JPS5823797A - 胎便試料中ラクタ−ゼの検出用試験具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 嚢胞性線維症（ＣＦ）は、臨床上の徴候として、慢性肺
疾患、すい原機能−書があり、汗中のナトリウムイオン
及び塩素化物イオンが高濃度となる遺伝性疾患である。

粘液がすい臓分泌管、腸内粘液分泌腺及び気管支をふさ
ぐ。

研究によって、ＣＦの新生児からの胎便では、蛋白質、
主にアルブミンの濃度が高くなることが立証された（　
ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　（小児科学）２１巻：６３５〜
６４１頁（１９５８年）参照〕。乾燥重量１ｇの胎便当
９２０Ｍ９以ｆ　（ａ９／９）　ＣＤ、胎便’ｔｌりア
ルブミンを検出するための試験具が開発されている（　
ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　、　５５巻＝３５〜３８頁（１
９７５年）参照〕。かかる試験具は、すべてのＣＦの新
生児を検出することができず、即ち感度が低く、かつ容
認できない程多数の誤まった正の試験結果をも走らし、
即ち特異性が低い。ＣＦについての誤まった正の試験結
果によって引き起こされる情緒上のストレスの故に、Ｃ
Ｆテストにおける誤まった正の試験結果の数を減少させ
ることが望まれる。

ｐｅｄｉ’ａｔｒｉｃｓ　、　５６巻：　７８２−７８
７頁（１９７５年）は、ＣＦの新生児からの胎便中の二
軸類分解酵素（ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄａｓｅ　）活性
の増加を報告し、かつＣＦの診断試験として、他の活性
と同様に。

ラクターゼ活性の測定を行うよう提案している。

Ａｍ、　Ｊ、旦す、、Ｃｈｉｌｄ、、　１３２巻：　１
１１２〜１１１４頁（１９７８年）には、胎便中の、ア
ルブミン分析と関連して、ラクターゼ活性及びβ−Ｄ−
７コシダーゼ（ｆｕｃｏｓｉｄａｓｅ　）活性について
の分析試験を含む研究が述べられている。著者Ｆｉ、ラ
クターゼ及び７コシダーゼ試験を追加すれは、誤まった
正の試験結果の発生を減少させるであろうと示唆してい
る。

上述のラクターゼ活性試験は、液状分析試験によって行
う。胎便試料を試験管にとり、３−のラクトース（乳糖
）−マレイン酸塩緩衝溶液を加えた。１５分間、温置後
、ラクターゼ活性がグルコースの存在によって検出され
た。このグルコースの存在は、グルコース試薬片を混合
物に含浸し、１０分後、實色（正の試験）を呈し喪か否
かについてグルコース試薬片を検査することによって立
証されたものである。

胎便試料中のラクターゼ活性検出のために、液状分析試
験系を用いることは不便である。胎便試料はタール状の
塊りであるので、試料は先ず、均質化されねばならない
。前述のＡｍ、　Ｊ、Ｄｉａ。

Ｃｈｉｌｄ、に述べられているように、試料は緩衝溶液
中で激しく攪拌することＫよって均質化される。他の研
究者は、超音波法を用いて均質化を行った。試験用試料
を適切に調製するためには、試料は１５分から１時間の
間装置されねばならない。更に、液状分析試験糸は個々
の試験ごとに溶液ｐｔ製を必要とする。新生児のＣＦに
ついて、より多くのスクリーニング（検査選別）を行な
わんとするためには、更に便利な試験系、好ましくは浸
漬−読み取り試薬片が必要とされる。本発明はかかる浸
漬−読み取り試験具に関する。

本発明は、胎便試料中ラクターゼ活性の検出用試験具に
関する。この試験具は、担体マトリック−スにラクトー
ス、グルコース分析系及び非イオン界面活性剤を含浸せ
しめた本のである。

この試験具は、細長い担体材料のシートにラクトース、
グルコース分析系及び非イオン界面活性剤を包含せしめ
た本のとして、製造してもよい。

これらの細長いシートは、ひとまきのロールの形状をと
ってもよく、ろ紙などの材料から作られる。この試験具
は、ラクトース、グルコース分析系及び非イオン界面活
性剤を含有する浴液を担体に含浸させ、しかる後にこの
含浸担体を乾燥することにより製造される。担体という
用＠Ｆｉ、生理学的液体又は他の液体にざらされた時、
不溶でかつそれらの構造上の一体性を保持するマトリッ
クスを指している。使用司能な適切なマトリックスとし
てｌｌ１１紙、セルロース、木材、合成樹脂フリース、
ガラス繊維、不織布及び織布、ゼラチン、ポリプロピレ
ンのような楡々の有機ポリマー及び当業者に、皮膜形成
剤としてよく知られている他の有機材料が挙けられる。

あるいは、担体は、従来Ｏ担体材料を含む圧縮錠剤又は
成形錠剤の形状をとってもよい０便利のよいように担体
は、ポリスチレンから製作しつル不溶性支持体もしくは
把持部材に適切に付着させうる。ラクターゼ検出溶液を
担体に包含させるには、担体上に試験組成物を含浸、印
刷又は噴霧するなど適切な方法によって行うことができ
る。

約１〜４重量バーセントのラクトースがｔ在する。好ま
しいｉｔは約り重搦、パーセントである。

クルコース分析系は、そのアルキル基が炭素数１〜４個
のアルキル基である３、３’、５．５’−テトラアルキ
ルベンジジン指示薬、好ましくは３゜３’、５．５’−
テトラメチルベンジジンを含ｔｒ。同様に一使用しうる
他物質としてａ、　　３．３’−ジメチル−５，５′−
ジエチルベンジジン及び３．３’、５．５’−テトラエ
チルベンジジンが挙げられる。

グルコース分析系は、胎便中に存在するラクターゼによ
ってラクトースをグルコースに転化することによって生
成されたグルコースと反応して、過酸化水素のような所
定の反応生成物を生成するグルコース酵素を含む。例え
ば、かび類から得られるグルコース酸化酵素を用いるこ
とができる。

好ましくは、二元酵素系が存在する。即ち、ある１つの
酵素が、グルコースを転化して過酸化水素を生成し、一
方、他の＃索が過酸化物活性化能を有する。本発明に有
用な、過酸化物活性化能を有する物質は、種々の有機及
び無機源から選択可能である。西洋ワサビペルオキシダ
ーゼ又はジャガイモペルオキシダーゼのような植物性ペ
ルオキシダーゼ類を用いることができる。

過酸化物活性化能を有する無機化合物としては、・ヨウ
化ナトリウム及びヨウ化アンモニウムのようなヨウ素化
物類、及びモリブデン酸カリウム及びモリブデン酸ア・
ンモニクムのようなモリブデン酸塩類が挙げられる。更
に、過酸化物活性化能を有するウロヘミン及び多数の他
のポルフィリン系物質を用いることができる。＃索類で
はないが、過酸化物活性化能を有する他の物質としては
、チオシアン酸鉄、タンニン酸鉄、フェロシアン酸第１
＃、ｉｌ酸クロムカリウム等が挙げられる。

当業者に知られている他のグルコース分析系も本発明に
おいて使用可能である。例えば、テトラゾリウム塩の存
在下で呈色するグルコース脱水素酵素を用いる試験系で
ある。

組成物中に存在する界面活性剤は非イオン界面活性剤で
ある。上述の配合物にかかる界面活性剤を用いると、高
い感度を有する試験具の製造が可能となる。すなわち、
ラクターゼ含有の胎便試料の存在下で、試験片は１〜２
分内に正の色を呈する。本発明に用いるための適切な非
イオン界面活性剤としてＦｉ、アルカノールアミド類、
ポリオキシエチレンアルカノールアミドエーテル類、ポ
リオキシエチレンフェノールエーテル類及びポリオキシ
エチレン脂肪アルコールエーテル類である。

非イオン界面活性剤の使用′Ｉｋｉｌｔ、約０．１〜１
．０重量パーセン）（”／ｖ）の範囲内でありうる。

好ましい量は約０．２５重量バー七ントである。

より多量の界面活性剤の存在は、試験具中に存在する酵
素に対し有害となることがめる。

本発明の試験具は、ラクターゼ活性の検出に対して高い
感度を有する。胎便試料は、水に浸漬せずに、本発明の
試験具を用いて試験することが可能である。胎便の非常
に薄いフィルムを試験具上に塗りつける仁とが必１１！
＆だけである。

もし、試料がラクターゼ活性を有するならば、容易に視
覚に感じられる青色が、胎便の真下に現われる。

メチルビニルエーテル及び無水マレイン酸の共１合体も
又、本発明のラクターゼ検出試験具の配合物において有
用である。かかる共１合体の１つは、ニューヨーク州、
ニューヨーク市ノジーエーエフ（ＧＡＦ）により、カン
トレッッ（Ｑａｎｔｒｅｚ　）　ＡＮ　−１３９として
市販されている。

この共重合体をアルコールに溶解させると、部分エステ
ル誘導体が生成し、この共重合体を水に溶解させると、
酸誘導体が生成する１本発明に従って製造された試験手
段は、通常、アルコール水溶液から製造するので、最終
製品における試験組成物は、酸誘導体か部分エステル誘
導体か、あるいはこれら誘導体の混合物を含有するであ
ろう。例えば、約４０．０００の平均分子量を有するポ
リビニルピロリドン（ＰＶＰ）と共に前述の共重合体の
誘導体が存在すると、ペルオキシダーゼの存在下で、呈
色指示薬が過酸化水素によって酸化される際、呈色が大
幅に強められる。この色の増強は、胎便試料中のラフ）
　−スがグルコースに転化することにより生じたグルコ
ースの存在、したがって、ラクターゼ活性の正の指示を
検出することにおいて助けとなる。

実施例に用いられた西洋ワサビペルオキシダーゼ及びグ
ルコース酸化酵素はインディアナ州エルクハートのマイ
ルス・ラボラトリーズ・インコーホレーテッドのザ・リ
サーチ・プロダクツ・ディビジａ　ｙ　（ｔｈｅ　Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ　ＰｒｏｄｕｃｔｓＤｉｖｉｓｉｏｎ　、
Ｍｉ　ｌｅｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　、　Ｉｎｃ
、　、　Ｅｌｋｈａｒｔ。

Ｉｎｄｉａｎａ　）より入手された。メチルビニルエー
テルと無水マレイン酸の共重合体（ガントレツツＡＮ−
１３９）及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ　）はＧＡ
Ｆより得た。溶液調製に用い良溶媒は、水、生理学的溶
液、メタノールのような有機溶媒又はそれらの混合物で
あってもよい。

実施例１ ラクターゼ活性の検出用浸漬−読みとり試験具Ｆｉ、二
段階含浸操作を用いて調製された。第１の溶液＃ｉ、以
下の第１表に示された物質を混合することによって調製
された。

第　　　１　　　表 １．３７　Ｍクエン酸塩緩衝溶液ｐｔ１５，０　１５・
０１１７　　０・２０９１ペルオキシダーゼ（ｌｓ　ａ
　Ｕ／＃）　ｓｏ、ｏミリρムｏ、５−（ｍｇ） ラクトース　　　　　　　　　　３．０グラム　３．０
％（９） ２０ｔｓｗ／ｖアスコルビン酸薫矢矢　１０マイクロリ
ツトル　０Ｄ０２　％（μ）） 蒸　　留　　水　　　　　　　　　加えて、総量ＩＱＱ
ａ４とする。

矢　ＰｖＰけに２９−３２の商品名でＧＡＦより市販。

−ｎポリオキシエチレンエーテル化された脂肪アルコー
ルは、０Ｎ−８７０の商品名でＧＡＦより市販。

薫薫矢ｐ　ｖ　ｐ中に過酸化物が混入している結果とし
て生成する酸化指示薬を減少させるために添加される。

添加量は、浸漬液を当量点まで適宜することによって、
決定される。

ホワット７　：／　（Ｗｈａｔｍａｎ　）　５４のろ紙
シートを、この含浸溶液で飽和するまで含浸し、５０〜
５５Ｃで約１５分間乾燥した。この含浸されたシートは
１次に、０．１パーセント０Ｎ−８７０を含む、５ミリ
モル濃度（ｍＭ）の３　＋　３’　、５．５’　−テト
ラメチルペンジジ／のア七トン溶液で、飽和するまで含
浸し、５０〜５５Ｃで１分間乾燥した。

このようにして製造されたろ紙を、０．２センチメート
ル（ｃｗｓ、　）　Ｘ　Ｏ，４ｃｔｎに切断し、試験具
を形成した。

次に１．この試験具を両面接着テープで裏うちし、これ
によってポリスチレン支持部材に固定した。試験具は２
つの方式によって評価した。

第１の方式では、胎便の薄層を試験具上に塗りつけた。

スパチュラで試験具をこすることによって、すべての過
剰物を除去するよう注意を払った。強いラクターゼ活性
を有することが判っている病態胎便試料＃ｉ、それが試
験具と接触したところに青色呈色を示した。明らかに、
試験具中で酵素反応がおこるに十分な水が胎便中に存在
する。

第２の方式では、胎便の塗布ののちに、−滴の水を試験
真上に滴下した。このことは呈色を強めるのに役立った
。

対照として、ラクターゼ活性を全く有しないことが判っ
ている胎便試料を本発明の試験具で試験した。試験は、
ラクターゼ活性について負の結果を与えた。

従って、この実施例における試験は、本発明の試験具が
、胎便試料中のラクターゼ活性を正確、迅速かつ容易に
検出することが可能であることを、示している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｔ　担体マトリックス１．及びその中に、ラクトース、
   グルコース分析系及び非イオン界面活性剤を包含せしめ
   てなることを特徴とする胎便試料中ラクターゼの検出用
   試験具。 ２　グルコース分析系が、　　３．３’、５．５’−テ
   トラアルキルベンジジン指示薬、グルコース酸化酵素及
   び過酸化物活性化物質からなる特許請求の範囲第１項記
   載の胎便試料中ラクターゼの検出用試験具。 五　過酸化物活性化物質がペルオキシダーゼである特許
   請求の範囲第１項記載の胎便試料中ラクターゼの検出用
   試験具。 ４、　指示薬が３．３’、５，５’−テトラメチルベン
   ジジンである特許請求の範囲第１項記載の胎便試料中ラ
   クターゼの検出用試験具。 ５　約１〜４重量パーセントのラクトースが存在する特
   許請求の範囲第１項記載の胎便□試料中ラクターゼの検
   出用試験具。 ＆　約０．１〜１重量パーセントの非イオン界面活性剤
   が存在する特許請求の範囲第１項記載の胎便試料中ラク
   ターゼの検出用試験具。 ｌ　非イオン界面活性剤が、ポリオキシエチレン脂肪ア
   ルコールエーテルである特許請求の範囲第１項記載の胎
   便試料中ラクターゼの検出用試験具。 ８、担体マトリックス及びその中に、ラクトース、グル
   コース分析系として３．３’、５．５’−テトラメチル
   ベンジジン、グルコース酸化酵素、ペルオキシダーゼ、
   及び非イオン界面活性剤としてポリオキシエチレンオレ
   イルアルコールエーテルを包含せしめてなる特許請求の
   範囲第１項記載の胎便試料中ラクターゼの検出用試験具
   。