JPH11500409A - ワクチン組成物用アジュバント - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ワクチン組成物投与用のアジュバントとして使用される、カチオン性基に結合したステロール由来の親油性基を含む両親媒性化合物。１つの実施例では親油性基はコレステロール誘導体であり、カチオン性基は第４級アンモニウムまたはプロトン化可能なアミンである。カチオン性基に結合したステロール由来の親油性基を有する少なくとも一種の両親媒性化合物と一種以上の抗原を含有するワクチン組成物にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】 ワクチン組成物用アジュバント 本発明はワクチン組成物に関するものであり、特にワクチン組成物の免疫原性 を高めるアジュバントに関するものである。 動物に注射された時に特異的な抗体を生成する抗原は多数存在する。ワクチン 投与の原理はヒトや動物に所定の抗原を投与して体内での抗体の生成を刺激する ことにある。こうして生成された抗体を用いて生物組織はその後の感染に対して 自己防御することが可能になる。しかし、いくつかの抗原はそれを単独で投与し ても免疫系を十分に刺激することができない。そのため、アジュバントを添加し て生物組織の免疫応答性を高め、それによって十分な量の抗体を生成させる必要 がある。 公知アジュバントの中でヒト用ワクチンに一般的に用いられるものは水酸化ア ルミニウムとリン酸アルミニウムである。しかしこれらの化合物は全ての抗原に 対してアジュバント特性を有するものではなく、特にインフルエンザワクチンの 免疫原性を高めることができない。 従って、ワクチン組成物において、投与した抗原の免疫原性を高める、毒性の ないアジュバントが要求されている。 また、IgA のように分泌性抗体を生成する免疫応答を誘導するアジュバントも 重要である。 この目的のために、本発明はワクチン組成物の製造においてカチオン性基に結 合したステロール(sterol)に由来する親油性(lipophile)基を有する両親媒性(am phipathique)化合物を用いることを提案する。 本発明の対象は上記両親媒性化合物のワクチン投与でのアジュバントとしての 使用にある。 本発明の他の対象は、少なくとも一種の抗原を含むワクチン組成物であって、 さらに、カチオン性基に結合したステロール由来の親油性基を有する少なくとも 一種類の両親媒性化合物を含むことを特徴とするワクチン組成物を対象とする。 本発明のさらに他の対象はワクチン投与と同時、別々または時間をあけて使用 される製品としての、少なくとも一種の抗原と、カチオン性基に結合したステロ ールに由来する親油性基を含む少なくとも一種の両親媒性化合物とを含む製品に ある。 本発明のさらに他の対象は、哺乳動物に少なくとも一種の抗原を投与する哺乳 動物の免疫応答の誘導方法において、抗原の他にカチオン性基に結合したステロ ール由来の親油性基を含む少なくとも一種の両親媒性化合物を投与することを特 徴とする方法にある。 両親媒性(amphipathique)という用語は疎水性部と親水性部との両方を有する 化合物を意味する。 本発明化合物を生成可能なステロール誘導体としてはコレステロール、フィト ステロールおよびエルゴステロールを挙げることができ、コレステロール誘導体 が特に好ましい。 本発明の両親媒性化合物のカチオン性基は第４級アンモニウムまたはプロトン 化可能なアミンで構成することができる。 親油性基は細胞中で加水分解可能なエステル、エーテル、アミドまたはカルバ モイル結合によってカチオン性基に結合されている。 ２つの官能基間は１〜20個の炭素原子を含む分岐鎖を有するまたは有しないア ルキル鎖から成るスペーサーアームを会して 結合されているのが好ましい。 本発明の目的に適した化合物としては米国特許第5,283,185 号に記載の特に下 記(a)〜(e)を挙げることができる： (a) コレステリル-3β- カルボキサミドエチレントリメチルアンモニウムアイオ ダイド (b) コレステリル-3β- カルボキサミドエチレンアミン (c) コレステリル-3β- オキシスクシナミドエチレントリメチルアンモニウムア イオダイド (d) ３β-[N-(N',N'- ジメチルアミノエタン)カルバモイル]-コレステロール、 (e) ３β-[N-（ポリエチレナミン）カルバモイル]コレステロール これらの中でも3 β-[N-(N',N'- ジメチルアミノエタン)カルバモイル]-コレ ステロールが特に有利である。 本発明の両親媒性化合物は“Advanced Organic Chemistry”Part B: Reactio ns and Synthesis（F．A．Carey and R．J．Sundberg-Plenum Publishing Corp. ）に記載の方法で、カチオン性基を有する化合物とステロール誘導体との縮合に よって得られる。本発明の化合物のいくつかは米国特許第5,283,185 号に記載の 方法で調製することができる。 アルコール性溶液中で得られた両親媒性化合物を水または水性緩衝液に懸濁し てミセルまたはリポソームの懸濁液にする。本発明の両親媒性化合物はリン脂質 等の中性脂質、例えばジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE)また はジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)と組み合わせるのが有利である。こ の組み合わせにすることによって本発明の両親媒性化合物は水性環境中に懸濁し た時にミセルよりもむしろリポソー ムを構成する。両親媒性化合物と組み合わせる中性脂質のモル比は20％以上にす るのが好ましい。 本発明で得られる生成物はネズミに接種した場合に全く急性毒性反応を起こさ なかった。 防御的免疫応答を誘導するために用いられる抗原は、ワクチン組成物で通常用 いられている任意の抗原単独か、それに他の抗原を組み合わせたもので構成する ことができる。 本発明の両親媒性化合物は、インフルエンザウィルスのエンベロープ表面にあ るヘマグルチニンであるHA蛋白質、ウィルスＲＮＡに結合したキャプシド核蛋白 質であるNP蛋白質およびエンベロープのＭ蛋白質または『マトリクス』蛋白質を 含むインフルエンザウィルスワクチンと組み合わせた時に優れた免疫アジュバン トになることが分かっている。 免疫原性を増加させようとする抗原と両親媒性化合物のミセルまたはリポソー ム懸濁液とは各成分を混合した時の疎水性相互作用および静電相互作用によって 自発的に結合する。 本発明で得られたワクチン組成物は優れた安定性を有する。ミセル懸濁液より もリポソーム懸濁液の方がより好ましいと思われる。リポソーム懸濁液は濾過お よび凍結乾燥によって安定化することができる。 本発明で得られたワクチン組成物に、従来ワクチンに用いられている成分、例 えば水、生理食塩水または緩衝液を添加することができることは明らかである。 本発明で得られるワクチン組成物はワクチン投与で通常用いられる任意の経路 で投与でき、特に皮下または鼻腔経路で投与することができる。一次免疫とブー スター免疫とを別々の経路で行うことも可能である。 抗原を含む組成物と本発明の両親媒性化合物を含む組成物とを別々に投与する こともできるが、本発明の両親媒性化合物を抗原とリポソーム組成物とを組み合 わせて投与することによって体液性(humorale)免疫応答を増加させることができ るだけでなく、特異的な細胞障害Ｔリンパ球を誘導することもできる。 以下、図面を参照して本発明の実施例を説明するが、本発明が下記実施例に限 定されるものではない。 図１はDC chol を合成するための反応スキーム。 図２〜６は実施例８に記載の各マウス群について行った細胞障害Ｔリンパ球誘 導試験の結果を示す図。 図７は実施例11に記載の結果を示す図。 図８、９は実施例12に記載の結果を示す図。 図10、11は実施例13に記載の結果を示す図。 図12、13は実施例14に記載の結果を示す図。 図14、15は実施例15に記載の結果を示す図。 図16は実施例16に記載の結果を示す図。実施例１ 3 β-[N-(N',N'- ジメチルアミノエタン)-カルバモイル] コレステロール(DC chol)の合成 DC chol は、X．Gaoと L．Huang の文献(BBRC 179(1):280-285)に報告の方法 で合成される。図１はコレステリルクロロホルメートとN,N-ジメチルエチレンジ アミンとの反応スキームである。 過剰量の N,N- ジメチルエチレンジアミン溶液（２ml、18.2mmolを３mlの乾燥 クロロホルムに添加したもの）に、温度０℃でコレステリルクロロホルメート溶 液（2.25ｇ、５mmolを５ml の乾燥クロロホルムに添加したもの）を一滴ずつ添加する。蒸発によって溶媒を 除去した後、残留物を４℃の無水エタノール中で２回再結晶化して精製し、減圧 乾燥すると、白色粉末状のDC chol 、0.545 ｇが得られる。ＮＭＲと質量分析に よって化合物の構造を確認した。得られた結果は上記文献に記載のデータと一致 した。実施例２ DC chol 2.3 mg のミセル懸濁液を用いた インフルエンザウィルスに対するワクチン組成物の調製 実施例１で得られたDC chol の30mgを 100μｌのエタノールに溶解して得られ る溶液75μｌをハミルトンシリンジを用いて45℃の水３mlに攪拌しながら添加す る。温度45℃でさらに５分間攪拌した後、得られたミセル懸濁液を抗原としてヘ マグルチニンHA、核蛋白質NPおよびM 蛋白質を含むインフルエンザウィルス（Ａ ／シンガポール株）に対する一価のワクチン200 μｌと混合する。 得られた混合物を１回分の投与量である0.3 mlに分ける。１回分の投与量には ５μｇのHAと、2.3 mgのDC chol を含む。実施例３ DC cho10.45 mg のミセル懸濁液を用いた インフルエンザウィルスに対するワクチン組成物の調製 実施例１で得られたDC chol ６mgを用いて実施例２と同様にした。実施例４ DC chol とジオレオイルホスファチジルエタノール アミン(DOPE)とを組み合わせたリポソーム懸濁液の調製 実施例１で得られたDC chol 4.5 mgを３mlのクロロホルムに溶解したものと、 18mgのジオレオイルホスパチジルエタノールアミン(DOPE)とを混合する。 減圧下にクロホルムを留去して脂質膜を形成し、デシケータを用いて減圧乾燥 してから３mlの水に再度懸濁する。 ４℃で24時間水和化した後、分散物を超音波槽(laboratory Supplies-Hicksvi lle-N.Y.）を用いて５〜10分間超音波処理してリポソームを形成する。 懸濁液は４℃で少なくとも６ヶ月間安定であった。実施例５ DC chol とジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)と を組み合わせたリポソーム懸濁液の調製 18mgのDOPEの代わりに18mgのジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)を用い て、実施例４と同様な操作を行った。 ４℃で少なくとも６ヶ月間安定なリポソーム懸濁液が得られた。実施例６ DC chol ／DOPEリポソーム懸濁液を用いたインフルエンザ ウィルスに対するワクチン組成物の調製 実施例４で得られたリポソーム懸濁液３mlを、Ａ／シンガポール株に対する一 価のインフルエンザワクチン0.2 mlと混合する。このワクチンはヘマグルチニン HAより成る抗原を50μｇ当 量含有している。 得られた混合物を１回分の投与量を0.3 ml（５μｇのHAと、0.45mlのDC chol とを含む）として10回分に分けた。実施例７ DC chol ／DOPCリポソーム懸濁液を用いたインフルエンザ ウィルスに対するワクチン組成物の調製 実施例５で得られたリポソーム懸濁液３mlを、0.2 mlのＡ／シンガポール株に 対する一価のインフルエンザワクチンに混合する。 得られた混合物を１回分の投与量を0.3 ml（５μｇのHAと、0.45mlのDC chol とを含む）として10回分に分けた。実施例８ 免疫処置 ４匹のBalb/cマウスで構成される５つのグループに対して異なる日：Ｄ０、Ｄ 21およびＤ36に下記ワクチン組成物を皮下注射して免疫処置した： Ａ群：Ａ／シンガポール株に対する希釈された一価のインフ ルエンザワクチン0.3 ml（0.3 mlのPBS 中に５μｇの HAを含む） Ｂ群：実施例２で得られたワクチン組成物0.3 ml Ｃ群：実施例３で得られたワクチン組成物0.3 ml Ｄ群：実施例６で得られたワクチン組成物0.3 ml Ｅ群：実施例７で得られたワクチン組成物0.3 ml 実施例９ 抗HA抗体の投与 中和抗体を定量するために異なる日：Ｄ21、Ｄ36およびＤ51にマウスの血清を 採取し、インフルエンザウィルスによって誘導された赤血球凝集阻害法を用いて 抗HA抗体を滴定した。 下記表１は１回注射後に各マウス群について得られる結果を示し、表２は２回 注射後の結果を示す。 マウス血清中の中和抗体の力価は赤血球凝集阻害を誘導した最大希釈度のlog2 で表される。 以上の結果はDC chol の果たすアジュバントとしての役割を明確に示している 。すなわち、抗HA抗体のレベルはアジュバント無しのワクチンを接種したマウス （Ａ群）よりもDC chol を接種したマウスで顕著に高くなる。 Ｂ群、Ｃ群、Ｄ群およびＥ群の中和抗体レベルは各ワクチン組成物を１回注射 した場合でもＡ群の中和抗体レベルよりも高いことは重要である。各力価は２回 目の注射後にわずかに上昇して安定化する。３回目の注射後に得られる結果（図 示せず）は２回目の注射について得られる結果とほぼ同じである。 Ａ／テキサス株、Ｂ／パナマ株およびＡ／ペキン株を含む３価のインフルエン ザワクチンを用いて試験を行った場合も、DC cholのアジュバントとしての効果 を示した。実施例10 細胞障害Ｔ細胞の誘導 実施例８に記載の各群のマウスからＤ51に脾臓細胞を取り出す。これらのエフ ェクター細胞を、被験ワクチンに対応するＡ／シンガポール株ウィルスに感染し た同系刺激細胞用いてインビトロで再度刺激する。刺激された細胞が特異的細胞 障害機能を示すことは、赤血球凝集素のＣＴＬエピトープであるペプチド（HAに 対する特異的応答）またはウィルスの核蛋白質のＣＴＬエピトープであるペプチ ド（NPに対する特異的応答）と一緒に培養することによって感作されたＰ815 肥 満細胞系を標的細胞として使用することによって示される。非特異的溶解（バッ クグラウンド）は感作されていないＰ815 細胞か、HIV ウィル ス(V3MN)のＣＴＬエピトープであるペプチドを用いた感作されたＰ815 細胞で測 定した。 標的細胞の溶解は、標的細胞にCr-15 を導入して細胞溶解時にこの放射性元素 が放出されることを利用した放射化法で測定した。 図２〜図６に示した結果は、試験した各マウス群についてエフェクター細胞と 標的細胞との比（Ｅ／Ｔ比）について見た細胞障害％を具体的に示すものであり 、DC chol を中性脂質と組み合わせたリポソーム組成物を使用することが特に有 利であることを示している。これは、この組成物によってDC chol のアジュバン ト作用の結果として得られる体液性免疫応答の他に特異的細胞障害Ｔリンパ球の 誘導が可能になるためである。実施例11 DC chol の使用量を変えた時の免疫応答に関する研究 それぞれＡ／シンガポール株に対する一価のインフルエンザワクチンと15μｇ または５μｇのHAとを含み、これに各種濃度のDC chol ／DOPCリポソームを組み 合わせた300 μｌのワクチン組成物を調製した。リポソーム懸濁液の調製は実施 例４と同様な方法で行うが、18mgのジオレオイルホスファチジルエタノールアミ ン(DOPE)の代わりに13.5ｇのジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)を用い、 所望のDC chol 濃度に応じて量を変えた水に脂質膜を懸濁させた。 得られたワクチン組成物を８〜10週齢のメスのBalb/cマウス５匹で構成される 群にＤ０およびＤ28に注射した。Ｄ42に血清を採取して凝集阻害(HAI)法によっ て抗HA抗体を定量した。 この方法で下記組成物を試験した： 15μｇHA＋０μｇDC chol 15μｇHA＋400 μｇDC chol ５μｇHA＋０μｇDC chol ５μｇHA＋25μｇDC chol ５μｇHA＋50μｇDC chol ５μｇHA＋100 μｇDC chol ５μｇHA＋200 μｇDC chol ５μｇHA＋300 μｇDC chol ５μｇHA＋400 μｇDC chol 赤血球凝集阻害を誘導した最大希釈度の対数(log 2)で表される結果を図７に 示す。この結果は１回分の投与量あたり100 μｇ以上のDC chol を使用した場合 にのみDC chol のアジュバント効果を最大限利用できるということを示している 。実施例12 各種抗体アイソタイプの誘導に関する実験 ８〜10週齢の成長したメスのBALB/cマウス５匹で構成される３つの群にＤ０と Ｄ28に２回下記組成物を皮下注射して、誘導される抗体について比較試験を行っ た。 第１群：0.3 mlの希釈されたＡ／シンガポール株に対する一価 のインフルエンザワクチン（0.3 mlのPBS 中に５μｇ のHAを含む） 第２群：0.3 mlの希釈されたＡ／シンガポール株に対する一価 のインフルエンザワクチン（アジュバントとしての水 酸化アルミニウム0.1 mgと５μｇのHAを含む） 第３群：実施例11で得られたワクチン組成物 0.3 ml（DOPCと 組み合わせて５μｇのHAと 400μｇのDC chol とを含 む） Ｄ28とＤ42にマウス血清を採取し、生成したIgG1およびIgG2をELISA 法で定量 した。 一次応答で得られた結果を図８に示し、二次応答で得られた結果を図９に示す 。 これらの結果は従来のアジュバントである水酸化アンモニムに比較して、一次 応答および二次応答のいずれでもDC chol のアジュバント効果を具体的に示して いる。また、生成IgG2a は大幅に増加し、DC chol がTH1 型リンパ球の発達を促 進する作用を有することを示している。実施例13 老齢のマウスにおけるDC chol の作用 実施例12と同様な実験を行うが、この場合は刺激がより困難な20〜22週齢のマ ウスを試験した。 一次応答で見られた結果を図10に、二次応答の結果を図11に示す。 この場合も、DC chol は一次応答および二次応答の両方において、特にIgG2a 抗体の誘導に関してアジュバント効果を有する。実施例14 成長マウスと老齢マウスにおけるHAI レベル 実施例12、13で行った試験で免疫処置したマウスを用いて赤血球凝集阻害(HAI )試験で中和抗体を測定した。 一次応答で得られた結果を図12に示し、二次応答の結果を図13に示す。得られ た力価は赤血球凝集を阻害する最大希釈度の 対数（log 2 HAI 力価）の形で表す。明らかに、成長マウスと老齢マウスの両方 におけるDC chol/DOPCリポソームのアジュバント効果を示している。実施例15 鼻腔経路による免疫処置 実施例11と同じ方法で、５μｇのHA（Ａ／シンガポール株に対する一価インフ ルエンザウィルスの状態で）をDC chol/DOPC（質量比１：４）の状態で存在する 200 μｇのDC chol と組み合わせて含有するワクチン組成物を調製した。 ４匹のBALB/cマウスより成る２つの群に４週間の間隔を開けて２回、鼻腔投与 で免疫処置した。 第１群のマウス(G₁)には200 μｇのDC chol を含むワクチン組成物50μｌを投 与し、第２群のマウス(G₂)にはアジュバントを含まない同じ一価のインフルエン ザウィルスを50μｌ投与した。ブースタ免疫の３週間後に採取した血清について ELISA 試験を行い、各群の免疫応答を分析した。 ELISA 力価の底10に対する対数(log base 10)で表した結果を、血清IgG につ いては図14に、血清IgA については図15に示す。 従って、厳密な粘膜投与プロトコルでは、DC chol/DOPCリポソームによって局 所的または全体的免疫応答が少なくともファクター２の分だけ増加することがわ かる。 ELISA 法でIgG およびIgA の力価を測定する代わりにHAI によって抗HA抗体の 力価を測定した場合も、全体的な免疫応答におけるDC chol/DOPCが果たすアジュ バントの投割が示される。局所免疫応答の増加は免疫処置したマウスの肺のIgA を分泌す る細胞の数とIgG を分泌する細胞の数とをELISPOT によってカウントすることに よっても示され、さらに、免疫処置したマウスの鼻咽頭洗浄液を用いてELISA 法 によって測定された全IgG レベル（またはIgA レベル）に対する特異的IgG レベ ル（またはIgA レベル）の比を決定することによっても示される。実施例16 皮下投与と鼻腔投与の組み合わせによる免疫処置 各４匹のBALB/cマウスより成る２つの群に対し、４週間の間隔を開けて２回ず つ下記組成物を用いて免疫処置した： 第３群(G₃)： (1)４μｇのHA（Ａ／シンガポール株の一価インフルエンザワクチンの状態で ）を６μｇのDC chol（DC chol/DOPCリポソームの状態で）と組み合わせて含有 するワクチン組成物300 μｌを皮下注射で投与し、 (2)0.25μｇのHA（Ａ／シンガポール株の一価インフルエンザワクチンの状態 で）を６μｇのDC chol（DC chol/DOPCリポソームの状態で）と組み合わせて含 有するワクチン組成物50μｌを鼻腔投与で投与した。 第４群(G₄)： (1)４μｇのHAを200 μｇのDC chol と組み合わせて含有するワクチン組成物3 00 μｌを皮下注射によって投与し、 (2)0.25 μｇのHAを200 μｇのDC chol と組み合わせて含有するワクチン組成 物50μｌを鼻腔投与した。 ブースター投与の３週間後に免疫処置したマウスの血清を採取し、中和抗体レ ベルをHAI 赤血球凝集阻害法で測定した。 得られた結果を、力価の底２に対する対数(log base 2)で表 したものを図16に示す。この結果は皮下経路と鼻腔経路とを組み合わせた混合投 与のプロトコルではDC chol がアジュバント効果を有することが示され、DC cho l の投与量を６から200 μｇに増加することによって免疫応答が増加することを 示している。 HAI法によって抗HA抗体レベルを測定する代わりにELISA 法によって血清IgG を測定した場合、免疫処置したマウスの肺についてIgA を分泌する細胞の数とIg G を分泌する細胞の数とを測定した場合（ELISPOT 法により）または免疫処置し たマウスの鼻咽頭洗浄液について全IgG レベル（またはIgA レベル）に対する特 異的IgG レベル（またはIgA レベル）の比を決定した場合も、投与量に関して同 じ効果が見られた。 DOPCをDOPEで置き換えた場合やDC chol と組み合わせる中性脂質のモル比を20 ％以上に保った状態でDC chol/中性脂質の比を変化させた場合も実施例11〜16と 類似の結果が得られた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｃ Ａ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ロンコ，ジョルジュ フランス国 69005 リヨン リュ ジェ. マルタン ウィトコウスキ 30

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．カチオン性基に結合したステロール由来の親油基を含む両親媒性化合物のワ クチン組成物製造における利用。 ２．親油性基がコレステロール誘導体である請求項１に記載の利用。 ３．カチオン性基が第４級アンモニウムまたはプロトン化可能なアミンである請 求項１または２に記載の利用。 ４．親油性基がエステル、エーテル、アミドまたはカルバモイル結合によってカ チオン性基に結合されている請求項１〜３のいずれか一項に記載の利用。 ５．親油性基とカチオン性基との間が１〜20個の炭素原子を含む分岐鎖を有する か有しないアルキル鎖で隔てられている請求項１〜４のいずれか一項に記載の利 用。 ６．両親媒性化合物が下記(a)〜(e)から選択される請求項１〜５のいずれか一項 に記載の利用： (a) コレステリル-3β- カルボキサミドエチレントリメチルアンモニウムアイオ ダイド (b) コレステリル-3β- カルボキサミドエチレナミン (c) コレステリル-3β- オキシスクシナミドエチレントリメチルアンモニウムア イオダイド (d) ３β-[N-(N',N'- ジメチルアミノエタン)カルバモイル]- コレステロール、 (e) ３β-[N-( ポリエチレナミン)カルバモイル]コレステロール。 ７．３β-[N-(N',N'- ジメチルアミノエタン)カルバモイル]-コレステロールの ワクチン組成物製造における利用。 ８．両親媒性化合物を中性脂質と組み合わせる請求項１〜７のいずれか一項に記 載の利用。 ９．組み合わせる中性脂質の割合を少なくとも20％にする請求項８に記載の利用 。 10．中性脂質がジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE)またはジオ レオイルホスファチジルコリン(DOPC)である請求項８または９に記載の利用。 11．両親媒性化合物をリポソーム形で水性環境中に懸濁させる請求項１〜10のい ずれか一項に記載の利用。 12．カチオン性基に結合したステロール由来の親油性基を含む両親媒性化合物の ワクチン投与用アジュバントとしての利用。 13．両親媒性化合物が 3β-[N-(N'，N'-ジメチルアミノエタン)カルバモイル]- コレステロールである請求項12に記載の利用。 14．両親媒性化合物を中性脂質と組み合わせる請求項12または 13に記載の利用。 15．少なくとも一種の抗原を含むワクチン組成物において、カチオン性基に結合 したステロール由来の親油性基を有する少なくとも一種の両親媒性化合物をさら に含むことを特徴とするワクチン組成物。 16．親油性基がコレステロール誘導体である請求項15に記載のワクチン組成物。 17．両親媒性化合物が 3β-[N-(N'，N'-ジメチルアミノエタン)カルバモイル]- コレステロールである請求項15または16に記載のワクチン組成物。 18．両親媒性化合物が少なくとも一種の抗原を含むリポソームの形の請求項15〜 17のいずれか一項に記載のワクチン組成物。 19．両親媒性化合物を中性脂質と組み合わせる請求項15〜18のいずれか一項に記 載のワクチン組成物。 20．少なくとも一種のインフルエンザウィルス抗原を含む請求項15〜19のいずれ か一項に記載のワクチン組成物。 21．少なくとも一種の抗原を哺乳動物に投与して哺乳動物における免疫応答を誘 導する方法において、極性基に結合したステロール由来の親油性基を有する少な くとも一種の両親媒性化合物をさらに投与することを特徴とする方法。 22．両親媒性化合物を抗原と同時に投与する請求項21に記載の方法。 23．抗原がインフルエンザウィルスの赤血球凝集素である請求項21または22のい ずれか一項に記載の方法。 24．カチオン性基に結合したステロール由来の親油性基を有する少なくとも一種 類の両親媒性化合物と、少なくとも一種の抗原とをワクチン処置において同時、 別々または時間をあけて使用する組合せ物。