JPS58144748A - 免疫学的反応用ラテツクス試薬 - Google Patents
免疫学的反応用ラテツクス試薬Info
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- JPS58144748A JPS58144748A JP2759482A JP2759482A JPS58144748A JP S58144748 A JPS58144748 A JP S58144748A JP 2759482 A JP2759482 A JP 2759482A JP 2759482 A JP2759482 A JP 2759482A JP S58144748 A JPS58144748 A JP S58144748A
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- polypeptide
- reagent
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- latex reagent
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は安定な免疫学的反応用ラテックス試秦に関する
ものである。
ものである。
血清、尿等の体液中に存在する抗原あるいは抗体を構出
＃ｊ定することは、択患の診断に極めて菖費な手段の１
つである。特に免疫学的方法として、被横体液中に含ま
れる抗原あるいは抗体に、それらに対応する抗体あるい
は抗原な感作した微細粒子担体を作用させ、抗原抗体反
応によって該微細粒子を凝集せしめ、凝集体の有無の観
察により、その凌集の程度あるいは凝集阻止程度を測定
する凝集反応または凝集阻止反応（以下、両者ｖｖｇ称
して凝集試験という）は、簡便かつ鋭敏な方法として広
く行なわれている。
＃ｊ定することは、択患の診断に極めて菖費な手段の１
つである。特に免疫学的方法として、被横体液中に含ま
れる抗原あるいは抗体に、それらに対応する抗体あるい
は抗原な感作した微細粒子担体を作用させ、抗原抗体反
応によって該微細粒子を凝集せしめ、凝集体の有無の観
察により、その凌集の程度あるいは凝集阻止程度を測定
する凝集反応または凝集阻止反応（以下、両者ｖｖｇ称
して凝集試験という）は、簡便かつ鋭敏な方法として広
く行なわれている。
上記凝集試験において抗原または抗体な感作するために
用いら−れる微細粒子担体としては、赤血球、または非
生物学的粒子であるベントナイト、コロジオン粒子、カ
オリン、活性炭、ポリスチレンラテックス、ポリビニー
ルトルエンラテックス、合成ゴムラテックス等があるが
、それらの選択あるいは使用条件によって、抗原または
抗体の吸着性、感作した微細粒子担体の保存安定性、該
感作担体による測定感度、免疫化学反応以外の現象に起
因する非特異性凝集反応の発生等が大きく変化ｔ７、条
件によっては。
用いら−れる微細粒子担体としては、赤血球、または非
生物学的粒子であるベントナイト、コロジオン粒子、カ
オリン、活性炭、ポリスチレンラテックス、ポリビニー
ルトルエンラテックス、合成ゴムラテックス等があるが
、それらの選択あるいは使用条件によって、抗原または
抗体の吸着性、感作した微細粒子担体の保存安定性、該
感作担体による測定感度、免疫化学反応以外の現象に起
因する非特異性凝集反応の発生等が大きく変化ｔ７、条
件によっては。
しはしば便用６：耐えないと＆）う問題がある。
上記微粒子担体のうち、ポリスチレンラテックス等の合
成ラテックスは合成物質であるため、保存時の安’ｉｉ
性が他の担体よりも優れ、抗原、抗体等の、蛋白質を強
く蚊看し、きりにこうして結合〒゛抗原抗体０性質を変
化痕保持しうる点でも凌れているため多くの免疫反応試
染に用いられ゛、符に峡集反応試薬の担体とし、て繁用
さスしている。
成ラテックスは合成物質であるため、保存時の安’ｉｉ
性が他の担体よりも優れ、抗原、抗体等の、蛋白質を強
く蚊看し、きりにこうして結合〒゛抗原抗体０性質を変
化痕保持しうる点でも凌れているため多くの免疫反応試
染に用いられ゛、符に峡集反応試薬の担体とし、て繁用
さスしている。
しかしなから、合成ラテックスにおいても、その保存中
に自然縦集を起工ことがある。この問題を防止するため
、従来感作したラテックスノ懸濁凍にウシ血清アルブミ
ン、クマ血清アルブミン等のアルブミンを添加しで、ラ
テックス粒子の表面侑電を負に維持することにより上記
目然献集を防止した免疫学的反見・用ラテックス試薬が
王として使用されていた。しかしｌｊ二から、このよう
なアルブミン添加によっても長期間の保存においでは感
作ラテツクスの目然＃！巣を阻止”（ることは不可能で
あった。したがって目然峡集１に′発生することなく、
長期間保存しうる免役学的反応用ラテックス試薬（以下
、単６ニラテツクスＩｔ業という）の開発が強く要望さ
れていた。
に自然縦集を起工ことがある。この問題を防止するため
、従来感作したラテックスノ懸濁凍にウシ血清アルブミ
ン、クマ血清アルブミン等のアルブミンを添加しで、ラ
テックス粒子の表面侑電を負に維持することにより上記
目然献集を防止した免疫学的反見・用ラテックス試薬が
王として使用されていた。しかしｌｊ二から、このよう
なアルブミン添加によっても長期間の保存においでは感
作ラテツクスの目然＃！巣を阻止”（ることは不可能で
あった。したがって目然峡集１に′発生することなく、
長期間保存しうる免役学的反応用ラテックス試薬（以下
、単６ニラテツクスＩｔ業という）の開発が強く要望さ
れていた。
このような状況に鑑み、本発明者等は鋭意研究の結果、
感作したラテックスの表面を従来のようにアルブミンの
添加により被覆しようとしても、アルブミンの分子量が
大きいためにラテックス粒子表面を密に被接し、て該表
面の荷電を不活性化することができず、これが長期間保
存したときの自然縦集の阻止を不可能にする原因である
ことが見出した。さらに、アルブミンは分子量が大きい
ため、ラテックスに感作した抗原あるいは抗体（二対し
ても立体障害を及はして、抗原抗体反応を阻害し、試薬
の一定感度を低下させることも見出した。
感作したラテックスの表面を従来のようにアルブミンの
添加により被覆しようとしても、アルブミンの分子量が
大きいためにラテックス粒子表面を密に被接し、て該表
面の荷電を不活性化することができず、これが長期間保
存したときの自然縦集の阻止を不可能にする原因である
ことが見出した。さらに、アルブミンは分子量が大きい
ため、ラテックスに感作した抗原あるいは抗体（二対し
ても立体障害を及はして、抗原抗体反応を阻害し、試薬
の一定感度を低下させることも見出した。
本発明者等は以上の知見に基づき、アルブミンの代りに
分子蓋の小さいポリペプチドを感作ラテツクスに添加す
ることにより、ラテックス試薬の保存安定性および一定
感度が従来Ｃ比べて大巾に改善されることを見出し、本
発明を完成した。
分子蓋の小さいポリペプチドを感作ラテツクスに添加す
ることにより、ラテックス試薬の保存安定性および一定
感度が従来Ｃ比べて大巾に改善されることを見出し、本
発明を完成した。
したがって、不発明は免疫学的反応用ラテックス試薬に
おいて、抗原または抗体を感作したう１゛ソクス子の懸
濁液１００容ｉＩｉ部肖り０．５〜８．０菖１１１ｉ１
１３の割合でポリペプチドＶ添加したことを特徴とする
安定化された免塊学的反応用ラテックス試薬を提供する
ものである。
おいて、抗原または抗体を感作したう１゛ソクス子の懸
濁液１００容ｉＩｉ部肖り０．５〜８．０菖１１１ｉ１
１３の割合でポリペプチドＶ添加したことを特徴とする
安定化された免塊学的反応用ラテックス試薬を提供する
ものである。
本発明で柑いられるポリペプチドは、分子蓋１、０（１
０〜３０．０００ 、好ましくは分子ｍｌ、４７００〜
５、０００の任意のポリペプチドである。このようなポ
リペプチドは、例えばゼラチン、オボアルプミン、ラク
トアルブミン、動物の血清アルブミン等を蛋白質分鱗酵
素、酸、その他の適当な手段（二より加水分解し、適当
な手段で棺製して得ることができる。
０〜３０．０００ 、好ましくは分子ｍｌ、４７００〜
５、０００の任意のポリペプチドである。このようなポ
リペプチドは、例えばゼラチン、オボアルプミン、ラク
トアルブミン、動物の血清アルブミン等を蛋白質分鱗酵
素、酸、その他の適当な手段（二より加水分解し、適当
な手段で棺製して得ることができる。
ｙ９ペプチドの分子量は、１０，０００より太き％Ｘと
きは従来の長期間保存時のラテックスｖ、県の非特異性
凝集の問題が解消されず、ｌ、 ０００より小さいとき
は、添加による効果が十分得られないのでｌ、 ０００
〜３０，０００の範囲でなければならない。
きは従来の長期間保存時のラテックスｖ、県の非特異性
凝集の問題が解消されず、ｌ、 ０００より小さいとき
は、添加による効果が十分得られないのでｌ、 ０００
〜３０，０００の範囲でなければならない。
ポリペプチドの添加は、感作ラテックスン任亀１１１１
１添加することにより行なう。０．５瓢量嗟より少ない
とポリペプチドの添加によるラテックス試薬の安定化が
十分でなく、８恵ｉ１−より多いと感作ラテツクス試薬
の測定感度が低下するのでポリペプチドは０．５〜８電
量−で添加する。
１添加することにより行なう。０．５瓢量嗟より少ない
とポリペプチドの添加によるラテックス試薬の安定化が
十分でなく、８恵ｉ１−より多いと感作ラテツクス試薬
の測定感度が低下するのでポリペプチドは０．５〜８電
量−で添加する。
本発明のラテックス試薬は懸濁液状態で長期間安定に保
存しつるが、凍結乾燥状崖で保存することもできる。
存しつるが、凍結乾燥状崖で保存することもできる。
次に実施例署二より本発明をさらに詳しく説明する。
冥施ｆｌｌム
試薬の調製
（１３５Ｗ／Ｖ １１ポリスｔレンラテツクス液０、
Ｉ Ｍ ｆ ９シン食塩緩衝液（ｐｉ−１８，２）１二
５ｗ／ｖ ｑ４になるようにポリスプレンラテックスを
浮遊させる。
Ｉ Ｍ ｆ ９シン食塩緩衝液（ｐｉ−１８，２）１二
５ｗ／ｖ ｑ４になるようにポリスプレンラテックスを
浮遊させる。
（２） Ｊ Ｗ／ｆｆ １１抗ヒト胎皺性ゴナドト口
ピンク夛ギ血Ｔイｒ−グロブリン俗液 仇ヒト胎盤性ゴナドトロピンウサギ血清の１−グロブリ
ン分画ＹＯ，１Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ８，２）に１
ｗ／ｖ−になるように希釈する。
ピンク夛ギ血Ｔイｒ−グロブリン俗液 仇ヒト胎盤性ゴナドトロピンウサギ血清の１−グロブリ
ン分画ＹＯ，１Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ８，２）に１
ｗ／ｖ−になるように希釈する。
（３）恍ヒト胎盤性ゴナドトロピンウサギｌ−グロブリ
ン感作ラテツクス試薬 前記（１１の５ ｗ／マ優ポリスチレンラテックスｉ？
ｌｌ容に前記（２）の抗ヒト胎盤性ゴナドトロピンウサ
ギ血清！−グロブリン溶液４容を加え、５７℃で】時間
感作後、氷冷する。次いで遠心し、その沈渣をポリペプ
デド０．５〜１６ｗ／ｖ俤を含む０．１Ｍグリシン緩衝
液（Ｓ ８．２）にて濃度０．５〜１０Ｗ／マチの感作
ラテックス試業鵜濁液を調製する。
ン感作ラテツクス試薬 前記（１１の５ ｗ／マ優ポリスチレンラテックスｉ？
ｌｌ容に前記（２）の抗ヒト胎盤性ゴナドトロピンウサ
ギ血清！−グロブリン溶液４容を加え、５７℃で】時間
感作後、氷冷する。次いで遠心し、その沈渣をポリペプ
デド０．５〜１６ｗ／ｖ俤を含む０．１Ｍグリシン緩衝
液（Ｓ ８．２）にて濃度０．５〜１０Ｗ／マチの感作
ラテックス試業鵜濁液を調製する。
（４） 刀、リペブデドの調製
ゼラチン１００．９に精製水８００−を加え、鳩ｅＲ≦
二てｐＨ１，８とした後ペプシン２１を加えた。これを
３７℃で２４時間＃累分解した後、加熱処理し限外−過
器により分子量１０００以上のものを譲縮する。
二てｐＨ１，８とした後ペプシン２１を加えた。これを
３７℃で２４時間＃累分解した後、加熱処理し限外−過
器により分子量１０００以上のものを譲縮する。
次にこの［ｌｉｉ准を４Ｘ６０ｃＩ１１のセファデック
スＧ−２５カラムでゲル濾過し、！Ｊ１図に示すように
、ボイドボリクＡ付近に鰺出される高分子量の区分１お
よびそれ以外のポリペプチド区分２を別々に集めて績縮
後凍結乾燥し、区分２より得られたものをポリペプチド
とＴる。
スＧ−２５カラムでゲル濾過し、！Ｊ１図に示すように
、ボイドボリクＡ付近に鰺出される高分子量の区分１お
よびそれ以外のポリペプチド区分２を別々に集めて績縮
後凍結乾燥し、区分２より得られたものをポリペプチド
とＴる。
一様にラクトアルブミンあるいはオボアルブミン］００
１１を０．８係炭酸ナトリウム溶液に溶解しＰＨ７，ｓ
にした後、パンクレアチン】Ｏｌを加え３７℃で７２時
間酵素分解する。
１１を０．８係炭酸ナトリウム溶液に溶解しＰＨ７，ｓ
にした後、パンクレアチン】Ｏｌを加え３７℃で７２時
間酵素分解する。
以下、ゼラチンの場合と同様に処理してポリペプチドを
得る。
得る。
なお、本実施例においては蛋白分解酵素としてペプシン
またはパンクレアチンＶ使用したが、これらのみに限定
されるものではない。
またはパンクレアチンＶ使用したが、これらのみに限定
されるものではない。
（５） ポリペプチドによる感作ラテツクス試薬の安
定化 前記ゼラチンの酵素分解物よりゲルー過して得られた区
分１および区分２ｔ％前記（３）で調１１ｉ！ｔ、た感
作ラテ゛ソクス試業懸濁液に０．５シ今チとなるように
添加し、この懸濁液ｖ４℃に保存した。各保存期間後に
この試薬を用いて蒙集反Ｌ６によりヒト胎盤性ゴナドト
ロピンの測定を行なったところ、表１に示すように区分
２のポリペプチドＶ添加した本発明の試薬は、従来のウ
シ血清アルブミンを安定剤として添加した試薬に比べ、
欄定感度および保存安定性が明らかに優れていた。
定化 前記ゼラチンの酵素分解物よりゲルー過して得られた区
分１および区分２ｔ％前記（３）で調１１ｉ！ｔ、た感
作ラテ゛ソクス試業懸濁液に０．５シ今チとなるように
添加し、この懸濁液ｖ４℃に保存した。各保存期間後に
この試薬を用いて蒙集反Ｌ６によりヒト胎盤性ゴナドト
ロピンの測定を行なったところ、表１に示すように区分
２のポリペプチドＶ添加した本発明の試薬は、従来のウ
シ血清アルブミンを安定剤として添加した試薬に比べ、
欄定感度および保存安定性が明らかに優れていた。
表１
＊不良とは鍜集が出ないか出ても不鮮明であることを示
テ。
テ。
実施例ＩＢ
液に、前記（４）で調製した酵素分解ゼラデンボリペプ
デドを各濃度に添加し、ポリペプチドのね加濃度とデラ
ックス試薬の画定感度および保存安定性についてヒト胎
盤性ゴナドトロピンとの凝集反応によリーベた二 表２ 表２に示した結果より、ポリペプチドの添加濃度は試薬
の感度の点からは８．０−以下であることが望ましく、
試薬の保存安定性の点がらは〔）５僑以上であることが
箪ましい。この範囲の濃度でポリペプチドを添加した試
薬は、２４ケ月以上４℃に保存した後便用しても感度は
何ら変化しない。
デドを各濃度に添加し、ポリペプチドのね加濃度とデラ
ックス試薬の画定感度および保存安定性についてヒト胎
盤性ゴナドトロピンとの凝集反応によリーベた二 表２ 表２に示した結果より、ポリペプチドの添加濃度は試薬
の感度の点からは８．０−以下であることが望ましく、
試薬の保存安定性の点がらは〔）５僑以上であることが
箪ましい。この範囲の濃度でポリペプチドを添加した試
薬は、２４ケ月以上４℃に保存した後便用しても感度は
何ら変化しない。
実施例２
試薬の調製
ｉｌｌ ポリスチレンラテックス液
央凡例１ム（１）と同様にして調製する。
（２１］Ｗ／Ｖ暢トキソプラズマ原虫液トキソプラズマ
原虫を０．１Ｍグリシシン緩衝液（Ｐ）′１８．２）に
１ ｗ／マチになるよう希釈する。
原虫を０．１Ｍグリシシン緩衝液（Ｐ）′１８．２）に
１ ｗ／マチになるよう希釈する。
（３）トキソプラズマ原虫感作ラテックス試薬前記実施
例】ム（３）の方法で抗ヒト胎盤性ゴナドトロピンウナ
ギ血ｔｆｔｌ−グロブリン＃４液の代１月二上記（２）
のトキソプラズマ原虫液な用いて愚作ラテックス試集艙
濁液を調製する。
例】ム（３）の方法で抗ヒト胎盤性ゴナドトロピンウナ
ギ血ｔｆｔｌ−グロブリン＃４液の代１月二上記（２）
のトキソプラズマ原虫液な用いて愚作ラテックス試集艙
濁液を調製する。
（４） ポリペプチド
実施例】ム（４）と同様の方法でラクトアルブミンから
酵素加水分解により一１１１Ｔる。
酵素加水分解により一１１１Ｔる。
（ゲル濾過（：よる区分２）を感作ラテツクス試薬に各
濃度で添加し、この試薬懸濁液を４゛に１℃ζ；保存す
る。各保存期間後にこの試薬な市いて縦条反応ば二より
トキソプラズマ原虫抗体の測定を行なったところ、表３
に示Ｔようにポリペプチドの添加濃度は試薬の感度の点
からは８．０嘔以下、試薬の保存安定性の面からは０．
５−以上であることが望ましい。この範。
濃度で添加し、この試薬懸濁液を４゛に１℃ζ；保存す
る。各保存期間後にこの試薬な市いて縦条反応ば二より
トキソプラズマ原虫抗体の測定を行なったところ、表３
に示Ｔようにポリペプチドの添加濃度は試薬の感度の点
からは８．０嘔以下、試薬の保存安定性の面からは０．
５−以上であることが望ましい。この範。
囲の１１度でポリペプチドを添加した試薬は、度は何ら
変化しない。
変化しない。
図はポリペプチド調製時のセファデツクスＧ−２５によ
るゲル濾過の分離状１！！を示す・（ばか１名） 手続補正書 昭和ｓ７年４月９日 特許庁長官・審輯景殿 １事件の表示昭和ｓ７年特許砿第２７５９４号２、発明
の名称 免疫学的反応用ラテックス試薬 ３、補正する者 事ｆ１との関係 特許出願人 ５、補ＩＦ命令のＨ付 「自発」 １、補正の内容 （１１明細書ｇ４頁第９行の「である仁とが」を「で島
ることを」と補正する。 （２）同第Ｓ］［第５行の「４のである。」を「亀ので
島る。 本発明で用ｉられるラテックス粒子は。 好ましく社粒径αｌ〜１２μの４のである。」と補正す
る。 １３） 岡＠１１ｊ［８９行、萬１０行、第１３行、
第１−行および菖ｌ雪頁第６行のｒ＊央」を「抗原」と
補正する。
るゲル濾過の分離状１！！を示す・（ばか１名） 手続補正書 昭和ｓ７年４月９日 特許庁長官・審輯景殿 １事件の表示昭和ｓ７年特許砿第２７５９４号２、発明
の名称 免疫学的反応用ラテックス試薬 ３、補正する者 事ｆ１との関係 特許出願人 ５、補ＩＦ命令のＨ付 「自発」 １、補正の内容 （１１明細書ｇ４頁第９行の「である仁とが」を「で島
ることを」と補正する。 （２）同第Ｓ］［第５行の「４のである。」を「亀ので
島る。 本発明で用ｉられるラテックス粒子は。 好ましく社粒径αｌ〜１２μの４のである。」と補正す
る。 １３） 岡＠１１ｊ［８９行、萬１０行、第１３行、
第１−行および菖ｌ雪頁第６行のｒ＊央」を「抗原」と
補正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）抗原または抗体を感作したラテックス粒子の懸濁
液１００容量部当り０．５〜８．０恵輩邪の割合でポリ
ペプチドＶ添加したことを特徴とする免疫学的反、応用
ラテックス試薬。 （２１ポリペプチドの分子量が１．０００〜１０，００
０である特許請求の範囲第１項記載の試薬。 （３） ポリペプチドの分子量が１．０００〜５．０
００である特許請求の範囲１３３項記載の試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2759482A JPS58144748A (ja) | 1982-02-23 | 1982-02-23 | 免疫学的反応用ラテツクス試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2759482A JPS58144748A (ja) | 1982-02-23 | 1982-02-23 | 免疫学的反応用ラテツクス試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58144748A true JPS58144748A (ja) | 1983-08-29 |
Family
ID=12225267
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2759482A Pending JPS58144748A (ja) | 1982-02-23 | 1982-02-23 | 免疫学的反応用ラテツクス試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58144748A (ja) |
Cited By (6)
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| EP0170983A2 (en) * | 1984-08-09 | 1986-02-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibody stabilization |
| JPS61241665A (ja) * | 1985-04-18 | 1986-10-27 | Toyobo Co Ltd | 安定化された固相試薬 |
| JPS61296270A (ja) * | 1985-06-25 | 1986-12-27 | Terumo Corp | 免疫学的反応用試薬 |
| JPS6474452A (en) * | 1987-09-17 | 1989-03-20 | Tokuyama Soda Kk | Reagent sealing body |
| WO2001092885A1 (fr) | 2000-05-30 | 2001-12-06 | Iatron Laboratories, Inc. | Methode immunologique de turbidimetrie provoquee par du latex et reactif pour la mise en oeuvre de ladite methode |
| WO2018206737A1 (en) | 2017-05-09 | 2018-11-15 | Immundiagnostik Ag | Method for determination of members of the s100 family of calcium binding proteins by immunoturbidimetry |
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| JPS5512419A (en) * | 1978-07-13 | 1980-01-29 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | Immunological measurement and reagent therefor |
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-
1982
- 1982-02-23 JP JP2759482A patent/JPS58144748A/ja active Pending
Patent Citations (2)
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