JPS58212799A - 糖転移酵素の活性測定法 - Google Patents
糖転移酵素の活性測定法Info
- Publication number
- JPS58212799A JPS58212799A JP9598682A JP9598682A JPS58212799A JP S58212799 A JPS58212799 A JP S58212799A JP 9598682 A JP9598682 A JP 9598682A JP 9598682 A JP9598682 A JP 9598682A JP S58212799 A JPS58212799 A JP S58212799A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- activity
- transferase
- type
- acetylgalactosamine
- measuring
- Prior art date
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- Granted
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血漿、人乳、胃粘膜等に見出されるＡ型の血液
型物質の生合成に関辱する糖転移酵素であるα−Ｎ−ア
セチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（以下Ａ−
トランスフェラーゼと称する）活性の測定法に関するも
のであり、これをさらに詳しくいえば、０型赤血球にＮ
−アセチルガラクトサミン供与体の存在ＦでＡ−トラン
スフェラーゼを作用せしめてこれをＡ型光血球に転換し
、その抗Ａ血清との凝集の強さからＡ−トランスフェラ
ーゼ・油性を測定する方法において、ｈ−アセナルガシ
ク）−１／ミン供辱体としてウリジンニ燐酸−Ｎ−アセ
ナルグルコサミン（以下ＵＤ）’Ｇ１ｃＮＡｃと称する
）をバナルスズプチリスのＵυＰＧ１ｃＮＡｃ −４−
エビメフーゼを用いてウリジンニ＃［−Ｎ−アセチルガ
ラクトサミン（以下ＵＤＰＯａｌＮＡｅと称する）・＼
変換せしめたＵＬＩＰＧｌｃＮＡｃとＬＩＤＰＪａｌＮ
Ａｃの混合物を用いることを特徴とするものでｈる。
型物質の生合成に関辱する糖転移酵素であるα−Ｎ−ア
セチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（以下Ａ−
トランスフェラーゼと称する）活性の測定法に関するも
のであり、これをさらに詳しくいえば、０型赤血球にＮ
−アセチルガラクトサミン供与体の存在ＦでＡ−トラン
スフェラーゼを作用せしめてこれをＡ型光血球に転換し
、その抗Ａ血清との凝集の強さからＡ−トランスフェラ
ーゼ・油性を測定する方法において、ｈ−アセナルガシ
ク）−１／ミン供辱体としてウリジンニ燐酸−Ｎ−アセ
ナルグルコサミン（以下ＵＤ）’Ｇ１ｃＮＡｃと称する
）をバナルスズプチリスのＵυＰＧ１ｃＮＡｃ −４−
エビメフーゼを用いてウリジンニ＃［−Ｎ−アセチルガ
ラクトサミン（以下ＵＤＰＯａｌＮＡｅと称する）・＼
変換せしめたＵＬＩＰＧｌｃＮＡｃとＬＩＤＰＪａｌＮ
Ａｃの混合物を用いることを特徴とするものでｈる。
血清めるいは血漿中のＡ−）ランスフエラーゼ活性の測
定は血液型判定の困難な変異型の検索や同定の手段とし
てのみならず白血病や、がん化に伴う糖代ｉ；１！ｃ−
常との関連からも重賛性を増している。
定は血液型判定の困難な変異型の検索や同定の手段とし
てのみならず白血病や、がん化に伴う糖代ｉ；１！ｃ−
常との関連からも重賛性を増している。
従来Ａ−トランスフェラーゼの活性を測定する方法とし
ては （Ｂ） ｏ型赤血°球を酵素、Ｕｌ、ｌｒ Ｇａ１Ｎ
Ａ ｅと反応させＡ型光血球に転換さｎた度合を抗Ａ血
清との凝集の強さから測る方法や ■ ２−フコシルラクトースのよりなロエ溶性の糖受容
体を酵素とアイ）ソトープでラベルした糖供与体と反応
させ受容体に転移さｎたアイソトーフ活性を測る方法な
どが知らＩＬ′Ｃいる。しかしながら、■のアイソトー
プを１ψ用する方法は取扱いや経費等の点から日常の検
査には不適当でめる。一方■の方法は一般の研究室や検
査室においても簡便に行なえる手法であるが、基質のＵ
ｌ）Ｐ Ｇａ１ＮＡｃの入手が極めて困難でめるところ
から実用化されるに至っていない。
ては （Ｂ） ｏ型赤血°球を酵素、Ｕｌ、ｌｒ Ｇａ１Ｎ
Ａ ｅと反応させＡ型光血球に転換さｎた度合を抗Ａ血
清との凝集の強さから測る方法や ■ ２−フコシルラクトースのよりなロエ溶性の糖受容
体を酵素とアイ）ソトープでラベルした糖供与体と反応
させ受容体に転移さｎたアイソトーフ活性を測る方法な
どが知らＩＬ′Ｃいる。しかしながら、■のアイソトー
プを１ψ用する方法は取扱いや経費等の点から日常の検
査には不適当でめる。一方■の方法は一般の研究室や検
査室においても簡便に行なえる手法であるが、基質のＵ
ｌ）Ｐ Ｇａ１ＮＡｃの入手が極めて困難でめるところ
から実用化されるに至っていない。
ＵＤＰＧａｌＮＡｃは有機合成法により合成する方法Ｃ
Ｊ、Ｂｉａｌ、Ｃｋｅｍ、２５８，８７７−８７９ （
１９７８） ］ も知られ、Ｊいるが、大量かつ安価
にＵｉｌＰＵａｌＮＡＣを調製すｊｌ＋’ （−ｐことは不−ｒ能であった。
Ｊ、Ｂｉａｌ、Ｃｋｅｍ、２５８，８７７−８７９ （
１９７８） ］ も知られ、Ｊいるが、大量かつ安価
にＵｉｌＰＵａｌＮＡＣを調製すｊｌ＋’ （−ｐことは不−ｒ能であった。
し
用いＣも前記■の方法によするＡ−トランスフェラーゼ
の活性測定が一１能であることを貝出し、本発明に到っ
た。
の活性測定が一１能であることを貝出し、本発明に到っ
た。
本発明の目的はＵＤｒＵｌｃＮＡｃより酵素的に変換し
たＵＬＩＰＧａｌＮＡｃを祐製することなく、そ〜ｕ、
＋ ｉま基質として用いるＡ−１フンスフエフーセの活
性測定法を提供するシこ必る。
たＵＬＩＰＧａｌＮＡｃを祐製することなく、そ〜ｕ、
＋ ｉま基質として用いるＡ−１フンスフエフーセの活
性測定法を提供するシこ必る。
その要旨は０型赤血球のＡ型赤血球への転換反応を利用
してＡ−）ランスフェラーゼの活性を測定する方法にお
い゛Ｃ１基質とし−（ＵＤｒＵｌｃＮＡｃを酵素的にｔ
Ｊｉ）ＰＣ）ａｌ［ＩＡｃ ｆこ変換せしめた反応液を
直接用いること全特徴とする糖転移酵素の活性測定法で
ある。
してＡ−）ランスフェラーゼの活性を測定する方法にお
い゛Ｃ１基質とし−（ＵＤｒＵｌｃＮＡｃを酵素的にｔ
Ｊｉ）ＰＣ）ａｌ［ＩＡｃ ｆこ変換せしめた反応液を
直接用いること全特徴とする糖転移酵素の活性測定法で
ある。
本発明の方法により、従来測定が極めて困難−’１つた
Ａ−トランスフェラーゼの活性を一般・・−ゼ活性の測
定はＡ亜型やボンペイ型のような判定の困難な血液型の
同定手段とし”Ｃ注目されており、従来一般に竹なわれ
でいる解離試験などではその判定ｆと２〜８日を嶽した
ものが、本発明の方法によってＡ−トランスフエラ ゼ
活性を測定することにより２〜３時間で４−ＩＪｍでき
るなど、本発明の効果は極めＣ尺きいものである。
Ａ−トランスフェラーゼの活性を一般・・−ゼ活性の測
定はＡ亜型やボンペイ型のような判定の困難な血液型の
同定手段とし”Ｃ注目されており、従来一般に竹なわれ
でいる解離試験などではその判定ｆと２〜８日を嶽した
ものが、本発明の方法によってＡ−トランスフエラ ゼ
活性を測定することにより２〜３時間で４−ＩＪｍでき
るなど、本発明の効果は極めＣ尺きいものである。
本発明に用いる粗ＵＤｔ・ｊａｌｆＪＡｃ樟品は次のよ
うに［７て調製することができる。Ｕｌ−Ｊ上＜Ｊｌｃ
ＮＡｃ ｌ ｍモルに０．１Ｍ）リス塩酸緩衝液（Ｐ
Ｈ８，０）中で１６ｍ Ｍ ｔＡｇ、Ｃ１，オよびｌ
ｒｎ Ｍ ＥＤＴ’Ａ存在下Ｖ（，２（チルス・ズ
ブチリス菌体より１！ｌ製した１Ｊ１））’ＧＩＣＮＡ
Ｃ−４−エピメラーゼ酵素を添加し３７℃に゛Ｃ９０分
間反応させる。反応後、沸騰湯浴中で数分間加熱し“Ｃ
反応を停圧し、冷却後１０，００１で１０分間遠心分離
して得られた上清を粗ＵＤＰＧａｌＮＡｃ標品とした。
うに［７て調製することができる。Ｕｌ−Ｊ上＜Ｊｌｃ
ＮＡｃ ｌ ｍモルに０．１Ｍ）リス塩酸緩衝液（Ｐ
Ｈ８，０）中で１６ｍ Ｍ ｔＡｇ、Ｃ１，オよびｌ
ｒｎ Ｍ ＥＤＴ’Ａ存在下Ｖ（，２（チルス・ズ
ブチリス菌体より１！ｌ製した１Ｊ１））’ＧＩＣＮＡ
Ｃ−４−エピメラーゼ酵素を添加し３７℃に゛Ｃ９０分
間反応させる。反応後、沸騰湯浴中で数分間加熱し“Ｃ
反応を停圧し、冷却後１０，００１で１０分間遠心分離
して得られた上清を粗ＵＤＰＧａｌＮＡｃ標品とした。
上記本発明の粗ＵＤ■ａｌＮＡｃ標品を用い°Ｃ血清中
のＡ−）ランスフェラーゼ活性を測定する具試験管にカ
コジル酸緩衝液ＣＰＨ６，５） ０．２ ｄ、Ａ型血清
（被検Ａ−ｉランス７エラーゼ含有）０．５ｍをとり、
粗σＤＰＧａｉｌＪＡｃ標品０．１ｍを加え８７℃で５
分間予備加温した。次に洗浄５０％０型赤血球浮遊液を
０．０５ｄ加え、３７℃にて２時間ｔａとう反応を行な
った。反応終ｆ後生理食塩水で２回洗浄しＣ反応を停市
し、固液１−に懸濁し／ζ。この懸濁液を倍数右釈した
抗Ａ血清と作用させたところ６４倍希釈士で凝集が認め
らｊ’した。
のＡ−）ランスフェラーゼ活性を測定する具試験管にカ
コジル酸緩衝液ＣＰＨ６，５） ０．２ ｄ、Ａ型血清
（被検Ａ−ｉランス７エラーゼ含有）０．５ｍをとり、
粗σＤＰＧａｉｌＪＡｃ標品０．１ｍを加え８７℃で５
分間予備加温した。次に洗浄５０％０型赤血球浮遊液を
０．０５ｄ加え、３７℃にて２時間ｔａとう反応を行な
った。反応終ｆ後生理食塩水で２回洗浄しＣ反応を停市
し、固液１−に懸濁し／ζ。この懸濁液を倍数右釈した
抗Ａ血清と作用させたところ６４倍希釈士で凝集が認め
らｊ’した。
比較例
反応の基質とし′Ｃ粗ＵＩＪＰＧａｌｌＪＡｃ 悼晶の
代りに単離精製したＵｌ、ｌ再ａｌＮＡｅ を用い゛〔
実施例と同様にしｃＡ−トランスフェラーゼ活性の測定
を行な）だ。精製したＵυＰυａｌｔｌＡ、： 會Ｆ１
１いた工易合でも抗Ａ血清による凝集は実施例と同じく
６４倍希の基質とし−Ｃは粗ＬＪ ＩＪｌ’六〇ａｌＮ
Ａｃ標品で十分良い給米が得ら扛ること／ｌ吻くさｔし
た。
代りに単離精製したＵｌ、ｌ再ａｌＮＡｅ を用い゛〔
実施例と同様にしｃＡ−トランスフェラーゼ活性の測定
を行な）だ。精製したＵυＰυａｌｔｌＡ、： 會Ｆ１
１いた工易合でも抗Ａ血清による凝集は実施例と同じく
６４倍希の基質とし−Ｃは粗ＬＪ ＩＪｌ’六〇ａｌＮ
Ａｃ標品で十分良い給米が得ら扛ること／ｌ吻くさｔし
た。
出願人・製鉄化学工業株式会社（ほか１名）代表者 １
（々木 清
（々木 清
Claims (1)
- （１）Ｏ型赤血球のＡ型光血球への転換を利用してａ−
Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼの活
性を測定する方法ｔこおいて、転換反応の基ノ鉤として
ウリジ／二燐酸−Ｎ−アセチルグルコサミンを酵素的に
ウリンンニ燐酸−Ｎ−アセチルガラクトサミンに変換せ
しめた反応液を直接用いることを特徴とする糖転移酵素
の活性測定法。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9598682A JPS58212799A (ja) | 1982-06-03 | 1982-06-03 | 糖転移酵素の活性測定法 |
| US06/499,919 US4569909A (en) | 1982-06-03 | 1983-06-01 | Process for preparing uridine diphosphate-N-acetylgalactosamine |
| DE8686116536T DE3381140D1 (de) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Verfahren zum messen der aktivitaet von glycosyl-transferase. |
| EP86116537A EP0220750B1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | A process for preparing uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| EP86116535A EP0223263A3 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | A process for purifying uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| DE8686116537T DE3381203D1 (de) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Verfahren zur herstellung von uridindiphosphat-n-acetylgalactosamin. |
| EP83303192A EP0096547B1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Process for preparing uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| EP86116536A EP0223264B1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | A method for measuring the activity of glycosyl transferase |
| DE8383303192T DE3376020D1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Process for preparing uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| US06/705,217 US4604349A (en) | 1982-06-03 | 1985-02-25 | Process for preparing uridine diphosphate-N-acetylgalactosamine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9598682A JPS58212799A (ja) | 1982-06-03 | 1982-06-03 | 糖転移酵素の活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58212799A true JPS58212799A (ja) | 1983-12-10 |
| JPS6139039B2 JPS6139039B2 (ja) | 1986-09-02 |
Family
ID=14152453
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9598682A Granted JPS58212799A (ja) | 1982-06-03 | 1982-06-03 | 糖転移酵素の活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58212799A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0315761A (ja) * | 1989-03-15 | 1991-01-24 | Sumitomo Seika Chem Co Ltd | 糖転移酵素の活性測定方法およびその用途 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3018758U (ja) * | 1995-05-30 | 1995-11-28 | 株式会社スズキ企画 | 鍋および鍋の油飛散防止板 |
-
1982
- 1982-06-03 JP JP9598682A patent/JPS58212799A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0315761A (ja) * | 1989-03-15 | 1991-01-24 | Sumitomo Seika Chem Co Ltd | 糖転移酵素の活性測定方法およびその用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6139039B2 (ja) | 1986-09-02 |
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