JPH11504009A

JPH11504009A - ホスホルアミドマスタード類似物である腫瘍プロテアーゼ活性化プロドラッグ

Info

Publication number: JPH11504009A
Application number: JP8531791A
Authority: JP
Inventors: グレイズィアー，アーノルド
Original assignee: ドラッグイノベーションアンドデザイン，インコーポレーテッド
Priority date: 1995-04-20
Filing date: 1996-04-11
Publication date: 1999-04-06
Also published as: DE69613691T2; EP0821689A1; WO1996033198A1; ES2160815T3; ATE202781T1; CA2215264A1; DK0821689T3; AU697110B2; PT821689E; GR3036796T3; DE69613691D1; AU5538996A; US5659061A; EP0821689B1

Abstract

(57)【要約】解毒化機能性を有する腫瘍関連プロテアーゼ活性化プロドラッグであるホスホルアミドマスタード、イソホスホルアミドマスタード及びそれらの類似物の組成、合成及び応用について記載されている。これらの薬剤は、腫瘍関連プロテアーゼ及びエステラーゼによる活性化の後、細胞毒性ホスホルアミドマスタード類似物を放出する。これらの薬剤の一般的な構造は（Ｉ）であり、式中、Ｒ１はβ−Ｘ−エチル−アミノ基であり、窒素原子上に又は炭素原子上に置換基を有していてもよい；ここでＸはハロゲン等の良好な脱離基である；Ｒ２はβ−Ｘ−エチル−アミノ基であり、窒素原子上に又は炭素原子上に置換基を有していてもよく；又は置換されてもよいアミノ基（ＮＨ₂）である。式中、Ａは、ホスホエステルに対するパラ位又はオルト位に１以上のアシルオキシ基又はアシルアミノ基を有するベンジルオキシ誘導体である；及びここでアシルオキシ基又はアシルアミノ基は（置換又は非置換の）ｐ−グアニジノ−ベンゾイルオキシ基又はｐ−グアニジノ−ベンゾイルアミノ基ではない。

Description

【発明の詳細な説明】ホスホルアミドマスタード類似物である腫瘍プロテアーゼ活性化プロドラッグ技術分野：本発明は化学、医学および薬理学の分野に属する。背景：アルキル化剤による臨床的癌治療における大きな進歩に係わらず、この分野の薬剤は厳しい制限を有している。主要な問題の一つとしては、非特異的な毒性が挙げられる。選択的に腫瘍細胞を標的にするアルキル化剤を開発しようとする多くの試みがなされてきた。その結果は、ほとんど例外なく、いずれも落胆させられるものであった。例えば、アルカリ性ホスファターゼ、アゾレダクターゼ、グルクロニダーゼ、プラスミンおよびコラゲナーゼ等の腫瘍細胞内にある酵素により活性化されるアルキル化剤が調べられた。ロス（Ｒｏｓｓ，Ｗ．Ｃ．）；バルビック（Ｗａｒｗｉｃｋ，Ｇ．Ｐ．）；ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｊ．Ｊ．）；Ｊ．Ｃｈeｍ．Ｓｏｃ．３１００（１９５５）。コンノールズ（Ｃｏｎｎｏｒｓ，Ｔ．Ａ．）；フォスター（Ｆｏｓｔｅｒ，Ａ．Ｂ．）；ティスダール（Ｔｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．）；（１９７２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２１：１３０９。；コンノールズ（Ｃｏｎｎｏｒｓ，Ｔ．Ａ．）；ヴィソン（Ｗｈｉｓｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．）：（１９６６）Ｎａｔｕｒｅ２１０：８６６。；バール（Ｂａｌｌ，Ｃ．Ｒ．）；ダブル（Ｄｏｕｂｌｅ，Ｊ．Ａ．）；（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２３：３１７３。；ワークマン（Ｗｏｒｋｍａｎ，Ｐ．）；ダブル（Ｄｏｕｂｌｅ，Ｊ．Ａ．）；（１９７７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２７：１９９。；マーキッシー（Ｍａｒｑｕｉｓｓｅｅ，Ｍ．Ｊ．）；カウエル（Ｋａｕｅｒ，Ｊ．Ｃ．）（１９７８）；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１：１１８８。；チャクラバーティ（Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ，Ｐ．）；カール（Ｃａｒｌ，Ｐ．）；ウェーバー（Ｗｅｂｅｒ，Ｍ．）；カッツェネンエレンボーゲン（Ｋａｔｚｅｎｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ，Ｊ．）；（１９８３）；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；２６：６３３；および２６：６３８。基本的な問題の一つとして、腫瘍特異性が残されている。腫瘍は、何倍もの高いレベルの標的酵素を有しているが、正常組織も、最終的にアルキル化剤を活性化し、毒性を発揮させるようないくつかの酵素を一定量有している。これは、腫瘍選択性を厳しく制限している。これらの問題を回避するために、新しい種類の腫瘍選択的抗腫瘍剤が開発された。ＡｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃＤｒｕｇｓｗｉｔｈＢｉｐｏｌａｒＴｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎ／ＤｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｉｔｅｓ，グラザー（Ａ．Ｇｌａｚｉｅｒ），（１９９３）米国特許第５，２７４，１６２号明細書。これら新規の抗腫瘍剤は２つの鍵となる機能を有している：薬剤を毒性化する引き金；および薬剤を解毒化する失活剤。引き金は、腫瘍細胞内ではレベルが高められて存在している酵素により活性化されるように選択される。失活剤は、全ての組織に遍在する酵素により活性化されるように選択される。その後、投与された細胞内の薬剤の運命は、薬剤を解毒化する酵素活性に対する、毒性を引き起こす酵素活性の割合により決定される。毒性代謝物と非毒性代謝物の間で薬剤を分けることにより、結果として生じる細胞毒性効果の特異性が規定される。グラザー（Ａ．Ｇｌａｚｉｅｒ）による米国特許第５，２７４，１６２号明細書では、グアニジノベンゾアターゼ酵素をもつ腫瘍細胞に対して毒性を選択的に示す新種の抗腫瘍薬剤が記載されている。悪性細胞の基本的特徴は組織侵襲性である。悪性細胞が増加し広がるためには、細胞は細胞外マトリックスを分解しなければならない。悪性化の過程における腫瘍関連プロテアーゼの重要な役割を説明する多くの生体の科学的データが存在する。腫瘍細胞外マトリックスの分解に影響を与える腫瘍関連酵素としては、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＤ、プラスミン、コラゲナーゼ、IV型コラゲナーゼおよびストロメリシンが挙げられる。リオッタ（ＬｉｏｔｔａＬ）；ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ（１９９０）９（４）：２８５−７クワーン（ＫｗａａｎＨＣ）；ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ（１９９２）１１（３−４）：２９１−３１１テスタ（ＴｅｓｔａＪＥ）、キュイグレイ（ＱｕｉｇｌｅｙＪＰ）；ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ（１９９０）９（４）：３５３−６７スローアン（ＳｌｏａｎｅＢＦ），モイン（ＭｏｉｎＫ），クレペラ（ＫｒｅｐｅｌａＥ），ロザイン（ＲｏｚｈｉｎＪ）；ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ（１９９０）９（４）：３３３。ロックフォルト（ＲｏｃｈｅｆｏｒｔＨ），カポニー（ＣａｐｏｎｙＦ），ガルシア（ＧａｒｃｉａＭ）；ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ（１９９０）９（４）：３２１。マクドネル（ＭｃＤｏｎｎｅｌｌＳ），マトリシアン（ＭａｔｒｉｓｉａｎＬＭ）；ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ（１９９０）９（４）：３０５。ステトラースチィーベンソン（Ｓｔｅｔｌｅｒ−ＳｔｅｖｅｎｓｏｎＷＧ）；ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ（１９９０）９（４）：２８９マトリシアン（ＭａｔｒｉｓｉａｎＬＭ），マクドネル（ＭｃＤｏｎｎｅｌｌＳ），ミラー（ＭｉｌｌｅｒＤＢ），ナブレ（ＮａｖｒｅＭ），セフトー（ＳｅｆｔｏｒＥＡ），ヘンドリクス（ＨｅｎｄｒｉｘＭＪ）；ＡｍＪＭｅｄＳｃｉ（１９９１）３０２（３）：１５７−６２；スコウ（ＳｕｋｏｈＮ），アベ（ＡｂｅＳ），オグラ（ＯｇｕｒａＳ），イソベ（ＩｓｏｂｅＨ），タケカワ（ＴａｋｅｋａｗａＨ），イノウエ（ＩｎｏｕｅＫ），カワカミ（ＫａｗａｋａｍｉＹ）；Ｃａｎｃｅｒ（１９９４）７４（１）：４６ −５１；コバヤシ（ＫｏｂａｙａｓｈｉＨ），オオイ（ＯｈｉＨ），スギムラ（ＳｕｇｉｍｕｒａＭ），シノハラ（ＳｈｉｎｏｈａｒａＨ），フジイ（ＦｕｊｉｉＴ），テラオ（ＴｅｒａｏＴ）：ＣａｎｃｅｒＲｅｓ（１９９２）５２（１３）：３６１０−４；ムルキャイ（ＭｕｌｃａｈｙＨＥ），ダフィ（ＤｕｆｆｙＭＪ），ギボンズ（ＧｉｂｂｏｎｓＤ），マッカーシィ（ＭｃＣａｒｔｈｙＰ），パーフレイ（ＰａｒｆｒｅｙＮＡ），オドノグー（Ｏ ’ＤｏｎｏｇｈｕｅＤＰ），シーハン（Ｓｈｅａｈａｎ；Ｋ）；Ｌａｎｃｅｔ（１９９４）３４４（８９２２）：５８３腫瘍の侵入および成長を遅くし得る抗腫瘍剤として、これら腫瘍関連プロテアーゼに対する阻害剤の開発に多くの努力が向けられてきた。デクレーク（ＤｅＣｌｅｒｃｋＹＡ）；イムレン（ＩｍｒｅｎＳ）；ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ（１９９４）３０Ａ（１４）：２１７０−８０。しかしながら、腫瘍関連プロテアーゼに対する阻害剤は腫瘍細胞にとって致命的ではなく、最良のものでも腫瘍の成長を遅延させるに過ぎないと思われる。発明の概要本発明は、腫瘍関連プロテアーゼおよびエステラーゼによる活性化の後に細胞毒性ホスホルアミドマスタード類似物を放出する、新種の腫瘍選択性抗腫瘍剤に関する。腫瘍関連プロテアーゼ選択的抗腫瘍薬剤類の一般的な構造は、式１である：式中、Ｒ１はβ−Ｘ−エチルアミノ基であり、任意に窒素原子上に又は炭素原子上に置換基を有していてもよい；ここで、Ｘはハロゲン等の良好な脱離基である；Ｒ２はβ−Ｘ−エチルアミノ基であり、任意に窒素原子上に又は炭素原子上に置換基を有していても良く；又は任意に置換されてもよいアミノ基（ＮＨ₂）である。式中、Ａは、ホスホエステルに対して、パラ位またはオルト位に１以上のアシルオキシまたはアシルアミノ基を有するベンジルオキシ誘導体である；およびここで、アシルオキシ基またはアシルアミノ基は（置換または非置換の）ｐ− グアニジノベンゾイルオキシ基またはｐ−グアニジノベンゾイルアミノ基ではない。図面の簡単な説明図１は、インビトロでのＣＥＭ細胞に対するＶ−イソフォス（Ｖ−Ｉｓｏｐｈｏｓ）の毒性のグラフである。図２は、インビトロでのＩＰＣ−８１白血病細胞および正常ラット骨髄細胞に対するＶ−イソフォスの毒性のグラフである。図３は、腫瘍をもつマウスに薬剤を投与した後での、ＦＳＡＩＩ繊維肉腫細胞および正常骨髄細胞に対するＶ−イソフォスの毒性を説明する表である。また、サイトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）、４−ヒドロペルオキシサイクロホスファミドおよびイフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）についてのデータも示している。発明の詳細な説明一般的な構造本発明の抗腫瘍薬剤類は、腫瘍関連プロテアーゼの酵素活性が強力な二機能性アルキル化剤の生産を引き起こすように設計されている。このアルキル化剤は、続いてＤＮＡに架橋しまたは極めて重要な酵素を不活性化することにより、腫瘍細胞を殺す。腫瘍関連プロテアーゼは、エステル機能性の適切な位置にあるアミドを開裂することによりホスホルアミド型マスタード誘導体の活性化と遊離を引き起こす。活性化ホスホルアミドマスタード誘導体は、シクロホスファミドおよびイホスファミド（ｉｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）の抗腫瘍効果を媒介する、毒性のある種類である。フレイドマン（Ｆｒｅｉｄｍａｎ，Ｏ．）；マイルズ（Ｍｙｌｅｓ，Ｍ．）；コルビン（Ｃｏｌｖｉｎ，Ｍ．）（１９７９）ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ；１：１４３。ボイド（Ｂｏｙｄ，Ｖ．）；ロビンズ（Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｊ．）：イーガン（Ｅｇａｎ，Ｗ．）；ルーデマン（Ｌｕｄｅｍａｎ，Ｓ．）；（１９８６）；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；２９：１２０６。シクロホスファミド、イホスファミドおよびホスホルアミドマスタードのベンジルエステル等の化合物は、活性化アルキル化剤ではない。生体内変換がないと、これらの化合物は比較的無毒性である。リン原子の影響をなくす電子は、近接した窒素の性能を劇的に低下させ、クロロエチル基を攻撃し、アジリジニウムカチオンを生産する。しかしながら、シクロホスファミド、イフォスファミドおよびホスホルアミドマスタードのエステル等の化合物のホスホエステル基を陰電子を帯びた種類へ転換することは、近接の窒素の求核性を大きく増加させる。これは、高毒性アジリジニウムカチオンの形成を引き起こす。ブロック（Ｂｒｏｃｋ，Ｎ．）（１９７６）；ＣａｎｃｅｒＴｒｅａｔｍｅｎｔＲｅｐ．；６０：３０１。クウォン（Ｋｗｏｎ，Ｃ．）；ムーン（Ｍｏｏｎ，Ｋ．）；バトゥライ（Ｂａｔｕｒａｙ，Ｎ．）；シロタ（Ｓｈｉｒｏｔａ，Ｆ）；（１９９１）；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；３４：５８８。本発明の抗腫瘍薬剤類を活性化するような腫瘍関連プロテアーゼおよびエステラーゼとしては特に限定されるものではなく、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化剤、カテプシン類、カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＣ、カテプシンＤ、プラスミン、コラゲナーゼ、IV型コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびジペプチジルペプチダーゼ等が挙げられる。本発明の抗腫瘍薬剤類のサブセット（ｓｕｂｓｅｔ）は、２つの鍵となる機能性からなる：薬剤を毒性化する引き金；薬剤を解毒化する失活剤。引き金としては、腫瘍内に高レベルで存在する腫瘍関連プロテアーゼにより活性化されるようなものが選択される。失活剤としては、全ての組織に遍在する酵素により活性化されるようなものが選択される。その後、投与された細胞内の薬剤の運命は、薬剤を解毒化する酵素活性に対する、毒性を引き起こす酵素活性の割合により決定される。毒性代謝物と非毒性代謝物の間で薬剤を分けることにより、結果として生じる細胞毒性効果の特異性が規定される。引き金をひく酵素が低レベルである正常組織においては、薬剤の多くは解毒化される。引き金をひく酵素が高レベルである腫瘍細胞においては、高い割合の薬剤が活性化され、細胞毒性を示す。腫瘍特異性は、悪性細胞に対してそれ自身も優先的に毒性を示す毒の種類の選択により、さらに高められる。また、失活剤の機能性は、酵素とは無関係に自発的な形で作動するように設計されていてもよい。この場合には、失活剤は生物時計として役立つ。腫瘍特異性は、腫瘍対正常組織における引き金をひく酵素のレベルの量的な違いに直接起因する。多くの酵素を、これらの選択的抗腫瘍薬剤の解毒化を作動するために選択してもよい。選択した酵素が正常組織内にあり、ホスホルアミドマスタードを解毒化する能力があることが、鍵となる必要性である。解毒化メカニズムの好ましい態様では、求核原子は解毒化酵素により剥き出しにされ、分子内でアジリジニウムカチオンと反応する。これは、ＤＮＡおよび生細胞性酵素のアルキル化を妨げるものである。解毒化メカニズムの好ましい態様において、解毒化酵素は分子内で反応し、４、５、または６員環を形成し、それに付随して二機能性アルキル化剤となるような化合物の能力を不活性化する位置にある求核原子を剥き出しにする。マスクされた求核原子（Ｎｕ）は、ヒドロキシ基、チオール、アミン、またはカルボキシレート部分等の基であればどれであってもよい。腫瘍選択的毒性化酵素ではなく、正常組織に遍在する酵素により、求核原子が剥き出しにされることが鍵となる必要性である。例えば、ヒドロキシ基およびカルボキシレート基を、遍在性非特異的エステラーゼにより開裂されるエステルとしてマスクすることができる。アミノ基を、プロテアーゼまたはアゾレダクターゼによりそれぞれ剥き出しにすることができるアミド部分またはアゾ部分としてマスクすることができる。チオールは、チオエステルまたは二硫化物としてマスクすることができる。チオールエステルを、チオールエステラーゼにより開裂することができる。二硫化物を様々の酵素工程によりチオールに還元することができる。また、失活剤機能性は、酵素とは無関係に作動されるように選択されてもよい。求核原子を、自発的な非酵素的な転換を経て、剥き出しの求核原子を得るという官能性（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）としてマスクしてもよい。この場合には、解毒化メカニズムは体内時計として作用する。腫瘍特異性は、腫瘍対正常組織における引き金をひく酵素のレベルの量的な違いに直接起因する。例えば、ヒドロキシ基をエノールエーテルとしてマスクすることができた。アミノ基をエナミンとしてマスクすることができた。腫瘍関連プロテアーゼ選択的抗腫瘍薬剤群の一般的な構造（式１）：式中、Ｒ１はβ−Ｘ−エチルアミノ基であり、任意に窒素原子上に又は炭素原子上に置換基を有していてもよい。ここで、Ｘはハロゲン等の良好な遊離基である。Ｒ２はβ−Ｘ−エチルアミノ基であり、任意に窒素原子上に又は炭素原子上に置換基を有していてもよい；又は任意に置換されてもよいアミノ基（ＮＨ₂）である。式中、Ａはホスホエステルに対してパラ位またはオルト位に１以上のアシルオキシ基またはアシルアミノ基をもつベンジルオキシ誘導体である；およびここで、アシルオキシ基またはアシルアミノ基は（置換または非置換の）ｐ−グアニジノベンゾイルオキシ基またはｐ−グアニジノベンゾイルアミノ基ではない。いくつかの好ましい態様を、式２として以下に示す：式中、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、メチル基又はエチル基のアルキル基、−ＣＨ₂− ＣＯ₂−ＹもしくはＮ置換メチレンカルボニルアミノ基であり、Ｙはメチル基又はエチル基のアルキル基であり、Ｒ５は、アシルオキシ基、またはアシルアミノ基であり、そして、ここでベンジル環を任意に、アルキル基、メトキシ等のアルキルオキシ基、またはハロゲン等の不活性基と置換してもよい。イソホスホルアミドマスタードおよびホスホルアミドマスタードを放出する、腫瘍プロテアーゼ活性化抗腫瘍剤の構造は、式３ａ−ｂとして以下に示す：好ましい態様では、薬剤は、式４ａ−ｂとして以下に示される構造を有している：Ｒ５の好ましい構造は、以下の式５ａ−５ｂに挙げられる基である：式中、Ｒ６は置換または非置換のアルキル基またはフェニル基である。または、ここで、Ｒ６はＲ６−ＣＯＯＨが置換または非置換のアミノ酸もしくは２〜約２０の置換または非置換のアミノ酸から構成させるオリゴペプチドとなるように選択される。解毒機能性を有する腫瘍プロテアーゼ活性化抗腫瘍剤種の一般的な構造は、式６に挙げられる：式中、Ａはホスホエステルに対してパラ位またはオルト位に１以上のアシルオキシ基またはアシルアミノ基をもつベンジルオキシ誘導体であり、ここで、アシルオキシ基またはアシルアミノ基は（置換または非置換の）ｐ−グアニジノベンゾイルオキシ基またはｐ−グアニジノベンゾイルアミノ基ではない。Ｒ１は、置換基がＸ基から３位、４位または５位の原子の位置にあるような窒素原子上又は炭素原子上にマスクされた求核原子を有するβ−Ｘ−エチルアミノ基である。式中、Ｘはハロゲン等の良好な遊離基であり、好ましいハロゲンとしては塩素が挙げられる。Ｒ２は、置換基がＸ基から３位、４位または５位の原子の位置にあるような窒素原子上又は炭素原子上にマスクされた求核原子を有するβ−Ｘ−エチルアミノ基であり、もしくは任意に置換されうるアミノ基（ＮＨ₂）である。マスクされた求核原子としては、ヒドロキシ基、アミノ基、カルボキシレート基、又はチオール基が好ましい。求核原子をマスクする基としては、アシルオキシ基（ＲＣＯ２−）、アシルスルファニル基（Ｒ（ＣＯ）−Ｓ−）またはアシルアミノ基（Ｒ（ＣＯ）−ＮＨ−）が好ましい。もし、カルボキシレートが求核原子であれば、エステルまたはアミドとしてマスクされていることが好ましい。解毒機能性をもつ腫瘍プロテアーゼ活性化抗腫瘍剤類の好ましい構造は、式７に挙げられる：式中、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、ＣＨ₃、エチル基等のアルキル基、−ＣＨ₂−ＣＯ₂ −Ｙ、Ｙはメチル基、エチル基等のアルキル基、又はＮ置換メチレンカルボニルアミノ基である。ベンジル環は、アルキル基、メトキシ基、またはハロゲン類等の不活性基で任意に置換されてもよい。Ｒ５はアシルオキシ基またはアシルアミノ基である。Ｒ５の好ましい構造は式８ａ−ｂとして以下に示す：式中、Ｒ６は置換または非置換のアルキル基またはフェニル基であり、もしくは式中、Ｒ６はＲ６−ＣＯＯＨが置換または非置換のアミノ酸もしくは２〜約２０の置換または非置換のアミノ酸から構成されるオリゴペプチドとなるように選択される。解毒機能をもつ腫瘍プロテアーゼ活性化抗腫瘍剤類の好ましい構造を式９ａ− ｅに挙げる：式中、Ｒ７はＯ、ＮＨまたはＳであり、Ｒ８はアルキル基、置換または非置換のフェニル基であり、又は式中、Ｒ８−ＣＯ₂Ｈは置換または非置換のアミノ酸である。作用メカニズム式１に挙げられる化合物は、腫瘍細胞の表面または腫瘍の微環境に存在する腫瘍関連プロテアーゼの作用により強力な細胞毒素に変換される。該プロテアーゼは、選択的にベンジル環のパラ位またはオルト位にあるアシルオキシ基またはアシルアミノ基を開裂し、腫瘍細胞表面にパラまたはオルトのヒドロキシ基またはアミノ基を有する不安定な中間体を遊離させる。この中間体は、腫瘍の細胞膜の中や外に急速に拡散する。強力に電子供与するヒドロキシ基またはアミノ基は、順番に剥き出しにされ、ベンジルホスホエステルのヘテロリシスな分解を引き起こす。最終的な効果としては、式１０として以下に示される、鍵となる構造成分を有する種類を細胞内および細胞外の両方で生じることである：これは急速な環化を経て高毒性アジリジニウム型カチオンを形成する。それから、この中間体はＤＮＡおよび他の生細胞成分と反応し、腫瘍細胞を殺す。この構造を有する中間体を放出する化合物の強力な抗腫瘍活性は、シクロホスホルアミド、イフォスファミドおよびイソホスホルアミドマスタードに例示されるように、よく確立されている。式１０に示される化合物を遊離するＣ−Ｏ結合のヘテロリシス分解に含まれる化学的なメカニズムの詳細な論議については、グラザー（Ａ．Ｇｌａｚｉｅｒ）によるオーストラリア国特許第６５１８３５号明細書（１９９４）ＰｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓＰｒｏｄｒｕｇｓを参照のこと。本発明の薬剤は、オルト位またはパラ位に強力に電子を供与する置換基（アミノ基等）を剥き出しにすることで、陰電気を帯びたリン化合物の放出を引き起こすようなリン化合物のプロドラッグに基づく、典型的なものである。式１の化合物のＣ−Ｏ結合がヘテロリシス分解する速度は、ベンゼン環上の（Ｈａｍｍｅｔｔｓｉｇｍａ＋）要素の関数である。電子供与性置換基は、劇的に加溶媒分解の速度を高める。プロテアーゼによるエステルまたはアミド機能性の分解は、それぞれ、パラヒドロキシ基またはｐ −アミノ基を剥き出しにする。これらの基は強力な電子供与体であり、自発的な加溶媒分解の速度を桁外れに高くする。式１の化合物に関して同じ形式で腫瘍関連プロテアーゼによる活性化をした後、式６に挙げられる化合物が引き起こされ、強力な二機能性アルキル化剤を放出する。しかしながら、これらの化合物は正常細胞に遍在する酵素により活性化される解毒化機能を有している。この解毒化機能は、自発的に又は正常細胞性酵素により剥き出しにされうるマスクされた求核原子からなる。正常細胞性酵素は存在するエステルまたはアミドの機能性を分解することにより薬剤を解毒化する。これは、形成されるアジリジニウムイオンを捕捉し、解毒化するのに有利な位置にある分子内求核原子を剥き出しにする。次いで、該求核原子は分子内求核反応を経て反応し、遊離基Ｘが置換した４、５または６員環を形成する。アルキル化剤の分子内消費は、細胞性ＤＮＡおよび蛋白質のアルキル化を妨げ、薬剤を解毒化するのに役立つ。１以上のマスクされた求核原子は、薬剤構造の一部であってもよいが、１つで充分である。二機能性アルキル化剤を一機能性アルキル化剤に変換することは、毒性の劇的な減少をおこす。最終的な効果は、腫瘍関連プロテアーゼ活性が低い組織において、薬剤が解毒化されることである。式６の抗腫瘍剤の代謝は、腫瘍および正常組織における分岐経路に続く。これらの化合物の毒性スペクトルは、投与された細胞または組織における解毒化活性を活性化する速度によって決められる。腫瘍プロテアーゼに富んだ腫瘍は、急速に薬剤を活性化し、高毒性ホスホルアミドマスタード中間体を放出する。少量の薬剤は、解毒化される。しかしながら、主要な経路は、腫瘍細胞の死を導く毒性化である。正常細胞において、主要な代謝経路は解毒化である。薬剤のうち、活性化され毒素になるのはほんの少量である。正常細胞は、大半が毒性にならず、腫瘍細胞が選択的に殺される。腫瘍選択性は、式１の（パラまたはオルト）アシルアミノ基またはアシルオキシ基を分解し、毒性ホスホルアミドマスタード類似物の放出を引き起こす腫瘍関連プロテアーゼの能力により与えられる。腫瘍関連プロテアーゼは、広範囲の様々なエステル、アミドおよびオリゴペプチドを分解することができる。従って、広範囲の様々な組成物を用いることができる。腫瘍関連プロテアーゼに関する基質に求められる性質は既知であり、または通常の方法体系により得てもよい。シン（Ｈ．Ｓｉｎｇｈ），カルニツスキー（Ｇ．Ｋａｌｎｉｔｓｋｙ），（１９７９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：４３１９。バレット（Ｂａｒｒｅｔｔ，Ａ．Ｊ．），キルシュケ（Ｋｉｒｓｃｈｋｅ，Ｈ．）；（１９８１）ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；８０：５３５，モリタ（Ｍｏｒｉｔａ，Ｔ．）；（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．；８２：１４９５；ロッテンバーグ（Ｌｏｔｔｅｎｂｅｒｇ，Ｒ．）；（１９８１）；ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；８０：３４１。例えば、通常、以下の基質が望ましいプロテアーゼをアッセイするために使用される。カテプシンＢ：Ｌ−アルギニン４−メトキシ−β−ナフチルアミドＮα−ベンゾイル−ｌ−アルギニン４−メトキシ−β−ナフチルアミドＮα−ベンゾイル−ＤＬ−アルギニン β−ナフチルアミドＮα−ベンゾイル−Ｄｌ−アルギニンｐ−ニトロアニリドＮ−Ｃｂｚ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ４−メトキシ−β−ナフチルアミドＮα−ＣｂＺ−Ａｒｇ−Ａｒｇ７−アミド−４−メチルクマリンＮα−ＣｂＺ−Ａｒｇ−Ａｒｇ４−メトキシ−β−ナフチルアミドＮ−Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ７−アミド−４−メチルクマリンＮ−Ｃｂｚ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ４−メトキシ−β−ナフチルアミドＮ−スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ７−アミド−４−メチルクマリン（ここで、Ｃｂｚ＝カルボベンズオキシ）カテプシンＤ：Ｎαベンゾイル−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ４−メトキシ−β −ナフチルアミドＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ− Ｖａｌ−Ｌｅｕ４−ヒドロキシメチルピリジンエステル（ここで、ｔ−Ｂｏｃ＝ｔ−ブトキシカルボニル）カテプシン（Ｃｏｔｈｅｐｓｉｎ）Ｌ：Ｎ−Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ７−アミド−４−メチルクマリンジペプチジルペプチダーゼＩＩ：ｌｙｓ−Ａｌａ７−アミド−４−メチルクマリンｌｙｓ−Ａｌａ４−メトキシ−β−ナフチルアミドｌｙｓ−Ａｌａ β−ナフチルアミドｌｙｓ−Ｐｒｏ−４−メトキシ−β−ナフチルアミドプラスミン：ｄ−Ａｌａ−ｌｅｕ−Ｌｙｓ７−アミド−４−メチルクマリンＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ７−アミド−４−メチルクマリンＮα−ベンゾイル−Ｄｌ−アルギニンｐ−ニトロアニリドＮ−ベンゾイル−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇｐ−ニトロアニリドＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ７−アミド−４−メチルクマリンＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ７−アミド−４−メチルクマリンＮ−Ｃｂｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ４−メトキシ β−メチルクマリンＮ−Ｃｂｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇｐ−ニトロアニリドＧｌｙ−Ａｒｇｐ−ニトロアニリドＮ−スクシニル−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ７−アミド−４−メチルクマリンＮ−ｐ−トシル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ７−アミド−４−メチルクマリンＮ−ｐ−トシル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓｐ−ニトロアニリドＤ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓｐ−ニトロアニリドウロキナーゼ（Ｕｒｏｋｉｎｏｓｅ）及び組織プラスミノーゲン活性化因子：Ｎ−アセチル−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ β−ナフチルアミドＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ７−アミド−４−メチルクマリンＮ−Ｃｂｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ７−アミド−４−メチルクマリンＮ−Ｃｂｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ４−メトキシ−β−ナフチルアミド１Ｎ−ａ−Ｃｂｚ−Ｌ−リジンｐ−ニトロフェニルエステルＮ−グルタリル−Ｇｌｙ−Ａｒｇ７−アミド−４−メチルクマリンＧｌｙ−Ａｒｇｐ−ニトロアニリド。ｐＧｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇｐ−ニトロアニリド。Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓｐ−ニトロアニリド。（ここで、ｐＧｌｕ＝ピログルタミル）これらのプロテアーゼは上記の基質の末端エステル又はアミドを切断し、芳香族アミノ類似物又はフェノール類似物を遊離させる。遊離されるフェノール又は芳香族アミンの性質によってではなく、（上記に太字で示されている）アミノ酸鎖の性質によって、特異性が決定される。Ｒ６ＣＯ₂Ｈが次の群から選ばれる場合、カテプシンＢで活性化される抗腫瘍薬剤である式２及び式７を生じた：Ｌ−アルギニンＮα−ベンゾイル−ｌ−アルギニンＮα−ベンゾイル−Ｄ−アルギニンＮ−Ｃｂｚ−Ａｌａ−Ａｒｇ−アルギニンＮ−Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−アルギニンＮ−Ｃｂｚ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−アルギニンＮ−スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−フェニルアラニンＲ６ＣＯ₂Ｈが次の群から選ばれる場合、カテプシンＤで活性化される抗腫瘍薬剤である式２及び式７を生じた：Ｎαベンゾイル−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ロイシンＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ロイシンＲ６ＣＯ₂Ｈが：Ｎ−Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−アルギニンである場合、カテプシンＬで活性化される抗腫瘍薬剤である式２及び式７を生じた。Ｒ６ＣＯ２Ｈが次の群から選ばれる場合、ジペプチジルペプチダーゼＩＩで活性化される抗腫瘍薬剤である式２及び式７の抗腫瘍薬剤を生じた：ｌｙｓ−アラニンｌｙｓ−プロリンＲ６ＣＯ₂Ｈが次の群から選ばれる場合、プラスミンで活性化される抗腫瘍薬剤である式２及び式７を生じた：ｄ−Ａｌａ−ｌｅｕ−リジンＡｌａ−Ｐｈｅ−リジンＮα−ベンゾイル−Ｄｌ−アルギニンＮ−ベンゾイル−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−アルギニンＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−リジンＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−リジンＮ−Ｃｂｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−リジンＮ−Ｃｂｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−アルギニンＧｌｙ−アルギニンＮ−スクシニル−Ａｌａ−Ｐｈｅ−リジンＮ−ｐ−トシル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−アルギニンＮ−ｐ−トシル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−リジンＤ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−リジンＲ６ＣＯ₂Ｈが次の群から選ばれる場合、組織プラスミノーゲン活性化因子及びウロキナーゼで活性化される抗腫瘍薬剤である式２及び式７を生じた：Ｎ−アセチル−Ｇｌｙ−リジンＡｌａ−Ｐｈｅ−リジンＮ−Ｃｂｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−アルギニンＮ−Ｃｂｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−アルギニンＮ−ａ−Ｃｂｚ−Ｌ−リジンＮ−グルタリル−Ｇｌｙ−アルギニンＧｌｙ−アルギニンｐＧｌｕ−Ｇｌｙ−アルギニンＤ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−リジンＲ６ＣＯ₂Ｈが、Ｎ−スクシニル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｌｅｕ−Ｇｌｙ−プロリンの場合、コラゲナーゼで活性化される抗腫瘍薬剤である式２及び式７を生じた。コラゲナーゼは、この構造の基質のｌｅｕ−ｇｌｙ結合を切断することが知られている。Ｋ．コジマ，Ｈ．キノシタ，Ｔ．カトウ，Ｔ．ナガツ，Ｋ．タカダ，Ｓ．サカキバラ（Ｋ．Ｋｏｊｉｍａ，Ｈ．Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ，Ｔ．Ｋａｔｏ，Ｔ．Ｎａｇａｔｓｕ，Ｋ．Ｔａｋａｄａ，Ｓ．Ｓａｋａｋｉｂａｒａ）（１９７９）ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍ．１００：４３。その結果は、Ｘ−プロリル−ジペプチジルペプチダーゼにより速やかに分解されるＧｌｙ−Ｐｒｏ−ジペプチドを遊離させ、毒性のホスホルアミドマスタード類似物を放出させるというものである。式１及び式６のアシルオキシ基又はアシルアミノ基にとって要求される重要なことは、腫瘍関連プロテアーゼによりその基が切断されることである。非常に多くのアルキル、芳香族エステル及びアミドはプロテアーゼにとっての基質であり、用いられるものである。現在では、異なるアミノ酸の組み合わせを有するオリゴペプチドのライブラリーを調製することは日常的な作業である。これらの組み合わせにより作られるオリゴペプチドも、Ｒ６ＣＯ₂Ｈのソースとして有用なものとなり得る。ゴードンＥＭバレットＲＷドーワーＷＪフォードルＳＰギャロップＭＡ（ＧｏｒｄｏｎＥＭＢａｒｒｅｔｔＲＷＤｏｗｅｒＷＪＦｏｄｏｒＳＰＧａｌｌｏｐＭＡ）（１９９４）ＪＭｅｄＣｈｅｍ３７（１０）：１３８５。；ギャロップＭＡバレットＲＷドーワーＷＪフォードルＳＰゴードンＥＭ（ＧａｌｌｏｐＭＡＢａｒｒｅｔｔＲＷＤｏｗｅｒＷＪＦｏｄｏｒＳＰＧｏｒｄｏｎＥＭ）；（１９９４）；ＪＭｅｄＣｈｅｍ３７（９）：１２３３。オストレッシュＪＭヒューサーＧＭブロンデレＳＥドーナーＢウェーバーＰＡハウテンＲＡ（ＯｓｔｒｅｓｈＪＭＨｕｓａｒＧＭＢｌｏｎｄｅｌｌｅＳＥＤｏｒｎｅｒＢＷｅｂｅｒＰＡＨｏｕｇｈｔｅｎＲＡ）；（１９９４）ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９１（２３）：１１１３８−４２。Ｒ６ＣＯ₂Ｈの基を最適化する高速スクリーニング法は、組み合わせて作られたオリゴペプチドの末端カルボキシル酸と、７−アミノ−４−メチルクマリン等の蛍光指示薬の基とを結合させることから構成される。精製腫瘍プロテアーゼによる、又はインビトロでの腫瘍細胞による末端アミドの切断により、現在の技術を用いて、高効率自動ロボット化マイクロウェル分光蛍光測定において定量できる蛍光物質である７−アミノ−４−メチルクマリンが放出されるであろう。あるいは、現在の技術を用いて、高効率自動ロボット化マイクロウェル細胞毒性測定において、インビトロで正常細胞及び悪性腫瘍細胞に対する細胞毒性について、組み合わせで作られたＲ６ＣＯ₂Ｈのライブラリーを作るプロテアーゼ活性化抗腫瘍薬剤のライブラリーをスクリーニングしても良い。次いで、日常的な方法だけを用いて、腫瘍関連プロテアーゼにより切断される、式１及び式６の化合物のアシルオキシ基又はアシルアミノ基を同定することができる。当業者であれば、腫瘍関連プロテアーゼの酵素活性により活性化され、細胞毒性を有するホスホルアミドマスタード類似物を生じさせる他の化合物を認識できるであろう。これらは本発明の範囲内のものと考えるべきである。薬剤は、経口的に、非経口的に又は局所的に投与され得る。好ましい投与経路は静脈注射によるものである。薬剤を投与する際の形状（例えば粉末状、タブレット状、カプセル状、溶液状、乳液状）は、投与される経路に依存するであろう。投与される薬剤の量は個人に基づいて決定され、そして、その個人の大きさ、症状の程度、及び調べられた結果を補助的に考慮して決定されるであろう。本発明の組成物には、薬剤に加えて、任意に他の成分を含めても良い。ある特定の組成物に含められる他の成分は、第一に、投与経路によって決定される。例えば、タブレットの形態で経口的に投与される組成物には、薬剤に加えて、増量剤（ラクトース等）、バインダー（カルボキシメチルセルロース、アラビアガム、ゼラチン等）、芳香剤、着色剤、被覆材（ワックス又は可塑剤等）を含めることができる。液体の形態で投与される組成物には本発明の薬剤を含めることができ、そして任意に、乳化剤、担体（生理的食塩水又は水等）、芳香剤そして又は着色剤を含めることができる。局所的な形式で投与される組成物には、乳化剤、溶媒、安定化剤及びポリエチレングリコール等の基剤を含めることができる。この薬剤を、吸引された骨髄標本等の腫瘍細胞をインビトロで殺すために用いても良い。インビトロで腫瘍細胞を殺すために、薬剤に曝露する時間内に所望の細胞殺性を達成するのに充分な濃度の薬剤に腫瘍細胞を接触させる。薬剤合成の一般的な方法トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン等の塩基の存在下、塩化メチレン、クロロホルム又はジエチルエーテル等の不活性溶媒中で、ベンジルアルコールＡ−ＯＨと式１１：の化合物とを反応させて、式１の化合物を合成することができる。Ａが適当な不活性溶媒に溶解しない場合、又はＡが式１１の化合物と反応し得る求核基を有する場合、次いで、保護基を用いる必要がある。カップリング反応の後に、この保護基を除去する。保護基としては標準的なものを用いれば良い。ヒドロキシ基のための適当な保護基としては、トリメチルシリル−、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−、β−（トリメチルシリル）エトキシメチル、ピクシル（ｐｉｘｙｌ）及びビニルエーテルが挙げられる。アミノ置換基のための適当な保護基としては、Ｔ−Ｂｏｃ、Ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル及び２−（ｐ−ビフェニル）−プロピル−オキシ−カルボニルが挙げられる。これらの保護基は常法を用いて結合（及び切断）することができる。グリーン，Ｔ．Ｗ．（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．）ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８１）。４当量のトリエチルアミン等の塩基の存在下、不活性な溶媒中で、１当量のＲ１Ｈの塩酸塩及び１当量のＲ２Ｈの塩酸塩とＰＯＣｌ₃との反応により、式１１に示される化合物を作ることができる。あるいは、ベンゼン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド又は塩化メチレン等の不活性な溶媒中で、Ａ−Ｘ、ここでＸはハロゲン又はトシル基等の良好な脱離基である、と式１２：に示される化合物との間の求核反応により、式１の化合物を合成してもよい。ここで、Ｒ１ａとＲ２ａはそれぞれ、脱離基Ｘがヒドロキシ基又は保護されたヒドロキシ基で置換されているＲ１とＲ２の類似物である。Ａ−Ｘとのカップリング反応の後、産物を適当な試薬で処理してＲ１ａ基とＲ２ａ基をそれぞれＲ１とＲ２に変化させる。例えば、Ｒ１とＲ２の脱離基が塩素である場合、チオニルクロライドを用いれば良い。式Ａ−ＯＨ、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２及びＲ２ａで示される式の化合物は公知の化合物、又は有機化学における当業者が確立された合成変法（ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ）及び手段を用いて合成できるものである。不活性な溶媒中で、式１１又は式１２の化合物とそれぞれ式１３ａ又は式１３ｂの化合物と反応させることにより、同様にして、式２で示される化合物を合成することができる。ここで、Ｘは良好な脱離基である。式１３ａ及び１３ｂで示される化合物は公知のもの、又は有機化学における当業者が確立された合成変法及び手段を用いて合成できるものである。式１４で示される、次の構造の化合物も公知のもの、又は有機化学における当業者が公知の手法を用いて容易に合成できるものである。式１４がオリゴペプチドの場合、次いで、ペプチド化学における通常用いられる技術を用いて合成される。式１４で示される化合物は、式１５ａ〜１５ｂの、公知の化合物又は容易に調製される化合物と反応し、式１６ａ〜１６ｂに示される、対応するエステル又はアミドを生成する。ジシクロヘキシルカルボジイミド、カルボニルジイミダゾール及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−ホスホニッククロライド等の、通常用いられる広範囲のカップリング試薬を用いることができる。あるいは、式１４の酸塩化物は、塩化チオニル又は塩化オキサリルによって調製され、そしてトリエチルアミン等の塩基の存在下で式１５の化合物と反応する。塩化チオニル、塩化トシル及び塩基、又はホスホラストリブロマイド等の試薬で処理することにより、式１６の化合物を式１３ｂの式の化合物に変化させることができる。有機化学における当業者であれば、この開示の範囲内に包含される化合物を作るための、他の多くの合成方法を認識できるであろう。実施例：次の基本化合物（Ｖ−イソフォス）を合成し、その抗腫瘍活性を測定した：４−アセトキシ３−メトキシベンジルアルコールを、１当量のトリエチルアミンの存在する無水塩化メチレン中で過剰量のＣｌ−（ＰＯ）（ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｃｌ）₂と、アルゴン気流下室温で２４時間反応させた。産物をシリカでのクロマトグラフィーで精製した。白色の結晶性物質を得た。この構造をプロトンＮＭＲ、リンＮＭＲ及び高分解能質量分析により確認した。 β−クロロエチルアミン塩酸塩（２当量）、酸塩化リン（１当量）及びトリエチルアミン（４当量）を塩化メチレン中で反応させることにより、Ｃｌ−（ＰＯ）（ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｃｌ）₂を合成した。アルゴン気流下−７８Ｃに冷却し、約４時間を費やしてゆっくり滴下して塩基を加えた。２４時間後、トリエチルアミン塩酸塩をろ過により除去した。次いで、有機相を２倍量の（２×’ｓ）氷冷飽和ＮａＣｌ水溶液ですみやかに洗浄した。溶媒を減圧処理に付して（ｅｘｖａｃｕｏ）除去した後、残渣を３倍量のトルエンと共に蒸発させて乾燥させた。貯蔵時にその産物は結晶となった。プロトン及びリンＮＭＲにより、所望の産物と一致していることが分かった。Ｖ−イソフォスは、エステラーゼ又はエステラーゼ活性を有する腫瘍関連プロテアーゼによりｐ−ヒドロキシ基を剥き出しにするように、イソホスホルアミドマスタードを遊離させるよう設計された。Ｖ−イソフォス及びイソホスホルアミドマスタードの、ＣＥＭ細胞に対するインビトロでの細胞毒性を４日間のインキュベートの後に調べた。生存細胞による、テトラゾリウム塩のホルマザンクロマフォレ（ｃｈｒｏｍａｐｈｏｒｅ）への変換に基づいて標準化されたアッセイを用いて４日後の細胞の生存率を測定した。（Ｔ．モスマン（Ｔ．Ｍｏｓｓｍａｎ）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ６５：５５（１９８３））モレキュラーデバイシズブイマックス（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓＶｍａｘ）プレートリーダを用いて、５７０ｎｍで、クロマフォレの産生を分光光度的に測定した。光学密度のデータをもとに、薬剤の細胞毒性効果と細胞の生存率が５０％に減少する濃度（ＩＣ₅₀値）をコンピュータプログラムで算出した。データは図１にまとめられている。Ｖ−イソフォスは、ＣＥＭ細胞に対するＩＣ₅₀が約０．０１μＭという強い毒性を示した。一方、イソホスホルアミドマスタードは、このアッセイによっては、１０μＭまで毒性を示さなかった。このインビトロでの試験は、サザンリサーチ研究所（ＳｏｕｔｈｅｒｎＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）のＲ．ブックハイト（Ｒ．Ｂｕｃｋｈｅｉｔ）により好意をもって行われた。Ｖ−イソフォスの、ＩＰＣ−８１ラット骨髄白血病細胞に対する抗腫瘍活性及び正常ラット骨髄コロニー形成細胞に対する毒性についても測定した。このインビトロでのアッセイは、ジョンスホプキンスオンコロジーセンター（ＪｏｈｎｓＨｏｐｋｉｎｓＯｎｃｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ）のＡ．イェーガー（Ａ．Ｙｅａｇｅｒ）により好意をもって、標準化された公知の手法を用いて行われた。この結果から、Ｖ−イソフォスは白血病細胞に対して明らかに活性を示すことが分かった。この結果は図２にまとめられている。マウス中でのＦＳＡ２繊維肉腫に対してもＶ−イソフォスを試験した。確立された腫瘍（各脾腹のサイズについて約１００ｍｇ）を有するマウスに、Ｖ−イソフォス、サイトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）、４−ヒドロペルオキシサイクロホスファミド又はイフォスファミドを、種々の投与量で腹腔内に１回投与した。２４時間後、マウスを屠殺して、薬剤処理マウスと対照マウスについて、生存する腫瘍コロニー形成細胞と骨髄コロニー形成細胞（ＣＦＵ−ＧＭ）の画分をアッセイした。このスクリーニング実験は、ダナファーバー腫瘍センター（ＤａｎａＦａｒｂｅｒＣａｎｃｅｒＣｅｎｔｅｒ）のＢ．タイヒャー（Ｂ．Ｔｅｉｃｈｅｒ）の好意により、標準化された公知の手法を用いて行われた。この結果は図３に要約されている。Ｖ−イソフォスは腫瘍に対して高い活性を示し、試験された他の薬剤より骨髄細胞に対して弱い毒性を示すことが分かった。均等物当業者は、日常的な実験を用いるだけで、本明細書に記載された特定の物質や成分と均等な多くのものを認識し、あるいはそれを確認することができる。これらの均等物は下記の請求の範囲に包含されるものとされる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年４月２１日【補正内容】請求の範囲１．次の構造式で示される抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ１は、β−Ｘ−エチルアミノ基、又は１以上の窒素原子上又は炭素原子上での置換を伴うβ−Ｘ−エチルアミノ基であり；Ｘは良好な脱離基又はハロゲンであり；Ｒ２は、β−Ｘ−エチルアミノ基、１以上の窒素原子上又は炭素原子上での置換を伴うβ−Ｘ−エチルアミノ基、アミノ基及び置換されたアミノ基からなる群より選ばれ；並びにＡは、ホスホエステルに対して、パラ位又はオルト位に１以上のアシルオキシ基又はアシルアミノ基を有するベンジルオキシ誘導体であり、ただし、該アシルオキシ基又は該アシルアミノ基は、置換又は非置換のｐ−グアニジノ−ベンゾイルオキシ基又はｐ−グアニジノ−ベンゾイルアミノ基ではない。２．次の構造を有する請求項１記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ３及びＲ４は独立して−Ｈ；アルキル基；メチル基；エチル基； −ＣＨ₂−ＣＯ₂−Ｙ；又はＮ置換メチレン−カルボニル−アミノ基であり；Ｙはアルキル基；メチル基；又はエチル基であり；及びＲ５はアシル−オキシ基又はアシル−アミノ基であり；そしてベンジル環は不活性基；アルキル基；アルキルオキシ基、メトキシ、又はハロゲンで置換されていても良い。３．次の構造を有する請求項２記載の抗腫瘍化合物：又は４．次の構造を有する請求項３記載の抗腫瘍化合物：又は５．Ｒ５が次の構造である請求項４記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ６は置換又は非置換のアルキル基又はフェニル基；又は、Ｒ６はＲ６−ＣＯＯＨが、置換又は非置換のアミノ酸、又は２〜約２０の置換又は非置換のアミノ酸から構成されるオリゴペプチドとなるように選択される。６．Ｒ５が次の構造である請求項２記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ６は置換又は非置換のアルキル基又はフェニル基；又は、Ｒ６はＲ６−ＣＯＯＨが、置換又は非置換のアミノ酸、又は２〜約２０の置換又は非置換のアミノ酸から構成されるオリゴペプチドとなるように選択される。７．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与える請求項６記載の抗腫瘍化合物。８．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与える請求項５記載の抗腫瘍化合物。９．腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項７記載の抗腫瘍化合物。１０．腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項８記載の抗腫瘍化合物。１１．Ｒ１が、窒素原子上又は炭素原子上に、マスクされた求核原子による置換を有するβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、該置換がＸ基；ここでＸは良好な脱離基である、から３位、４位又は５位の原子の位置にある、請求項１記載の抗腫瘍化合物。１２．Ｒ２が、窒素原子上又は炭素原子上に置換を有していても良いβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、マスクされた求核原子が、該求核原子とＸ基；ここでＸは良好な脱離基である、との間の３位、４位又は５位の原子の位置にある請求項１１記載の抗腫瘍化合物。１３．Ｘが塩素であり；求核原子がヒドロキシ基；アミノ基；カルボキシレート基；又はチオール基である請求項１１記載の抗腫瘍化合物。１４．Ｒ１が、窒素原子上又は炭素原子上に、マスクされた求核原子による置換を有するβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、該置換がＸ基；ここでＸは良好な脱離基である、から３位、４位又は５位の原子の位置にあり、そして該求核原子がヒドロキシ基；アミノ基；カルボキシレート基；又はチオール基である請求項６記載の抗腫瘍化合物。１５．マスクされた求核原子がアシルオキシ基；アシル−スルファニル基；又はアシル−アミノ基である請求項１１記載の抗腫瘍化合物。１６．Ｒ５が次の構造を有する請求項２記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ６は置換又は非置換のアルキル基又はフェニル基；又は、Ｒ６はＲ６−ＣＯＯＨが、置換又は非置換のアミノ酸、又は２〜約２０の置換又は非置換のアミノ酸から構成されるオリゴペプチドとなるように選択され；Ｒ１が、窒素原子上又は炭素原子上に、マスクされた求核原子による置換を有するβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、該置換がＸ基；ここでＸは良好な脱離基である、から３位、４位又は５位の原子の位置にある。１７．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与える請求項１６記載の抗腫瘍化合物。１８．腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項１７記載の抗腫瘍化合物。１９．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与え、そして該腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織ブラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項１１記載の抗腫瘍化合物。２０．次の構造を有する請求項１６記載の抗腫瘍化合物：又は又は又は又はここて、Ｒ７はＯ、ＮＨ、又はＳであり、Ｒ８はアルキル基、置換又は非置換のフェニル基、又はＲ８−ＣＯ₂Ｈが置換又は非置換のアミノ酸である。２１．Ｒ１及びＲ２が−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｃｌである請求項１記載の抗腫瘍化合物。２２．Ｒ１が−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃｌ）₂であり、Ｒ２が−ＮＨ₂である請求項１記載の抗腫瘍化合物。２３．次の構造を有する請求項１記載の抗腫瘍化合物。２４．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項１の化合物と腫瘍細胞とをインビトロ又はインビボで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。２５．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項１記載の抗腫瘍化合物。２６．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項６の化合物と腫瘍細胞とをインビトロで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。２７．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項６記載の抗腫瘍化合物。２８．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項１１の化合物と腫瘍細胞とをインビトロで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。２９．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項１１記載の抗腫瘍化合物。３０．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項１４の化合物と腫瘍細胞とをインビトロで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。３１．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項１４記載の抗腫瘍化合物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．次の構造を有する抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ１は、窒素原子上又は炭素原子上で置換基を有していても良いβ−Ｘ −エチル−アミノ基である。Ｘは良好な脱離基又はハロゲンである；Ｒ２は、窒素原子上又は炭素原子上で置換基を有していても良いβ−Ｘ−エチル −アミノ基；又は置換されていても良いアミノ基（ＮＨ₂）であり、並びに；Ａは、ホスホエステルに対して、パラ位又はオルト位に１以上のアシルオキシ基又はアシルアミノ基を有するベンジルオキシ誘導体であり；そしてアシルオキシ基又はアシルアミノ基は（置換又は非置換の）ｐ−グアニジノ−ベンゾイルオキシ基又はｐ−グアニジノ−ベンゾイルアミノ基ではない。２．次の構造を有する請求項１記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ３及びＲ４はＨ；アルキル基；メチル基；又はエチル基；−ＣＨ₂− ＣＯ₂−Ｙ；又はＮ置換メチレン−カルボニル−アミノ基；Ｙはアルキル基；メチル基；又はエチル基；及びＲ５はアシル−オキシ基；又はアシル−アミノ基；及びベンジル環は不活性基；アルキル基；アルキルオキシ基、メトキシ、又はハロゲンで置換されていても良い。３．次の構造を有する請求項２記載の抗腫瘍化合物：又は４．次の構造を有する請求項３記載の抗腫瘍化合物：又は５．Ｒ５が次の構造である請求項４記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ６は置換又は非置換のアルキル基又はフェニル基；又は、Ｒ６はＲ６ −ＣＯＯＨが、置換又は非置換のアミノ酸、又は２〜約２０の置換又は非置換のアミノ酸から構成されるオリゴペプチドとなるように選択される。６．Ｒ５が次の構造である請求項２記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ６は置換又は非置換のアルキル基又はフェニル基；又は、Ｒ６はＲ６ −ＣＯＯＨが、置換又は非置換のアミノ酸、又は２〜約２０の置換又は非置換のアミノ酸から構成されるオリゴペプチドとなるように選択される。７．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与える請求項６記載の抗腫瘍化合物。８．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与える請求項５記載の抗腫瘍化合物。９．腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項７記載の抗腫瘍化合物。１０．腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項８記載の抗腫瘍化合物。１１．Ｒ１が、窒素原子上又は炭素原子上に、マスクされた求核原子による置換を有するβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、該置換がＸ基；ここでＸは良好な脱離基又はハロゲンである、から３位、４位又は５位の原子の位置にある、請求項１記載の抗腫瘍化合物。１２．Ｒ２が、窒素原子上又は炭素原子上に置換を有していても良いβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、マスクされた求核原子が、該求核原子とＸ基；ここでＸは良好な脱離基又はハロゲンである、との間の３位、４位又は５位の原子の位置にある請求項１１記載の抗腫瘍化合物。１３．Ｘが塩素であり；求核原子がヒドロキシ基；アミノ基；カルボキシレート基；又はチオールである請求項１１記載の抗腫瘍化合物。１４．Ｒ１が、窒素原子上又は炭素原子上に、マスクされた求核原子による置換を有するβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、該置換がＸ基；ここでＸは良好な脱離基又はハロゲンである、から３位、４位又は５位の原子の位置にあり、そして該求核原子がヒドロキシ基；アミノ基；カルボキシレート基；又はチオールである請求項６記載の抗腫瘍化合物。１５．マスクされた求核原子がアシルオキシ基；アシル−スルファニル基；又はアシル−アミノ基である請求項１１記載の抗腫瘍化合物。１６．Ｒ５が次の構造を有する請求項２記載の抗腫瘍化合物：ここで、Ｒ６は置換又は非置換のアルキル基又はフェニル基；又は、Ｒ６はＲ６ −ＣＯＯＨが、置換又は非置換のアミノ酸、又は２〜約２０の置換は非置換のアミノ酸から構成されるオリゴペプチドとなるように選択され；Ｒ１が、窒素原子上又は炭素原子上に、マスクされた求核原子による置換を有するβ−Ｘ−エチル−アミノ基であって、該置換がＸ基；ここでＸは良好な脱離基又はハロゲンである、から３位、４位又は５位の原子の位置にある。１７．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与える請求項１６記載の抗腫瘍化合物。１８．腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項１７記載の抗腫瘍化合物。１９．腫瘍関連プロテアーゼ又はエステラーゼに曝した場合に、細胞に毒性を与え、そして該腫瘍関連プロテアーゼが、次の、ウロキナーゼ；組織プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＢ；カテプシンＣ；カテプシンＤ；プラスミン；コラゲナーゼ；ＩＶ型コラゲナーゼ；ストロメリシン；及びジペプチジルペプチダーゼからなる群より選ばれる請求項１１記載の抗腫瘍化合物。２０．次の構造を有する請求項１６記載の抗腫瘍化合物：又は又は又は又はここで、Ｒ７はＯ、ＮＨ、又はＳであり、Ｒ８はアルキル基、置換又は非置換のフェニル基、又はＲ８−ＣＯ₂Ｈが置換又は非置換のアミノ酸である。２１．Ｒ１及びＲ２が−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｃｌである請求項１記載の抗腫瘍化合物。２２．Ｒ１が−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃｌ．）₂であり、Ｒ２が−ＮＨ₂である請求項１記載の抗腫瘍化合物。２３．次の構造を有する請求項１記載の抗腫瘍化合物。２４．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項１の化合物と腫瘍細胞とをインビトロで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。２５．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項１記載の抗腫瘍化合物。２６．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項６の化合物と腫瘍細胞とをインビトロで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。２７．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項６記載の抗腫瘍化合物。２８．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項１１の化合物と腫瘍細胞とをインビトロで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。２９．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項１１記載の抗腫瘍化合物。３０．所望の効果を発揮させるのに充分に高い濃度の請求項１４の化合物と腫瘍細胞とをインビトロで接触させることを含む腫瘍細胞を殺す方法。３１．例えば、ガン患者を治療する等の、治療目的のための請求項１４記載の抗腫瘍化合物。