JPH11130793A - アンチセンスオリゴヌクレオチド - Google Patents
アンチセンスオリゴヌクレオチドInfo
- Publication number
- JPH11130793A JPH11130793A JP30971197A JP30971197A JPH11130793A JP H11130793 A JPH11130793 A JP H11130793A JP 30971197 A JP30971197 A JP 30971197A JP 30971197 A JP30971197 A JP 30971197A JP H11130793 A JPH11130793 A JP H11130793A
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- Japan
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- thymidine
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- antisense oligonucleotide
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヌクレアーゼによる加水分解に対して抵抗性
を示し、標的とするメッセンジャーＲＮＡに対して特異
的でかつ熱力学的に安定な相補的結合を有する二本鎖を
形成するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。 【解決手段】 デオキシリボヌクレオシドの糖部の４’
位のα位にアミノ側鎖を導入した、下記の構造式（式
中、Ｂは塩基：チミン、ウラシル、シトシン、アデ ニンまたはグアニン）で表されるヌクレオシド誘導体を
構成成分として含む。
を示し、標的とするメッセンジャーＲＮＡに対して特異
的でかつ熱力学的に安定な相補的結合を有する二本鎖を
形成するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。 【解決手段】 デオキシリボヌクレオシドの糖部の４’
位のα位にアミノ側鎖を導入した、下記の構造式（式
中、Ｂは塩基：チミン、ウラシル、シトシン、アデ ニンまたはグアニン）で表されるヌクレオシド誘導体を
構成成分として含む。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、第二世代のアン
チセンスオリゴヌクレオチドに関し、より詳しくは、デ
オキシリボヌクレオシドの糖部を修飾した修飾デオキシ
ヌクレオシドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドに
関する。
チセンスオリゴヌクレオチドに関し、より詳しくは、デ
オキシリボヌクレオシドの糖部を修飾した修飾デオキシ
ヌクレオシドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドに
関する。
【０００２】
【従来の技術】疾病の原因が遺伝子の発現調節によるも
のであって、遺伝子産物（蛋白質）が感染症や癌などの
原因となっている場合に、それらの原因物質の産生を抑
制するために、原因物質の遺伝子情報を伝達するメッセ
ンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の働きを抑える方法の概念
が近年生まれた。すなわち、ｍＲＮＡをセンスＲＮＡと
し、それに対して相補的なＤＮＡまたはＲＮＡをアンチ
センスＤＮＡまたはアンチセンスＲＮＡと呼び、アンチ
センスＤＮＡまたはアンチセンスＲＮＡがｍＲＮＡと二
本鎖を形成することによりｍＲＮＡの働きを抑制し、疾
病を治療する、といった考え方である。この概念に基づ
いて、エイズ（ＡＩＤＳ）等のウイルス感染症や癌など
の疾病治療を目的としたアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドについての提案が種々なされており（例えば特開平３
−９９０９３号公報、特開平４−１５４７９４号公報、
特開平６−４１１８５号公報、特開平６−１７９６９４
号公報等参照）、また、そのアンチセンスオリゴヌクレ
オチドの合成法や生物活性などについて盛んに研究され
学会等で報告されている。
のであって、遺伝子産物（蛋白質）が感染症や癌などの
原因となっている場合に、それらの原因物質の産生を抑
制するために、原因物質の遺伝子情報を伝達するメッセ
ンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の働きを抑える方法の概念
が近年生まれた。すなわち、ｍＲＮＡをセンスＲＮＡと
し、それに対して相補的なＤＮＡまたはＲＮＡをアンチ
センスＤＮＡまたはアンチセンスＲＮＡと呼び、アンチ
センスＤＮＡまたはアンチセンスＲＮＡがｍＲＮＡと二
本鎖を形成することによりｍＲＮＡの働きを抑制し、疾
病を治療する、といった考え方である。この概念に基づ
いて、エイズ（ＡＩＤＳ）等のウイルス感染症や癌など
の疾病治療を目的としたアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドについての提案が種々なされており（例えば特開平３
−９９０９３号公報、特開平４−１５４７９４号公報、
特開平６−４１１８５号公報、特開平６−１７９６９４
号公報等参照）、また、そのアンチセンスオリゴヌクレ
オチドの合成法や生物活性などについて盛んに研究され
学会等で報告されている。
【０００３】アンチセンスオリゴヌクレオチドは、試験
管内や細胞レベルでの研究では有効であるとされている
が、ヌクレアーゼによるアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの分解反応に対する安定性や細胞膜の透過性に問題が
あるとされている。それらの問題を解決するために、Ｄ
ＮＡやＲＮＡの天然型リン酸ジエステルをホスホン酸エ
ステルやチオリン酸エステル或いはアミノ酸結合に変換
したりするなどの工夫が従来なされている。
管内や細胞レベルでの研究では有効であるとされている
が、ヌクレアーゼによるアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの分解反応に対する安定性や細胞膜の透過性に問題が
あるとされている。それらの問題を解決するために、Ｄ
ＮＡやＲＮＡの天然型リン酸ジエステルをホスホン酸エ
ステルやチオリン酸エステル或いはアミノ酸結合に変換
したりするなどの工夫が従来なされている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来か
ら検討されているようにアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドのリン酸エステルをホスホン酸エステルやチオリン酸
エステルに変換したものは、非天然型の異性体を生じる
ことから、それらの生理的効果が低いと推定されてい
る。また、リン酸エステルをチオリン酸エステル型やア
ミノ酸結合型に変換したアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドは、非特異的アンチセンス効果を示し、そのことが問
題となっている。
ら検討されているようにアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドのリン酸エステルをホスホン酸エステルやチオリン酸
エステルに変換したものは、非天然型の異性体を生じる
ことから、それらの生理的効果が低いと推定されてい
る。また、リン酸エステルをチオリン酸エステル型やア
ミノ酸結合型に変換したアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドは、非特異的アンチセンス効果を示し、そのことが問
題となっている。
【０００５】なお、オリゴヌクレオチドの塩基部の変換
によりアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を高めよ
うとする研究は、天然型のヌクレオチドを用いた例が僅
かに報告されているが、極めて希である。
によりアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を高めよ
うとする研究は、天然型のヌクレオチドを用いた例が僅
かに報告されているが、極めて希である。
【０００６】この発明は、以上のような状況下でなされ
たものであり、天然型のリン酸ジエステル結合を有し、
生物学的安定性を示し、すなわちヌクレアーゼによる加
水分解に対して抵抗性を示し、標的とするｍＲＮＡに対
して特異的でかつ熱力学的に安定な相補的結合を有する
二本鎖を形成する有用なアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを提供することを目的とする。
たものであり、天然型のリン酸ジエステル結合を有し、
生物学的安定性を示し、すなわちヌクレアーゼによる加
水分解に対して抵抗性を示し、標的とするｍＲＮＡに対
して特異的でかつ熱力学的に安定な相補的結合を有する
二本鎖を形成する有用なアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】請求項１ないし請求項５
に係る各発明はそれぞれ、デオキシリボヌクレオシドの
糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入したヌクレオシ
ド誘導体を構成成分として含むアンチセンスオリゴヌク
レオチドを形成した。すなわち、請求項１に係る発明
は、チミジンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入
した、化１に構造式を示すチミジン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チルチミジンを構成成分として含んでアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドを形成したことを特徴とする。
に係る各発明はそれぞれ、デオキシリボヌクレオシドの
糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入したヌクレオシ
ド誘導体を構成成分として含むアンチセンスオリゴヌク
レオチドを形成した。すなわち、請求項１に係る発明
は、チミジンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入
した、化１に構造式を示すチミジン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チルチミジンを構成成分として含んでアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドを形成したことを特徴とする。
【０００８】
【化１】
【０００９】請求項２に係る発明は、デオキシウリジン
の糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化２に
構造式を示すデオキシウリジン誘導体、すなわち４’−
Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−
２’−デオキシウリジンを構成成分として含んでアンチ
センスオリゴヌクレオチドを形成したことを特徴とす
る。
の糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化２に
構造式を示すデオキシウリジン誘導体、すなわち４’−
Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−
２’−デオキシウリジンを構成成分として含んでアンチ
センスオリゴヌクレオチドを形成したことを特徴とす
る。
【００１０】
【化２】
【００１１】請求項３に係る発明は、デオキシシチジン
の糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化３に
構造式を示すデオキシシチジン誘導体、すなわち４’−
Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−
２’−デオキシシチジンを構成成分として含んでアンチ
センスオリゴヌクレオチドを形成したことを特徴とす
る。
の糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化３に
構造式を示すデオキシシチジン誘導体、すなわち４’−
Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−
２’−デオキシシチジンを構成成分として含んでアンチ
センスオリゴヌクレオチドを形成したことを特徴とす
る。
【００１２】
【化３】
【００１３】請求項４に係る発明は、デオキシアデノシ
ンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化４
に構造式を示すデオキシアデノシン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チル−２’−デオキシアデノシンを構成成分として含ん
でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形成したことを特
徴とする。
ンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化４
に構造式を示すデオキシアデノシン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チル−２’−デオキシアデノシンを構成成分として含ん
でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形成したことを特
徴とする。
【００１４】
【化４】
【００１５】請求項５に係る発明は、デオキシグアノシ
ンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化５
に構造式を示すデオキシグアノシン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チル−２’−デオキシグアノシンを構成成分として含ん
でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形成したことを特
徴とする。
ンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化５
に構造式を示すデオキシグアノシン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チル−２’−デオキシグアノシンを構成成分として含ん
でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形成したことを特
徴とする。
【００１６】
【化５】
【００１７】請求項１ないし請求項５に係る各発明のア
ンチセンスオリゴヌクレオチドはそれぞれ、ヌクレアー
ゼによる加水分解に対して抵抗性を示し、また、相補鎖
と二本鎖を形成させたときに熱安定性を示す。
ンチセンスオリゴヌクレオチドはそれぞれ、ヌクレアー
ゼによる加水分解に対して抵抗性を示し、また、相補鎖
と二本鎖を形成させたときに熱安定性を示す。
【００１８】
【発明の実施の形態】以下、この発明の最良の実施形態
について説明する。
について説明する。
【００１９】まず、アンチセンスオリゴヌクレオチドを
化学的に合成する場合の第１段階として、図１に示すよ
うに、それぞれ官能基を保護したデオキシリボヌクレオ
シド誘導体（化合物１）からオリゴヌクレオチド合成ユ
ニット（化合物２）を合成する。化合物１および化合物
２のそれぞれの構造式中、Ｂは塩基、すなわちチミン、
ウラシル、シトシン、アデニンまたはグアニンである。
例えば、塩基Ｂがチミンであるときは、化合物１は５’
−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−ト
リフルオロアセチルアミノエチル）カルバモイル］オキ
シエチルチミジン、化合物２は３’−Ｏ−［２−シアノ
エトキシ（ジイソプロピルアミノホスフィノ）］−５’
−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−ト
リフルオロアセチルアミノエチル）カルバモイル］オキ
シエチルチミジンであり、塩基Ｂがウラシルであるとき
は、化合物１は５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−
Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノエチル）
カルバモイル］オキシエチル−２’−デオキシウリジ
ン、化合物２は３’−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイ
ソプロピルアミノホスフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキ
シトリチル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセ
チルアミノエチル）カルバモイル］オキシエチル−２’
−デオキシウリジンである。
化学的に合成する場合の第１段階として、図１に示すよ
うに、それぞれ官能基を保護したデオキシリボヌクレオ
シド誘導体（化合物１）からオリゴヌクレオチド合成ユ
ニット（化合物２）を合成する。化合物１および化合物
２のそれぞれの構造式中、Ｂは塩基、すなわちチミン、
ウラシル、シトシン、アデニンまたはグアニンである。
例えば、塩基Ｂがチミンであるときは、化合物１は５’
−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−ト
リフルオロアセチルアミノエチル）カルバモイル］オキ
シエチルチミジン、化合物２は３’−Ｏ−［２−シアノ
エトキシ（ジイソプロピルアミノホスフィノ）］−５’
−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−ト
リフルオロアセチルアミノエチル）カルバモイル］オキ
シエチルチミジンであり、塩基Ｂがウラシルであるとき
は、化合物１は５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−
Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノエチル）
カルバモイル］オキシエチル−２’−デオキシウリジ
ン、化合物２は３’−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイ
ソプロピルアミノホスフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキ
シトリチル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセ
チルアミノエチル）カルバモイル］オキシエチル−２’
−デオキシウリジンである。
【００２０】続いて、第２段階として、上記したオリゴ
ヌクレオチド合成ユニットからアンチセンスオリゴヌク
レオチドを合成する。オリゴヌクレオチドは、公知の固
相合成法により、ＤＮＡ合成機を使用して合成する。
ヌクレオチド合成ユニットからアンチセンスオリゴヌク
レオチドを合成する。オリゴヌクレオチドは、公知の固
相合成法により、ＤＮＡ合成機を使用して合成する。
【００２１】以上のようにして合成されたオリゴヌクレ
オチドは、デオキシリボヌクレオシドの糖部の４’位の
α位にアミノ側鎖を導入したヌクレオシド誘導体を構成
成分として含む。すなわち、化合物２の構造式中の塩基
Ｂがチミンであるオリゴヌクレオチド合成ユニットから
は、チミジンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入
した、化１に構造式を示すチミジン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チルチミジンを、塩基Ｂがウラシルであるオリゴヌクレ
オチド合成ユニットからは、デオキシウリジンの糖部の
４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化２に構造式を
示すデオキシウリジン誘導体、すなわち４’−Ｃ−（Ｎ
−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−２’−デ
オキシウリジンを、塩基Ｂがシトシンであるオリゴヌク
レオチド合成ユニットからは、デオキシシチジンの糖部
の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化３に構造式
を示すデオキシシチジン誘導体、すなわち４’−Ｃ−
（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−２’
−デオキシシチジンを、塩基Ｂがアデニンであるオリゴ
ヌクレオチド合成ユニットからは、デオキシアデノシン
の糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化４に
構造式を示すデオキシアデノシン誘導体、すなわち４’
−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル
−２’−デオキシアデノシンを、塩基Ｂがグアニンであ
るオリゴヌクレオチド合成ユニットからは、デオキシグ
アノシンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入し
た、化５に構造式を示すデオキシグアノシン誘導体、す
なわち４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オ
キシエチル−２’−デオキシグアノシンを、それぞれ構
成成分として含むアンチセンスオリゴヌクレオチドが合
成される。
オチドは、デオキシリボヌクレオシドの糖部の４’位の
α位にアミノ側鎖を導入したヌクレオシド誘導体を構成
成分として含む。すなわち、化合物２の構造式中の塩基
Ｂがチミンであるオリゴヌクレオチド合成ユニットから
は、チミジンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入
した、化１に構造式を示すチミジン誘導体、すなわち
４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエ
チルチミジンを、塩基Ｂがウラシルであるオリゴヌクレ
オチド合成ユニットからは、デオキシウリジンの糖部の
４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化２に構造式を
示すデオキシウリジン誘導体、すなわち４’−Ｃ−（Ｎ
−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−２’−デ
オキシウリジンを、塩基Ｂがシトシンであるオリゴヌク
レオチド合成ユニットからは、デオキシシチジンの糖部
の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化３に構造式
を示すデオキシシチジン誘導体、すなわち４’−Ｃ−
（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル−２’
−デオキシシチジンを、塩基Ｂがアデニンであるオリゴ
ヌクレオチド合成ユニットからは、デオキシアデノシン
の糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入した、化４に
構造式を示すデオキシアデノシン誘導体、すなわち４’
−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オキシエチル
−２’−デオキシアデノシンを、塩基Ｂがグアニンであ
るオリゴヌクレオチド合成ユニットからは、デオキシグ
アノシンの糖部の４’位のα位にアミノ側鎖を導入し
た、化５に構造式を示すデオキシグアノシン誘導体、す
なわち４’−Ｃ−（Ｎ−アミノエチルカルバモイル）オ
キシエチル−２’−デオキシグアノシンを、それぞれ構
成成分として含むアンチセンスオリゴヌクレオチドが合
成される。
【００２２】
【化１】
【化２】
【化３】
【化４】
【化５】
【００２３】例えば、化１に構造式を示すチミジン誘導
体を構成成分として含むＤＮＡオリゴヌクレオチド（Ｘ
Ｔ-１〜ＸＴ-８）の基本構造の例を、化６〜化１３にそ
れぞれ示す。
体を構成成分として含むＤＮＡオリゴヌクレオチド（Ｘ
Ｔ-１〜ＸＴ-８）の基本構造の例を、化６〜化１３にそ
れぞれ示す。
【００２４】
【化６】
【化７】
【化８】
【化９】
【化１０】
【化１１】
【化１２】
【化１３】
【００２５】化６〜化１３の式中、Ｔはチミジン、Ｃは
デオキシシチジン、Ａはデオキシアデノシン、Ｇはデオ
キシグアノシンであり、Ｘが、化１に構造式を示すチミ
ジン誘導体である。
デオキシシチジン、Ａはデオキシアデノシン、Ｇはデオ
キシグアノシンであり、Ｘが、化１に構造式を示すチミ
ジン誘導体である。
【００２６】また、化６〜化１３に基本構造を示したオ
リゴヌクレオチドのＸをＴ（チミジン）に置き換えたオ
リゴヌクレオチドのＣ、Ｔ、ＡまたはＧを、化３に構造
式を示すデオキシシチジン誘導体、化２に構造式を示す
デオキシウリジン誘導体、化４に構造式を示すデオキシ
アデノシン誘導体、または化５に構造式を示すデオキシ
グアノシン誘導体でそれぞれ置き換えた各種のアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドを合成することが可能である。
リゴヌクレオチドのＸをＴ（チミジン）に置き換えたオ
リゴヌクレオチドのＣ、Ｔ、ＡまたはＧを、化３に構造
式を示すデオキシシチジン誘導体、化２に構造式を示す
デオキシウリジン誘導体、化４に構造式を示すデオキシ
アデノシン誘導体、または化５に構造式を示すデオキシ
グアノシン誘導体でそれぞれ置き換えた各種のアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドを合成することが可能である。
【００２７】上記したようにして得られたオリゴヌクレ
オチドに含まれるヌクレオシド誘導体は、それぞれの相
補的ヌクレオシドと水素結合対を形成して、熱安定性お
よびヌクレアーゼに対する抵抗性を示すものと想定され
る。
オチドに含まれるヌクレオシド誘導体は、それぞれの相
補的ヌクレオシドと水素結合対を形成して、熱安定性お
よびヌクレアーゼに対する抵抗性を示すものと想定され
る。
【００２８】
【実施例】以下に、この発明に係るアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドの具体的な製法例、ならびに、得られたア
ンチセンスオリゴヌクレオチドの熱安定性およびヌクレ
アーゼに対する抵抗性について検討した結果を示す。
ヌクレオチドの具体的な製法例、ならびに、得られたア
ンチセンスオリゴヌクレオチドの熱安定性およびヌクレ
アーゼに対する抵抗性について検討した結果を示す。
【００２９】〔オリゴヌクレオチド合成ユニット：３’
−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノホ
スフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−
Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノエチル）
カルバモイル］オキシエチルチミジンの合成例〕アルゴ
ンガス雰囲気下において、５’−Ｏ−ジメトキシトリチ
ル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミ
ノエチル）カルバモイル］オキシエチルチミジン（化合
物１）４２３ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン
１０ｍｌに溶解させ、この溶液にジイソプロピルエチル
アミン１９２μｌ（１．１ｍｍｏｌ，２ｅｑ）と２−シ
アノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホロア
ミダイト１８４μｌ（０．８３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）
を添加し、その混合液を室温で３０分間撹拌した。その
後さらに、混合液にジイソプロピルエチルアミン４８μ
ｌ（０．５ｅｑ）と２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソ
プロピルクロロホスホロアミダイト６１μｌ（０．５ｅ
ｑ）を添加し、その混合液を室温で１時間半、撹拌し
た。次に、反応液にクロロホルム５０ｍｌを添加し、飽
和重曹水４０ｍｌで２回分液し、飽和食塩水４０ｍｌで
１回分液した。そして、抽出された有機層を無水硫酸ナ
トリウムによって乾燥させた後、溶媒を留去させ、残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（中性シリカゲ
ル：φ３．０×１３ｃｍ、カラムクロマトグラフィー溶
媒：ヘキサン−酢酸エチル（ヘキサン：酢酸エチル＝
１：１〜１：３）または酢酸エチルのみ）により精製
し、３’−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイソプロピル
アミノホスフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル
−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ
エチル）カルバモイル］オキシエチルチミジン（化合物
２）を３８５ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ、収率７２％）、白
色泡状物質として得た。機器分析値は、ＦＡＢ−ＭＳ
（ｍ／ｚ）：９７１（Ｍ+＋１）、31Ｐ−ＮＭＲ（５０
０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１５０．２８，１４９．８
８であった。
−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノホ
スフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−
Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノエチル）
カルバモイル］オキシエチルチミジンの合成例〕アルゴ
ンガス雰囲気下において、５’−Ｏ−ジメトキシトリチ
ル−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミ
ノエチル）カルバモイル］オキシエチルチミジン（化合
物１）４２３ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン
１０ｍｌに溶解させ、この溶液にジイソプロピルエチル
アミン１９２μｌ（１．１ｍｍｏｌ，２ｅｑ）と２−シ
アノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホロア
ミダイト１８４μｌ（０．８３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）
を添加し、その混合液を室温で３０分間撹拌した。その
後さらに、混合液にジイソプロピルエチルアミン４８μ
ｌ（０．５ｅｑ）と２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソ
プロピルクロロホスホロアミダイト６１μｌ（０．５ｅ
ｑ）を添加し、その混合液を室温で１時間半、撹拌し
た。次に、反応液にクロロホルム５０ｍｌを添加し、飽
和重曹水４０ｍｌで２回分液し、飽和食塩水４０ｍｌで
１回分液した。そして、抽出された有機層を無水硫酸ナ
トリウムによって乾燥させた後、溶媒を留去させ、残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（中性シリカゲ
ル：φ３．０×１３ｃｍ、カラムクロマトグラフィー溶
媒：ヘキサン−酢酸エチル（ヘキサン：酢酸エチル＝
１：１〜１：３）または酢酸エチルのみ）により精製
し、３’−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイソプロピル
アミノホスフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル
−４’−Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ
エチル）カルバモイル］オキシエチルチミジン（化合物
２）を３８５ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ、収率７２％）、白
色泡状物質として得た。機器分析値は、ＦＡＢ−ＭＳ
（ｍ／ｚ）：９７１（Ｍ+＋１）、31Ｐ−ＮＭＲ（５０
０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１５０．２８，１４９．８
８であった。
【００３０】〔オリゴデオキシヌクレオチドの合成例お
よび精製例〕合成は、ＤＮＡ自動合成機（Ａｐｐｌｉｅ
ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ３９１ＤＮＡ ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｚｅｒ）を使用し、ホスホロアミダイト法に従っ
て、１μｍｏｌスケールで行なった。デオキシアデノシ
ン、デオキシグアノシン、デオキシシチジンおよびチミ
ジンの各ホスホロアミダイト体については、それぞれの
濃度を０．１Ｍとしたアセトニトリル溶液として、３’
−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノホ
スフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−
Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノエチル）
カルバモイル］オキシエチルチミジンについては、その
濃度を０．１２Ｍとしたアセトニトリル溶液としてそれ
ぞれ用いた。
よび精製例〕合成は、ＤＮＡ自動合成機（Ａｐｐｌｉｅ
ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ３９１ＤＮＡ ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｚｅｒ）を使用し、ホスホロアミダイト法に従っ
て、１μｍｏｌスケールで行なった。デオキシアデノシ
ン、デオキシグアノシン、デオキシシチジンおよびチミ
ジンの各ホスホロアミダイト体については、それぞれの
濃度を０．１Ｍとしたアセトニトリル溶液として、３’
−Ｏ−［２−シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノホ
スフィノ）］−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−
Ｃ−［Ｎ−（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノエチル）
カルバモイル］オキシエチルチミジンについては、その
濃度を０．１２Ｍとしたアセトニトリル溶液としてそれ
ぞれ用いた。
【００３１】合成されたオリゴヌクレオチドに濃アンモ
ニア水３ｍｌを添加し、その溶液を５５℃の温度で１６
時間静置させ、樹脂からの切り出しおよびアミノ基の脱
保護を行った。樹脂を濾去させた後、濾液の溶媒を留去
させ、残渣をＣ-１８逆相シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（φ１．０×１２ｃｍ、溶媒：０〜４０％アセ
トニトリルを含むトリエチルアンモニウムアセテート緩
衝液により精製した。逆相高速液体クロマトグラフィー
（逆相ＨＰＬＣ）により、目的物を高純度に含むフラク
ションを確認し、それらを集め、濃縮した。続いて、水
で数回共沸させた後、残渣を８０％酢酸４ｍｌに溶解さ
せ、エーテルで洗浄した。その後に、水層を濃縮し、逆
相ＨＰＬＣによりオリゴヌクレオチドの純度を確認し、
必要な場合には、さらに分取精製して、高純度のオリゴ
ヌクレオチド（ＸＴ−１〜ＸＴ−８）を得た。
ニア水３ｍｌを添加し、その溶液を５５℃の温度で１６
時間静置させ、樹脂からの切り出しおよびアミノ基の脱
保護を行った。樹脂を濾去させた後、濾液の溶媒を留去
させ、残渣をＣ-１８逆相シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（φ１．０×１２ｃｍ、溶媒：０〜４０％アセ
トニトリルを含むトリエチルアンモニウムアセテート緩
衝液により精製した。逆相高速液体クロマトグラフィー
（逆相ＨＰＬＣ）により、目的物を高純度に含むフラク
ションを確認し、それらを集め、濃縮した。続いて、水
で数回共沸させた後、残渣を８０％酢酸４ｍｌに溶解さ
せ、エーテルで洗浄した。その後に、水層を濃縮し、逆
相ＨＰＬＣによりオリゴヌクレオチドの純度を確認し、
必要な場合には、さらに分取精製して、高純度のオリゴ
ヌクレオチド（ＸＴ−１〜ＸＴ−８）を得た。
【００３２】〔二本鎖の熱安定性の検討〕上記したよう
にして合成、精製された、化６〜化１３に基本構造を示
したオリゴヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-８のそれぞれ
と、それらと相補的なオリゴヌクレオチド（標的ＤＮＡ
および標的ＲＮＡ）のそれぞれとで二本鎖を形成させ
て、それぞれの場合における二本鎖の熱安定性を測定し
た。これには、まず、オリゴヌクレオチドＸＴ-１〜Ｘ
Ｔ-５のそれぞれと相補的なオリゴデオキシリボヌクレ
オチド（標的ＤＮＡ）：５’−ＡＴＧＡＧＡＣＧＡＧＣ
ＴＧＡＧＣＣＡＧ−３’、および、オリゴヌクレオチド
ＸＴ-６〜ＸＴ-８のそれぞれと相補的なオリゴリボヌク
レオチド（標的ＲＮＡ）：５’−ＧＡＧＣＧＧＡＡＵＧ
ＧＵＡＣＧＡＧ−３’をそれぞ、公知の方法により合成
する。なお、Ｕはウリジンを示す。また、コントロール
オリゴヌクレオチドとして、化６に示したオリゴヌクレ
オチドＸＴ-１のＸ（チミジン誘導体）をＴ（チミジ
ン）に置き換えたＣｏｎｔｒｏｌ−１：３’−ＴＡＣＴ
ＣＴＧＣＴＣＧＴＣＴＧＧＴＣ−５’、および、化１１
に示したオリゴヌクレオチドＸＴ-６のＸ（チミジン誘
導体）をＴ（チミジン）に置き換えたＣｏｎｔｒｏｌ−
２：３’−ＣＴＣＧＣＣＴＴＡＣＣＡＴＧＣＴＣ−５’
をそれぞ、公知の方法により合成する。続いて、オリゴ
ヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-５のそれぞれと相補的なオ
リゴデオキシリボヌクレオチド（標的ＤＮＡ）とコント
ロールオリゴヌクレオチドＣｏｎｔｒｏｌ−１および新
規なオリゴヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-５との二本鎖を
それぞれ形成させて、それぞれの場合における二本鎖の
熱安定性を測定した。また、オリゴヌクレオチドＸＴ-
６〜ＸＴ-８のそれぞれと相補的なオリゴリボヌクレオ
チド（標的ＲＮＡ）とコントロールオリゴヌクレオチド
Ｃｏｎｔｒｏｌ−２および新規なオリゴヌクレオチドＸ
Ｔ-６〜ＸＴ-８との二本鎖をそれぞれ形成させて、それ
ぞれの場合における二本鎖の熱安定性を測定した。
にして合成、精製された、化６〜化１３に基本構造を示
したオリゴヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-８のそれぞれ
と、それらと相補的なオリゴヌクレオチド（標的ＤＮＡ
および標的ＲＮＡ）のそれぞれとで二本鎖を形成させ
て、それぞれの場合における二本鎖の熱安定性を測定し
た。これには、まず、オリゴヌクレオチドＸＴ-１〜Ｘ
Ｔ-５のそれぞれと相補的なオリゴデオキシリボヌクレ
オチド（標的ＤＮＡ）：５’−ＡＴＧＡＧＡＣＧＡＧＣ
ＴＧＡＧＣＣＡＧ−３’、および、オリゴヌクレオチド
ＸＴ-６〜ＸＴ-８のそれぞれと相補的なオリゴリボヌク
レオチド（標的ＲＮＡ）：５’−ＧＡＧＣＧＧＡＡＵＧ
ＧＵＡＣＧＡＧ−３’をそれぞ、公知の方法により合成
する。なお、Ｕはウリジンを示す。また、コントロール
オリゴヌクレオチドとして、化６に示したオリゴヌクレ
オチドＸＴ-１のＸ（チミジン誘導体）をＴ（チミジ
ン）に置き換えたＣｏｎｔｒｏｌ−１：３’−ＴＡＣＴ
ＣＴＧＣＴＣＧＴＣＴＧＧＴＣ−５’、および、化１１
に示したオリゴヌクレオチドＸＴ-６のＸ（チミジン誘
導体）をＴ（チミジン）に置き換えたＣｏｎｔｒｏｌ−
２：３’−ＣＴＣＧＣＣＴＴＡＣＣＡＴＧＣＴＣ−５’
をそれぞ、公知の方法により合成する。続いて、オリゴ
ヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-５のそれぞれと相補的なオ
リゴデオキシリボヌクレオチド（標的ＤＮＡ）とコント
ロールオリゴヌクレオチドＣｏｎｔｒｏｌ−１および新
規なオリゴヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-５との二本鎖を
それぞれ形成させて、それぞれの場合における二本鎖の
熱安定性を測定した。また、オリゴヌクレオチドＸＴ-
６〜ＸＴ-８のそれぞれと相補的なオリゴリボヌクレオ
チド（標的ＲＮＡ）とコントロールオリゴヌクレオチド
Ｃｏｎｔｒｏｌ−２および新規なオリゴヌクレオチドＸ
Ｔ-６〜ＸＴ-８との二本鎖をそれぞれ形成させて、それ
ぞれの場合における二本鎖の熱安定性を測定した。
【００３３】二本鎖の熱安定性の測定は、緩衝液とし
て、オリゴヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-５およびコント
ロールオリゴヌクレオチドＣｏｎｔｒｏｌ−１のそれぞ
れと標的ＤＮＡとでそれぞれ形成された二本鎖について
は０．０５Ｍの塩化ナトリウムと０．０１Ｍの燐酸ナト
リウムとの混合水溶液（ｐＨ７．０）を用い、オリゴヌ
クレオチドＸＴ-６〜ＸＴ-８およびコントロールオリゴ
ヌクレオチドＣｏｎｔｒｏｌ−２と標的ＲＮＡとでそれ
ぞれ形成された二本鎖については０．５Ｍの塩化ナトリ
ウムと０．０１Ｍの燐酸ナトリウムとの混合水溶液（ｐ
Ｈ７．０）を用い、それぞれオリゴマーの３μＭの溶液
を調製して、それぞれの溶液の融点Ｔｍを測定すること
により行った。その結果を表１に示す。
て、オリゴヌクレオチドＸＴ-１〜ＸＴ-５およびコント
ロールオリゴヌクレオチドＣｏｎｔｒｏｌ−１のそれぞ
れと標的ＤＮＡとでそれぞれ形成された二本鎖について
は０．０５Ｍの塩化ナトリウムと０．０１Ｍの燐酸ナト
リウムとの混合水溶液（ｐＨ７．０）を用い、オリゴヌ
クレオチドＸＴ-６〜ＸＴ-８およびコントロールオリゴ
ヌクレオチドＣｏｎｔｒｏｌ−２と標的ＲＮＡとでそれ
ぞれ形成された二本鎖については０．５Ｍの塩化ナトリ
ウムと０．０１Ｍの燐酸ナトリウムとの混合水溶液（ｐ
Ｈ７．０）を用い、それぞれオリゴマーの３μＭの溶液
を調製して、それぞれの溶液の融点Ｔｍを測定すること
により行った。その結果を表１に示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】表１に示した結果より、アンチセンスオリ
ゴヌクレオチドに含まれるチミジンを、チミジンの糖部
の４’位のα位にアミノ側鎖を導入したチミジン誘導体
に置き換えても、二本鎖の熱安定性が低下することはな
く、二本鎖が安定に存在することが分かる。
ゴヌクレオチドに含まれるチミジンを、チミジンの糖部
の４’位のα位にアミノ側鎖を導入したチミジン誘導体
に置き換えても、二本鎖の熱安定性が低下することはな
く、二本鎖が安定に存在することが分かる。
【００３６】〔ヌクレアーゼに対するアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドの抵抗性試験〕一方、アンチセンスオリ
ゴヌクレオチドの生体内での安定性を調べるために、ヌ
クレアーゼによるアンチセンスオリゴヌクレオチドの加
水分解に対する抵抗性を検討した。
ゴヌクレオチドの抵抗性試験〕一方、アンチセンスオリ
ゴヌクレオチドの生体内での安定性を調べるために、ヌ
クレアーゼによるアンチセンスオリゴヌクレオチドの加
水分解に対する抵抗性を検討した。
【００３７】試験は、次のような方法により行った。す
なわち、エキソヌクレアーゼによる加水分解では、オリ
ゴヌクレオチドＸＴ−５：３'-ＴＡＣＸＣＴＧＣＸＣＧ
ＡＣＸＣＧＧＸＣ-５'を用いて表２に示すような組成の
溶液を調製し、また、エンドヌクレアーゼによる加水分
解では、オリゴヌクレオチドＸＴ−１：３'-ＴＡＣＸＣ
ＴＧＣＴＣＧＡＣＴＣＧＧＴＣ-５'を用いて表３に示す
ような組成の溶液を調製した。
なわち、エキソヌクレアーゼによる加水分解では、オリ
ゴヌクレオチドＸＴ−５：３'-ＴＡＣＸＣＴＧＣＸＣＧ
ＡＣＸＣＧＧＸＣ-５'を用いて表２に示すような組成の
溶液を調製し、また、エンドヌクレアーゼによる加水分
解では、オリゴヌクレオチドＸＴ−１：３'-ＴＡＣＸＣ
ＴＧＣＴＣＧＡＣＴＣＧＧＴＣ-５'を用いて表３に示す
ような組成の溶液を調製した。
【００３８】
【表２】
【００３９】
【表３】
【００４０】そして、調製された溶液を３７℃に加温
し、１０、２０、３０、６０、１２０分後にそれぞれ溶
液４μｌずつを５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸水溶液
１０μｌと混合させ、１００℃の温度で５分間加熱した
後に濃縮乾固させた。この操作によって得られた試料を
２０％ポリアクリルアミドの電気泳動によって解析し
た。また、コントロールオリゴヌクレオチドＣｏｎｔｒ
ｏｌ−１：３'-ＴＡＣＴＣＴＧＣＴＣＧＡＣＴＣＧＧＴ
Ｃ-５'を用いて表２および表３に示すような組成の溶液
をそれぞれ調製して、上記と同様の解析を行った。それ
らの結果を図２および図３にそれぞれ示す。
し、１０、２０、３０、６０、１２０分後にそれぞれ溶
液４μｌずつを５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸水溶液
１０μｌと混合させ、１００℃の温度で５分間加熱した
後に濃縮乾固させた。この操作によって得られた試料を
２０％ポリアクリルアミドの電気泳動によって解析し
た。また、コントロールオリゴヌクレオチドＣｏｎｔｒ
ｏｌ−１：３'-ＴＡＣＴＣＴＧＣＴＣＧＡＣＴＣＧＧＴ
Ｃ-５'を用いて表２および表３に示すような組成の溶液
をそれぞれ調製して、上記と同様の解析を行った。それ
らの結果を図２および図３にそれぞれ示す。
【００４２】図２に示すように、２時間以内においては
エキソヌクレアーゼによる分解がほとんど観察されなか
った。これは、ヌクレオシドの糖部の４’位に導入され
たアミノ側鎖の存在がヌクレアーゼに対する抵抗性を増
強することを示唆している。
エキソヌクレアーゼによる分解がほとんど観察されなか
った。これは、ヌクレオシドの糖部の４’位に導入され
たアミノ側鎖の存在がヌクレアーゼに対する抵抗性を増
強することを示唆している。
【００４３】以上のことより、この発明に係るオリゴヌ
クレオチドは新規のアンチセンスオリゴヌクレオチドと
して応用することが可能であることが分かった。
クレオチドは新規のアンチセンスオリゴヌクレオチドと
して応用することが可能であることが分かった。
【００４４】
【発明の効果】請求項１ないし請求項５に係る各発明の
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生物学的安定性を
示すとともに、標的とするｍＲＮＡに対して特異的でか
つ熱力学的に安定な相補的結合を有する二本鎖を形成す
るので、エイズウイルス、サイトメガロウイルスなどに
対する抗ウイルス剤や慢性骨髄性白血病等に対する抗癌
剤として開発が進められているアンチセンスオリゴヌク
レオチドで問題となっている特異性、熱安定性及び生体
内安定性の要求を克服することができ、より効果的な薬
剤としての利用が期待される。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生物学的安定性を
示すとともに、標的とするｍＲＮＡに対して特異的でか
つ熱力学的に安定な相補的結合を有する二本鎖を形成す
るので、エイズウイルス、サイトメガロウイルスなどに
対する抗ウイルス剤や慢性骨髄性白血病等に対する抗癌
剤として開発が進められているアンチセンスオリゴヌク
レオチドで問題となっている特異性、熱安定性及び生体
内安定性の要求を克服することができ、より効果的な薬
剤としての利用が期待される。
【図１】この発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを化学的に合成する場合の第１段階として、それぞれ
官能基を保護したデオキシリボヌクレオシド誘導体（化
合物１）からオリゴヌクレオチド合成ユニット（化合物
２）を合成する場合の反応式を示す。
ドを化学的に合成する場合の第１段階として、それぞれ
官能基を保護したデオキシリボヌクレオシド誘導体（化
合物１）からオリゴヌクレオチド合成ユニット（化合物
２）を合成する場合の反応式を示す。
【図２】この発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの、エキソヌクレアーゼに対する抵抗性試験の結果を
示す図である。
ドの、エキソヌクレアーゼに対する抵抗性試験の結果を
示す図である。
【図３】この発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの、エンドヌクレアーゼに対する抵抗性試験の結果を
示す図である。
ドの、エンドヌクレアーゼに対する抵抗性試験の結果を
示す図である。
Claims (5)
- 【請求項１】 チミジンの糖部の４’位のα位にアミノ
側鎖を導入した、化１に構造式を示すチミジン誘導体を
構成成分として含むアンチセンスオリゴヌクレオチド。 【化１】 - 【請求項２】 デオキシウリジンの糖部の４’位のα位
にアミノ側鎖を導入した、化２に構造式を示すデオキシ
ウリジン誘導体を構成成分として含むアンチセンスオリ
ゴヌクレオチド。 【化２】 - 【請求項３】 デオキシシチジンの糖部の４’位のα位
にアミノ側鎖を導入した、化３に構造式を示すデオキシ
シチジン誘導体を構成成分として含むアンチセンスオリ
ゴヌクレオチド。 【化３】 - 【請求項４】 デオキシアデノシンの糖部の４’位のα
位にアミノ側鎖を導入した、化４に構造式を示すデオキ
シアデノシン誘導体を構成成分として含むアンチセンス
オリゴヌクレオチド。 【化４】 - 【請求項５】 デオキシグアノシンの糖部の４’位のα
位にアミノ側鎖を導入した、化５に構造式を示すデオキ
シグアノシン誘導体を構成成分として含むアンチセンス
オリゴヌクレオチド。 【化５】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30971197A JP4180681B2 (ja) | 1997-10-23 | 1997-10-23 | アンチセンスオリゴヌクレオチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30971197A JP4180681B2 (ja) | 1997-10-23 | 1997-10-23 | アンチセンスオリゴヌクレオチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11130793A true JPH11130793A (ja) | 1999-05-18 |
| JP4180681B2 JP4180681B2 (ja) | 2008-11-12 |
Family
ID=17996379
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30971197A Expired - Fee Related JP4180681B2 (ja) | 1997-10-23 | 1997-10-23 | アンチセンスオリゴヌクレオチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4180681B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018110678A1 (ja) * | 2016-12-16 | 2018-06-21 | 国立大学法人岐阜大学 | ヌクレオシド誘導体及びその利用 |
| US11780874B2 (en) | 2017-10-31 | 2023-10-10 | Yamasa Corporation | Nucleoside derivative and use thereof |
-
1997
- 1997-10-23 JP JP30971197A patent/JP4180681B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018110678A1 (ja) * | 2016-12-16 | 2018-06-21 | 国立大学法人岐阜大学 | ヌクレオシド誘導体及びその利用 |
| JPWO2018110678A1 (ja) * | 2016-12-16 | 2019-10-24 | 国立大学法人岐阜大学 | ヌクレオシド誘導体及びその利用 |
| US11643432B2 (en) | 2016-12-16 | 2023-05-09 | National University Corporation Tokai National Higher Education And Research System | Nucleoside derivative and use thereof |
| US11780874B2 (en) | 2017-10-31 | 2023-10-10 | Yamasa Corporation | Nucleoside derivative and use thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4180681B2 (ja) | 2008-11-12 |
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