JPH1118779A - 新規核酸及びそのエイズ発症抑制剤としての用途 - Google Patents
新規核酸及びそのエイズ発症抑制剤としての用途Info
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- JPH1118779A JPH1118779A JP9193239A JP19323997A JPH1118779A JP H1118779 A JPH1118779 A JP H1118779A JP 9193239 A JP9193239 A JP 9193239A JP 19323997 A JP19323997 A JP 19323997A JP H1118779 A JPH1118779 A JP H1118779A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 種々のＨＩＶに対して有効な、エイズの発症
を抑制する手段を提供すること。 【解決手段】 配列表の配列番号２で示される塩基配列
又は該塩基配列のうちの１個ないし数個の塩基が置換、
欠失又は挿入された塩基配列であって、アンチサイレン
サー因子との結合能を有する塩基配列から成る核酸領域
を含む核酸を提供した。
を抑制する手段を提供すること。 【解決手段】 配列表の配列番号２で示される塩基配列
又は該塩基配列のうちの１個ないし数個の塩基が置換、
欠失又は挿入された塩基配列であって、アンチサイレン
サー因子との結合能を有する塩基配列から成る核酸領域
を含む核酸を提供した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規核酸及び該核
酸のエイズ発症抑制剤としての用途に関する。
酸のエイズ発症抑制剤としての用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】エイズの原因ウイルスはＨＩＶ（human
immunodeficiency virus) であり、ＣＤ４分子を発現し
ているヘルパーＴ細胞やマクロファージに特異的に感染
する。ＨＩＶは通常、宿主の染色体中に組込まれ、臨床
症状のない不顕性感染の状態となる。その後、種々の原
因でウイルスの増殖が起るとヘルパーＴ細胞の減少、免
疫機能の低下が起り、日和見感染や悪性腫瘍の好発を特
徴とするエイズが発症する。
immunodeficiency virus) であり、ＣＤ４分子を発現し
ているヘルパーＴ細胞やマクロファージに特異的に感染
する。ＨＩＶは通常、宿主の染色体中に組込まれ、臨床
症状のない不顕性感染の状態となる。その後、種々の原
因でウイルスの増殖が起るとヘルパーＴ細胞の減少、免
疫機能の低下が起り、日和見感染や悪性腫瘍の好発を特
徴とするエイズが発症する。
【０００３】これまでのエイズ治療法は、抗ウイルス剤
とワクチンの開発が主であった。ＨＩＶの逆転写酵素を
阻害するＡＺＴやｄｄＩは臨床試験でもエイズの進行を
遅らせる効果があることが確認されているが、重篤な副
作用や、薬剤耐性のウイルスの出現等の問題点がある。
また、ワクチン療法も、ＨＩＶ遺伝子が急速に変異を蓄
積していくために、その効果は一過性であり、実用化の
めどは立っていない。その他、可溶性ＣＤ４、インター
フェロン等の研究が行われているが、期待される効果は
得られていない。
とワクチンの開発が主であった。ＨＩＶの逆転写酵素を
阻害するＡＺＴやｄｄＩは臨床試験でもエイズの進行を
遅らせる効果があることが確認されているが、重篤な副
作用や、薬剤耐性のウイルスの出現等の問題点がある。
また、ワクチン療法も、ＨＩＶ遺伝子が急速に変異を蓄
積していくために、その効果は一過性であり、実用化の
めどは立っていない。その他、可溶性ＣＤ４、インター
フェロン等の研究が行われているが、期待される効果は
得られていない。
【０００４】現在、エイズの遺伝子治療としては以下の
方法がある。先ず、ＨＩＶの増殖を阻止できるような抗
ＨＩＶ遺伝子を導入する方法である。例えば、ＨＩＶ遺
伝子のｍＲＮＡと相補的な配列を持つアンチセンスヌク
レオチドである。アンチセンスとの結合により、遺伝情
報の発現を抑制する。また、ＲＮＡを切断するリボザイ
ムをアンチセンスと組み合わせ、標的とするｍＲＮＡを
切断する方法も考案されている。これらの方法では、生
体内でアンチセンスやリボザイムの安定性が低いことが
問題点である。また、ウイルスタンパクであるＧａｇや
Ｅｎｖ、Ｒｅｖの変異タンパクを細胞内で産生させ、正
常タンパクの機能を阻害し、感染性のあるウイルスの産
生を阻止しようという方法があるが、現在、in vitroで
の効果の検討が主であり、Ｒｅｖの変異体を用いた臨床
試験が始まったばかりである。また、最近、ＨＩＶ遺伝
子を組込んだベクターをマウスや、サル等に注射し、Ｈ
ＩＶに特異的な細胞障害性Ｔ細胞や抗体を誘導する、Ｄ
ＮＡワクチン療法が開発された。誘導される免疫反応に
は交差反応が認められ、その点では通常のワクチン療法
よりも優れているが、免疫応答の程度には個体差が著し
く、効果の見られない場合もまれではない。
方法がある。先ず、ＨＩＶの増殖を阻止できるような抗
ＨＩＶ遺伝子を導入する方法である。例えば、ＨＩＶ遺
伝子のｍＲＮＡと相補的な配列を持つアンチセンスヌク
レオチドである。アンチセンスとの結合により、遺伝情
報の発現を抑制する。また、ＲＮＡを切断するリボザイ
ムをアンチセンスと組み合わせ、標的とするｍＲＮＡを
切断する方法も考案されている。これらの方法では、生
体内でアンチセンスやリボザイムの安定性が低いことが
問題点である。また、ウイルスタンパクであるＧａｇや
Ｅｎｖ、Ｒｅｖの変異タンパクを細胞内で産生させ、正
常タンパクの機能を阻害し、感染性のあるウイルスの産
生を阻止しようという方法があるが、現在、in vitroで
の効果の検討が主であり、Ｒｅｖの変異体を用いた臨床
試験が始まったばかりである。また、最近、ＨＩＶ遺伝
子を組込んだベクターをマウスや、サル等に注射し、Ｈ
ＩＶに特異的な細胞障害性Ｔ細胞や抗体を誘導する、Ｄ
ＮＡワクチン療法が開発された。誘導される免疫反応に
は交差反応が認められ、その点では通常のワクチン療法
よりも優れているが、免疫応答の程度には個体差が著し
く、効果の見られない場合もまれではない。
【０００５】さらに、ＨＩＶがリンパ球内に侵入するの
を防止する方法として、可溶性のＣＤ４レセプターを投
与する方法も提案されている。すなわち、ＨＩＶは、ヘ
ルパーＴ細胞上に発現しているＣＤ４レセプターを介し
てヘルパーＴ細胞内に侵入することが知られており、可
溶性ＣＤ４レセプターを投与することにより、ＨＩＶを
この可溶性ＣＤ４レセプターと結合させてしまい、それ
によってＨＩＶがヘルパーＴ細胞上のＣＤ４レセプター
と結合して該細胞内に侵入することを阻止しようという
方法である。しかしながら、この方法では、ＨＩＶ株に
よりその効果が異なり、特にprimary isolatesのウイル
スの感染阻止にはあまり効果がないことが知られてい
る。
を防止する方法として、可溶性のＣＤ４レセプターを投
与する方法も提案されている。すなわち、ＨＩＶは、ヘ
ルパーＴ細胞上に発現しているＣＤ４レセプターを介し
てヘルパーＴ細胞内に侵入することが知られており、可
溶性ＣＤ４レセプターを投与することにより、ＨＩＶを
この可溶性ＣＤ４レセプターと結合させてしまい、それ
によってＨＩＶがヘルパーＴ細胞上のＣＤ４レセプター
と結合して該細胞内に侵入することを阻止しようという
方法である。しかしながら、この方法では、ＨＩＶ株に
よりその効果が異なり、特にprimary isolatesのウイル
スの感染阻止にはあまり効果がないことが知られてい
る。
【０００６】また、ＨＩＶのコレセプターであるケモカ
インレセプター（ＣＣＲ５、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４レセ
プターなど）が、ＨＩＶの細胞指向性にも関与している
ことが明かになり、これらコレセプターの発現を抑制し
てウイルスエントリーを阻止する可能性が考えられた
が、ある特定のコレセプターの発現が抑制できても生体
内ではすぐに代替のレセプターに適応したウイルスが増
殖してくることが明らかになった。
インレセプター（ＣＣＲ５、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４レセ
プターなど）が、ＨＩＶの細胞指向性にも関与している
ことが明かになり、これらコレセプターの発現を抑制し
てウイルスエントリーを阻止する可能性が考えられた
が、ある特定のコレセプターの発現が抑制できても生体
内ではすぐに代替のレセプターに適応したウイルスが増
殖してくることが明らかになった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、種々のＨＩＶに対して有効な、エイズの発症を抑制
する手段を提供することである。
は、種々のＨＩＶに対して有効な、エイズの発症を抑制
する手段を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】分化、成熟したヘルパー
Ｔ細胞上のＣＤ４分子は、通常安定発現しており、抗原
刺激後もその発現は維持されている。サル類には野生状
態でエイズ様ウイルス、ＳＩＶ（simian immunodeficie
ncy virus)に感染している例が知られている。その中で
もアフリカミドリザルは特に注目されている。このサル
はアフリカのサバンナに生息しており、野生ザルの３０
〜５０％もの個体がＳＩＶａｇｍ（アフリカミドリザル
由来のＳＩＶ）に感染しているにもかかわらず、エイズ
発症例が観察されていない。実験感染例でも、ウイルス
感染はするが、エイズの発症には至らない。
Ｔ細胞上のＣＤ４分子は、通常安定発現しており、抗原
刺激後もその発現は維持されている。サル類には野生状
態でエイズ様ウイルス、ＳＩＶ（simian immunodeficie
ncy virus)に感染している例が知られている。その中で
もアフリカミドリザルは特に注目されている。このサル
はアフリカのサバンナに生息しており、野生ザルの３０
〜５０％もの個体がＳＩＶａｇｍ（アフリカミドリザル
由来のＳＩＶ）に感染しているにもかかわらず、エイズ
発症例が観察されていない。実験感染例でも、ウイルス
感染はするが、エイズの発症には至らない。
【０００９】本願発明者は、アフリカミドリザルにおけ
るエイズ発症抑制機構が明らかになれば、これをヒトに
応用することにより、ヒトのエイズの発症を抑制するこ
とができるのではないかと考えた。そこで、このサルに
おけるＣＤ４分子、遺伝子の発現を解析した結果、以下
のことが明らかになった。アフリカミドリザルＣＤ４
細胞は、抗原刺激等によりリンパ球活性化後、ＣＤ４分
子が細胞表面から消失する、ＣＤ４分子消失はＣＤ４
遺伝子の転写抑制による、アフリカミドリザル生体内
にはＣＤ４陰性のヘルパー活性を持つ細胞群が分化して
いる、ＣＤ４陰性となったヘルパーＴ細胞はＳＩＶ感
染に抵抗性を示す。これらの結果は、アフリカミドリザ
ルヘルパーＴ細胞が抗原刺激後、その細胞表面からＣＤ
４分子を失い、ＣＤ４陰性のヘルパーＴ細胞となって末
梢を循環することを示唆している。また、ＳＩＶもＣＤ
４分子をウイルスレセプターとして使用しているので、
このＣＤ４陰性ヘルパーＴ細胞はウイルス感染を免れる
ことになり、ヘルパーＴ細胞の減少に基づく致命的免疫
不全状態を回避できるようになる。このＣＤ４分子隠蔽
機構のために、アフリカミドリザルはＳＩＶ感染しても
発症しないと考えた。
るエイズ発症抑制機構が明らかになれば、これをヒトに
応用することにより、ヒトのエイズの発症を抑制するこ
とができるのではないかと考えた。そこで、このサルに
おけるＣＤ４分子、遺伝子の発現を解析した結果、以下
のことが明らかになった。アフリカミドリザルＣＤ４
細胞は、抗原刺激等によりリンパ球活性化後、ＣＤ４分
子が細胞表面から消失する、ＣＤ４分子消失はＣＤ４
遺伝子の転写抑制による、アフリカミドリザル生体内
にはＣＤ４陰性のヘルパー活性を持つ細胞群が分化して
いる、ＣＤ４陰性となったヘルパーＴ細胞はＳＩＶ感
染に抵抗性を示す。これらの結果は、アフリカミドリザ
ルヘルパーＴ細胞が抗原刺激後、その細胞表面からＣＤ
４分子を失い、ＣＤ４陰性のヘルパーＴ細胞となって末
梢を循環することを示唆している。また、ＳＩＶもＣＤ
４分子をウイルスレセプターとして使用しているので、
このＣＤ４陰性ヘルパーＴ細胞はウイルス感染を免れる
ことになり、ヘルパーＴ細胞の減少に基づく致命的免疫
不全状態を回避できるようになる。このＣＤ４分子隠蔽
機構のために、アフリカミドリザルはＳＩＶ感染しても
発症しないと考えた。
【００１０】そこで、アフリカミドリザルにおけるＣＤ
４発現機構を調べるために、ＣＤ４サイレンサー領域を
クローニングし、塩基配列を決定した。その結果、アン
チサイレンサー配列の両端近傍に塩基置換が認められ
た。この配列にはある種の調節タンパク（アンチサイレ
ンサー因子）が結合することが知られており、アフリカ
ミドリザルでは塩基置換のためにこの調節タンパクが結
合できず、ＣＤ４遺伝子の発現を維持できない可能性が
考えられた。そこで、ルシフェラーゼ遺伝子をレポータ
ーに用いて、ヒト及びアフリカミドリザルのＣＤ４サイ
レンサー領域の転写調節機能を比較した。前述したよう
に、ＣＤ４細胞においてはこの領域は転写促進活性を示
す。ヒトＣＤ４細胞株にヒトＣＤ４サイレンサーを組込
んだベクターを導入するとレポーター遺伝子の発現は、
ベクターのみを導入した場合と比較して３倍近い転写促
進活性を示した。一方、アフリカミドリザルのＣＤ４サ
イレンサーを組込んだベクターではそのような転写促進
は認められず、ベクターのみを導入した場合とほぼ同じ
であった。つまり、アフリカミドリザルＣＤ４サイレン
サーにはＣＤ４遺伝子の発現に必要なアンチサイレンサ
ー活性が欠如していることを示している。この実験例で
はヒト及びアフリカミドリザルのアンチサイレンサー配
列に認められた塩基置換のためにアンチサイレンサー因
子が結合できず、そのために転写促進活性が認められな
かったと考えられる。
４発現機構を調べるために、ＣＤ４サイレンサー領域を
クローニングし、塩基配列を決定した。その結果、アン
チサイレンサー配列の両端近傍に塩基置換が認められ
た。この配列にはある種の調節タンパク（アンチサイレ
ンサー因子）が結合することが知られており、アフリカ
ミドリザルでは塩基置換のためにこの調節タンパクが結
合できず、ＣＤ４遺伝子の発現を維持できない可能性が
考えられた。そこで、ルシフェラーゼ遺伝子をレポータ
ーに用いて、ヒト及びアフリカミドリザルのＣＤ４サイ
レンサー領域の転写調節機能を比較した。前述したよう
に、ＣＤ４細胞においてはこの領域は転写促進活性を示
す。ヒトＣＤ４細胞株にヒトＣＤ４サイレンサーを組込
んだベクターを導入するとレポーター遺伝子の発現は、
ベクターのみを導入した場合と比較して３倍近い転写促
進活性を示した。一方、アフリカミドリザルのＣＤ４サ
イレンサーを組込んだベクターではそのような転写促進
は認められず、ベクターのみを導入した場合とほぼ同じ
であった。つまり、アフリカミドリザルＣＤ４サイレン
サーにはＣＤ４遺伝子の発現に必要なアンチサイレンサ
ー活性が欠如していることを示している。この実験例で
はヒト及びアフリカミドリザルのアンチサイレンサー配
列に認められた塩基置換のためにアンチサイレンサー因
子が結合できず、そのために転写促進活性が認められな
かったと考えられる。
【００１１】本願発明者は、以上の実験結果に基づき、
ヒトＣＤ４細胞からＣＤ４遺伝子の転写を抑制するに
は、このアンチサイレンサー活性が発現できないように
してやればよいことに想到した。一般的に遺伝子が発現
するためには転写因子が、遺伝子内やその近傍に位置す
る認識配列に結合することが必要である。このときに遺
伝子とは関係のない認識配列を持つ核酸が細胞内に大量
にあると転写因子と結合してしまい、本来の遺伝子の認
識配列とは結合できないために、遺伝子発現が阻害され
る。このような競合阻害を起こす核酸分子をデコイ（de
coy ）というが、ＣＤ４遺伝子の発現抑制にもこの方法
が適用できる。すなわち、アンチサイレンサー領域のＤ
ＮＡを合成し、細胞外から投与することによってＣＤ４
細胞におけるＣＤ４遺伝子の転写を抑制することが可能
になる。また、細胞外から投与する代りに、プラスミド
ベクターや、ウイルスベクターでアンチサイレンサー領
域を細胞に導入し、アンチサイレンサー因子が核内に到
達する前に、その活性を中和してしまうことによりエイ
ズ発症を抑制することもできる。
ヒトＣＤ４細胞からＣＤ４遺伝子の転写を抑制するに
は、このアンチサイレンサー活性が発現できないように
してやればよいことに想到した。一般的に遺伝子が発現
するためには転写因子が、遺伝子内やその近傍に位置す
る認識配列に結合することが必要である。このときに遺
伝子とは関係のない認識配列を持つ核酸が細胞内に大量
にあると転写因子と結合してしまい、本来の遺伝子の認
識配列とは結合できないために、遺伝子発現が阻害され
る。このような競合阻害を起こす核酸分子をデコイ（de
coy ）というが、ＣＤ４遺伝子の発現抑制にもこの方法
が適用できる。すなわち、アンチサイレンサー領域のＤ
ＮＡを合成し、細胞外から投与することによってＣＤ４
細胞におけるＣＤ４遺伝子の転写を抑制することが可能
になる。また、細胞外から投与する代りに、プラスミド
ベクターや、ウイルスベクターでアンチサイレンサー領
域を細胞に導入し、アンチサイレンサー因子が核内に到
達する前に、その活性を中和してしまうことによりエイ
ズ発症を抑制することもできる。
【００１２】すなわち、本発明は、配列表の配列番号２
で示される塩基配列又は該塩基配列のうちの１個ないし
数個の塩基が置換した塩基配列であって、アンチサイレ
ンサー因子との結合能を有する塩基配列から成る核酸領
域を含む核酸を提供する。また、本発明は、配列表の配
列番号１で示される塩基配列又は該塩基配列と８０％以
上の相同性を有する塩基配列を有し、かつ、アンチサイ
レンサー因子との結合能を有する塩基配列から成る核酸
領域を含む核酸を提供する。さらに、本発明は、上記本
発明の核酸を含む組換えベクターであって、ヒト細胞内
で該核酸を産生することができる組換えベクターを提供
する。さらに、本発明は、上記本発明の核酸を有効成分
として含有するエイズ発症抑制剤を提供する。
で示される塩基配列又は該塩基配列のうちの１個ないし
数個の塩基が置換した塩基配列であって、アンチサイレ
ンサー因子との結合能を有する塩基配列から成る核酸領
域を含む核酸を提供する。また、本発明は、配列表の配
列番号１で示される塩基配列又は該塩基配列と８０％以
上の相同性を有する塩基配列を有し、かつ、アンチサイ
レンサー因子との結合能を有する塩基配列から成る核酸
領域を含む核酸を提供する。さらに、本発明は、上記本
発明の核酸を含む組換えベクターであって、ヒト細胞内
で該核酸を産生することができる組換えベクターを提供
する。さらに、本発明は、上記本発明の核酸を有効成分
として含有するエイズ発症抑制剤を提供する。
【００１３】
【発明の実施の形態】下記実施例において詳述する方法
により決定したアフリカミドリザル（ＡＧＭ）のＣＤ４
遺伝子の塩基配列及びアカゲザル（Ｒｈ）のＣＤ４サイ
レンサー領域の塩基配列を、ヒトのＣＤ４遺伝子の塩基
配列と共に図１に示す。また、図１に示されるヒトのＣ
Ｄ４遺伝子の塩基配列を配列表の配列番号１に示す。な
お、図１中、サルの配列の「−」はヒトと同一の塩基で
あることを示す。ヒトＣＤ４サイレンサー領域内には、
２ケ所の調節タンパクの結合部位が同定されており、そ
の１つはＦＰＩサイト（CCACCAACCACAAGA)であり、もう
１つはＦＰIIサイト(CTAGTCAGCAGTAGAGAGGG)である。Ｆ
ＰＩサイトは、ヒト、アフリカミドリザル及びアカゲザ
ルの全てにおいて保存されている（すなわち塩基配列が
同一）のに対し、ＦＰIIサイトでは、アフリカミドリザ
ルとヒトの間では該サイトの両端近傍に各１ケ所、合計
２ケ所の塩基置換があり、アカゲザルでは、これらのう
ち１ケ所の塩基置換のみが存在した。そして、下記実施
例において測定した、ルシフェラーゼ遺伝子をレポータ
ー遺伝子として用いた転写促進活性の測定試験では、ヒ
トのＣＤ４サイレンサー領域が最も転写促進活性が強
く、アフリカミドリザルが最も弱く、アカゲザルはこれ
らの中間であった。このことから、アフリカミドリザル
におけるＣＤ４遺伝子のアンチサイレンサー活性はＦＰ
IIサイトにあることが示された。ＦＰIIサイトは、図１
中の四角で囲まれた部分であり、また、この部分の塩基
配列を取出して配列表の配列番号２に示す。
により決定したアフリカミドリザル（ＡＧＭ）のＣＤ４
遺伝子の塩基配列及びアカゲザル（Ｒｈ）のＣＤ４サイ
レンサー領域の塩基配列を、ヒトのＣＤ４遺伝子の塩基
配列と共に図１に示す。また、図１に示されるヒトのＣ
Ｄ４遺伝子の塩基配列を配列表の配列番号１に示す。な
お、図１中、サルの配列の「−」はヒトと同一の塩基で
あることを示す。ヒトＣＤ４サイレンサー領域内には、
２ケ所の調節タンパクの結合部位が同定されており、そ
の１つはＦＰＩサイト（CCACCAACCACAAGA)であり、もう
１つはＦＰIIサイト(CTAGTCAGCAGTAGAGAGGG)である。Ｆ
ＰＩサイトは、ヒト、アフリカミドリザル及びアカゲザ
ルの全てにおいて保存されている（すなわち塩基配列が
同一）のに対し、ＦＰIIサイトでは、アフリカミドリザ
ルとヒトの間では該サイトの両端近傍に各１ケ所、合計
２ケ所の塩基置換があり、アカゲザルでは、これらのう
ち１ケ所の塩基置換のみが存在した。そして、下記実施
例において測定した、ルシフェラーゼ遺伝子をレポータ
ー遺伝子として用いた転写促進活性の測定試験では、ヒ
トのＣＤ４サイレンサー領域が最も転写促進活性が強
く、アフリカミドリザルが最も弱く、アカゲザルはこれ
らの中間であった。このことから、アフリカミドリザル
におけるＣＤ４遺伝子のアンチサイレンサー活性はＦＰ
IIサイトにあることが示された。ＦＰIIサイトは、図１
中の四角で囲まれた部分であり、また、この部分の塩基
配列を取出して配列表の配列番号２に示す。
【００１４】従って、配列表の配列番号２に示す塩基配
列から成る核酸領域を含む核酸は、アンチサイレンサー
因子と結合することができるので、これをデコイとして
用いることにより、ＣＤ４遺伝子の発現を抑制すること
ができ、ひいてはエイズの発症を抑制することができ
る。配列番号２に示す塩基配列から成る核酸領域を含む
核酸は、この２０塩基の核酸のみから成っていてもよい
し、この両端又は一端に他の塩基配列が結合したもので
もよい。配列番号２に示す塩基配列の両端又は一端に結
合される核酸領域は、任意の塩基配列を有していてよ
い。もっとも、配列番号２に示す塩基配列及びその両端
又は一端に他の核酸が結合して成る核酸は、配列番号１
に示される配列の一部分であることが好ましい。核酸の
サイズは配列番号２で示される領域が含まれてさえおれ
ば特に限定されないが、あまりに大きくてもそれによる
利点がないので、通常、２０塩基からＣＤ４サイレンサ
ーの全体である５１３塩基程度が好ましい。
列から成る核酸領域を含む核酸は、アンチサイレンサー
因子と結合することができるので、これをデコイとして
用いることにより、ＣＤ４遺伝子の発現を抑制すること
ができ、ひいてはエイズの発症を抑制することができ
る。配列番号２に示す塩基配列から成る核酸領域を含む
核酸は、この２０塩基の核酸のみから成っていてもよい
し、この両端又は一端に他の塩基配列が結合したもので
もよい。配列番号２に示す塩基配列の両端又は一端に結
合される核酸領域は、任意の塩基配列を有していてよ
い。もっとも、配列番号２に示す塩基配列及びその両端
又は一端に他の核酸が結合して成る核酸は、配列番号１
に示される配列の一部分であることが好ましい。核酸の
サイズは配列番号２で示される領域が含まれてさえおれ
ば特に限定されないが、あまりに大きくてもそれによる
利点がないので、通常、２０塩基からＣＤ４サイレンサ
ーの全体である５１３塩基程度が好ましい。
【００１５】また、一般に、生理活性を有する核酸にお
いて、その塩基配列のうち、少数の塩基が置換し、欠失
し又は挿入された場合であっても、その生理活性が維持
される場合があることは当業者に広く知られている。従
って、配列番号２で示される塩基配列のうち、１個又は
数個の塩基が置換、欠失又は挿入されている場合であっ
ても、アンチサイレンサー因子との結合活性を有するも
のは、本発明の範囲に含まれる。なお、アンチサイレン
サー因子との結合活性は、例えば、下記実施例に詳述す
る、レポーター遺伝子を用いた転写促進活性の測定試験
により調べることができる。
いて、その塩基配列のうち、少数の塩基が置換し、欠失
し又は挿入された場合であっても、その生理活性が維持
される場合があることは当業者に広く知られている。従
って、配列番号２で示される塩基配列のうち、１個又は
数個の塩基が置換、欠失又は挿入されている場合であっ
ても、アンチサイレンサー因子との結合活性を有するも
のは、本発明の範囲に含まれる。なお、アンチサイレン
サー因子との結合活性は、例えば、下記実施例に詳述す
る、レポーター遺伝子を用いた転写促進活性の測定試験
により調べることができる。
【００１６】さらに、配列番号１に示されたＣＤ４サイ
レンサー領域は、少なくともその全体でアンチサイレン
サー因子との結合能を有することが下記実施例において
実験的に確認されたので、このＣＤ４サイレンサー領域
を含む核酸をデコイとして用いることによりエイズの発
症を抑制できることは明らかである。この場合も、上記
と同様、少数の塩基が置換し、欠失し又は挿入されてい
てもアンチサイレンサー因子との結合能が維持される場
合があると考えられるので、配列番号１で示される塩基
配列と８０％以上の相同性を有する塩基配列を有し、か
つ、アンチサイレンサー因子との結合能を有する塩基配
列から成る核酸領域を含む核酸も本願発明の範囲に含ま
れる。この相同性は高い方が好ましく、従って、好まし
くは９５％以上であり、さらに好ましくは９８％以上で
あり、最も好ましくは１００％（すなわち配列番号１で
示される配列）である。また、配列番号１で示される塩
基配列を有する核酸のみから成るものであってもよい
し、この両端又は一端に他の核酸領域が結合したもので
あってもよい。もっとも、配列番号１で示される塩基配
列の両端又は一端に結合される他の核酸領域は必要なも
のではなく、その塩基配列も任意のものであってよい。
レンサー領域は、少なくともその全体でアンチサイレン
サー因子との結合能を有することが下記実施例において
実験的に確認されたので、このＣＤ４サイレンサー領域
を含む核酸をデコイとして用いることによりエイズの発
症を抑制できることは明らかである。この場合も、上記
と同様、少数の塩基が置換し、欠失し又は挿入されてい
てもアンチサイレンサー因子との結合能が維持される場
合があると考えられるので、配列番号１で示される塩基
配列と８０％以上の相同性を有する塩基配列を有し、か
つ、アンチサイレンサー因子との結合能を有する塩基配
列から成る核酸領域を含む核酸も本願発明の範囲に含ま
れる。この相同性は高い方が好ましく、従って、好まし
くは９５％以上であり、さらに好ましくは９８％以上で
あり、最も好ましくは１００％（すなわち配列番号１で
示される配列）である。また、配列番号１で示される塩
基配列を有する核酸のみから成るものであってもよい
し、この両端又は一端に他の核酸領域が結合したもので
あってもよい。もっとも、配列番号１で示される塩基配
列の両端又は一端に結合される他の核酸領域は必要なも
のではなく、その塩基配列も任意のものであってよい。
【００１７】本発明の核酸は、その塩基数が少ない場合
（２００個以下）には、市販の核酸合成機を用いて合成
することが可能であり、また、塩基数が多い場合には、
ヒト末梢リンパ球のＤＮＡを鋳型として用いるＰＣＲに
より容易に調製することができる。また、本発明の核酸
は、ＤＮＡでもＲＮＡでもよいが、ＤＮＡの方が安定性
が高いので好ましい。さらに、安定性や吸収率が改善さ
れたＰＮＡ等の修飾核酸であることも好ましい。
（２００個以下）には、市販の核酸合成機を用いて合成
することが可能であり、また、塩基数が多い場合には、
ヒト末梢リンパ球のＤＮＡを鋳型として用いるＰＣＲに
より容易に調製することができる。また、本発明の核酸
は、ＤＮＡでもＲＮＡでもよいが、ＤＮＡの方が安定性
が高いので好ましい。さらに、安定性や吸収率が改善さ
れたＰＮＡ等の修飾核酸であることも好ましい。
【００１８】本発明の核酸は、エイズに感染している患
者にデコイとして外部から投与することにより、エイズ
の発症を抑制することができる。投与経路は、静脈内投
与、筋肉内投与、経腸投与等の非経口投与が好ましい。
また、投与量は、患者の状態等により異なるが、通常体
重１ｋｇ、１日当り本発明の核酸を0.001 mmol〜1000mm
ol 程度投与する。本発明の核酸は、例えば生理食塩水
に溶解する等の常法に基づき製剤することができ、他の
エイズ治療薬と併用することも可能である。
者にデコイとして外部から投与することにより、エイズ
の発症を抑制することができる。投与経路は、静脈内投
与、筋肉内投与、経腸投与等の非経口投与が好ましい。
また、投与量は、患者の状態等により異なるが、通常体
重１ｋｇ、１日当り本発明の核酸を0.001 mmol〜1000mm
ol 程度投与する。本発明の核酸は、例えば生理食塩水
に溶解する等の常法に基づき製剤することができ、他の
エイズ治療薬と併用することも可能である。
【００１９】本発明の核酸は、上記のように外部から投
与してもよいし、あるいは、ヒト細胞内で複製可能なベ
クターに組込みんで患者に投与し、患者の体内で該組換
えベクターにより本発明の核酸を生産してもよい。ヒト
に対する遺伝子治療に用いられるプラスミドベクターや
ウイルスベクターは既にこの分野において周知であり、
そのマルチクローニング部位に本発明の核酸を組込むこ
とにより本発明の組換えベクターが得られる。
与してもよいし、あるいは、ヒト細胞内で複製可能なベ
クターに組込みんで患者に投与し、患者の体内で該組換
えベクターにより本発明の核酸を生産してもよい。ヒト
に対する遺伝子治療に用いられるプラスミドベクターや
ウイルスベクターは既にこの分野において周知であり、
そのマルチクローニング部位に本発明の核酸を組込むこ
とにより本発明の組換えベクターが得られる。
【００２０】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に
説明する。もっとも、本発明は、下記実施例に限定され
るものではない。
説明する。もっとも、本発明は、下記実施例に限定され
るものではない。
【００２１】材料及び方法 ＣＤ４サイレンサー塩基配列の決定 アフリカミドリザル（ＡＧＭ）及びアカゲザル（Ｒｈ）
のＣＤ４サイレンサー領域をクローニングし、塩基配列
を決定した。ＡＧＭ及びＲｈの末梢リンパ球から分離し
たＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲを行ない、ＣＤ４
サイレンサー領域を増幅した。ＰＣＲに用いたプライマ
ーは既に報告されているヒト塩基配列をもとに設計した
（フォワードプライマー：TCTGAGTTTGAGCTCTGTTC、リバ
ースプライマー：CAAAGCGCAGGGTAGTAC) 。得られたＰＣ
Ｒ産物を精製後、pCR-TRAPクローニングベクターに組込
んだ。E. coli HB101 コンピテント細胞を用いてトラン
スフォーメーションを行なった。各々の大腸菌コロニー
に含まれるプラスミドについてＰＣＲ法でインサートチ
ェックを行ない、そのＰＣＲ産物のサイズからＣＤ４サ
イレンサー領域を含まれると思われるプラスミドを持つ
コロニーを得た。得られたＰＣＲ産物を精製して、Perk
in Elmer DNA sequencer 377を用いてdye-terminator法
により塩基配列を解析した。
のＣＤ４サイレンサー領域をクローニングし、塩基配列
を決定した。ＡＧＭ及びＲｈの末梢リンパ球から分離し
たＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲを行ない、ＣＤ４
サイレンサー領域を増幅した。ＰＣＲに用いたプライマ
ーは既に報告されているヒト塩基配列をもとに設計した
（フォワードプライマー：TCTGAGTTTGAGCTCTGTTC、リバ
ースプライマー：CAAAGCGCAGGGTAGTAC) 。得られたＰＣ
Ｒ産物を精製後、pCR-TRAPクローニングベクターに組込
んだ。E. coli HB101 コンピテント細胞を用いてトラン
スフォーメーションを行なった。各々の大腸菌コロニー
に含まれるプラスミドについてＰＣＲ法でインサートチ
ェックを行ない、そのＰＣＲ産物のサイズからＣＤ４サ
イレンサー領域を含まれると思われるプラスミドを持つ
コロニーを得た。得られたＰＣＲ産物を精製して、Perk
in Elmer DNA sequencer 377を用いてdye-terminator法
により塩基配列を解析した。
【００２２】ルシフェラーゼプロモーターベクターコン
ストラクトの作製 ルシフェラーゼ遺伝子を含むプロモーターベクターにＣ
Ｄ４サイレンサー領域を組込み、レポータージーンアッ
セイで転写調節能を比較した。ベクターのMluI制限酵素
部位に組込むため、両端にMluI部位を持つＣＤ４サイレ
ンサー配列を準備した。決定した塩基配列をもとに、Ml
u 認識部位を持つプライマーを設計した（ヒトフォワー
ドプライマー：AGCTACGCGTACTTTTGAGGGGATGAGGGAAGGAGG
G 、ＡＧＭ及びＲｈフォワードプライマー：AGCTACGCGT
ATCTTTGAGGGGATGAGGGGAGGAGGG 、リバースプライマー：
CATTTGCGCAACAAAAAAAGAGGAAAAGAAGAAATTC)。ヒト、ＡＧ
Ｍ及びＲｈのＣＤ４サイレンサー領域をクローニングし
たプラスミドをテンプレートとして用い、ＰＣＲを行な
った。得られたＰＣＲ産物をMluIで３７℃、１．５時間
処理して接着末端とし、精製した。
ストラクトの作製 ルシフェラーゼ遺伝子を含むプロモーターベクターにＣ
Ｄ４サイレンサー領域を組込み、レポータージーンアッ
セイで転写調節能を比較した。ベクターのMluI制限酵素
部位に組込むため、両端にMluI部位を持つＣＤ４サイレ
ンサー配列を準備した。決定した塩基配列をもとに、Ml
u 認識部位を持つプライマーを設計した（ヒトフォワー
ドプライマー：AGCTACGCGTACTTTTGAGGGGATGAGGGAAGGAGG
G 、ＡＧＭ及びＲｈフォワードプライマー：AGCTACGCGT
ATCTTTGAGGGGATGAGGGGAGGAGGG 、リバースプライマー：
CATTTGCGCAACAAAAAAAGAGGAAAAGAAGAAATTC)。ヒト、ＡＧ
Ｍ及びＲｈのＣＤ４サイレンサー領域をクローニングし
たプラスミドをテンプレートとして用い、ＰＣＲを行な
った。得られたＰＣＲ産物をMluIで３７℃、１．５時間
処理して接着末端とし、精製した。
【００２３】一方、ルシフェラーゼレポーターアッセイ
用プロモーターベクターであるPGV-P2（和光純薬工業株
式会社より市販）をMluIで３７℃、３時間処理し、プラ
スミドを切断した。セルフライゲーションを防ぐため、
アルカリフォスファターゼ処理を行なった。このプラス
ミドと、各霊長類由来ＣＤ４サイレンサー配列を結合
し、Hu-PGV-V2 、AGM-PGV-P2、Rh-PGV-P2 を作製した。
これらのレポーターベクターを用いて、E. coli JM109
コンピテント細胞を用いてトランスフォーメーションを
行なった。ＰＣＲ法でＣＤ４サイレンサーの挿入された
プラスミドを持つコロニーをスクリーニングした。
用プロモーターベクターであるPGV-P2（和光純薬工業株
式会社より市販）をMluIで３７℃、３時間処理し、プラ
スミドを切断した。セルフライゲーションを防ぐため、
アルカリフォスファターゼ処理を行なった。このプラス
ミドと、各霊長類由来ＣＤ４サイレンサー配列を結合
し、Hu-PGV-V2 、AGM-PGV-P2、Rh-PGV-P2 を作製した。
これらのレポーターベクターを用いて、E. coli JM109
コンピテント細胞を用いてトランスフォーメーションを
行なった。ＰＣＲ法でＣＤ４サイレンサーの挿入された
プラスミドを持つコロニーをスクリーニングした。
【００２４】トランスフェクション Hu-PGV-P2 、AGM-PGV-P2及びRh-PGV-P2 が導入された大
腸菌コロニーから、プラスミドＤＮＡを回収し、ヒトＣ
Ｄ４陽性細胞株であるCemX174 （Immunogenetics 21:23
5, 1985 ）にトランスフェクションした。トランスフェ
クションにはエレクトロポレーション法を用いた。CemX
174 細胞を回収し、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含まない
RPMI1640培地で洗浄後、２×１０7 個／ｍｌに調整し
た。細胞浮遊液２００μｌにPGV-P2、Hu-PGV-P2 、Rh-P
GV-P2 のいずれか２０μｇと、コントロールベクターで
あるpRL-CMV １μｇを加えた。pRL-CMV はシーパンジ
ーのルシフェラーゼ遺伝子を持ち、テスト用レポーター
ベクターとコトランスフェクションすることにより、イ
ンターナルコントロールとして用いることができる。電
圧１５０Ｖ、静電気容量2700μＦ、抵抗１２９Ωでエレ
クトロポレーションを行い、室温で５分静置後、細胞懸
濁液を10%FCS RPMI1640 培地５ｍｌ中に移し、３７℃で
４８時間培養した。
腸菌コロニーから、プラスミドＤＮＡを回収し、ヒトＣ
Ｄ４陽性細胞株であるCemX174 （Immunogenetics 21:23
5, 1985 ）にトランスフェクションした。トランスフェ
クションにはエレクトロポレーション法を用いた。CemX
174 細胞を回収し、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含まない
RPMI1640培地で洗浄後、２×１０7 個／ｍｌに調整し
た。細胞浮遊液２００μｌにPGV-P2、Hu-PGV-P2 、Rh-P
GV-P2 のいずれか２０μｇと、コントロールベクターで
あるpRL-CMV １μｇを加えた。pRL-CMV はシーパンジ
ーのルシフェラーゼ遺伝子を持ち、テスト用レポーター
ベクターとコトランスフェクションすることにより、イ
ンターナルコントロールとして用いることができる。電
圧１５０Ｖ、静電気容量2700μＦ、抵抗１２９Ωでエレ
クトロポレーションを行い、室温で５分静置後、細胞懸
濁液を10%FCS RPMI1640 培地５ｍｌ中に移し、３７℃で
４８時間培養した。
【００２５】ルシフェラーゼアッセイ 培養後、トランスフェクションした細胞を回収し、ピッ
カジーンデュアル・シーパンジーシステム（和光純薬工
業株式会社より市販）を用いてホタルルシフェラーゼ活
性（Luc F)及びシーパンジールシフェラーゼ活性（Luc
S)を測定した。それぞれの細胞についてLuc F/Luc S を
算出した後、PGV-P2をトランスフェクションした細胞の
Luc F/Luc S を１としてHu-PGV-P2 、AGM-PGV-P2、Rh-P
GV-P2 のトランスフェクタントの相対的ルシフェラーゼ
活性を算出した。
カジーンデュアル・シーパンジーシステム（和光純薬工
業株式会社より市販）を用いてホタルルシフェラーゼ活
性（Luc F)及びシーパンジールシフェラーゼ活性（Luc
S)を測定した。それぞれの細胞についてLuc F/Luc S を
算出した後、PGV-P2をトランスフェクションした細胞の
Luc F/Luc S を１としてHu-PGV-P2 、AGM-PGV-P2、Rh-P
GV-P2 のトランスフェクタントの相対的ルシフェラーゼ
活性を算出した。
【００２６】結果 ＡＧＭ及びＲｈＣＤ４サイレンサー領域の塩基配列 各霊長類ＣＤ４サイレンサー領域の塩基配列を比較し
た。ヒト配列とＡＧＭ配列間では１３ケ所、ヒト配列と
Ｒｈ配列間では８ケ所の塩基置換が存在し、このうちの
５ケ所はＡＧＭ特異的であった。ヒトＣＤ４サイレンサ
ー領域内には、２ケ所の調節タンパク結合部位、すなわ
ち、ＦＰＩサイト（CCACCAACCACAAGA)及びＦＰIIサイト
（CTAGTCAGCAGTAGAGAGGG) が知られており（Eur. J. Im
munol. 26:493-500, 1996 ）、ＡＧＭ、ＲｈともにＦＰ
Ｉサイトは保存されているが、ＡＧＭではＦＰIIサイト
の両端近傍に、Ｒｈでは片端近傍に塩基置換が存在し
た。
た。ヒト配列とＡＧＭ配列間では１３ケ所、ヒト配列と
Ｒｈ配列間では８ケ所の塩基置換が存在し、このうちの
５ケ所はＡＧＭ特異的であった。ヒトＣＤ４サイレンサ
ー領域内には、２ケ所の調節タンパク結合部位、すなわ
ち、ＦＰＩサイト（CCACCAACCACAAGA)及びＦＰIIサイト
（CTAGTCAGCAGTAGAGAGGG) が知られており（Eur. J. Im
munol. 26:493-500, 1996 ）、ＡＧＭ、ＲｈともにＦＰ
Ｉサイトは保存されているが、ＡＧＭではＦＰIIサイト
の両端近傍に、Ｒｈでは片端近傍に塩基置換が存在し
た。
【００２７】ＣＤ４サイレンサー領域の転写調節 ルシフェラーゼレポーターアッセイにより相対的ルシフ
ェラーゼ活性を算出したところ（図２）、コントロール
ベクターをトランスフェクトした場合に比較して、Hu-P
GV-P2 をトランスフェクションした細胞では２．５倍、
Rh-PGV-P2 では２．１倍の転写促進活性を示した。一
方、AGM-PGV-P2をトランスフェクトした細胞ではヒトや
Ｒｈに比べて明らかに転写促進活性が低く、１．４倍の
値を示したに過ぎなかった。トランスフェクションに使
用したCemX174 はＣＤ４陽性であるので、Hu-PGV-P2 で
はＦＰIIサイトが存在することにより、レポーター遺伝
子（ルシフェラーゼ遺伝子）の発現を増強したものと考
えられる。一方、ＦＰIIサイトの両端に塩基配列を持つ
ＡＧＭ−ＰＧＶ−Ｐ２ではエンハンサー活性がほとんど
観察されなかった。Rh-PGV-P2 ではヒトとＡＧＭの中間
のエンハンサー活性が観察された。Ｒｈでは、ＡＧＭで
見られた２ケ所の塩基置換の一方にのみ変異していた。
また、ヒト、ＡＧＭ及びＲｈのＣＤ４サイレンサー領域
の転写調節能と、それぞれの末梢リンパ球におけるＣＤ
４陽性細胞率あるいはＣＤ４分子密度と相関しており
（図３）、生体内におけるＣＤ４発現調節にこの領域が
深く関与していると考えられる。
ェラーゼ活性を算出したところ（図２）、コントロール
ベクターをトランスフェクトした場合に比較して、Hu-P
GV-P2 をトランスフェクションした細胞では２．５倍、
Rh-PGV-P2 では２．１倍の転写促進活性を示した。一
方、AGM-PGV-P2をトランスフェクトした細胞ではヒトや
Ｒｈに比べて明らかに転写促進活性が低く、１．４倍の
値を示したに過ぎなかった。トランスフェクションに使
用したCemX174 はＣＤ４陽性であるので、Hu-PGV-P2 で
はＦＰIIサイトが存在することにより、レポーター遺伝
子（ルシフェラーゼ遺伝子）の発現を増強したものと考
えられる。一方、ＦＰIIサイトの両端に塩基配列を持つ
ＡＧＭ−ＰＧＶ−Ｐ２ではエンハンサー活性がほとんど
観察されなかった。Rh-PGV-P2 ではヒトとＡＧＭの中間
のエンハンサー活性が観察された。Ｒｈでは、ＡＧＭで
見られた２ケ所の塩基置換の一方にのみ変異していた。
また、ヒト、ＡＧＭ及びＲｈのＣＤ４サイレンサー領域
の転写調節能と、それぞれの末梢リンパ球におけるＣＤ
４陽性細胞率あるいはＣＤ４分子密度と相関しており
（図３）、生体内におけるＣＤ４発現調節にこの領域が
深く関与していると考えられる。
【００２８】
【発明の効果】本発明により、エイズの発症抑制に有効
な新規核酸及びそれを有効成分とするエイズ発症抑制剤
が提供された。本発明のエイズ発症抑制剤は、従来の可
溶性ＣＤ４を用いる方法やケモカインレセプターの発現
を抑制する方法とは異なり、ヘルパーＴ細胞の細胞表面
からＣＤ４分子の発現を抑制するので、Ｔリンパ球及び
マクロファージ指向性を持つあらゆるＨＩＶ株にも有効
であり、生体内で生じるウイルス変異にも対応できる。
な新規核酸及びそれを有効成分とするエイズ発症抑制剤
が提供された。本発明のエイズ発症抑制剤は、従来の可
溶性ＣＤ４を用いる方法やケモカインレセプターの発現
を抑制する方法とは異なり、ヘルパーＴ細胞の細胞表面
からＣＤ４分子の発現を抑制するので、Ｔリンパ球及び
マクロファージ指向性を持つあらゆるＨＩＶ株にも有効
であり、生体内で生じるウイルス変異にも対応できる。
【００２９】
配列番号：１ 配列の長さ：５１３ 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列 AGCTCTGTTC TGTACTTTTG AGGGGATGAG GGAAGGAGGG TGGGCACGGT TCCCCCGATG 60 TGGGTGTCTG AGGCGAAGAA GAGGATGGCG GAGGTTGCAG CCACCAACCA CAAGAGTTCC 120 TTAGAGGGGT CACAGTCTCT AGGAAGTTTA TAGGAAGCTA GTCAGCAGTA GAGAGGGTGA 180 ACGCGGTGGG GCACATCCCG CGGCTGGGCT TGAGTGGGCT GCTTGGGGGT TATGGGGAGA 240 AGATAAAAGT GCCTGTGGGA CCACAGACTC TCGCTGTGGT GGAGCTGGGC CCTCTTACCC 300 TCCCAAGCCT CGCCCCTCAT CCCATCCCTG GGGGCCAGGG GTGAGGGCGG CAGGAACCTC 360 AAGGCTCTGA GAAAGTGCGT GGTGTGTGTT GCCATTTTGG TCTCTTCTCT TTCTCAGTCT 420 CTCTTTGCCT CACTTTGGAT CTATGCTCTG TGCATCTGTC TTGCTTCTCA GAATTTCTTC 480 TTTTCCTCTT TTTTTGTACT ACCCTGCGCT TTG 513
【００３０】配列番号：２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列 CTAGTCAGCA GTAGAGAGGG 20
【００３１】配列番号：３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 TCTGAGTTTG AGCTCTGTTC 20
【００３２】配列番号：４ 配列の長さ：１８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 CAAAGCGCAG GGTAGTAC 18
【００３３】配列番号：５ 配列の長さ：３７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 AGCTACGCGT ACTTTTGAGG GGATGAGGGA AGGAGGG 37
【００３４】配列番号：６ 配列の長さ：３７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 AGCTACGCGT ATCTTTGAGG GGATGAGGGG AGGAGGG 37
【００３５】配列番号：７ 配列の長さ：３７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 CATTTGCGCA ACAAAAAAAG AGGAAAAGAA GAAATTC 37
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒト、アフリカミドリザル及びアカゲザルのＣ
Ｄ４サイレンサー領域の塩基配列を示す図である。
Ｄ４サイレンサー領域の塩基配列を示す図である。
【図２】ヒト、アフリカミドリザル及びアカゲザルのＣ
Ｄ４サイレンサー領域の転写促進活性を比較して示す図
である。
Ｄ４サイレンサー領域の転写促進活性を比較して示す図
である。
【図３】ヒト、アフリカミドリザル及びアカゲザルの末
梢リンパ球のフローサイトメトリーの結果を示す図であ
り、黒く塗りつぶされているのがＣＤ４レセプターを発
現している末梢リンパ球を示す。
梢リンパ球のフローサイトメトリーの結果を示す図であ
り、黒く塗りつぶされているのがＣＤ４レセプターを発
現している末梢リンパ球を示す。
Claims (9)
- 【請求項１】 配列表の配列番号２で示される塩基配列
又は該塩基配列のうちの１個ないし数個の塩基が置換、
欠失又は挿入された塩基配列であって、アンチサイレン
サー因子との結合能を有する塩基配列から成る核酸領域
を含む核酸。 - 【請求項２】 配列表の配列番号２で示される塩基配列
から成る核酸領域を含む請求項１記載の核酸。 - 【請求項３】 配列表の配列番号１で示される塩基配列
又は該塩基配列と８０％以上の相同性を有する塩基配列
を有し、かつ、アンチサイレンサー因子との結合能を有
する塩基配列から成る核酸領域を含む核酸。 - 【請求項４】 配列表の配列番号１で示される塩基配列
又は該塩基配列と８０％以上の相同性を有する塩基配列
を有し、かつ、アンチサイレンサー因子との結合能を有
する塩基配列から成る核酸領域から成る請求項３記載の
核酸。 - 【請求項５】 前記相同性が９５％以上である請求項３
又は４記載の核酸。 - 【請求項６】 前記相同性が１００％である請求項５記
載の核酸。 - 【請求項７】 請求項１ないし６のいずれか１項に記載
の核酸を含む組換えベクターであって、ヒト細胞内で該
核酸を産生することができる組換えベクター。 - 【請求項８】 エイズ発症抑制用である請求項７記載の
組換えベクター。 - 【請求項９】 請求項１ないし６のいずれか１項に記載
の核酸を有効成分として含有するエイズ発症抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9193239A JPH1118779A (ja) | 1997-07-03 | 1997-07-03 | 新規核酸及びそのエイズ発症抑制剤としての用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9193239A JPH1118779A (ja) | 1997-07-03 | 1997-07-03 | 新規核酸及びそのエイズ発症抑制剤としての用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1118779A true JPH1118779A (ja) | 1999-01-26 |
Family
ID=16304653
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9193239A Pending JPH1118779A (ja) | 1997-07-03 | 1997-07-03 | 新規核酸及びそのエイズ発症抑制剤としての用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1118779A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002534979A (ja) * | 1999-01-25 | 2002-10-22 | マスク ファウンデーション フォー リサーチ デヴェロップメント | Ｈｉｖ薬剤抵抗性のモニタリング方法 |
-
1997
- 1997-07-03 JP JP9193239A patent/JPH1118779A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002534979A (ja) * | 1999-01-25 | 2002-10-22 | マスク ファウンデーション フォー リサーチ デヴェロップメント | Ｈｉｖ薬剤抵抗性のモニタリング方法 |
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