JPH11108933A - Ｅｌｉｓａによる血清中胆汁酸類の測定による大腸癌及び直腸癌の決定法 - Google Patents
Ｅｌｉｓａによる血清中胆汁酸類の測定による大腸癌及び直腸癌の決定法Info
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- JPH11108933A JPH11108933A JP27110597A JP27110597A JPH11108933A JP H11108933 A JPH11108933 A JP H11108933A JP 27110597 A JP27110597 A JP 27110597A JP 27110597 A JP27110597 A JP 27110597A JP H11108933 A JPH11108933 A JP H11108933A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＥＬＩＳＡによる血清中胆汁酸類の測定によ
る大腸癌および直腸癌疾患を決定する方法を提供する。 【解決手段】 胆汁酸の活性エステルを製造し、牛血清
アルブミン溶液と反応させ、透析し、上記透析された物
を抗原としてヒト以外の哺乳動物を免疫することにより
抗胆汁酸抗体を作製し；上記活性エステルを酵素と反応
させて酵素標識胆汁酸を酵素標識抗原として作成し；第
二抗体固相化プレートに測定対象の血清の希釈液と抗胆
汁酸抗体液、酵素標識抗原液を加えて反応させ、さらに
基質を加えて反応させ；該反応物の吸光度の測定を行な
い、同時測定の標準曲線よりそれぞれの胆汁酸の濃度を
求め；得られたデオキシコール酸（ＤＣＡ）とコール酸
（ＣＡ）の濃度より、その濃度比（ＤＣＡ／ＣＡ）を求
め；および得られたこのＤＣＡ／ＣＡ比を健常者につい
て設定した該比の基準範囲と比較することにより大腸癌
および直腸癌を決定する。
る大腸癌および直腸癌疾患を決定する方法を提供する。 【解決手段】 胆汁酸の活性エステルを製造し、牛血清
アルブミン溶液と反応させ、透析し、上記透析された物
を抗原としてヒト以外の哺乳動物を免疫することにより
抗胆汁酸抗体を作製し；上記活性エステルを酵素と反応
させて酵素標識胆汁酸を酵素標識抗原として作成し；第
二抗体固相化プレートに測定対象の血清の希釈液と抗胆
汁酸抗体液、酵素標識抗原液を加えて反応させ、さらに
基質を加えて反応させ；該反応物の吸光度の測定を行な
い、同時測定の標準曲線よりそれぞれの胆汁酸の濃度を
求め；得られたデオキシコール酸（ＤＣＡ）とコール酸
（ＣＡ）の濃度より、その濃度比（ＤＣＡ／ＣＡ）を求
め；および得られたこのＤＣＡ／ＣＡ比を健常者につい
て設定した該比の基準範囲と比較することにより大腸癌
および直腸癌を決定する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙ
ｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａ
ｓｓａｙ）による血清中胆汁酸類の測定結果に基づいて
大腸癌および直腸癌を決定する方法に関する。
ｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａ
ｓｓａｙ）による血清中胆汁酸類の測定結果に基づいて
大腸癌および直腸癌を決定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】大腸癌および直腸癌は我が国でも急速に
増加している。その成因として、疫学や実験面から胆汁
酸の関与が指摘されている。
増加している。その成因として、疫学や実験面から胆汁
酸の関与が指摘されている。
【０００３】胆汁酸は胆汁の主成分の一つである。肝細
胞においてアセチル−ｃｏＡ（ｃｏｅｍｚｙｍｅ Ａ）
からコレステロールが生成され、さらに一次胆汁酸（コ
ール酸（ＣＡ）およびケノデオキシコール酸（ＣＤＣ
Ａ））ができる。グリシンあるいはタウリンと抱合した
一次胆汁酸は腸管内において腸内細菌により７αの脱水
酸化をうけ、二次胆汁酸（デオキシコール酸（ＤＣＡ）
およびリトコール酸（ＬＣＡ））が生成される。この時
ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）もできる。
胞においてアセチル−ｃｏＡ（ｃｏｅｍｚｙｍｅ Ａ）
からコレステロールが生成され、さらに一次胆汁酸（コ
ール酸（ＣＡ）およびケノデオキシコール酸（ＣＤＣ
Ａ））ができる。グリシンあるいはタウリンと抱合した
一次胆汁酸は腸管内において腸内細菌により７αの脱水
酸化をうけ、二次胆汁酸（デオキシコール酸（ＤＣＡ）
およびリトコール酸（ＬＣＡ））が生成される。この時
ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）もできる。
【０００４】胆汁酸は腸管内で脂溶性物質の吸収を助け
たのち、そのほとんどが回腸末端から再吸収され門脈を
経て肝臓に戻る閉鎖的な腸肝循環を繰り返している。胆
汁酸の体内プールは約３〜５ｇであり、そのほとんどは
胆のうと腸に存在する。ごく微量の胆汁酸が腸肝循環を
逸脱して血液大循環に洩れ、健常者の早朝空腹時で末梢
血中に約２μｇ／ｍｌほどの微量濃度として存在してい
る。また、血中胆汁酸濃度は食事に伴う日内変動が存在
し早朝空腹時がもっとも低く、朝、昼、夕の食後にそれ
ぞれ上昇する。就寝時に減少して早朝空腹時値にもど
る。
たのち、そのほとんどが回腸末端から再吸収され門脈を
経て肝臓に戻る閉鎖的な腸肝循環を繰り返している。胆
汁酸の体内プールは約３〜５ｇであり、そのほとんどは
胆のうと腸に存在する。ごく微量の胆汁酸が腸肝循環を
逸脱して血液大循環に洩れ、健常者の早朝空腹時で末梢
血中に約２μｇ／ｍｌほどの微量濃度として存在してい
る。また、血中胆汁酸濃度は食事に伴う日内変動が存在
し早朝空腹時がもっとも低く、朝、昼、夕の食後にそれ
ぞれ上昇する。就寝時に減少して早朝空腹時値にもど
る。
【０００５】胆汁酸と消化器疾患との研究報告では大腸
癌と糞便中胆汁酸（下記文献一覧表の文献１）ー２）参
照）や血中胆汁酸と肝疾患（該一覧表の文献３）参照）
などが多く占めている。特に肝疾患については血清中胆
汁酸が微量にしか存在しないことからＧＬＣ（気ー液ク
ロマトグラフィー）（該一覧表の文献４）参照）やＨＰ
ＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）（該一覧表の文献
５）参照）などの機器分析法が多く用いられて測定され
ている。いずれも分析操作が煩雑で高度な知識と技術を
必要としている。
癌と糞便中胆汁酸（下記文献一覧表の文献１）ー２）参
照）や血中胆汁酸と肝疾患（該一覧表の文献３）参照）
などが多く占めている。特に肝疾患については血清中胆
汁酸が微量にしか存在しないことからＧＬＣ（気ー液ク
ロマトグラフィー）（該一覧表の文献４）参照）やＨＰ
ＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）（該一覧表の文献
５）参照）などの機器分析法が多く用いられて測定され
ている。いずれも分析操作が煩雑で高度な知識と技術を
必要としている。
【０００６】また、一方３α−ヒドロキシステロイドデ
ヒドロゲナーゼ（３α−ＨＳＤ）を用いた血清胆汁酸の
酵素による測定法が報告（該一覧表の文献６）参照）さ
れ、近年では重要な肝機能検査として日常的に実施され
るようになったが、測定対象は総胆汁酸である。
ヒドロゲナーゼ（３α−ＨＳＤ）を用いた血清胆汁酸の
酵素による測定法が報告（該一覧表の文献６）参照）さ
れ、近年では重要な肝機能検査として日常的に実施され
るようになったが、測定対象は総胆汁酸である。
【０００７】なお、血清中の各胆汁酸を測定し、その組
成比により肝疾患を決定する方法は、本出願人の特許第
２６３８５２１号として登録されている。
成比により肝疾患を決定する方法は、本出願人の特許第
２６３８５２１号として登録されている。
【０００８】
【発明が解決すべき課題】上述のように、従来は、胆汁
酸によって消化器疾患を調べるには、機器分析法が多く
用いられて測定され、いずれも分析操作が煩雑で高度な
知識と技術を必要としている上、血清胆汁酸の酵素によ
る測定法の測定対象は総胆汁酸であったし、また、血清
中の各胆汁酸を測定し、その組成比により肝疾患を決定
する方法はすでに特許登録されているが、大腸癌および
直腸癌の診断に応用する方法はなかった。
酸によって消化器疾患を調べるには、機器分析法が多く
用いられて測定され、いずれも分析操作が煩雑で高度な
知識と技術を必要としている上、血清胆汁酸の酵素によ
る測定法の測定対象は総胆汁酸であったし、また、血清
中の各胆汁酸を測定し、その組成比により肝疾患を決定
する方法はすでに特許登録されているが、大腸癌および
直腸癌の診断に応用する方法はなかった。
【０００９】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは、下
記のような工程からなる、簡便で多数検査処理可能な血
清胆汁酸分画測定のＥＬＩＳＡ法を確立した：胆汁酸の
活性エステルを製造し、牛血清アルブミン溶液と反応さ
せ、透析し、上記透析された物を抗原としてヒト以外の
哺乳動物を免疫することにより抗胆汁酸抗体を作製し；
上記活性エステルを酵素と反応させて酵素標識胆汁酸を
酵素標識抗原として作成し；第二抗体固相化プレートに
測定対象の血清の希釈液と抗胆汁酸抗体液、酵素標識抗
原液を加えて反応させ、さらに基質を加えて反応させ；
該反応物の吸光度の測定を行ない、同時測定の標準曲線
よりそれぞれの胆汁酸の濃度を求める。
記のような工程からなる、簡便で多数検査処理可能な血
清胆汁酸分画測定のＥＬＩＳＡ法を確立した：胆汁酸の
活性エステルを製造し、牛血清アルブミン溶液と反応さ
せ、透析し、上記透析された物を抗原としてヒト以外の
哺乳動物を免疫することにより抗胆汁酸抗体を作製し；
上記活性エステルを酵素と反応させて酵素標識胆汁酸を
酵素標識抗原として作成し；第二抗体固相化プレートに
測定対象の血清の希釈液と抗胆汁酸抗体液、酵素標識抗
原液を加えて反応させ、さらに基質を加えて反応させ；
該反応物の吸光度の測定を行ない、同時測定の標準曲線
よりそれぞれの胆汁酸の濃度を求める。
【００１０】本発明の上記測定方法を使用して、健常者
を対象にコール酸およびデオキシコール酸（ＣＡおよび
ＤＣＡ）の濃度を測定後ＤＣＡ／ＣＡ比を求め、それぞ
れの基準範囲（平均値±ＳＤ）を設定した。
を対象にコール酸およびデオキシコール酸（ＣＡおよび
ＤＣＡ）の濃度を測定後ＤＣＡ／ＣＡ比を求め、それぞ
れの基準範囲（平均値±ＳＤ）を設定した。
【００１１】本発明者らは、このような基準範囲を参照
すれば、肝疾患のみならず大腸癌および直腸癌の決定を
行うことができることを見い出し、次のような大腸癌お
よび直腸癌の決定方法を創出した：胆汁酸の活性エステ
ルを製造し、牛血清アルブミン溶液と反応させ、透析
し、上記透析された物を抗原としてヒト以外の哺乳動物
を免疫することにより抗胆汁酸抗体を作製し；上記活性
エステルを酵素と反応させて酵素標識胆汁酸を酵素標識
抗原として作成し；第二抗体固相化プレートに測定対象
の血清の希釈液と抗胆汁酸抗体液、酵素標識抗原液を加
えて反応させ、さらに基質を加えて反応させ；該反応物
の吸光度の測定を行ない、同時測定の標準曲線よりそれ
ぞれの胆汁酸の濃度を求め；これらの胆汁酸の測定値よ
りデオキシコール酸（ＤＣＡ）／コール酸（ＣＡ）比を
算出した。
すれば、肝疾患のみならず大腸癌および直腸癌の決定を
行うことができることを見い出し、次のような大腸癌お
よび直腸癌の決定方法を創出した：胆汁酸の活性エステ
ルを製造し、牛血清アルブミン溶液と反応させ、透析
し、上記透析された物を抗原としてヒト以外の哺乳動物
を免疫することにより抗胆汁酸抗体を作製し；上記活性
エステルを酵素と反応させて酵素標識胆汁酸を酵素標識
抗原として作成し；第二抗体固相化プレートに測定対象
の血清の希釈液と抗胆汁酸抗体液、酵素標識抗原液を加
えて反応させ、さらに基質を加えて反応させ；該反応物
の吸光度の測定を行ない、同時測定の標準曲線よりそれ
ぞれの胆汁酸の濃度を求め；これらの胆汁酸の測定値よ
りデオキシコール酸（ＤＣＡ）／コール酸（ＣＡ）比を
算出した。
【００１２】得られたこの比を健常者について設定した
該比の基準範囲と比較することにより大腸癌および直腸
癌を決定する。
該比の基準範囲と比較することにより大腸癌および直腸
癌を決定する。
【００１３】本発明の方法により、上行結腸癌、横行結
腸癌、下行結腸癌またはＳ状結腸癌ならびに直腸癌の患
者を対象に血清中の胆汁酸濃度を測定後、健常者と同様
に各成分の濃度比を求め、得られた濃度比を健常者につ
いて設定した基準範囲と比較し、それぞれの病態との関
係を検討し新らしい知見結果を得た。詳細は以下の実施
例に述べる。
腸癌、下行結腸癌またはＳ状結腸癌ならびに直腸癌の患
者を対象に血清中の胆汁酸濃度を測定後、健常者と同様
に各成分の濃度比を求め、得られた濃度比を健常者につ
いて設定した基準範囲と比較し、それぞれの病態との関
係を検討し新らしい知見結果を得た。詳細は以下の実施
例に述べる。
【００１４】
【実施例】参考例１ 抗コール酸および抗デオキシコール酸の抗血清の作製： 抗デオキシコール酸ー２４−牛血清アルブミンーウサギ
血清 ： （ａ）デオキシコール酸（ＤＣＡ）（４０ｍｇ）をジオ
キサン１．０ｍｌで溶かし、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イ
ミド２３ｍｇと１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド塩酸塩３８ｍｇを加え３時間
反応させる。 （ｂ）この反応液に酢酸エチル４ｍｌと水４ｍｌを加え
胆汁酸を抽出する。水層を除去後酢酸エチル層を酢酸ナ
トリウムで脱水し、蒸発乾固させて、デオキシコール酸
活性エステルを得た。 （ｃ）次に、乾固物であるデオキシコール酸活性エステ
ルを１．０ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解後、２５
ｍｇ／ｍｌ牛血清アルブミン溶液（ＢＳＡ）１０ｍｌに
ゆっくりと加え１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整し
た。 （ｄ）３０分間放置し、さらに水に対して一昼夜透析
後、抗原（ＤＣＡ活性エステル）を生成する。 （ｅ）得られた抗原を１回当り１ｍｇをウサギに４ケ月
にわたり授与して免疫した。ウサギ体内で抗デオキシコ
ール酸を産生させ、これを採取して抗デオキシコール酸
ー２４−牛血清アルブミンーウサギ血清（以下ＤＣＡ抗
体）を得た。ＤＣＡ抗体を２０，０００倍希釈したもの
を測定に使用した。
血清 ： （ａ）デオキシコール酸（ＤＣＡ）（４０ｍｇ）をジオ
キサン１．０ｍｌで溶かし、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イ
ミド２３ｍｇと１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド塩酸塩３８ｍｇを加え３時間
反応させる。 （ｂ）この反応液に酢酸エチル４ｍｌと水４ｍｌを加え
胆汁酸を抽出する。水層を除去後酢酸エチル層を酢酸ナ
トリウムで脱水し、蒸発乾固させて、デオキシコール酸
活性エステルを得た。 （ｃ）次に、乾固物であるデオキシコール酸活性エステ
ルを１．０ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解後、２５
ｍｇ／ｍｌ牛血清アルブミン溶液（ＢＳＡ）１０ｍｌに
ゆっくりと加え１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整し
た。 （ｄ）３０分間放置し、さらに水に対して一昼夜透析
後、抗原（ＤＣＡ活性エステル）を生成する。 （ｅ）得られた抗原を１回当り１ｍｇをウサギに４ケ月
にわたり授与して免疫した。ウサギ体内で抗デオキシコ
ール酸を産生させ、これを採取して抗デオキシコール酸
ー２４−牛血清アルブミンーウサギ血清（以下ＤＣＡ抗
体）を得た。ＤＣＡ抗体を２０，０００倍希釈したもの
を測定に使用した。
【００１５】抗コール酸ー２４−牛血清アルブミンーウ
サギ血清：抗コール酸ー２４−牛血清アルブミンーウサ
ギ血清（以下ＣＡ抗体）は以下のように免疫学的寛容を
用いて作製した。 （ａ）ＣＤＣＡ活性エステルとＤＣＡ活性エステル各１
５ｍｇをそれぞれ１．０ｍｌのジメチルホルムアミドで
溶かし２５ｍｇ／ｍｌポリ−Ｄ−グルタミン酸−Ｄ−リ
ジン溶液４ｍｌにそれぞれ、ゆっくり加え３０分放置し
た。 （ｂ）水に対して一昼夜透析後、免疫学的寛容抗原を得
た。 （ｃ）免疫学的寛容抗原２ｍｇをウサギの腹腔内に注入
し、その３日後より１回当り１ｍｇのＣＡ−ＢＳＡ抗原
を４ケ月にわたりウサギに授与して免疫してＣＡ抗体を
得た。 （ｄ）得られたＣＡ−抗体を１５，０００倍に希釈して
測定に用いた。
サギ血清：抗コール酸ー２４−牛血清アルブミンーウサ
ギ血清（以下ＣＡ抗体）は以下のように免疫学的寛容を
用いて作製した。 （ａ）ＣＤＣＡ活性エステルとＤＣＡ活性エステル各１
５ｍｇをそれぞれ１．０ｍｌのジメチルホルムアミドで
溶かし２５ｍｇ／ｍｌポリ−Ｄ−グルタミン酸−Ｄ−リ
ジン溶液４ｍｌにそれぞれ、ゆっくり加え３０分放置し
た。 （ｂ）水に対して一昼夜透析後、免疫学的寛容抗原を得
た。 （ｃ）免疫学的寛容抗原２ｍｇをウサギの腹腔内に注入
し、その３日後より１回当り１ｍｇのＣＡ−ＢＳＡ抗原
を４ケ月にわたりウサギに授与して免疫してＣＡ抗体を
得た。 （ｄ）得られたＣＡ−抗体を１５，０００倍に希釈して
測定に用いた。
【００１６】酵素標識ーＣＡおよび酵素標識−ＤＣＡの
作製：西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯＤ）２．
０ｍｇを０．４ｍｌの０．１Ｍリン酸塩緩衝剤を加えた
生理塩液（ＰＢＳ）ｐＨ７．４で溶解する。ＣＡ活性エ
ステル、ＤＣＡ活性エステル各２μｇを４０μｌのジメ
チルホルムアミドで溶解後、ＨＲＰＯＤ−ＰＢＳ溶液に
ゆっくり加える。３０分後、ｐＨ７．４ ０．１Ｍ Ｐ
ＢＳに対して一昼夜透析する。得られたＨＲＰＯＤ標識
ＣＡ（ＨＲＰＯＤ−ＣＡ）および他の酵素標準胆汁酸
（ＨＲＰＯＤ−ＤＣＡ）液は１５０倍に希釈後、測定に
用いた。
作製：西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯＤ）２．
０ｍｇを０．４ｍｌの０．１Ｍリン酸塩緩衝剤を加えた
生理塩液（ＰＢＳ）ｐＨ７．４で溶解する。ＣＡ活性エ
ステル、ＤＣＡ活性エステル各２μｇを４０μｌのジメ
チルホルムアミドで溶解後、ＨＲＰＯＤ−ＰＢＳ溶液に
ゆっくり加える。３０分後、ｐＨ７．４ ０．１Ｍ Ｐ
ＢＳに対して一昼夜透析する。得られたＨＲＰＯＤ標識
ＣＡ（ＨＲＰＯＤ−ＣＡ）および他の酵素標準胆汁酸
（ＨＲＰＯＤ−ＤＣＡ）液は１５０倍に希釈後、測定に
用いた。
【００１７】ＥＬＩＳＡによる胆汁酸測定：本法の測定
に用いた試薬、機器は表１に示した。
に用いた試薬、機器は表１に示した。
【００１８】
【表１】
【００１９】また、測定に用いたすべての検体は早朝空
腹時に採血し、血清分離後−２０℃以下に保存した。図
１に示した手順のように、第二抗体固相化プレートに各
５０μｌの希釈血清液と抗胆汁酸抗体液、酵素標識抗原
液を加え２５℃で４時間反応させ、洗浄、さらに基質を
加え２５℃、３０分反応させ、反応停止液を加えたの
ち、４９２ｎｍフィルターで吸光度の測定を行ない、同
時測定の標準曲線よりそれぞれＣＡおよびＤＣＡの値を
求めた。また、上記４成分の測定値の総和を総胆汁酸値
（ＴＢＡ）とした。
腹時に採血し、血清分離後−２０℃以下に保存した。図
１に示した手順のように、第二抗体固相化プレートに各
５０μｌの希釈血清液と抗胆汁酸抗体液、酵素標識抗原
液を加え２５℃で４時間反応させ、洗浄、さらに基質を
加え２５℃、３０分反応させ、反応停止液を加えたの
ち、４９２ｎｍフィルターで吸光度の測定を行ない、同
時測定の標準曲線よりそれぞれＣＡおよびＤＣＡの値を
求めた。また、上記４成分の測定値の総和を総胆汁酸値
（ＴＢＡ）とした。
【００２０】対象は健常者１２０名，１８才〜６９才、
平均年齢４５．３才（男子６０名，平均年齢４７．１
才，女子６０名，平均年齢４３．８才）である。なお有
意差検定はｔ−テストにて行なった。
平均年齢４５．３才（男子６０名，平均年齢４７．１
才，女子６０名，平均年齢４３．８才）である。なお有
意差検定はｔ−テストにて行なった。
【００２１】結果：本法ＥＬＩＳＡ法におけるＣＡおよ
びＤＣＡの標準曲線を図２に示した。図２はＥＬＩＳＡ
法の典型的な標準曲線を示している。二重測定値も満足
する結果であった。
びＤＣＡの標準曲線を図２に示した。図２はＥＬＩＳＡ
法の典型的な標準曲線を示している。二重測定値も満足
する結果であった。
【００２２】
【表２】
【００２３】表２には胆汁酸と抗体との交叉反応が示し
てあり、ＣＡ−抗体，ＤＣＡ−抗体それぞれの各胆汁酸
との交叉率を示した。ＣＡ−抗体については遊離−ＣＡ
１００％に比してグリシンとタウリン複合体でそれぞれ
１６４％，２１０％の交叉率、同様にＣＤＣＡでは１．
５〜３．５％であった。また二次胆汁酸のＤＣＡでは
２．０〜４．１％でありリトコール酸（ＬＣＡ）では
０．１％であった。
てあり、ＣＡ−抗体，ＤＣＡ−抗体それぞれの各胆汁酸
との交叉率を示した。ＣＡ−抗体については遊離−ＣＡ
１００％に比してグリシンとタウリン複合体でそれぞれ
１６４％，２１０％の交叉率、同様にＣＤＣＡでは１．
５〜３．５％であった。また二次胆汁酸のＤＣＡでは
２．０〜４．１％でありリトコール酸（ＬＣＡ）では
０．１％であった。
【００２４】ＤＣＡ−抗体については、遊離−ＤＣＡ１
００％に比してグリシンとタウリン複合体でそれぞれ１
８４％，１９２％の交叉率であった。同様にＣＡに対し
ては４．９％以下、ＣＤＣＡに対しては０．８％以下、
ＬＣＡでは３．２％以下の交叉率であった。
００％に比してグリシンとタウリン複合体でそれぞれ１
８４％，１９２％の交叉率であった。同様にＣＡに対し
ては４．９％以下、ＣＤＣＡに対しては０．８％以下、
ＬＣＡでは３．２％以下の交叉率であった。
【００２５】これらの各胆汁酸抗体についてはほぼ満足
するものであった。
するものであった。
【００２６】表３には健常者における胆汁酸レベルの基
準値範囲の設定が示されている。また、ＤＣＡ、ＣＡの
胆汁酸測定値より求めたＤＣＡ／ＣＡ比も表３に示し
た。
準値範囲の設定が示されている。また、ＤＣＡ、ＣＡの
胆汁酸測定値より求めたＤＣＡ／ＣＡ比も表３に示し
た。
【００２７】
【表３】
【００２８】実施例１ 治療切除された大腸癌症例の術前（３１症例）と術後
（６症例）、および健常者（１２０症例）の静脈血を採
血して、参考例１と同様にして、血清中の一次胆汁酸と
してコール酸（ＣＡ），二次胆汁酸としてデオキシコー
ル酸（ＤＣＡ）を酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）
法で測定した。
（６症例）、および健常者（１２０症例）の静脈血を採
血して、参考例１と同様にして、血清中の一次胆汁酸と
してコール酸（ＣＡ），二次胆汁酸としてデオキシコー
ル酸（ＤＣＡ）を酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）
法で測定した。
【００２９】一次胆汁酸と二次胆汁酸の組成比として、
ＤＣＡ／ＣＡを算出し検討した。
ＤＣＡ／ＣＡを算出し検討した。
【００３０】上記測定の結果、ＣＡ値（μｍｏｌ／ｌ）
について、健常者では１．７９±０．７４（平均値±Ｓ
Ｄ）で大腸癌患者は２．８１±１．６１（平均値±Ｓ
Ｄ）と高値傾向を認めた。同様にＤＣＡ値（μｍｏｌ／
ｌ）については、健常者０．３０±０．４０に比して大
腸癌患者は１０．５５±５．１０と明らかな高値傾向を
認め、有意差（Ｐ＜０．００１）が認められた。
について、健常者では１．７９±０．７４（平均値±Ｓ
Ｄ）で大腸癌患者は２．８１±１．６１（平均値±Ｓ
Ｄ）と高値傾向を認めた。同様にＤＣＡ値（μｍｏｌ／
ｌ）については、健常者０．３０±０．４０に比して大
腸癌患者は１０．５５±５．１０と明らかな高値傾向を
認め、有意差（Ｐ＜０．００１）が認められた。
【００３１】また、上記結果をＤＣＡ／ＣＡ比で見る
と、健常者０．１８（０．１５）に比して、大腸癌患者
は４．１９（１．４０）と著明な有意差（Ｐ＜０．００
１）が認められた。一方、大腸癌患者のＤＣＡ／ＣＡ比
の術前、術後における動態は、術前値４．１９±１．４
０に比して術後１．２４±１．５５と有意な差（Ｐ＜
０．００１）を認めた。
と、健常者０．１８（０．１５）に比して、大腸癌患者
は４．１９（１．４０）と著明な有意差（Ｐ＜０．００
１）が認められた。一方、大腸癌患者のＤＣＡ／ＣＡ比
の術前、術後における動態は、術前値４．１９±１．４
０に比して術後１．２４±１．５５と有意な差（Ｐ＜
０．００１）を認めた。
【００３２】上記所見は、二次胆汁酸と一次胆汁酸との
組成比を大腸癌の診断にも応用できることを明確に示し
た。
組成比を大腸癌の診断にも応用できることを明確に示し
た。
【００３３】
【発明の効果】上記の試験値に示されるように、大腸癌
症例でＤＣＡ／ＣＡ値が非常に高いことから、血清胆汁
酸組成比を求めることが肝疾患のみならず、大腸癌およ
び直腸癌のスクリーニングなどの診断に役立つ可能性が
ある。大腸癌または直腸癌の検体として、従来の糞便で
はなく血清を試料として測定する本発明の方法を用いる
ことは、測定される患者にとっても、測定する側にとっ
ても臨床的に大変利便性があり有用である。今後、さら
に臨床症例データを集積することにより、より正確で緻
密な診断に応用することが可能である。
症例でＤＣＡ／ＣＡ値が非常に高いことから、血清胆汁
酸組成比を求めることが肝疾患のみならず、大腸癌およ
び直腸癌のスクリーニングなどの診断に役立つ可能性が
ある。大腸癌または直腸癌の検体として、従来の糞便で
はなく血清を試料として測定する本発明の方法を用いる
ことは、測定される患者にとっても、測定する側にとっ
ても臨床的に大変利便性があり有用である。今後、さら
に臨床症例データを集積することにより、より正確で緻
密な診断に応用することが可能である。
【００３４】文献一覧表 １） Ｋａｎｏ Ｍ，Ｗａｄａ Ｈ，Ｍａｔｓｕｍｏｔ
ｏ Ｍ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋ，Ｋａｍａｎｏ Ｔ，Ｍ
ｏｔｅｇｉ Ｋ，Ｏｇｕｃｈｉ Ｋ ａｎｄ ｋａｎｏ
Ｙ：Ｈｕｎａｎ ｔｅｃａｌ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ
ａｎｄ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｅｎｚｙｍ
ｅ−ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓ
ｓａｙ．Ｓｈｏｗａ ｕｎｉｖ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，
５：１８３−１９１（１９９３） ２） Ｒｅｄｄｙ ＢＳ ａｎｄ Ｗｙｎｄｅｒ Ｅ
Ｌ：Ｍｅｔａｂｏｌｉｃｅｐｉｄｅｍｉ−ｏｌｏｇｙ
ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｆｅｃａｌｂｉｌｅ
ａｃｉｄ ａｎｄ ｎｅｕｔｒａｌ ｓｔｅｒｏｌｓ
ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ
ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈａｄｅｎｏｍａ
ｔｏｕｓ ｐｏｌｙｐｓ．ｃａｎｃｅｒ，３９：２５３
３−２５３９（１９７７） ３） Ｋｕｍａｄａ Ｔ，Ｎａｋａｎｏ Ｓ，ｏｈｔａ
Ｈ，Ｓａｓａｋｉ Ｔ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｗａ
ｔａｈｉｋｉ Ｈ，Ｔａｋｅｄａ Ｉ，Ｏｋｕｙａｍａ
Ｓ，ａｎｄ Ｔａｋａｇｉ Ｋ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｅｎａｌｕａｔｉｏｎ ｏｎ ｄｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｂｉｌｅ ａｃ
ｉｄｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．ｓｅｒｕ
ｍ ｂｉｌｅａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ
ｆｌｕｍｉｎａｎｔ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ａｎｄ
ａｃｕｔｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｋａｎｚｈｓ，２
３：３６４−３７１（１９８２）（ｉｎ Ｊａｐａｎｅ
ｓｅ，Ｅｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ） ４） Ｋａｒｌａｇａｎｉｓ Ｇ ａｎｄ ｐａｕｍｇ
ａｒｔｎｅｒ Ｇ：Ｄｅｔｅｍｉｎａ−ｔｉｏｎ ｏｆ
ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｂｙ ｃ
ａｐｉｌｌａｒｙ ｇａｓ−ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍ
ａｔｏｇｒａｐｈｙ．ｃｌｉｎ ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，
９２：１９−２６（１９７９） ５） Ｍａｒｕｙａｍａ Ｋ，Ｔａｎｉｍｕｒａ Ｈ
ａｎｄ ＨｉｋａｓａＹ：Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃ
ｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓｉｎ ｂｉ
ｌｅ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉ
ｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒｐｈｙ．ｃｌｉｎ ｃｈｉｍ
Ａｃｔａ，１００：４７−５４（１９８０） ６） Ｍａｓｈｉｇｅ Ｆ，Ｔａｎａｋａ Ｎ，Ｍａｋ
ｉ Ａ，Ｋａｍｅｉ Ｓａｎｄ Ｙａｍａｎａｋａ
Ｍ：Ｄｉｒｅｃｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒ
ｙ ｏｆ ｔａｔａｌ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｉｎ
ｓｅｒｕｍ ．Ｃｌｉｎｃｈｅｍ，２７：１３５２−１
３５６（１９８１）
ｏ Ｍ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋ，Ｋａｍａｎｏ Ｔ，Ｍ
ｏｔｅｇｉ Ｋ，Ｏｇｕｃｈｉ Ｋ ａｎｄ ｋａｎｏ
Ｙ：Ｈｕｎａｎ ｔｅｃａｌ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ
ａｎｄ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｅｎｚｙｍ
ｅ−ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓ
ｓａｙ．Ｓｈｏｗａ ｕｎｉｖ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，
５：１８３−１９１（１９９３） ２） Ｒｅｄｄｙ ＢＳ ａｎｄ Ｗｙｎｄｅｒ Ｅ
Ｌ：Ｍｅｔａｂｏｌｉｃｅｐｉｄｅｍｉ−ｏｌｏｇｙ
ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｆｅｃａｌｂｉｌｅ
ａｃｉｄ ａｎｄ ｎｅｕｔｒａｌ ｓｔｅｒｏｌｓ
ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ
ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈａｄｅｎｏｍａ
ｔｏｕｓ ｐｏｌｙｐｓ．ｃａｎｃｅｒ，３９：２５３
３−２５３９（１９７７） ３） Ｋｕｍａｄａ Ｔ，Ｎａｋａｎｏ Ｓ，ｏｈｔａ
Ｈ，Ｓａｓａｋｉ Ｔ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｗａ
ｔａｈｉｋｉ Ｈ，Ｔａｋｅｄａ Ｉ，Ｏｋｕｙａｍａ
Ｓ，ａｎｄ Ｔａｋａｇｉ Ｋ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｅｎａｌｕａｔｉｏｎ ｏｎ ｄｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｂｉｌｅ ａｃ
ｉｄｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．ｓｅｒｕ
ｍ ｂｉｌｅａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ
ｆｌｕｍｉｎａｎｔ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ａｎｄ
ａｃｕｔｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｋａｎｚｈｓ，２
３：３６４−３７１（１９８２）（ｉｎ Ｊａｐａｎｅ
ｓｅ，Ｅｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ） ４） Ｋａｒｌａｇａｎｉｓ Ｇ ａｎｄ ｐａｕｍｇ
ａｒｔｎｅｒ Ｇ：Ｄｅｔｅｍｉｎａ−ｔｉｏｎ ｏｆ
ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｂｙ ｃ
ａｐｉｌｌａｒｙ ｇａｓ−ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍ
ａｔｏｇｒａｐｈｙ．ｃｌｉｎ ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，
９２：１９−２６（１９７９） ５） Ｍａｒｕｙａｍａ Ｋ，Ｔａｎｉｍｕｒａ Ｈ
ａｎｄ ＨｉｋａｓａＹ：Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃ
ｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓｉｎ ｂｉ
ｌｅ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉ
ｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒｐｈｙ．ｃｌｉｎ ｃｈｉｍ
Ａｃｔａ，１００：４７−５４（１９８０） ６） Ｍａｓｈｉｇｅ Ｆ，Ｔａｎａｋａ Ｎ，Ｍａｋ
ｉ Ａ，Ｋａｍｅｉ Ｓａｎｄ Ｙａｍａｎａｋａ
Ｍ：Ｄｉｒｅｃｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒ
ｙ ｏｆ ｔａｔａｌ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｉｎ
ｓｅｒｕｍ ．Ｃｌｉｎｃｈｅｍ，２７：１３５２−１
３５６（１９８１）
【図１】本法ＥＬＩＳＡ法におけるＣＡ，ＤＣＡの測定
手順を示す図式である。
手順を示す図式である。
【図２】本法ＥＬＩＳＡ法におけるＣＡ，ＤＣＡの標準
曲線を示すグラフである。
曲線を示すグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】 胆汁酸の活性エステルを製造し、牛血清
アルブミン溶液と反応させ、透析し、上記透析された物
を抗原としてヒト以外の哺乳動物を免疫することにより
抗胆汁酸抗体を作製し；上記活性エステルを酵素と反応
させて酵素標識胆汁酸を酵素標識抗原として作成し；第
二抗体固相化プレートに測定対象の血清の希釈液と抗胆
汁酸抗体液、酵素標識抗原液を加えて反応させ、さらに
基質を加えて反応させ；該反応物の吸光度の測定を行な
い、同時測定の標準曲線よりそれぞれの胆汁酸の濃度を
求め；得られたデオキシコール酸（ＤＣＡ）とコール酸
（ＣＡ）の濃度より、その濃度比（ＤＣＡ／ＣＡ）を求
め；および得られたこのＤＣＡ／ＣＡ比を健常者につい
て設定した該比の基準範囲と比較することからなる大腸
癌および直腸癌の決定方法。 - 【請求項２】 酵素が西洋ワサビペルオキシダーゼで、
基質がｏ−フェニレンジアミンであり、免疫される哺乳
動物がウサギである請求項１の方法。 - 【請求項３】 第二抗体固相化プレートが抗−ウサギＩ
ｇＧＥＬＩＳＡプレートで、４９２ｎｍフィルターを使
用して測定する請求項１の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27110597A JPH11108933A (ja) | 1997-10-03 | 1997-10-03 | Ｅｌｉｓａによる血清中胆汁酸類の測定による大腸癌及び直腸癌の決定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27110597A JPH11108933A (ja) | 1997-10-03 | 1997-10-03 | Ｅｌｉｓａによる血清中胆汁酸類の測定による大腸癌及び直腸癌の決定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11108933A true JPH11108933A (ja) | 1999-04-23 |
Family
ID=17495420
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27110597A Pending JPH11108933A (ja) | 1997-10-03 | 1997-10-03 | Ｅｌｉｓａによる血清中胆汁酸類の測定による大腸癌及び直腸癌の決定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11108933A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108700572A (zh) * | 2016-02-29 | 2018-10-23 | 富士胶片株式会社 | 用于定量生物试样中的胆汁酸的试剂盒及定量生物试样中的胆汁酸的方法 |
| CN111474288A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-07-31 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种用于准确测定血清中胆汁酸浓度的质谱试剂盒 |
-
1997
- 1997-10-03 JP JP27110597A patent/JPH11108933A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108700572A (zh) * | 2016-02-29 | 2018-10-23 | 富士胶片株式会社 | 用于定量生物试样中的胆汁酸的试剂盒及定量生物试样中的胆汁酸的方法 |
| US10883986B2 (en) | 2016-02-29 | 2021-01-05 | Fujifilm Corporation | Kit for quantitatively determining bile acid in biological sample, and method for quantitatively determining bile acid in biological sample |
| CN111474288A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-07-31 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种用于准确测定血清中胆汁酸浓度的质谱试剂盒 |
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