JPS58209993A - インタ−フエロンの産生方法 - Google Patents
インタ−フエロンの産生方法Info
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- JPS58209993A JPS58209993A JP57092583A JP9258382A JPS58209993A JP S58209993 A JPS58209993 A JP S58209993A JP 57092583 A JP57092583 A JP 57092583A JP 9258382 A JP9258382 A JP 9258382A JP S58209993 A JPS58209993 A JP S58209993A
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- Japan
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- medium
- interferon
- polyhydric alcohol
- cells
- production
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/565—IFN-beta
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines
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- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は培誉細胞からインターフェロンを産生する際に
多価アルコールを用いることによるインターフェロンの
大量生産方法、に関するものである。
多価アルコールを用いることによるインターフェロンの
大量生産方法、に関するものである。
長野ら（Ｃｏｍｐｔ、 Ｒｅｎｄ、 Ｓｏｃ、 Ｂｉｏ
ｌ−＋１４８巻、１７００頁。
ｌ−＋１４８巻、１７００頁。
１９５４年）およびｌ５ａａｃｓら（Ｐｒｏｃ、 Ｒｏ
ｙ、 Ｓｏｃ、 ５ｅｒＢ、１４７巻、２５８頁、 １
９５７年）によって発見されたインターフェロンは、抗
ウイルス作用以外に、近年抗腫瘍効果を含む多岐にわた
る生物学的作用を有する事が報告され（Ｇｒｅｓｓｏｒ
、 ＩらＢ、 Ｂ、 Ａ、。
ｙ、 Ｓｏｃ、 ５ｅｒＢ、１４７巻、２５８頁、 １
９５７年）によって発見されたインターフェロンは、抗
ウイルス作用以外に、近年抗腫瘍効果を含む多岐にわた
る生物学的作用を有する事が報告され（Ｇｒｅｓｓｏｒ
、 ＩらＢ、 Ｂ、 Ａ、。
５１６巻、２６１頁、 １９７８年）、医薬としての
可能性が注目を集めている。現在、インターフェロンは
大きく５橿に分類名れ、それぞれインターフェロン−α
、インターフェロン−β、インターフェロン−γと命名
されている（Ｎａｔｕｒｅ。
可能性が注目を集めている。現在、インターフェロンは
大きく５橿に分類名れ、それぞれインターフェロン−α
、インターフェロン−β、インターフェロン−γと命名
されている（Ｎａｔｕｒｅ。
２８６巻、１１０貞、 １９８０年）。インターフェ
ロン−ｄは培養した白血球ｌたはリンパ芽球を、各種の
ウィルス、たとえばセンダイウィルス（ＨＶＪ）、ニュ
ーキャスルデイシーズウィルス（ＮＯＶ）、−ＥｆｃＨ
インフルエンザウィルスなどで刺激することによっ−Ｃ
誘起される。
ロン−ｄは培養した白血球ｌたはリンパ芽球を、各種の
ウィルス、たとえばセンダイウィルス（ＨＶＪ）、ニュ
ーキャスルデイシーズウィルス（ＮＯＶ）、−ＥｆｃＨ
インフルエンザウィルスなどで刺激することによっ−Ｃ
誘起される。
インターフェロン−βは正常二倍体細胞を各種のウィル
ス、たとえばＨＶＪ、 ＮＬ）Ｖ、インフルエンザウィ
ルスや二重鎖■ζＮＡ等で誘起して得られる。この方法
は近年大きな発展をとげた。たとえばＶｉｌｃｅｋら（
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、Ａｇ、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、
２巻、４７６頁、 １９７２年）によるスーツ々−
インダクションは二重鎖ＲＮＡ等の誘起剤で細胞を刺激
した鎌、シクロヘキシばド、アクナノマイシンＤなどの
代謝阻害剤で処理する方法であり、インターフェロン−
βの産生を著しく増強させた。
ス、たとえばＨＶＪ、 ＮＬ）Ｖ、インフルエンザウィ
ルスや二重鎖■ζＮＡ等で誘起して得られる。この方法
は近年大きな発展をとげた。たとえばＶｉｌｃｅｋら（
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、Ａｇ、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、
２巻、４７６頁、 １９７２年）によるスーツ々−
インダクションは二重鎖ＲＮＡ等の誘起剤で細胞を刺激
した鎌、シクロヘキシばド、アクナノマイシンＤなどの
代謝阻害剤で処理する方法であり、インターフェロン−
βの産生を著しく増強させた。
インターフェロン−γｆｌＴリンパ球ニフィトヘマグル
チニン（Ｐｉ−ＩＡ）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ
）などのマイトゲンあるいは抗原抗体反応などで刺激を
与えると誘起される。また細ｊＭを各ａ！誘起剤で刺激
する前にインターフェロンを含む培地で一晩培養するこ
とにより、インターフェロンの生殖が上昇することが仰
られておシ、この効果をプライミング効果と呼んでいる
。
チニン（Ｐｉ−ＩＡ）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ
）などのマイトゲンあるいは抗原抗体反応などで刺激を
与えると誘起される。また細ｊＭを各ａ！誘起剤で刺激
する前にインターフェロンを含む培地で一晩培養するこ
とにより、インターフェロンの生殖が上昇することが仰
られておシ、この効果をプライミング効果と呼んでいる
。
本発明はプライミング培地、ｈり起時の培地および／ま
たは生産培地へ多価アルコールを添加するかあるいは培
地を交換する際に培養細胞をφ価アルコールを含有する
溶液と一過性に接触させるか又はこれらの処理を併用す
ることによる高単位インターフェロンの産生方法である
。
たは生産培地へ多価アルコールを添加するかあるいは培
地を交換する際に培養細胞をφ価アルコールを含有する
溶液と一過性に接触させるか又はこれらの処理を併用す
ることによる高単位インターフェロンの産生方法である
。
本発明で使用する多価アルコールは、−分子中に２つ以
上のアルコール性ＯＨ基を肩する物質である。分子量が
大きくても使用濃度で培地等に可溶性であり、細胞毒性
を示さない限り使用し得る。たとえばポリエチレングリ
コール（平均分子量２００〜２００００ ）、ジオール
タイプポリプロピレングリコール（平均分子量１０００
〜５０００）、トリオールタイプポリプロピレングリコ
ール（重合度５００〜２０００）、エチレングリコール
、プロパンジオール、グリセリン、ブタンジオール、ブ
タントリオール、ブタンテトロール、−ベンタンジオー
ル、ペンタエ’ＪトＩＪ）−ル等が使用できる。使用す
べき一度は培養細胞の種類、培地の柵類、誘起剤の種類
および使用する多価アルコールの種類等によって異なる
ので、最も過当な一度は実験的に定めるが、一般的には
、培地に添加する場合は約１００１〜３０％、好１しく
は約［１１〜５ｑｂ、一過性に細胞と接触嘔せる場合は
約［１，１〜６０％、好１しくに約１〜５０％を基準と
して使用壊れる。
上のアルコール性ＯＨ基を肩する物質である。分子量が
大きくても使用濃度で培地等に可溶性であり、細胞毒性
を示さない限り使用し得る。たとえばポリエチレングリ
コール（平均分子量２００〜２００００ ）、ジオール
タイプポリプロピレングリコール（平均分子量１０００
〜５０００）、トリオールタイプポリプロピレングリコ
ール（重合度５００〜２０００）、エチレングリコール
、プロパンジオール、グリセリン、ブタンジオール、ブ
タントリオール、ブタンテトロール、−ベンタンジオー
ル、ペンタエ’ＪトＩＪ）−ル等が使用できる。使用す
べき一度は培養細胞の種類、培地の柵類、誘起剤の種類
および使用する多価アルコールの種類等によって異なる
ので、最も過当な一度は実験的に定めるが、一般的には
、培地に添加する場合は約１００１〜３０％、好１しく
は約［１１〜５ｑｂ、一過性に細胞と接触嘔せる場合は
約［１，１〜６０％、好１しくに約１〜５０％を基準と
して使用壊れる。
インターフェロン産生細胞としては、ヒトニ培体細胞で
あるＭＲＣ−５細胞、ヒドリ／バ芽球細胞であるＮａｍ
ａ ｌ ｗａ細胞の他、ヒＩ−Ｔ細胞およびマウスＬ９
２９細胞、他のヒト細胞、たとえはＷＩ−３８細胞、Ｉ
ＭＲ−９０細胞、ＭＧ６５細胞、Ｂａ ｌ ｌ−１細胞
、Ｆ’ｌｏｗ １０００細胞、Ｆ１０Ｗ４ＵＯＯ細胞嘔
らに他の動物細胞、たとえはＲＫ１３細胞、ＭＤＢＫ細
胞、および種々の動物初代培養細胞も使用し得る。
あるＭＲＣ−５細胞、ヒドリ／バ芽球細胞であるＮａｍ
ａ ｌ ｗａ細胞の他、ヒＩ−Ｔ細胞およびマウスＬ９
２９細胞、他のヒト細胞、たとえはＷＩ−３８細胞、Ｉ
ＭＲ−９０細胞、ＭＧ６５細胞、Ｂａ ｌ ｌ−１細胞
、Ｆ’ｌｏｗ １０００細胞、Ｆ１０Ｗ４ＵＯＯ細胞嘔
らに他の動物細胞、たとえはＲＫ１３細胞、ＭＤＢＫ細
胞、および種々の動物初代培養細胞も使用し得る。
インターフェロン誘起剤としてはポリ（Ｉ）−ポリ（Ｃ
）、）ｉＶＪ、 ＮＤＶ、 ＣｏｎＡの他、他の誘起剤
たとえばクラミジア、リケッチア、マイトゲン、リボ多
糖類を用いることが可能である。
）、）ｉＶＪ、 ＮＤＶ、 ＣｏｎＡの他、他の誘起剤
たとえばクラミジア、リケッチア、マイトゲン、リボ多
糖類を用いることが可能である。
各細胞の培養培地としてはイーグルＭＥＭ培地、ＲＰＩ
ＶＩＩ １６４０培地を用いるのが一般的であるが他
の培地、たとえばＭｃｏｙＳ ＡＪｆ地、１９９培地、
ハム培地、Ｌ１５培地などを使用することかり能である
。
ＶＩＩ １６４０培地を用いるのが一般的であるが他
の培地、たとえばＭｃｏｙＳ ＡＪｆ地、１９９培地、
ハム培地、Ｌ１５培地などを使用することかり能である
。
インターフェロン産生培地としては、イーグルＭＥＭ培
地のみならず、平衡塩類ｍ液、例えばハンクス液、ＰＢ
Ｓ−浴液などを用いることが可能である。
地のみならず、平衡塩類ｍ液、例えばハンクス液、ＰＢ
Ｓ−浴液などを用いることが可能である。
’！ｆＣ，培養細胞と多価アルコール金倉む溶液・と全
接触させる場合の多１曲アルコールの溶媒としてはＰＢ
Ｓ の他、他の塩類浴液、例えばハンクス液、アール
液あるいは培養液を使用することができる。
接触させる場合の多１曲アルコールの溶媒としてはＰＢ
Ｓ の他、他の塩類浴液、例えばハンクス液、アール
液あるいは培養液を使用することができる。
次に、実験例により多価アルコールのインターフェロン
産生に対する効果を説明する。
産生に対する効果を説明する。
実験例１
インターフェロン−β産生に対する多価アルコールの効
果を調べた。
果を調べた。
ヒト二倍体細胞であるＭＲＣ−５細胞ｉ１０％仔牛血清
添加イーグルＭＥＭ培地を用いてプラスチック製培養フ
ラスコにて３７狐５％ＣＯ２’Ｆで培養し、細胞が単細
胞層（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ）形成後、培地ｋ １００単
位／ ｓｔｌのインターフェロン−βを含む０．１％ヒ
ト血清アルブミン含有イーグルｉＶＩＥＭ培地と交換し
て、−晩培養した。次いで、この培地にポリ（Ｉ）・ポ
リ（Ｃ）およびサイクロへキシミド／ｃ終濃贋それぞれ
５０μ汁家および２μｒ／ｍＪとなる様に添加して５時
間培養した後、更に、アクチノマイシンＤヲ１μか實と
なる様に絡加して２時間培養した。次に、この細胞をＰ
ＢＳ−で２度洗浄して生産培地（０，１％ヒト血清アル
ブミン含南イーグル＋ｖｉＥＭ培地）に交換し、−晩培
誉した。インターフェロンの力価はＦＬ細胞−シンドビ
スウィルス系によるＣＰＥ （Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ
ｅｆｆｅｃｔ）法（小長谷ら蛋白質核酸酵素 別冊２５
号、貞６５５〜頁５６５．１９８１年）により測定した
。
添加イーグルＭＥＭ培地を用いてプラスチック製培養フ
ラスコにて３７狐５％ＣＯ２’Ｆで培養し、細胞が単細
胞層（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ）形成後、培地ｋ １００単
位／ ｓｔｌのインターフェロン−βを含む０．１％ヒ
ト血清アルブミン含有イーグルｉＶＩＥＭ培地と交換し
て、−晩培養した。次いで、この培地にポリ（Ｉ）・ポ
リ（Ｃ）およびサイクロへキシミド／ｃ終濃贋それぞれ
５０μ汁家および２μｒ／ｍＪとなる様に添加して５時
間培養した後、更に、アクチノマイシンＤヲ１μか實と
なる様に絡加して２時間培養した。次に、この細胞をＰ
ＢＳ−で２度洗浄して生産培地（０，１％ヒト血清アル
ブミン含南イーグル＋ｖｉＥＭ培地）に交換し、−晩培
誉した。インターフェロンの力価はＦＬ細胞−シンドビ
スウィルス系によるＣＰＥ （Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ
ｅｆｆｅｃｔ）法（小長谷ら蛋白質核酸酵素 別冊２５
号、貞６５５〜頁５６５．１９８１年）により測定した
。
この産生工ａｔよ、正常細胞からポＩＪ （Ｉ）・ポリ
（ＱＪｆｒ：誘起剤としてインターフェロン−βｋｇ生
する一般的方法であり、その概略を第１図に示した。
（ＱＪｆｒ：誘起剤としてインターフェロン−βｋｇ生
する一般的方法であり、その概略を第１図に示した。
多価アルコールとして平均分子ｉ１，５４０のポリエチ
レングリコール（ＰＥＧ １５４０）（Ｈ用い、鑓度１
．５％の割付でブライミング培地および／または生産培
地へ添加したＪＭ＠、ブライはング培地への交換前また
は、生産培地への交換前に細胞とＰＥＧ １５４０を含
むＰＢＳ−とを一過性に接触させた場合およびこれらの
処理を併用した場合のインターフェロン−βの増産効果
を検討した。
レングリコール（ＰＥＧ １５４０）（Ｈ用い、鑓度１
．５％の割付でブライミング培地および／または生産培
地へ添加したＪＭ＠、ブライはング培地への交換前また
は、生産培地への交換前に細胞とＰＥＧ １５４０を含
むＰＢＳ−とを一過性に接触させた場合およびこれらの
処理を併用した場合のインターフェロン−βの増産効果
を検討した。
その結果を第１衣に示した。
次に、ブライばング培地へのＰＥＧ １５４０の添加量
−２ｏ、 Ｑ、００１．０．（＋１． ａｌ、 １．０
．１ｎ、ｏｌとｆ 化すせた場合のインターフェロン−
Ｉの増産効果を恢肘した。その結果を第２表に示した。
−２ｏ、 Ｑ、００１．０．（＋１． ａｌ、 １．０
．１ｎ、ｏｌとｆ 化すせた場合のインターフェロン−
Ｉの増産効果を恢肘した。その結果を第２表に示した。
史に、ブライミング培地へ、種々の多価アルコール、た
とえば）’ＥＧ １５４０、ヘキサントリオール、ブタ
ンジオール、ベンタンジオールをそれぞれ添加した場合
のインターフェロン−βの増産効果を検討した。その結
果を第６衣に示した。
とえば）’ＥＧ １５４０、ヘキサントリオール、ブタ
ンジオール、ベンタンジオールをそれぞれ添加した場合
のインターフェロン−βの増産効果を検討した。その結
果を第６衣に示した。
ＩＡ １ 表
ＰＥＧ １ｓ４ｏ１用いた インターフェロ
ン−Ｉ産処理方法 生賞単位／ｒｔｔ
ｉ１、非処理 １２，７００２．０
．３係ＰＥＧ １５４０含有 プライミング培地使用 ２５，６００＆
Ｑ、６係ＰＥＧ １５４０含 Ｍ午腫培地使用 １４２００４、
ブライミンク培地への父 換前に１０％ＰＥＧ１５４０ 含有ＰＢＳ−にて細胞表面 洸汐 １７．５ Ｕ Ｕ
民生座培地への交換ＭｉＪに１０頭 ＰＥＧ １５４０ 含有ＰＢＳ− にて細胞表面洗浄 ２乙５０口＆処理
２＋処理５ ２７．１００Ｚ処ｆＭ２＋
処理４ ２７．４００ａ処理２＋処理
５ ２へ７００第２表 プライミング培地への インターフェロン
−β産ＰＦ２Ｇ １５４０ 添加風（％）
化量 単位／虹０ １２．
７０００．００１ １４８００（Ｌ
Ｏｌ １５，１００ｎ １
２７．９００１・０
２４，６００１Ｑ、０
２［１，５００第 ５ 表 プライミング培地へ添 インタ−７エロンー
β厘生無添加 １１，８００ＰＥＧ
１５４０ ０．３％ ２７，５
００ヘキサントリオ一ルα５％ １９，７
００ブタンジオール α３チ １７．１
［１［１ペンタンエリトリトール １５％
１４４００実験ＶＩＩ２ マウス細胞Ｌ９２９細胞ヲ１０％仔牛血清添加イーグル
ＭＥＭ培地を用いて１５０Ｃ−プラスチ・ツク製培養フ
ラスコにて６７℃ ５９６ Ｃ０ｍ下で培養し、細胞が
単細胞層形成後第１図に示した方法でインターフェロン
を産生じた。多価アルコールとしては、ＰＥＧ １５
４０−Ｅたはヘキサントリオール添加用い、プライミン
グ培地に［１３チの＃度で添加した。また−適性の処理
としては、生産培地への交換前に１０チのＰＦＪＧ １
５４０を含むＰＢＳ−で２回洗浄することにより実施し
た。インタ−７エロンーβはＬ９２９細胞−シンドビス
ウイルス系によるＣＰＥ法により測定した。その結果ｆ
：第４表に示した。
ン−Ｉ産処理方法 生賞単位／ｒｔｔ
ｉ１、非処理 １２，７００２．０
．３係ＰＥＧ １５４０含有 プライミング培地使用 ２５，６００＆
Ｑ、６係ＰＥＧ １５４０含 Ｍ午腫培地使用 １４２００４、
ブライミンク培地への父 換前に１０％ＰＥＧ１５４０ 含有ＰＢＳ−にて細胞表面 洸汐 １７．５ Ｕ Ｕ
民生座培地への交換ＭｉＪに１０頭 ＰＥＧ １５４０ 含有ＰＢＳ− にて細胞表面洗浄 ２乙５０口＆処理
２＋処理５ ２７．１００Ｚ処ｆＭ２＋
処理４ ２７．４００ａ処理２＋処理
５ ２へ７００第２表 プライミング培地への インターフェロン
−β産ＰＦ２Ｇ １５４０ 添加風（％）
化量 単位／虹０ １２．
７０００．００１ １４８００（Ｌ
Ｏｌ １５，１００ｎ １
２７．９００１・０
２４，６００１Ｑ、０
２［１，５００第 ５ 表 プライミング培地へ添 インタ−７エロンー
β厘生無添加 １１，８００ＰＥＧ
１５４０ ０．３％ ２７，５
００ヘキサントリオ一ルα５％ １９，７
００ブタンジオール α３チ １７．１
［１［１ペンタンエリトリトール １５％
１４４００実験ＶＩＩ２ マウス細胞Ｌ９２９細胞ヲ１０％仔牛血清添加イーグル
ＭＥＭ培地を用いて１５０Ｃ−プラスチ・ツク製培養フ
ラスコにて６７℃ ５９６ Ｃ０ｍ下で培養し、細胞が
単細胞層形成後第１図に示した方法でインターフェロン
を産生じた。多価アルコールとしては、ＰＥＧ １５
４０−Ｅたはヘキサントリオール添加用い、プライミン
グ培地に［１３チの＃度で添加した。また−適性の処理
としては、生産培地への交換前に１０チのＰＦＪＧ １
５４０を含むＰＢＳ−で２回洗浄することにより実施し
た。インタ−７エロンーβはＬ９２９細胞−シンドビス
ウイルス系によるＣＰＥ法により測定した。その結果ｆ
：第４表に示した。
第 ４ 表
処理方法 インターフェロン−β産
生址 単位／１ ＰＥＧ １５４０ 無添加 乙０９０
プライミング培地にａ６％ プライミング培地に０．５％ ヘキサントリオール添加 ２，９７０生
産培地への交換前に１０％ ＰＥＧ １５４０ ＰＢＳ−で ２回洗浄 ２，５６０実
験例６ インターフェロン−αの産生に対する多価アルコールの
効果を調べた。
生址 単位／１ ＰＥＧ １５４０ 無添加 乙０９０
プライミング培地にａ６％ プライミング培地に０．５％ ヘキサントリオール添加 ２，９７０生
産培地への交換前に１０％ ＰＥＧ １５４０ ＰＢＳ−で ２回洗浄 ２，５６０実
験例６ インターフェロン−αの産生に対する多価アルコールの
効果を調べた。
リンホブラストイドとして５俤仔牛血清添加ＲＰＭＩ
１６４０培地で維持されているＮａｍａｌｗａ ａ胞
ヲ用い、１００単位／ｌｄのインターフェロン−αｔｆ
む０．１％ヒト血清アルブミン添加ＲＰＭ１１６４０４
地を用いて一晩プライミングし、その後ＨＶＪ ’ｃ
Ｉ Ｇ Ｏ１１［ＡＶ７＆ｌの濃度で添加して一晩放置
した。そのｋ、ｐＨ２として１−ＩＶＪ金失活烙せ、史
に、ｐＨ７にもどしインターフェロンの収量全測定した
。この工程は、白血球ｔｆｃはリンホブラストイド細胞
を用いるインターフェロンーαの一般的處生方法であシ
、その概略を第２図に示した。多価アルコールとしては
、ＰＥＧ１５４０ ’！ｃ用い、プライミング培地にＣ
Ｌ３％の濃度で添加した。
１６４０培地で維持されているＮａｍａｌｗａ ａ胞
ヲ用い、１００単位／ｌｄのインターフェロン−αｔｆ
む０．１％ヒト血清アルブミン添加ＲＰＭ１１６４０４
地を用いて一晩プライミングし、その後ＨＶＪ ’ｃ
Ｉ Ｇ Ｏ１１［ＡＶ７＆ｌの濃度で添加して一晩放置
した。そのｋ、ｐＨ２として１−ＩＶＪ金失活烙せ、史
に、ｐＨ７にもどしインターフェロンの収量全測定した
。この工程は、白血球ｔｆｃはリンホブラストイド細胞
を用いるインターフェロンーαの一般的處生方法であシ
、その概略を第２図に示した。多価アルコールとしては
、ＰＥＧ１５４０ ’！ｃ用い、プライミング培地にＣ
Ｌ３％の濃度で添加した。
また、一過性の処理としては、プライミング培地への交
換前に１０％のＰｈ：Ｇ１５４０′を含むＰＢＳ−で細
胞乞２回洗浄することによシ実施した。その結果を第５
表に示した。１次、前記の処理を行う際（Ｄｋ’ＥＧ
１５４０Ｃり濃度ｉ０．１．１．１０．３０．６０％
と変化させた場合のインターフェロン−αの増産効果に
ついても検討した。七の結果を第６表に示した。
換前に１０％のＰｈ：Ｇ１５４０′を含むＰＢＳ−で細
胞乞２回洗浄することによシ実施した。その結果を第５
表に示した。１次、前記の処理を行う際（Ｄｋ’ＥＧ
１５４０Ｃり濃度ｉ０．１．１．１０．３０．６０％
と変化させた場合のインターフェロン−αの増産効果に
ついても検討した。七の結果を第６表に示した。
第 ５ 表
ＰＥＧ １５４ｏｙ２用いた インターフェロ
ン−０厘処理方法 生産 単位／ｎ
ｔＪ非処理 １．７４０ａ−ｓｑｂ
ＰｇＧ １５４０ 含有ブライミング培地使用
へ６２０プライミング培地への父換前 に１０％ ＰＥＧ含有Ｐ Ｂ Ｓ − にて細胞表曲況浄 乙９８０第
６ 懺 プライミング培地への父換前 イ／ターｌエロン
ーα産生量における一過性処理のＰＥＧ
単位／＃！１１５４０の濃度（％） 無添加 １．７４ ［１［Ｌ１％ＰＥ
Ｇ １５４０ １，９６０１チ
２．１７０１０チ
２，９８０６０チ ２，９５０６
０ ％ ２．６５０実験例４ インターフェロン−γの産生に対する多価アルコールの
効果を調べた。
ン−０厘処理方法 生産 単位／ｎ
ｔＪ非処理 １．７４０ａ−ｓｑｂ
ＰｇＧ １５４０ 含有ブライミング培地使用
へ６２０プライミング培地への父換前 に１０％ ＰＥＧ含有Ｐ Ｂ Ｓ − にて細胞表曲況浄 乙９８０第
６ 懺 プライミング培地への父換前 イ／ターｌエロン
ーα産生量における一過性処理のＰＥＧ
単位／＃！１１５４０の濃度（％） 無添加 １．７４ ［１［Ｌ１％ＰＥ
Ｇ １５４０ １，９６０１チ
２．１７０１０チ
２，９８０６０チ ２，９５０６
０ ％ ２．６５０実験例４ インターフェロン−γの産生に対する多価アルコールの
効果を調べた。
健康成人より得た末梢血ｆ Ｆｉ ｃｏ ｌ ｌ−Ｈｙ
ｐａｑｕｅｇｒａｄｉｅｎｔにより単核球を分離し、こ
の単核球をプラスチックシャーレで培養後、非付着細胞
を分取し、α１％ヒト血清アルブミン添加ＲＰＭ１１６
４０培地に浮遊した。この浮遊液にＣｏｎ Ａを５μｒ
／ｄの濃度で添加して４８時間培譬した。
ｐａｑｕｅｇｒａｄｉｅｎｔにより単核球を分離し、こ
の単核球をプラスチックシャーレで培養後、非付着細胞
を分取し、α１％ヒト血清アルブミン添加ＲＰＭ１１６
４０培地に浮遊した。この浮遊液にＣｏｎ Ａを５μｒ
／ｄの濃度で添加して４８時間培譬した。
この工程はインターフェロン−ｒを産生する一般的方法
であり、その概略を第６図に示した。
であり、その概略を第６図に示した。
多価アルコールとしてｔ／′１ＰＥＧ １５４０を用い
、０．１％ヒト血清アルブミン添加ＲＰＭＩ １６４
０培地に［ｌＬ５％の割合で添加した。その結果ｆｉｌ
−第７表に示した。
、０．１％ヒト血清アルブミン添加ＲＰＭＩ １６４
０培地に［ｌＬ５％の割合で添加した。その結果ｆｉｌ
−第７表に示した。
第 ７ 表
無添刀ロ
７９０ＰＥＧ α５％
１．４ ２ ０次に実施
例により本完明を具体的に説明するが、本発明ｔまこれ
らの実施例に限定されるものではない。
７９０ＰＥＧ α５％
１．４ ２ ０次に実施
例により本完明を具体的に説明するが、本発明ｔまこれ
らの実施例に限定されるものではない。
実施例１ インターフェロン−αの産生Ｎａｍａ １
ｗａ細ｊＢ ｆ ３ ｘ １ａｓ Ｃｅ１ｌ Ｓ／ｍ
ｅ ）割合テ５チ仔牛血清添加ＲＰＭＩ １６４０培
地に植込み５日間培養後、１０予ＰＥＧ １５４０含！
ＰＢＳ−で細胞を洗浄した。次に、１００単位／ ｒ
ｎｌのインターフェロン−αヲ含むα１％ヒト血清アル
ブミンおよび［１３％ＰＥＧ添加ＲＰＭＩ １６４０
培地を用い、１Ｘ１０’ Ｃｅ １１ ｓｏｌの割合で
懸ｆｆ１Ｌ、１８時間後に）１ＶＪ ｆ １００ ／
Ｈ）；になるように象〃口した。−夜培養後にＨＣｌを
用いｐＨ２とし、ＨＶＪｔ失活後、ｐ）Ｌ７．０にもど
しＩＦＮ−α活性を側冗した。インターフェロン−αの
生産量は４，７００単位／ ＃ＥＡ！であった。
ｗａ細ｊＢ ｆ ３ ｘ １ａｓ Ｃｅ１ｌ Ｓ／ｍ
ｅ ）割合テ５チ仔牛血清添加ＲＰＭＩ １６４０培
地に植込み５日間培養後、１０予ＰＥＧ １５４０含！
ＰＢＳ−で細胞を洗浄した。次に、１００単位／ ｒ
ｎｌのインターフェロン−αヲ含むα１％ヒト血清アル
ブミンおよび［１３％ＰＥＧ添加ＲＰＭＩ １６４０
培地を用い、１Ｘ１０’ Ｃｅ １１ ｓｏｌの割合で
懸ｆｆ１Ｌ、１８時間後に）１ＶＪ ｆ １００ ／
Ｈ）；になるように象〃口した。−夜培養後にＨＣｌを
用いｐＨ２とし、ＨＶＪｔ失活後、ｐ）Ｌ７．０にもど
しＩＦＮ−α活性を側冗した。インターフェロン−αの
生産量は４，７００単位／ ＃ＥＡ！であった。
実施例２ インターフェロン−βの産生Ｗ１５Ｂ細胞
ｆ ５ Ｘ １０’ Ｃｅ１ｌｓ／１５０ｃｒＡ培養フ
ラスコの割合で１０チ仔牛血清含有ＭＥＭ庵地？用いて
植込み佐５日間培養した。その後１００単位／ｄのイン
ターフェロンーβを含む（Ｌ１％ヒト血清アルブミン、
および［１５％ＰＥＧ １５４０添加ＭＥＭ培地で一晩
ブライミングを実施した。次にポリ（Ｉｌ・ポリ（Ｃ）
、サイクロヘキシミド、アクチノマイシンＤｔ−用いた
スーツ（−インダクション法によりインターフェロン金
誘導した。生産培地としては、［Ｌ１チヒト血清アルブ
ばン金倉むアール液を用いたが、本培地交換前に１０チ
プタンジオールを用い細胞派面を洗浄した。インターフ
ェロン−βの生産量は５７．５００単位／罰であった。
ｆ ５ Ｘ １０’ Ｃｅ１ｌｓ／１５０ｃｒＡ培養フ
ラスコの割合で１０チ仔牛血清含有ＭＥＭ庵地？用いて
植込み佐５日間培養した。その後１００単位／ｄのイン
ターフェロンーβを含む（Ｌ１％ヒト血清アルブミン、
および［１５％ＰＥＧ １５４０添加ＭＥＭ培地で一晩
ブライミングを実施した。次にポリ（Ｉｌ・ポリ（Ｃ）
、サイクロヘキシミド、アクチノマイシンＤｔ−用いた
スーツ（−インダクション法によりインターフェロン金
誘導した。生産培地としては、［Ｌ１チヒト血清アルブ
ばン金倉むアール液を用いたが、本培地交換前に１０チ
プタンジオールを用い細胞派面を洗浄した。インターフ
ェロン−βの生産量は５７．５００単位／罰であった。
第１図は実験例１におけるインターフェロン−βの産生
工程を示す図） 第２図は実験例３におけるインターフェロン−αの産生
工程を示す図 第５図は実績例４におけるインターフェロン−γの産生
工程を示す図である。 ％許出願人 持田製薬株式式会 代理人 萼 優美、ソミｔ）１名） Ｊ７ｔＩ図 単細胞層を形成した培養細胞 ↓ プライミング培地に交換 ポリ（Ｉｌ・ポ１月Ｑ 、サイクロへキシミド添加土 生産培地に交換 インターフェロン活性測定 ′２２図 培 養 細 胞 土 プライミング培地に交換 ＨＶＪ 、ＮＤＶ等ウィルス添加 土 ｐＨ２，０処理によりウィルス失活 上 ｐＨ７，０にもどしインターフェロン 活性測定 才３ｒＩ！Ｊ ＴＣｅ１１浮遊液 ＰＨＡ 、 Ｃｏｎ Ａ等添加 インターフェロン活性測定
工程を示す図） 第２図は実験例３におけるインターフェロン−αの産生
工程を示す図 第５図は実績例４におけるインターフェロン−γの産生
工程を示す図である。 ％許出願人 持田製薬株式式会 代理人 萼 優美、ソミｔ）１名） Ｊ７ｔＩ図 単細胞層を形成した培養細胞 ↓ プライミング培地に交換 ポリ（Ｉｌ・ポ１月Ｑ 、サイクロへキシミド添加土 生産培地に交換 インターフェロン活性測定 ′２２図 培 養 細 胞 土 プライミング培地に交換 ＨＶＪ 、ＮＤＶ等ウィルス添加 土 ｐＨ２，０処理によりウィルス失活 上 ｐＨ７，０にもどしインターフェロン 活性測定 才３ｒＩ！Ｊ ＴＣｅ１１浮遊液 ＰＨＡ 、 Ｃｏｎ Ａ等添加 インターフェロン活性測定
Claims (9)
- （１） 培養細胞をインターフェロン誘起剤で刺激し
てインターフェロン金産生ずる方法において、培地に多
価アルコールを添加するか、あるいは培地の交換時に培
養細胞と多価アルコールを含む溶液とを一過性に接触さ
せるか又は両者全併用することを％徴とするインターフ
ェロンの産生方法〇 - （２） 多価アルコールをプライミング培地に添加す
る特許請求の範囲第１項記載の産生方法。 - （３）多価アルコールを誘起時の培地に添加する特許請
求の範囲第１項記載の産生方法。 - （４） 多価アルコ−ルを生産培地に添〃口する特許
請求の範囲第１項記載の産生方法。 - （５）多価アルコールをブライミング培地、誘起時の培
地および生産培地のいずれか２種以上に添加する特許請
求の範囲第１項記載の産生方法。 - （６）培養細胞と多価アルコール２！Ｉ−合む溶液との
接触金、ブライミング培地に交換する時、訪起培地に交
換する時および／または生産培地に交換する時に行なう
特許請求の範囲第１項記載の産生方法。 - （７） ４価アルコールがポリエチレ７ りｌ）コー
ルである特許請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか
一項に記載の産生方法。 - （８） 多価アルコールの濃度がα００１〜３０％で
ある特許請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか一項
に記載の産生方法。 - （９） 多価アルコールのａ度がα１〜５％である特
許請求の範囲第８項記載の産生方法。 （イ） 多価アルコールの濃度が［ｌＬ１〜６０％であ
る特許請求の範囲Ｍ１項又は第６項記載の産生方法。 （ロ） 多価アルコールの濃度が１〜３０％である特許
請求の範囲第１０項記載の産生方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57092583A JPS58209993A (ja) | 1982-05-31 | 1982-05-31 | インタ−フエロンの産生方法 |
| US06/496,506 US4548900A (en) | 1982-05-31 | 1983-05-20 | Method of interferon production |
| GB08314400A GB2121806B (en) | 1982-05-31 | 1983-05-25 | Method of interferon production |
| CA000429218A CA1195274A (en) | 1982-05-31 | 1983-05-30 | Method of interferon production |
| FR8309002A FR2527448B1 (fr) | 1982-05-31 | 1983-05-31 | Procede de production d'interferon |
| DE19833319714 DE3319714A1 (de) | 1982-05-31 | 1983-05-31 | Verfahren zur interferonherstellung |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57092583A JPS58209993A (ja) | 1982-05-31 | 1982-05-31 | インタ−フエロンの産生方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58209993A true JPS58209993A (ja) | 1983-12-07 |
| JPS645878B2 JPS645878B2 (ja) | 1989-02-01 |
Family
ID=14058451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57092583A Granted JPS58209993A (ja) | 1982-05-31 | 1982-05-31 | インタ−フエロンの産生方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4548900A (ja) |
| JP (1) | JPS58209993A (ja) |
| CA (1) | CA1195274A (ja) |
| DE (1) | DE3319714A1 (ja) |
| FR (1) | FR2527448B1 (ja) |
| GB (1) | GB2121806B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6274284A (ja) * | 1985-09-27 | 1987-04-06 | Teijin Ltd | 動物細胞の培養方法 |
| JPS62285780A (ja) * | 1986-06-04 | 1987-12-11 | Agency Of Ind Science & Technol | 動物細胞増殖用組成物および増殖方法 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58209993A (ja) * | 1982-05-31 | 1983-12-07 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | インタ−フエロンの産生方法 |
| US4551429A (en) * | 1983-09-15 | 1985-11-05 | American Home Products Corporation | Stimulation of antigen production by Bordetella pertussis |
| DE3785086T2 (de) * | 1986-06-04 | 1993-07-08 | Agency Ind Science Techn | Zubereitung fuer zellkultur und ihre verwendung. |
| DE3787805T2 (de) * | 1986-08-04 | 1994-02-10 | Garvan Inst Med Res | Serumfreies gewebekulturmedium, das ein polymerzellenschutzmittel enthält. |
| US4961969A (en) * | 1987-05-11 | 1990-10-09 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interferon-β |
| DE69633040T2 (de) * | 1995-03-17 | 2004-12-09 | Toray Industries, Inc. | Inhibitor der hornhaut-vaskularisation |
| US5840565A (en) | 1995-08-22 | 1998-11-24 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhancing the production of viral vaccines in PKR-deficient cell culture |
| US6855519B2 (en) | 1995-08-22 | 2005-02-15 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhancing the production of interferon in cell culture |
| US7367961B2 (en) * | 2004-09-10 | 2008-05-06 | Depuy Spine, Inc. | Intradiscal injection of autologous interferon |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3413198A (en) * | 1966-06-30 | 1968-11-26 | Calbiochem | Reagents and method for assaying biological samples |
| US3876375A (en) * | 1971-11-22 | 1975-04-08 | Jonas Maurukas | Biological composition for use as a reference control in diagnostic analysis |
| EP0005476B1 (de) * | 1978-05-17 | 1981-12-30 | Dr. Karl Thomae GmbH | Verfahren zur Herstellung von Humaninterferon |
| EP0014050A3 (en) * | 1979-01-16 | 1980-10-01 | Beecham Group Plc | Interferon production |
| US4198479A (en) * | 1979-03-30 | 1980-04-15 | Merck & Co., Inc. | Replacement of animal serum proteins by human albumin for growth and interferon production by Namalva cells |
| JPS58209993A (ja) * | 1982-05-31 | 1983-12-07 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | インタ−フエロンの産生方法 |
| US4462940A (en) * | 1982-09-23 | 1984-07-31 | Cetus Corporation | Process for the recovery of human β-interferon-like polypeptides |
-
1982
- 1982-05-31 JP JP57092583A patent/JPS58209993A/ja active Granted
-
1983
- 1983-05-20 US US06/496,506 patent/US4548900A/en not_active Expired - Fee Related
- 1983-05-25 GB GB08314400A patent/GB2121806B/en not_active Expired
- 1983-05-30 CA CA000429218A patent/CA1195274A/en not_active Expired
- 1983-05-31 FR FR8309002A patent/FR2527448B1/fr not_active Expired
- 1983-05-31 DE DE19833319714 patent/DE3319714A1/de active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6274284A (ja) * | 1985-09-27 | 1987-04-06 | Teijin Ltd | 動物細胞の培養方法 |
| JPH0375154B2 (ja) * | 1985-09-27 | 1991-11-29 | ||
| JPS62285780A (ja) * | 1986-06-04 | 1987-12-11 | Agency Of Ind Science & Technol | 動物細胞増殖用組成物および増殖方法 |
| JPH0561907B2 (ja) * | 1986-06-04 | 1993-09-07 | Kogyo Gijutsuin |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2121806A (en) | 1984-01-04 |
| DE3319714A1 (de) | 1983-12-01 |
| GB2121806B (en) | 1985-06-26 |
| JPS645878B2 (ja) | 1989-02-01 |
| US4548900A (en) | 1985-10-22 |
| FR2527448B1 (fr) | 1986-12-12 |
| CA1195274A (en) | 1985-10-15 |
| GB8314400D0 (en) | 1983-06-29 |
| FR2527448A1 (fr) | 1983-12-02 |
| DE3319714C2 (ja) | 1988-05-11 |
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