JPH119287A - Ａｔｇ−１１１７（ａｉｆ−３）、同種異型移植炎症性因子−１／ｒｃ−９の新規相同物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 アテローム性動脈硬化症、ＣＨＦ、再狭窄、
高血圧、線維性血管障害、脳血管事象、造血障害、ＡＲ
ＤＳ、癌（特に白血病）、自己免疫疾患、線維増殖障
害、炎症疾患、糸球体疾患、ならびに変形性線維増殖／
炎症応答によって特徴づけられる心臓血管および心臓血
管以外の両方の病態を含め、機能不全または疾患の予防
等において役割を果たす、遺伝子を同定および特徴付け
る必要がある 【解決手段】 本発明は、配列番号２のATG−1117（AIF
−3）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とそ
の全長にわたって少なくとも８０％の同一性を有するヌ
クレオチド配列；または該ヌクレオチド配列に相補的な
ヌクレオチド配列を有してなる単離ポリヌクレオチドを
提供するものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規に同定された
ポリヌクレオチド、それによってコードされるポリペプ
チド、かかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使
用、およびそれらの産生に関する。より詳細には、本発
明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、本明細書
中、以下、ATG−1117（AIF−3）と称される同種異型炎
症性因子ファミリーに関する。本発明はまた、かかるポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドの働きの阻害または
活性化にも関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】進行
冠状動脈、大脳、および末梢のアテローム性動脈硬化症
は、米国、ヨーロッパおよび日本における死亡の主原因
である心臓発作をもたらす。閉塞性血管疾患の内科的治
療は最初に１９６４年に報告され、後に経皮経管冠状動
脈拡張術（ＰＴＣＡ）に適用された。その後、狭心症お
よび心筋梗塞の治療のためのＰＴＣＡ、および最近の血
管内ステント設置は冠状動脈バイパス手術にかわる好ま
しいものとなっており、現在、高リスク患者に使用し
て、近位および遠位の両方の冠状動脈部に多発性病巣を
有する複雑な病変を治療することができる。年間に行わ
れる処置数は着実に増加しており、米国だけで年間７５
０,０００件を超えている。１処置当たり平均１５,００
０ドルの費用がかかり、ＰＴＣＡおよびステント設置は
米国における医療費の約１００億ドルを占める。操作の
進歩は初期の成功率を上げ、急性の合併症の発生率を低
下させたが、ＰＴＣＡの長期効果は再狭窄によって有意
に低下する。この工程の、血管壁に対する外傷的障害の
直接的結果として、処置後約６ヶ月以内に患者の約４０
％において血管の再閉塞を引き起こす。これらの対象の
ほとんど４分の３が、繰り返し血管形成術、ステント設
置またはバイパス手術を必要とする。これら再血管修復
の処置の費用は年間４０億ドルと見積もられているの
で、再狭窄の比率が２５％程度減少するだけで、年間１
０億ドルまで節約されると見積もられる。心臓病学者が
ＰＴＣＡを実施して２０年になるが、冠状動脈血管形成
術に対する薬理学的付加物の発達により、二義的な成
功、例えば、抗凝血剤（ヘパリン）および抗血小板薬剤
（アスピリン、チクロピジン、およびReoPro［c7E3］）
が得られた。かくして、再狭窄は、近代のインターベン
ショナル心臓病学において、なおも主たる不当な臨床的
要求を構成する（Douglas, 1996）。

【０００３】結果として再狭窄病変の形成を引き起こす
正確な分子機構は複雑で、ほとんどわかっていない。そ
れにも拘わらず、この動的応答にはいくつかの別個の細
胞事象が関係している。傷害に対する第1の応答は、そ
の特性が主として炎症性であり、つづいて内皮細胞の破
壊および傷害に応答して多くのサイトカイン／ケモカイ
ンおよび成長因子を放出する白血球（主に単球由来マク
ロファージおよびＴリンパ球）が関係している血小板の
活性化がおこる。侵入または内在白血球のいずれかに由
来するこれら因子が局所炎症応答をおこす可能性があ
る。これら最初の事象に続いて、病変の主な細胞成分で
ある血管平滑筋細胞が、細胞分裂の第1期に入り、その
後、これら細胞は被膜媒介物から傷害部位へ移動する。
被膜内膜／亜内皮空間において、これらの細胞が十分な
複製を行い、大量の細胞外マトリックスを作り上げる。
そのように、これらの細胞は新しい内膜を形成し始め、
やがては内腔径を傷つけるのに十分な大きさのプラーク
に成熟し、再狭窄を引き起こす。

【０００４】しかしながら、上記のごとく、臨床的再狭
窄を防止するための効果的な薬理学的付加物はなく、か
くして、本発明者らはこの疾病の病因に関係する分子標
的を同定する試みを行ってきた。かかる遺伝子産物それ
自体は、薬理学的インターベンションの機会を与えるの
みならず（従来の小さな非ペプチドアンタゴニストによ
るかまたは特異的中和抗体の開発によって）、かかる障
害の病因の潜在的診断マーカーとなる。

【０００５】ディファレンシャル・ディスプレイ逆転写
ポリメラーゼ連鎖反応（Liang & Pardee, 1992）の技法
を用いて、ＲＣ-９ ｃＤＮＡ、配列タグを発現する４２
４ｂｐポリヌクレオチドが、バルーン血管形成術の結
果、ラット頚動脈においてディファレンシャルに発現す
るものと同定された（Autieri et al., 1995）。血管傷
害に続く特徴的な線維細胞増殖的血管再生工程に付随す
るＲＣ-９ ｍＲＮＡのディファレンシャル・アップレギ
ュレーションを、ノザンブロットによるこの実験におい
て確認し、完全長のラットＲＣ-９配列を同定するため
に、この部分配列を用いてラット精巣ｃＤＮＡライブラ
リーをスクリーニングした。一度同定すれば、この完全
長のクローンを用いてATGデータベースを検索して、ヒ
ト相同体を同定した（ATG-７０５：ＳＢＣ Ｐ５０４２
０Ｐ、「ＢＡＲＴ−１、新規バルーン血管形成術応答転
写物およびその使用」に関する米国特許出願［ＳＢＣ
９４ＵＳＡ］およびＳＢＣ Ｐ５０４２０−１、「ＲＣ-
９の増殖性動脈疾患の診断および治療における使用」に
ついての一部継続出願［外国出願用に使用、ＳＢＣ９４
ＡＰＣＴ］）。同種異型移植組織の拒絶反応／進行した
移植アテローム性動脈硬化症の治療および／または診断
に潜在的有用性のある、同じ完全長のラット（GenBank
受入番号Ｕ１７９１９）およびヒト（GenBank 受入番号
Ｕ１９７１３）配列がUtans ら（1995, 1996）によって
同定された（WO95／17506）。より最近には、Autieri
（1996）は、ヒト・AIF-１であることを意図とするポリ
ヌクレオチド配列を発表した（GenBank 受入番号Ｕ４９
３９２）。単球細胞における非常に相同的なラットの配
列（GenBank受入番号Ｄ８２０６９）がImaiら（1996）
によって記載され、未公表のヒトの配列がGenBank（受
入番号Ｄ８６４３８）に委託されている。

【０００６】これは、その同種異型炎症性因子ファミリ
ーが治療標的として確立されかつ証明された歴史を有す
ることを示す。明らかに、アテローム性動脈硬化症、Ｃ
ＨＦ、再狭窄、高血圧、線維性血管障害（糖尿病、ＳＬ
Ｅ、ＡＳ）、脳血管事象（例えば、発作、神経傷害およ
びＣＮＳ内部での再生）、造血障害、ＡＲＤＳ、癌（特
に白血病）、自己免疫疾患（例えば、ＨＩＶ感染および
ＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例えば、乾癬）、炎症疾患
（例えば、ＲＡ、クローン病、ＩＢＳ）、糸球体疾患、
ならびに変形性線維増殖／炎症応答によって特徴づけら
れる心臓血管および心臓血管以外の両方の病態を包含す
るが、これに限定されない、機能障害または疾患の、予
防、改善または矯正において役割を果たしうる、さらな
る同種異型炎症性因子ファミリーの構成員の同定および
特徴付けに対する要求がある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】一の態様において、本発
明はATG−1117（AIF−3）ポリペプチドおよび組換え体
およびそれらの産生方法に関する。本発明のもう一つ別
の態様は、かかるATG−1117（AIF−3）ポリペプチドお
よびポリヌクレオチドの使用方法に関する。かかる使用
は、とりわけ、アテローム性動脈硬化症、ＣＨＦ、再狭
窄、高血圧、線維性血管障害（糖尿病、ＳＬＥ、Ａ
Ｓ）、脳血管事象（例えば、発作、神経傷害およびＣＮ
Ｓ内部での再生）、造血障害、ＡＲＤＳ、癌（特に白血
病）、自己免疫疾患（例えば、ＨＩＶ感染およびＡＩＤ
Ｓ）、線維増殖障害（例えば、乾癬）、炎症疾患（例え
ば、ＲＡ、クローン病、ＩＢＳ）、糸球体疾患、ならび
に変形性線維増殖／炎症応答によって特徴づけられる心
臓血管および心臓血管以外の両方の病態の治療を包含す
る。さらにもう一つ別の態様において、本発明は、本発
明によって得られる物質を用いてアゴニストおよびアン
タゴニストを同定する方法、およびATG−1117（AIF−
3）不均衡に伴う症状を同定された化合物で治療する方
法に関する。本発明のさらにもう一つ別の態様は、不当
なATG−1117（AIF−3）活性またはレベルに付随する疾
患を検出するための診断アッセイに関する。

【０００８】定義 本明細書中で頻繁に使用されるある種の用語をその理解
を容易にするために以下に定義する。「ATG−1117（AIF
−3）」は、とりわけ、配列番号２に示されたアミノ酸
配列またはそれの対立遺伝子変異体を含有してなるポリ
ペプチドをいう。「ATG−1117（AIF−3）活性またはATG
−1117（AIF−3）ポリペプチド活性」または「ATG−111
7（AIF−3）またはATG−1117（AIF−3）ポリペプチドの
生物学的活性」は、類似活性または改良活性、または望
ましくない副作用の減少したこれらの活性を包含する、
該ATG−1117（AIF−3）の代謝的または生理学的機能を
いう。さらに該ATG−1117（AIF−3）の抗原的および免
疫原的活性も含まれる。「ATG−1117（AIF−3）遺伝
子」は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列、また
はその対立遺伝子変異体および／またはそれらの相補物
を含有してなるポリペプチドをいう。

【０００９】本明細書中で使用される「抗体」は、ポリ
クローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ、単鎖お
よびヒト化抗体、ならびにＦａｂまたは他の免疫グロブ
リン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメント
を包含する。「単離」は、自然の状態から「人の手によ
り」変えられたことを意味する。「単離」された組成物
または物質が自然界に存在するならば、それはその最初
の環境から変形されているか、または取り出されてお
り、あるいはその両方である。例えば、生体に自然に存
在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」
されていないが、その自然状態の共存物質から分離され
た同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、その用
語を本明細書に使用する場合には、「単離」されている
ことになる。

【００１０】「ポリヌクレオチド」は、一般に、ポリリ
ボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドの
いずれをもいい、それらは非修飾ＲＮＡまたはＤＮＡ、
あるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであってもよい。「ポ
リヌクレオチド」は、単鎖および二重鎖ＤＮＡ、単鎖お
よび二重鎖領域の混合物であるＤＮＡ、単鎖および二重
鎖ＲＮＡ、単鎖および二重鎖領域の混合物であるＲＮ
Ａ、および単鎖またはより典型的には二重鎖、または単
鎖および二重鎖領域の混合物であってもよいＤＮＡおよ
びＲＮＡを含有してなるハイブリッド分子を包含する
が、これに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチ
ド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡ、あるいはＲＮＡおよびＤ
ＮＡの両方からなる三重鎖領域をいう。ポリヌクレオチ
ドなる用語はまた、一つまたはそれ以上の修飾された塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由で修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡ
も包含する。例えば、「修飾」された塩基は、トリチル
化された塩基およびイノシンなどの異常な塩基を包含す
る。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡになされており；
かくして、「ポリヌクレオチド」は、自然界に典型的に
見いだされるようなポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、ならびにウイルスおよ
び細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学形態を包含
する。さらに「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【００１１】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または
修飾ペプチド結合、即ちペプチドアイソスターで互いに
結合した２つまたはそれ以上のアミノ酸を含有してなる
いずれのペプチドまたはタンパク質をもいう。「ポリペ
プチド」は、通常、ペプチド、オリゴペプチドまたはオ
リゴマーと称される短い鎖、および一般にタンパク質と
称される長い鎖の両方をいう。ポリペプチドは、遺伝子
コードされている２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を含
有してもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセッシ
ングのごとき自然の工程、または当該分野においてよく
知られている化学修飾技法のいずれかによって修飾され
たアミノ酸配列を有する。かかる修飾は、基本テキスト
にて、およびより詳細な研究論文にて、ならびに膨大な
研究文献にて詳しく記載されている。修飾は、ペプチド
骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノまたはカルボキシル
末端を包含する、ポリペプチドのどこででも起こりう
る。同じ型の修飾が、所定のポリペプチド中、いくつか
の部位で、同じまたは異なる程度にて存在してもよいこ
とは明らかであろう。また、所定のペプチドは多くの型
の修飾を有していてもよい。ポリペプチドは、ユビキチ
ン化の結果として分枝してもよく、分枝と共にまたはな
しで環状であってもよい。環状、分枝化および分枝化環
状ポリペプチドは、翻訳後の自然工程の結果、得られる
ものであってもよく、または合成法によって作られても
よい。修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシ
ル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有
結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結
合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイ
ノシトールの共有結合、交差結合、環化、ジスルフィド
結合形成、脱メチル化、共有交差結合の形成、シスチン
の形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ
ーカルボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアンカー形成、ヒ
ドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、
酸化、蛋白分解的プロセッシング、リン酸化、プレニル
化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化な
どの転移ＲＮＡ媒介の蛋白質へのアミノ酸付加、および
ユビキチン化を包含する。例えば、PROTEINS−STRUCTUR
E AND MOLECULAR PROPERTIES, 第２版，Ｔ.Ｅ.Ｃreight
on，Ｗ.Ｈ.Ｆreeman and Ｃompany，New York，1993お
よびＷold,Ｆ.，POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICA
TION OF PROTEINS，Posttranslational Protein Modifi
cations：Perspectives and Prospects,pgs.1-12，B.C.
Johnson編，Academic Press，New York，1983；Seifter
ら,“Analysis for protein modifications and nonpro
tein cofactors”,Meth Enzymol（1990）182：626-64
6、およびRattanら,“Protein Synthesis：Posttransla
tional Modifications and Aging”，Ann NY Acad Sci
（1992）663：48-62を参照のこと。

【００１２】本明細書中で使用される「変異体」なる語
は、各々、対照標準のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドと異なるが、本質的な特性を保持しているポリヌク
レオチドまたはポリペプチドである。ポリヌクレオチド
の典型的な変異体は、別の対照標準のポリヌクレオチド
とヌクレオチド配列において異なっている。変異体のヌ
クレオチド配列における変化は、対照標準のポリヌクレ
オチドによってコードされたポリペプチドのアミノ酸配
列と変わっていてもよいし、または変わっていなくても
よい。ヌクレオチドの変化は、後記するように、対照標
準の配列によってコードされたポリペプチドにおいて、
アミノ酸置換、付加、欠失、融合および切断をもたらし
うる。ポリペプチドの典型的な変異体は、別の対照標準
のポリペプチドとはアミノ酸配列において異なってい
る。一般に、差異は、対照標準のポリペプチドとその変
異体の配列が全体的に非常に類似しており、多くの領域
においては同一であるように限定される。変異体および
対照標準のポリペプチドは、一またはそれ以上の置換、
付加、欠失のいずれかの組み合わせによって、アミノ酸
配列において異なってもよい。置換または挿入されたア
ミノ酸残基は、遺伝暗号によってコードされたものであ
ってもなくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体は、対立遺伝子変異体のごとく天然に存在
するものであってもよく、または天然に存在することが
知られていない変異体であってもよい。ポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドの天然に存在しない変異体は、変
異誘発法または直接合成によって作られてもよい。

【００１３】「同一性」は、ヌクレオチド配列またはア
ミノ酸配列の同一性の度合いを示す。一般に、最も高い
オーダーマッチが得られるように配列を並べる。「同一
性」そのものは一の分野で認識されている意味を有し、
公開された技術を用いて計算することができる。例え
ば、COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY，Lesk，A.M.
編，Oxford University Press，New York，1988；BIOCO
MPUTING：INFORMATICS ANDGENOME PROJECTS，Smith,D.
W.編，Academic Press，New York，1993；COMPUTERANAL
YSIS OF SEQUENCE DATA，PART I，Griffin A.M.およびG
riffin H.G.編，Humana Press，New Jersey，1994；SEQ
UENCE ANALYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY，Von Heinje,
G．Academic Press，1987；およびSEQUENCE ANALYSIS P
RIMER，Gribskov,M.およびDevereux,J.編，M Stockton
Press，New York，1991を参照のこと。２つのポリヌク
レオチドまたはポリペプチド配列の間の同一性を測定す
る方法は多数存在するが、「同一性」という語は当業者
によく知られている（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．およびＬｉ
ｐｔｏｎ，Ｄ．，SIAM J Applied Math（1988）48：107
3）。２つの配列間の同一性または類似性を測定するた
めに一般に使用される方法は、Guide to Huge Computer
s，Martin J. Bishop編，Academic Press，SanDiego，1
994およびCarillo,H.およびLipton,D.，SIAM J Applied
Math (1988) 48：1073に開示されている方法を包含す
るが、これに限定されない。同一性および類似性を決定
する方法は、コンピューターのプログラムにコード化さ
れている。２つの配列間の同一性および類似性を決定す
るための好ましいコンピュータープログラム法は、ＧＣ
Ｓプログラムパッケージ（Devereux,J.ら，Nucleic Aci
ds Research（1984）12（1）：387）、ＢＬＡＳＴＰ、
ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Atschul,S. F.ら, J Molec
Biol（1990）215：403）を包含するが、これに限定さ
れない。

【００１４】一例として、配列番号１の対照標準のヌク
レオチド配列に対して少なくとも、例えば９５％の「同
一性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオ
チドは、そのポリヌクレオチド配列が配列番号１の対照
標準のヌクレオチド配列のヌクレオチド各１００当たり
５つまでの点突然変異を有してもよいことを除き、その
ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、対照標準の配
列と同一であることを意図とする。言い換えれば、対照
標準のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同一
のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るた
めには、その対照標準の配列におけるヌクレオチドの５
％までが欠失または別のヌクレオチドで置換されていて
もよく、または対照標準の配列における全ヌクレオチド
の５％までの数のヌクレオチドが対照標準の配列中に挿
入されてもよい。対照標準の配列のこれらの変異は対照
標準のヌクレオチド配列の５または３末端部位で、また
はそれら末端部位の間のどこで起こってもよく、対照標
準の配列中のヌクレオチド間に個々に、または対照標準
の配列内の一またはそれ以上の隣接する基において点在
してもよい。

【００１５】同様に、配列番号２の対照標準のアミノ酸
配列に対して少なくとも、例えば９５％同一性を有する
アミノ酸配列を有するポリペプチドは、そのポリペプチ
ド配列が配列番号２の対照標準のアミノ酸配列のアミノ
酸各１００当たり５つまでのアミノ酸変異を有してもよ
いことを除き、そのポリペプチドのアミノ酸配列が、対
照標準の配列と同一であることを意図とする。言い換え
れば、対照標準のアミノ酸配列に対して少なくとも９５
％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るため
には、その対照標準の配列におけるアミノ酸残基の５％
までが欠失または別のアミノ酸で置換されていてもよ
く、または対照標準の配列における全アミノ酸残基の５
％までの数のアミノ酸が対照標準の配列中に挿入されて
もよい。対照標準の配列のこれらの変化は対照標準のア
ミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端部位で、また
はそれら末端部位の間のどこで起こってもよく、対照標
準の配列中の残基間に個々に、または対照標準の配列内
の一またはそれ以上の隣接する基において点在してもよ
い。

【００１６】本発明のポリペプチド 一の態様において、本発明はATG−1117（AIF−3）ポリ
ペプチドに関する。ATG−1117（AIF−3）ポリペプチド
は、配列番号２のポリペプチド；ならびに配列番号２の
アミノ酸配列を含んでなるポリペプチド；および配列番
号２のアミノ酸配列と全長にわたって少なくとも８０％
の同一性、より好ましくは配列番号２に対して少なくと
も９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９
５％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるポリペ
プチドを包含する。さらには、少なくとも９７−９９％
の同一性を有するものが好ましい。また、ATG−1117（A
IF−3）ポリペプチドには、配列番号２のアミノ酸配列
を有するポリペプチドと全長にわたって少なくとも８０
％の同一性、より好ましくは配列番号２に対して少なく
とも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも
９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプ
チドも含まれる。さらには、少なくとも９７−９９％の
同一性を有するものが好ましい。好ましくは、ATG−111
7（AIF−3）ポリペプチドは、ATG−1117（AIF−3）の少
なくとも一つの生物学的活性を示す。

【００１７】ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドは「成
熟」タンパク質の形態であるか、または融合タンパク質
のようなより大きなタンパク質の一部であってもよい。
分泌またはリーダー配列、プロ配列、多ヒスチジン残基
のような精製を助成する配列、または組換え体産生の間
の安定性のための付加的配列を有する付加的アミノ酸配
列を含むことが有利なことがよくある。

【００１８】ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドのフラ
グメントも本発明に含まれる。フラグメントは、前記し
たATG−1117（AIF−3）ポリペプチドのアミノ酸配列
の、全部ではないが、一部と完全に同一であるアミノ酸
配列を有するポリペプチドである。ATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドと同様、フラグメントは「自立してい
る」であるか、またはそれらが一の部分または領域、最
も好ましくは単一の連続した領域を形成するより大きな
ポリペプチドの中に含まれていてもよい。本発明のポリ
ペプチドフラグメントの代表例は、例えば、ATG−1117
（AIF−3）ポリペプチドのアミノ酸の約１−２０番、２
１−４０番、４１−６０番、６１−８０番、８１−１０
０番、および１０１から末端までのフラグメントを包含
する。この場合の「約」は、一方の末端または両方の末
端において数個、５、４、３、２または１個のアミノ酸
分だけ長い、または短い特記した範囲のものを包含す
る。

【００１９】好ましいフラグメントは、例えば、アミノ
末端を含む一連の残基、またはカルボキシル末端を含む
一連の残基の欠失、あるいは一方がアミノ末端を有し、
もう一方がカルボキシル末端を有する２つの一連の残基
の欠失は除く、ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドのア
ミノ酸配列を有する末端切断ポリペプチドを包含する。
アルファヘリックスおよびアルファヘリックス形成領
域、ベータシートおよびベータシート形成領域、ターン
およびターン形成領域、コイルおよびコイル形成領域、
親水領域、疎水領域、アルファ両親媒性領域、ベータ両
親媒性領域、可変領域、界面形成領域、基質結合領域、
および、高抗原指数領域を含んでなるフラグメントのよ
うな、構造的または機能的属性によって特徴づけられる
フラグメントもまた好ましいフラグメントである。他の
好ましいフラグメントは生物学的に活性なフラグメント
である。生物学的に活性なフラグメントは、類似活性ま
たは改良活性を有するもの、または望ましくない活性が
減少したものを包含する、ATG−1117（AIF−3）活性を
媒介するフラグメントである。さらに、動物、特にヒト
において抗原性または免疫原性であるフラグメントも含
まれる。

【００２０】好ましくは、これらすべてのポリペプチド
フラグメントは、抗原活性を包含するATG−1117（AIF−
3）の生物学的活性を保持している。定義された配列お
よびフラグメントの変異体も本発明の一部を形成する。
好ましい変異体は、同類アミノ酸置換によって対照標準
と異なるもの、即ち、一の残基を別の類似の性質の残基
で置換したものである。そのような典型的な置換は、Ａ
la、Ｖal、ＬeuおよびＩleの間で；ＳerおよびＴhrの間
で；酸性残基ＡspおよびＧluの間で；ＡsnおよびＧlnの
間で；塩基性残基ＬysおよびＡrgの間で；または芳香族
残基ＰheおよびＴyrの間でなされる。数個、５−１０、
１−５または１−２アミノ酸がいずれかの組み合わせ
で、置換、欠失または付加されている変異体が特に好ま
しい。

【００２１】本発明のATG−1117（AIF−3）ポリペプチ
ドは、いずれか適当な方法で製造できる。かかるポリペ
プチドは、単離された天然に存在するポリペプチド、組
換えで製造されたポリペプチド、合成されたポリペプチ
ド、またはこれらの方法の組み合わせで製造されたポリ
ペプチドを包含する。かかるポリペプチドを合成する方
法は当該分野において周知である。

【００２２】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つ別の態様は、ATG−1117（AIF−3）ポ
リヌクレオチドに関する。ATG−1117（AIF−3）ポリヌ
クレオチドは、ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドおよ
びフラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチ
ド、およびそれに密接に関連したポリヌクレオチドを包
含する。より詳細には、本発明のATG−1117（AIF−3）
ポリヌクレオチドは、配列番号２のATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドをコードする配列番号１に示されたヌ
クレオチド配列を有してなるポリヌクレオチド、および
配列番号１の特定配列を有するポリヌクレオチドを包含
する。さらに、ATG−1117（AIF−3）ポリヌクレオチド
は、配列番号２のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列と全長にわたって少なくと
も８０％同一性を有するヌクレオチド配列を有してなる
ポリヌクレオチド、および配列番号１を有するポリヌク
レオチドと全長にわたって少なくとも８０％同一である
ポリヌクレオチドを包含する。この点において、少なく
とも９０％同一のポリヌクレオチドが特に好ましく、少
なくとも９５％同一のポリヌクレオチドがとりわけ好ま
しい。さらには、少なくとも９７％同一のポリヌクレオ
チドがより好ましく、少なくとも９８−９９％同一のポ
リヌクレオチドがさらに好ましく、少なくとも９９％同
一のものが最も好ましい。増幅に使用可能な条件下でハ
イブリダイゼーションするための、またはプローブまた
はマーカーとして使用されるための、配列番号１に含ま
れるヌクレオチド配列に対して十分な同一性を有するヌ
クレオチド配列もまた、ATG−1117（AIF−3）ポリヌク
レオチドに含まれる。本発明は、かかるATG−1117（AIF
−3）ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドも
提供するものである。

【００２３】ヒト・ATG−1117（AIF−3）をコードして
いる表１のｃＤＮＡ（配列番号１）の配列を決定するこ
とによって示されるごとく、本発明のATG−1117（AIF−
3）は、同種異型移植炎症性因子ファミリーの他のタン
パク質に構造的に関係している。配列番号１のｃＤＮＡ
配列は配列番号２の１５０アミノ酸のポリペプチドをコ
ードしているオープンリーディングフレーム（ヌクレオ
チド番号１ないし４５０）を含有する。表２のアミノ酸
配列（配列番号２）は、同種異型移植片炎症性因子-１
（U. Utansら, Transplantation, 61:1387-1392,1996）
と１２３アミノ酸残基において約６７％同一である（Bl
astPを使用）。さらに、ATG−1117（AIF−3）は、１２
３アミノ酸残基にわたってM. V. Autieri（Biochem. Bi
ophys. REs. Commun., 228:29-37, 1996）によって同定
されたヒト・AIF−１と６７％同一である。ATG−1117
（AIF−3）は、各々１２７および１２１アミノ酸残基に
わたって、ラット・AIF−１およびｉｂａ-１（受入番号
Ｕ１７９１９；U. Utansら,J. Clin. Invest., 95:2954
-2962,1995；受入番号Ｄ８２０６９、Y. Imaiら, Bioch
em. Biophys. Res. Commun., 224:855-862, 1996）とも
各々６２％および６３％同一である。表１のヌクレオチ
ド配列（配列番号１）は、ＡＡ０１６７１４（ｍｇ９０
ｈ０５.ｒｌsoaresマウス胎児ＮｂＭＥ１３.５ １４.５
Ｍｕｓ筋肉）、即ち、ＷａｓｈＵ-ＨＨＭＩマウスＥＳ
Ｔプロジェクトによって同定された部分的ＥＳＴと３８
４ヌクレオチドにおいて約９１％同一（BLASTの使用）
であり、そのＥＳＴは、AIF−３のオープンリーディン
グフレームの３’末端（約６６ヌクレオチド）を欠失し
ている。さらに、ATG−1117（AIF−3）は、さらに４つ
のＷａｓｈＵ-ＨＨＭＩマウスＥＳＴプロジェクトによ
って同定された部分的配列（受入番号Ｗ７６９１７、Ｎ
２８５１５、ＡＡ１１００３２およびＡＡ２０６２３
６）と、各々３７２、２８３、２４８および１２２ヌク
レオチドにわたって、各々９１％、９８％、９０％およ
び１００％同一である。しかしながら、これらの配列の
うち最初の２つは３’-ＥＳＴの部分のみであって、ATG
−1117（AIF−3）において詳述される完全なオープンリ
ーディングフレームを包含せず、Ｗ７６９１７およびＮ
２８５１５は、ATG−1117（AIF−3）の５’末端の最初
の各々８０および１７０ヌクレオチドを欠失している。
対照的に、部分的５’-ＥＳＴ ＡＡ１１００３２および
ＡＡ２０６２３６は、ATG−1117（AIF−3）のオープン
リーディングフレームの３’末端の７５−７８塩基対を
欠失している。ATG−1117（AIF−3）は、U. Utansら（T
ransplantation, 61:1387-1392, 1996 ）およびM. V. A
utieri（Biochem. Biophys. Res. Commun., 228:29-37,
1996）によって記載されたヒト・AIF−１配列と、各々
３７３および３８３ヌクレオチドにわたって６７％同一
である。ATG−1117（AIF−3）は、ヒト（受入番号Ｄ８
６４３８、ＤＤＢＪ、ＥＭＢＬおよびＧｅｎＢａｎｋに
直接寄託）およびラットiba-1（受入番号Ｄ８２０６
９、Y. Imaiら, Biochem. Biophys. Res. Commun., 22
4:855-862, 1996）と、各々３８３および３８０ヌクレ
オチドにわたって、各々６７％および６５％同一であ
る。

【００２４】

【表１】 表１^a *ATGTCGGGCGAGCTCAGCAACAGGTTCCAAGGAGGGAAGGCGTTCGGCTTGCTCAAAGCCCGGCAGGAGAG GAGGCTGGCCGAGATCAACCGGGAGTTTCTGTGTGACCAGAAGTACAGTGATGAAGAGAACCTTCCAGAAAA GCTCACAGCCTTCAAAGAGAAGTACATGGAGTTTGACCTGAACAATGAAGGCGAGATTGACCTGATGTCTTT AAAGAAGATGATGGAGAAGCTTGGTGTCCCCAAGACCCACCTGGAGATGACGACGATGATCTCAGAGGTGAC AGGAGGGGTCAGTGACACTATATCCTACCGAGACTTTGTGAACATGATGCTGGGGAAACGGTCGGCTGTCCT CAAGTTAGTCATGATGTTTGAAGGAAAAGCCAACGAGAGCAGCCCCAAGCCAGTTGGCCCCCCTCCAGAGAG AGACATTGCTAGCCTGCCCTGA ａ：ヒトATG−1117（AIF−3）のヌクレオチド配列。配列番号１。

【００２５】

【表２】 表２^b *MSGELSNRFQGGKAFGLLKARQERRLAEINREFLCDQKYSDEENLPEKLTAFKEKYMEFDLNNEGEIDLMS LKKMMEKLGVPKTHLEMTTMISEVTGGVSDTISYRDFVNMMLGKRSAVLKLVMMFEGKANESSPKPVGPPPE RDIASLP. ｂ：ヒトATG−1117（AIF−3）のアミノ酸配列。配列番号２。

【００２６】ATG−1117（AIF−3）をコードする本発明
の一のポリヌクレオチドは、発現配列標識（ＥＳＴ）解
析（Adams,M.D.ら、Science（1991）252：1651-1656；A
dams,M.D.ら、Nature（1992）355：632-634；Adams,M.
D.ら、Nature（1995）377 Supp：3-174）を用い、ヒト
海馬の細胞におけるｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡライブラリ
ーから標準的クローニングおよびスクリーニングを使用
して得ることができる。本発明のポリヌクレオチドは、
ゲノムＤＮＡライブラリーのごとき天然源から得ること
もでき、または周知かつ商業上利用できる技術を使用し
て合成することもできる。

【００２７】配列番号２のATG−1117（AIF−3）ポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列は、表１に含まれ
るポリペプチドをコードする配列（配列番号1のヌクレ
オチド番号１ないし４５０）と同一であってもよく、ま
たは遺伝暗号の重複性（縮重性）の結果として、配列番
号２のポリペプチドをコードする配列であってもよい。

【００２８】本発明のポリヌクレオチドがATG−1117（A
IF−3）ポリペプチドの組換え体製造に使用される場
合、そのポリヌクレオチドは、単独で、成熟ポリペプチ
ドまたはそのフラグメントの暗号配列；リーダーまたは
分泌配列、プレ、プロまたはプレプロタンパク質配列、
または他の融合ペプチド部分をコードする配列のごと
き、他の暗号配列のリーディングフレームにおける成熟
ポリペプチドまたはフラグメントの暗号配列を有してい
てもよい。例えば、融合ポリペプチドの精製を促進する
マーカー配列をコードすることができる。本発明のこの
態様のある種の好ましい具体例において、マーカー配列
は、ｐＱＥベクター（Qiagen,Inc.）において提供さ
れ、Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1989）86：821
-824に記載されるような、６−ヒスチジンペプチドであ
るか、またはＨＡ標識である。ポリヌクレオチドはま
た、転写配列、非翻訳配列、スプライシングおよびポリ
アデニル化シグナル、リボソーム結合部位およびｍＲＮ
Ａを安定化する配列のような、非暗号５’および３’配
列を含有してもよい。

【００２９】さらに好ましい具体例は、数個、５−１
０、１−５、１−３、１−２または１個のアミノ酸残基
が、いずれかの組み合わせで置換、欠失または付加され
た表１のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドのアミノ酸
配列（配列番号２）を含んでなる、ATG−1117（AIF−
3）変異体をコードするポリヌクレオチドである。さら
に本発明は、本明細書にて前記した配列にハイブリダイ
ゼートするポリヌクレオチドに関する。この点におい
て、本発明は特に、本明細書にて前記したポリヌクレオ
チドにストリンジェントな条件下でハイブリダイゼート
するポリヌクレオチドに関する。本明細書で使用される
「ストリンジェントな条件」という語は、ハイブリダイ
ゼーションが、配列間に少なくとも９５％、好ましくは
少なくとも９７％の同一性が存在する場合にのみ起こる
ことを意味する。

【００３０】配列番号１に含まれるヌクレオチド配列ま
たはそのフラグメントと同一または十分に同一である本
発明のポリヌクレオチドは、ATG−1117（AIF−3）ポリ
ペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクロー
ンを単離するため、およびATG−1117（AIF−3）遺伝子
と高配列類似性を有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲ
ノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡおよびゲノム
ＤＮＡのためのハイブリダイゼーションプローブとして
用いてもよい。かかるハイブリダイゼーション法は当業
者に知られている。典型的には、これらのヌクレオチド
配列は、対照標準の配列と８０％同一、好ましくは９０
％同一、より好ましくは９５％同一である。一般にプロ
ーブは少なくとも１５のヌクレオチドを含んでなるであ
ろう。好ましくは、かかるプローブは少なくとも３０の
ヌクレオチドを有するであろうし、少なくとも５０のヌ
クレオチドを有してもよい。特に好ましいプローブは、
３０と５０の範囲のヌクレオチドであろう。

【００３１】一つの具体例において、ATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを得る
のは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件
下、配列番号１またはそのフラグメントを有する標識化
されたプローブで適当なライブラリーをスクリーニング
する工程と、該ポリヌクレオチド配列を含有する全長ｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する工程とからな
る。かくして、もう一つの態様において、本発明ATG−1
117（AIF−3）ポリヌクレオチドは、さらに配列番号１
を有するヌクレオチド配列またはそれの断片にストリン
ジェントな条件下でハイブリダイゼートするヌクレオチ
ド配列を含んでなるヌクレオチド配列を包含する。ATG
−1117（AIF−3）ポリペプチドは、上記ハイブリダイゼ
ーション条件によって得られるヌクレオチド配列によっ
てコードされるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド
も包含する。かかるハイブリダイゼーション法は、当業
者によく知られている。ストリンジェントなハイブリダ
イゼーション条件は、前記に定義した通りであるか、ま
たは別法として５０％ホルムアルデヒド、５ｘＳＳＣ
（１５０ｍＭ ＮaＣl、１５ｍＭ クエン酸三ナトリウ
ム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（pＨ７.６）、５ｘデ
ンハルト（Denhardt’s）溶液、１０％硫酸デキストラ
ンおよび２０μｇ／ｍｌ変性切断サケ精子ＤＮＡを含ん
でなる溶液中、４２℃で一夜インキュベーションし、そ
の後そのフィルターを０.１ｘＳＳＣで約６５℃で洗浄
する条件である。本発明のポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドは、動物およびヒトの疾患に対する治療および
診断の発見のための研究試薬および研究材料として用い
てもよい。

【００３２】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドまたはポリヌ
クレオチド類を含んでなるベクターおよび本発明のベク
ターで遺伝子操作される宿主細胞に、および組換え技術
による本発明のポリペプチドの産生に関する。さらに無
細胞翻訳系を用い、本発明のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡ
を使用してかかるタンパク質を製造することができる。

【００３３】組換え体産生のために、宿主細胞を遺伝子
操作し、本発明のポリヌクレオチドの発現系またはそれ
の一部を取り込むことができる。ポリヌクレオチドの宿
主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクシ
ョン、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクショ
ン、トランスベクション、マイクロインジェクション、
陽イオン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポ
レーション、トランスダクション、スクレープ・ローデ
ィング、弾道導入または感染のような、Davisら、BASIC
METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY（1986）およびSambroo
kら、MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，2nd E
d. Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring
Harbor, N.Y.（1989）のごとき複数の標準的研究室マ
ニュアルに記載されている方法によって行うことができ
る。

【００３４】適当な宿主の代表例は、レンサ球菌（stre
ptococcus）、ブドウ球菌（staphylococcus）、大腸菌
（E.coli）、ストレプトマイセス（streptomyces）およ
び枯草菌（Bacillus subtilis）細胞のごとき細菌細
胞；酵母細胞およびアスペルギルス（Aspergillus）細
胞のごとき真菌細胞；ドロソフィラ（Drosophila）Ｓ２
およびスポドプテラ（Spodoptera）Ｓｆ９細胞のごとき
昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨeＬa、Ｃ１２７、３Ｔ
３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３およびボーウェス（Bowes）
メラノーマ細胞のごとき動物細胞；および植物細胞を包
含する。

【００３５】非常に多様な発現系を使用することができ
る。かかる系は、とりわけ、染色体、エピソームおよび
ウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由来、バク
テリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソ
ーム由来、挿入因子由来、酵母染色体因子由来、バキュ
ロウイルス、ＳＶ４０のごときパポーバウイルス、ワク
シニアウイルス、アデノウイルス、ニワトリポックスウ
イルス、偽狂犬病ウイルスおよびレトロウイルスのよう
なウイルス由来のベクター、およびコスミドおよびファ
ージミドなどのプラスミドおよびバクテリオファージの
遺伝子因子由来のベクターのごとき、それらの組み合わ
せに由来するベクターを包含する。発現系は、発現を制
御ならびに引き起こす調節領域を有していてもよい。一
般に、宿主においてポリペプチドを産生するためのポリ
ヌクレオチドを維持、増幅または発現するのに適した系
またはベクターを使用してもよい。適当なヌクレオチド
配列を、例えば、Sambrookら、MOLECULAR CLONING，A L
ABORATORY MANUAL（前掲）に示されている技術のごと
き、種々のよく知られた慣用的技術のいずれかによっ
て、発現系に挿入してもよい。

【００３６】翻訳されたタンパク質を小胞体ルーメン、
周辺腔または細胞外環境に分泌するために、適当な分泌
シグナルが所望のポリペプチドに挿入されていてもよ
い。これらのシグナルは、ポリペプチドに固有のもので
あってもよく、または異種のシグナルであってもよい。
ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドがスクリーニングア
ッセイにおける用途として発現されなければならない場
合、一般に、ポリペプチドは細胞の表面で産生されるこ
とが望ましい。この場合には、細胞はスクリーニングア
ッセイに使用される前に集められる。ATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドが培養液中に分泌される場合、そのポ
リペプチドを回収および精製するために、培養液を回収
することができ；細胞内に産生される場合は、ポリペプ
チドを回収する前に、まず細胞を溶解させなければなら
ない。

【００３７】ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドは、硫
酸アンモニウムまたはエタノール沈澱、酸抽出、アニオ
ンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセル
ロースクロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラ
フィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキ
シルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロ
マトグラフィーを包含する、周知方法によって組換え細
胞培養物から回収および精製できる。最も好ましくは、
高速液体クロマトグラフィーが精製に使用される。ポリ
ペプチドが単離および／または精製の間に変性する場
合、タンパク質を再生する周知方法を用いて、再び活性
な立体配座とすることができる。

【００３８】診断アッセイ 本発明はまた、診断試薬としての用途におけるATG−111
7（AIF−3）ポリヌクレオチドの使用に関する。機能障
害に伴うATG−1117（AIF−3）遺伝子の変異した形態の
検出は、ATG−1117（AIF−3）の発現不足、発現過多ま
たは発現の変化の結果生じる疾患または疾患に対する感
受性の診断に付加しうる、または診断を限定しうる診断
手段を提供するであろう。ATG−1117（AIF−3）遺伝子
にて変異を有する個体は、様々な技術によってＤＮＡレ
ベルで検出され得る。

【００３９】診断のための核酸は、血液、尿、唾液、組
織生検または検死材料のごとき、対象の細胞から得ても
よい。ゲノムＤＮＡを検出のために直接使用してもよ
く、または解析の前にＰＣＲまたは他の増幅技術を用い
ることによって酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたは
ｃＤＮＡもまた同様にして使用してもよい。欠失および
挿入は正常な遺伝子型と比較して増幅された産物の大き
さが変化していることによって検出できる。点突然変異
は、標識されたATG−1117（AIF−3）ヌクレオチド配列
に増幅したＤＮＡをハイブリダイゼーションさせること
によって同定できる。完全に一致した配列は、ＲＮase
消化によりまたは融点における差異によって、ミスマッ
チの二重螺旋と区別することができる。ＤＮＡ配列の差
異はまた、変性試薬存在下または非存在下でのゲル中の
ＤＮＡフラグメントの電気泳動的移動度における変化、
または直接的ＤＮＡ塩基配列決定によって検出してもよ
い。例えば、Myersら、Science（1985）230：1242を参
照のこと。特異的な位置での配列の変化はまた、ＲＮas
eおよびＳ１保護などのヌクレアーゼ保護アッセイまた
は化学分解法によって明らかにすることができる。Cott
onら、Proc Natl AcadSci USA（1985）85：4397-4401を
参照のこと。もう一つ別の具体例において、ATG−1117
（AIF−3）ヌクレオチド配列またはそれのフラグメント
を含んでなるオリゴヌクレオチドプローブの配列を構築
し、例えば、遺伝子変異の効果的なスクリーニングを行
うことができる。配列工学法はよく知られており、一般
的な適用性を有し、遺伝子発現、遺伝子連結および遺伝
子多様性を包含する分子遺伝学における種々の疑問を処
理するために用いることができる。（例えば、M.Chee
ら、Science 第274巻、610-613頁（1996）を参照のこ
と。）

【００４０】診断アッセイは、記載した方法によるATG
−1117（AIF−3）遺伝子中の変異の検出によって、アテ
ローム性動脈硬化症、ＣＨＦ、再狭窄、高血圧、線維性
血管障害（糖尿病、ＳＬＥ、ＡＳ）、脳血管事象（例え
ば、発作、神経傷害およびＣＮＳ内部での再生）、造血
障害、ＡＲＤＳ、癌（特に白血病）、自己免疫疾患（例
えば、ＨＩＶ感染およびＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例
えば、乾癬）、炎症疾患（例えば、ＲＡ、クローン病、
ＩＢＳ）、糸球体疾患、ならびに変形性線維増殖／炎症
応答によって特徴づけられる心臓血管および心臓血管以
外の両方の病態に対する罹病し易さを診断または決定す
るための方法を提供する。

【００４１】加えて、アテローム性動脈硬化症、ＣＨ
Ｆ、再狭窄、高血圧、線維性血管障害（糖尿病、ＳＬ
Ｅ、ＡＳ）、脳血管事象（例えば、発作、神経傷害およ
びＣＮＳ内部での再生）、造血障害、ＡＲＤＳ、癌（特
に白血病）、自己免疫疾患（例えば、ＨＩＶ感染および
ＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例えば、乾癬）、炎症疾患
（例えば、ＲＡ、クローン病、ＩＢＳ）、糸球体疾患、
ならびに変形性線維増殖／炎症応答によって特徴づけら
れる心臓血管および心臓血管以外の両方の病態は、異常
に増加または減少したATG−1117（AIF−3）ポリペプチ
ドまたはATG−1117（AIF−3）ｍＲＮＡのレベルを、対
象由来の試料を測定することを含んでなる方法によって
診断できる。減少または増加した発現を、例えば、ＰＣ
Ｒ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮase保護、ノザンブロッティン
グおよび他のハイブリダイゼーション法などの、ポリヌ
クレオチドの定量のための、当業者によく知られている
いずれかの方法を用いて、ＲＮＡレベルで測定すること
ができる。宿主由来の試料におけるATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドなどのタンパク質のレベルを決定する
ために用いることのできるアッセイ技法は当業者に周知
である。かかるアッセイ法は、ラジオイムノアッセイ、
競合的結合アッセイ、ウエスタンブロット解析およびＥ
ＬＩＳＡアッセイを包含する。

【００４２】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも価
値がある。その配列は、特異的に標的とされ、個々のヒ
ト染色体上の特定位置にハイブリダイゼーションするこ
とができる。本発明による関連配列の染色体へのマッピ
ングは、それら配列を遺伝子関連の疾患に関係付けるこ
とにおける重要な第１工程である。一旦、配列が正確な
染色体上の位置にマッピングされると、その配列の染色
体上での物理的な位置を遺伝子マップデータに関係付け
ることができる。そのようなデータは、例えば、V.McKu
sick、Mendelian Inheritance in Man（Johns Hopkins
University Welch Medical Libraryを介してオンライン
で入手可能）にある。同じ染色体領域にマッピングされ
る遺伝子と疾患の間の関係は、連鎖解析（物理的に近接
した遺伝子の同時遺伝）によって同定される。

【００４３】影響を受けた対象と影響を受けていない対
象の間のｃＤＮＡまたはゲノム配列における差異もまた
測定できる。変異がいくつかまたはすべての影響を受け
た対象において観察されるが、正常な対象においては観
察されないならば、その変異がその疾患の原因である可
能性が高い。

【００４４】抗体 本発明のポリペプチドもしくはそのフラグメントまたは
そのアナログ、あるいはそれらを発現する細胞はまた、
ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドに免疫特異的な抗体
を産生するための免疫原として用いることもできる。
「免疫特異的」なる語は、抗体が従来の他の関連ポリペ
プチドに対する親和性より、本発明のポリペプチドに実
質的により高い親和性を有することをいう。

【００４５】ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドに拮抗
して産生された抗体は、ポリペプチドまたはエピトープ
を有するフラグメント、アナログまたは細胞を、動物、
好ましくはヒト以外の動物に、慣用的プロトコルを用い
て投与することによって得ることができる。モノクロー
ナル抗体を調製する場合、連続的細胞系培養によって産
生された抗体を供給するいずれの技術も用いることがで
きる。例えば、ハイブリドーマ技法（Kohler,G.およびM
ilstein,C.、Nature（1975）256：495-497）、トリオー
マ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Kozborら、Im
munology Today（1983）4：72）およびＥＢＶ−ハイブ
リドーマ技法（Coleら、MONOCLONAL ANTIBODIES AND CA
NCER THERAPY、77-96頁、Alan R.Liss,Inc.，1985）が
挙げられる。

【００４６】単鎖抗体を産生する技法（米国特許第４９
４６７７８号）をまた適用し、本発明のポリペプチドに
対する単鎖抗体を産生することができる。さらに、トラ
ンスジェニックマウス、または他の哺乳動物を包含する
他の生物を用いて、ヒト化された抗体を発現させてもよ
い。前記した抗体を用い、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離または同定してもよく、あるいはアフィ
ニティクロマトグラフィーによりそのポリペプチドを精
製してもよい。

【００４７】ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドに対す
る抗体を用いて、とりわけ、アテローム性動脈硬化症、
ＣＨＦ、再狭窄、高血圧、線維性血管障害（糖尿病、Ｓ
ＬＥ、ＡＳ）、脳血管事象（例えば、発作、神経傷害お
よびＣＮＳ内部での再生）、造血障害、ＡＲＤＳ、癌
（特に白血病）、自己免疫疾患（例えば、ＨＩＶ感染お
よびＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例えば、乾癬）、炎症
疾患（例えば、ＲＡ、クローン病、ＩＢＳ）、糸球体疾
患、ならびに変形性線維増殖／炎症応答によって特徴づ
けられる心臓血管および心臓血管以外の両方の病態を治
療してもよい。

【００４８】ワクチン 本発明のもう一つ別の態様は、とりわけ、アテローム性
動脈硬化症、ＣＨＦ、再狭窄、高血圧、線維性血管障害
（糖尿病、ＳＬＥ、ＡＳ）、脳血管事象（例えば、発
作、神経傷害およびＣＮＳ内部での再生）、造血障害、
ＡＲＤＳ、癌（特に白血病）、自己免疫疾患（例えば、
ＨＩＶ感染およびＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例えば、
乾癬）、炎症疾患（例えば、ＲＡ、クローン病、ＩＢ
Ｓ）、糸球体疾患、ならびに変形性線維増殖／炎症応答
によって特徴づけられる心臓血管および心臓血管以外の
両方の病態から哺乳動物を保護するために抗体および／
またはＴ細胞免疫応答を引き起こすのに十分なATG−111
7（AIF−3）ポリペプチドまたはそれのフラグメントで
該哺乳動物を接種することからなる、哺乳動物において
免疫応答を誘発する方法に関する。本発明のさらにもう
一つ別の態様は、哺乳動物における免疫学的応答を誘発
する方法であって、かかる免疫学的応答を誘発し、該動
物を疾患から保護する抗体を産生するために、in vivo
にてATG−1117（AIF−3）ポリヌクレオチドの発現を方
向付けるベクターを用いてATG−1117（AIF−3）ポリペ
プチドをデリバーすることからなる方法に関する。

【００４９】本発明のさらなる態様は、哺乳動物宿主に
導入されると、その哺乳動物においてATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドに対する免疫学的応答を誘発する免疫
学的／ワクチン処方（組成物）であって、ATG−1117（A
IF−3）ポリペプチドまたはATG−1117（AIF−3）遺伝子
を含有してなる組成物に関する。ワクチン処方は、さら
に適当な担体を含有していてもよい。ATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドは胃で破壊されるかもしれないので、
非経口的投与（皮下、筋肉内、静脈内、皮内等の注射を
包含する）が望ましい。非経口投与に適した処方は、抗
酸化剤、緩衝剤、抗菌剤、およびその処方を受容者の血
液と等張にする溶質を含有していてもよい、水性および
非水性滅菌注射溶液；懸濁化剤または増粘剤を含有して
もよい、水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。処方
は、単位投与または複数投与用コンテナ、例えば、密封
されたアンプルおよびバイアルにて提供され、使用直前
に滅菌液体担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で貯
蔵することができる。ワクチン処方はまた、水中油系の
ごとき処方の免疫原性を高めるアジュバント系および当
該分野において知られている他の系を有してもよい。投
与量はワクチンの比活性に依存し、慣用的実験操作によ
って容易に決定できる。

【００５０】スクリーニングアッセイ 本発明のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドは、本発明
のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドを活性化し（アゴ
ニスト）、またはその活性化を阻害（アンタゴニスト、
あるいは阻害剤と称される）する化合物についてのスク
リーニング法において用いてもよい。かくして、本発明
のポリペプチドを用い、例えば、細胞、無細胞調製物、
化学ライブラリーおよび天然物の混合物中のアゴニスト
またはアンタゴニストを同定してもよい。これらのアゴ
ニストまたはアンタゴニストは、事情しだいで、本発明
のポリペプチドの、天然の基質、リガンド、レセプター
などであってもよく、または本発明のポリペプチドの構
造的または機能的模倣物であってもよい。Coliganら、C
urrent Protocols in Immunology 1（2）：Chapter5（1
991）を参照のこと。

【００５１】ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドは、多
くの病理学を含む、多くの生物学的機能に関与してい
る。従って、一方でATG−1117（AIF−3）ポリペプチド
を刺激し、他方でATG−1117（AIF−3）ポリペプチドの
機能を阻害しうる化合物および薬剤を見いだすことが望
ましい。一般に、アゴニストは、アテローム性動脈硬化
症、ＣＨＦ、再狭窄、高血圧、線維性血管障害（糖尿
病、ＳＬＥ、ＡＳ）、脳血管事象（例えば、発作、神経
傷害およびＣＮＳ内部での再生）、造血障害、ＡＲＤ
Ｓ、癌（特に白血病）、自己免疫疾患（例えば、ＨＩＶ
感染およびＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例えば、乾
癬）、炎症疾患（例えば、ＲＡ、クローン病、ＩＢ
Ｓ）、糸球体疾患、ならびに変形性線維増殖／炎症応答
によって特徴づけられる心臓血管および心臓血管以外の
両方の病態のような病状を治療および予防する目的に使
用される。アンタゴニストは、アテローム性動脈硬化
症、ＣＨＦ、再狭窄、高血圧、線維性血管障害（糖尿
病、ＳＬＥ、ＡＳ）、脳血管事象（例えば、発作、神経
傷害およびＣＮＳ内部での再生）、造血障害、ＡＲＤ
Ｓ、癌（特に白血病）、自己免疫疾患（例えば、ＨＩＶ
感染およびＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例えば、乾
癬）、炎症疾患（例えば、ＲＡ、クローン病、ＩＢ
Ｓ）、糸球体疾患、ならびに変形性線維増殖／炎症応答
によって特徴づけられる心臓血管および心臓血管以外の
両方の病態のような病状を治療および予防する種々の目
的に使用できる。

【００５２】一般に、かかるスクリーニング法は、本発
明のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドを発現するか、
または本発明のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドに応
答する適当な細胞を用いることを包含する。かかる細胞
は、哺乳動物、酵母、ドロソフィラまたはイー・コリ由
来の細胞を包含する。ついで、ATG−1117（AIF−3）ポ
リペプチドを発現する細胞（または、発現されたレセプ
ターを含有する細胞膜）またはATG−1117（AIF−3）ポ
リペプチドに応答する細胞を試験化合物と接触させて、
結合、または機能的応答の刺激または阻害を観察する。
候補の化合物と接触させた細胞の能力を、接触させてい
ない同じ細胞の能力とATG−1117（AIF−3）活性につい
て比較する。

【００５３】該アッセイは候補の化合物の結合を簡易的
に試験するものであって、ATG−1117（AIF−3）ポリペ
プチドを有する細胞への付着を、直接または間接的にそ
の候補の化合物に付随する標識により検出するか、また
は標識化された競合物との競合を含むアッセイにおいて
検出するものである。さらに、これらのアッセイは、AT
G−1117（AIF−3）ポリペプチドを有する細胞に適した
検出系を使用して、候補の化合物がATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドの活性化によってシグナルを生じるか
どうかを試験してもよい。活性化の阻害剤は、一般に、
既知のアゴニストの存在下で検定され、候補の化合物の
存在によってアゴニストによる活性化についての作用を
観察する。かかるスクリーニングアッセイを行うための
標準的方法は、当該分野においてよく理解されている。

【００５４】潜在的ATG−1117（AIF−3）ポリペプチド
アンタゴニストとして、抗体、またはある場合には、事
情しだいで、ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドのリガ
ンド、基質、レセプターなどに密接に関係付けられるオ
リゴヌクレオチドまたはタンパク質、例えば、リガン
ド、基質、レセプターのフラグメント、または本発明の
ポリペプチドに結合するが応答を誘起せず、それで該ポ
リペプチドの活性が阻害される小分子が挙げられる。

【００５５】予防および治療方法 本発明は、ATG−1117（AIF−3）ポリペプチド活性量の
過剰および不足の両方に関係付けられる、アテローム性
動脈硬化症、ＣＨＦ、再狭窄、高血圧、線維性血管障害
（糖尿病、ＳＬＥ、ＡＳ）、脳血管事象（例えば、発
作、神経傷害およびＣＮＳ内部での再生）、造血障害、
ＡＲＤＳ、癌（特に白血病）、自己免疫疾患（例えば、
ＨＩＶ感染およびＡＩＤＳ）、線維増殖障害（例えば、
乾癬）、炎症疾患（例えば、ＲＡ、クローン病、ＩＢ
Ｓ）、糸球体疾患、ならびに変形性線維増殖／炎症応答
によって特徴づけられる心臓血管および心臓血管以外の
両方の病態などの異常な状態の治療方法を提供する。

【００５６】ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドの活性
が過剰である場合、数種の解決法が利用可能である。一
の解決法は、前記した阻害剤化合物（アンタゴニスト）
を医薬上許容される担体と一緒に、リガンド、基質など
の結合を遮断することによって、または別のシグナルを
阻害することによって、ATG−1117（AIF−3）ポリペプ
チドの機能を阻害するのに有効な量にて対象に投与し、
それによって異常な状態を緩和することからなる。もう
一つ別の解決法において、内在性ATG−1117（AIF−3）
ポリペプチドとの競合においてなおリガンド、基質等へ
の結合能を有する可溶形のATG−1117（AIF−3）ポリペ
プチドを投与してもよい。かかる競合物の典型例は、AT
G−1117（AIF−3）ポリペプチドのフラグメントを含ん
でなる。

【００５７】もう一つ別の解決法において、内在性ATG
−1117（AIF−3）ポリペプチドとの競合においてなおリ
ガンドへの結合能を有する可溶形のATG−1117（AIF−
3）ポリペプチドを投与してもよい。かかる競合物の典
型例は、ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドのフラグメ
ントを含んでなる。

【００５８】さらにもう一つ別の解決法において、内在
性ATG−1117（AIF−3）ポリペプチドをコードする遺伝
子の発現は、発現遮断法を用いて阻害することができ
る。このような既知の方法は、内部で産生されるか、ま
たは別に投与されるかのいずれかの、アンチセンス配列
の使用を包含する。例えば、O’Connor、J Neurochem
（1991）56：560、Oligodeoxynucleotides as Antisens
e Inhibitors of Gene Expression、CRC Press, Boca R
aton, FL（1988）を参照のこと。別法として、遺伝子と
三重螺旋を形成するオリゴヌクレオチドを付加すること
ができる。例えば、Leeら、Nucleic Acids Res（1979）
6：3073；Cooneyら、Science（1988）241：456；Dervan
ら、Science（1991）251：1360を参照のこと。これらオ
リゴマーはそのままで投与することができ、または関連
するオリゴマーをin vivoで発現させることができる。

【００５９】ATG−1117（AIF−3）の発現不足および活
性不足に関係付けられる異常状態を治療する場合にも、
いくつかの解決法が利用可能である。一つの解決法は、
対象に、治療上有効量のATG−1117（AIF−3）ポリペプ
チドを活性化する化合物、即ち、前記したアゴニスト
を、医薬上許容される担体と組み合わせて投与し、それ
によって異常な状態を緩和することからなる。別法とし
て、遺伝子療法を用い、対象の関連細胞によりATG−111
7（AIF−3）を内在的に産生させてもよい。例えば、本
発明のポリヌクレオチドを、前記のごとく、複製欠失レ
トロウイルスベクターにおいて発現するように操作して
もよい。ついで、レトロウイルス発現構築物を単離し、
本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有するレ
トロウイルスプラスミドベクターで形質導入されたパッ
ケージング細胞に導入すると、そのパッケージング細胞
が目的の遺伝子を含有する感染性のウイルス粒子を産生
する。これらの産生細胞は、細胞をin vivoにて操作す
るために、およびそのポリペプチドをin vivoにて発現
するために、対象に投与されてもよい。遺伝子療法の概
説としては、Chapter20，Gene Therapy and other Mole
cular Genetic-basedTherapeutic Approaches（および
その明細書中に列挙された参考文献）in HumanMolecula
r Genetics、T StrachanおよびA P Read、BIOS Scienti
fic Publishers Ltd（1996）を参照のこと。別の解決法
は、治療有効量のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドを
適当な医薬担体と組み合わせて投与することである。

【００６０】処方および投与 可溶形のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドなどのペプ
チド、およびアゴニストおよびアンタゴニストペプチド
または小分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処方し
てもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプチド
または化合物と、医薬上許容される担体または賦形剤を
含有してなる。かかる担体は、セイライン、緩衝セイラ
イン、デキストロース、水、グリセロール、エタノール
およびその組み合わせを包含するが、これに限定されな
い。処方は投与方法に適していなければならず、当該分
野における技術の範囲内である。本発明は、さらには、
本発明の前記した組成物の一またはそれ以上の成分を充
填した、一またはそれ以上のコンテナを有してなる医薬
用パックまたはキットに関する。

【００６１】本発明のポリペプチドおよび他の化合物
を、単独で、または、治療用化合物などの他の化合物と
組み合わせて用いてもよい。医薬組成物の全身性投与の
好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含す
る。皮下、筋肉内または腹腔内などの他の注射経路も用
いることができる。全身性投与に関する別法は、胆汁酸
塩またはフシジン酸または他のデタージェントなどの浸
透剤を用いる経粘膜および経皮投与を包含する。加え
て、腸溶処方またはカプセル封入処方にて適宜処方され
る場合、経口投与も可能であろう。これらの化合物の投
与は、軟膏、ペースト、ゲルなどの形態で、局所的およ
び／または局部的であってもよい。

【００６２】必要とする投与量の範囲は、ペプチドの選
択、投与経路、処方の性質、対象の病状の性質、および
主治医の判断に依存する。しかしながら、適当な投与量
は、対象１ｋｇ当たり０.１−１００μｇの範囲であ
る。しかしながら、必要な投与量の大きな変化は、種々
の市販の化合物および種々の投与経路の異なる効率とい
う観点において予想されるべきである。例えば、経口投
与は静脈注射による投与よりもより多くの投与量を必要
とすることが予想される。これらの投与量レベルにおけ
る変化は、当該分野において十分に理解されている、最
適化のための標準的経験的慣用手段を用いて調整でき
る。

【００６３】治療において用いられるポリペプチドを、
前記した、しばしば「遺伝子療法」と称される治療方式
で、対象において内在的に産生させることもできる。す
なわち、例えば、ex vivoでポリペプチドをコードする
ために、例えば、レトロウイルスプラスミドベクターを
使用して、対象由来の細胞をＤＮＡまたはＲＮＡなどの
ポリヌクレオチドで操作してもよい。ついで、その細胞
を対象に導入する。

【００６４】

【実施例】以下の実施例は、別に詳細に記載されている
ものを除いて、当業者に周知かつ慣用的である標準的技
法を用いて実施される。実施例は、本発明を説明するも
のであって、これを制限するものではない。

【００６５】実施例１ AIF−１／RC−９遺伝子産物は、線維増殖性／炎症性疾
患の病因に関係する病原媒体として関係しているので、
ATG ＥＳＴおよびアセンブリーズ（Assemblies）データ
ベースがAIF−1／RC−9の推定相同物を含有するかどう
かを調べるために、それらのデータベースの検索を行っ
た。この検索の結果、ATG−1117（AIF−3）が同定さ
れ、BlastＮ解析は、ＥＳＴ ＩＤ＃５４７５１（「単一
のＥＳＴ」アセンブリー（アセンブリーＩＤ＃５１１２
８１２）を構成するＥＳＴ配列）を示した。

【００６６】ATG−1117は、ATG−705の相同物として同
定された。ヒト・RC−9クローンがATGデータベースにお
いて同定された時（ATG−705）、この配列（ＨＧＳクロ
ーンＩＤ＃９２３９８３）は、Utansら（1996）によっ
て記載されたヒト・AIF−1配列と同一であることが見い
だされた。公的データベースのBlastＮ解析も、ヒト・R
C−9／AIF−1およびヒト・ＢＡＴ-２遺伝子をコードす
ることが知られている遺伝子の上流のゲノムＤＮＡ配列
（GenBank受入番号Ｚ１５０２５）との間の相同性を示
し、即ち、RC−9／AIF−1は、Iris et al.（Nature Gen
etics, 3:137-145,1993）によって記載された９０ｋｂ
ＨＬＡクラスＩＩＩセグメント内にある別個の今まで特
徴付けされていない遺伝子産物であった。ATG−705ヌク
レオチド配列（オープンリーディングフレームは下線で
示し、ＥＦ-ハンドはヌクレオチド１９１ないし２２８
である）：

【００６７】 1 GGCACGAGAG CCTGCAGACA GAGGCCTCCA GCTTGGTCTG TCTCCCCACC 51 TCTACCAGCA TCTGCTGAGC TATG AGCCAA ACCAGGGATT TACAGGGAGG 101 AAAAGCTTTC GGACTGCTGA AG GCCCAGCA GGAAGAGAGG CTGGATGAGA 151 TCAACAAGCA ATTCCTAGAC GA TCCCAAAT ATAGCAGTGA TGAGGATCTG 201 CCCTCCAAAC TGGAAGGCTT CA AAGAGAAA TACATGGAGT TTGACCTTAA 251 TGGAAATGGC GATATTGATA TC ATGTCCCT GAAACGAATG CTGGAGAAAC 301 TTGGAGTCCC CAAGACTCAC CT AGAGCTAA AGAAATTAAT TGGAGAGGTG 351 TCCAGTGGCT CCGGGGAGAC GT TCAGCTAC CCTGACTTTC TCAGGATGAT 401 GCTGGGCAAG AGATCTGCCA TC CTAAAAAT GATCCTGATG TATGAGGAAA 451 AAGCGAGAGA AAAGGAAAAG CC AACAGGCC CCCCAGCCAA GAAAGCTATC 501 TCTGAGTTGC CCTGATTTGA AGGGAAAAGG GATGATGGGA TTGAAGGGGC 551 TTCTAATGAC CCAGATATGG AAACAGAAGA CAAAATTGTA AGCCAGAGTC 601 AACAAATTAA ATAAATTACC CCCTCCTCCA AAAAA （配列番号３）

【００６８】AIF-１相同物を同定するための試みに、Bl
astＮ ATG ＥＳＴ／アセンブリーデータベースに対して
ATG−705のオープンリーディングフレームを用いた。こ
のBlastＮ解析は、結果としてＨＧＳ ＩＤ＃５４７５１
（プロジェクトＩＤ＃ＨＨＰＤＪ７０）を同定した。Ｈ
ＧＳによって未知のクラス５として同定された５５２ｂ
ｐのＥＳＴを同定した。

【００６９】 1 CCGACTCGCT NCTGAGCAAC TAGTGGATCC CCCGGGACTG CAGGTNATTC 51 GGCAGAGACC CGGNACCAGG CGCCTGTGCC TCCTCCTCGT CCCTNGCCGN 101 GTCCGGAAGN CTGGGAGCCG GCGGGAGCCC GCNCTCGCCA TGTCGGGCGN 151 TNCAGCAACA GGTTCCAAGG AGGGAAGGCG TTCGGCTTGC TCAAAGACCG 201 GNCAGAGAGG AGGCTGGCCG AGATCAACCG GGNGTTTCTG TGTGACCAGA 251 AGTACAGTNC TGAAGAGAAC CTTCCAGAAA AGCTCACAGC CTTCAAAGAG 301 ACGTACATGG AGTTTGACCT GAACAATGAA GGCGAGATTG ACCTGATGTC 351 TTTTAAAGAG GATGATGNAG AAGCTTNGTG TTCCCCAAGA CCCACCTAGG 401 AGATGAAGAA GTNGTTTTCA NAGGTNGACA AGNGGNGTTC ATTGACATTA 451 TTTCCTACCG GATTTNTGGA ACAAANGCTG GGGGAAAGGT CGGTTTTCCC 501 CANTTANTCA AGNTGTTNAA GGNNAANNCC ACGGGNGCAA CCCCAAGCCC 551 AT （配列番号４）

【００７０】このＥＳＴは、多連続アセンブリーの一部
ではなく：アセンブリーＩＤ＃５１１２８１２は、ＨＧ
Ｓ５４７５１のみを含んでなっていた（即ち、単一のＥ
ＳＴアセンブリー）。この部分的な長さのＥＳＴは、完
全なオープンリーディングフレームの３’末端から約５
０ヌクレオチドを欠失しており、ATG-1117と再命名し
た。完全な長さの配列がこのクローンから得られ、完全
なＯＲＦを同定し、それによって新規相同物AIF-３を明
らかにした。

【００７１】

【配列表】

（１）一般的情報 （ｉ）出願人：ダグラス，ステファン・エイ （ｉｉ）発明の名称：ATG−1117（AIF−３）、同種異型
移植炎症性因子−１／ＲＣ−９の新規相同物 （ｉｉｉ）配列の数：４ （ｉｖ）郵送先 （Ａ）名称：ラトナー＆プレスティア （Ｂ）通り名：ピー・オー・ボックス９８０ （Ｃ）都市名：バレー・ホーグ （Ｄ）州名：PA （Ｅ）国名：USA （Ｆ）郵便番号：19482 （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）オペレーティング・システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：Windowsバージョン２.０用FastSE
Q （ｖ）現出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日：1997年5月22日 （Ｃ）分類番号： （ｖｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （ｖｉｉｉ）代理人情報： （Ａ）名称：プレスティア, ポール・エフ （Ｂ）登録番号：２３０３１ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＨ−７００３２ （ｉｘ）テレコミュニケーション情報： （Ａ）電話番号：610-407-0700 （Ｂ）ファックス番号：610-407-0701 （Ｃ）テレックス番号：846169

【００７２】（２）配列番号１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：４５２塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号１： ATGTCGGGCG AGCTCAGCAA CAGGTTCCAA GGAGGGAAGG CGTTCGGCTT GCTCAAAGCC 60 CGGCAGGAGA GGAGGCTGGC CGAGATCAAC CGGGAGTTTC TGTGTGACCA GAAGTACAGT 120 GATGAAGAGA ACCTTCCAGA AAAGCTCACA GCCTTCAAAG AGAAGTACAT GGAGTTTGAC 180 CTGAACAATG AAGGCGAGAT TGACCTGATG TCTTTAAAGA AGATGATGGA GAAGCTTGGT 240 GTCCCCAAGA CCCACCTGGA GATGACGACG ATGATCTCAG AGGTGACAGG AGGGGTCAGT 300 GACACTATAT CCTACCGAGA CTTTGTGAAC ATGATGCTGG GGAAACGGTC GGCTGTCCTC 360 AAGTTAGTCA TGATGTTTGA AGGAAAAGCC AACGAGAGCA GCCCCAAGCC AGTTGGCCCC 420 CCTCCAGAGA GAGACATTGC TAGCCTGCCC TGA 453

【００７３】（２）配列番号２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：１５０アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：タンパク質 （ｘｉ）配列の記載：配列番号２： Met Ser Gly Glu Leu Ser Asn Arg Phe Gln Gly Gly Lys Ala Phe Gly 1 5 10 15 Leu Leu Lys Ala Arg Gln Glu Arg Arg Leu Ala Glu Ile Asn Arg Glu 20 25 30 Phe Leu Cys Asp Gln Lys Tyr Ser Asp Glu Glu Asn Leu Pro Glu Lys 35 40 45 Leu Thr Ala Phe Lys Glu Lys Tyr Met Glu Phe Asp Leu Asn Asn Glu 50 55 60 Gly Glu Ile Asp Leu Met Ser Leu Lys Lys Met Met Glu Lys Leu Gly 65 70 75 80 Val Pro Lys Thr His Leu Glu Met Thr Thr Met Ile Ser Glu Val Thr 85 90 95 Gly Gly Val Ser Asp Thr Ile Ser Tyr Arg Asp Phe Val Asn Met Met 100 105 110 Leu Gly Lys Arg Ser Ala Val Leu Lys Leu Val Met Met Phe Glu Gly 115 120 125 Lys Ala Asn Glu Ser Ser Pro Lys Pro Val Gly Pro Pro Pro Glu Arg 130 135 140 Asp Ile Ala Ser Leu Pro 145 150

【００７４】（２）配列番号３に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：６３５塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号３： GGCACGAGAG CCTGCAGACA GAGGCCTCCA GCTTGGTCTG TCTCCCCACC TCTACCAGCA 60 TCTGCTGAGC TATGAGCCAA ACCAGGGATT TACAGGGAGG AAAAGCTTTC GGACTGCTGA 120 AGGCCCAGCA GGAAGAGAGG CTGGATGAGA TCAACAAGCA ATTCCTAGAC GATCCCAAAT 180 ATAGCAGTGA TGAGGATCTG CCCTCCAAAC TGGAAGGCTT CAAAGAGAAA TACATGGAGT 240 TTGACCTTAA TGGAAATGGC GATATTGATA TCATGTCCCT GAAACGAATG CTGGAGAAAC 300 TTGGAGTCCC CAAGACTCAC CTAGAGCTAA AGAAATTAAT TGGAGAGGTG TCCAGTGGCT 360 CCGGGGAGAC GTTCAGCTAC CCTGACTTTC TCAGGATGAT GCTGGGCAAG AGATCTGCCA 420 TCCTAAAAAT GATCCTGATG TATGAGGAAA AAGCGAGAGA AAAGGAAAAG CCAACAGGCC 480 CCCCAGCCAA GAAAGCTATC TCTGAGTTGC CCTGATTTGA AGGGAAAAGG GATGATGGGA 540 TTGAAGGGGC TTCTAATGAC CCAGATATGG AAACAGAAGA CAAAATTGTA AGCCAGAGTC 600 AACAAATTAA ATAAATTACC CCCTCCTCCA AAAAA 635

【００７５】（２）配列番号４に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：５５２塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号４： ＣＣＧＡＣＴＣＧＣＴ ＮＣＴＧＡＧＣＡＡＣ ＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣ ＣＣＣ
ＧＧＧＡＣＴＧ ＣＡＧＧＴＮＡＴＴＣ ＧＧＣＡＧＡＧＡＣＣ ６０ ＣＧＧＮＡＣＣＡＧＧ ＣＧＣＣＴＧＴＧＣＣ ＴＣＣＴＣＣＴＣＧＴ ＣＣＣ
ＴＮＧＣＣＧＮ ＧＴＣＣＧＧＡＡＧＮ ＣＴＧＧＧＡＧＣＣＧ １２０ ＧＣＧＧＧＡＧＣＣＣ ＧＣＮＣＴＣＧＣＣＡ ＴＧＴＣＧＧＧＣＧＮ ＴＮＣ
ＡＧＣＡＡＣＡ ＧＧＴＴＣＣＡＡＧＧ ＡＧＧＧＡＡＧＧＣＧ １８０ ＴＴＣＧＧＣＴＴＧＣ ＴＣＡＡＡＧＡＣＣＧ ＧＮＣＡＧＡＧＡＧＧ ＡＧＧ
ＣＴＧＧＣＣＧ ＡＧＡＴＣＡＡＣＣＧ ＧＧＮＧＴＴＴＣＴＧ ２４０ ＴＧＴＧＡＣＣＡＧＡ ＡＧＴＡＣＡＧＴＮＣ ＴＧＡＡＧＡＧＡＡＣ ＣＴＴ
ＣＣＡＧＡＡＡ ＡＧＣＴＣＡＣＡＧＣ ＣＴＴＣＡＡＡＧＡＧ ３００ ＡＣＧＴＡＣＡＴＧＧ ＡＧＴＴＴＧＡＣＣＴ ＧＡＡＣＡＡＴＧＡＡ ＧＧＣ
ＧＡＧＡＴＴＧ ＡＣＣＴＧＡＴＧＴＣ ＴＴＴＴＡＡＡＧＡＧ ３６０ ＧＡＴＧＡＴＧＮＡＧ ＡＡＧＣＴＴＮＧＴＧ ＴＴＣＣＣＣＡＡＧＡ ＣＣＣ
ＡＣＣＴＡＧＧ ＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡ ＧＴＮＧＴＴＴＴＣＡ ４２０ ＮＡＧＧＴＮＧＡＣＡ ＡＧＮＧＧＮＧＴＴＣ ＡＴＴＧＡＣＡＴＴＡ ＴＴＴ
ＣＣＴＡＣＣＧ ＧＡＴＴＴＮＴＧＧＡ ＡＣＡＡＡＮＧＣＴＧ ４８０ ＧＧＧＧＡＡＡＧＧＴ ＣＧＧＴＴＴＴＣＣＣ ＣＡＮＴＴＡＮＴＣＡ ＡＧＮ
ＴＧＴＴＮＡＡ ＧＧＮＮＡＡＮＮＣＣ ＡＣＧＧＧＮＧＣＡＡ ５４０ ＣＣＣＣＡＡＧＣＣＣ ＡＴ
５５２

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 39/395 ＡＤＰ Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＢＥ 48/00 ＡＢＥ ＡＢＸ ＡＢＸ ＡＣＶ ＡＣＶ Ｃ０７Ｋ 2/00 Ｃ０７Ｋ 2/00 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＡ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のATG−1117（AIF−3）ポリ
   ペプチドをコードするヌクレオチド配列とその全長にわ
   たって少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド
   配列；または該ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチ
   ド配列を有してなる単離ポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ＤＮＡまたはＲＮＡである請求項１記載
   のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ヌクレオチド配列が配列番号１に含まれ
   るヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一である請求
   項１記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ヌクレオチド配列が配列番号１に含まれ
   るATG−1117（AIF−3）ポリペプチドをコードする配列
   を有してなる請求項３記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 配列番号１のポリヌクレオチドである請
   求項３記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 発現系を有してなるＤＮＡまたはＲＮＡ
   分子であって、該発現系が適合しうる宿主細胞に存在す
   る場合、その発現系が配列番号２のポリペプチドと少な
   くとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を有してな
   るATG−1117（AIF−3）ポリペプチドの産生能を有す
   る、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子。
7. 【請求項７】 請求項６に記載の発現系を含有してなる
   宿主細胞。
8. 【請求項８】 ポリペプチドを産生するのに十分な条件
   下で、請求項７に記載の宿主を培養し、該ポリペプチド
   を培地から回収してなるATG−1117（AIF−3）ポリペプ
   チドの産生方法。
9. 【請求項９】 適当な培養条件下、宿主細胞がATG−111
   7（AIF−3）ポリペプチドを産生するように、宿主細胞
   を請求項６に記載の発現系で形質転換またはトランスフ
   ェクトしてなる、そのATG−1117（AIF−3）ポリペプチ
   ドを産生する細胞の産生方法。
10. 【請求項１０】 配列番号２のアミノ酸配列とその全長
    にわたって少なくとも８０％が同一であるアミノ酸配列
    を有してなるATG−1117（AIF−3）ポリペプチド。
11. 【請求項１１】 配列番号２のアミノ酸配列を有してな
    る請求項１０記載のポリペプチド。
12. 【請求項１２】 請求項１０に記載のATG−1117（AIF−
    3）ポリペプチドに免疫特異的な抗体。
13. 【請求項１３】 請求項１０に記載のATG−1117（AIF−
    3）ポリペプチドの活性または発現の強化を必要とする
    対象の治療方法であって、 （ａ）治療上有効量の該ポリペプチドに対するアゴニス
    トを該対象に投与し；および／または（ｂ）配列番号２
    のATG−1117（AIF−3）ポリペプチドをコードするヌク
    レオチド配列とその全長にわたって少なくとも８０％の
    同一性を有するヌクレオチド配列、またはin vivoにて
    該ポリペプチド活性を生じさせる形態で該ヌクレオチド
    配列に相補的なヌクレオチド配列を有してなる、単離ポ
    リヌクレオチドを該対象に投与することからなる方法。
14. 【請求項１４】 請求項１０に記載のATG−1117（AIF−
    3）ポリペプチドの活性または発現の阻害を必要とする
    対象の治療方法であって、 （ａ）治療上有効量の該ポリペプチドに対するアンタゴ
    ニストを該対象に投与し；および／または（ｂ）該ポリ
    ペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を阻害す
    る核酸分子を該対象に投与し；および／または（ｃ）該
    ポリペプチドとそのリガンド、基質またはレセプターを
    競合する、治療上有効量のポリペプチドを該対象に投与
    することからなる方法。
15. 【請求項１５】 対象の請求項１０に記載のATG−1117
    （AIF−3）ポリペプチドの発現または活性に関係付けら
    れる、対象における疾患または罹病し易さの診断方法で
    あって、 （ａ）該対象のゲノム中のATG−1117（AIF−3）ポリペ
    プチドをコードするヌクレオチド配列における変異の有
    無を測定し；および／または（ｂ）該対象に由来する試
    料中のATG−1117（AIF−3）ポリペプチド発現の存在ま
    たは量を分析することからなる方法。
16. 【請求項１６】 請求項１０に記載のATG−1117（AIF−
    3）ポリペプチドを阻害（拮抗）または作動させる化合
    物の同定方法であって、 （ａ）候補の化合物を、ATG−1117（AIF−3）ポリペプ
    チドを発現する細胞（またはATG−1117（AIF−3）ポリ
    ペプチドを発現する細胞膜）、またはATG−1117（AIF−
    3）ポリペプチドに応答する細胞と接触させ；および
    （ｂ）その結合、または機能応答の刺激もしくは阻害を
    観察するか；あるいは候補の化合物と接触させた細胞
    （または細胞膜）の能力を、接触させていない同一細胞
    の能力とATG−1117（AIF−3）ポリペプチド活性につい
    て比較することからなる方法。
17. 【請求項１７】 請求項１６に記載の方法によって同定
    されるアゴニスト。
18. 【請求項１８】 請求項１６に記載の方法によって同定
    されるアンタゴニスト。