JPH11175A - Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｐａｌｌｉｄｕｓ 由来の熱安定性ＤＮＡポリメラーゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 Bacillus pallidus 由来の新規Ｉ型ＤＮＡポ
リメラーゼ（Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ）を同定し、該ポリメ
ラーゼをコードしている遺伝子をクローニングし、発現
させる。 【解決手段】 酵素の特徴として、ＤＮＡポリメラーゼ
活性の他に、５’−３’エキソヌクレアーゼ活性、逆転
写酵素活性、鎖置換活性、および二本鎖ＤＮＡのニック
において重合を開始できる能力が明らかとなった。ある
種の構築物においては、５’−３’エキソヌクレアーゼ
活性をコードしている領域が欠失しており、鎖置換増幅
に特に有用な酵素が提供される。抗Bacillus pallidus
Ｉ型ポリメラーゼ抗体とその抗体の使用方法も明らかに
されている。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ＤＮＡポリメラー
ゼ、ＤＮＡポリメラーゼをコードする遺伝子、および組
換えＤＮＡポリメラーゼの製造に関する。ＤＮＡポリメ
ラーゼに対する抗体とこれらの抗体の使用方法も提示さ
れている。

【０００２】

【従来の技術】Ｉ型ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｏｌ Ｉ）
類は真正細菌に多く見られる酵素である。これらは、Ｄ
ＮＡ修復とＤＮＡ複製に関与していると思われる多機能
／複数ドメイン酵素である。大腸菌のＰｏｌ Ｉおよび
現在までにその特徴が明らかにされている多くのその他
のＩ型ＤＮＡポリメラーゼは、３つの酵素活性、即ち、
ＤＮＡ重合（５’−３’）、３’−５’エキソヌクレア
ーゼ活性、および５’−３’エキソヌクレアーゼ活性を
有する。これらの活性はそれぞれタンパク質の特定領域
またはドメインにその位置が特定されている。大腸菌の
Ｐｏｌ Ｉでは、Ｎ末端ドメイン（１〜３２４番目のア
ミノ酸配列）が５’−３’エキソヌクレアーゼ活性をコ
ードし、中央のドメイン（３２４〜５１７番目のアミノ
酸配列）が３’−５’エキソヌクレアーゼ活性をコード
し、Ｃ末端ドメイン（５２１〜９２８番目のアミノ酸配
列）がＤＮＡポリメラーゼ活性をコードしている。大腸
菌Ｐｏｌ Ｉをサブチリシン消化により２つのフラグメ
ントに切断すると、大きなフラグメント（クレノウフラ
グメント）は３’−５’エキソヌクレアーゼとＤＮＡポ
リメラーゼ活性を有し、小さなフラグメントは５’−
３’エキソヌクレアーゼ活性を有する。

【０００３】ＤＮＡポリメラーゼＩは、Streptococcus
pneumoniae（肺炎双球菌(A.Diaz, et al. 1992. J. Bac
teriol. 174: 2014-2024) 、Bacillus stearothermophi
lus(S-M. Phang, et al. 1995. Gene 63: 65-68 および
国際公開ＷＯ９５／２７０６７）、Bacillus caldotena
x(T.Uemori, et al. 1993. J. Biochem. 113: 401-410)
およびThermus aquaticus(Lawyer et al. 1993. PCR Me
thods and Applications. 2: 275-287) 等の数種の真正
細菌から単離され、クローニングされ、その配列が決定
されている。大腸菌と肺炎双球菌のＰｏｌ Ｉ酵素活性
の至適温度は約３７℃である。即ち、これらは中温性で
ある。これに対し、より高温に耐性を有する細菌のポリ
メラーゼはＢａｃｉｌｌｕｓ類では約６０〜７０℃、
Ｔ．ａｑｕａｔｉｃｕｓでは約８０℃と至適温度がより
高い。これらのポリメラーゼは好熱性で、ＰＣＲおよび
好熱性ＳＤＡの温度において有用と思われる。

【０００４】真正細菌とバクテリオファージ由来のＤＮ
ＡポリメラーゼＩのアミノ酸配列のアラインメントは、
５’−３’エキソヌクレアーゼドメインとＤＮＡポリメ
ラーゼドメインの両者において保存されたモチーフを示
した。これらの保存された配列は、典型的には、この酵
素の構造および／または機能に重要なアミノ酸を表して
いる。この保存された配列の知識に基づき、大腸菌以外
の種のポリメラーゼの「クレノウ様」形態（即ち、５’
−３’エキソヌクレアーゼ活性を欠失した形態）も報告
されている。５’−３’エキソヌクレアーゼ活性の欠失
は、鎖置換増幅(Strand Displacement Amplification:
SDA G. T. Walker, et al. 1992. Proc. Natl. Acad. S
ci. USA 89, 392-396; G. T. Walker, et al. 1992. Nu
c. Acid. Res. 20, 1691-1696、米国特許番号第５，４
５５．１６６号、米国特許番号第５，２７０，１８４
号、欧州特許出願第０ ６８４ ３１５号）においてポ
リメラーゼを利用する場合に特に重要である。なぜなら
ば、ＳＤＡポリメラーゼは、ニック下流の鎖の消化を防
止するために、天然にあるいは遺伝子操作によって５’
−３’エキソヌクレアーゼ活性が欠失していなくてはな
らないからである。ＳＤＡの場合、ポリメラーゼは増幅
に必要なデオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰ）の
誘導体（αチオｄＮＴＰの様なヌクレオチド類似体）を
組み入れ、一本鎖のニックで始まる二本鎖分子から下流
の一本鎖を置換しなくてはならない。アンプリコンの汚
染除去ができるように、ポリメラーゼはｄＵＴＰを組み
入れることができることも望ましいが、必須ではない。

【０００５】

【課題を解決するための手段】新しいＤＮＡポリメラー
ゼＩをBacillus pallidus において同定し（ＢｐａＰｏ
ｌ Ｉ）、このＰｏｌ Ｉをコードしている遺伝子をク
ローニングし、配列決定し、発現させてポリメラーゼを
製造した。完全な長さの野生型酵素は、好熱性ＤＮＡポ
リメラーゼ活性と好熱性５’−３’エキソヌクレアーゼ
活性を有する。５’−３’エキソヌクレアーゼ活性を不
活化するクレノウ様（Ｋｌｅｎｏｗ−ｌｉｋｅ）欠失を
構築し、発現させてＳＤＡにおいて特に有用なポリメラ
ーゼを作製した。Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉは、Ｂｐａ Ｐｏ
ｌ Ｉに結合する抗体を産生するための動物の免疫感作
にも利用できる。

【０００６】

【発明の実施の形態】まず、Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉの「ク
レノウ様」フラグメントをクローニングした。これに
は、５’−３’エキソヌクレアーゼドメイン内およびポ
リメラーゼ遺伝子のＣ末端に位置する相対的な保存配列
に基づく縮重ＰＣＲプライマーをデザインするために、
ＧｅｎＢａｎｋ配列データベースにおいて入手可能なそ
の他の種のＤＮＡ Ｐｏｌ Ｉ遺伝子の複数の配列のア
ラインメントを使用した。プライマーは、ｐＢＬＵＥＳ
ＣＲＩＰＴプラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）におい
て増幅産物のクローニングと発現を可能にする制限酵素
認識部位を含む様にデザインされた。フォアード・プラ
イマーは、B. caldotenax 、B. stearothermophilus 、
大腸菌および肺炎双球菌のＰｏｌ Ｉ遺伝子のアライン
メントに基づいてデザインされた。リバース・プライマ
ーは、B. caldotenax 、B. stearothermophilus 、およ
び肺炎双球菌のＰｏｌ Ｉ遺伝子のアラインメントに基
づいてデザインされた。B. stearothermophilus に関し
ては、２つの遺伝子配列がＧｅｎＢａｎｋに記載されて
おり、両者共アラインメントに使用された。

【０００７】縮重ＰＣＲプライマーを以下に示す。 配列番号１ ＴＧＣＣＡＡＴＣＴＡＧＡＡＧＧＣＧＴＧＣＣＳＧＧＣ
ＲＴＣＧＧＫＲＡＡＡＡＲＡＣ（クローニングのための
ＸｂａＩ部位は下線が付けられている。）

【０００８】配列番号２ ＣＡＣＣＡＡＧＧＡＴＣＣＳＹＴＴＴＴＡＴＴＴＳＧＣ
ＧＴＣＲＴＡＣＣＡＹＧＴ（クローニングのためのＢａ
ｍＨＩ部位は下線が付けられている。）

【０００９】Bacilus pallidus（ＡＴＣＣ番号５１１７
６号）をＡＴＣＣ推奨培養培地において５５℃で増殖さ
せ、従来の技術を用いてゲノムＤＮＡを単離した。縮重
プライマーである配列番号１と配列番号２を用いて、こ
のゲノムの２ｋｂセグメントを増幅した。このセグメン
トをｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴベクターにクローニング
し、大腸菌を形質転換した。この遺伝子産物を、クロー
ニングベクターの製造者によって推奨されているように
ＩＰＴＧを用いて誘導することにより、形質転換細胞に
発現させた。細胞を含まない溶解産物液を調製し、活性
化された子牛胸腺ＤＮＡ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に取り
込まれる³²Ｐ標識ヌクレオチドの量によりポリメラーゼ
活性を以下の様に分析した。ポリメラーゼを新しく調製
した酵素希釈液（２５ｍＭのＫｉＰＯ₄ ｐＨ７．５、５
０ｍＭの硫酸アンモニウム、１０ｍＭの２−メルカプト
エタノール、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ）に室温で連続希釈
し、ボルテックスミキサーで混合した。９０μＬの反応
緩衝液（２５ｍＭのＫｉＰＯ ₄ ｐＨ７．５、０．１５ｍ
Ｍの各種ｄＮＴＰ、４ｍＭのＭｇＣｌ₂ 、４．５μｇ／
反応液となるように添加した活性化子牛胸腺ＤＮＡ、
０．３ｍｇ／反応液の活性化子牛胸腺ＤＮＡ、０．３μ
Ｌ／反応液となるように添加した３０００ｍＣｕ／ｍｍ
ｏｌのα³²Ｐ−ｄＣＴＰ）を各反応試験管に加え、選択
された反応温度で５分間予め加温した。予め加温した
後、１０μＬのポリメラーゼ希釈液を加え、ボルテック
スミキサーで混合した。ブランク反応液には１０μＬの
酵素希釈液だけを加えた。反応液を選択された反応温度
で１５分間保温し、２分後、５分後、１０分後、１５分
後に１５μＬのアリコートを取り出し、それらに２５ｍ
ＭのＥＤＴＡを４５μＬ加え、反応を停止した。同じ時
点でブランク対照を取り出した。全時点でアリコートを
取り出した後、反応が停止した４０μＬの液をＤＥ−８
１フィルターディスクにスポット状に染み込ませた（最
初の反応液１０μＬに相当する。）。フィルターあたり
１０ｍＬを用いて０．３Ｍの蟻酸アンモニウム（ｐＨ
８．０）の中でフィルターを少なくとも４回洗浄した
（１回の洗浄は５分ずつ）。洗浄は、スポット状に染み
込ませたフィルターを蟻酸アンモニウムの入ったビーカ
ーに入れ、２〜３分毎にそっと揺り動かして実施した。
廃液をデカントし、更に洗浄緩衝液のアリコートをフィ
ルターに注いだ。最後の洗浄後、フィルターをメタノー
ル中で濯ぎ、ワットマン濾紙の上に置き、約５分間乾燥
させた。次に、フィルターをシンチレーションバイアル
に入れ、計測した。フィルターにより保持された放射能
の増加は、形質転換細胞の組換え発現産物がポリメラー
ゼ活性を示すことを表していた。ポリメラーゼ活性は、
３０分以内に１０ｎｍｏｌｅの総ヌクレオチドが酸不溶
物中に取り込まれるのに必要な量として１単位（Ｕ）が
定義されているが、以下の式により計算した。

【００１０】

【式１】Ｕ／ｍＬ＝（正味のｃｐｍ）（ｎｍｏｌｅ／ｃ
ｐｍ）（１μ／１０ｎｍｏｌｅ）（１００％ ｄＮＴＰ
／ｘ％ｄＸＴＰ）（１／０．０１ｍＬ添加された酵素）
（希釈係数）

【００１１】式中、（正味のｃｐｍ）は、総反応液に関
して３０分の時点で取り込まれた総ｃｐｍである。例え
ば、３０分後の上記の１００μＬの反応液に関して、
（正味のｃｐｍ）は、（時点のｃｐｍ）と（計測された
１０μＬ）と（３０分／１０分の時点）を乗じたもので
ある。（ｎｍｏｌｅ／ｃｐｍ）は、反応液の比活性であ
る。（１００％ｄＮＴＰ／ｘ％ｄＸＴＰ）は、鋳型ＤＮ
ＡにおけるＧまたはＣの割合（％）に対する総ヌクレオ
チドの比、またはＡまたはＴの割合（％）に対する総ヌ
クレオチドの比である。子牛胸腺ＤＮＡは、約２２％の
ＧまたはＣおよび２８％のＡまたはＴである。選択され
た値は、使用された³²Ｐ標識ヌクレオチドに対応する。

【００１２】反応液の比活性は、典型的には、５μＬの
ブランク反応液（９０μＬ緩衝液混合物＋１０μＬ酵素
希釈液）を３枚のＤＥ−８１フィルターのそれぞれに染
み込ませ、フィルターをカウントし、平均ｃｐｍを得る
ことによって決定した。比活性は、（５μＬ）（０．１
５ｎｍｏｌｅ）／（平均ｃｐｍ）＝ｎｍｏｌｅ／ｃｐｍ
として計算した。例えば、好熱性ポリメラーゼの単位活
性は以下のように計算した。ポリメラーゼは、１０μＬ
の１：５０００希釈液と１０μＬの１：１０，０００希
釈液とα ³²Ｐ−ｄＡＴＰを使用して上記の様に分析し
た。３つの時点（５分、１０分、１５分）で検討が行わ
れ、フィルターのバックグラウンドカウントとブランク
コントロールの反応液が含められた。３枚のフィルター
の平均バックグラウンドカウントは１４４２ｃｐｍであ
った。ブランクコントロール（２枚のフィルターのそれ
ぞれに染み込ませた２μＬ）の平均ｃｐｍは２４０５３
６ｃｐｍで、比活性は１．２４×１０^-6ｎｍｏｌｅ／ｃ
ｐｍであった。単位数／ｍＬ（Ｕ／ｍＬ）は各希釈液の
各時点に関して計算した。一例として、１：５０００希
釈液の５分の時点のＵ／ｍＬは、次の様に計算した。正
味のｃｐｍ＝（３７１４ｃｐｍ−１４４２ｃｐｍ）（１
０μＬ）（３０分／５分）＝１３４８２０正味のｃｐ
ｍ、Ｕ／ｍＬ＝（１３４８２０正味のｃｐｍ）（１．２
４×１０^-6ｎｍ／ｃｐｍ）（０．１Ｕ／ｎｍ）（３．５
７）（１００）（５０００）＝２９８４１

【００１３】各時点の単位数／ｍＬ（Ｕ／ｍＬ）は各希
釈液に関して平均した。この希釈液の平均を平均して、
組み合わせた平均Ｕ／ｍＬが得られた。この例において
は、組み合わせた平均は２６４９４Ｕ／ｍＬであった。

【００１４】組換えポリメラーゼの精製を単純化するた
めに、また発現レベルを高めるために、増幅されたフラ
グメントをｐＭＡＬ−ｃプラスミド（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ
ａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）に、製造者によって推奨され
ているように再クローニングした。これらの構築物で
は、Ｂｐａポリメラーゼの大きなフラグメントが大腸菌
のｌａｃプロモーターの制御下に置かれた。ＩＰＴＧに
より誘導すると、形質転換された宿主細胞は、マルトー
ス結合タンパク質（ＭＢＰ、ｍａｌＥ遺伝子産物）と融
合したＢｐａ Ｐｏｌ Ｉの大きなフラグメントを含む
融合産物を発現した。このクローン（クローンＭＢＰ／
Ｂｐａ−１９２）のコード配列が配列番号５に示されて
おり、ここで、１〜３２３７番目のヌクレオチド配列は
ＭＢＰ／Ｂｐａ融合タンパク質をコードし、３２３８〜
３２５５番目のヌクレオチド配列はポリヒスチジンアフ
ィニティー精製タグをコードしている。融合タンパク質
のＭＢＰ部分によりアミロース樹脂上での発現産物の精
製が可能となる。ＭＢＰ／Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ融合タン
パク質は分子量が約１１７ｋｄで、総細胞タンパク質の
約５〜１０％として表された。融合タンパク質の推定ア
ミノ酸配列が配列番号６の１〜１０７８番目のアミノ酸
配列に示されている。

【００１５】Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ
により推奨されているプロトコールに従って、アミロー
ス樹脂上でＭＢＰ／Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ融合タンパク質
が精製された。ＤＮＡポリメラーゼ活性分析の温度的特
性は、約３０℃から約７５℃の間で活性を示し、至適活
性は約６５℃であった。２つの隣接するプライマーが標
的配列にハイブリッド形成し、「ニック（ｎｉｃｋ）」
を設定するプライマー伸長分析において、ポリメラーゼ
はニックから合成を開始し、下流のプライマーを置換す
ることができることが明らかにされ、ＳＤＡにおける有
用性が示された。好熱性ＳＤＡ反応（ＥＰ ０ ６８４
３１５）において増幅が実証され、鎖置換能、５’−
３’エキソヌクレアーゼ活性の欠失、およびｄＮＴＰ類
似体の取り込み能が確認された。増幅に関して検討され
た最小数の最初の標的（１，０００）は、３単位のＢｐ
ａ Ｐｏｌ Ｉと８０単位のＢｓｏＢＩによりＳＤＡ反
応において検出可能であった。Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ活性
の単位は、上記の³²Ｐの取り込み分析において定義さ
れ、３０分以内に１０ｎＭのヌクレオチドを取り込むポ
リメラーゼの量に対応する。Ｍｎ²⁺の存在下の逆転写酵
素活性が、ＲＮＡ鋳型にアニーリングされたＤＮＡプラ
イマーをポリメラーゼが伸長する分析において証明され
た。

【００１６】Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ遺伝子の完全な長さの
ゲノムコピーを単離するために、B.Pallidus のＤＮＡ
のゲノムライブラリーが、Ｂｃｌ Ｉにより消化された
ゲノムＤＮＡをλＺＡＰベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ
ｅ）にクローニングすることによって作製された。ライ
ブラリーはＢｐａ Ｐｏｌ ＩのＰＣＲ産物とハイブリ
ッド形成することによりスクリーニングされ、Ｂｐａ
Ｐｏｌ Ｉ遺伝子を含む５．８ｋｂのＤＮＡフラグメン
トが同定され、単離された。このフラグメントのＤＮＡ
配列は従来の配列決定技術により決定され、Ｂｐａ Ｐ
ｏｌ Ｉの完全な長さのコード配列が明らかにされた。
また、Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ遺伝子の上流に２つのオープ
ンリーディングフレームとＢｐａ Ｐｏｌ Ｉ遺伝子の
下流に２つのオープンリーディングフレームを含むこと
が明らかにされた。完全な長さのＢｐａ Ｐｏｌ Ｉの
コード配列は配列番号３に示され、配列番号３によりコ
ードされた完全な長さのポリメラーゼの推定アミノ酸配
列は配列番号４に示されている。最初にクローニングさ
れた５’−３’エキソヌクレアーゼドメインが欠失して
いる大きなフラグメントは、配列番号４の１９２〜８７
６番目のアミノ酸配列に対応し、配列番号３の５７４〜
２６２８番目のヌクレオチド配列によりコードされてい
る。アミノ酸配列の比較から、Ｂｓｔポリメラーゼ(B.
Stearothermophilus、 Riggs et al. 1995)と６８％の相
同性があり、Ｂｃａポリメラーゼ(B.caldotenax 、 Uemo
ri et al. 1993) と６７％の相同性があることが明らか
にされた。完全な長さのＢｐａ Ｐｏｌ Ｉ遺伝子をｐ
ＭＡＬ−ｃの中にクローニングし、ＭＢＰ融合タンパク
質を作製した。このクローンはＭＢＰ／Ｂｐａ−１と名
付けられ、前記分析において好熱性ＤＮＡポリメラーゼ
活性と好熱性５’−３’エキソヌクレアーゼ活性を発現
することが明らかにされた。ＭＢＰ／Ｂｐａ−１は配列
番号７に示される核酸配列を有し、配列番号８に示され
るアミノ酸配列を持つＢｐａ Ｐｏｌ Ｉを発現する。
配列番号７の１〜３８１０番目のヌクレオチド配列はＭ
ＢＰ／Ｂｐａ融合タンパク質をコードし、３８１１〜３
８２８ヌクレオチド配列はポリヒスチジンアフィニティ
ー精製タグをコードしている。配列番号８において、１
〜１２７０番目のアミノ酸配列はＭＢＰ／Ｂｐａ融合タ
ンパク質を表し、１２７１〜１２７６番目のアミノ酸配
列は付加されたポリヒスチジンアフィニティー精製タグ
を表す。

【００１７】更に、５’−３’エキソヌクレアーゼドメ
インを欠失した大きなフラグメントをプラスミドｐＴＲ
Ｃ９９Ａ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）にＭＢＰ精製タグを含
めずにサブクローニングした。このクローンは、ｐＴＲ
Ｃ／Ｂｐａｌと命名され、ブダペスト条約に基づき、ア
メリカンタイプカルチャーコレクション、ロックビル、
メリーランド州にＡＴＣＣ受託番号９８１６０号として
１９９６年８月３０日に寄託された。大きなフラグメン
トは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発とクローニング等
の従来の遺伝子操作方法を用いて、寄託された完全な長
さのクローンから得ることができる。ｐＴＲＣ／Ｂｐａ
ｌにおけるポリメラーゼの発現により、前記のＳＤＡに
おいて検討された非融合ポリメラーゼタンパク質が作製
された。このポリメラーゼを用いた増幅により、５’−
３’エキソヌクレアーゼ活性が不活性であることが確認
され、非融合ポリメラーゼがＳＤＡにとって必要なその
他の活性（鎖置換活性、ニックにおける開始、改変され
たｄＮＴＰの取り込み）を有することが確認された。

【００１８】アフィニティー精製タグが存在しない場
合、ポリメラーゼタンパク質は、例えば以下の様に精製
できる。組換えＢｐａ Ｐｏｌ Ｉを発現する大腸菌
（約１．２８ｇの細胞ペースト）を培養培地から単離
し、３ｍＬの溶解産物緩衝液（２０ｍＭのイミダゾール
−ＨＣｌｐＨ６．９４， ０．２ＭのＫＣｌ，１０％グ
リセロール（ｗ／ｖ），０．５ｍＭのＮａ₂ ＥＤＴＡ，
１ｍＭのＤＴＴ）に再懸濁し、ピペットを用いて細胞凝
集塊を破壊した。細胞懸濁液を２０秒バースト(burst)
で１０分間、超音波処理破壊し、細胞を溶解し、遠心分
離にかけ細胞片を除去した。勿論、組換えポリメラーゼ
に関して分泌発現系を使用する場合には、細胞溶解は必
要ない。これらの系において、細胞は培養培地から単離
され、細胞溶解物ではなく培養培地が以下のポリメラー
ゼを単離する工程に従って処理される。次に、遠心分離
された細胞溶解物の上清を水浴内で５５℃で１５分間加
熱し、ミクロ遠心機で１５分間遠心分離して、変性タン
パク質のペレットを得た。固体硫酸アンモニウムを上清
に加え、２５％飽和とした。試料をそっと揺り動かしな
がら４℃で１５分間保温し、その低温で１５分間ミクロ
遠心分離した。上清を新しいミクロ遠心機に取り出し、
硫酸アンモニウムを飽和させた溶解物緩衝液を加え、所
望の％飽和にし、前記の様に１５分間そっと揺り動か
し、遠心分離した。得られた硫酸アンモニウム片は、３
５％、４５％、５５％、６５％飽和であった。全ての硫
酸アンモニウム片のペレットをドライアイス−エタノー
ル浴中で急速冷凍し、−７６℃で保存し、その間上記の
ポリメラーゼ活性分析を溶解と分画工程から得られた試
料について実施し、精製工程の効率を評価した。ポリメ
ラーゼ分析の間、６５％硫酸アンモニウム飽和上清を氷
上で保存した。

【００１９】粗細胞抽出物中に存在するポリメラーゼ活
性は、回収された総活性の約８６％が加熱処理中安定
で、ＵＶ吸光度測定により推定されたように総タンパク
質濃度は７５％減少した。これは、１回の単純な工程に
おけるＢｐａポリメラーゼの少なくとも３倍濃縮に相当
する。６５％飽和上清に残存した活性の大部分は、約２
０％は沈殿したが、５５％と６５％ペレット中に回収さ
れた。従って、いずれの方法でも精製工程に使用でき
る。即ち、５５％以上の硫酸アンモニウムのペレット中
にポリメラーゼを回収するか、あるいは約５０〜５５％
硫酸アンモニウム片の上清中にポリメラーゼを回収でき
る。

【００２０】プールされた６５％硫酸アンモニウム上清
と再懸濁された５５％硫酸アンモニウムペレットと６５
％硫酸アンモニウムペレットを、２０ｍＭのイミダゾー
ル−ＨＣｌ（ｐＨ６．９４），２０ｍＭのＫＣｌ，１０
％グリセロール（ｗ／ｖ），０．５ｍＭのＮａ₂ ＥＤＴ
Ａ，１ｍＭのＤＴＴ（緩衝液Ａ）に５倍に希釈した、７
５０倍容量の緩衝液Ａに対して、４時間透析を行い、緩
衝液Ａで平衡化したＤＥＡＥセルロースカラムに流速
０．２５ｍＬ／分で添加した。試料添加後、ＵＶモニタ
リングによりカラムから出る液体にタンパク質の存在が
示されるまで、緩衝液Ａの流速を０．２５ｍＬ／分に維
持した。この時点で、１ｍＬの分画収集を開始し、流速
を１ｍＬ／分に上げた。この流速でカラムを緩衝液Ａで
２０分間洗浄した。緩衝液Ａから緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ＋
１ＭのＫＣｌ）の直線勾配（総勾配容量６０ｍＬ）を開
始した。勾配が終わった所で、緩衝液Ｂを２０分間続
け、続いて緩衝液Ｂから緩衝液Ａの直線勾配を開始した
（総勾配容量２０ｍＬ）。２回目の勾配が終わったとこ
ろで、緩衝液Ａでカラムを２０分間洗浄した。１０％ポ
リアクリルアミド、４％濃縮ゲルを含む０．１％ＳＤＳ
ゲルでタンパク質を分析するまで、また上記の様にポリ
メラーゼ活性を分析するまで、収集した画分を４℃で保
存した。

【００２１】ポリメラーゼ活性は、約０．３ＭのＫＣｌ
で溶出され、ＵＶ吸光度トレースの吸光ピークの１つに
相関していた。カラムに加えた試料の容量と比較する
と、活性濃度は約２倍であった。３０％メタノール、１
０％酢酸、０．０５％クーマシーブリリアントブルーＲ
−２５０で染色し、３０％メタノール、１０％酢酸中で
脱染されたポリアクリルアミドゲルの写真は、タンパク
質が約５０％の純度であることを示していた。ポリメラ
ーゼは、６８ｋｄのマーカーのやや下に移動し、予想さ
れるサイズと一致していた。ＤＥＡＥセルロースカラム
からの活性画分をプールし、ＫＫＥＧＤ緩衝液（２０ｍ
ＭのＫ₂ ＰＯ₄ （ｐＨ７．４）、２０ｍＭのＫＣｌ、１
０％グリセロール（ｗ／ｖ）、１ｍＭのＤＴＴ、０．５
ｍＭのＮａ₂ ＥＤＴＡ）に対して４℃で４時間透析し
た。１ｍＬの透析されたＤＥＡＥプールを１ｍＬのＫＫ
ＥＧＤ緩衝液で希釈し、２０ｍＬのＫＫＥＧＤ緩衝液で
平衡化したＨＩＴＲＰヘパリンカラム（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ）に注入した。緩衝液の流速は、ＵＶ吸収物質が溶
出液の中に検出されるまで０．２５ｍＬ／分で開始され
た。それから流速を０．５ｍＬ／分に上げて、ＫＫＥＧ
Ｄ緩衝液でカラムを１０分間洗浄した。ＫＫＥＧＤから
１Ｍ ＫＣｌを含むＫＫＥＧＤまでの直線勾配を開始し
（総勾配容量１０ｍＬ）、０．５ｍＬの画分を収集し
た。勾配が終了した時点で、カラムを１ＭのＫＣｌを含
むＫＫＥＧＤで１０分間洗浄し、１ＭのＫＣｌを含むＫ
ＫＥＧＤからＫＫＥＧＤまでの直線勾配を開始した（総
勾配容量５ｍＬ）。勾配が終了した時点で、カラムをＫ
ＫＥＧＤで１０分間洗浄した。タンパク質とポリメラー
ゼ活性を分析するまで、収集した分画を４℃で保存し
た。ＵＶ吸光度プロフィールはピークを１つだけ示し
た。

【００２２】ポリアクリルアミドゲルによる分析から、
ヘパリンカラムクロマトグラフィー後のポリメラーゼの
純度は９０％以上であることが示された。ポリメラーゼ
活性レベルが最も高い分画をプールし、ＣＥＮＴＲＩＣ
ＯＮ−３０を用いた限外濾過により濃縮し、ＫＫＥＧＤ
緩衝液と溶液交換した。精製された原液の単位濃度は約
３８，０００単位／ｍＬで、総タンパク質濃度はブラッ
ドフォード法に基づき約０．６ｍｇ／ｍＬであった。収
量はＤＥＡＥ活性プールの１／３から約３０μｇであっ
た。従って、細胞１ｇあたりの収量は計算により約７０
μｇ、すなわち１４ｇの細胞あたりタンパク質約１ｍｇ
であった。この標本の推定比活性は、６３，０００単位
／ｍｇタンパク質であった。

【００２３】前記の本発明の説明より、幾つかの変更が
可能なことは明らかである。第一に、ＭＢＰアフィニテ
ィー精製タグをＢｐａ Ｐｏｌ ＩのＮ末端またはＣ末
端に結合することができる。Ｃ末端またはＮ末端に付加
されたヒスチジン残基（ポリ−ヒスチジン）は、固定化
金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ、例
えばニッケル）によるポリメラーゼの精製に有用な異種
アミノ酸配列を提供する。融合タンパク質内の異種アミ
ノ酸配列は、ポリメラーゼ活性に有害な影響を及ぼさな
い。更に、所望により、ポリメラーゼ活性に顕著に有害
な影響を及ぼさずに、２つの異種配列（例えば、２つの
アフィニティー精製タグ）を（各末端に一つづつ）ポリ
メラーゼに結合することができる。更に別の異種アミノ
酸配列が本技術において公知であり、従来の方法により
Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉに結合させ、種々の融合タンパク質
を作製することができる。異種配列がアフィニティー精
製タグの場合には、アフィニティー精製タグの様な異種
コード配列をＢｐａ Ｐｏｌ Ｉコード配列の末端に結
合して融合タンパク質を発現させるための材料と方法
は、融合タンパク質のアフィニティー精製のための方法
と同様に、本技術において公知である。

【００２４】更に、遺伝子コードの縮重のため、本発明
のＢｐａ Ｐｏｌ Ｉ酵素（例えば、配列番号４、配列
番号４の１９２〜８７６番目のアミノ酸配列、配列番号
６または配列番号８において示される）をコードするヌ
クレオチド配列と異なる配列ではあるが、同等の配列を
新規な技術を使用せずに単離または調製することができ
る。この様な縮重したコード配列は本発明の範囲に含ま
れる。本発明のＢｐａＰｏｌ ＩをコードしているＤＮ
Ａフラグメントを種々のクローニングベクターにクロー
ニングし、種々の形質転換した原核宿主細胞および真核
宿主細胞においてプロモーターの制御下に組換えＢｐａ
Ｐｏｌ Ｉタンパク質を発現することも本技術におい
て通常の技術の範囲内である。

【００２５】従来の技術によるポリメラーゼＩ酵素の広
範なアミノ酸配列分析により、高度な保存モチーフが明
らかにされた。これらのモチーフは、種々の活性に必要
なタンパク質領域に対応することが知られている。例え
ば、L. Blanco, et al. 1991.Gene 100: 27-38; M. Del
arue, et al. 1990. Proc. Eng. 3: 461-467; P. Gutma
n and K. Minton. 1993. Nucl. Acids Res. 21: 4406-4
407 参照。本発明のＢｐａ Ｐｏｌ Ｉのアミノ酸配列
とこれらの文献およびその他の文献との比較により、本
発明のポリメラーゼの中に対応する保存モチーフを同定
することは可能であろう。保存モチーフの外にあるタン
パク質の領域におけるアミノ酸置換、特に同類アミノ酸
による保存的置換は、ポリメラーゼの生物学的活性にあ
るとしても僅かな影響しか及ぼさないものと予想され
る。従って、本技術に精通する者は、保存モチーフ外の
同類（およびある種の非同類）アミノ酸置換により、本
明細書に開示されている特定のアミノ酸配列を持つ酵素
と実質的に同等の変異型Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉが得られる
ことを予想できるであろう。この様な僅かな配列の変化
の例として、アミノ酸配列がヒスチジンアフィニティー
精製タグと結合するように変更された、配列番号６およ
び配列番号８の変異型Ｃ末端配列が挙げられるが、これ
に限定されない。これらの変異型Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉポ
リメラーゼと、これをコードしている核酸配列は、本発
明のＢｐａ Ｐｏｌ Ｉと実質的に同等と考えられ、そ
の範囲に含まれると考えられる。

【００２６】本発明のＢｐａ Ｐｏｌ Ｉを使用するこ
とにより、Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉを認識し、それに結合す
るモノクローナル抗体とポリクローナル抗体を調製する
ことができる。ポリクローナル抗体は、一般に、従来の
プロトコールに従って、Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉの濃縮また
は精製標本を用いて動物を免疫感作することにより作製
される。免疫感作のための好ましい抗原は、Ｂｐａ Ｐ
ｏｌ Ｉの単離または精製標本であるが、粗抽出物も使
用できる。単離された組換えＢｐａ ＰｏｌＩは免疫感
作のために好ましい抗原である。従って、免疫感作され
た動物の血清は、ポリクローナル抗Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ
抗体を含み、免疫血清はしばしばイムノアッセイに直接
使用される。この場合、血清を赤血球と血液のその他の
細胞成分から分離することによって、抗Ｂｐａ Ｐｏｌ
Ｉポリクローナル抗体を単離する。本発明のＢｐａ
Ｐｏｌ Ｉを認識するモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌ
ｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ
２５６：４９５）の方法を用いて調製できる。マウス
をＢｐａ Ｐｏｌ Ｉ抗原標本を用いて免疫感作し、そ
の脾臓細胞を融合し、得られたハイブリドーマを免疫原
との反応性について酵素結合イムノソルベント検定（Ｅ
ＬＩＳＡ）またはイムノブロットによってスクリーニン
グする。典型的には、目的の抗体を分泌するハイブリド
ーマをサブクローニングする。次に、モノクローナル抗
体を、ハイブリドーマを培養することによって、あるい
はプリスタン感作Ｂａｌｂ／Ｃ(pristan-primed Balb/
C) マウスの腹水中で作製する。つづいて、モノクロー
ナル抗体をプロテインＡ−セファロース（Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．セントルイス、ミズリー州）
のクロマトグラフィーにより培養培地または腹水から単
離する。あるいは、Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉを固相に結合
し、アフィニティークロマトグラフィーによりポリクロ
ーナル抗体またはモノクローナル抗体の精製に使用す
る。これらの方法を用いて、抗Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉモノ
クローナル抗体を産生する種々のハイブリドーマを同定
できる。モノクローナル抗体は、検出される抗原に対す
る特異性と親和性が改善されているため、イムノアッセ
イにとって好ましい。タンパク質の異なるエピトープを
認識する抗Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉモノクローナル抗体は、
タンパク質の構造と機能を評価する研究においても有用
と思われる。上記の抗Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ、好ましくは
そのモノクローナル抗体を、天然型または組換えＢｐａ
Ｐｏｌ Ｉのアフィニティー精製に使用するための技術
において公知の様に、プロテインＡ−セファロースと結
合させることもできる。

【配列表】

配列番号：1 配列の長さ：39 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 TGCCAATCTA GAAGGCGTGC CSGGCRTCGG KRAAAARAC 39 配列番号：2 配列の長さ：37 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 CACCAAGGAT CCSYTTTTAT TTSGCGTCRT ACCAYGT 37 配列番号：3 配列の長さ：2631 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..2628 配列 GTG ACA AAG AAG CTA GTT TTA ATT GAT GGA AAC AGT ATT GCT TAC AGA 48 Val Thr Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Asn Ser Ile Ala Tyr Arg 1 5 10 15 GCG TTT TTC GCT TTG CCG CTT TTA AAT AAT GAT AAG GGG ATT TAT ACG 96 Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu Asn Asn Asp Lys Gly Ile Tyr Thr 20 25 30 AAT GCA ATT TAC GGC TTT ACA AAT ATG CTG TTA AAA GTA CTG GAG GAA 144 Asn Ala Ile Tyr Gly Phe Thr Asn Met Leu Leu Lys Val Leu Glu Glu 35 40 45 GAA AAA CCG ACA CAT ATT CTT GTT GCA TTT GAT GCA GGG AAA ACA ACG 192 Glu Lys Pro Thr His Ile Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr 50 55 60 TTC CGG CAT AAA ACT TTT AAA GAA TAT AAA GGA ACT CGG CAA AAA ACC 240 Phe Arg His Lys Thr Phe Lys Glu Tyr Lys Gly Thr Arg Gln Lys Thr 65 70 75 80 CCG CCT GAA TTG TCG GAG CAG CTA CCA TTT ATA CGG GAT TTG CTT GAT 288 Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Leu Pro Phe Ile Arg Asp Leu Leu Asp 85 90 95 GCC TAC CAA ATT ACA ACA TAT GAA CTC GAA AAT TAT GAG GCT GAT GAT 336 Ala Tyr Gln Ile Thr Thr Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp 100 105 110 ATT ATT GGA ACA GTT GCG AGA CAA GCT GAG AAG CAA GAT TTT GAA GTG 384 Ile Ile Gly Thr Val Ala Arg Gln Ala Glu Lys Gln Asp Phe Glu Val 115 120 125 AAA ATT ATT TCC GGA GAT AAG GAT TTA ACA CAG CTG GCA ACT GAA AAA 432 Lys Ile Ile Ser Gly Asp Lys Asp Leu Thr Gln Leu Ala Thr Glu Lys 130 135 140 ACG ACC GTT TCC ATC ACG AAA AAA GGA ATT ACA GAT GTT GAA CCG CAC 480 Thr Thr Val Ser Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Val Glu Pro His 145 150 155 160 ACG CCT GAA TCG ATT CAA GAG AAG TAT GGG CTA AGC CCG GCA CAA ATT 528 Thr Pro Glu Ser Ile Gln Glu Lys Tyr Gly Leu Ser Pro Ala Gln Ile 165 170 175 ATT GAT TTG AAA GGA TTG ATG GGC GAT CAA TCA GAT AAT ATC CCA GGT 576 Ile Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Gln Ser Asp Asn Ile Pro Gly 180 185 190 GTG CCC GGC GTT GGA GAG AAA ACC GCG ATT AAA TTG CTG AAA CAG TTT 624 Val Pro Gly Val Gly Glu Lys Thr Ala Ile Lys Leu Leu Lys Gln Phe 195 200 205 GAG ACA GTC GAA AAT ATT TTA AAT TCG ATT GAA GAA GTA AAT GGA AAA 672 Glu Thr Val Glu Asn Ile Leu Asn Ser Ile Glu Glu Val Asn Gly Lys 210 215 220 AAA TTG AAG GAA AAC TTA CAA AAC TAT AAA GAG CAA GCA TTA ATG AGC 720 Lys Leu Lys Glu Asn Leu Gln Asn Tyr Lys Glu Gln Ala Leu Met Ser 225 230 235 240 AAA CAG CTT GCG ACA ATT CAT TGT GAA GCT CCT GTC GAA ATA AAA ATT 768 Lys Gln Leu Ala Thr Ile His Cys Glu Ala Pro Val Glu Ile Lys Ile 245 250 255 CAA GAC CTT GAG TAT AAA GGC TAT GAC AAA GAA AAA GTA GTG AAA ATT 816 Gln Asp Leu Glu Tyr Lys Gly Tyr Asp Lys Glu Lys Val Val Lys Ile 260 265 270 TTT AAG GAA CTA GGC TTC CAA TCG CTC CTA GAC AAA ATG GGA GAG CAT 864 Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Leu Leu Asp Lys Met Gly Glu His 275 280 285 GAG AAT GAA GAA GCG GAT GAA ATG CCG ACG ATT AAG TTC GAA AAA GTT 912 Glu Asn Glu Glu Ala Asp Glu Met Pro Thr Ile Lys Phe Glu Lys Val 290 295 300 GAA AAG CTG TCA GAC AAG GTT TTA TCA GAG AAG GCA GCT CTT TTA GTG 960 Glu Lys Leu Ser Asp Lys Val Leu Ser Glu Lys Ala Ala Leu Leu Val 305 310 315 320 GAA ATC ATT GAT GAA AAT TAT CAT ACT GGA GAA ATC ATC GGG TTT TCT 1008 Glu Ile Ile Asp Glu Asn Tyr His Thr Gly Glu Ile Ile Gly Phe Ser 325 330 335 ATC GCA AAC GAA AAT GGA TGT TTT TAT ATT CCA GCC GAA ATT GCG CTA 1056 Ile Ala Asn Glu Asn Gly Cys Phe Tyr Ile Pro Ala Glu Ile Ala Leu 340 345 350 CAT TCA AAA GAG TTC ATA GAA TGG GTG AAG GAT GAA ACA AAG CGG AAA 1104 His Ser Lys Glu Phe Ile Glu Trp Val Lys Asp Glu Thr Lys Arg Lys 355 360 365 GTG GTG TAT GAT GCG AAA AAA TCA ATT GTG GCG CTG CGC TGG CGA AAC 1152 Val Val Tyr Asp Ala Lys Lys Ser Ile Val Ala Leu Arg Trp Arg Asn 370 375 380 ATT GAT TTA GCA GGT ATT GAG TTT GAT GTT CTC ATT GCC TCA TAC ATT 1200 Ile Asp Leu Ala Gly Ile Glu Phe Asp Val Leu Ile Ala Ser Tyr Ile 385 390 395 400 TTA AAT CCG TCT GAA TCG ATT GAC GAC ATA GCC GAG CTT GCC AAG ACA 1248 Leu Asn Pro Ser Glu Ser Ile Asp Asp Ile Ala Glu Leu Ala Lys Thr 405 410 415 AAA AAT AAA CAT TTA GTT CAA AAG GAT GAA GTG ATT TAC GGA AAA GGC 1296 Lys Asn Lys His Leu Val Gln Lys Asp Glu Val Ile Tyr Gly Lys Gly 420 425 430 GCT AAA CGT CAT ATC CCT GAT GAA GAC ATT TTA GGC GAA CAT CTT GCC 1344 Ala Lys Arg His Ile Pro Asp Glu Asp Ile Leu Gly Glu His Leu Ala 435 440 445 AGA AAA GCG TTA GCC ATT TAT GAG CTG GAA GAA TTA TTA ATA CAA GAA 1392 Arg Lys Ala Leu Ala Ile Tyr Glu Leu Glu Glu Leu Leu Ile Gln Glu 450 455 460 TTA GAA GAA AAT GAA CAA TTT CAT TTA TTC AGC GAA TTG GAG CTT CCG 1440 Leu Glu Glu Asn Glu Gln Phe His Leu Phe Ser Glu Leu Glu Leu Pro 465 470 475 480 CTG TCA GCC ATT TTA TCT GAC ATG GAA ACA ACA GGA GTA AAG ATA GAC 1488 Leu Ser Ala Ile Leu Ser Asp Met Glu Thr Thr Gly Val Lys Ile Asp 485 490 495 GTC AAC CGT CTG AAA GAA ATG GGA AAA GAG CTT GAT GAA CAG CTG AAG 1536 Val Asn Arg Leu Lys Glu Met Gly Lys Glu Leu Asp Glu Gln Leu Lys 500 505 510 CAA TTA GAA AAG GAT ATT CAT CGT CTA GCT GGA GTG TCA TTT AAC ATT 1584 Gln Leu Glu Lys Asp Ile His Arg Leu Ala Gly Val Ser Phe Asn Ile 515 520 525 AAT TCT CCG AAG CAG CTT GGG CCG ATT TTA TTT GAA AAG CTC AAT CTA 1632 Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Pro Ile Leu Phe Glu Lys Leu Asn Leu 530 535 540 CCG GTT TTG AAA AAG ACC AAA ACG GGG TAT TCG ACC TCT GCG GAC GTT 1680 Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val 545 550 555 560 TTA GAA AAA TTG AGA GGA CAG CAC GAA ATT GTG GAG AAA ATT TTG CAT 1728 Leu Glu Lys Leu Arg Gly Gln His Glu Ile Val Glu Lys Ile Leu His 565 570 575 TAC CGG CAG CTC GGA AAG CTT CAA TCG ACG TAT ATT GAA GGG CTG CTG 1776 Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu 580 585 590 AAG GTT GTC CAT CGT GAT ACG CAT AAA ATC CAC ACC CGA TTT AAT CAA 1824 Lys Val Val His Arg Asp Thr His Lys Ile His Thr Arg Phe Asn Gln 595 600 605 GCA TTA ACG CAA ACC GGA AGA TTA AGC TCC ACA GAC CCG AAT TTG CAA 1872 Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Asp Pro Asn Leu Gln 610 615 620 AAC ATT CCG ATT CGC CTT GAG GAA GGC CGC AAA ATT CGT CAA GCA TTT 1920 Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe 625 630 635 640 ATC CCT TCT GAA AAA GAT TGG GTC ATT TTT GCA GCG GAC TAT TCC CAG 1968 Ile Pro Ser Glu Lys Asp Trp Val Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln 645 650 655 ATT GAA CTG CGA GTG CTT GCG CAT ATA TCT GGA GAT GAA AAA TTG ATT 2016 Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ser Gly Asp Glu Lys Leu Ile 660 665 670 GAA GCG TTT AAA CAA GAT CTT GAT ATT CAT ACA AAA ACG GCG ATC GAT 2064 Glu Ala Phe Lys Gln Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Ile Asp 675 680 685 GTG TTC CAT GTC GAA GAA GAT AAA GTG ACC TCC AAC ATG AGA AGA CAG 2112 Val Phe His Val Glu Glu Asp Lys Val Thr Ser Asn Met Arg Arg Gln 690 695 700 GCA AAA GCA GTT AAT TTC GGG ATT GTT TAC GGA ATC AGC GAT TAC GGA 2160 Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly 705 710 715 720 TTG TCG CAA AAC TTA GGA ATT ACC CGA AAA GAA GCT GGT GAA TTT ATT 2208 Leu Ser Gln Asn Leu Gly Ile Thr Arg Lys Glu Ala Gly Glu Phe Ile 725 730 735 AAA AAA TAT TTT GAA ATT TAT AAA GGC GTT AAA GAA TAT ATG GAT GGC 2256 Lys Lys Tyr Phe Glu Ile Tyr Lys Gly Val Lys Glu Tyr Met Asp Gly 740 745 750 ATA ATC CAA GAG GCG AAG CAA AAA GGC TAT GTA ACG ACA CTA ATG CAG 2304 755 760 765 CGT CGG AGA TAT ATT CCG GAA ATT ACG AGC AGA AAT TTC AAT ATC AGA 2352 Arg Arg Arg Tyr Ile Pro Glu Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Ile Arg 770 775 780 AGC TTC GCT GAG CGA ACA GCC ATG AAT ACT CCG ATT CAA GGA AGT GCA 2400 Ser Phe Ala Glu Arg Thr Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala 785 790 795 800 GCG GAT ATT ATC AAA AAA GCG ATG ATC GAT ATG GCG CAA GAA ATT GAA 2448 Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Met Ala Gln Glu Ile Glu 805 810 815 AAA CGA AAT TTG CAA ACG AGG CTG CTG CTT CAA GTT CAT GAC GAA TTG 2496 Lys Arg Asn Leu Gln Thr Arg Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu 820 825 830 GTG TTT GAA GCG CCA AAG GAT GAA ATT GAA ATT TTA GAA AAG CTT GTT 2544 Val Phe Glu Ala Pro Lys Asp Glu Ile Glu Ile Leu Glu Lys Leu Val 835 840 845 CCG GAA GTA ATG GAA AAT GCC ATT CAG CTA AAA GTA CCG TTA AAG GTT 2592 Pro Glu Val Met Glu Asn Ala Ile Gln Leu Lys Val Pro Leu Lys Val 850 855 860 GAT TAT TCT TAC GGT TCT ACG TGG TAT GAA GCG AAA TAA 2631 Asp Tyr Ser Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Glu Ala Lys 865 870 875 配列番号：4 配列の長さ：876 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Val Thr Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Asn Ser Ile Ala Tyr Arg 1 5 10 15 Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu Asn Asn Asp Lys Gly Ile Tyr Thr 20 25 30 Asn Ala Ile Tyr Gly Phe Thr Asn Met Leu Leu Lys Val Leu Glu Glu 35 40 45 Glu Lys Pro Thr His Ile Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr 50 55 60 Phe Arg His Lys Thr Phe Lys Glu Tyr Lys Gly Thr Arg Gln Lys Thr 65 70 75 80 Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Leu Pro Phe Ile Arg Asp Leu Leu Asp 85 90 95 Ala Tyr Gln Ile Thr Thr Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp 100 105 110 Ile Ile Gly Thr Val Ala Arg Gln Ala Glu Lys Gln Asp Phe Glu Val 115 120 125 Lys Ile Ile Ser Gly Asp Lys Asp Leu Thr Gln Leu Ala Thr Glu Lys 130 135 140 Thr Thr Val Ser Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Val Glu Pro His 145 150 155 160 Thr Pro Glu Ser Ile Gln Glu Lys Tyr Gly Leu Ser Pro Ala Gln Ile 165 170 175 Ile Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Gln Ser Asp Asn Ile Pro Gly 180 185 190 Val Pro Gly Val Gly Glu Lys Thr Ala Ile Lys Leu Leu Lys Gln Phe 195 200 205 Glu Thr Val Glu Asn Ile Leu Asn Ser Ile Glu Glu Val Asn Gly Lys 210 215 220 Lys Leu Lys Glu Asn Leu Gln Asn Tyr Lys Glu Gln Ala Leu Met Ser 225 230 235 240 Lys Gln Leu Ala Thr Ile His Cys Glu Ala Pro Val Glu Ile Lys Ile 245 250 255 Gln Asp Leu Glu Tyr Lys Gly Tyr Asp Lys Glu Lys Val Val Lys Ile 260 265 270 Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Leu Leu Asp Lys Met Gly Glu His 275 280 285 Glu Asn Glu Glu Ala Asp Glu Met Pro Thr Ile Lys Phe Glu Lys Val 290 295 300 Glu Lys Leu Ser Asp Lys Val Leu Ser Glu Lys Ala Ala Leu Leu Val 305 310 315 320 Glu Ile Ile Asp Glu Asn Tyr His Thr Gly Glu Ile Ile Gly Phe Ser 325 330 335 Ile Ala Asn Glu Asn Gly Cys Phe Tyr Ile Pro Ala Glu Ile Ala Leu 340 345 350 His Ser Lys Glu Phe Ile Glu Trp Val Lys Asp Glu Thr Lys Arg Lys 355 360 365 Val Val Tyr Asp Ala Lys Lys Ser Ile Val Ala Leu Arg Trp Arg Asn 370 375 380 Ile Asp Leu Ala Gly Ile Glu Phe Asp Val Leu Ile Ala Ser Tyr Ile 385 390 395 400 Leu Asn Pro Ser Glu Ser Ile Asp Asp Ile Ala Glu Leu Ala Lys Thr 405 410 415 Lys Asn Lys His Leu Val Gln Lys Asp Glu Val Ile Tyr Gly Lys Gly 420 425 430 Ala Lys Arg His Ile Pro Asp Glu Asp Ile Leu Gly Glu His Leu Ala 435 440 445 Arg Lys Ala Leu Ala Ile Tyr Glu Leu Glu Glu Leu Leu Ile Gln Glu 450 455 460 Leu Glu Glu Asn Glu Gln Phe His Leu Phe Ser Glu Leu Glu Leu Pro 465 470 475 480 Leu Ser Ala Ile Leu Ser Asp Met Glu Thr Thr Gly Val Lys Ile Asp 485 490 495 Val Asn Arg Leu Lys Glu Met Gly Lys Glu Leu Asp Glu Gln Leu Lys 500 505 510 Gln Leu Glu Lys Asp Ile His Arg Leu Ala Gly Val Ser Phe Asn Ile 515 520 525 Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Pro Ile Leu Phe Glu Lys Leu Asn Leu 530 535 540 Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val 545 550 555 560 Leu Glu Lys Leu Arg Gly Gln His Glu Ile Val Glu Lys Ile Leu His 565 570 575 Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu 580 585 590 Lys Val Val His Arg Asp Thr His Lys Ile His Thr Arg Phe Asn Gln 595 600 605 Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Asp Pro Asn Leu Gln 610 615 620 Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe 625 630 635 640 Ile Pro Ser Glu Lys Asp Trp Val Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln 645 650 655 Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ser Gly Asp Glu Lys Leu Ile 660 665 670 Glu Ala Phe Lys Gln Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Ile Asp 675 680 685 Val Phe His Val Glu Glu Asp Lys Val Thr Ser Asn Met Arg Arg Gln 690 695 700 Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly 705 710 715 720 Leu Ser Gln Asn Leu Gly Ile Thr Arg Lys Glu Ala Gly Glu Phe Ile 725 730 735 Lys Lys Tyr Phe Glu Ile Tyr Lys Gly Val Lys Glu Tyr Met Asp Gly 740 745 750 Ile Ile Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Met Gln 755 760 765 Arg Arg Arg Tyr Ile Pro Glu Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Ile Arg 770 775 780 Ser Phe Ala Glu Arg Thr Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala 785 790 795 800 Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Met Ala Gln Glu Ile Glu 805 810 815 Lys Arg Asn Leu Gln Thr Arg Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu 820 825 830 Val Phe Glu Ala Pro Lys Asp Glu Ile Glu Ile Leu Glu Lys Leu Val 835 840 845 Pro Glu Val Met Glu Asn Ala Ile Gln Leu Lys Val Pro Leu Lys Val 850 855 860 Asp Tyr Ser Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Glu Ala Lys 865 870 875 配列番号：5 配列の長さ：3255 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..3252 配列 ATG AAA ATC GAA GAA GGT AAA CTG GTA ATC TGG ATT AAC GGC GAT AAA 48 Met Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile Asn Gly Asp Lys 880 885 890 GGC TAT AAC GGT CTC GCT GAA GTC GGT AAG AAA TTC GAG AAA GAT ACC 96 Gly Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe Glu Lys Asp Thr 895 900 905 GGA ATT AAA GTC ACC GTT GAG CAT CCG GAT AAA CTG GAA GAG AAA TTC 144 Gly Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu Glu Glu Lys Phe 910 915 920 CCA CAG GTT GCG GCA ACT GGC GAT GGC CCT GAC ATT ATC TTC TGG GCA 192 Pro Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile Ile Phe Trp Ala 925 930 935 940 CAC GAC CGC TTT GGT GGC TAC GCT CAA TCT GGC CTG TTG GCT GAA ATC 240 His Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu Leu Ala Glu Ile 945 950 955 ACC CCG GAC AAA GCG TTC CAG GAC AAG CTG TAT CCG TTT ACC TGG GAT 288 Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro Phe Thr Trp Asp 960 965 970 GCC GTA CGT TAC AAC GGC AAG CTG ATT GCT TAC CCG ATC GCT GTT GAA 336 Ala Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro Ile Ala Val Glu 975 980 985 GCG TTA TCG CTG ATT TAT AAC AAA GAT CTG CTG CCG AAC CCG CCA AAA 384 Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro Asn Pro Pro Lys 990 995 1000 ACC TGG GAA GAG ATC CCG GCG CTG GAT AAA GAA CTG AAA GCG AAA GGT 432 Thr Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu Lys Ala Lys Gly 1005 1010 1015 1020 AAG AGC GCG CTG ATG TTC AAC CTG CAA GAA CCG TAC TTC ACC TGG CCG 480 Lys Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr Phe Thr Trp Pro 1025 1030 1035 CTG ATT GCT GCT GAC GGG GGT TAT GCG TTC AAG TAT GAA AAC GGC AAG 528 Leu Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr Glu Asn Gly Lys 1040 1045 1050 TAC GAC ATT AAA GAC GTG GGC GTG GAT AAC GCT GGC GCG AAA GCG GGT 576 Tyr Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly Ala Lys Ala Gly 1055 1060 1065 CTG ACC TTC CTG GTT GAC CTG ATT AAA AAC AAA CAC ATG AAT GCA GAC 624 Leu Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His Met Asn Ala Asp 1070 1075 1080 ACC GAT TAC TCC ATC GCA GAA GCT GCC TTT AAT AAA GGC GAA ACA GCG 672 Thr Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys Gly Glu Thr Ala 1085 1090 1095 1100 ATG ACC ATC AAC GGC CCG TGG GCA TGG TCC AAC ATC GAC ACC AGC AAA 720 Met Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile Asp Thr Ser Lys 1105 1110 1115 GTG AAT TAT GGT GTA ACG GTA CTG CCG ACC TTC AAG GGT CAA CCA TCC 768 Val Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys Gly Gln Pro Ser 1120 1125 1130 AAA CCG TTC GTT GGC GTG CTG AGC GCA GGT ATT AAC GCC GCC AGT CCG 816 Lys Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn Ala Ala Ser Pro 1135 1140 1145 AAC AAA GAG CTG GCA AAA GAG TTC CTC GAA AAC TAT CTG CTG ACT GAT 864 Asn Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr Leu Leu Thr Asp 1150 1155 1160 GAA GGT CTG GAA GCG GTT AAT AAA GAC AAA CCG CTG GGT GCC GTA GCG 912 Glu Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Ala Val Ala 1165 1170 1175 1180 CTG AAG TCT TAC GAG GAA GAG TTG GCG AAA GAT CCA CGT ATT GCC GCC 960 Leu Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Ala Lys Asp Pro Arg Ile Ala Ala 1185 1190 1195 ACC ATG GAA AAC GCC CAG AAA GGT GAA ATC ATG CCG AAC ATC CCG CAG 1008 Thr Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro Asn Ile Pro Gln 1200 1205 1210 ATG TCC GCT TTC TGG TAT GCC GTG CGT ACT GCG GTG ATC AAC GCC GCC 1056 Met Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val Ile Asn Ala Ala 1215 1220 1225 AGC GGT CGT CAG ACT GTC GAT GAA GCC CTG AAA GAC GCG CAG ACT AAT 1104 Ser Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp Ala Gln Thr Asn 1230 1235 1240 TCG AGC TCG AAC AAC AAC AAC AAT AAC AAT AAC AAC AAC CTC GGG ATC 1152 Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Leu Gly Ile 1245 1250 1255 1260 GAG GGA AGG ATT TCA GAA TTC GGT GTG CCC GGC GTT GGA GAG AAA ACC 1200 Glu Gly Arg Ile Ser Glu Phe Gly Val Pro Gly Val Gly Glu Lys Thr 1265 1270 1275 GCG ATT AAA TTG CTG AAA CAG TTT GAG ACA GTC GAA AAT ATT TTA AAT 1248 Ala Ile Lys Leu Leu Lys Gln Phe Glu Thr Val Glu Asn Ile Leu Asn 1280 1285 1290 TCG ATT GAA GAA GTA AAT GGA AAA AAA TTG AAG GAA AAC TTA CAA AAC 1296 Ser Ile Glu Glu Val Asn Gly Lys Lys Leu Lys Glu Asn Leu Gln Asn 1295 1300 1305 TAT AAA GAG CAA GCA TTA ATG AGC AAA CAG CTT GCG ACA ATT CAT TGT 1344 Tyr Lys Glu Gln Ala Leu Met Ser Lys Gln Leu Ala Thr Ile His Cys 1310 1315 1320 GAA GCT CCT GTC GAA ATA AAA ATT CAA GAC CTT GAG TAT AAA GGC TAT 1392 Glu Ala Pro Val Glu Ile Lys Ile Gln Asp Leu Glu Tyr Lys Gly Tyr 1325 1330 1335 1340 GAC AAA GAA AAA GTA GTG AAA ATT TTT AAG GAA CTA GGC TTC CAA TCG 1440 Asp Lys Glu Lys Val Val Lys Ile Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser 1345 1350 1355 CTC CTA GAC AAA ATG GGA GAG CAT GAG AAT GAA GAA GCG GAT GAA ATG 1488 Leu Leu Asp Lys Met Gly Glu His Glu Asn Glu Glu Ala Asp Glu Met 1360 1365 1370 CCG ACG ATT AAG TTC GAA AAA GTT GAA AAG CTG TCA GAC AAG GTT TTA 1536 Pro Thr Ile Lys Phe Glu Lys Val Glu Lys Leu Ser Asp Lys Val Leu 1375 1380 1385 TCA GAG AAG GCA GCT CTT TTA GTG GAA ATC ATT GAT GAA AAT TAT CAT 1584 Ser Glu Lys Ala Ala Leu Leu Val Glu Ile Ile Asp Glu Asn Tyr His 1390 1395 1400 ACT GGA GAA ATC ATC GGG TTT TCT ATC GCA AAC GAA AAT GGA TGT TTT 1632 Thr Gly Glu Ile Ile Gly Phe Ser Ile Ala Asn Glu Asn Gly Cys Phe 1405 1410 1415 1420 TAT ATT CCA GCC GAA ATT GCG CTA CAT TCA AAA GAG TTC ATA GAA TGG 1680 Tyr Ile Pro Ala Glu Ile Ala Leu His Ser Lys Glu Phe Ile Glu Trp 1425 1430 1435 GTG AAG GAT GAA ACA AAG CGG AAA GTG GTG TAT GAT GCG AAA AAA TCA 1728 Val Lys Asp Glu Thr Lys Arg Lys Val Val Tyr Asp Ala Lys Lys Ser 1440 1445 1450 ATT GTG GCG CTG CGC TGG CGA AAC ATT GAT TTA GCA GGT ATT GAG TTT 1776 Ile Val Ala Leu Arg Trp Arg Asn Ile Asp Leu Ala Gly Ile Glu Phe 1455 1460 1465 GAT GTT CTC ATT GCC TCA TAC ATT TTA AAT CCG TCT GAA TCG ATT GAC 1824 Asp Val Leu Ile Ala Ser Tyr Ile Leu Asn Pro Ser Glu Ser Ile Asp 1470 1475 1480 GAC ATA GCC GAG CTT GCC AAG ACA AAA AAT AAA CAT TTA GTT CAA AAG 1872 Asp Ile Ala Glu Leu Ala Lys Thr Lys Asn Lys His Leu Val Gln Lys 1485 1490 1495 1500 GAT GAA GTG ATT TAC GGA AAA GGC GCT AAA CGT CAT ATC CCT GAT GAA 1920 Asp Glu Val Ile Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg His Ile Pro Asp Glu 1505 1510 1515 GAC ATT TTA GGC GAA CAT CTT GCC AGA AAA GCG TTA GCC ATT TAT GAG 1968 Asp Ile Leu Gly Glu His Leu Ala Arg Lys Ala Leu Ala Ile Tyr Glu 1520 1525 1530 CTG GAA GAA TTA TTA ATA CAA GAA TTA GAA GAA AAT GAA CAA TTT CAT 2016 Leu Glu Glu Leu Leu Ile Gln Glu Leu Glu Glu Asn Glu Gln Phe His 1535 1540 1545 TTA TTC AGC GAA TTG GAG CTT CCG CTG TCA GCC ATT TTA TCT GAC ATG 2064 Leu Phe Ser Glu Leu Glu Leu Pro Leu Ser Ala Ile Leu Ser Asp Met 1550 1555 1560 GAA ACA ACA GGA GTA AAG ATA GAC GTC AAC CGT CTG AAA GAA ATG GGA 2112 Glu Thr Thr Gly Val Lys Ile Asp Val Asn Arg Leu Lys Glu Met Gly 1565 1570 1575 1580 AAA GAG CTT GAT GAA CAG CTG AAG CAA TTA GAA AAG GAT ATT CAT CGT 2160 Lys Glu Leu Asp Glu Gln Leu Lys Gln Leu Glu Lys Asp Ile His Arg 1585 1590 1595 CTA GCT GGA GTG TCA TTT AAC ATT AAT TCT CCG AAG CAG CTT GGG CCG 2208 Leu Ala Gly Val Ser Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Pro 1600 1605 1610 ATT TTA TTT GAA AAG CTC AAT CTA CCG GTT TTG AAA AAG ACC AAA ACG 2256 Ile Leu Phe Glu Lys Leu Asn Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr 1615 1620 1625 GGG TAT TCG ACC TCT GCG GAC GTT TTA GAA AAA TTG AGA GGA CAG CAC 2304 Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Arg Gly Gln His 1630 1635 1640 GAA ATT GTG GAG AAA ATT TTG CAT TAC CGG CAG CTC GGA AAG CTT CAA 2352 Glu Ile Val Glu Lys Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln 1645 1650 1655 1660 TCG ACG TAT ATT GAA GGG CTG CTG AAG GTT GTC CAT CGT GAT ACG CAT 2400 Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val His Arg Asp Thr His 1665 1670 1675 AAA ATC CAC ACC CGA TTT AAT CAA GCA TTA ACG CAA ACC GGA AGA TTA 2448 Lys Ile His Thr Arg Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu 1680 1685 1690 AGC TCC ACA GAC CCG AAT TTG CAA AAC ATT CCG ATT CGC CTT GAG GAA 2496 Ser Ser Thr Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu 1695 1700 1705 GGC CGC AAA ATT CGT CAA GCA TTT ATC CCT TCT GAA AAA GAT TGG GTC 2544 Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Ile Pro Ser Glu Lys Asp Trp Val 1710 1715 1720 ATT TTT GCA GCG GAC TAT TCC CAG ATT GAA CTG CGA GTG CTT GCG CAT 2592 Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His 1725 1730 1735 1740 ATA TCT GGA GAT GAA AAA TTG ATT GAA GCG TTT AAA CAA GAT CTT GAT 2640 Ile Ser Gly Asp Glu Lys Leu Ile Glu Ala Phe Lys Gln Asp Leu Asp 1745 1750 1755 ATT CAT ACA AAA ACG GCG ATC GAT GTG TTC CAT GTC GAA GAA GAT AAA 2688 Ile His Thr Lys Thr Ala Ile Asp Val Phe His Val Glu Glu Asp Lys 1760 1765 1770 GTG ACC TCC AAC ATG AGA AGA CAG GCA AAA GCA GTT AAT TTC GGG ATT 2736 Val Thr Ser Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile 1775 1780 1785 GTT TAC GGA ATC AGC GAT TAC GGA TTG TCG CAA AAC TTA GGA ATT ACC 2784 Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ser Gln Asn Leu Gly Ile Thr 1790 1795 1800 CGA AAA GAA GCT GGT GAA TTT ATT AAA AAA TAT TTT GAA ATT TAT AAA 2832 Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｌｙｓ 1805 1810 1815 1820 GGC GTT AAA GAA TAT ATG GAT GGC ATA ATC CAA GAG GCG AAG CAA AAA 2880 Gly Val Lys Glu Tyr Met Asp Gly Ile Ile Gln Glu Ala Lys Gln Lys 1825 1830 1835 GGC TAT GTA ACG ACA CTA ATG CAG CGT CGG AGA TAT ATT CCG GAA ATT 2928 Gly Tyr Val Thr Thr Leu Met Gln Arg Arg Arg Tyr Ile Pro Glu Ile 1840 1845 1850 ACG AGC AGA AAT TTC AAT ATC AGA AGC TTC GCT GAG CGA ACA GCC ATG 2976 Thr Ser Arg Asn Phe Asn Ile Arg Ser Phe Ala Glu Arg Thr Ala Met 1855 1860 1865 AAT ACT CCG ATT CAA GGA AGT GCA GCG GAT ATT ATC AAA AAA GCG ATG 3024 Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met 1870 1875 1880 ATC GAT ATG GCG CAA GAA ATT GAA AAA CGA AAT TTG CAA ACG AGG CTG 3072 Ile Asp Met Ala Gln Glu Ile Glu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Arg Leu 1885 1890 1895 1900 CTG CTT CAA GTT CAT GAC GAA TTG GTG TTT GAA GCG CCA AAG GAT GAA 3120 Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Val Phe Glu Ala Pro Lys Asp Glu 1905 1910 1915 ATT GAA ATT TTA GAA AAG CTT GTT CCG GAA GTA ATG GAA AAT GCC ATT 3168 Ile Glu Ile Leu Glu Lys Leu Val Pro Glu Val Met Glu Asn Ala Ile 1920 1925 1930 CAG CTA AAA GTA CCG TTA AAG GTT GAT TAT TCT TAC GGT TCT ACG TGG 3216 Gln Leu Lys Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Ser Tyr Gly Ser Thr Trp 1935 1940 1945 TAT GAC GCC AAA TCA TCT CAT CAT CAT CAT CAT CAT TAA 3255 Tyr Asp Ala Lys Ser Ser His His His His His His 1950 1955 1960

【００２７】配列配列番号：6 配列の長さ：1084 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile Asn Gly Asp Lys 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe Glu Lys Asp Thr 20 25 30 Gly Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu Glu Glu Lys Phe 35 40 45 Pro Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile Ile Phe Trp Ala 50 55 60 His Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu Leu Ala Glu Ile 65 70 75 80 Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro Phe Thr Trp Asp 85 90 95 Ala Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro Ile Ala Val Glu 100 105 110 Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro Asn Pro Pro Lys 115 120 125 Thr Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Lys Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr Phe Thr Trp Pro 145 150 155 160 Leu Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr Glu Asn Gly Lys 165 170 175 Tyr Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly Ala Lys Ala Gly 180 185 190 Leu Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His Met Asn Ala Asp 195 200 205 Thr Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys Gly Glu Thr Ala 210 215 220 Met Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile Asp Thr Ser Lys 225 230 235 240 Val Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys Gly Gln Pro Ser 245 250 255 Lys Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn Ala Ala Ser Pro 260 265 270 Asn Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr Leu Leu Thr Asp 275 280 285 Glu Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Ala Val Ala 290 295 300 Leu Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Ala Lys Asp Pro Arg Ile Ala Ala 305 310 315 320 Thr Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro Asn Ile Pro Gln 325 330 335 Met Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val Ile Asn Ala Ala 340 345 350 Ser Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp Ala Gln Thr Asn 355 360 365 Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Leu Gly Ile 370 375 380 Glu Gly Arg Ile Ser Glu Phe Gly Val Pro Gly Val Gly Glu Lys Thr 385 390 395 400 Ala Ile Lys Leu Leu Lys Gln Phe Glu Thr Val Glu Asn Ile Leu Asn 405 410 415 Ser Ile Glu Glu Val Asn Gly Lys Lys Leu Lys Glu Asn Leu Gln Asn 420 425 430 Tyr Lys Glu Gln Ala Leu Met Ser Lys Gln Leu Ala Thr Ile His Cys 435 440 445 Glu Ala Pro Val Glu Ile Lys Ile Gln Asp Leu Glu Tyr Lys Gly Tyr 450 455 460 Asp Lys Glu Lys Val Val Lys Ile Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser 465 470 475 480 Leu Leu Asp Lys Met Gly Glu His Glu Asn Glu Glu Ala Asp Glu Met 485 490 495 Pro Thr Ile Lys Phe Glu Lys Val Glu Lys Leu Ser Asp Lys Val Leu 500 505 510 Ser Glu Lys Ala Ala Leu Leu Val Glu Ile Ile Asp Glu Asn Tyr His 515 520 525 Thr Gly Glu Ile Ile Gly Phe Ser Ile Ala Asn Glu Asn Gly Cys Phe 530 535 540 Tyr Ile Pro Ala Glu Ile Ala Leu His Ser Lys Glu Phe Ile Glu Trp 545 550 555 560 Val Lys Asp Glu Thr Lys Arg Lys Val Val Tyr Asp Ala Lys Lys Ser 565 570 575 Ile Val Ala Leu Arg Trp Arg Asn Ile Asp Leu Ala Gly Ile Glu Phe 580 585 590 Asp Val Leu Ile Ala Ser Tyr Ile Leu Asn Pro Ser Glu Ser Ile Asp 595 600 605 Asp Ile Ala Glu Leu Ala Lys Thr Lys Asn Lys His Leu Val Gln Lys 610 615 620 Asp Glu Val Ile Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg His Ile Pro Asp Glu 625 630 635 640 Asp Ile Leu Gly Glu His Leu Ala Arg Lys Ala Leu Ala Ile Tyr Glu 645 650 655 Leu Glu Glu Leu Leu Ile Gln Glu Leu Glu Glu Asn Glu Gln Phe His 660 665 670 Leu Phe Ser Glu Leu Glu Leu Pro Leu Ser Ala Ile Leu Ser Asp Met 675 680 685 Glu Thr Thr Gly Val Lys Ile Asp Val Asn Arg Leu Lys Glu Met Gly 690 695 700 Lys Glu Leu Asp Glu Gln Leu Lys Gln Leu Glu Lys Asp Ile His Arg 705 710 715 720 Leu Ala Gly Val Ser Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Pro 725 730 735 Ile Leu Phe Glu Lys Leu Asn Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr 740 745 750 Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Arg Gly Gln His 755 760 765 Glu Ile Val Glu Lys Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln 770 775 780 Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val His Arg Asp Thr His 785 790 795 800 Lys Ile His Thr Arg Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu 805 810 815 Ser Ser Thr Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu 820 825 830 Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Ile Pro Ser Glu Lys Asp Trp Val 835 840 845 Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His 850 855 860 Ile Ser Gly Asp Glu Lys Leu Ile Glu Ala Phe Lys Gln Asp Leu Asp 865 870 875 880 Ile His Thr Lys Thr Ala Ile Asp Val Phe His Val Glu Glu Asp Lys 885 890 895 Val Thr Ser Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile 900 905 910 Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ser Gln Asn Leu Gly Ile Thr 915 920 925 Arg Lys Glu Ala Gly Glu Phe Ile Lys Lys Tyr Phe Glu Ile Tyr Lys 930 935 940 Gly Val Lys Glu Tyr Met Asp Gly Ile Ile Gln Glu Ala Lys Gln Lys 945 950 955 960 Gly Tyr Val Thr Thr Leu Met Gln Arg Arg Arg Tyr Ile Pro Glu Ile 965 970 975 Thr Ser Arg Asn Phe Asn Ile Arg Ser Phe Ala Glu Arg Thr Ala Met 980 985 990 Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met 995 1000 1005 Ile Asp Met Ala Gln Glu Ile Glu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Arg Leu 1010 1015 1020 Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Val Phe Glu Ala Pro Lys Asp Glu 1025 1030 1035 1040 Ile Glu Ile Leu Glu Lys Leu Val Pro Glu Val Met Glu Asn Ala Ile 1045 1050 1055 Gln Leu Lys Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Ser Tyr Gly Ser Thr Trp 1060 1065 1070 Tyr Asp Ala Lys Ser Ser His His His His His His 1075 1080 配列番号：7 配列の長さ：3831 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の特徴 配列を表す記号：CDS 存在位置：1..3828 配列 ATG AAA ATC GAA GAA GGT AAA CTG GTA ATC TGG ATT AAC GGC GAT AAA 48 Met Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile Asn Gly Asp Lys 1085 1090 1095 1100 GGC TAT AAC GGT CTC GCT GAA GTC GGT AAG AAA TTC GAG AAA GAT ACC 96 Gly Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe Glu Lys Asp Thr 1105 1110 1115 GGA ATT AAA GTC ACC GTT GAG CAT CCG GAT AAA CTG GAA GAG AAA TTC 144 Gly Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu Glu Glu Lys Phe 1120 1125 1130 CCA CAG GTT GCG GCA ACT GGC GAT GGC CCT GAC ATT ATC TTC TGG GCA 192 Pro Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile Ile Phe Trp Ala 1135 1140 1145 CAC GAC CGC TTT GGT GGC TAC GCT CAA TCT GGC CTG TTG GCT GAA ATC 240 His Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu Leu Ala Glu Ile 1150 1155 1160 ACC CCG GAC AAA GCG TTC CAG GAC AAG CTG TAT CCG TTT ACC TGG GAT 288 Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro Phe Thr Trp Asp 1165 1170 1175 1180 GCC GTA CGT TAC AAC GGC AAG CTG ATT GCT TAC CCG ATC GCT GTT GAA 336 Ala Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro Ile Ala Val Glu 1185 1190 1195 GCG TTA TCG CTG ATT TAT AAC AAA GAT CTG CTG CCG AAC CCG CCA AAA 384 Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro Asn Pro Pro Lys 1200 1205 1210 ACC TGG GAA GAG ATC CCG GCG CTG GAT AAA GAA CTG AAA GCG AAA GGT 432 Thr Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu Lys Ala Lys Gly 1215 1220 1225 AAG AGC GCG CTG ATG TTC AAC CTG CAA GAA CCG TAC TTC ACC TGG CCG 480 Lys Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr Phe Thr Trp Pro 1230 1235 1240 CTG ATT GCT GCT GAC GGG GGT TAT GCG TTC AAG TAT GAA AAC GGC AAG 528 Leu Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr Glu Asn Gly Lys 1245 1250 1255 1260 TAC GAC ATT AAA GAC GTG GGC GTG GAT AAC GCT GGC GCG AAA GCG GGT 576 Tyr Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly Ala Lys Ala Gly 1265 1270 1275 CTG ACC TTC CTG GTT GAC CTG ATT AAA AAC AAA CAC ATG AAT GCA GAC 624 Leu Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His Met Asn Ala Asp 1280 1285 1290 ACC GAT TAC TCC ATC GCA GAA GCT GCC TTT AAT AAA GGC GAA ACA GCG 672 Thr Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys Gly Glu Thr Ala 1295 1300 1305 ATG ACC ATC AAC GGC CCG TGG GCA TGG TCC AAC ATC GAC ACC AGC AAA 720 Met Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile Asp Thr Ser Lys 1310 1315 1320 GTG AAT TAT GGT GTA ACG GTA CTG CCG ACC TTC AAG GGT CAA CCA TCC 768 Val Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys Gly Gln Pro Ser 1325 1330 1335 1340 AAA CCG TTC GTT GGC GTG CTG AGC GCA GGT ATT AAC GCC GCC AGT CCG 816 Lys Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn Ala Ala Ser Pro 1345 1350 1355 AAC AAA GAG CTG GCA AAA GAG TTC CTC GAA AAC TAT CTG CTG ACT GAT 864 Asn Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr Leu Leu Thr Asp 1360 1365 1370 GAA GGT CTG GAA GCG GTT AAT AAA GAC AAA CCG CTG GGT GCC GTA GCG 912 Glu Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Ala Val Ala 1375 1380 1385 CTG AAG TCT TAC GAG GAA GAG TTG GCG AAA GAT CCA CGT ATT GCC GCC 960 Leu Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Ala Lys Asp Pro Arg Ile Ala Ala 1390 1395 1400 ACC ATG GAA AAC GCC CAG AAA GGT GAA ATC ATG CCG AAC ATC CCG CAG 1008 Thr Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro Asn Ile Pro Gln 1405 1410 1415 1420 ATG TCC GCT TTC TGG TAT GCC GTG CGT ACT GCG GTG ATC AAC GCC GCC 1056 Met Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val Ile Asn Ala Ala 1425 1430 1435 AGC GGT CGT CAG ACT GTC GAT GAA GCC CTG AAA GAC GCG CAG ACT AAT 1104 Ser Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp Ala Gln Thr Asn 1440 1445 1450 TCG AGC TCG AAC AAC AAC AAC AAT AAC AAT AAC AAC AAC CTC GGG ATC 1152 Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Leu Gly Ile 1455 1460 1465 GAG GGA AGG ATT TCA GAA TTC GGC GTG ACA AAG AAG CTA GTT TTA ATT 1200 Glu Gly Arg Ile Ser Glu Phe Gly Val Thr Lys Lys Leu Val Leu Ile 1470 1475 1480 GAT GGA AAC AGT ATT GCT TAC AGA GCG TTT TTC GCT TTG CCG CTT TTA 1248 Asp Gly Asn Ser Ile Ala Tyr Arg Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu 1485 1490 1495 1500 AAT AAT GAT AAG GGG ATT TAT ACG AAT GCA ATT TAC GGC TTT ACA AAT 1296 Ａｓｎ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｎ 1505 1510 1515 ATG CTG TTA AAA GTA CTG GAG GAA GAA AAA CCG ACA CAT ATT CTT GTT 1344 Met Leu Leu Lys Val Leu Glu Glu Glu Lys Pro Thr His Ile Leu Val 1520 1525 1530 GCA TTT GAT GCA GGG AAA ACA ACG TTC CGG CAT AAA ACT TTT AAA GAA 1392 Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr Phe Arg His Lys Thr Phe Lys Glu 1535 1540 1545 TAT AAA GGA ACT CGG CAA AAA ACC CCG CCT GAA TTG TCG GAG CAG CTA 1440 Tyr Lys Gly Thr Arg Gln Lys Thr Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Leu 1550 1555 1560 CCA TTT ATA CGG GAT TTG CTT GAT GCC TAC CAA ATT ACA ACA TAT GAA 1488 Pro Phe Ile Arg Asp Leu Leu Asp Ala Tyr Gln Ile Thr Thr Tyr Glu 1565 1570 1575 1580 CTC GAA AAT TAT GAG GCT GAT GAT ATT ATT GGA ACA GTT GCG AGA CAA 1536 Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp Ile Ile Gly Thr Val Ala Arg Gln 1585 1590 1595 GCT GAG AAG CAA GAT TTT GAA GTG AAA ATT ATT TCC GGA GAT AAG GAT 1584 Ala Glu Lys Gln Asp Phe Glu Val Lys Ile Ile Ser Gly Asp Lys Asp 1600 1605 1610 TTA ACA CAG CTG GCA ACT GAA AAA ACG ACC GTT TCC ATC ACG AAA AAA 1632 Leu Thr Gln Leu Ala Thr Glu Lys Thr Thr Val Ser Ile Thr Lys Lys 1615 1620 1625 GGA ATT ACA GAT GTT GAA CCG CAC ACG CCT GAA TCG ATT CAA GAG AAG 1680 Gly Ile Thr Asp Val Glu Pro His Thr Pro Glu Ser Ile Gln Glu Lys 1630 1635 1640 TAT GGG CTA AGC CCG GCA CAA ATT ATT GAT TTG AAA GGA TTG ATG GGC 1728 Tyr Gly Leu Ser Pro Ala Gln Ile Ile Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly 1645 1650 1655 1660 GAT CAA TCA GAT AAT ATC CCA GGT GTG CCC GGC GTT GGA GAG AAA ACC 1776 Asp Gln Ser Asp Asn Ile Pro Gly Val Pro Gly Val Gly Glu Lys Thr 1665 1670 1675 GCG ATT AAA TTG CTG AAA CAG TTT GAG ACA GTC GAA AAT ATT TTA AAT 1824 Ala Ile Lys Leu Leu Lys Gln Phe Glu Thr Val Glu Asn Ile Leu Asn 1680 1685 1690 TCG ATT GAA GAA GTA AAT GGA AAA AAA TTG AAG GAA AAC TTA CAA AAC 1872 Ser Ile Glu Glu Val Asn Gly Lys Lys Leu Lys Glu Asn Leu Gln Asn 1695 1700 1705 TAT AAA GAG CAA GCA TTA ATG AGC AAA CAG CTT GCG ACA ATT CAT TGT 1920 Tyr Lys Glu Gln Ala Leu Met Ser Lys Gln Leu Ala Thr Ile His Cys 1710 1715 1720 GAA GCT CCT GTC GAA ATA AAA ATT CAA GAC CTT GAG TAT AAA GGC TAT 1968 Glu Ala Pro Val Glu Ile Lys Ile Gln Asp Leu Glu Tyr Lys Gly Tyr 1725 1730 1735 1740 GAC AAA GAA AAA GTA GTG AAA ATT TTT AAG GAA CTA GGC TTC CAA TCG 2016 Asp Lys Glu Lys Val Val Lys Ile Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser 1745 1750 1755 CTC CTA GAC AAA ATG GGA GAG CAT GAG AAT GAA GAA GCG GAT GAA ATG 2064 Leu Leu Asp Lys Met Gly Glu His Glu Asn Glu Glu Ala Asp Glu Met 1760 1765 1770 CCG ACG ATT AAG TTC GAA AAA GTT GAA AAG CTG TCA GAC AAG GTT TTA 2112 Pro Thr Ile Lys Phe Glu Lys Val Glu Lys Leu Ser Asp Lys Val Leu 1775 1780 1785 TCA GAG AAG GCA GCT CTT TTA GTG GAA ATC ATT GAT GAA AAT TAT CAT 2160 Ser Glu Lys Ala Ala Leu Leu Val Glu Ile Ile Asp Glu Asn Tyr His 1790 1795 1800 ACT GGA GAA ATC ATC GGG TTT TCT ATC GCA AAC GAA AAT GGA TGT TTT 2208 Thr Gly Glu Ile Ile Gly Phe Ser Ile Ala Asn Glu Asn Gly Cys Phe 1805 1810 1815 1820 TAT ATT CCA GCC GAA ATT GCG CTA CAT TCA AAA GAG TTC ATA GAA TGG 2256 Tyr Ile Pro Ala Glu Ile Ala Leu His Ser Lys Glu Phe Ile Glu Trp 1825 1830 1835 GTG AAG GAT GAA ACA AAG CGG AAA GTG GTG TAT GAT GCG AAA AAA TCA 2304 Val Lys Asp Glu Thr Lys Arg Lys Val Val Tyr Asp Ala Lys Lys Ser 1840 1845 1850 ATT GTG GCG CTG CGC TGG CGA AAC ATT GAT TTA GCA GGT ATT GAG TTT 2352 Ile Val Ala Leu Arg Trp Arg Asn Ile Asp Leu Ala Gly Ile Glu Phe 1855 1860 1865 GAT GTT CTC ATT GCC TCA TAC ATT TTA AAT CCG TCT GAA TCG ATT GAC 2400 Asp Val Leu Ile Ala Ser Tyr Ile Leu Asn Pro Ser Glu Ser Ile Asp 1870 1875 1880 GAC ATA GCC GAG CTT GCC AAG ACA AAA AAT AAA CAT TTA GTT CAA AAG 2448 Asp Ile Ala Glu Leu Ala Lys Thr Lys Asn Lys His Leu Val Gln Lys 1885 1890 1895 1900 GAT GAA GTG ATT TAC GGA AAA GGC GCT AAA CGT CAT ATC CCT GAT GAA 2496 Asp Glu Val Ile Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg His Ile Pro Asp Glu 1905 1910 1915 GAC ATT TTA GGC GAA CAT CTT GCC AGA AAA GCG TTA GCC ATT TAT GAG 2544 Asp Ile Leu Gly Glu His Leu Ala Arg Lys Ala Leu Ala Ile Tyr Glu 1920 1925 1930 CTG GAA GAA TTA TTA ATA CAA GAA TTA GAA GAA AAT GAA CAA TTT CAT 2592 Leu Glu Glu Leu Leu Ile Gln Glu Leu Glu Glu Asn Glu Gln Phe His 1935 1940 1945 TTA TTC AGC GAA TTG GAG CTT CCG CTG TCA GCC ATT TTA TCT GAC ATG 2640 Leu Phe Ser Glu Leu Glu Leu Pro Leu Ser Ala Ile Leu Ser Asp Met 1950 1955 1960 GAA ACA ACA GGA GTA AAG ATA GAC GTC AAC CGT CTG AAA GAA ATG GGA 2688 Glu Thr Thr Gly Val Lys Ile Asp Val Asn Arg Leu Lys Glu Met Gly 1965 1970 1975 1980 AAA GAG CTT GAT GAA CAG CTG AAG CAA TTA GAA AAG GAT ATT CAT CGT 2736 Lys Glu Leu Asp Glu Gln Leu Lys Gln Leu Glu Lys Asp Ile His Arg 1985 1990 1995 CTA GCT GGA GTG TCA TTT AAC ATT AAT TCT CCG AAG CAG CTT GGG CCG 2784 Leu Ala Gly Val Ser Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Pro 2000 2005 2010 ATT TTA TTT GAA AAG CTC AAT CTA CCG GTT TTG AAA AAG ACC AAA ACG 2832 Ile Leu Phe Glu Lys Leu Asn Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr 2015 2020 2025 GGG TAT TCG ACC TCT GCG GAC GTT TTA GAA AAA TTG AGA GGA CAG CAC 2880 Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Arg Gly Gln His 2030 2035 2040 GAA ATT GTG GAG AAA ATT TTG CAT TAC CGG CAG CTC GGA AAG CTT CAA 2928 Glu Ile Val Glu Lys Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln 2045 2050 2055 2060 TCG ACG TAT ATT GAA GGG CTG CTG AAG GTT GTC CAT CGT GAT ACG CAT 2976 Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val His Arg Asp Thr His 2065 2070 2075 AAA ATC CAC ACC CGA TTT AAT CAA GCA TTA ACG CAA ACC GGA AGA TTA 3024 Lys Ile His Thr Arg Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu 2080 2085 2090 AGC TCC ACA GAC CCG AAT TTG CAA AAC ATT CCG ATT CGC CTT GAG GAA 3072 2095 2100 2105 GGC CGC AAA ATT CGT CAA GCA TTT ATC CCT TCT GAA AAA GAT TGG GTC 3120 Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Ile Pro Ser Glu Lys Asp Trp Val 2110 2115 2120 ATT TTT GCA GCG GAC TAT TCC CAG ATT GAA CTG CGA GTG CTT GCG CAT 3168 Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His 2125 2130 2135 2140 ATA TCT GGA GAT GAA AAA TTG ATT GAA GCG TTT AAA CAA GAT CTT GAT 3216 Ile Ser Gly Asp Glu Lys Leu Ile Glu Ala Phe Lys Gln Asp Leu Asp 2145 2150 2155 ATT CAT ACA AAA ACG GCG ATC GAT GTG TTC CAT GTC GAA GAA GAT AAA 3264 Ile His Thr Lys Thr Ala Ile Asp Val Phe His Val Glu Glu Asp Lys 2160 2165 2170 GTG ACC TCC AAC ATG AGA AGA CAG GCA AAA GCA GTT AAT TTC GGG ATT 3312 Val Thr Ser Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile 2175 2180 2185 GTT TAC GGA ATC AGC GAT TAC GGA TTG TCG CAA AAC TTA GGA ATT ACC 3360 Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ser Gln Asn Leu Gly Ile Thr 2190 2195 2200 CGA AAA GAA GCT GGT GAA TTT ATT AAA AAA TAT TTT GAA ATT TAT AAA 3408 Arg Lys Glu Ala Gly Glu Phe Ile Lys Lys Tyr Phe Glu Ile Tyr Lys 2205 2210 2215 2220 GGC GTT AAA GAA TAT ATG GAT GGC ATA ATC CAA GAG GCG AAG CAA AAA 3456 Gly Val Lys Glu Tyr Met Asp Gly Ile Ile Gln Glu Ala Lys Gln Lys 2225 2230 2235 GGC TAT GTA ACG ACA CTA ATG CAG CGT CGG AGA TAT ATT CCG GAA ATT 3504 Gly Tyr Val Thr Thr Leu Met Gln Arg Arg Arg Tyr Ile Pro Glu Ile 2240 2245 2250 ACG AGC AGA AAT TTC AAT ATC AGA AGC TTC GCT GAG CGA ACA GCC ATG 3552 Thr Ser Arg Asn Phe Asn Ile Arg Ser Phe Ala Glu Arg Thr Ala Met 2255 2260 2265 AAT ACT CCG ATT CAA GGA AGT GCA GCG GAT ATT ATC AAA AAA GCG ATG 3600 Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met 2270 2275 2280 ATC GAT ATG GCG CAA GAA ATT GAA AAA CGA AAT TTG CAA ACG AGG CTG 3648 Ile Asp Met Ala Gln Glu Ile Glu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Arg Leu 2285 2290 2295 2300 CTG CTT CAA GTT CAT GAC GAA TTG GTG TTT GAA GCG CCA AAG GAT GAA 3696 Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Val Phe Glu Ala Pro Lys Asp Glu 2305 2310 2315 ATT GAA ATT TTA GAA AAG CTT GTT CCG GAA GTA ATG GAA AAT GCC ATT 3744 Ile Glu Ile Leu Glu Lys Leu Val Pro Glu Val Met Glu Asn Ala Ile 2320 2325 2330 CAG CTA AAA GTA CCG TTA AAG GTT GAT TAT TCT TAC GGT TCT ACG TGG 3792 Gln Leu Lys Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Ser Tyr Gly Ser Thr Trp 2335 2340 2345 TAT GAC GCC AAA TCA TCT CAT CAT CAT CAT CAT CAT TAA 3831 Tyr Asp Ala Lys Ser Ser His His His His His His 2350 2355 2360

【００２８】配列番号：8 配列の長さ：1276 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile Asn Gly Asp Lys 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe Glu Lys Asp Thr 20 25 30 Gly Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu Glu Glu Lys Phe 35 40 45 Pro Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile Ile Phe Trp Ala 50 55 60 His Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu Leu Ala Glu Ile 65 70 75 80 Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro Phe Thr Trp Asp 85 90 95 Ala Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro Ile Ala Val Glu 100 105 110 Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro Asn Pro Pro Lys 115 120 125 Thr Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Lys Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr Phe Thr Trp Pro 145 150 155 160 Leu Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr Glu Asn Gly Lys 165 170 175 Tyr Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly Ala Lys Ala Gly 180 185 190 Leu Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His Met Asn Ala Asp 195 200 205 Thr Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys Gly Glu Thr Ala 210 215 220 Met Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile Asp Thr Ser Lys 225 230 235 240 Val Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys Gly Gln Pro Ser 245 250 255 Lys Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn Ala Ala Ser Pro 260 265 270 Asn Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr Leu Leu Thr Asp 275 280 285 Glu Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Ala Val Ala 290 295 300 Leu Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Ala Lys Asp Pro Arg Ile Ala Ala 305 310 315 320 Thr Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro Asn Ile Pro Gln 325 330 335 Met Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val Ile Asn Ala Ala 340 345 350 Ser Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp Ala Gln Thr Asn 355 360 365 Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Leu Gly Ile 370 375 380 Glu Gly Arg Ile Ser Glu Phe Gly Val Thr Lys Lys Leu Val Leu Ile 385 390 395 400 Asp Gly Asn Ser Ile Ala Tyr Arg Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu 405 410 415 Asn Asn Asp Lys Gly Ile Tyr Thr Asn Ala Ile Tyr Gly Phe Thr Asn 420 425 430 Met Leu Leu Lys Val Leu Glu Glu Glu Lys Pro Thr His Ile Leu Val 435 440 445 Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr Phe Arg His Lys Thr Phe Lys Glu 450 455 460 Tyr Lys Gly Thr Arg Gln Lys Thr Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Leu Pro Phe Ile Arg Asp Leu Leu Asp Ala Tyr Gln Ile Thr Thr Tyr Glu 485 490 495 Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp Ile Ile Gly Thr Val Ala Arg Gln 500 505 510 Ala Glu Lys Gln Asp Phe Glu Val Lys Ile Ile Ser Gly Asp Lys Asp 515 520 525 Leu Thr Gln Leu Ala Thr Glu Lys Thr Thr Val Ser Ile Thr Lys Lys 530 535 540 Gly Ile Thr Asp Val Glu Pro His Thr Pro Glu Ser Ile Gln Glu Lys 545 550 555 560 Tyr Gly Leu Ser Pro Ala Gln Ile Ile Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly 565 570 575 Asp Gln Ser Asp Asn Ile Pro Gly Val Pro Gly Val Gly Glu Lys Thr 580 585 590 Ala Ile Lys Leu Leu Lys Gln Phe Glu Thr Val Glu Asn Ile Leu Asn 595 600 605 Ser Ile Glu Glu Val Asn Gly Lys Lys Leu Lys Glu Asn Leu Gln Asn 610 615 620 Tyr Lys Glu Gln Ala Leu Met Ser Lys Gln Leu Ala Thr Ile His Cys 625 630 635 640 Glu Ala Pro Val Glu Ile Lys Ile Gln Asp Leu Glu Tyr Lys Gly Tyr 645 650 655 Asp Lys Glu Lys Val Val Lys Ile Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser 660 665 670 Leu Leu Asp Lys Met Gly Glu His Glu Asn Glu Glu Ala Asp Glu Met 675 680 685 Pro Thr Ile Lys Phe Glu Lys Val Glu Lys Leu Ser Asp Lys Val Leu 690 695 700 705 710 715 720 Thr Gly Glu Ile Ile Gly Phe Ser Ile Ala Asn Glu Asn Gly Cys Phe 725 730 735 Tyr Ile Pro Ala Glu Ile Ala Leu His Ser Lys Glu Phe Ile Glu Trp 740 745 750 Val Lys Asp Glu Thr Lys Arg Lys Val Val Tyr Asp Ala Lys Lys Ser 755 760 765 Ile Val Ala Leu Arg Trp Arg Asn Ile Asp Leu Ala Gly Ile Glu Phe 770 775 780 Asp Val Leu Ile Ala Ser Tyr Ile Leu Asn Pro Ser Glu Ser Ile Asp 785 790 795 800 Asp Ile Ala Glu Leu Ala Lys Thr Lys Asn Lys His Leu Val Gln Lys 805 810 815 Asp Glu Val Ile Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg His Ile Pro Asp Glu 820 825 830 Asp Ile Leu Gly Glu His Leu Ala Arg Lys Ala Leu Ala Ile Tyr Glu 835 840 845 Leu Glu Glu Leu Leu Ile Gln Glu Leu Glu Glu Asn Glu Gln Phe His 850 855 860 Leu Phe Ser Glu Leu Glu Leu Pro Leu Ser Ala Ile Leu Ser Asp Met 865 870 875 880 Glu Thr Thr Gly Val Lys Ile Asp Val Asn Arg Leu Lys Glu Met Gly 885 890 895 Lys Glu Leu Asp Glu Gln Leu Lys Gln Leu Glu Lys Asp Ile His Arg 900 905 910 Leu Ala Gly Val Ser Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Pro 915 920 925 Ile Leu Phe Glu Lys Leu Asn Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr 930 935 940 945 950 955 960 Glu Ile Val Glu Lys Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln 965 970 975 Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val His Arg Asp Thr His 980 985 990 Lys Ile His Thr Arg Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu 995 1000 1005 Ser Ser Thr Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu 1010 1015 1020 Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Ile Pro Ser Glu Lys Asp Trp Val 1025 1030 1035 1040 Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His 1045 1050 1055 Ile Ser Gly Asp Glu Lys Leu Ile Glu Ala Phe Lys Gln Asp Leu Asp 1060 1065 1070 Ile His Thr Lys Thr Ala Ile Asp Val Phe His Val Glu Glu Asp Lys 1075 1080 1085 Val Thr Ser Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile 1090 1095 1100 Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ser Gln Asn Leu Gly Ile Thr 1105 1110 1115 1120 Arg Lys Glu Ala Gly Glu Phe Ile Lys Lys Tyr Phe Glu Ile Tyr Lys 1125 1130 1135 Gly Val Lys Glu Tyr Met Asp Gly Ile Ile Gln Glu Ala Lys Gln Lys 1140 1145 1150 Gly Tyr Val Thr Thr Leu Met Gln Arg Arg Arg Tyr Ile Pro Glu Ile 1155 1160 1165 Thr Ser Arg Asn Phe Asn Ile Arg Ser Phe Ala Glu Arg Thr Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met 1185 1190 1195 1200 Ile Asp Met Ala Gln Glu Ile Glu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Arg Leu 1205 1210 1215 Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Val Phe Glu Ala Pro Lys Asp Glu 1220 1225 1230 Ile Glu Ile Leu Glu Lys Leu Val Pro Glu Val Met Glu Asn Ala Ile 1235 1240 1245 Gln Leu Lys Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Ser Tyr Gly Ser Thr Trp 1250 1255 1260 Tyr Asp Ala Lys Ser Ser His His His His His His 1265 1270 1275

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 9/12 Ｃ１２Ｒ 1:19） (71)出願人 595117091 １ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲＡ ＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥ ＲＳＥＹ 07417−1880， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号４をコードしている核酸配列
   と、配列番号４の１９２〜８７６番目のアミノ酸配列を
   コードしている核酸配列と、配列番号３の配列と、配列
   番号３の５７４〜２６２８番目のヌクレオチド配列と、
   配列番号５の配列と、配列番号５の１〜３２３７番目の
   ヌクレオチド配列と、配列番号６の１〜１０７８番目の
   アミノ酸配列をコードしている核酸配列と、配列番号７
   の配列と、配列番号７の１〜３８１０番目のヌクレオチ
   ド配列と、配列番号８の１〜１２７０番目のアミノ酸配
   列をコードしている核酸配列と、配列番号４と実質的に
   同等のタンパク質をコードしている核酸配列と、配列番
   号４の１９２〜８７６番目のアミノ酸配列と実質的に同
   等のタンパク質をコードしている核酸配列とからなる群
   から選択される単離された核酸配列。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の核酸配列を含む組換え
   ベクター。
3. 【請求項３】 該核酸配列が異種アミノ酸配列をコード
   している核酸配列と結合している請求項２に記載の組換
   えベクター。
4. 【請求項４】 請求項２に記載の組換えベクターにより
   形質転換された宿主細胞。
5. 【請求項５】 組換えＤＮＡポリメラーゼが形質転換さ
   れた宿主細胞により発現される条件下で、請求項４に記
   載の形質転換された宿主細胞を培養培地において培養す
   ることを含む、組換えＤＮＡポリメラーゼの製造方法。
6. 【請求項６】 細胞溶解産物または培養培地から得られ
   る発現された組換えＤＮＡポリメラーゼを精製すること
   を更に含む請求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 配列番号４の配列と、配列番号４の１９
   ２〜８７６番目のアミノ酸配列と、配列番号４を含む融
   合タンパク質と、配列番号４の１９２〜８７６番目のア
   ミノ酸配列を含む融合タンパク質と、配列番号４と実質
   的に同等のポリメラーゼと、配列番号４の１９２〜８７
   ６番目のアミノ酸配列と実質的に同等のポリメラーゼと
   からなる群から選択されるＤＮＡポリメラーゼ。
8. 【請求項８】 該融合タンパク質が配列番号６または配
   列番号８で示される請求項７に記載のＤＮＡポリメラー
   ゼ。
9. 【請求項９】 配列番号３の配列と、配列番号３の５７
   ４〜２６２８番目のヌクレオチド配列と、配列番号４を
   コードしている核酸配列と、配列番号４の１９２〜８７
   ６番目のアミノ酸配列をコードしている核酸配列とから
   なる群から選択される核酸配列を、ポリメラーゼが形質
   転換された宿主細胞の中で発現できるように、プロモー
   ターの制御下で発現ベクターにクローニングすることを
   含む、宿主細胞中でＤＮＡポリメラーゼを発現するため
   の組換えベクターを製造する方法。
10. 【請求項１０】 ポリメラーゼの発現により融合タンパ
    ク質を生産できるよに、ベクター内の核酸配列と異種ア
    ミノ酸配列をコードしている核酸配列を結合することを
    更に含む請求項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 単離された抗Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ抗
    体。
12. 【請求項１２】 抗Ｂｐａ Ｐｏｌ Ｉ抗体を産生する
    ハイブリドーマ。