いた場合について説明する
）。
（１）ｔｓ−５３４株よりｔｓ−ｓ３４−ｕ−株■相菌
の作出 前記特公昭５５−４７６１２号またはＩｎ ｆｅｃｔ
ｉｏｎ＆ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ の文献に記載の方法によ
りえた【Ｓ、−５３４株を血液寒天培地（成分ニトリブ
チケース−ソイ寒天培地（Ｂ Ｂ Ｌ ） （Ｕ、Ｓ、
Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｘｘ、 Ｊｕｌｙ １．１９
８０．８７５頁に記載（７） ５ｏｙｂｅａｎ −Ｃａ
ｓｅｉｎ Ｄｉｇｅｓｔ Ａｇａｒ Ｍｅｄｉｕｍ）
ニ羊血液を１０％加えたもの）（以下、ＴＳ血寒培地と
いう）に゛て３２℃で１夜培養し、これを適当な緩衝食
塩液、たとえば燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，０）にかきと
って浮遊菌液を作り、この対数増殖期の培養菌液に複数
の変異誘起方法を適用する。
の作出 前記特公昭５５−４７６１２号またはＩｎ ｆｅｃｔ
ｉｏｎ＆ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ の文献に記載の方法によ
りえた【Ｓ、−５３４株を血液寒天培地（成分ニトリブ
チケース−ソイ寒天培地（Ｂ Ｂ Ｌ ） （Ｕ、Ｓ、
Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｘｘ、 Ｊｕｌｙ １．１９
８０．８７５頁に記載（７） ５ｏｙｂｅａｎ −Ｃａ
ｓｅｉｎ Ｄｉｇｅｓｔ Ａｇａｒ Ｍｅｄｉｕｍ）
ニ羊血液を１０％加えたもの）（以下、ＴＳ血寒培地と
いう）に゛て３２℃で１夜培養し、これを適当な緩衝食
塩液、たとえば燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，０）にかきと
って浮遊菌液を作り、この対数増殖期の培養菌液に複数
の変異誘起方法を適用する。
この変異誘起方法としては、一般に菌株ノ変異方法とし
て採用されているもの、たとえば、ニトロソグアニジン
、亜硝酸、２−アミノプリン、５−ブロモウラシルなど
の変異誘起剤による処理、紫外線照射、放射線照射など
が挙げられる。これらの処理は単独で行なってもよいが
、好ましくはそれらの２種またはそれ以上を組合せて適
用することによりさらに効率よく所望の変異株に導くこ
とができる。好ましい組合せは、ニトロソグアニジン処
理と紫外線照射との組合せである。
て採用されているもの、たとえば、ニトロソグアニジン
、亜硝酸、２−アミノプリン、５−ブロモウラシルなど
の変異誘起剤による処理、紫外線照射、放射線照射など
が挙げられる。これらの処理は単独で行なってもよいが
、好ましくはそれらの２種またはそれ以上を組合せて適
用することによりさらに効率よく所望の変異株に導くこ
とができる。好ましい組合せは、ニトロソグアニジン処
理と紫外線照射との組合せである。
かく変異処理された菌株を遠心分離、洗浄後、血液寒天
培地にて３２°Ｃで３日間培養し、その発育集落につい
て尿素分解試験を行なって尿素分解能陰性のものを選択
してｔｓ−ｓ３４・Ｕ 株をえる。
培地にて３２°Ｃで３日間培養し、その発育集落につい
て尿素分解試験を行なって尿素分解能陰性のものを選択
してｔｓ−ｓ３４・Ｕ 株をえる。
この菌株は■生菌である。
（２）■生菌より■生菌の作出
ボルデテラ・ブロンヒセプテイカの工相菌は小集落でか
つ強溶血性であり、一方■相菌は大集落でかつ非溶血性
であることに着目し、つぎのような方法を見い出し、■
生菌からのＩ生菌の作出に成功した。
つ強溶血性であり、一方■相菌は大集落でかつ非溶血性
であることに着目し、つぎのような方法を見い出し、■
生菌からのＩ生菌の作出に成功した。
すなわち、上記のようにしてえられたｔｓ−ｓ ３４・
Ｕ−株■相菌を血液寒天培地（成分：ポルデジヤング培
地（Ｄｉｆｃｏ）に羊血液を１〇−加えたもの、細菌学
実習提要７９頁およびＡｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃ。
Ｕ−株■相菌を血液寒天培地（成分：ポルデジヤング培
地（Ｄｉｆｃｏ）に羊血液を１〇−加えたもの、細菌学
実習提要７９頁およびＡｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃ。
ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ発行、Ｍａｎｕａｌ
ｏｆ ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒＣ１１ｎｉｃａ１．
２ｎｄ Ｅｄ−ｇ９４〜５頁を参照、以下ＢＧ培地とい
う）にて３２℃で３日間以上、通常３〜６日間、培養し
、３日め以降に初めて認められる比較的小集落で、でき
れば少しでも溶血性を示すものを釣菌し、それをさらに
培養して増菌する。この菌株を用いて同様の処理を２回
以上、通常２〜１０回繰返し、弱溶血性集落の■生菌を
経たのち、強溶血性集落の■生菌（微工研菌寄第６０９
９号）かえられる。
ｏｆ ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒＣ１１ｎｉｃａ１．
２ｎｄ Ｅｄ−ｇ９４〜５頁を参照、以下ＢＧ培地とい
う）にて３２℃で３日間以上、通常３〜６日間、培養し
、３日め以降に初めて認められる比較的小集落で、でき
れば少しでも溶血性を示すものを釣菌し、それをさらに
培養して増菌する。この菌株を用いて同様の処理を２回
以上、通常２〜１０回繰返し、弱溶血性集落の■生菌を
経たのち、強溶血性集落の■生菌（微工研菌寄第６０９
９号）かえられる。
本発明でえられるｔ、−５３４・Ｕ−株Ｉ相菌は下記の
ような種々の特徴ある性状を有する。
ような種々の特徴ある性状を有する。
（１）生物学的性状
（イ）温度感受性
ｔｓ−ｓ ３４株と同様に、３２゛Ｃでは発育するが３
４°Ｃ〜３７°Ｃおよびそれ以上では発育しない。
４°Ｃ〜３７°Ｃおよびそれ以上では発育しない。
一般的なウレアーゼ試験法へ前記Ｍａｎｕａｌ ｏｆＣ
ｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 ２ｎ
ｄ Ｅｃｌ、９２３〜９２４頁を参照）により尿素分解
能を試験した。該試験には、前記■生菌より工相菌に導
く過程での数代の菌株のほか、ｔｓ−ｓ３４株、野外株
のＳ１株、他の萎縮性鼻炎の豚由来のＡ−１９株、さら
に生物学的性状が尿素分解能を除いてボルデテラ・ブロ
ンヒセプティ力と非常によく似ているアルカリゲネス・
フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉ
ｓ。
ｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 ２ｎ
ｄ Ｅｃｌ、９２３〜９２４頁を参照）により尿素分解
能を試験した。該試験には、前記■生菌より工相菌に導
く過程での数代の菌株のほか、ｔｓ−ｓ３４株、野外株
のＳ１株、他の萎縮性鼻炎の豚由来のＡ−１９株、さら
に生物学的性状が尿素分解能を除いてボルデテラ・ブロ
ンヒセプティ力と非常によく似ているアルカリゲネス・
フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉ
ｓ。
Ｃｏｗａｎ ａｎｄ ５ｔｅｅｌ’ｓ、 Ｍａｎｕａｌ
ｆｏｒ ｔｈｅＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ２ｎｄ Ｅｄ、１
９７４を参照） オヨヒイ−−：Ｉ ＩＪ （Ｅ。
ｆｏｒ ｔｈｅＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ２ｎｄ Ｅｄ、１
９７４を参照） オヨヒイ−−：Ｉ ＩＪ （Ｅ。
ｃｏ目）を用いた（以後の性状についても同様）。
その結果を第１表に示す。
第１表
米）常法における判定時期
上記結果から明らかなように、ｔｓ−ｓ３４・Ｕ−株工
相菌は尿素分解能陰性であり、この遺伝的性（ハ）発育
速度 各菌株の発育速度について２種類の平板培地上における
集落発育能で比較した。
相菌は尿素分解能陰性であり、この遺伝的性（ハ）発育
速度 各菌株の発育速度について２種類の平板培地上における
集落発育能で比較した。
まず、発育支持能の高いＴＳ血寒培地と発育支持能の低
いＢＣ，培地とを用い、３２°Ｃにて５日間培養し、そ
の集落の直径の経口変化を測定した。
いＢＣ，培地とを用い、３２°Ｃにて５日間培養し、そ
の集落の直径の経口変化を測定した。
その結果を第１図に示す。この結果から明らかなように
、直径Ｑ、 ５ ＭＭ以上に達するために、ｔ、−５３
４・Ｕ−株工相菌は３〜５日を要し、野外株であるＳ１
株工相菌に比べて遅発育性である。
、直径Ｑ、 ５ ＭＭ以上に達するために、ｔ、−５３
４・Ｕ−株工相菌は３〜５日を要し、野外株であるＳ１
株工相菌に比べて遅発育性である。
またＫＣＮ培地（前記Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉ
ｃａｌＭｉｃｒＣ１１ｎｉｃａ１．２ｎｄ Ｅｄ、 、
９１５頁を参照）およびクエン酸塩を含むシモンズ・ク
エン酸ナトリウム培地（前記Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃ１
１ｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇｙ、 ２ｎｄ
Ｅｄ、、 ｇ ９８頁を参照）を用イテ３２°Ｃで数
日間培養した結果をそれぞれ第２表および第３表に示す
。
ｃａｌＭｉｃｒＣ１１ｎｉｃａ１．２ｎｄ Ｅｄ、 、
９１５頁を参照）およびクエン酸塩を含むシモンズ・ク
エン酸ナトリウム培地（前記Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃ１
１ｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇｙ、 ２ｎｄ
Ｅｄ、、 ｇ ９８頁を参照）を用イテ３２°Ｃで数
日間培養した結果をそれぞれ第２表および第３表に示す
。
第２表 ＫＣＮ培地における発育
来）常法における判定期間
第３表 シモンズクエン酸塩培地における発育能米）常
法における判定時期 上記結果から明らかなように、本発明のｔ、Ｓ３４・Ｕ
−株Ｉ相菌は、常法の判定時期ではいずれも陰性であり
、観察期間を延長して判定すればいずれも陽性であって
遅発育性である。
法における判定時期 上記結果から明らかなように、本発明のｔ、Ｓ３４・Ｕ
−株Ｉ相菌は、常法の判定時期ではいずれも陰性であり
、観察期間を延長して判定すればいずれも陽性であって
遅発育性である。
その他の生物学的性状はＳ１株およびｊｓ−５３４株と
同じである。
同じである。
（２）抗原的特性
Ｓ１株工相菌およびｔ、−ｓ ３４−ｕ−株■相菌を用
いてそれぞれ高度免疫したウサギ血清および豚血清に対
して、Ｓ１株工相菌、ｔｓ−ｓ ３４・ｕ−株工相菌、
市販の萎縮性鼻炎抗原（ＡＲ抗原「北研」）およびアル
カリゲネス・フェカリスＩＡＭＩ４７３株をそれぞれ抗
原として試験管凝集反応を行なった（清水、萎縮性鼻炎
、３．血清学的診断法、豚病学、１９７７％近代出版、
東京を参照）。その結果を第４表に示す。
いてそれぞれ高度免疫したウサギ血清および豚血清に対
して、Ｓ１株工相菌、ｔｓ−ｓ ３４・ｕ−株工相菌、
市販の萎縮性鼻炎抗原（ＡＲ抗原「北研」）およびアル
カリゲネス・フェカリスＩＡＭＩ４７３株をそれぞれ抗
原として試験管凝集反応を行なった（清水、萎縮性鼻炎
、３．血清学的診断法、豚病学、１９７７％近代出版、
東京を参照）。その結果を第４表に示す。
第４表 Ｓ１株およびｔｓ−ｓ ３４．ｕ−株の高（註
）抗原はすべて工相菌を使用 上記結果から明らかなように、Ｉｓ −Ｓ ３４・Ｕ−
株工相菌など３抗原は両血清に対してもいずれも２０．
４８０倍の被凝集価を示し、”５−８３４・Ｕ−株■相
菌は野外株のＳ１株工相菌と抗原的特性が全く同じであ
り、一方、生物学的性状において酷似しているアルカリ
ゲネス・フェカリスは１０倍以下の被凝集価を示し、抗
原的特性に関して全く異なる。
）抗原はすべて工相菌を使用 上記結果から明らかなように、Ｉｓ −Ｓ ３４・Ｕ−
株工相菌など３抗原は両血清に対してもいずれも２０．
４８０倍の被凝集価を示し、”５−８３４・Ｕ−株■相
菌は野外株のＳ１株工相菌と抗原的特性が全く同じであ
り、一方、生物学的性状において酷似しているアルカリ
ゲネス・フェカリスは１０倍以下の被凝集価を示し、抗
原的特性に関して全く異なる。
（ｄＪ ’ ｓ −８３４・Ｕ−株工相菌生菌ワクチン
の感染防御能および安全性の検定 Ｌｓ−５３４・Ｕ−株工相菌生菌ワクチンのモルモット
における感染防御能を下記の方法で実験した。
の感染防御能および安全性の検定 Ｌｓ−５３４・Ｕ−株工相菌生菌ワクチンのモルモット
における感染防御能を下記の方法で実験した。
体重的３００ ｙのハートレイ系モルモット２２匹を、
免疫群（１２匹）と対照群（１０匹）とに分けた。
免疫群（１２匹）と対照群（１０匹）とに分けた。
Ｌｓ−５３４・Ｕ−株■相菌をＢＧ培地ニテ３２°Ｃで
２日間培養し、燐酸緩衝食塩水（ＰＨ７，０）にがきと
って菌浮遊液をえ、その０．２ ｍｌを上記免疫群の各
モルモットの左右の鼻内に接種した（計０．４ｗｌ、菌
数としては６×１０８個）。接種後４週間めにボルデテ
ラ・ブロンヒセプテイ力Ｓ１株Ｉ相菌のＢＧ培地上３７
°Ｃ１日培養菌の燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，０）浮遊菌
液０．２ ｍｌを、免疫群および対照群の全モルモット
の左右の鼻内に（計０．４ ａｔ ）接種、攻撃し、５
週間観察した。このときの接種菌数旧、３２ Ｘ １０
１０個（１５０００ＸＬＤ５０）であった。その結果を
第５表に示す。
２日間培養し、燐酸緩衝食塩水（ＰＨ７，０）にがきと
って菌浮遊液をえ、その０．２ ｍｌを上記免疫群の各
モルモットの左右の鼻内に接種した（計０．４ｗｌ、菌
数としては６×１０８個）。接種後４週間めにボルデテ
ラ・ブロンヒセプテイ力Ｓ１株Ｉ相菌のＢＧ培地上３７
°Ｃ１日培養菌の燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，０）浮遊菌
液０．２ ｍｌを、免疫群および対照群の全モルモット
の左右の鼻内に（計０．４ ａｔ ）接種、攻撃し、５
週間観察した。このときの接種菌数旧、３２ Ｘ １０
１０個（１５０００ＸＬＤ５０）であった。その結果を
第５表に示す。
米）○：生存 ・：死亡（数字は死亡日次）上記結果に
示すとおり、Ｌｓ−５３４・Ｕ−株工相菌の生菌ワクチ
ンを接種した免疫群では供試１２匹のすべて臨床症状を
まったく示さずに生存し、５週間後の剖検時にも肉眼的
な病理変化はまったく認められなかった。それに対し、
生菌ワクチンを接種しなかった対照群では、供試１０匹
の金側がいずれも呼吸困難を示しつつ、１４日以内に敗
血症により死亡した。
示すとおり、Ｌｓ−５３４・Ｕ−株工相菌の生菌ワクチ
ンを接種した免疫群では供試１２匹のすべて臨床症状を
まったく示さずに生存し、５週間後の剖検時にも肉眼的
な病理変化はまったく認められなかった。それに対し、
生菌ワクチンを接種しなかった対照群では、供試１０匹
の金側がいずれも呼吸困難を示しつつ、１４日以内に敗
血症により死亡した。
このように、本発明のｔｓ−Ｓ３４・Ｕ−株工相菌はボ
ルデテラ・ブロンヒセプテイ力感染症に対してすぐれた
免疫原性を有し、しかも何らの臨床症状も示さず安全性
が高い特徴を有する。
ルデテラ・ブロンヒセプテイ力感染症に対してすぐれた
免疫原性を有し、しかも何らの臨床症状も示さず安全性
が高い特徴を有する。
（４）易熱性毒素の検討
ボルデテラ・ブロンヒセプテイ力が有する易熱性前（以
下、ＬＴと略称する）は、本菌が豚に感染した場合、そ
の鼻甲介萎縮に直接関与するものと考えられている。し
たがって、萎縮性鼻炎用ワクチンにおいてもＬＴによる
副作用の防除が重要な関心事となっている。
下、ＬＴと略称する）は、本菌が豚に感染した場合、そ
の鼻甲介萎縮に直接関与するものと考えられている。し
たがって、萎縮性鼻炎用ワクチンにおいてもＬＴによる
副作用の防除が重要な関心事となっている。
そこで、本発明のｌ５−８３４・Ｕ−株工相菌のほか、
１ｇ−８３４株、Ｓ１株、アルカリゲネス・フェカリス
ＩＡＭ１４７３株およびイー・コリＢ４１株についてモ
ルモットを用いてＬＴによる副作用の有無を試験した。
１ｇ−８３４株、Ｓ１株、アルカリゲネス・フェカリス
ＩＡＭ１４７３株およびイー・コリＢ４１株についてモ
ルモットを用いてＬＴによる副作用の有無を試験した。
各試験菌株の５ Ｘ １０”／ｌｌ 菌液をソニケータ
（５ｏｎｉｆｅｒ ｍｏｄｅｌ ２００ 、１５０Ｗ
）にて２０ＫＩ（Ｚ。
（５ｏｎｉｆｅｒ ｍｏｄｅｌ ２００ 、１５０Ｗ
）にて２０ＫＩ（Ｚ。
１５分間破砕し、４°Ｃ，１５０００ｒＰｍ で３０分
間冷却遠心したのち、０．３μｍミリポアフィルタ−に
て濾過した。これを生理食塩水で倍数希釈し、体重約３
００ｆＩのハートレイ系モルモットに皮内接種し、１日
後の壊死形成に要する最大希釈倍数を測った。その結果
をｇＪ６表に示す。
間冷却遠心したのち、０．３μｍミリポアフィルタ−に
て濾過した。これを生理食塩水で倍数希釈し、体重約３
００ｆＩのハートレイ系モルモットに皮内接種し、１日
後の壊死形成に要する最大希釈倍数を測った。その結果
をｇＪ６表に示す。
上記結果からも明らかなように、本発明の１．−５３４
・Ｕ−株工相菌はＬＴが極めて少なく、１ｓ−５３４株
と比べても約半分である。このことは前記感染防御能試
験における臨床症状がまったく認められなかったことと
相俟って、本発明のｔｓ−５３４・ＵａＩ相菌の生菌ワ
クチンとしての安全性の指標となる。
・Ｕ−株工相菌はＬＴが極めて少なく、１ｓ−５３４株
と比べても約半分である。このことは前記感染防御能試
験における臨床症状がまったく認められなかったことと
相俟って、本発明のｔｓ−５３４・ＵａＩ相菌の生菌ワ
クチンとしての安全性の指標となる。
上述したとおり、本発明の１ｓ−５３４・Ｕ−株■相菌
は特異的な染色体性遺伝標識を有し、免疫原性において
きわめて優れている一方、安全性もきわめて高く、ボル
デテラ・ブロンヒセプティ力感染症に対する生菌ワクチ
ン製造用原株として有用なものである。
は特異的な染色体性遺伝標識を有し、免疫原性において
きわめて優れている一方、安全性もきわめて高く、ボル
デテラ・ブロンヒセプティ力感染症に対する生菌ワクチ
ン製造用原株として有用なものである。
本発明のｔｓ−ｓ３４・Ｕ−株工相菌を用いてボルデテ
ラ・フロンヒセプティ力感染症用生菌ワクチンを製造す
る場合、常法により行なわれる。すなわち、ｌ５−５３
４・Ｕ−株工相菌を血液寒天培地、例えばＢＧ培地、に
て３２°Ｃで培養して充分に増殖させ、これを燐酸緩衝
食塩水（ｐＨ７，０）にかきとって浮遊液を調・製する
。これに、通常の乾燥保護剤、例えば１０％スキンミル
クと５％酵母エキスの混合液を混合しく浮遊液：混合液
−１：１容量比）、それ″をバイアルに小分けしたのち
凍結乾燥して製品とする。このものは使用時に燐酸緩衝
食塩水（ｐＨ７，０） にて復元し、動物の鼻腔内に
注入または噴霧投与する。
ラ・フロンヒセプティ力感染症用生菌ワクチンを製造す
る場合、常法により行なわれる。すなわち、ｌ５−５３
４・Ｕ−株工相菌を血液寒天培地、例えばＢＧ培地、に
て３２°Ｃで培養して充分に増殖させ、これを燐酸緩衝
食塩水（ｐＨ７，０）にかきとって浮遊液を調・製する
。これに、通常の乾燥保護剤、例えば１０％スキンミル
クと５％酵母エキスの混合液を混合しく浮遊液：混合液
−１：１容量比）、それ″をバイアルに小分けしたのち
凍結乾燥して製品とする。このものは使用時に燐酸緩衝
食塩水（ｐＨ７，０） にて復元し、動物の鼻腔内に
注入または噴霧投与する。
つぎに実施例を挙げて本発明のｌ５−５３４・Ｕ−株工
相菌の製造法を示す。
相菌の製造法を示す。
実施例１
（１）Ｉｓ−５３４株よりｔｓ−ｓ３４−ｕ−株の作出
ボルデテラ・ブロンヒセプテイカｔ＄−５３４株を血液
寒天培地（ＴＳ血寒培地）に接種し、３２°Ｃで１日培
養する。これを燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，０）にかきと
って浮遊菌液を調製する。この浮遊菌液４ｍｌにニトロ
ソグアニジンを最終濃度が１０００μｇｈｔとなるよう
に加え、３２°Ｃで１時間振盪培養する。この培養液に
、引続き紫外線照射（距離：１０ｃＭ、時間＝４秒間）
を行なう。えられた菌液を３．００ Ｏｒｐｍ、 １
５分間にて３回遠心を繰返したのち、上記と同じ燐酸緩
衝食塩水にて洗浄する。この菌液を希釈したのち上記と
同じ血液寒天培地上に塗抹し、３２°Ｃにて３日間培養
し、その発育集落についてウレアーゼ試験にて尿素分解
能陰性の菌株を選択し、ｌ５−５３４・Ｕ−株■相菌を
える。
ボルデテラ・ブロンヒセプテイカｔ＄−５３４株を血液
寒天培地（ＴＳ血寒培地）に接種し、３２°Ｃで１日培
養する。これを燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，０）にかきと
って浮遊菌液を調製する。この浮遊菌液４ｍｌにニトロ
ソグアニジンを最終濃度が１０００μｇｈｔとなるよう
に加え、３２°Ｃで１時間振盪培養する。この培養液に
、引続き紫外線照射（距離：１０ｃＭ、時間＝４秒間）
を行なう。えられた菌液を３．００ Ｏｒｐｍ、 １
５分間にて３回遠心を繰返したのち、上記と同じ燐酸緩
衝食塩水にて洗浄する。この菌液を希釈したのち上記と
同じ血液寒天培地上に塗抹し、３２°Ｃにて３日間培養
し、その発育集落についてウレアーゼ試験にて尿素分解
能陰性の菌株を選択し、ｌ５−５３４・Ｕ−株■相菌を
える。
（２）■生菌より工相菌の作出
上記でえられたｔｓ−ｓ３４・Ｕ−株■相菌を燐酸緩衝
食塩水（ｐＨ７，０）にかきとり、この希釈菌液を血液
寒天培地（ＢＧ培地）上に塗抹し、３２°Ｃで３日間以
上培養し、３日め以降に生じた比較的小集落の菌株を釣
菌し、これを同様に培養して増菌させる。このようにし
てえた菌株を上記と同様にして培養後、釣菌する。この
操作を数回繰返し、弱溶血性集落の■生菌を経て、第１
０代において強溶血性を示す小集落の工相菌かえられる
。
食塩水（ｐＨ７，０）にかきとり、この希釈菌液を血液
寒天培地（ＢＧ培地）上に塗抹し、３２°Ｃで３日間以
上培養し、３日め以降に生じた比較的小集落の菌株を釣
菌し、これを同様に培養して増菌させる。このようにし
てえた菌株を上記と同様にして培養後、釣菌する。この
操作を数回繰返し、弱溶血性集落の■生菌を経て、第１
０代において強溶血性を示す小集落の工相菌かえられる
。
実施例２
前記実施例１の方法において、ニドジノグアニジン処理
および引続く紫外線照射の代りに、ニトロソグアニジン
を最終濃度が１０００／ｇ／となるように加えて３２°
Ｃで１時間振盪培養する以外は同様にしてｔｓ−ｓ３４
・Ｕ−株■相菌をえ、ついでこれを、培養、釣菌の操作
を４回繰返す以外は実施例１と同様にしてｌ５−３３４
・Ｕ−株工相菌をえる。
および引続く紫外線照射の代りに、ニトロソグアニジン
を最終濃度が１０００／ｇ／となるように加えて３２°
Ｃで１時間振盪培養する以外は同様にしてｔｓ−ｓ３４
・Ｕ−株■相菌をえ、ついでこれを、培養、釣菌の操作
を４回繰返す以外は実施例１と同様にしてｌ５−３３４
・Ｕ−株工相菌をえる。
実施例３
前記実施例１の方法において、ニトロングアニジン処理
および紫外線照射の代りに、浮遊菌液に紫外線照射（距
離＝２０α、時間＝４秒間）を行なう以外は同様にして
Ｌｓ−８３４・Ｕ−株■相菌をえ、ついでこれを、培養
、釣菌の操作を４回繰返す以外は実施例１と同様にして
ｔ、ｓ３４・Ｕ−株Ｉ相菌をえる。
および紫外線照射の代りに、浮遊菌液に紫外線照射（距
離＝２０α、時間＝４秒間）を行なう以外は同様にして
Ｌｓ−８３４・Ｕ−株■相菌をえ、ついでこれを、培養
、釣菌の操作を４回繰返す以外は実施例１と同様にして
ｔ、ｓ３４・Ｕ−株Ｉ相菌をえる。
実施例４
実施例１の方法によってえられたボルデテラ・ブロンヒ
セプティカｔ、ｓ３４・Ｕ−株工相菌をＢＧ培地（ｐＨ
６，８・１０％めん羊脱繊血加）に接種し、３２°Ｃ・
２日間培養した。これを集菌して滅菌燐酸緩衝食塩水（
ＰＨ７，０）に１． ｓ ｘ ｉ Ｏ９／ｌｅｌになる
よう浮遊し、等量の乾燥保護剤（１０悌スキムミルク・
５％酵母エキス含有液・１２０°Ｃ２０分滅菌）とよく
混和したものを最終バルクとした。これを１０ｇ／容バ
イアルに２Ｃ）ｓ＋／宛分注し、凍結乾燥して減圧下で
封じ、生菌ワクチン（乾燥）をえた。本品は２〜５°Ｃ
の冷暗所に保存したところ、よく安定した性状を保有し
ていた。本品は、溶解用液たとえば滅菌燐酸緩衝食塩水
（ｐＨ７，０）に容易に溶解し、かつ、均一な性状を示
した。なお、溶解用液のＩＣ１ｙｌに溶解した場合、含
有生菌数は１０８／ｌｌ１ｌであり、はぼ満足しうる生
残数であった。
セプティカｔ、ｓ３４・Ｕ−株工相菌をＢＧ培地（ｐＨ
６，８・１０％めん羊脱繊血加）に接種し、３２°Ｃ・
２日間培養した。これを集菌して滅菌燐酸緩衝食塩水（
ＰＨ７，０）に１． ｓ ｘ ｉ Ｏ９／ｌｅｌになる
よう浮遊し、等量の乾燥保護剤（１０悌スキムミルク・
５％酵母エキス含有液・１２０°Ｃ２０分滅菌）とよく
混和したものを最終バルクとした。これを１０ｇ／容バ
イアルに２Ｃ）ｓ＋／宛分注し、凍結乾燥して減圧下で
封じ、生菌ワクチン（乾燥）をえた。本品は２〜５°Ｃ
の冷暗所に保存したところ、よく安定した性状を保有し
ていた。本品は、溶解用液たとえば滅菌燐酸緩衝食塩水
（ｐＨ７，０）に容易に溶解し、かつ、均一な性状を示
した。なお、溶解用液のＩＣ１ｙｌに溶解した場合、含
有生菌数は１０８／ｌｌ１ｌであり、はぼ満足しうる生
残数であった。
実施例１によりえられたｔｓ−ｓ３４・Ｕ−株Ｉ相菌に
ついてＨＰＣＤ豚を用いて、安全性試験を行った。ボル
デテラ・ブロンヒセプテイ力抗体陰性の生後６日齢のＨ
ＰＣＤ仔豚８頭（１０７接種、１０８接種、１０９接種
、未接種の各群２頭）に１頭当り前記の菌量を１． Ｏ
ｔｇｌ宛鼻腔内に接種し、その後、・１２週間目に剖検
した。本菌株接種群および未接種群のいずれも試験期間
中、元気−食欲等一般所見に何ら異常を認めず、さらに
剖検時の肉眼および組織所見においても異常は認められ
なかった。
ついてＨＰＣＤ豚を用いて、安全性試験を行った。ボル
デテラ・ブロンヒセプテイ力抗体陰性の生後６日齢のＨ
ＰＣＤ仔豚８頭（１０７接種、１０８接種、１０９接種
、未接種の各群２頭）に１頭当り前記の菌量を１． Ｏ
ｔｇｌ宛鼻腔内に接種し、その後、・１２週間目に剖検
した。本菌株接種群および未接種群のいずれも試験期間
中、元気−食欲等一般所見に何ら異常を認めず、さらに
剖検時の肉眼および組織所見においても異常は認められ
なかった。
従って、本菌株は豚に対して安全であるト、とが確認さ
れた。
れた。
実施例４でえられたワクチンを滅菌ＰＢＳで溶解し、さ
らに１０倍階段稀釈系列をつくりＨＰＣＤ豚を用い、１
０ ’／１ｔｔｌ 、 １０６／ｌｌ 、 １０８／ｘ
ｌの各濃度のワクチンについて免疫原性試験を行った。
らに１０倍階段稀釈系列をつくりＨＰＣＤ豚を用い、１
０ ’／１ｔｔｌ 、 １０６／ｌｌ 、 １０８／ｘ
ｌの各濃度のワクチンについて免疫原性試験を行った。
ボルデテラ・ブロンヒセプテイ力抗体陰性の生後６日齢
のＨＰＣＤ仔豚８頭（１ｏ４．ｘｏ６．ｘｏ’。
のＨＰＣＤ仔豚８頭（１ｏ４．ｘｏ６．ｘｏ’。
未接種の各群２頭）に１頭当り前記の菌量を鼻腔内に接
種し、接種後３週目にボルデテラ・ブロン上セプテイカ
３１株（強者）で１頭当り１０７宛全頭経鼻攻撃し、攻
撃後１０週目に剖検した。攻撃後、剖検特進の期間にお
いて、ワクチン接種群では、元気食欲等一般所見および
臨床症状に何ら異常を認めず、ワクチン未接種群では攻
撃後、目やに、くしやみなどの臨床症状を呈し、飼料効
率も悪く剖検時鼻甲介萎縮を認めた。以上の成績により
本ワクチンの有効性が確認された。
種し、接種後３週目にボルデテラ・ブロン上セプテイカ
３１株（強者）で１頭当り１０７宛全頭経鼻攻撃し、攻
撃後１０週目に剖検した。攻撃後、剖検特進の期間にお
いて、ワクチン接種群では、元気食欲等一般所見および
臨床症状に何ら異常を認めず、ワクチン未接種群では攻
撃後、目やに、くしやみなどの臨床症状を呈し、飼料効
率も悪く剖検時鼻甲介萎縮を認めた。以上の成績により
本ワクチンの有効性が確認された。
ｔｓ−ｓ３４・Ｕ−株■相菌についてＨＰＣＤ豚を用い
て病原性復帰試験を行った。生後６日齢のＨＰＣＤ豚の
鼻腔内に１０８の生菌を接種し１週間観察した後、滅菌
綿棒で鼻腔内をスワップし、２ ｍｌのＰＢＳを用いて
スワップ浮遊液を作成し、その１ｙｌを次の豚に継代し
、他の１ ｚｌについては同定、菌の性状チェックのた
めの培養試験を行った。このようにして、１継代ごとに
２頭宛３代継代した結果、１，２．３代継代した豚群お
よび、対照群（未接種）のいずれも、剖検時まで元気・
食欲等一般所見に何ら異常を認めず、かつ、剖検時の肉
眼および組織所見でも、異常を認めなかった。以上の成
績より、本菌株は、原性が復帰せず、きわめて安定して
いることが判った。
て病原性復帰試験を行った。生後６日齢のＨＰＣＤ豚の
鼻腔内に１０８の生菌を接種し１週間観察した後、滅菌
綿棒で鼻腔内をスワップし、２ ｍｌのＰＢＳを用いて
スワップ浮遊液を作成し、その１ｙｌを次の豚に継代し
、他の１ ｚｌについては同定、菌の性状チェックのた
めの培養試験を行った。このようにして、１継代ごとに
２頭宛３代継代した結果、１，２．３代継代した豚群お
よび、対照群（未接種）のいずれも、剖検時まで元気・
食欲等一般所見に何ら異常を認めず、かつ、剖検時の肉
眼および組織所見でも、異常を認めなかった。以上の成
績より、本菌株は、原性が復帰せず、きわめて安定して
いることが判った。
第１図は、本発明のｔｓ−ｓ ３４・Ｕ−株、およびｔ
ｓ−ｓａ ４株、Ｓ１株（いずれも工相菌）の３２℃に
おける集落発育能を示すグラフである。 特許出願人 清 水 健 代理人弁理士青山 葆はか１名
ｓ−ｓａ ４株、Ｓ１株（いずれも工相菌）の３２℃に
おける集落発育能を示すグラフである。 特許出願人 清 水 健 代理人弁理士青山 葆はか１名
Claims (7)
- （１）ボルデテラ・ブロンヒセプテイカ菌株の培養菌液
に変異誘起方法を適用して、少なくとも温度感受性（３
２°Ｃで発育するが３４°Ｃ以上で発育しない）および
尿素分解能陰性の遺伝標識を有する変異菌株を分離し、
ついでこれを血液寒天培地にて培養して比較的小集落の
ものを釣菌し、培養増菌させ、この血液寒天培地培養お
よび小集落のものの釣菌の操作を繰返すことにより莢膜
抗原を完備した溶血性の工゛相菌に導くことを特徴とす
る、少なくとも温度感受性および尿素分解能陰性の染色
体性遺伝標識を兼備したボルデテラ・ブロンヒセプテイ
力感染症生菌ワクチン用の改良原株の作出法。 - （２）変異誘起方法がニトロソグアニジン処理および紫
外線照射の組合せからなる前記第（１）項の作出法。 - （３）変異処理後の菌株の血液寒天培地培養および釣菌
の操作を２回以上繰返す前記第（１）項の作出法。 - （４）該操作を２〜１ｏ回繰返す前記第（３）項の作出
法。 - （５）出発菌株のボルデテラ・ブロンヒセプティカ菌株
が、温度感受性・を有する変異菌株である前記第（１）
項の作出法。 - （６）出発菌株のボルデテラ・ブロンヒセプテイ力菌株
が、野外株である前記第（１）項の作出法。 - （７）少なくとも温度感受性（３２℃では発育するが３
４℃以上では発育しない）および尿素分解能陰性の染色
体性遺伝標識を兼備したボルデテラ・ブロンヒセプテイ
カｔ５−ｓ ３４・Ｕ−株■相菌からなるボルデテラ・
ブロンヒセプテイ力感染症用生菌ワクチン。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56125530A JPS5953828B2 (ja) | 1981-08-10 | 1981-08-10 | ボルデテラ・プロンヒセブティカ感染症生菌ワクチン用改良原株の作出法および生菌ワクチン |
| US06/400,363 US4456588A (en) | 1981-08-10 | 1982-07-21 | Method of the preparation of improved mutant strain of Bordetella bronchiseptica useful as live attenuated vaccine for prophlaxis of B. bronchiseptica infection |
| DK349782A DK169707B1 (da) | 1981-08-10 | 1982-08-04 | Fremgangsmåde til fremstilling af en mutantstamme af Bordetella bronchiseptica |
| KR1019820003543A KR840001215A (ko) | 1981-08-10 | 1982-08-06 | 개량된 변종균주의 제법 |
| AT82304185T ATE18135T1 (de) | 1981-08-10 | 1982-08-09 | Verfahren zur herstellung von einem verbessertem mutantenstamm von bordetella bronchiseptica und diesen enthaltendes lebendes attenuiertes vakzin. |
| DE8282304185T DE3269388D1 (en) | 1981-08-10 | 1982-08-09 | Method for the preparation of improved mutant strain of bordetella bronchiseptica and live attenuated vaccine containing it |
| EP82304185A EP0072656B1 (en) | 1981-08-10 | 1982-08-09 | Method for the preparation of improved mutant strain of bordetella bronchiseptica and live attenuated vaccine containing it |
| CA000409089A CA1185549A (en) | 1981-08-10 | 1982-08-10 | Method for the preparation of an improved mutant strain of bordetella bronchiseptica useful as a live attenuated vaccine for prophylaxis of b. bronchiseptica infection |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56125530A JPS5953828B2 (ja) | 1981-08-10 | 1981-08-10 | ボルデテラ・プロンヒセブティカ感染症生菌ワクチン用改良原株の作出法および生菌ワクチン |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5828276A true JPS5828276A (ja) | 1983-02-19 |
| JPS5953828B2 JPS5953828B2 (ja) | 1984-12-27 |
Family
ID=14912457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56125530A Expired JPS5953828B2 (ja) | 1981-08-10 | 1981-08-10 | ボルデテラ・プロンヒセブティカ感染症生菌ワクチン用改良原株の作出法および生菌ワクチン |
Country Status (8)
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