JPH11279199A - 活性化血液凝固第ｖｉｉ因子に特異的なモノクロ―ナル抗体およびその使用 - Google Patents

活性化血液凝固第ｖｉｉ因子に特異的なモノクロ―ナル抗体およびその使用

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 活性化血液凝固第VII因子に特異的に結合す
るモノクローナル抗体の開発。 【解決手段】 本発明の課題はハイブリドーマ細胞系Ｄ
ＳＭ ＡＣＣ ２３３２から単離されるモノクローナル抗
体によって達成された。本発明のモノクローナル抗体は
活性化血液凝固第VII因子に特異的に結合し、血液凝固
第VII因子またはアンチトロンビンIIIと複合体を形成し
た活性化血液凝固第VII因子には結合しない。本発明の
モノクローナル抗体は体液、血液凝固製剤またはこれら
の製剤の製造に際しての中間段階において細胞表面上ま
たは組織内の活性化血液凝固第VIIａ因子を定性的また
は定量的に検出するために、また、治療用製剤中のヒト
化モノクローナル抗体として、使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、活性化血液凝固第
VII因子（ＦVIIａ）に特異的に結合するモノクローナル
抗体およびその使用に関する。
【０００２】
【従来技術】血液凝固はタンパク質がプロテアーゼ、ア
クセラレーターおよびインヒビターの形態で関与する複
雑なシステムである。プロテアーゼは大部分が非活性化
状態で存在する。血液凝固が誘導された場合は、それら
のプロ型が活性化状態に変換され、それらの因子のカス
ケード様式での活性化を生じ、それにより反応が増幅さ
れる。いわゆる内因性および外因性血液凝固経路は根本
的に相違する。組織が傷害された場合は、外因性カスケ
ードが細胞表面上に暴露され血液凝固第VII因子（ＦVI
I）またはＦVIIａに結合するトロンボプラスチン（ＴＦ
＝組織因子）により開始される。ＦVIIは、ＴＦ上で自
己触媒的にまたはトロンビンもしくはＦＸａのようなプ
ロテアーゼのいずれかにより活性化される。ＴＦ／ＦVI
Iａ複合体はＦＸをＦＸａに活性化し、続いて順次、カ
ルシウムの存在下にリン脂質表面上でプロトロンビンの
活性化が起こる。この反応はＦＶａにより加速され、生
成したトロンビンによってフィブリンの形成、それによ
る傷口の閉鎖が誘導される。
【０００３】血液凝固阻止因子は通常、非活性化状態で
存在するが、健康な個体の血漿には少量のＦVIIａが検
出されている。この機構が多分、ＴＦが暴露された場
合、きわめて小さい組織傷害にもきわめて迅速に生理学
的に反応できるように使用されるものと考えられる。循
環ＦVIIａレベルの上昇が、病態生理学的反応にある役
割を果たし、たとえば血栓症の危険の増大を招くこれら
の反応を誘発するものと思われる。
【０００４】現在ＦVIIの定量的な測定には、痕跡のＦV
IIａの測定も考慮され、すなわちＦVIIとＦVIIａを識別
できない血液凝固試験が用いられている。ＦVIIａを測
定するためのはるかに特異的な試験システムは、いわゆ
るｒＴＦ−ＦVIIａ試験の形態で導入されている。この
システムでは他の活性化因子たとえばＦＸａまたはＦII
ａが全くまたはきわめて少量しか存在しない場合、特に
信頼できる結果が得られる。しかしながら、高濃度の活
性化因子が存在する場合には、このシステムはＦVIIａ
レベルが上昇しているという誤った結果を示すことがあ
る。
【０００５】体液中、特に血漿中における血液凝固第VI
Iａ因子の定量的測定以外に、ＦVIIおよび／またはＦII
ａ含有凝固産物の定量もきわめて興味がある。たとえ
ば、いわゆるプロトロンビン複合体濃縮物（PPSB）は相
当する血液凝固因子（ＦII／ＦVII／ＦIX／ＦＸ等）の
欠損に冒されている患者に投与される。痕跡のＦVIIａ
の存在が血栓塞栓症の併発の危険を増大させるという証
明はできていないが、非活性化ＰＰＳＢ濃縮物中のＦVI
Iａ含量をできる限り低くすることを保証する努力がな
されている。したがって、この関係での分析にはかなり
の興味がもたれる。さらに既に活性化されている複合体
濃縮物がある種の適応症に使用されることから、この場
合も同様に、活性化因子の注意深い定量が必要である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ＦVIIａの活性を測定
するｒＴＦ−ＦVIIａアッセイとは別に、ＦVIIａ抗原を
検出するシステムをもつことも望ましい。本発明はした
がって、ＦVIIａを抗原ベースで検出する方法の提供を
目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】この目的は活性化血液凝
固第VII因子に特異的に結合するモノクローナル抗体に
よって達成される。
【０００８】
【発明の実施の形態】この抗体を製造するためには、マ
ウスを組換え活性化血液凝固第VII因子で免疫処置し
た。ついで、マウス脾臓細胞をマウスミエローマ細胞系
Ｓｐ２／０−Ａｇ１４と融合させた。融合試薬としては
ポリエチレングリコール４０００を使用した。この細胞
を２４−ウエル培養プレート上に分配した。培地には１
０％ウシ胎児結成を含有するダルベッコ改良イーグル培
地を使用し、選択にはハット培地を使用した。約２週間
後、増殖した細胞系を４８−ウエルプレートのウエルに
移し、コード番号を付した。増殖した約２４００の細胞
系から培養上清を採取し、マウスＩｇＧの存在をＥＬＩ
ＳＡによって試験した。
【０００９】３９２のマウスＩｇＧ陽性細胞系につい
て、固定化血液凝固第VII因子および活性化血液凝固第V
II因子を用いて特異性を試験した（ＥＬＩＳＡ）。試験
した細胞系中、コード番号１０６９／１３７３の１つの
細胞系が活性化血液凝固第VII因子に特異的であるとし
て同定された。この細胞系は、Deutche Sammlung fuerM
ikroorganismen und Zellkulturen GmbH にＤＳＭ ＡＣ
Ｃ ２３３２号として寄託された。この細胞系によって
形成される抗体の特異性は、いわゆるBIAcoreシステム
で確認された。精製されたモノクローナル抗体のタイプ
はＩｇＧ１型である。
【００１０】この新規なモノクローナル抗体は、凝血試
験における活性化血液凝固第VII因子のその阻害能を試
験することによりさらに特徴が明らかにされた。この関
係で、活性化血液凝固第VII因子の活性はモノクローナ
ル抗体（Ｍab）１０６９／１３７３とインキュベートす
ることによって濃度依存性に阻害された。血液凝固第VI
I因子および活性化血液凝固第VII因子についてＳＤＳ−
ＰＡＧＥを実施し、ついでニトロセルロースに移し、Ｍ
ab １０６９／１３７３とインキュベートすることによ
り、結合して、ＰＯＤ−連結ヤギ抗−マウス抗体および
適当な基質を添加した場合に相当するバンドの標識化を
導くのは、活性化血液凝固第VII因子のみであり、血液
凝固第VII因子自体ではないことが確認された。
【００１１】Ｍab １０６９／１３７３の他の特性は、
認識されるのが特に遊離の活性化血液凝固第VII因子で
あること、すなわち、たとえばアンチトロンビンIII
（ＡＴIII）と複合体を形成した活性化血液凝固第VII因
子との結合は起こらない。この性質は以下の実験によっ
て明らかにされた。
【００１２】このような複合体は、活性化血液凝固第VI
I因子を過剰のアンチトロンビンIII／ヘパリンと４℃に
おいて数時間インキュベートすることによりインビトロ
で調製される。活性化血液凝固第VII因子とアンチトロ
ンビンIIIの間の複合体形成の完了の程度によって、活
性化血液凝固第VII因子は、相当する活性試験において
著しく低下するかまたは全く検出されなくなる。この実
験では、対照に比較して活性化血液凝固第VII因子の活
性の９０％以上の低下が観察された。相当する様式で変
化するシグナルが抗原検出システム中に見出された。こ
れにより、認識されるのは、遊離の活性化血液凝固第VI
I因子のみであり、プロテアーゼ阻害剤複合体ではない
ことが明瞭にされる。Ｍab １０６９／１３７３は、体
液または血液凝固因子の調製時に生じる溶解した血液凝
固製剤もしくは中間体のような溶液中における活性化血
液凝固第VII因子の定性的および定量的検出に著しく適
している。実施例１（下記参照）には適当なＥＬＩＳＡ
試験のセットアップを説明する。これに加えて、新規な
モノクローナル抗体１０６９／１３７３はまた、細胞表
面および組織に結合した活性化血液凝固第VII因子の検
出にも適している。Ｍabの活性化血液凝固第VII因子と
の直接反応またはＭabに対する第２の（抗−マウス）抗
体を用いる間接的検出のような既知の方法を検出に使用
することができる。活性化血液凝固第VII因子結合領域
たとえばＦ(ab2) またはＦ(ab)を含有する新規なモノク
ローナル抗体の抗原結合フラグメントもこの目的に使用
できる。その阻害能力によりＭabおよびそのフラグメン
トに加えて、相当するヒト化モノクローナル抗体は、特
に血栓現象の防止または処置に予防的および／または治
療的に特に有利に使用できる。この性質のヒト化モノク
ローナル抗体は、活性化血液凝固第VII因子に結合した
新規なモノクローナル抗体の超可変領域ならびにヒト抗
体の軽鎖および重鎖の可変および不変領域フレームワー
ク領域からなる。
【００１３】さらに、Ｍabはまた、溶液から活性化血液
凝固第VII因子を除去するためにも使用することができ
る。たとえば、新規なモノクローナル抗体が繋留された
親和性ゲルは抗体を既知のマトリックスたとえばＢrＣ
ＮセファロースまたはプロテインＡセファロースにカッ
プリングさせることによって調製できる。活性化血液凝
固第VII因子を含有する溶液をついでこのようなマトリ
ックスに通すと、活性化血液凝固第VII因子はそれに選
択的に結合することになる。これによって、活性化血液
凝固第VII因子を含まない血液凝固製剤が得られる。
【００１４】
【実施例】本発明を以下の実施例によってさらに明瞭に
説明する。
【００１５】実施例１ 活性化血液凝固第VII因子の定量的測定用のＥＬＩＳＡ
のセットアップのためのモノクローナル抗体１０６９／
１３７３の使用 活性化血液凝固第VII因子の定量的測定のために間接的
ＥＬＩＳＡを開発した。すなわち活性化血液凝固第VII
因子に特異的なモノクローナル抗体１０６９／１３７３
をマイクロタイタープレートのウエルに付着によって結
合させた。固相上の空いている結合部位を飽和させるた
めにはウシ血清アルブミンを用いた。サンプル中の活性
化血液凝固第VII因子は特異的抗体に結合する。結合し
なかった活性化血液凝固第VII因子は洗浄工程により除
去する。血液凝固第VII因子に特異的な酵素標識モノク
ローナル抗体を第２の抗体として使用する。結合した活
性化血液凝固第VII因子は、導入された酵素によって触
媒される発色反応によって検出する。
【００１６】サンプル溶液たとえば血漿またはそれから
単離される製品中の活性化血液凝固第VII因子の含量
は、図１に示す標準曲線を用いて定量することができ
る。活性化血液凝固第VII因子についてのこの試験の特
異性およびその有用性は血液凝固第VII因子または血漿
に精製した活性化血液凝固第VII因子を添加し（ベース
ライン値を差引いたのち）、ついで活性化血液凝固第VI
I因子を定量することによって証明された。
【００１７】セットアップされたＥＬＩＳＡを使用し
て、２０例の健康なドナーからの血漿中の活性化血液凝
固第VII因子抗原の濃度を測定した。定量された活性化
血液凝固第VII因子の濃度を、血液凝固第VIIａ因子活性
試験［Staclot(R)ＦVIIａ／ｒＴＦ，Boehringer Mannhe
im，Stago］を用いて確認した濃度と比較した。図２は
２つの試験系によって得られた結果の間にきわめて良好
な相関があることを示している。
【００１８】さらに、ＥＬＩＳＡは、血漿分画から得ら
れ多数のタンパク質を含有する溶液に定められた量の活
性化血液凝固第VII因子を添加するため、その前または
後に、ＦVIIａ濃度を定量する目的でも使用された。表
１には定められた量のｒＦVIIａを添加する前の血漿分
画（ＰＦ）のＦVIIａ含量、ならびに添加されたｒＦVII
ａ溶液および（ＰＦ＋ｒＦVIIａ）混合物の分析結果を
示す。優れた回収率が得られて、この試験がこのような
複雑なタンパク質溶液における使用にも同様に適してい
ることが強調される。
【００１９】
【表１】 表 １ ＦVIIａ抗原濃度(IU／ml) サンプル 平均値 標準偏差 ｒＦVIIａ ５.０２ ０.１９ ＰＦ ９.５３ ０.１７ ＰＦ＋ｒＦVIIａ １４.３１ ０.４２
【００２０】実施例２ 活性化血液凝固第VII因子の単離／除去用免疫親和性マ
トリックスの構築のためのモノクローナル抗体１０６９
／１３７３の使用 精製したモノクローナル抗体１０６９／１３７３をＢr
ＣＮセファロースのサンプルに結合させた。特に血液凝
固因子ＦII、ＦVII、ＦIXおよびＦXを含有し、定められ
た量の精製血液凝固第VIIａ因子を補充した血漿分画中
間体をついでこのＭab−セファロースにポンプで送っ
た。溶液およびカラムは、５０ｍＭ Ｔris、１５０ｍＭ
塩化ナトリウム、１０ｍＭ 塩化カルシウム、ｐＨ８.５
中に平衡化した。カラムからの流出液を収集した。カラ
ム材料を０.５Ｍ塩化ナトリウムを含有する平衡緩衝液
によって洗浄したのち、マトリックスを５０ｍＭクエン
酸ナトリウム、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ３.５
からなる緩衝液で溶出した。
【００２１】出発材料、カラム流出液および溶出液中の
上述の血液凝固因子の含量を、血液凝固試験によって定
量的に測定した。活性化血液凝固第VII因子はＦVIIａ／
ｒＴＦ試験［Staclot(R)，Boehringer Mannheim，Stag
o］を用いて定量した。
【００２２】結 果 親和性マトリックスは、出発溶液から活性化血液凝固第
VII因子を消失させた。活性化血液凝固第VII因子はカラ
ムからの溶出液中に検出された。試験された他の血液凝
固因子はカラムの流出液中に見出された。これは、新規
なモノクローナル抗体が活性化血液凝固第VII因子の特
異的な単離および除去に使用できることを示している。
溶出液中に単離された活性化血液凝固第VII因子は活性
型で存在し、ついで他の適用に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】活性化血液凝固第VIIａ因子の定量的測定のた
めの間接的ＥＬＩＳＡ用の標準曲線を示す。
【図２】本発明のＥＬＩＳＡならびに血液凝固第VII因
子活性試験［Staclot(R)ＦVIIａ／ｒＴＦ，Boehringer
Mannheim，Stago］によって定量された活性化血液凝固
第VII因子の濃度の相関を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ // Ｃ１２Ｎ 15/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (72)発明者 ヴィーガント・ラング ドイツ連邦共和国デー−35091ケルベ．ア カーツィエンヴェーク２ (72)発明者 アネッテ・フォイスナー ドイツ連邦共和国デー−35043マルブルク. ランゲヴィーゼンヴェーク10 (72)発明者 ヨーアヒム・レーダー ドイツ連邦共和国デー−35041マルブルク. ヘーエンヴェーク80

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 活性化血液凝固第VII因子に特異的に結
    合するモノクローナル抗体。
  2. 【請求項２】 血液凝固第VII因子には結合しない請求
    項１記載のモノクローナル抗体。
  3. 【請求項３】 アンチトロンビンIIIと複合体を形成し
    た活性化血液凝固第VII因子には結合しない請求項１お
    よび２記載のモノクローナル抗体。
  4. 【請求項４】 ハイブリドーマ細胞系ＤＳＭ ＡＣＣ ２
    ３３２によって形成される請求項１〜３記載のモノクロ
    ーナル抗体。
  5. 【請求項５】 活性化血液凝固第VII因子の結合領域を
    含有する請求項１〜４記載のモノクローナル抗体。
  6. 【請求項６】 請求項１〜５記載のモノクローナル抗体
    の活性化血液凝固第VII因子結合超可変領域、ならびに
    ヒト抗体の軽鎖および重鎖の可変および不変領域のフレ
    ームワーク領域を含有するヒト化モノクローナル抗体。
  7. 【請求項７】 請求項６記載のヒト化モノクローナル抗
    体からなる治療用製剤。
  8. 【請求項８】 活性化血液凝固第VII因子を含有する溶
    液を請求項１〜７記載のモノクローナル抗体が繋留され
    たマトリックスに通過させる活性化血液凝固第VII因子
    の除去方法。
  9. 【請求項９】 抗体を、体液中、血液凝固製剤中または
    これら製剤の製造に際しての中間段階において、細胞表
    面上または組織中の活性化血液凝固第VII因子を定性的
    または定量的に検出するために使用する請求項１〜７記
    載のモノクローナル抗体の使用。
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Cited By (1)

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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005520124A (ja) * 2001-07-03 2005-07-07 オゥクラホゥマ、メディカル、リサーチ、ファウンデイシャン 第ＶＩＩａ因子−アンチトロンビン複合体を測定するためのアッセイ

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19802139C1 (de) * 1998-01-22 1999-09-23 Centeon Pharma Gmbh Monoklonaler Antikörper spezifisch für aktivierten Gerinnungsfaktor VII und seine Verwendung
WO2002061090A2 (en) * 2000-12-14 2002-08-08 Genentech, Inc. Prokaryotically produced antibodies and uses thereof
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5506134A (en) * 1990-10-22 1996-04-09 Corvas International, Inc. Hypridoma and monoclonal antibody which inhibits blood coagulation tissue factor/factor VIIa complex
US5843442A (en) * 1990-10-22 1998-12-01 Corvas International, Inc. Blood coagulation protein antagonists and uses therefor
IE922437A1 (en) * 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
MA24512A1 (fr) * 1996-01-17 1998-12-31 Univ Vermont And State Agrienl Procede pour la preparation d'agents anticoagulants utiles dans le traitement de la thrombose
DE19802139C1 (de) * 1998-01-22 1999-09-23 Centeon Pharma Gmbh Monoklonaler Antikörper spezifisch für aktivierten Gerinnungsfaktor VII und seine Verwendung

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005520124A (ja) * 2001-07-03 2005-07-07 オゥクラホゥマ、メディカル、リサーチ、ファウンデイシャン 第ＶＩＩａ因子−アンチトロンビン複合体を測定するためのアッセイ

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