JPH11276182A - 逆転写酵素モチーフを有する新規遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は、逆転写モチーフを有する新規な遺
伝子を提供することを目的とする。 【解決手段】 本発明は、逆転写モチーフを有する新規
遺伝子を単離してその決定された全塩基配列を与える。
また、該遺伝子がコードするタンパク質、該タンパク質
に対する抗体を提供する。それらを用いて、テロメラー
ゼ活性検出方法、癌細胞検出方法、さらにはテロメラー
ゼ活性阻害剤の開発あるいはテロメラーゼ活性阻害剤の
スクリーニング方法の開発に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、逆転写酵素モチー
フを有する新規遺伝子、該遺伝子がコードするタンパク
質、該タンパク質に対する抗体、及びそれらを用いた逆
転写酵素活性検出方法、癌細胞検出方法、さらに逆転写
酵素活性阻害剤あるいは逆転写酵素活性阻害剤のスクリ
ーニング方法に関する。また、上記検出方法を用いた癌
の診断方法、上記遺伝子に対して相補的なプローブを含
有する癌診断薬、さらに上記抗体を含有する癌診断薬に
関する。

【０００２】

【従来の技術】テロメラーゼは細胞分裂のたびに短縮す
るテロメア長を修復する機能を有する酵素であることが
知られている（Greider C.W. and Blackburn E.H.,(198
7) Cell, 51, 887-898 ; Morin G.B. (1989) Cell, 59,
521-529）。また、ほとんどの癌細胞でテロメラーゼ活
性が認められ（Kim N.W. et al., (1994) Science, 20
6, 2011-2015）、癌細胞の無限増殖の維持にテロメラー
ゼが関与することが強く示唆されている。

【０００３】それ故、テロメラーゼ活性の測定は、癌の
診断に重要であり、さらにテロメラーゼ活性を阻害する
物質は、正常細胞に対する副作用の少ない抗癌剤として
期待される（Counter C.M.et al., (1989) EMBO J., 1
1, 1921-1929; Counter C.M.et al., (1994) Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 91, 2900-2904 ; Chadenneau C.et
al., (1995) Cancer Res., 55, 2533-2536 ; Hiyama
E. et al., (1995) Nature Med., 1, 249-255 ; Shay
J. W. et al., (1995) Mol. Cell. Biol., 15,425-43
2）。

【０００４】テロメラーゼ活性を測定する従来法の１つ
は、テロメラーゼ酵素活性を測定する方法である。この
方法は、酵素活性を維持した状態で細胞抽出物をあらか
じめ調製する必要があり、その後、テロメア伸長反応
（テロメラーゼ反応）を実施し、これを直接に、または
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）にて増幅した後に、得
られたDNAの量を測定するものであり、簡便かつ効果的
なテロメラーゼの活性測定ではなかった。また、他のテ
ロメラーゼ活性測定方法としては、テロメラーゼ遺伝子
の発現を測定する方法であるが、係る方法は、テロメラ
ーゼ活性と相関する遺伝子を同定することが必要とな
る。最近このような遺伝子の１つとして、ヒト精巣由来
あるいは癌細胞由来のmRNAより、分子量約130kDaの逆転
写酵素モチーフを有する蛋白をコードする遺伝子が単離
された（Meyerson M., et al., (1997) Cell, 90,785-7
95; Nakamura T.M. et al., (1997) Science, 277, 955
-959）。またこの遺伝子の発現と、テロメラーゼ活性と
がよい相関を示したことから、この遺伝子はヒトテロメ
ラーゼ触媒サブユニットをコードするものと推察されて
いる。

【０００５】しかしながら、テロメラーゼについては今
も不明な点が多い。例えば、逆転写酵素モチーフを有す
る遺伝子は複数個存在しないのか、テロメラーゼ活性を
示す遺伝子は１個か複数個存在するのか、正常生殖細胞
と癌細胞のテロメラーゼ活性は常に同一の遺伝子産物に
よるのか、すべての癌細胞のテロメラーゼ活性が単一の
遺伝子で説明されるのかなど、これらの問題点の解決が
テロメラーゼに着眼した癌の診断と治療において切望さ
れている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、逆転写酵素
活性と相関を有する、逆転写酵素モチーフを有する蛋白
をコードする新規遺伝子を提供することを目的とする。
また、該遺伝子がコードするタンパク質、及びそのタン
パク質に対する抗体を提供することを目的とする。

【０００７】さらに、上記遺伝子、タンパク質、抗体を
用いた逆転写酵素活性測定方法、癌細胞検出方法を提供
することを目的とする。ここで逆転写酵素とは、RNAを
鋳型にしてDNA合成を行う核酸ポリメラーゼの一般的な
総称であり、代表的なものにレトロウイルスの逆転写酵
素が知られている。テロメラーゼは、自身のサブユニッ
トである１本鎖RNAを鋳型としてテロメアDNA配列を合成
することから、RNA依存性DNAポリメラーゼの仲間、すな
わち逆転写酵素の仲間として位置付けられているもので
ある。なお、本明細書中で逆転写酵素活性とは好ましく
はテロメラーゼ酵素活性を意味する。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記問題点
に鑑み、逆転写酵素活性と相関を有する新規遺伝子を発
見すべく鋭意研究を重ねた結果、ヒト前骨髄性白血病細
胞株HL60細胞より逆転写酵素モチーフを有する蛋白をコ
ードする新規遺伝子を見出し、さらに得られた遺伝子の
発現と逆転写酵素活性に相関があることを確認し、本発
明を完成するに至った。

【０００９】従って、本発明に係る遺伝子および該遺伝
子がコードする蛋白質、又は該タンパク質に対する抗体
を用いることにより逆転写酵素活性を測定可能とし、さ
らに、逆転写酵素活性の発現を制御可能とするものであ
る。さらに該活性の阻害剤のデザイン、又は逆転写酵素
活性阻害剤のスクリーニング方法が開発可能となる。

【００１０】より詳しくは、本発明は、以下の遺伝子、
タンパク質、抗体、癌細胞検出方法、逆転写酵素活性阻
害剤、そのスクリーニング方法、逆転写酵素活性調節
剤、リボザイム、逆転写酵素活性抑制剤、逆転写酵素活
性誘導剤スクリーニング方法、および逆転写酵素活性誘
導剤を提供するものである。

【００１１】1. 配列表の配列番号１、９、１１に記載
の塩基配列を有するCRT-1遺伝子。 2. 配列表の配列番号２、１０、１２に記載のアミノ酸
配列からなるタンパク質をコードする遺伝子。 3. 配列表の配列番号２、１０、１２に記載のアミノ酸
配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若
しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ逆転写酵
素活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。 4. 上記1.〜3.のいずれか１つに記載の遺伝子とストリ
ンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ逆転写酵
素活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。 5. 配列表の配列番号２、１０、１２に記載のアミノ酸
配列を有するタンパク質。 6. 配列表の配列番号２、１０、１２に記載のアミノ酸
配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若
しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ逆転写酵
素活性を有するタンパク質。 7. 上記5.又は6.のいずれか１つに記載のタンパク質に
対する抗体。 8. 上記1.〜4.のいずれか１つに記載の遺伝子のアンチ
センス鎖の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド。 9. 上記1.〜4.に記載の遺伝子を検出することを特徴と
する癌細胞検出方法。 10. 上記7.に記載のタンパク質に対する抗体を用いる
ことを特徴とする癌細胞検出方法。 11. 上記1.〜4.のいずれか１つに記載の塩基配列を含
むオリゴヌクレオチドを有する逆転写酵素活性阻害剤。 12. 上記1.〜4.のいずれか１つに記載の塩基配列を含
むオリゴヌクレオチドを用いる逆転写酵素活性阻害剤の
スクリーニング方法。 13. 上記1.〜4.のいずれかに記載の遺伝子を検出する
ことを特徴とする癌細胞検出方法。 14. 上記1.〜4.のいずれかに記載の塩基配列を含むオ
リゴヌクレオチドを有する逆転写酵素活性阻害剤。 15. 上記1.〜4.のいずれかに記載の塩基配列を含むオ
リゴヌクレオチドを用いる逆転写酵素活性阻害剤のスク
リーニング方法。 16. 上記CRT-1遺伝子に作用して逆転写酵素活性を調節
する薬剤。 17. 上記CRT-1遺伝子のリボザイム。 18. 上記 CRT-1タンパク質に対する細胞内抗体。 19. 上記CRT-1タンパク質のドミナントネガティブタン
パク質を含有する逆転写酵素活性抑制剤。 20. 上記CRT-1タンパク質、または該遺伝子を用いて逆
転写酵素活性誘導剤をスクリ−ニングする方法。 21. 上記CRT-1遺伝子、タンパク質それらの変異体を含
む逆転写酵素活性誘導体。 22. 上記癌細胞検出方法を用いた癌の診断方法。 23. 上記遺伝子に対して相補的なプローブを含有する
癌診断薬。 24. 上記抗体を含有する癌診断薬。

【００１２】

【発明の実施の形態】以下に本発明を発明の実施の形態
に即してさらに詳しくに説明する。ここで、遺伝子につ
いては、天然に存在するｍＲＮＡからの逆転写により得
たＤＮＡ（該ＤＮＡを増幅して得られるＤＮＡを含む）
を表す場合、その意味を明確するときはｃＤＮＡと称す
る。

【００１３】（逆転写酵素モチーフを有する遺伝子）本
発明に係る逆転写酵素モチーフを有する遺伝子は、以下
の操作により得ることが可能である。

【００１４】(1)ヒト由来の細胞からmRNAを調製する。
具体的にはHL-60が好ましく使用可能である。

【００１５】(2)選択された細胞から、全RNAを調製す
る。係る全RNA構成についても通常公知の方法が好まし
く使用可能である。

【００１６】(3)次に、poly(A)＋RNA(mRNA)を調製す
る。係る調製法にも特に制限はなく通常公知の方法、市
販キットを用いて行うことが可能である。

【００１７】(4)得られたmRNAに基づいて、5' RACE及び
3' RACEに用いるHL-60のcDNAライブラリーを調製する。
係る調製法にも特に制限はなく通常公知の方法、市販キ
ットを用いて行うことが可能である。

【００１８】(5) 5' RACE法に用いるプライマーの選択
には特に制限はないが、例えば繊毛虫Euplotesおよび酵
母S. cerevisiaeのテロメラーゼ触媒サブユニットに高
いホモロジーをもつヒト由来のESTクローン(GenBank Ac
cession Number AA281296)をもとに、逆転写酵素様のモ
チーフをもつ遺伝子の5領域を増幅するプライマーをデ
ザインすることが可能である。具体的には以下の実施例
で使用したものが挙げられる。また、プライマーの合成
は通常の方法により望ましい純度で得ることが可能であ
る。

【００１９】(6)遺伝子増幅条件についても特に制限は
ないが、通常公知の方法により最適な増幅条件を選択す
ることが可能である。また、市販のキットを用いること
も可能である。増幅条件について具体的には、以下の実
施例で使用した条件が挙げられる。

【００２０】(7)得られた反応産物を精製した後、これ
を適当なベクターにサブクローニングし、クローニング
された遺伝子断片の塩基配列を決定する。この際使用可
能なサブクローニングベクターについては特に制限はな
いが、具体的には以下の実施例で使用したベクターが好
ましい。また市販キットも使用可能である。塩基配列の
決定方法についても特に制限はなく通常公知の方法、及
びそれを利用したシーケンサーを使用可能である（例え
ば、Ｔａｑサイクルシークエンシング法（『Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｉｑｕｅｓ ｖｏｌ．７』（１９８９年）４９４
〜４９９頁に記載の方法）。

【００２１】(8) 3' RACE法用のプライマーも上記5' RA
CE用のプライマーデザイン同様に行うことが可能であ
る。具体的には、実施例で使用した配列が挙げられる。
増幅反応条件についても上記5'RACE方法と同様に最適条
件を選択することが可能である。具体的には以下の実施
例で使用した条件が挙げられる。この際市販のキットを
使用することも可能である。

【００２２】(9)同様に反応産物を精製し、適当なベク
ターにサブクローニングし、その塩基配列を決定する。

【００２３】(10)全長遺伝子の取得は、上記説明した5'
RACE及び3' RACE法により得られた遺伝子断片からcDNA
の5'末端及び3'末端にハイブリダイズするプライマーを
デザインして適当な増幅反応により取得することが可能
である。係る増幅反応として実施例で使用したRT-PCRが
好ましく使用可能である。得られる遺伝子の塩基配列の
決定方法についても特に制限はなく通常公知の方法、及
びそれを利用したシーケンサーを使用可能である。

【００２４】（組織分布の検出及び、癌細胞検出方法、
抗癌剤スクリーニング方法）上記得られた遺伝子の断片
を用いてプローブを調製し、該遺伝子が発現している組
織を見いだすことが可能である。例えば前記プローブを
通常公知の標識手段により標識し、公知のノーザンブロ
ット法により実施することが可能である。

【００２５】また、特定の標準物を用いることにより、
特定の組織に発現している遺伝子を定量することも可能
となる。従って、該遺伝子の発現を検出することによ
り、テロメラーゼ活性を確認することが可能となる。ま
た、テロメラーゼ活性が癌細胞の存在と関連する場合に
は、係る遺伝子を検出定量することは癌細胞の検出方法
を提供することになる。

【００２６】同様に、上記遺伝子の発現の定量化によ
り、抗癌剤の効果を確認する方法をも提供するものであ
る。この場合、抗癌剤の投与の有無、または抗癌剤の投
与後の特定の時間内の遺伝子発現量の変化を確認するこ
とで可能となる。

【００２７】（タンパク質、癌細胞検出方法）上記の方
法により、本発明に係るヒト由来の新規の逆転写酵素モ
チーフを有する遺伝子を取得し、係る遺伝子の塩基配列
情報からその遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸
配列を同定することが可能となる。すなわち、本発明に
係る新規遺伝子によりコードされるタンパク質は、配列
表の配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質
である。

【００２８】また、本発明に係るタンパク質は、このア
ミノ酸配列のみ限定されることはなく、その１又は２以
上のアミノ酸を置換し、欠失又は付加したものであっ
て、かつテロメラーゼ活性を有するもの（変異体タンパ
ク質）が含まれる。

【００２９】従って、本発明に係るテロメラーゼ活性を
有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドの具体
例としては、配列表の配列番号の１に記載の塩基配列か
らなるポリヌクレオチドのみならず、自然、又は人工の
変異によりポリヌクレオチドの構造の一部を、該ポリヌ
クレオチドがコードするポリペプチドの主たる機能であ
るテロメラーゼ活性に変化を与えることなく変化させた
もの（変異体遺伝子）も含まれる。係る人工変異の導入
方法には、例えば「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ」（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ、１９８９年）１５．１〜１５．１１３頁を参照）が
参考となる。

【００３０】また、遺伝暗号の縮重により、該遺伝子の
塩基配列の少なくとも一部の塩基を他の種類の塩基に置
換して得られる遺伝子によっても同一のアミノ酸配列を
有するタンパク質を得ることができる。したがって、本
発明に係るタンパク質をコードする遺伝子とは、本発明
に係るタンパク質及びその変異体タンパク質をコードし
うる全ての縮重のパターンを含むものである。

【００３１】本発明に係るタンパク質（変異体タンパク
質も含む）を得る方法は特に制限はない。具体的には、
蛋白合成装置等による人工的なペプチド合成方法、また
は本発明で得られた該タンパク質をコードする遺伝子の
塩基配列情報に基づいて遺伝子工学的方法によりタンパ
ク質を発現させる種々の方法が挙げられる。この際CRT-
1タンパク質は単独でもまたMBP(Maltose Binding Prote
in)等との融合タンパク質として発現してもよいし、FLA
GペプチドのようなTagを付加して発現させてもよい。ま
た遺伝子工学的方法は、大腸菌などの細菌によって、あ
るいは酵母によってあるいは動物細胞や昆虫細胞を用い
て調製することを可能とするものである。具体例とし
て、適当なベクター及び宿主を選択し、遺伝子を導入し
て形質転換体を得る方法が挙げられる（例えば、「細胞
工学プロトコール」（秀潤社、１９９１年）１０５〜１
０７頁に記載の方法により可能である）。さらに、得ら
れた形質転換体を培養し、遺伝子の増幅、発現を行い目
的タンパク質を発現させることが可能である。

【００３２】次に培養物を回収し、必要に応じて濃縮、
可溶化、透析、各種クロマトグラフィー等の操作を行う
ことにより、本発明のタンパク質及びその変異体タンパ
ク質を得ることが可能である。

【００３３】形質転換体の培養については、各種の教科
書があり、例えば、「微生物実験法」（社団法人日本生
化学会編、東京化学同人、１９９２年）に記載の方法で
行うことが可能である。本発明に記載の塩基配列に基づ
いて目的とするタンパク質（変異体タンパク質を含む）
を発現させることも、公知の方法により可能である。こ
のとき、宿主としては、大腸菌等の細菌、酵母、動物細
胞のいずれも使用可能であるが、特には動物細胞が好ま
しい。細胞に遺伝子を導入するには、リポソーム法、エ
レクトロポーレーション法等を用いることができる。特
に、ＤＥＡＥ−デキストラン法（ファルマシア社製）を
用いることが好ましい。

【００３４】得られた培養物からタンパク質を精製する
精製方法には、免疫沈降法、塩析法、限外濾過法、等電
点沈澱法、ゲル濾過法、電気泳動法、イオン交換クロマ
トグラフィー、疎水性クロマトグラフィーや抗体クロマ
トグラフィー等の各種アフィニティークロマトグラフィ
ー、クロマトフォーカシング法、吸着クロマトグラフィ
ー法及び逆相クロマトグラフィー等があり、適宜選択し
て行えばよい。

【００３５】また、製造段階において、製造する目的タ
ンパク質は、他のポリペプチドとの融合ペプチドとして
形質転換体に生産させてもよい。必要に応じて、精製工
程において、ブロムシアン等の化学物質やプロテアーゼ
等の酵素で処理して、該目的タンパク質を切り出す操作
を行えばよい。

【００３６】（抗体、抗体を用いた癌細胞検出方法）上
記得られるタンパク質（変異体タンパク質を含む）の全
部又は一部のタンパク質に対する抗体を得る方法は、通
常公知の方法により可能である。また、本発明に係る抗
体とは、本発明のタンパク質（その変異体）と反応する
限り、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいず
れも含むものである。また、その活性フラグメント及び
その活性フラグメントを含むキメラ抗体も含まれる。

【００３７】抗体、すなわち免疫グロブリンは、Ｈ鎖と
Ｌ鎖を持ち、物理化学的性質や免疫学的性質から５つの
クラス（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、）
に分けられる。このうち、ＩｇＡ、ＩｇＧはＨ鎖のタイ
プによってさらにサブクラスに分けられる。本発明の新
規抗体は、これらの全てのクラス、サブクラスに属する
ものを含む。

【００３８】さらに、本発明の抗体は、必ずしも抗体分
子全体を用いる必要はなく、活性を有する限り、分子の
一部（活性フラクメント）を用いることができる。活性
フラグメントとしては、具体的にはＦ（ａｂ'）2 、Ｆ
ａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、組み換えＦｖ体及び一本鎖Ｆｖ
を挙げることができる。例えば、ペプシンで分解すると
Ｆ（ａｂ'）2、Ｆｃ'が得られ、パパインで分解すると
Ｆａｂ、Ｆｃが得られる。

【００３９】これらの活性フラグメントは、単独でも用
いられるが、必要に応じて、アルブミン、ポリエチレン
グリコール等の物質と結合させ、新たな複合物として用
いることができる。このような複合物は、一般に、生体
内では、長時間分解されずにその効果を最大限まで発揮
することが多い。活性フラグメントに、アルブミン、ポ
リエチレングリコール等の物質を付加する方法は、例え
ば、『Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ』（Ｃｏｌｄ ＳｐｒｉｎｇＨｅｒｂ
ｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８）ｐ．７７−８
１、ｐ１２９−１３７に記載されている。一般的には、
ＳＰＤＰ（ファルマシア社製）、ＳＭＰＢ（ピアス社
製）、ＥＭＣＳ（ドータイト社製）等の２価反応性試薬
を用いれば、活性フラグメントをアルブミン等と容易に
結合させることができる。

【００４０】本発明の抗体作成方法としては、例えば、
「免疫実験操作法」（日本免疫学会編、日本免疫学会発
行）を参考にすることができる。免疫抗原としては本発
明のタンパク質の一部、すなわち配列表の配列番号２に
記載のアミノ酸配列、又は変異体タンパク質のアミノ酸
配列のうちの連続する８個以上のアミノ酸からなるポリ
ペプチドであればよい。また、それが抗体の作製に使用
しうる精製度のものであれば、該タンパク質が得られた
方法は問わない。

【００４１】また、免疫抗原が、８ないし約２０個のア
ミノ酸からなるポリペプチドである場合には、それをキ
ーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）等のキャリ
アと結合させて抗原として使用すればよい。

【００４２】該免疫抗原を免疫する動物はヒト以外のい
ずれでもよく、通常当業者で使用される動物から目的の
抗体を産生し得る動物種を選択して使用することが好ま
しい。

【００４３】ポリクローナル抗体は、得られた抗血清を
精製することによって得られる。精製は、塩析、イオン
交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラ
フィー等の方法を組み合わせて行えばよい。

【００４４】モノクローナル抗体は、通常のハイブリド
ーマを作製する方法によって融合細胞を得た後、該細胞
に抗体を産生させることにより得られる。細胞融合に
は、ポリエチレングリコール、センダイウィルス、電気
パルス等を用いる手法が使用可能である。

【００４５】また、上記以外に、遺伝子工学的な方法を
用いても該モノクローナル抗体が得られうる。例えば、
本発明のタンパク質又はその一部で免疫した動物の脾細
胞、リンパ球又は該モノクローナル抗体を産生するハイ
ブリドーマからｍＲＮＡを採取し、これをもとにｃＤＮ
Ａライブラリーを作製する。次に、該ｃＤＮＡライブラ
リーにより抗体を発現させる。抗原と反応する抗体を産
生するクローンをスクリーニングによりｃＤＮＡライブ
ラリーから得、得られたクローンを培養し、培養混合物
から目的とする抗体を、塩析、イオン交換クロマトグラ
フィー、アフィニティークロマトグラフィー等の方法を
組み合わせて精製することができる。

【００４６】上記得られる本発明の抗体は、種々の組織
に存在するテロメラーゼの検出に用いることができる。
係る際には通常使用されるウエスタンブロッティング方
法が好ましく使用可能である。本発明のタンパク質、そ
の変異体又はそれらの一部を精製するために使用する抗
体カラムの作製、各分画中の該タンパク質、その変異体
又はその一部の検出のために用いることができる。

【００４７】さらに、特定の標準物を用いることによ
り、特定の組織に発現しているテロメラーゼを定量する
ことも可能となる。従って、該テロメラーゼの発現を検
出することにより、テロメラーゼ活性を確認することが
可能となる。また、テロメラーゼ活性が癌細胞の存在と
関連する場合には、係るテロメラーゼを検出定量するこ
とは癌細胞の検出方法を提供することになる。

【００４８】同様に、上記テロメラーゼの発現の定量化
により、抗癌剤の効果を確認する方法をも提供するもの
である。この場合、抗癌剤の投与の有無、または抗癌剤
の投与後の特定の時間内のテロメラーゼ発現量の変化を
確認することで可能となる。

【００４９】さらに、診断への応用として、例えば細胞
の抽出液や病理組織を材料として、本発明の遺伝子が存
在するかどうか調べることにより癌の診断が可能であ
る。具体的には、該遺伝子に対して相補的な配列をプロ
ーブとして用い、該遺伝子の有無を調べる方法がある。
その際にプローブとして用いられる配列の長さは10base
〜1300base、好ましくは10base〜1000base、更に好まし
くは20base〜400baseである。該遺伝子の有無を調べる
際には該遺伝子を増幅させてもさせなくてもよいが、増
幅させる手段としてはＲＴ−ＰＣＲ法、ＴＭＡ(Transcr
iption MediatedAmplification、特表平4-500759号）法
などを用いることが可能である。検出手段としてはＨＰ
Ａ(Hybridization Protection Assay,特表平2-504314
7）法などを用いることが可能である。癌の診断方法の
具体例としては、例えば特表平9-502102号や米国特許54
89508号に記載の方法を用いることができる。

【００５０】特に用いる材料が病理組織の場合には、例
えば上記プローブを用いたin situhybridization法を用
いることができる。また本発明に係わる抗体を用いたＡ
ＢＣ組織染色法を用いることができる。

【００５１】（アンチセンスオリゴヌクレオチド、テロ
メラーゼ活性阻害剤、テロメラーゼ活性阻害剤スクリー
ニング方法）本発明にて得られる上記遺伝子に基づくア
ンチセンスポリヌクレオチドには、塩基、リン酸、糖か
らなるヌクレオチドが複数結合したものが、天然には存
在しないものを含めて全て含まれる。その代表的なもの
は、ＤＮＡとｍＲＮＡである。

【００５２】また、本発明のアンチセンスポリヌクレオ
チド誘導体には、その立体構造や機能がポリヌクレオチ
ドと類似するものが全て含まれる。例えば、ポリヌクレ
オチドの３'末端もしくは５'末端に他の物質が結合した
ものやポリヌクレオチドの塩基、糖、リン酸の少なくと
もいずれか一部において、置換や欠失や付加の修飾が生
じた物質、天然に存在しないような塩基、糖、リン酸を
有するものや、糖−リン酸骨格以外の骨格を有するもの
である。

【００５３】該アンチセンスポリヌクレオチド及びその
誘導体は、本発明に係る遺伝子及びその変異体遺伝子の
いかなる部分にハイブリダイズするものであってもよ
い。

【００５４】また、該アンチセンスポリヌクレオチド及
びその誘導体は、組織や細胞における本発明に係るタン
パク質又はその変異体をコードする遺伝子の存在やその
発現状況を調べるための研究用ポリヌクレオチドプロー
ブとして、使用可能である。また、診断用ポリヌクレオ
チドプローブとしても使用可能である。なお、プローブ
としては、１２塩基以上且つＧＣ含有率が３０ないし７
０％であるものが好ましく、１６塩基以上且つＧＣ含有
率が３０ないし７０％であるものが、特に好ましい。

【００５５】また、該アンチセンスポリヌクレオチド及
びその誘導体を使用して、本発明に係るタンパク質（そ
の変異体を含む）の発現を調節することが可能である。
これらは上記タンパク質をコードする遺伝子もしくはｍ
ＲＮＡにハイブリダイズして係るタンパク質の発現を抑
制することが期待されるので、係るタンパク質が関与す
る機能、すなわちテロメラーゼ活性に基づく癌等の疾患
の治療薬として使用可能である。すなわち、該アンチセ
ンスポリヌクレオチドやその誘導体よりアンチセンス医
薬品を開発することが可能である。

【００５６】一般に、ポリペプチドをコードするＤＮＡ
やｍＲＮＡの相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチド
を使用して、該ポリペプチドの発現を調節する方法は、
アンチセンス法と呼ばれている。相補的な配列を有する
ポリヌクレオチドは、遺伝子からｐｒｅ−ｍＲＮＡへ
の転写段階、ｐｒｅ−ｍＲＮＡから成熟ｍＲＮＡへの
プロセッシング段階、核膜通過段階、蛋白への翻訳
段階のいずれかで、遺伝情報を担うＤＮＡ又はｍＲＮＡ
に結合し、遺伝情報の伝達の正常な流れに影響を与えて
ポリペプチドの発現を調節すると考えられている。

【００５７】一般的には、１５塩基以上の塩基を含む塩
基配列であれば特異性のある配列であると考えられてい
る（横山一成、蛋白質・核酸・酵素、３８巻、754〜765
頁、1994年）。従って、本発明のアンチセンスポリヌク
レオチド及びアンチセンスポリヌクレオチド誘導体も、
本発明に係るタンパク質及びその変異体に対するｍＲＮ
Ａに相補的な塩基配列であって１５塩基以上からなる塩
基配列を含むものであれば、本発明に係る遺伝子もしく
は本発明に係る遺伝子に対するｍＲＮＡに特異的に結合
することが推定される。

【００５８】一方、ポリヌクレオチドを細胞内に取り込
ませるには、その長さはあまりに長すぎても不適当であ
る。本発明のアンチセンスポリヌクレオチド及びその誘
導体は、いかなる長さのものであってもよいが、本発明
のアンチセンスポリヌクレオチドおよびアンチセンスポ
リヌクレオチド誘導体を細胞内に取り込ませ、タンパク
質の発現を調節させることを考慮すると、前記アンチセ
ンスポリヌクレオチド及びこれらアンチセンスポリヌク
レオチドの誘導体は遺伝子に対するｍＲＮＡに相補的な
１５塩基以上３０塩基以下、好ましくは１５塩基以上２
５塩基以下、より好ましくは１８塩基以上２２塩基以下
の塩基数から成る塩基配列を有するものが好ましい。

【００５９】本発明のアンチセンスポリヌクレオチド及
びアンチセンスヌクレオチド誘導体においても、公知の
アンチセンス技術を用いて、ポリヌクレオチドの医薬品
としての効果を高めることを目的として様々な誘導体、
即ち、目的のＤＮＡやｍＲＮＡとの結合力、組織選択
性、細胞透過性、ヌクレアーゼ耐性、細胞内安定性の高
い様々なポリヌクレオチド誘導体が得られうる。

【００６０】ハイブリダイズのし易さの点では、一般的
には、ステムループを形成している領域の塩基配列に相
補的な塩基配列を持つポリヌクレオチド又はポリヌクレ
オチド誘導体を設計するとよいとされている（『臨床免
疫 ２５巻』１２００〜１２０６頁、１９９３年）。本
発明のポリヌクレオチド及びその誘導体は、必要に応
じ、ステムループを形成することが可能である。

【００６１】また、翻訳開始コドン付近、リボソーム結
合部位、キャッピング部位、スプライス部位の配列に相
補的な配列を有するようなポリヌクレオチドは、一般に
高い発現抑制効果が期待できる（『癌と化学療法 ２０
巻１３号』１８９９〜１９０７頁）。したがって、本発
明のポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体であ
って、本発明に係るタンパク質又はその変異体をコード
する遺伝子又は該遺伝子に対するｍＲＮＡの翻訳開始コ
ドン付近、リボソーム結合部位、キャッピング部位、ス
プライス部位の相補的な配列を含むものは、高い発現抑
制効果が期待される。

【００６２】現在一般に知られている誘導体は、ヌクレ
アーゼ耐性、組織選択性、細胞透過性、結合力の少なく
とも１つが高められた誘導体であることが好ましく、特
に好ましくは、当該ポリヌクレオチド誘導体は、フォス
フォロチオエート結合（「癌と化学療法」２０巻、１３
号、1899-1907頁、1993年参照）を骨格構造として有す
る誘導体であることが示されている。本発明のポリヌク
レオチド及びその誘導体についても、これらの機能又は
構造を有する誘導体が含まれる。

【００６３】本発明のアンチセンスポリヌクレオチド誘
導体の製造方法については、例えば、『ｉｎ Ａｎｔｉ
ｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃ
ａｔｉｏｎｓ』（Michael J. GAIT, p290-299, CRC出
版, フロリダ,1993年）に記載の方法を用いることが可
能である。

【００６４】例えば、天然型のＤＮＡやＲＮＡであれ
ば、化学合成機を使用して合成したり、本発明に係るタ
ンパク質をコードする遺伝子を鋳型とするＰＣＲ法によ
り本発明のアンチセンスポリヌクレオチドを得ることが
できる。また、メチルフォスフォネート型やフォスフォ
ロチオエート型等、誘導体の中には、化学合成機（例え
ば、パーキンエルマージャパン社製３９４型）を使用し
て合成できるものもある。この場合には、化学合成機に
添付されている説明書にしたがって操作を行い、得られ
た合成産物を逆相クロマトグラフィー等を用いたＨＰＬ
Ｃ法により精製することによっても、目的のポリヌクレ
オチド又はポリヌクレオチド誘導体を得ることができ
る。

【００６５】(応用例）上で一般的に説明したように、
本発明に係る遺伝子及びそれがコードするタンパク質、
また、それらの変異体の全部又は一部を利用して、遺伝
子治療、その他の種々の応用が可能となるが、以下にそ
の具体的応用例のいくつかを詳細に説明する。

【００６６】(1) 遺伝子治療への適応例 本発明に係るアンチセンスRNAを細胞内で発現させるこ
とによりCRT-1タンパク質の翻訳を阻害することができ
る。係る目的のために、適当な動物細胞用の発現ベクタ
ーに、pCRT-1の全長またはcDNAの一部分を逆方向にクロ
ーニング部位に挿入することで、適当なプロモーターに
よりアンチセンスRNAを調製することが可能である。

【００６７】また、pCRT-1タンパク質の活性を抑制する
細胞内抗体に適用可能である。具体的にはすでに報告さ
れてるようにHIV治療法(Marasco W.A. Gene Therapy (1
997)4, 11-15.)、または乳癌治療法(Wright M., et a
l., Gene Therapy (1997) 4,317-322.)が挙げられる。C
RT-1に対するモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法
や抗体ライブラリー法により単離することができる。CR
T-1の活性を抑制できるモノクローナル抗体を選択した
後、ハイブリドーマ細胞より抗体の可変領域をコードす
るcDNAを単離することができる。細胞内抗体は、１本鎖
抗体の構築に基づいて構築できる。すなわち、H鎖及びL
鎖可変領域をリンカー配列、例えば15アミノ酸配列(Gly
4Ser)３によって連結し、これを適当な発現ベクターに
よって細胞内で発現させることができる。

【００６８】また、CRT-1の変異体をドミナントネガテ
ィブとして細胞内で発現させることで、CRT-1の活性を
抑制することが可能となる。ドミナントネガティブは、
例えばテロメア配列に結合するがDNA合成能力が欠損し
ている変異体に基づいて構築される。ドミナントネガテ
ィブは、正常のCRT-1に対しきっこう阻害を示す。

【００６９】また、CRT-1のmRNAを特異的に分解できる
リボザイムを細胞に導入してCRT-1を阻害することも可
能である。ここで、リボザイムは配列特異的にRNA切断
活性を有するRNA分子であり、癌やHIVの遺伝子治療法と
して知られている(Looney D. and Yu M., Methods in M
olecular Biology (1997) 74, 469-486; Duarte E.A.,e
t al., Methods in Molecular Biology (1997) 74, 459
-468)。

【００７０】(2) CRT-1と相互作用する細胞内因子の同
定に用いることが可能である。

【００７１】テトラヒメナや酵母のテロメラーゼの研究
から、細胞内のテロメラーゼは複数のタンパク因子と複
合体を形成していることが示唆されている（Collins
K., etal., Cell (1995) 81, 677-686; Linger J., et
al., Science (1997) 276, 561-567)。CRT-1と相互作用
する因子は例えば酵母を用いた公知技術であるTwo-hybr
id法で単離することが可能である(Cowell I.G. Method
in Molecular Biology(1997) 69, 185-202)。

【００７２】(3) CRT-1タンパク質は、結晶化して構造
解析の研究材料として提供可能であり、また薬物設計に
もちいることも可能である。さらに、テロメラーゼ活性
を有する酵素系を再構成する材料として用いることも可
能である。係る再構成系はテロメラーゼ活性を調節する
物質の探索に用いることが可能である。

【００７３】以下、実施例により本発明をさらに具体的
に説明する。但し、本発明はこれらの実施例に限定され
ない。

【００７４】

【実施例１】cDNAクローニング (1) HL-60 mRNAの調製およびcDNAライブラリの作製 HL-60株より、Chirgwinら(1979)の方法(Biochemisitry
18, 5294-5299)に従い全RNAを調製し、mRNA Purificati
on Kit (Pharmacia社製)を用いて製造者の指示に従いpo
ly A+RNAを調製した。5' RACE及び3' RACE用HL-60 cDNA
ライブラリをMarathon^TM cDNA Amplification Kit (CLO
NTECH社製)を用いて製造者の指示に従い作製した。

【００７５】(2) 5' RACE法 繊毛虫Euplotesおよび酵
母S. cerevisiaeのテロメラーゼ触媒サブユニットに高
いホモロジーをもつヒト由来のESTクローン(GenBank Ac
cessionNumber AA281296)をもとに、逆転写酵素様のモ
チーフをもつ遺伝子の5'領域を増幅するプライマー hTR
T5(配列：5'-ccgctcgtagttgagcacgctgaa-3')およびtelo
-rev（配列：5'-accctcttcaagtgctgtc-3'）をデザイン
した。これらのプライマーは（ 株）サワディー・テク
ノロジーより得た（以下用いるプライマーも同様）。

【００７６】Takara LA PCRTM Kit Ver.2（宝酒造社
製）を用い、以下の条件で遺伝子増幅を行った。反応液
(50μｌ)を、1xLA PCR Buffer II (Mg²⁺), 0.2 mM dNT
P, 0.2μMのhTRT5プライマーおよびAP1プライマー(Mara
thon^TM cDNA Amplification Kitに付属), 2μlの5' RAC
E用cDNAライブラリ、並びに5 U Takara LA Taqから な
る組成になるように調製し、Perkin-Elmer/ABI社製のGe
neAmp PCR System 2400を用いて94℃ 1min, 30サイクル
の94℃ 15 secと68℃ 3min,68℃ 7minの条件で反応させ
た。この反応産物を50倍希釈したもの1μlを鋳型に0.2
μMのtelo-revプライマーとAP2プライマー(Marathon^TM
cDNA Amplification Kitに付属)を用いて94℃ 1min, 15
サイクルの94℃ 15 secと68℃ 3min,68℃ 7minの条件で
反応を行った。なお、プライマーと鋳型DNA以外の反応
液組成ははじめの反応液と同様である。

【００７７】２段階目の反応産物をPCR Purification K
it (QIAGEN) を用いて精製し、これをpGEM-Tベクター(P
romega)にサブクローニングし、その塩基配列をAmpliTa
q FSPrism ready reaction cycle sequencing Kit (Per
kin-Elmer/ABI社製)を用いて決定した。その結果逆転写
様モチーフを有する遺伝子を同定した。単離した配列の
3'末端213 bpは、以前逆転写様モチーフをもつ遺伝子と
して単離されたhEST2/hTRT1 (Meyerson M. et al. (199
7) Cell 90, 785-795; Nakamura T. M. et al. (1997)
Science 277, 955-959)と同一の配列 をもつが、3'末端
側から214bpより上流は全く異なる構造をもっていた。

【００７８】(3) 3' RACE法 5' RACE法により得られた
５断片の配列をもとに3' RACE用のプライマーhRT1（配
列：5'-tgcgtttcctgccgagtgtgtgttgatcc-3'）とhRT3
（配列：5'-tgcacagatgaagatgtggagactcacgag-3'）及び
telo-for(配列：5'-agttcctgcactggctgatgagtg-3')をデ
ザインした。3' RACEを5' RACE同様、以下の条件で行っ
た。

【００７９】Takara LA PCRTM Kit Ver.2 を用い、以下
の条件で遺伝子増幅を行った。反応液(50μｌ)を 、1 x
LA PCR Buffer II (Mg²⁺), 0.2 mM dNTP, 0.2μMのhRT
1もしくはhRT3プライマーおよびAP1プライマー, 2μｌ
の3' RACE用cDNAライブラリ、並びに５U Takara LA Taq
からなる組成になるように調製し、94℃ 1min, 30サイ
クルの94℃ 15 secと68℃ 3min,68℃ 7minの条件で反応
させた。この反応産物を50倍希釈したもの1μｌを鋳型
に0.2μMのtelo-forプライマーとAP2プライマーを用い
て94℃ 1min, 15サイクルの94℃ 15 secと68℃ 3min,68
℃ 7minの条件で反応を行った。なお、プライマーと鋳
型DNA以外の反応液組成ははじめの反応液と同様であ
る。

【００８０】２段階目の反応産物をPCR Purification K
it を用いて精製し、これをpGEM-Tベクターにサブクロ
ーニングし、その塩基配列をAmpliTaq FS Prism ready
reaction cycle sequencing Kit を用いて決定した。

【００８１】(4) RT-PCRによるアミノ酸をコードする
領域の遺伝子の取得 3'-RACE法により得られた遺伝子断片からcDNAの3'末端
にハイブリダイズするプライマーとして、プライマーhC
RT-rev（配列：5'-aagatgaagtctcactctgttgcccaggctgga
gtg-3'）と、プライマーhCRT-rev2（配列：5'-ctgaaaaa
ct catatattcagtattttact cccacag-3'）をデザインし、
これらのプライマーとhRT3を用いてRACE用cDNAライブラ
リを鋳型にアミノ酸をコードする領域を含む遺伝子をPC
R法により取得した。反応条件は以下の通りである。1x
LA PCR Buffer II (Mg²⁺), 0.2mM dNTP, 0.2μM hCRT-r
evプライマー（若しくはhCRT-rev2プライマー）及びhRT
3プライマー, 2μｌのRACE用cDNAライブラリ、並びに5U
Takara LA Taqからなるように反応液50μｌを調製し、
Perkin-Elmer/ABI社製のGeneAmp PCR System 2400を用
いて94℃ 1min, 30サイクルの94℃ 15 secと68℃ 3min,
68 ℃ 7minの条件で反応させた。得られた反応産物をp
GEM-Tベクターにサブクロー ニングしその塩基配列をAm
pliTaq FS Prism ready reaction cycle sequencing Ki
t (Perkin-Elmer/ABI社製)を用いて決定した。数種のス
プライシングバリアントを取得し、その中から可能な逆
転写様蛋白質の読み枠をもつ配列を推定した。

【００８２】プライマーhCRT-revを用いた場合に２種類
の上記塩基配列が得られた。その１の塩基配列、及び導
かれるアミノ酸配列をそれぞれ配列表の配列番号１及び
２に示した。また、他の１つの塩基配列、及び導かれる
アミノ酸配列をそれぞれ配列表の配列番号９及び１０に
示した。

【００８３】また、プライマーhCRT-rev2を用いた場合
に得られた上記塩基配列、及び導かれるアミノ酸配列を
それぞれ配列表の配列番号１１及び１２に示した。

【００８４】配列番号１０のアミノ酸配列は、配列番号
２のアミノ酸配列の361番目にLeuが挿入されたものであ
った。また、配列番号１２のアミノ酸配列は、配列番号
２のアミノ酸配列の361番目にLeuが挿入され、437番目
のArgがSerに置換され、かつさらにアミノ酸残基が付加
されたものであった。

【００８５】

【実施例２】 RT-PCR法による遺伝子診断 1.発現分布の解析 本発明に係る逆転写様モチーフを有する遺伝子ＣＲＴ−
１を増幅するプライマー（ｈＲＴ３及びｈＴＲＴ５）を
用いて、テロメラーゼ活性を保有する癌細胞株や精巣及
びテロメラーゼ活性を保持しない正常二倍体細胞株ＷＩ
−３８でのｈＣＲＴの発現をＲＴ−ＰＣＲ法により調べ
た。なお、 ＲＴ−ＰＣＲは以下の手順で行った。

【００８６】各種培養細胞より、グアニジン−イソチア
ネート／フェノール法(Ｃｈｏｍｃｚ ｙｎｓｋｉ ａｎ
ｄ Sacchi(1987) Anal.Biochem.162,156-159)に従い、
全ＲＮＡを調製し、Ｆｉｒｓｔ−Ｓｒａｎｄ ｃＤＮＡ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｐ ｈａｒｍａｃｉａ）を
用いて使用マニュアルに従いｃＤＮＡ合成を行った。反
応産物１／５０を鋳型に用いて以下の条件でＰＣＲを行
った。反応は２０μｌスケールで行い、反応液組成を１
０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．３、５０ｍＭ ＫＣ
ｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０．２μＭのプライマーｈ
ＲＴ３とｈＴＲＴ５及び１ＵＡｍｐｌｉＴａｑＧｏｌｄ
（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）に調製した。

【００８７】Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ／ＡＢＩ社製の
ＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ９６００を用い
て、９４℃ １０分、４０サイクルの９４℃ ３０秒、
５５℃３０秒、７２℃ １分の条件で反応させた。反応
産物を１％アガロース電気泳動により分析した。癌細胞
株や精巣においてｈＣＲＴ遺伝子の発現が認められ、こ
の遺伝子の発現がテロメラーゼ活性と相関していること
を示す。逆転反応の陽性対照としてＧ３ＰＤＨ(Ｇｋｙ
ｃｅｒ ａｌｄｅｈｙｄｅ ３−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｄ
ｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ)遺伝 子のＲＴ−ＰＣＲの結
果を図１に示した。

【００８８】

【配列表】

配列番号１ 配列の長さ：1311 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ATG AAG ATG TGG AGA CTC ACG AGG AGG GCG GTC ATC TTG GCC CGG 45 GTT GGC TGT GTT CCG GCC GCA GAG CAC CGT CTG CGT GAG GAG ATC 90 CTG GCC AAG TTC CTG CAC TGG CTG ATG AGT GTG TAC GTC GTC GAG 135 CTG CTC AGG TCT TTC TTT TAT GTC ACG GAG ACC ACG TTT CAA AAG 180 AAC AGG CTC TTT TTC TAC CGG AAG AGT GTC TGG AGC AAG TTG CAA 225 AGC ATT GGA ATC AGA CAG CAC TTG AAG AGG GTG CAG CTG CGG GAG 270 CTG TCG GAA GCA GAG GTC AGG CAG CAT CGG GAA GCC AGG CCC GCC 315 CTG CTG ACG TCC AGA CTC CGC TTC ATC CCC AAG CCT GAC GGG CTG 360 CGG CCG ATT GTG AAC ATG GAC TAC GTC GTG GGA GCC AGA ACG TTC 405 CGC AGA GAA AAG AGG GCC GAG CGT CTC ACC TCG AGG GTG AAG GCA 450 CTG TTC AGC GTG CTC AAC TAC GAG CGG GCG CGG CGC CCC GGC CTC 495 CTG GGC GCC TCT GTG CTG GGC CTG GAC GAT ATC CAC AGG GCC TGG 540 CGC ACC TTC GTG CTG CGT GTG CGG GCC CAG GAC CCG CCG CCT GAG 585 CTG TAC TTT GTC AAG GTG GAT GTG ACG GGC GCG TAC GAC ACC ATC 630 CCC CAG GAC AGG CTC ACG GAG GTC ATC GCC AGC ATC ATC AAA CCC 675 CAG AAC ACG TAC TGC GTG CGT CGG TAT GCC GTG GTC CAG AAG GCC 720 GCC CAT GGG CAC GTC CGC AAG GCC TTC AAG AGC CAC GTC TCT ACC 765 TTG ACA GAC CTC CAG CCG TAC ATG CGA CAG TTC GTG GCT CAC CTG 810 CAG GAG ACC AGC CCG CTG AGG GAT GCC GTC GTC ATC GAG CAG AGC 855 TCC TCC CTG AAT GAG GCC AGC AGT GGC CTC TTC GAC GTC TTC CTA 900 CGC TTC ATG TGC CAC CAC GCC GTG CGC ATC AGG GGC AAG TCC TAC 945 GTC CAG TGC CAG GGG ATC CCG CAG GGC TCC ATC CTC TCC ACG CTG 990 CTC TGC AGC CTG TGC TAC GGC GAC ATG GAG AAC AAG CTG TTT GCG 1035 GGG ATT CGG CGG GAC GGG CTG CTC CTG CGT TTG GTG GAT GAT TTC 1080 TTG GTG ACA CCT CAC CTC ACC CAC GCG AAA ACC TTC CTC AGG ACC 1125 CTG GTC CGA GGT GTC CCT GAG TAT GGC TGC GTG GTG AAC TTG CGG 1170 AAG ACA GTG GTG AAC TTC CCT GTA GAA GAC GAG GCC CTG GGT GGC 1215 ACG GCT TTT GTT CAG ATG CCG GCC CAC GGC CTA TTC CCC TGG TGC 1260 GGC CTG CTG CTG GAT ACC CGG ACC CTG GAG GTG CAG AGC GAC TAC 1305 TCC AGG 1311 配列番号：2 配列の長さ：437 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Lys Met Trp Arg Leu Thr Arg Arg Ala Val Ile Leu Ala Arg 5 10 15 Val Gly Cys Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile 20 25 30 Leu Ala Lys Phe Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu 35 40 45 Leu Leu Arg Ser Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys 50 55 60 Asn Arg Leu Phe Phe Tyr Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln 65 70 75 Ser Ile Gly Ile Arg Gln His Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu 80 85 90 Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln His Arg Glu Ala Arg Pro Ala 95 100 105 Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys Pro Asp Gly Leu 110 115 120 Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val Gly Ala Arg Thr Phe 125 130 135 Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser Arg Val Lys Ala 140 145 150 Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu 155 160 165 Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg Ala Trp 170 175 180 Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro Glu 185 190 195 Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile 200 205 210 Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro 215 220 225 Gln Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala 230 235 240 Ala His Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr 245 250 255 Leu Thr Asp Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu 260 265 270 Gln Glu Thr Ser Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser 275 280 285 Ser Ser Leu Asn Glu Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu 290 295 300 Arg Phe Met Cys His His Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr 305 310 315 Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu 320 325 330 Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala 335 340 345 Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu Arg Leu Val Asp Asp Phe 350 355 360 Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala Lys Thr Phe Leu Arg Thr 365 370 375 Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys Val Val Asn Leu Arg 380 385 390 Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu Ala Leu Gly Gly 395 400 405 Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe Pro Trp Cys 410 415 420 Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser Asp Tyr 425 430 435 Ser Arg 配列番号3 配列の長さ：14 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 CCGCTCGTAG TTGAGCACGC TGAA 14 配列番号4 配列の長さ：19 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ACCCTCTTCA AGTGCTGTC 19 配列番号5 配列の長さ：29 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 TGCGTTTCCT GCCGAGTGTG TGTTGATCC 29 配列番号6 配列の長さ：30 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 TGCACAGATG AAGATGTGGA GACTCAGGAG 30 配列番号7 配列の長さ：24 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 AGTTCCTGCA CTGGCTGATG AGTG 24 配列番号8 配列の長さ：36 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 AAGATGAAGT CTCACTCTGT TGCCCAGGCT GGAGTG 36 配列番号9 配列の長さ：1314 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ATG AAG ATG TGG AGA CTC ACG AGG AGG GCG GTC ATC TTG GCC CGG 45 GTT GGC TGT GTT CCG GCC GCA GAG CAC CGT CTG CGT GAG GAG ATC 90 CTG GCC AAG TTC CTG CAC TGG CTG ATG AGT GTG TAC GTC GTC GAG 135 CTG CTC AGG TCT TTC TTT TAT GTC ACG GAG ACC ACG TTT CAA AAG 180 AAC AGG CTC TTT TTC TAC CGG AAG AGT GTC TGG AGC AAG TTG CAA 225 AGC ATT GGA ATC AGA CAG CAC TTG AAG AGG GTG CAG CTG CGG GAG 270 CTG TCG GAA GCA GAG GTC AGG CAG CAT CGG GAA GCC AGG CCC GCC 315 CTG CTG ACG TCC AGA CTC CGC TTC ATC CCC AAG CCT GAC GGG CTG 360 CGG CCG ATT GTG AAC ATG GAC TAC GTC GTG GGA GCC AGA ACG TTC 405 CGC AGA GAA AAG AGG GCC GAG CGT CTC ACC TCG AGG GTG AAG GCA 450 CTG TTC AGC GTG CTC AAC TAC GAG CGG GCG CGG CGC CCC GGC CTC 495 CTG GGC GCC TCT GTG CTG GGC CTG GAC GAT ATC CAC AGG GCC TGG 540 CGC ACC TTC GTG CTG CGT GTG CGG GCC CAG GAC CCG CCG CCT GAG 585 CTG TAC TTT GTC AAG GTG GAT GTG ACG GGC GCG TAC GAC ACC ATC 630 CCC CAG GAC AGG CTC ACG GAG GTC ATC GCC AGC ATC ATC AAA CCC 675 CAG AAC ACG TAC TGC GTG CGT CGG TAT GCC GTG GTC CAG AAG GCC 720 GCC CAT GGG CAC GTC CGC AAG GCC TTC AAG AGC CAC GTC TCT ACC 765 TTG ACA GAC CTC CAG CCG TAC ATG CGA CAG TTC GTG GCT CAC CTG 810 CAG GAG ACC AGC CCG CTG AGG GAT GCC GTC GTC ATC GAG CAG AGC 855 TCC TCC CTG AAT GAG GCC AGC AGT GGC CTC TTC GAC GTC TTC CTA 900 CGC TTC ATG TGC CAC CAC GCC GTG CGC ATC AGG GGC AAG TCC TAC 945 GTC CAG TGC CAG GGG ATC CCG CAG GGC TCC ATC CTC TCC ACG CTG 990 CTC TGC AGC CTG TGC TAC GGC GAC ATG GAG AAC AAG CTG TTT GCG 1035 GGG ATT CGG CGG GAC GGG CTG CTC CTG CGT TTG GTG GAT GAT TTC 1080 TTG TTG GTG ACA CCT CAC CTC ACC CAC GCG AAA ACC TTC CTC AGG 1125 ACC CTG GTC CGA GGT GTC CCT GAG TAT GGC TGC GTG GTG AAC TTG 1170 CGG AAG ACA GTG GTG AAC TTC CCT GTA GAA GAC GAG GCC CTG GGT 1215 GGC ACG GCT TTT GTT CAG ATG CCG GCC CAC GGC CTA TTC CCC TGG 1260 TGC GGC CTG CTG CTG GAT ACC CGG ACC CTG GAG GTG CAG AGC GAC 1305 TAC TCC AGG 1314 配列番号：10 配列の長さ：438 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Lys Met Trp Arg Leu Thr Arg Arg Ala Val Ile Leu Ala Arg 5 10 15 Val Gly Cys Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile 20 25 30 Leu Ala Lys Phe Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu 35 40 45 Leu Leu Arg Ser Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys 50 55 60 Asn Arg Leu Phe Phe Tyr Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln 65 70 75 Ser Ile Gly Ile Arg Gln His Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu 80 85 90 Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln His Arg Glu Ala Arg Pro Ala 95 100 105 Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys Pro Asp Gly Leu 110 115 120 Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val Gly Ala Arg Thr Phe 125 130 135 Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser Arg Val Lys Ala 140 145 150 Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu 155 160 165 Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg Ala Trp 170 175 180 Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro Glu 185 190 195 Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile 200 205 210 Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro 215 220 225 Gln Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala 230 235 240 Ala His Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr 245 250 255 Leu Thr Asp Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu 260 265 270 Gln Glu Thr Ser Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser 275 280 285 Ser Ser Leu Asn Glu Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu 290 295 300 Arg Phe Met Cys His His Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr 305 310 315 Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu 320 325 330 Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala 335 340 345 Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu Arg Leu Val Asp Asp Phe 350 355 360 Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala Lys Thr Phe Leu Arg 365 370 375 Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys Val Val Asn Leu 380 385 390 Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu Ala Leu Gly 395 400 405 Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe Pro Trp 410 415 420 Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser Asp 425 430 435 Tyr Ser Arg 438 配列番号11 配列の長さ：1866 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ATG AAG ATG TGG AGA CTC ACG AGG AGG GCG GTC ATC TTG GCC CGG 45 GTT GGC TGT GTT CCG GCC GCA GAG CAC CGT CTG CGT GAG GAG ATC 90 CTG GCC AAG TTC CTG CAC TGG CTG ATG AGT GTG TAC GTC GTC GAG 135 CTG CTC AGG TCT TTC TTT TAT GTC ACG GAG ACC ACG TTT CAA AAG 180 AAC AGG CTC TTT TTC TAC CGG AAG AGT GTC TGG AGC AAG TTG CAA 225 AGC ATT GGA ATC AGA CAG CAC TTG AAG AGG GTG CAG CTG CGG GAG 270 CTG TCG GAA GCA GAG GTC AGG CAG CAT CGG GAA GCC AGG CCC GCC 315 CTG CTG ACG TCC AGA CTC CGC TTC ATC CCC AAG CCT GAC GGG CTG 360 CGG CCG ATT GTG AAC ATG GAC TAC GTC GTG GGA GCC AGA ACG TTC 405 CGC AGA GAA AAG AGG GCC GAG CGT CTC ACC TCG AGG GTG AAG GCA 450 CTG TTC AGC GTG CTC AAC TAC GAG CGG GCG CGG CGC CCC GGC CTC 495 CTG GGC GCC TCT GTG CTG GGC CTG GAC GAT ATC CAC AGG GCC TGG 540 CGC ACC TTC GTG CTG CGT GTG CGG GCC CAG GAC CCG CCG CCT GAG 585 CTG TAC TTT GTC AAG GTG GAT GTG ACG GGC GCG TAC GAC ACC ATC 630 CCC CAG GAC AGG CTC ACG GAG GTC ATC GCC AGC ATC ATC AAA CCC 675 CAG AAC ACG TAC TGC GTG CGT CGG TAT GCC GTG GTC CAG AAG GCC 720 GCC CAT GGG CAC GTC CGC AAG GCC TTC AAG AGC CAC GTC TCT ACC 765 TTG ACA GAC CTC CAG CCG TAC ATG CGA CAG TTC GTG GCT CAC CTG 810 CAG GAG ACC AGC CCG CTG AGG GAT GCC GTC GTC ATC GAG CAG AGC 855 TCC TCC CTG AAT GAG GCC AGC AGT GGC CTC TTC GAC GTC TTC CTA 900 CGC TTC ATG TGC CAC CAC GCC GTG CGC ATC AGG GGC AAG TCC TAC 945 GTC CAG TGC CAG GGG ATC CCG CAG GGC TCC ATC CTC TCC ACG CTG 990 CTC TGC AGC CTG TGC TAC GGC GAC ATG GAG AAC AAG CTG TTT GCG 1035 GGG ATT CGG CGG GAC GGG CTG CTC CTG CGT TTG GTG GAT GAT TTC 1080 TTG TTG GTG ACA CCT CAC CTC ACC CAC GCG AAA ACC TTC CTC AGG 1125 ACC CTG GTC CGA GGT GTC CCT GAG TAT GGC TGC GTG GTG AAC TTG 1170 CGG AAG ACA GTG GTG AAC TTC CCT GTA GAA GAC GAG GCC CTG GGT 1215 GGC ACG GCT TTT GTT CAG ATG CCG GCC CAC GGC CTA TTC CCC TGG 1260 TGC GGC CTG CTG CTG GAT ACC CGG ACC CTG GAG GTG CAG AGC GAC 1305 TAC TCC AGC TAT GCC CGG ACC TCC ATC AGA GCC AGT CTC ACC TTC 1350 AAC CGC GGC TTC AAG GCT GGG AGG AAC ATG CGT CGC AAA CTC TTT 1395 GGG GTC TTG CGG CTG AAG TGT CAC AGC CTG TTT CTG GAT TTG CAG 1440 GTG AAC AGC CTC CAG ACG GTG TGC ACC AAC ATC TAC AAG ATC CTC 1485 CTG CTG CAG GCG TAC AGG TTT CAC GCA TGT GTG CTG CAG CTC CCA 1530 TTT CAT CAG CAA GTT TGG AAG AAC CCC ACA TTT TTC CTG CGC GTC 1575 ATC TCT GAC ACG GCC TCC CTC TGC TAC TCC ATC CTG AAA GCC AAG 1620 AAC GCA GGG ATG TCG CTG GGG GCC AAG GGC GCC GCC GGC CCT CTG 1665 CCC TCC GAG GCC GTG CAG TGG CTG TGC CAC CAA GCA TTC CTG CTC 1710 AAG CTG ACT CGA CAC CGT GTC ACC TAC GTG CCA CTC CTG GGG TCA 1755 CTC AGG ACA GCC CAG ACG CAG CTG AGT CGG AAG CTC CCG GGG ACG 1800 ACG CTG ACT GCC CTG GAG GCC GCA GCC AAC CCG GCA CTG CCC TCA 1845 GAC TTC AAG ACC ATC CTG GAC 1866 配列番号：12 配列の長さ：622 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Lys Met Trp Arg Leu Thr Arg Arg Ala Val Ile Leu Ala Arg 5 10 15 Val Gly Cys Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile 20 25 30 Leu Ala Lys Phe Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu 35 40 45 Leu Leu Arg Ser Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys 50 55 60 Asn Arg Leu Phe Phe Tyr Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln 65 70 75 Ser Ile Gly Ile Arg Gln His Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu 80 85 90 Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln His Arg Glu Ala Arg Pro Ala 95 100 105 Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys Pro Asp Gly Leu 110 115 120 Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val Gly Ala Arg Thr Phe 125 130 135 Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser Arg Val Lys Ala 140 145 150 Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu 155 160 165 Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg Ala Trp 170 175 180 Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro Glu 185 190 195 Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile 200 205 210 Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro 215 220 225 Gln Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala 230 235 240 Ala His Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr 245 250 255 Leu Thr Asp Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu 260 265 270 Gln Glu Thr Ser Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser 275 280 285 Ser Ser Leu Asn Glu Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu 290 295 300 Arg Phe Met Cys His His Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr 305 310 315 Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu 320 325 330 Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala 335 340 345 Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu Arg Leu Val Asp Asp Phe 350 355 360 Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala Lys Thr Phe Leu Arg 365 370 375 Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys Val Val Asn Leu 380 385 390 Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu Ala Leu Gly 395 400 405 Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe Pro Trp 410 415 420 Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser Asp 425 430 435 Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe 440 445 450 Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe 455 460 465 Gly Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln 470 475 480 Val Asn Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu 485 490 495 Leu Leu Gln Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro 500 505 510 Phe His Gln Gln Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val 515 520 525 Ile Ser Asp Thr Ala Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys 530 535 540 Asn Ala Gly Met Ser Leu Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu 545 550 555 Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu 560 565 570 Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser 575 580 585 Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser Arg Lys Leu Pro Gly Thr 590 595 600 Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ser 605 610 615 Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp 620 622 配列番号13 配列の長さ：37 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 CTGAAAAACT CATATATTCA GTATTTTACT CCCACAG 37

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、テロメラーゼ活性と、ＣＲＴ−１遺伝
子発現の相関を示す電気泳動写真である。ここでPC93,C
OLO203,HCT-15,DU145,LNCap,PC3,MCF7,SC6,HL60,WI-38
とはそれぞれ、前立腺癌、大腸癌、大腸癌、前立腺癌、
前立腺癌、前立腺癌、乳癌、胃癌、前骨髄性白血病細
胞、及び肺由来の細胞株を示し、またtestisは精巣（組
織）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 9/99 9/99 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 21/08 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/574 Ｄ 33/574 33/577 Ｂ 33/577 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１に記載の塩基配列を
   有するCRT-1遺伝子。
2. 【請求項２】 配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配
   列からなるタンパク質をコードする遺伝子。
3. 【請求項３】 配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配
   列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若し
   くは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ逆転写酵素
   活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。
4. 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の遺
   伝子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、
   かつ逆転写酵素活性を有するタンパク質をコードする遺
   伝子。
5. 【請求項５】 配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配
   列を有するタンパク質。
6. 【請求項６】 配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配
   列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若し
   くは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ逆転写酵素
   活性を有するタンパク質。
7. 【請求項７】 請求項５又は６のいずれか１項に記載の
   タンパク質に対する抗体。
8. 【請求項８】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の遺
   伝子のアンチセンス鎖の塩基配列を含むオリゴヌクレオ
   チド。
9. 【請求項９】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の遺
   伝子を検出することを特徴とする癌細胞検出方法。
10. 【請求項１０】 請求項７に記載のタンパク質に対する
    抗体を用いることを特徴とする癌細胞検出方法。
11. 【請求項１１】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の
    塩基配列を含むオリゴヌクレオチドを有する逆転写酵素
    活性阻害剤。
12. 【請求項１２】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の
    塩基配列を含むオリゴヌクレオチドを用いる逆転写酵素
    活性阻害剤のスクリーニング方法。
13. 【請求項１３】 請求項９又は１０のいずれか１項に記
    載の方法を用いた癌の診断方法。
14. 【請求項１４】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の
    遺伝子に対して相補的なプローブを含有する癌診断薬。
15. 【請求項１５】 請求項７に記載の抗体を含有する癌診
    断薬。