JPH11502813A

JPH11502813A - インターロイキン−１２を利用するパピロマウィルス関連損傷の処置

Info

Publication number: JPH11502813A
Application number: JP8528209A
Authority: JP
Inventors: アンスタンレイ，マーガレット; ジュセッピーナスカーピニ，チンジア
Original assignee: ケンブリッジユニバーシティテクニカルサービシズリミティド
Priority date: 1995-03-22
Filing date: 1996-03-22
Publication date: 1999-03-09
Also published as: EP0817644A1; GB9505784D0; WO1996029091A1; CA2215525A1; US6096869A; AU5151596A

Abstract

(57)【要約】インターロイキン−12（IL−12）もしくはその機能性類似体、又はIL−12をコードするもしくはその機能性類似体をコードするポリヌクレオチドはパピロマウィルス関連損傷、例えば HPV６及び／又は11に基づくいぼ、例えば尖圭コンジロームの治療の治療剤又はアジュバントとして利用される。IL−12又は内生産生のためのそれをコードするベクターをワクチン、例えばパピロマウィルス抗原、又はパピロマウィルス抗原をコードするベクターと共に利用してよい。

Description

【発明の詳細な説明】インターロイキン-12 を利用するパピロマウィルス関連損傷の処置発明の分野本発明はパピロマウィルス関連損傷、例えば性器いぼと称される腫瘍の如きHP V 関連損傷の処置のための剤及び方法に関する。本発明は更に、ワクチン及びアジュバントの如き免疫治療剤を含むかかる剤の製造及び利用方法に関する。発明の背景及び従来技術数多くの増殖性症状、特に様々ないぼ、例えば尖圭コンジローマ（肛門性器いぼ）及び頸部上皮内形成異常症及び新形成であって頸部癌へと進行しうるものがパピロマウィルスに関連することが知られている。尖圭コンジローマは通常６及び11型のヒトパピロマウィルスによる感染により生じ、そして英国における最もよく診断される性的感染型ウィルス障害である。著しい罹病率は損傷に関連し、そして有効な処置療法は満足たるものでなく、数多くの患者が再発性障害を示す。その他の型のHPV、特に16及び18は上皮内形成異常及び新形成の進行を伴い、それらは頸部、そして（稀に）外陰、膣又は陰茎の侵襲性癌腫へと進行しうる。更に、目に見える性器いぼを有する患者の50％において頸部上皮内新形成が示される研究がされた(PG Walker ら（1983）Br J Ve n DiS 59:120-123)。コンジロームを有する患者の一部（約20％）はその腫瘍が自発的退行し、明らかに宿主による効果的な免疫反応を反映する。S Aibaら（1986）Cancer 58:1246 -1251)は、腫瘍退行がCD４＋Ｔリンパ球及びマクロファージが主要となっている活性Ｔ細胞媒介型免疫反応を特徴とすることを報告しており、外来抗原に対する遅延型過敏反応と一致する。ワクチンは従来からパピロマウィルス関連症状の予防及び治療のために提案されていた。即ち、例えばWO 93/00436(Cancer Research Campaign Technology:WF H Jarrett ら）は、パピロマウィルス関連症状の予防及び治療のためのパピロマウィルスタンパク質Ｌ２、並びに関連のフラグメント及び融合タンパク質の利用に関する；WO 93/20844(Cancer Research Campaign Technology:MS Campoら）はパピロマウィルスＥ７タンパク質のワクチン用途に関する；そしてWO 93/02184( University of Queensland and CLS Ltd:I Frazer ら：Papilloma Virus Vaccin e)はＬ１タンパク質又はＬ１及びＬ２タンパク質を含んで成るパピロマウィルス様粒子並びにワクチンとしてのその利用に関する。更に、WO 96/00583(Merck:JJ Donnelly ら：Polynucleotide Vaccine for Pap ilomavirus)には、パピロマウィルスによる感染症に対する免疫防御を供しうる予防薬としての、動物組織への直接導入により発現できるパピロマウィルス遺伝子生成物をコードするDNA 構築体が記載されている。免疫分野において、数多くのサイトカイン及びアクセサー物質が知られ、そのうちの一の公知のサイトカインが現在IL−12と称されている。WO 92/05256(Gene tics Institute and Wistar Institute:G Trinchieri ら：Natural killer Stim ulatory Factor)にはナチュラルキラー刺激因子の名称で、ヒトサイトカインとしてのIL−12が記載されている。WO 92/05256 は一般に、「ガンマーインターフェロンの高揚した存在又はGM-CSF産生に応答性の癌、ウィルス感染症、例えばAI DS、細菌感染症及びその他の疾患状態の処置のための方法」における適当な薬理担体中のNKSF又はそのサブユニットの一方もしくは両方又はそのペプチドフラグメントの利用の推奨を含む。 EP 0,433,827(Hoffman-la Roche:RA Chizzonite ら：Cytotoxic lymphocyte m aturation fuctor and monolclonal antibodies directed thereto)には、細胞障害性リンパ球成熟因子(CLMF)の名のIL−12が記載されている。IL−12は他にナチュラルキラー細胞刺激因子と呼ばれている。 IL−12に関する言及はM Kobayashi ら J Exp Med(Sep1989)170(3)827-845「Id entification and purification of natural killer cell stimulatory factor( NKSF)，a cytokine with multiple biologic effects on human lymphocytes」；A S Stern ら Proc Nat Acad Sci USA(Sep 1990)87:6808-6812，「Purificati on to homogeneity and partial characterization of cytotoxic lymphocyte m aturation factor from human B-lymphoblastoid cells」；及びSF Wolf らJ Im munol(May 1991)146(9):3074-3081，「Cloning of cDNA for natural killer ce ll stimulatory factor，a heterodimeric cytokine with multiple biologic e ffects on T and natural killer cells」にもされている。IL−12は異なる遺伝子の産物である二本の共有結合ポリペプチド鎖ｐ40及びｐ35のヘテロダイマーとしても存在する。IL−12レセプターはＴ細胞及び活性化NK細胞の上に見い出され、そして70〜75kDa の単一トランスメンブラン糖タンパク質である。IL−12は活性化NK，CD４＋及びCD８＋Ｔ細胞サブ集団の増殖を促進し、そして抗体依存性細胞障害及びNK媒介細胞障害の双方を高めることが報告されている。IL−12はまた、マクロファージを活性化し得るインターフェロン−ガンマー(IFN−ガンマー）のインデューサーでもある。インターフェロン−ガンマー（サイトカインの一種）の性器いぼへの注射がなされている（LJ Eron ら(1986)New Engl J Med,vol 315(17)；及びL Belli ら(C ondylomata International Study Group)(1991),J Amer Med Ass,vol 265(20)（５月22／29日））。従来技術はパピロマウィルス関連症状及びそれらが生じせしめうる腫瘍のための更なる処置を探求することを所望せしめ続けている。発明の概要及び説明本発明は、同時に調べた多くの他のサイトカインと異なり、IL-12が臨床試験において本発明者により調べを退行性HPV 誘導型腫瘍において100 ％存在しているという驚くべき発現に基づく。 HPV 感染に由来する損傷におけるIL−12の存在とこのような損傷の退行との間の関係により、本発明はパピロマウィルス関連損傷の治療、例えば腫瘍の処置に一般に関連する様々な観点を提供する。本発明が適用できる症状には任意のパピロマウィルス感染症が含まれ、そして特にヒト又は非ヒト動物性パピロマウィルスによる感染の結果として誘導された任意の上皮細胞増殖、例えば良性いぼ又は皮膚もしくは粘膜表層、例えば皮膚、頸部、膣、外陰、肛門、直腸、陰茎、通路、尿道、喉道、口腔、口腔前庭、舌及び鼻咽頭のいぼが含まれる。本発明は更にパピロマウィルス感染に関連する悪性損傷、例えば肛門性器癌、例えば頸部、外陰、肛門、陰茎、並びに皮膚、喉頭及び腸結節癌にも適用できる。特に注目されるのは６及び11型のHPV により生ずるが如き肛門性器いぼの処置である。従って、本発明によれば、パピロマウィルス関連損傷の処置における治療剤又はアジュバントとして利用するためのサイトカインインターロイキン−12（IL− 12）及びその機能性類似体を提供する。かかる損傷は例えば６及び／又は11型のHPV により生ずるいぼ、例えば肛門性器いぼとしても知られる性器いぼ、又は尖圭コンジローマでありうる。更に、本発明によりパピロマウィルス関連損傷の処置における治療剤又はアジュバントとして提供するのは、IL−12をコードする又はその機能性類似体をコードするポリヌクレオチドである。本発明の態様に係る治療の担いは個体のIL−12の量、特に、例えばパピロマウィルスに対する免疫反応が治療効果を有しうる組織箇所、例えばHPV の関係する損傷箇所又はその付近のIL−12の量を高めることにある。本発明によれば、IL−12自体を損傷の治療のためにHPV 関連損傷を有する個体に投与してよい。他方、本発明の一定の実施例に従うと、IL−12のインデューサー（例えばIL− 12をコードし、且つ細胞に感染したときにコードされたIL−12の発現を及ぼすことのできる組換ウィルスベクターにより担持されたポリヌクレオチドの形態）を損傷の治療のためにHPV 関連損傷を有する個体に投与してよい。一般にかかるインデューサーは、例えば細胞によるIL−12の高揚した内性生産又は放出の結果としてIL−12のレベルを局部的又は全身的に高めることを誘導できる分子状物質の如き物質であってよい。即ち、本発明によれば、腫瘍の如きパピロマウィルス関連症状の治療において利用するための薬理組成物；並びにIL−12及びそのインデューサーを、パピロマウィルス関連症状の治療、例えば抗腫瘍処置において利用するための医薬品、組成物の製造のための方法において利用できる。 IL−12又はそのインデューサーは以下に記載の更なる成分と混合して存在しうる。即ち、本発明は一の観点において、例えばパピロマウィルス関連腫瘍の処置において利用するための免疫治療剤又はワクチンアジュバントとに利用するための IL−12又はその機能性類似体を含んで成る薬理治療剤を提供する。この薬理治療剤は（ｉ）ワクチンアジュバントとして利用するためのIL−12又はその機能性類似体と、（ii）ワクチンとして利用するためのパピロマウィルス抗原、又はパピロマウィルス抗原をコードし、且つその発現を及ぼすことのできるベクターとの組合せを含んで成りうる。成分（ii）は少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質もしくは抗原性フラグメント又はその対応の融合タンパク質；イリンがHPV ６，11，16及び／又は 18のタンパク質Ｅ１，Ｅ２，Ｅ４，Ｅ５，Ｅ６，Ｅ７，Ｌ１及び／又はＬ２のうちの少なくとも一種の配列の少なくとも実体的な部分を存するポリペプチドを含んで成りうる。−般に、本発明において、31，31，35，45，51，52及び56型のHP V の対応のタンパク質及び抗原も、例えば頸部上皮内新形成に関連するパピロマウィルス損傷又はその危険性に関係して、利用できる。他方、成分（ii）は少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質もしくは抗原性フラグメント又はその対応の融合タンパク質をコードし、且つ発現を及ぼすことのできる組換ウィルスベクターを含んで成りうる。かかるベクターはHPV ６，11，16及び／又は18の少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質Ｅ１，Ｅ２，Ｅ４，Ｅ５，Ｅ６，Ｅ７，Ｌ１及び／又はＬ２の配列の少なくとも実体的な部分を有するポリペプチドをコードする少なくとも一種の組換ワクシニアウィルスを含んで成りうる。他方、前述の通り、IL−12のインデューサーを使用してよい。本発明は一定の態様において、IL−12のｐ35サブユニットと共にｐ40サブユニットの如きIL−12の一方もしくは両方のサブユニット（鎖）をコードするポリヌクレオチド、又は所定の場合、ｐ40サブユニットのみをコードする、並びにその他の機能性類似体をコードするポリヌクレオチドの、パピロマウィルス関連損傷の処置における治療剤又はアジュバンドとしての利用を含む。これは例えばヘテロダイマーIL−12のｐ40鎖でなくｐ35鎖を構成的に発現できるケラチン細胞の如き組織との関連で有用でありうる(G Mullerら、1994,J Clin Invest 94:1799-1805)。IL−12活性はｐ40サブユニットを包括するヘテロダイマー形態に、生体内の正常状態で、依存すると報告されている（ML Kobayashiら 1989,J Exp Med 170:827-832;SF Wolfら1991,J Immunol 146:3074-3081）。即ち、例えば、更なる観点において、本発明は、免疫治療剤又はワクチンアジュバントとして利用するための、IL−12もしくはそのｐ40サブユニット又はその他機能性類似体をコードし、且つ発現を及ぼすことのできる薬理治療剤を提供する。ポリヌクレオチドは組換ウィルスベクター、例えば遺伝子障害ヘルペスウィルスベクター（それらについてはWO 92/05263 及びWO 94/21807(Immunology Ltd/C antab Pharmaceuticals:Inglisら）並びにWO 92/16636(Immunology Ltd:Boursne llら）を参照のこと)の一部を成しうる。これとの関連で、当該ウィルスベクターは例えばgH遺伝子において欠失を存し、且つIL−12もしくはそのｐ40サブユニット又はその他の機能性類似体をコードする１又は複数の挿入外来遺伝子を担持する突然変異体 HSV１又はHSV２を含んで成りうる。他方、例えば真核細胞の中での発現のために適当も調節配列を有するプラスミドDNA 又はより複雑なベクターを使用してよい。 IL−12又はその機能性類似体をコードし且つ発現を及ぼすことのできるかかるポリヌクレオチドは、パピロマウィルス抗原と組合せてワクチンアジュバントとして、又はパピロマウィルス抗原をコードし且つ発現を及ぼすベクターと組合せてワクチンとして利用できうる。かかるワクチン要素の例は既に記述した。所望するなら、IL−12又は類似体をコードするポリヌクレオチドはパピロマウィルス抗原をコードする同一のベクターによりコード且つ担持されていてよく、そして独立のタンパク質として、又は例えばHPV 誘導アミノ酸配列とIL−12鎖の一方もしくは他方又はその双方に由来するアミノ酸配列を含む融合タンパク質としてコードされうる。 IL−12の内生生産は、任意の他の所望の治療剤、例えばワクチンと一緒に、アジュバントの如き刺激剤を局所又は末梢投与することにより、処置被検体において誘導させることもできる。本発明に係る治療方法は、損傷付近において、例えば皮膚又は粘膜の外部又はアクセス可能な腫瘍において本発明に係る薬剤を投与することにより、パピロマウィルス関連損傷、例えば腫瘍中の又はそのまわりのIL−12のレベルを高める治療を含む。 IL−12タンパク質は、本発明に係る薬理組成物中で、例えば損傷箇所にもしくはその付近に局所的に、又は全身的に投与される生物活性ヘテロダイマーIL−12 タンパク質として、唯一の活性成分でありうる。局所投与が好ましい。他方、更なる活性成分、例えばワクチンを付与してよい。IL−12又はそのインデューサーと一緒に使用できるワクチンには、HPV タンパク質又は抗原をコードする核酸を担持した死滅HPV 調製物、又は死滅もしくは生存ベクター、例えばワクシニアウィルスベクター；又は対応の「裸DNA」を含む。コードする適当なHPV タンパク質は本明細書全体に記載のものが含まれる。本発明の例に係る薬理組成物は例えば経口的に、又は皮膚、皮下、静脈内、筋肉内もしくは皮内注射により服用されるように処方し得る。本発明の例に係る薬理組成物は、対応の活性成分に加えて、薬理学的に許容されるビヒクル、賦形剤、担体、その他のアジュバント、バッファー、安定剤及びその他の公知の材料、好ましくは非毒性であり且つ選択した活性成分と非適合性でない材料を含んで成りうる。局所投与用の薬理組成物にはクリーム及びエマルションが含まれる。タンパク質を投与する場合、それらは例えば水性バッファーにおいて、又は公知の徐放形態、例えばリポソーム及びマイクロ粒子で投与できうる。経口組成物は錠剤又はカプセルとして投与してよく、例えばゼラチン、又は粉末もしくは液体を含んで成りうる。液体組成物は水、例えば生理食塩水又はデキストロースもしくはその他の糖溶液、グリセリンもしくはその他のグリコール、エチレンもしくはプロピレングリコール、又はポリエチレングリコール、石油、動物、植物、鉱物もしくは合成油を含んで成りうる。注射用の薬理組成物は公知の無菌注射用ビヒクルを含んで成り得、それらは往々にしてパイロジェンフリーであり、そして適当なpH、等張性及び安定性を有し、例えば等張性ビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、及びラクテート型リンガー注射液である。注射によりIL−12を投与するためのビヒクルの適当な例にはバッファー、ヒト血清アルブミン及びグリシン、又はヒト血清アルブミン、又は注射用食塩水が含まれうる（L J Eronら(1986)New England J Med vol 315(17);及びBelli ら(Condylomata International Study Group),(199 1),J Amer Med Ass,vol 265(20)(５月22／29日））。本発明に係る利用のために提供する治療的に有効な量は以下に記載するものでありうるか、又は腫瘍領域もしくは容積として腫瘍の定量評価によって容易に決定し得る。他方、処置の用量及び進行は損傷の生検及びその中に存在するIL−12のレベル又は発現性の、イムノアッセイもしくはその他の免疫化学測定による（公知のイムノアッセイから容易に応用できうるものか、又はIL−12に特異的な適当な結合力の抗体を利用することによる免疫化学法）又は以下に詳細の如きPCR法による評価によって評価できうる。従って、活性成分の用量は本明細書に記載の通りであるか、又はかかるアッセイ法により供される処置及び処方のもとで、臨床例における損傷の箇所、タイプ及び症度に従ってかかりつけの医師により調整されうる。タンパク質IL−12は１回の投与当り１pg〜１mgの範囲、例えば１回の投与当り 10pg〜10μｇの範囲、例えば１回の投与当り10pg〜１μｇの範囲において唯一の活性成分として注射されうる。ワクチンアジュバントとして使用する場合、投与は例えば１回の投与当り１pg−10μｇ、例えば１回の投与当り 100pg〜１μｇの範囲でありうる。 IL−12をコードするDNA の利用において、その用量は例えば１回の投与当り１ ng〜１mg、例えば１回の投与当り100ng〜100μｇでありうる。本明細書に記載の治療はその他の形態の治療、例えば抗腫瘍剤の投与及び／又はその他の細胞溶解性もしくは細胞破壊処置、例えば外科的切除、低温手術、電気焼灼、レーザー療法及びポドフィルム(podophyllum)樹脂の適用と組合せてよい。異なる治療は同時又は連続式に施してよい。本発明を以下の実施例及び関連の試験方法を参照しながら実施態様について説明するが、それらは限定の意図はない。 HPV 腫瘍に対する免疫療法としてのIL−12の利用この利用のため、組換IL−12は、適当な発現系、好ましくは哺乳動物細胞発現系、しかしながら他に酵母又はバキュロウィルス発現系におけるIL−12のｐ35及びｐ40鎖の双方の発現によりin vitroで製造できうる。かかる発現系はrDNA技術の業界において公知であり、そして公知のクローニング及び発現ベクター並びにその他の関連の材料をIL−12の発現に容易に応用できうる。WO 92/05256(Geneti cs Institute and Wistar Institute:G Trinchieri ら：Naturalkiller Stimula tory Factor)には、ナチュラルキラー刺激因子の名のもとでヒトカイトカインとしてのIL−12が記載され、そしてそれを製造するための方法及びそれを含む薬理製剤が記載されている。EP 0433827(Hoffmann-la Roche:RA Chizzoniteら：Cyto toxic lympocyte maturation factor and monoclonal antibodies directed the reto)には細胞障害性リンパ球成熟因子（CLMF）の名のもとでIL−12が記載され、そしてその製造及びヒトＢ−リンパ芽球細胞系による合成が記載されている。このようにして製造したIL−12は本質的に標準な技術、例えばWO 92/05256（G enetics Institute and Wistar Institute:G Trinchieri ら）及びEP 0433827(H of fmann-la Roche:RA Chizzoniteら）、並びに上記のその他の文献に記載の技術により精製できうる。組換IL−12調製物は性器いぼを処置するために利用でき、そして薬理学的に許容される担体と一緒に、例えば当該タンパク質の水性溶液として、又は封入形態として、例えば生物分解性ミクロ粒子もしくはリポソーム中で、又は水性クリーム製剤中で処方されうる。例えばHPV いぼ又はその他の損傷に局所塗布するとき、IL−12は例えば0.01〜 1000μｇ／日の用量範囲で適用してよい。この目的のため、IL−12の薬理製剤は局所調製物、又は非経口、特に注射用調製物であってよい。アジュバントないしHPV ワクチンとしてのIL−12の利用 IL−12はワクチンアジュバントとしての利用によりHPV 障害を処置するのにも利用できうる。アジュバントとしてIL−12が添加されうるHPV ワクチンは組換HPV タンパク質、融合タンパク質、フラグメント、又はペプチドを含む。例えば、パピロマウィルス関連症状の予防及び治療のためのパピロマウィルスタンパク質Ｌ２並びに関連のフラグメント及び融合タンパク質の利用を考慮したWO 93/00436（Cancer Re search Campaign Technology:WFH Jarrettら）に記載のものを含む。かかるワクチンは、その他のアジュバント、例えばアルヒドロゲル（TM）として知られる調製物形態の水酸化アルミニウムゲル及び公知の生物分解性ミクロ粒子又はリポソームと組合せてよい。 IL−12を組合せることのできるその他のHPV ワクチン形態には組換ウィルス様粒子、例えばWO 93/02184 (University of Queensland and CLS Ltd:I Frazerら：Papilloma Virus Vaccine)に記載のものが含まれる。他方、核酸ベースプラスミドワクチン、例えばWO 96/00583(Merck:JJ Donnell yら：Polynucleotide Vaccine for Papillomavirus)に記載のものをIL−12又はそれをコードするポリヌクレオチドと一緒に使用してよい。他方、組換ベクター、例えばワクシニアウィルス、例えばHPV タンパク質又は関連の融合タンパク質をコードする遺伝子を担持するもの、例えばWO 92/16636 に記載のものを使用してよい。WO 92/16636 (Immunology Ltd:MEG Boursnell ら :Recombinant Virus Vectors Encoding Human Papillomavirus Proteins) には、例えばHPV 野生型タンパク質、例えば HPV16Ｅ７及び HPV18Ｅ７又はそれと免疫学的に交差反応する突然変異タンパク質の一部又は全体をコードする組換ウィルスベクターが記載されている。 HPV ワクチンアジュバントとして使用する組換IL−12はIL−12と、それと同じ箇所に投与するワクチンとの混合物であってよい。他方、それは複数の成分を個々に、例えば同じ箇所且つ同じ時間において、又は別の箇所及び／もしくは時間において投与する組合せ治療における個々の成分として使用できうる。例えば、 IL−12は、ワクチンを注射により全身投与しながら、局所投与してよい。例えば、IL−12投与は日常ベースで、例えば０日目から１週間にわたり投与してよく、一方ワクチンの注射は定期的ベースで、例えば０日目、14日目及び28日目と投与してよい。 cDNAによるIL−12の導入 IL−12はIL−12をコードするcDNAの如きポリヌクレオチドを導入することによりHPV 障害の処置において使用できる。これは例えばIL−12の双方の鎖をコードする裸プラスミドDNA の形態で供与できうる。これらは類似もしくは異なるものでありうる別々のプロモーターのコントロール下の、又は単一のプロモーターのコントロール下の同一のプラスミド上の異なるタンパク質としてコードされうる。他方、二本鎖をコードするcDNAを融合させ合って単一の融合タンパク質をコードするcDNAを作ってよく、それは所望するなら２種のIL−12サブユニットに対応する配列の間に位置するペプチドスペーサーを存しうる。他方、IL−12の二本の鎖は別々のプラスミド上でコードされうる。この２つのプラスミドは混合物としてもしくは複数の注射部位において付与するか、又はこれらのプラスミドを別々の注射部位に別々に注射してよい。他方、IL−12のｐ40サブユニットのみをコードするポリヌクレオチドを、特に他方のサブユニットｐ35が構成的に発現されるワクチン細胞の如き細胞の中で発現を及ぼさせるのに当該ポリヌクレオチドを使用するとき、付与してよい。ポリヌクレオチド、例えばIL−12のｐ40及びｐ35サブユニット又はｐ40サブユニットのいづれかをコードするcDNAは組換ウィルスベクター又は細菌ベクターにより導入されうる。有用なウィルスベクターはレトロウィルス、アデノウィルス、アデノウィルス関連ウィルス、ヘルペスウィルス、ポラクスウィルス又はその他のウィルスを基礎としうる。このウィルスは複製コンピテント、例えば衰弱生存ウィルスであるか、又は複製欠陥ウィルス、例えば本質的なウィルス遺伝子の欠失によるウィルスにおける遺伝子欠損に原因して接種を施した被検体において感染性の新規ウィルス粒子を作ることのできないものでありうる。有用な細菌性ベクター系にはラクトコッカス・ラクチス（Lactococcus Iactis ）、衰弱サルモネラ（Salmonella）及びその他の安全な細菌系が含まれる。 IL−12鎖は、類似又は異なるものでありうる別々のプロモーターのコントロール下にある、又は単一のプロモーターのコントロール下にある同一のウィルス又は細菌の中の別々のプロモーターとしてコードされうる。他方、二本の鎖をコードするcDNAを融合させて上記の単一の融合タンパク質を作ってよい。他方、二本の鎖は別々のベクターの中でコードされうる。 IL−12cDNAはリポソーム導入によっても導入されうる。裸プラスミドDNA の投与はプラスミドDNA を含む水性溶液の注射により達成し得る。一般に、本発明により供される剤の注射ルートは筋肉内、皮下又は皮内ルートであってよく、例えばHPV 関連損傷（腫瘍、いぼ）は直接又はその付近に注射してよい。他の有用な注射部位はHPV 関連損傷の近辺の皮膚又は粘膜、更にはHPV 関連損傷から遠方の皮膚又は粘膜である。その他の近年論じられている方法は、金粒子上にDNA を吸着させ、そしてガンによりこの粒子を注入することにより適用できうる。ウィルス又は細菌ベースベクターの投与は組成物、例えば改良ウィルス又は細菌を含む水性組成物の、筋肉内、皮下又は皮内ルートを介する、HPV 関連損傷への直接的な、又はそうでなければ損傷のすぐ近く又は離れた箇所への注射によるものであってよい。他にベクターは鼻内、経口又はその他の投与により粘膜表層に付与してよい。 IL−12ポリヌクレオチド、例えばcDNA又はかかるポリヌクレオチド含有ベクターはHPV 誘導障害の治療のためのワクチンアジュバントとして利用できうる。関連のワクチンは１又は複数のHPV 関連抗原をコードする裸プラスミドDNA を含んで成ってよく、その抗原は独立で又は融合タンパク質形態で発現されるHPV ゲノムに由来する１又は複数の遺伝子生成物であってよい。HPV 抗原をコードするDNA はIL−12遺伝子として同一のプラスミド上にあるか、又は別のプラスミド上に載っていてよい。他方、IL−12をコードするポリヌクレオチドは上記の通りウィルスもしくは細菌ベクター中で導入されるHPV 抗原をコードするポリヌクレオチドと共に、又はリポソーム導入を介して付与してよい。IL−12及びHPV 抗原は同一のベクター又は別々のベクターの中でコードされうる。 IL−12鎖をコードするDNA は、合体して生物活性分子を形成する二種類のタンパク質をコードするか、又は任意的にスペーサーアミノ酸配列により分けられたIL−12の双方の鎖の配列を含む融合タンパク質をコードしうる。試験方法：以下の試験方法を上記及び更に以下に詳細する本発明者の臨床研究において用い、そしてそれらは本発明に係る治療の経時的なモニターにも適用される。腫瘍細胞のサイトカインmRNA分析：ここで分析した腫瘍は尖圭コンジロームを有する患者由来の性器いぼとした。前述の通り、これらはHPV 感染症に原因する。性器損傷のサンプリング：本研究において利用した性器損傷はDepartment of Genito-Urinary Medicine, Jefferiss Wing,St Mary's Hospital,Paddington,London で得た。全ケースにおいて、損傷をサンプリングの24時間前にベータジン（TM）で処置した。損傷を切り取り、そして直ちに液体窒素の中で瞬間凍結した。サンプルを−70℃で分析するまで保存した。生検からのRNA 抽出： RNAを、P Chomczynski ら(1987)Anal Biochem 162:156-161の方法に基づき、市販の製品RNA₂₀LB(Cambio Cambridge,UK)を用いてサンプルから抽出した。凍結組織を氷上の少なくとも１mlのRNA₂₀LBを含むチューブの中に入れ、そして電動ホモジナイザー(OMNI International 1000,Camlab,Cambridge UK)でホモジナイズした。得られる懸濁物を1.5ml のオートクレーブ処理したコンペンドルフチューブに移し、そして0.2ml のクロロホルムを２mlづつのホモシネート物に加えた。サンプルを15秒間強力に撹拌し、そしてその懸濁物を氷上で少なくとも15分放置し、次いで12,000ｇで15分、４℃で遠心分離した。サンプルを二相、即ち、上部水性相と下部有機相に分けた。上相を新しいチューブに移し、そして等容量のイソプロパノールを加えた。 RNA を沈殿させるため、サンプルを−20℃で少なくとも16時間保存し、次いで 12,000gで４℃で15分遠心分離した。上滴液を除去し、そしてペレットを70％のエタノールで洗った。RNAを真空で簡単に乾かし、50〜100 μｌのDEPC処理水に再懸濁し、そして光度計での260nm での測定により定量した。RNAの少量アリコートを−70℃で保存した。生検から抽出したRNA の品質チェックサンプルから抽出したRNA が分解していないかを確認するため、少量アリコートを 6.6％のホルムアルデヒドを含むアカリロースゲル上で RNA18S及び28Ｓについてのマーカーと一緒に泳動させた。RNA を0.1 Ｍの酢酸アンモニウム中のエチジウムブロミド(0.5μｇ／ml)で30〜60分かけて染色することにより識別化させた。rRNA18Ｓ及び28Ｃに相当するバンドが見えたら、ゲルを写真撮影し、そしてリボソームRNA についての明瞭なバンドを示すサンプルのみを更なる研究のために使用した。 RT−PCR によるRNA の酵素的増幅：（ａ）鋳型としてRNA を利用するDNA 合成：性器損傷から抽出した全RNA ２μｇを逆転写用の鋳型として用いた。RNA を20 μｌの最終容量で500ng のポリ（T）18プライマーと６５℃で15分インキュベートし、次いで氷上で冷却した。以下の混合物を各サンプルのために調製して： 10μｌの５Ｘの逆転写酵素バッファー２μｌの0.1 ＭのDTT(ジチオスレイトール) ５μｌの８mMの４種のdNTP混合物（２mMづつ）２μｌ（20U）のRNAsin 10μｌの水。この混合物29μｌをRNA を含むチューブに加えた。各サンプルに１μｌ（200 Ｕ）のSuperscript(TM) 逆転写酵素を加え、そしてそのチューブを42℃で１時間インキュベートした。このインキュベーションの終了時に、15μｌの10mMのトリス−Cl，10mMのEDTA,pH7.5を加え、次いで 200μｌの緩衝化フェノールを加え、サンプルを軽くボルテックスにかけ、次いで高速で室温にて５分間遠心分離した。上部水性相を新しいチューブに移し、次いで200 μｌの24：１のクロロホルム：イソアミルアルコールを加えた。ボルテックス及び高速で室温での遠心後、上相を新しいチューブに移し、それに20μｌの３Ｍの酢酸ナトリウム及び500μｌの無水アルコールを加えた。サンプルを−20℃で一夜又は−70℃で20分保存し、次いで高速で４℃で15分遠心分離した。上清液を除き、そしてペレットを真空で軽く乾かし、そして100μｌの水に再懸濁した。得られるcDNAを−20℃で保存した。（ｂ）特異的なプライマーによるcDNAの増幅：逆転写により得られるcDNA５μｌをサイトカインの特異的な配列の増幅のために用いた。PCR 増幅のために使用したプライマーは下記の通りである：以下の混合物を各サンプルについて調製した： 2.5μｌの20Xの反応バッファー３μｌの25mMのMgCl₂ １μlの40mMの４種のdNTP（10mMづつ） 2.5μｌづつの各プライマー 31.5μｌの水 43μｌの混合物を0.5mlのエッペンドルフチューブに移し、そして５μｌの鋳型DNA を加えた。２μｌの熱安定性DNA ポリメラーゼTf１(Cambio,Cambridge UK )を加えた。この混合物の上に20μｌの鉱物油を載せ、そして以下の温度で60サイクル増幅させた：変性94℃で１分；アニーリング55℃で１分；伸長72℃で２分。この増幅過程に94℃で５分の長い変性時間を先行させ、そして72℃10分サイクルを後続させ、ポリメラーゼの残留活性を失わせた。適当なバンドの存在はエチジウムブロミドを含む 1.5％のアガロースゲル上で PCR 生成物20μｌを泳動させることにより確認した。ゲルを適当な時間泳動後、それを写真撮影し、そしてDNA をニトロセルロース膜に移すのに使用した。このゲルを 0.5ＭのNaOH，１ＭのNaClの中で20分づつサイクルに２回かけて変性させ、次いで水で洗い、そして 0.5ＭのTris-Cl,pH7.4,３ＭのNaClの中で20分のサイクルに２回かけて中和した。ゲルをQuickdraw ブロッティング紙(Sigma International)を用い20ＸのSSC の中でニトロセルロース膜に一夜かけて移した。次いでこの膜を20 XのSSC で平衡化し、風乾し、そして80℃２時間かけて焼き、次いで使用するまで４℃で保存した。（Ｃ）PCR 生成物の同一性の確認 PCR 生成物の同一性を確認するため、膜をPCR により増幅させたサイトカインの内部配列を認識するジゴキシゲニンラベル化プローブと、Boehringer Mannhei m によるそのin-situ ハイブリダイゼーションガイドのプロトコールに従ってハイブリダイズさせた。PCR生成物とのハイブリダイゼーションのために使用したプローブは下記の通りである。膜を少なくとも20ml／100 cm²において、0.1 ％Ｖ／ＶのＮ−ラウロイルサルコシン、0.02％Ｖ／ＶのSDS 及び１％の核酸ハイブリダイゼーション用ブロッキング試薬の中に37℃で１時間プレハイブリダイズした。ハイブリダイゼーションを４ml／100 cm²においてハイブリダイゼーションバッファーの中で10pmol／ml のオリゴヌクレオチドと37℃で４時間行った。次いで膜を２ＸのSSC，0.1％Ｖ／ＶのSDS で１回の洗浄当り５分かけて２回洗い、次いで0.1ＸのSSC，0.1 ％Ｖ／ＶのSDS で37℃で15分づつ２回洗った。膜をバッファー１(核酸100 mM,NaCl 150 mM,pH7.5)中で数分間平衡化し、次いで１％のブロッキング試薬の中で30分インキュベーションした。次いで膜を１：5000に希釈したアルカリホスファターゼとコンジュゲーションした抗DIG 抗体(Boehringer Mannheim)と30分、室温で静かに振とうしながらインキュベーションした。膜をバッファー１で５分かけて２回洗い、次いでバッファー３(100mMのトリス−Cl,pH9.5,100mMのNaCl,50mM のMgCl₂ )にすばやく移した。膜を変色溶液（10mlのバッファー３中の45μｌのNBT,35μ ｌのＸ−ホスフェート）と16時間かけてインキュベーションし、そして反応をバッファー１の中での洗浄によりブロッキングした。ポジティブコントロール及びサンプルの双方中の適正なサイズのバンドの識別化は増幅cDNAの特異性を表示した。結果：臨床研究におけるRT−PCR 分析の結果を添付表ａ〜ｅに示す。異なる表への分割は退行性又は非退行性いぼにおけるサイトカイン発現のパターンにおける類似性に基づく。表はIL−２ｐ40又は IFN−ガンマー転写の徴候のない非退行性いぼのケースに関する。表ｂは IL−12p 40転写の徴候がないが、IFN−ガンマー転写の徴候のある非退行性いぼのケースに関する。表ｃはIL−12p40転写の徴候のある非退行性いぼのケースに関する。表ｄは退行性いぼのケースに関する。シグナルの強度は、同一の反応において増幅させ、次いでアクチンバンドの強度との対比により標準化したサンプル間での対比により決定した。この研究において、本発明者は正常組織における遺伝子発現に基づいたデータを得るため、正常頸部組織も分析した。これらのサンプルはHPV 感染症に関連しないとの理由のために取り出した子宮に由来し、そしてその他のサンプルと同様に瞬間凍結した。損傷は全て、異なるレベルではあるにせよ、IL−１ベーター、IL−８，IL−12 p 35及び TGF−ベーター１についての転写物を示した。IL− 3，IL− 4又はIL− 10についてはどのいぼサンプルもポジティブでなかった。IL− 4は正常な頸部組織においてのみ認められた（NC×２）。これらの２つのサンプルはIL− 6についてはポジティブであり、一方IL− 5についての転写物は５種類のサンプルにおいて認められた。非退行性損傷を表ａにおいてグループ分けし、そしてIL− 2，IL−12p 40又は IFN−ガンマーについての転写物を示さなかった。３種類のサンプルのみが TNF −ガンマー及びベーターの双方についての転写物を示し、そして残りの４種は示さなかった。ほとんどのサンプルがＴ−細胞の存在を示す転写物CD４及びCD８の両方を有していた。３種類のサンプルはＴ細胞についても、その他の免疫系細胞についてもの転写物を示さなかった。表１ｂにおける一部の損傷は同一のパターンを示した。これらの損傷はアクチンについての低い強度のバンドを有することに注目すべきであり、従ってＴ細胞についてのシグナルは感度の限界値よりも低いかもしれない。表ｂにおいてグループ分けした非退行性いぼは IFN−ガンマーについての転写物は示したが、IL− 2についての２種類の転写物のみを有していた。TNF についての転写物はほとんどの損傷に関して低く、しかしながら２種類のサンプルは双方とも高いレベルを有した。一般にこれらの損傷は高度のサイトカイン転写率を示し、それ故表ａにおいてグループ分けした損傷と比べて強い免疫系の活性化を示した。表ｃにおいてグループ分けした非退行性いぼは、先のグループのいづれにも存在しないIL−12p 40についての転写物を示した。３つの損傷はIL- 2についてネガティブであり、そして最初の２つはIL− 2についてもネガティブであり、そして最初の２つは IFN−ガンマー転写物についてもネガティブであり、一方残りの損傷はこれらのサイトカインの双方についての転写物を有していた。更に、TNF −アルファーが全ての損傷において存在し、そしてやや高めのレベルで転写された。表ｄにおいてグループ分けした退行性いぼは表Ｃにおける損傷で認められるものと非常に似たサイトカインプロフィールを示した。IL−12p 40、IFN−ベーター及び IFN−ガンマーについての転写物が全ての損傷において存在し、そしてIL − 2転写物が５種類の損傷のうちの４種に存在していた。正常な頸部はIL− 2， TNF についての転写物を示し、そしてーのケースにおいては IFN−ガンマーについての転写物を示したが、IL−12 40については示さなかった（表ｅ参照）。従って、正常頸部組織の検査はIL− 1ベーター，IL− 2，IL− 4，IL− 8，IL −12p 35，TNF−ベーター，INF−ガンマー及びTGF−ベーターについての転写物を示した。IL− 2はおそらくは正常上皮細胞において存在することが示されている常在性Ｔ細胞集団の中に存在する。このリンパ球集団の存在は細胞性マーカーCD３，CD４及びCD８についての転写物により確認された。IL− 1ベーター、IL− 4，IL− 8，IL−12p 35，TNF−ベーター、IFN−ガンマー及びTGF−ベーターはワクチン細胞もしくはランゲルハンス島又はその両者により生成されうる。サンプルの第一グループにおいて、IL− 1ベーター、IL− 8，IL−12p 35，TN F 及びTGF−ベーターについての転写物が存在していた。CD３，CD４及びCD８転写物により示されるように一部のサンプル中にＴ細胞が存在していたが、IL− 2 又はIFN−ガンマーについての転写物は検出されなかった。サンプルの第二グループにおいて、サイトカインのパターンはIL− 1ベーター、IL− 8，IL−12p 35，TNF，IFN−ガンマー及びTGF−ベーターについての転写物を有する正常頸部組織の中において見い出せるものと似ていた。いくつかのケースにおいて、IL− 2についての転写物もあった。このパターンはより正常な状況を示唆するものと考えられる。第三及び第四グループにおけるサンプルは非常に類似のサイトカイン発現のパターンを有した。これらの損傷において、IL− 1アルファー、IL−ベーター、IL − 2，IL− 5，IL− 8，IL−12p35，IL−12p 40，TNF−アルファー、TNF−ベーター、IFN−ガンマー及びTCF−ベーターについての転写物があった。IL− 1アルファー及びTNF は前炎症反応、それ故免疫反応を示した。これらの損傷と先のグループにおけるものとの最もめざましい違いは、正常頸部組織においては検出されないIL−12p 4Oについての転写物の存在にあると考えられる。IL−12はTh１リンパ球の活性化にとって必須であると信じられ、そしてその存在はこのような損傷の中でCD４＋Ｔ細胞の集団はDTH 型の反応を誘導する過程にあることを示唆する（既にウィルスの浄化との関連で報告：S Aibaら、1986,Cancer 58:1246-1251）。少数の非退行性損傷におけるIL−12p 40転写物の出現は、これらのサンプルを採取した被検体が非常に早期の退行段階にあるが、臨床的向上がいまだ測定できない時期にある可能性を示唆するものと信じられる。これらの結果はHPV 感染症に対応する局所免疫反応におけるIL−12の中心的な役割を示唆し、そしてIL−12がいぼ退行の主因又は補助因子であることの期待を高める。 IL−12タンパク質分析：退行性及び非退行性性器いぼの生検をIL−12の発現について分析でき、そして結果を比較した。p35，p40及びヘテロダイマーの存在は容易に応用できる免疫化学技術を利用して調べられうる。IL−12を認識する抗体は市販されている。 IL−12タンパク質は、ワクチン細胞及び白血球の双方において、退行性いぼから採取した材料の中で検出されうる。発現のレベルは、ワクチン細胞よりも白血球、特に樹状突起細胞において高い。本明細書に記載の研究は、いぼ退行におけるIL−12についての役割並びにIL− 12及びいぼ退行の樹状細胞発現間での連結を示唆する。 in-vivo モデルにおけるIL−12投与の効果 HPV 16Ｅ６もしくはＥ７又は双方を発現するマウスワクチン細胞は分化した上皮細胞の再生を可能にする移植技術を利用して、同系マウスの側腹部上に移植できうる。これらの動物の耳におけるＥ７又はＥ６の皮内負荷は遅延型の過敏(DT H)反応をもたらす、DTH の誘導と、第一グラフトを形成するために用いるＥ７発現細胞の数との間に関係がある。限界播種量であってそれを下回ると、上皮細胞は形成されるが、DTH が誘引されない量がある。このような条件下での免疫的非反応性はその後の負荷に基づいて維持され、そしてグラフトされた細胞は拒絶されない。細胞は誘導型の非反応性の欠如（これはHPV 感染のモデルとなる）及びかかる感染に原因する腫瘍に対した備った免疫反応において拒絶される。C McLeanら(1993)JG en Virol 74:239-245;MA Chambersら(1994)Eur J Immunol 24:748-45;MA Chambe rs ら(1994)J Gen Virol 75:165-169；及びMA Chambers らProceedings of the 2nd International Workshop on HPV Immunology,Cambridge UK'(1993年６月)ed .MA Stanley(Plenum Press London 1994)pp267-274)を参照のこと。マウスはワクチン細胞グラフティングにより、例えば10⁴〜５×10⁵個のワクチン細胞という低レベルの抗原、次いで高い播種量、例えば10⁷個のワクチン細胞による第二グラフトにより感作できる。グラフトは拒絶されない。動物にＥ７を、タンパク質又は組換ワクシニアウィルスによりコードされ且つ発現されるものとして、負荷する。 IL−12をかかる抗原負荷されたかかる動物に供することができる。IL−12供給の様々なルート、例えばそれをコードする裸核酸の注射及び組換ワクシニアウィルスゲノムにおいて担持された対応の核酸よりそれを発現できるワクシニアウィルスによる感染は容易に試験できる。DTH の誘導及びグラフトの拒絶はプロトコールの効率の尺度として利用できうる。IL−12の供与は、DTH 反応により明示される、ワクチン細胞グラフトに対して備った免疫反応を高める。IL−12供与の様々なルートの効果はそれ故容易に試験できる。本発明は本発明の範囲を逸脱することなく様々な改良及び変更がなされうることが当業者に明らかである。本開示内容は本明細書記載の特徴の組合せに及ぶ。本明細書において引用する文献はその内容全体を本明細書に組入れている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:92）

Claims

【特許請求の範囲】１．パピロマウィルス関連損傷の処置における治療剤もしくはアジュバントとしてのインターロイキン−12（IL−12）もしくはその機能性類似体、又はIL−12 をコードするもしくはその機能性類似体をコードするポリヌクレオチドの利用。２．６型及び／又は11型HPV により生じたいぼ、例えば尖圭コンジロームの処置のための請求項１記載の利用。３．パピロマウィルス関連損傷の処置における免疫治療剤又はワクチンアジュバントとして利用するための、IL−12又はその機能性類似体を含んで成る薬理治療剤。４．（ｉ）ワクチンアジュバントとして利用するためのIL−12又はその機能性類似体と、（ii）ワクチンとして利用するためのパピロマウィルス抗原、又はパピロマウィルス抗原をコードし、且つ発現を及ぼすことのできるベクターとの組合せを含んで成る薬理治療剤。５．成分（ii）が少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質もしくは抗原性フラグメント又はその対応の融合タンパク質を含んで成る、請求項４記載の薬理治療剤。６．成分（ii）が６，11，16及び／又は18型のHPV のタンパク質Ｅ６，Ｅ７，Ｌ１及び／又はＬ２のうちの少なくとも一種のタンパク質の配列の少なくとも実体的な部分を有するポリペプチドを含んで成る、請求項４記載の薬理治療剤。７．成分（ii）が少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質もしくは抗原性フラグメント又はその対応の融合タンパク質をコードし、且つその発現を及ぼすことのできる組換ウィルスベクターを含んで成る、請求項４記載の薬理治療剤。８．前記組換ウィルスが６，11，16及び／又は18型のHPV のＥ６，Ｅ７，Ｌ１及び／又はＬ２から選ばれる少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質の配列の少なくとも実体的な部分を有するポリペプチドをコードする少なくとも一種の組換ワクシニアウィルスを含んで成る、請求項７記載の薬理治療剤。９．免疫治療剤又はワクチンアジュバントとして利用するための、IL−12又はその機能性類似体をコードし、且つその発現を及ぼすことのできるポリヌクレオチドを含んで成る薬理治療剤。 10．前記ポリヌクレオチドが組換ウィルスベクターの一部を成している、請求項９記載の薬理治療剤。 11．前記ウィルスベクターが遺伝子障害ヘルペスウィルスベクターを含んで成る、請求項10記載の薬理治療剤。 12．前記ウィルスベクターが、gH遺伝子において欠失を有し、且つIL−２又はその機能性類似体をコードする１又は複数の挿入外来遺伝子を（gH欠失の遺伝子座において）担持している突然変異HSV１又は HSV２を含んで成る、請求項11記載の薬理治療剤。 13．（ｉ）ワクチンアジュバントとして利用するためのIL−12又はその機能性類似体をコードし、且つその発現を及ぼすことのできるポリヌクレオチドと、（ ii）ワクチンとして利用するためのパピロマウィルス抗原又はパピロマウィルス抗原をコードし、且つその発現を及ぼすことのできるベクターとの組合せを含んで成る、薬理治療剤。 14．成分（ii）が少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質もしくは抗原性フラグメント又はその対応の融合タンパク質を含んで成る、請求項13記載の薬理治療剤。 15．成分（ii）が６，11，16及び／又は18型のHPV のタンパク質Ｅ６，Ｅ７，Ｌ１及び／又はＬ２のうちの少なくとも一種のタンパク質の配列の少なくとも実体的な部分を有するポリペプチドを含んで成る、請求項13記載の薬理治療剤。 16．成分（ii）が少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質もしくは抗原性フラグメント又はその対応の融合タンパク質をコードし、且つその発現を及ぼすことのできる組換ウィルスベクターを含んで成る、請求項13記載の薬理治療剤。 17．前記組換ウィルスベクターが６，11，16及び／又は18型のHPV のＥ６，Ｅ７，Ｌ１及び／又はＬ２から選ばれる少なくとも一種のパピロマウィルスタンパク質の配列の少なくとも実体的な部分を有するポリペプチドをコードする少なくとも一種の組換ワクシニアウィルスを含んで成る、請求項16記載の薬理治療剤。