JPH1072488A - 抗ヘリコバクター・ピロリ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 サポニン類を有効成分としてなる消化性潰瘍
治療、またその再発防止剤としての抗ヘリコバクター・
ピロリ剤及び新規サポニンを提供する。 【解決手段】 一般式（Ｉ） 【化１】 ［式中、R¹は、糖残基を表わし、R²は水素原子または水
酸基を表わし、R³はメチル基またはヒドロキシメチル基
を表わし、R⁴は一般式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）（R⁵は水
素原子または糖残基を表わし、R⁶は水素原子または水酸
基を表わし、R⁷とR⁸は独立に水素原子または水酸基を表
わすが、同時に水酸基を表わすことはない。）を表わ
す。なお、R¹とR⁵が糖残基であるときは３−ヒドロキシ
メチル−３−メチル−１，５−ペンタジオイル基を介し
て結合していてもよい。］で示されるサポニン類を有効
成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、胃潰瘍、十二指腸
潰瘍等の発症の防御剤ならびにこれら消化性潰瘍治療後
の再発防止剤として有効な抗ヘリコバクター・ピロリ剤
及びゴンフレノシドに関する。

【０００２】

【従来の技術】ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏ
ｂａｃｔｏｒ ｐｙｌｏｒｉ）は、ヒトに慢性胃炎や消
化性潰瘍を起こさせる病原菌として、近年注目を浴びて
きているグラム陰性の微好気性細菌である。この菌が、
胃炎、消化性潰瘍患者などの胃粘膜から高率に検出され
る（胃炎患者から６５％、胃潰瘍患者から８６％、十二
指腸潰瘍患者から９１％に及ぶ高率で検出されている）
ことが報告されている。一方、本病原菌は、これらの疾
患の発症のみならず、いったん治癒した潰瘍の再発につ
いても関連があると考えられており、胃潰瘍患者で本菌
保有患者の７０％が１年以内に再発したのに対し、保菌
者でない患者の再発率は１０％程度であったとされてい
る。

【０００３】従来、抗潰瘍剤としては、制酸剤、抗コリ
ン剤、抗ガストリン剤、消化管ホルモン剤、抗ペプシン
剤、抗ヒスタミン剤、組織修復剤、粘膜保護剤、微小循
環改善剤、プロトンポンプ阻害剤等が開発されてきた。
特に、強力な胃酸分泌抑制効果を有する、抗ヒスタミン
剤とプロトンポンプ阻害剤は、最もよく用いられてい
る。しかし、これらの抗潰瘍剤は、投薬中止後の再発率
が高いという問題点も含んでいる。先に述べたように、
ヘリコバクター・ピロリが、潰瘍発症に関わっているこ
とが報告されてからは、本菌の除菌のための抗菌剤と、
オメプラゾールのようなプロトンポンプ阻害剤の併用が
行われるようになった。これらは、一応の効果を上げて
いるが、投薬中止後の再発率が高く、また強力な抗菌剤
の長期連続投与による下痢、嘔吐などの副作用が問題と
なっている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】強力な抗菌剤ではな
く、ヘリコバクター・ピロリ以外の微生物に対しては抗
菌力をもたない、ヘリコバクター・ピロリ特異的な抗菌
剤を見い出し、長期連続投与に適する抗ヘリコバクター
・ピロリ剤として、すなわち胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の
発症の防御剤並びに消化性潰瘍治療後の再発防止剤とし
て有効な抗ヘリコバクター・ピロリ剤を提供することに
ある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために、各種天然物について鋭意検討を行っ
た結果、植物の成分であるサポニン類の中から、ヘリコ
バクター・ピロリの生育を選択的に抑制するものを見い
出し、本発明を完成することに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、下記の一般式（Ｉ）

【０００７】

【化５】

【０００８】［式中、R¹は、糖残基を表し、R²は水素原
子または水酸基を表し、R³はメチル基またはヒドロキシ
メチル基を表し、R⁴は一般式（ＩＩ）

【０００９】

【化６】

【００１０】または、一般式（ＩＩＩ）

【００１１】

【化７】

【００１２】（R⁵は水素原子または糖残基を表し、R⁶は
水素原子または水酸基を表し、R⁷とR⁸は独立に水素原子
または水酸基を表すが、同時に水酸基を表すことはな
い。）を表す。なお、R¹とR⁵が糖残基であるときは、各
々の糖残基が３−ヒドロキシメチル−３−メチル−１，
５−ペンタジオイル基を介して結合していてもよい。］
で示されるサポニン類を有効成分とする抗ヘリコバクタ
ー・ピロリ剤を提供する。

【００１３】また本発明は、前記一般式（Ｉ）における
R¹と前記一般式（ＩＩ）におけるR⁵の糖残基が、グルコ
ース、キシロース、グルクロン酸、アラビノース、リボ
ース、ラムノースより選ばれる単糖類または、それらの
同一または異なってもよい２乃至は３個が結合してなる
多糖類から成る糖残基の群より選ばれたものである、前
記の抗ヘリコバクター・ピロリ剤を提供する。

【００１４】また、下記式（ＩＶ）で表される抗ヘリコ
バクター・ピロリ活性を有すゴンフレノシドに関するも
のである。

【化８】 （式中、GlcAはグルクロン酸、Rhaはラムノース、Xylは
キシロースの糖残基を表す。）

【発明の実施の形態】本発明において、糖残基とは単糖
類もしくは多糖類から水素原子を一個除去して成る基を
意味し、Ｄ体あるいはＬ体のいずれであってもよい。以
下に本発明に係る化合物の具体例を示す。

【００１５】

【化９】

【００１６】１、チクセツサポニンIVa 式（Ｖ）において、R¹はグルクロン酸、R³はメチル基、
R⁵はグルコースである化合物。

【００１７】２、ムクロジサポニンX 式（Ｖ）において、R¹はアラビノシルラムノース、R³は
ヒドロキシメチル基、R⁵はグルコシルグルコースである
化合物。

【００１８】３、フサンゴシドB 式（Ｖ）において、R¹はアラビノシルラムノシルリブロ
ース、R³はメチル基、R⁵はグルコシルグルコシルラムノ
ースである化合物。

【００１９】４、フサンゴシドC 式（Ｖ）において、R¹はキシロシルラムノシルリブロー
ス、R³はメチル基、R⁵はグルコシルグルコシルラムノー
スである化合物。

【００２０】５、フサンゴシドD 式（Ｖ）において、R¹はアラビノシルラムノシルリブロ
ース、R³はヒドロキシメチル基、R⁵はグルコシルグルコ
シルラムノースである化合物。

【００２１】６、Cp−４ 式（Ｖ）において、R¹はアラビノシルラムノシルリブロ
ース、R³はメチル基、R⁵は水素原子である化合物。

【００２２】７、Cp−６ 式（Ｖ）において、R¹はアラビノシルラムノシルリブロ
ース、R³はヒドロキシメチル基、R⁵は水素原子である化
合物。

【００２３】８、式（ＶＩ）で表されるツベイモシドＩ
ＩＩ

【００２４】

【化１０】

【００２５】９、式（ＶＩＩ）で表されるサイコサポニ
ンA。ただし式中、Rhaはラムノース、Glcはグルコース
を表す。

【００２６】

【化１１】

【００２７】１０、式（ＶＩＩＩ）で表されるサイコサ
ポニンD。ただし式中、Rhaはラムノース、Glcはグルコ
ースを表す。

【００２８】

【化１２】

【００２９】以下に本発明の化合物について説明する。

【００３０】チクセツサポニンIVaは、チクセツニンジ
ン（Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）の乾燥物のメタ
ノール抽出、水飽和ブタノール抽出を行い、メタノール
／アセトンで沈殿画分をとり、これをクロロホルム／メ
タノール／水系のシリカゲルクロマトグラフィーで精製
することにより得ることができる。（Chem. Pharm. Bul
l., 31 (9), 3205-3209, 1983)

【００３１】ムクロジサポニンXは、Sapindus mukuross
iの熱メタノール抽出物のHP−２０（７５％メタノー
ル）カラムクロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（クロロフォルム／メタノール／水或い
は、酢酸エチル／エタノール／水系）を行ったあと、逆
相カラムクロマトグラフィー（LiChroprep RP-8, 水／
メタノール系）によって精製する。(Chem. Pharm. Bul
l., 31 (6), 1998-2005,1983)

【００３２】フサンゴシドB、C、D、Cp−４、Cp−６
は、アネモネリブラリス（Anemone rivularis）のメタ
ノール抽出物を、水谷らの方法（Planta Medica, No.4,
327, 1984）により精製して得ることができる。

【００３３】ツベイモシドＩＩＩは、ボルボステマ パ
ニクラータム（Bolbostema paniculatum）を熱メタノー
ル抽出、熱５０％メタノール抽出を行い、メタノールを
用いたHPー２０カラムクロマトグラフィー、逆相（LiCh
roprep RP-8）カラムクロマトグラフィーにより精製す
ることができる。（Phytochemistry, 27 (5), 1439-144
6, 1988） サイコサポニンA, Dは試薬として購入するこ
とができる。

【００３４】ゴンフレノシドは、千日紅の種子をすり潰
し、９０％メタノールで抽出後、メタノール可溶部をヘ
キサンで脱脂する。これをブタノール抽出し、ブタノー
ル層をHPー２０カラムに吸着、８０％アセトンで溶出し
て精製する。さらにこれを、シリカゲルカラム（酢酸エ
チル／メタノール／水）で展開し、活性画分を逆相HPLC
カラム（センシューパックVPー３０４ー３２５１）で分
取することにより純粋な、ゴンフレノシドを得ることが
できる。単離したゴンフレノシドの構造を以下のとおり
に決定した。（下記、実施例参照。）本化合物は、今ま
でに報告のない新規なサポニンゴンフレノシドである。

【００３５】

【化１３】

【００３６】〔式中、GlcAはグルクロン酸、Rhaはラム
ノース、Xylはキシロースの糖残基を表す。〕

【００３７】本発明において上記の化合物は、経口的に
も非経口的にも投与することができるが、通常は経口的
に投与される。また適当な医薬坦体と混合して用いるこ
ともできる。医薬坦体としては、経口的には、乳糖、マ
ンニットなどの糖類、デンプン類結晶セルロース、クエ
ン酸カルシウム、第２リン酸カルシウム、ゼラチン、デ
キストリン、メチルセルロース、カルボキシメチルセル
ロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、ステアリン酸およびそのマグネシ
ウム塩または、カルシウム塩、タルク等が挙げられる。
非経口的には、植物油、エタノール、プロピレングリコ
ール、ポリエチレングリコール類、カカオ脂ラウリン
酸、グリセリンなどが挙げられる。又投与剤型として
は、錠剤、散剤、カプセル剤の如き固形剤であってもよ
く、溶液、懸濁液の如き液剤であってもよい。さらに、
非経口的に投与する場合は、注射剤、点滴溶液剤或い
は、坐薬として用いることができる。

【００３８】また上記の化合物は、通常の飲食物中に添
加して、日常的に摂取することも可能である。添加しう
る食品の種類には特に限定はなく、添加量は食品本来の
味を損なうことがない範囲であれば制限はないが、通常
０．０１〜１重量％程度を添加して用いることができ
る。

【００３９】本発明の有効成分を経口投与する場合に
は、有効成分の合計として、通常成人１日あたり１〜３
００mg／kg、好ましくは３〜３０mg／kgを１〜３回に分
けて投与すればよく飲食物等に添加して日常的に摂取す
る場合も、経口投与ととほぼ同様に行えばよい。これら
は、年齢、症状等により適宜増減することが可能であ
る。

【００４０】

【実施例】以下、試験例により本発明をさらに詳しく説
明する。なお、本発明はこれらによって制限されるもの
ではない。

【００４１】

【実施例】

実施例１ 千日紅（Gomphrena globosa L)の種をすりつぶし、９０
％メタノールで抽出し、メタノール可溶部をＨＰ−２０
カラムに吸着させた。８０％アセトンで溶離する画分を
集め、更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸
エチル／メタノール／水）行い、得られた活性画分を逆
相ＨＰＬＣ（センシュウパックＶＰ−３０４−３２５
１、８ｍｍｘ２５０ｍｍ）により精製した。このように
してえられた物質について、ヨードリチウムによる加水
分解或いは酵素（ホラ貝グリコシダーゼ混合物）による
加水分解を施し、分解物を得た。これらの分解物につい
てSIマススペクトル、¹Ｈ−、¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル
を測定し、オレアノール酸をアグリコンとし、２８位に
グルコースを、３位にグルクロン酸、アラビノース、Ｘ
を含む３種で構成される糖鎖を有するサポニンであるこ
とが判明した。さらにＸを明らかにするために、分解前
の化合物のネガティブモードＦＡＢマススペクトルを測
定し、その分子イオンピークとフラグメントのパターン
より３位の糖鎖を構成する糖の種類とその結合順序を以
下のように決定した。本物質は、今迄に報告のない新規
なサポニンであり千日紅の学名からゴンフレノシドと命
名した。ホラ貝グリコシダーゼによる加水分解で得られ
る分解物（３位の糖鎖が切断されたもの）の¹Ｈ−ＮＭ
Ｒと¹³Ｃ−ＮＭＲ、分解前の化合物の¹³Ｃ−ＮＭＲ、ネ
ガティブモードＦＡＢマススペクトルデータを以下に示
した。

【００４２】酵素分解物¹ H-NMR (C₅D₅N): δ 6.15(1H, d, J=8.0Hz), 5.65(1H,
br), 5.25(1H, s), 4.26(1H, dd, J=2.2Hz, 11.8Hz),
4.12〜4.24(2H, m), 4.08(1H, t-like dd, J=8.8Hz, 9.
7Hz), 4.00(1H, t-like dd, J=8.7Hz, 8.8Hz), 3.82(1
H, m), 3.22(1H,m), 3.00(1H, dd, J=4.0Hz, 13.8Hz),
2.10〜2.20(1H, m), 1.82〜2.00(2H, m),1.67〜1.80(3
H, m), 1.40〜1.66(6H, m), 1.22〜1.36(3H, m), 1.06
〜1.20(3H,m), 1.02(3H, s), 1.01(3H, s), 0.92(3H,
s), 0.81(3H, s), 0.70(3H, s), 0.69(3H, s), 0.67(3
H, s).¹³ C-NMR (C₅D₅N): δ 176.7s, 144.4s, 123.2d, 96.01
d, 79.58d, 79.15d, 78.32d, 74.37d, 71.33d, 62.42t,
56.05d, 48.39d, 47.25s, 46.46d, 42.38s, 42.00d, 4
0.17s, 39.60s, 39.22t, 37.60s, 34.23t, 33.36q, 33.
35t, 32.77t, 31.01s, 29.01q, 28.50t, 28.34t, 26.33
q, 24.06t, 23.89q, 23.67t, 19.05t, 17.75q, 16.77q,
15.87q.

【００４３】分解前の化合物¹³ C-NMR（C₅D₅N-D₂O):δ13.52(C-25), 14.78(C-24), 1
6.73(C-26), 17.74(rha-6), 17.81(C-6), 23.03(C-11),
22.65(C-16), 22.93(C-30), 25.36(C-27), 25.65(C-
2), 27.08(C-23), 27.51(C-15), 30.03 (C-20), 31.78
(C-22), 32.38(C-7), 32.43(C-29), 33.23(C-21), 36.1
2(C-10), 37.96(C-1), 38.87(C-4), 39.12(C-8), 41.01
(C-18), 41.34(C-14), 45.52(C-19), 46.37(C-17), 47.
24(C-9), 55.13(C-5), 61.28(glc-6), 66.15(xyl-5), 6
9.21(xyl-4), 70.16(glcA-5), 70.34(glcA-4), 71.41(g
lc-4), 71.56(rha-2), 71.69(rha-3), 73.10(rha-4), 7
3.13(glc-2), 74.79(xyl-2), 75.53^*(rha-5), 77.10^*(g
lcA-2), 77.66(xyl-3), 78.32^{* *}(glc-3), 78.38^**(glc-
5), 82.99(glcA-3), 89.39(C-3), 94.96(glc-1), 102.0
(rha-1), 103.6(xyl-1), 104.1(glcA-1), 122.2(C-12),
143.4(C-13), 174.5s(glcA-6), 176.2s(C-28). MS (FAB-MS) m/z=1071 (M-H)^-. MS (HRFAB-MS) m/z=1071.5390 (1071.5377 ; 計算値).

【００４４】

【化１４】

【００４５】〔式中、GlcAはグルクロン酸、Rhaはラム
ノース、Xylはキシロースの糖残基を表す。〕

【００４６】試験例１．ヘリコバクター・ピロリに対す
る抗菌活性の測定 （方法） ヘリコバクター・ピロリの培養 ＡＴＣＣ４３５７９，ＡＴＣＣ４３６２９，ＡＴＣＣ４
３５２６の３種の株を各々ブルセラ寒天培地上に（Difc
o社製ブルセラブロス２８g／リットルに、馬血清を７
％、寒天１.５％を添加したもの）植え付け、カンピロ
パック（ダイアヤトロン製）を用いて４８時間、３７度
で嫌気培養する。

【００４７】抗菌試験 得られた培養菌体を適量取り、生理食塩水に懸濁し、バ
クテリアカウンターで定量する。菌の濃度が３ｘ１０⁷
／ｍｌとなるように調製する。９６ウエルＵ字底プレー
トに、牛胎仔血清を５％添加したミューラーヒントン培
地（Difco社製ミューラーヒントンブロス２１gを１リッ
トルの水に溶かしオートクレーブ滅菌したもの）でサン
プルの希釈列を作る。サンプルの希釈液１００μlに対
し５μlのヘリコバクター・ピロリ菌液を加え、嫌気性
下、３７度４８時間培養する。陽性コントロールとして
エリスロマイシンを用いる。結果の判定は、肉眼による
菌の生育観察および吸光度（６３０nm）の測定で行う。

【００４８】大腸菌の培養 大腸菌（E.coli ＡＴＣＣ２５９２２）は、LB寒天培地
（食塩0.5％、バクトトリプトン1％、バクトイーストエ
キストラクト0.5％、寒天1.5％）上にまき３７度１８時
間培養する。これを生理食塩水で、菌の濃度が３ｘ１０
⁷／ｍｌとなるように調製する。この菌液をミューラー
ヒントン培地を用いた９６ウエルプレートでの抗菌試験
に用いる。３７度で１８時間培養した後に結果の判定を
行う。陽性コントロール薬剤として硫酸カナマイシンを
用いた。

【００４９】黄色ブドウ球菌の培養 黄色ブドウ球菌（S.aureus ＡＴＣＣ２５９２３）は、
TGY培地（Difco社製バクトトリプトン0.5％、酵母エキ
ス0.5％、グルコース 0.1％、ＫＨ₂ＰＯ₄ ０．１％，
寒天 ２．０％）で３７度１８時間培養後、生理食塩水
に３ｘ１０⁷／ｍｌとなるように懸濁する。これを菌液
として大腸菌の場合と同様にして抗菌試験に用いる。陽
性コントロール薬剤としては、エリスロマイシンを用い
た。 糸状菌の培養 糸状菌A.terreus ＩＦＯ６３６５をＰＳＡ培地（ジャガ
イモ２００グラムの煮出し汁、シュクロース２０グラ
ム、寒天２０グラムを１リットルの蒸留水に溶かし、オ
ートクレーブ滅菌したもの。pH６．０）で培養した後、
生理食塩水で２．４X１０⁷〜３X１０⁷／mlに調製する。
これを菌液とし、ミューラーヒントン培地を用いた９６
ウエルプレートでの抗菌試験を行い２８度４８時間培養
後に生育の有無を判定した。陽性コントロール薬剤とし
ては、ナイスタチンを用いた。

【００５０】（試験結果）本発明のサポニン類と各種陽
性コントロールの薬剤のＭＩＣ（最小生育阻止濃度）を
表１に示す。

【００５１】

【表１】 表１．抗菌活性試験結果 ────────────────────────────────── ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ） H.pyroli E.coli S.aureus A.terreus ATCC 43579 43629 43526 25922 25923 IFO6365 ──────────────────────────────────コ゛ンフレノシト゛ 6.25 6.25 12.5 ＞100 ＞100 ＞100チクセツサホ゜ニン IVa 12.5 6.25 12.5 ＞100 ＞100 ＞100フサンコ゛シト゛ B 12.5 25 6.25 ＞100 ＞100 ＞100フサンコ゛シト゛ C 50 25 6.25 ＞100 ＞100 ＞100フサンコ゛シト゛ D 6.25 0.39 6.25 ＞100 ＞100 ＞100ムクロシ゛サホ゜ニン X ＞100 12.5 50 ＞100 50 ＞100サイコサホ゜ニン A 12.5 12.5 100 ＞100 ＞100 ＞100サイコサホ゜ニン D 50 25 25 ＞100 ＞100 ＞100 Cp-4 12.5 12.5 12.5 ＞100 ＞100 ＞100 Cp-6 25 50 12.5 ＞100 ＞100 ＞100ツヘ゛イモシト゛ー 3 50 12.5 25 ＞100 ＞100 ＞100 ──────────────────────────────────エリスロマイシン 0.1 0.1 0.1 ー 0.4 ーカナマイシン ー ー ー 6.25 ー ーナイスタチン ー ー ー ー ー 6.25 ────────────────────────────────── 表１より、本発明の化合物は、ヘリコバクター・ピロリ
に対して特異的に抗菌活性を示すことが明らかである。

【００５２】

【発明の効果】本発明のサポニン類は、ヘリコバクター
・ピロリに代表されるヘリコバクター属の菌に対し選択
的に抗菌活性を示すことより、長期連続投与による副作
用を示すこと無くヘリコバクター・ピロリの除菌を行う
ことが出来る。従って、ヘリコバクター属の菌に起因す
る十二指腸潰瘍、胃潰瘍、慢性胃炎等の各種の疾患の予
防、治療または再発防止のための薬剤としての用途を有
する。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の一般式（Ｉ） 【化１】 ［式中、R¹は、糖残基を表し、R²は水素原子または水酸
   基を表し、R³はメチル基またはヒドロキシメチル基を表
   し、R⁴は一般式（ＩＩ） 【化２】 または、一般式（ＩＩＩ） 【化３】 （R⁵は水素原子または糖残基を表し、R⁶は水素原子また
   は水酸基を表し、R⁷とR⁸は独立に水素原子または水酸基
   を表すが、同時に水酸基を表すことはない。）を表す。
   なお、R¹とR⁵が糖残基であるときは、各々の糖残基が３
   −ヒドロキシメチル−３−メチル−１，５−ペンタジオ
   イル基を介して結合していてもよい。］で示されるサポ
   ニン類を有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤。
2. 【請求項２】 一般式（Ｉ）におけるR¹と一般式（Ｉ
   Ｉ）におけるR⁵の糖残基が、グルコース、キシロース、
   グルクロン酸、アラビノース、リボース、ラムノースよ
   り選ばれる単糖類または、それらの同一または異なって
   もよい２乃至は３個が結合してなる多糖類から成る糖残
   基の群より選ばれたものである、請求項１に記載の抗ヘ
   リコバクター・ピロリ剤。
3. 【請求項３】 式（ＩＶ） 【化４】 （式中、GlcAはグルクロン酸、Rhaはラムノース、Xylは
   キシロースの糖残基を表す。）で表されるゴンフレノシ
   ド。