JPH10511116A

JPH10511116A - ヘリコバクター・ピロリの新規膜タンパク

Info

Publication number: JPH10511116A
Application number: JP9514037A
Authority: JP
Inventors: リソロ，ラン
Original assignee: パストゥール・メリュー・セロム・エ・ヴァクサン
Priority date: 1995-10-04
Filing date: 1996-10-04
Publication date: 1998-10-27
Also published as: HUP9900498A3; CN1173877A; NZ319640A; NO972532D0; WO1997012909A1; AU724013B2; NO972532L; FR2739622B1; FR2739622A1; AU7220396A; CA2206797A1; HUP9900498A2; EP0793676A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈelicobacter pylori）の膜フラクションから得ることができ、ＳＤＳの存在下で１０％ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動後の分子量が約５４kＤa、５０kＤa、３２〜３５kＤaまたは３０kＤaである、実質的に精製された形態のヘリコバクター・ピロリ（Ｈelicobacter pylori）のタンパクに関する。

Description

【発明の詳細な説明】ヘリコバクター・ピロリの新規膜タンパク本発明の目的は、実質的に精製された形態で新しく得られたヘリコバクター・ピロリ（Ｈelicobacter pylori）タンパク、および該タンパクを含有する医薬組成物である。ヘリコバクター（Ｈelicobacter）は、グラム陰性螺旋状細菌によって特徴付けられる細菌の属である。いくつかの種は、哺乳動物の胃腸管に集落形成する。特に、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）、ヘリコバクター・ヘイルマニイ（Ｈ．heilmanii）、ヘリコバクター・フェリス（Ｈ．felis）およびヘリコバクター・ムステレ（Ｈ．mustelae）が挙げられる。ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ． pylori）は、最も一般的にヒト感染に関連している種であり、いくつかの一般の認める稀なケースでは、ヒトにおいてヘリコバクター・ヘイルマニイ（Ｈ．heil manii）およびヘリコバクター・フェリス（Ｈ．felis）を単離することもできた。ヘリコバクター（Ｈelicobacter）は、先進諸国における成人の人口の５０％よりも多くに、および、発展途上国の成人の人口のほぼ１００％に感染し、これにより、世界的に有力な感染病原体の１つとなった。ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）は、ある程度まで独占的にヒトにおける胃の粘膜の表面に、さらに詳しくは、胃潰瘍および十二指腸潰瘍のクレーター病変の周囲に見られる。この細菌は、現在、幽門洞胃炎（antral gastritis）の病因として認識されており、潰瘍の発生に必要とされるコファクターの１つと思われている。さらにまた、胃癌の発生がヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）の存在と関連していると思われている。したがって、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）感染を予防または治療しようとするワクチンの開発が非常に望まれている。かかるワクチンは、ほとんどサブユニット性質のものである。種々のヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）タンパクは、ある程度までは特徴付けられているかまたは単離されている。該タンパクは、特に、各々３０kＤa および６７kＤaの２つのサブユニットＡおよびＢからなるウレアーゼ（Hu & Mob ley，Infect．Immun．(1990)58：992；Dunn et al.，J．Biol．Chem．(1990)265 : 9464; Evans et al.，Microbial Pathogenesis（1991）10: 15; Labigne et a l.，J．Bact，(1991)173: 1920）；８７kＤaの液胞細胞毒素（ＶacＡ）（Cover & Blaster，J．Biol．Chem．(1992)267: 10570; Phadnis et al.，Infect．Immu n．(1994)62: 1557; WO 93/18150）；該細胞毒素に関連する１２８kＤaの免疫優性抗原（ＣagＡ、ＴagＡとも称される）（WO 93/18150; USP 5 403 924）；各々１３kＤaおよび５８kＤaの熱ショックタンパクＨspＡおよびＨspＢ（Suerbaum e t al.，Mol．Microbiol．(1994)14: 595; WO 93/18150）；５４kＤaのカタラーゼ（Hazell et al.，J．Gen．Microbiol．(1991)137：57）；２０kＤaの原線維性赤血球凝集素（ＨpaＡ）；１５kＤaのヒスチジンに富んでいるタンパク（Ｈpn ）（Gilbert et al.，Infect．Immun．(1995)63：2682）；３０kＤ kＤaの膜関連リポタンパク（Kostrcynska et al.，J．Bact．(1994)176: 5938）ならびに４８〜６７kＤaの分子量のポーリンＨopＡ、ＨopＢ、ＨopＣおよびＨop Ｄのファミリー（Exner et al.，Infect．Immun．(1995)63：1567）である。これのタンパクのいくつかは、既に、有効なワクチン抗原として提案されている。特に、ウレアーゼは、この目的のために用いることができる最も好ましい抗原であると認識されている（WO 94/9823; WO 95/3824; WO 95/22987; Michetti et al.，Gastroenterology（1994）107：1002）。特に、最適なワクチン効果を得るためには、いくつかの抗原をワクチンに取り込まなければならないであろうと考えられるので、依然として、新しい抗原についての調査を続ける必要がある。概して、別の抗原を高い効力のワクチンに取り込むためには、依然としてこの別の抗原の同定が必要とされているのは明らかである。したがって、本発明の課題は、特に、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）膜フラクションから得ることができる実質的に精製された形態のヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）タンパクであり、ＳＤＳの存在下で１０％ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動後の該タンパクの分子量は、約５４kＤa、５０kＤa、３２〜３５kＤaまたは３０kＤaであると思われる。該タンパクが約５４kＤaの分子量を有する場合、さらに、抗カタラーゼ抗血清と反応しないと明記される。抗ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）カタラーゼ抗血清は、特に、実施例６に記載するようにクロマトグラフィーによって得られるカタラーゼ調製物を用いて、下記実施例５に記載する免疫化工程に従って調製されてよい。「実質的に精製された形態」とは、タンパクが自然に存在する環境から分離されていることを意味すると解される。特にヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori ）細胞質タンパクおよび周縁細胞質タンパクを欠いている調製物であってもよい。見かけの分子量が約５４kＤaである当該膜タンパクは、以下の工程によって得ることができる：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７ .５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質（好都合には、５％ツィッタージェント（zwittergent）３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）に懸濁させ；（ｖ）該膜フラクションを、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）を用いてＱ−セファロース（Sepharose）カラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し、次いで、１ＭＮaＣl（好都合には、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）で洗浄し；（vi）１ＭＮaＣlによる洗浄の初めに溶出したフラクションを回収し、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有するＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）中）を用いてＤＥＡＥ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し（好都合には、１ＭＮaＣl におけるフラクションを、まず、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有するＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）に対して透析する）；（vii）０.１〜０.２５ＭＮaＣlで溶出したフラクションを回収する。見かけの分子量が約５０kＤaである当該膜タンパクは、以下の工程によって得ることができる：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７ .５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質（好都合には、５％ツィッタージェント３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）に懸濁させ；（ｖ）該膜フラクションを、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）を用いてＱ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し、次いで、１ＭＮaＣl（好都合には、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）で洗浄し；（vi）１ＭＮaＣlによる洗浄の初めに溶出したフラクションを回収し、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、０.１％ツィッタージェント３-１４を含有するＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）中）を用いてＤＥＡＥ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し（好都合には、１ＭＮaＣl におけるフラクションを、まず、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有するＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）に対して透析する）；（vii）０.３〜０.４ＭＮaＣlで溶出したフラクションを回収する。見かけの分子量が約３０kＤaである当該膜タンパクは、以下の工程によって得ることができる：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris-ＨＣlバッファー（pＨ７. ５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質（好都合には、５％ツィッタージェント３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）に懸濁させ；（ｖ）該膜フラクションを、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有する炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）を用いてＱ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し；（vi）０.２８〜０.３５ＭＮaＣlで溶出したフラクションを回収し、０〜０. ５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有するＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）中）を用いてＤＥＡＥ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し（好都合には、１ＭＮaＣlにおけるフラクションを、まず、０.１％ツィッタージェント３−１４を含有するＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）に対して透析する）；（vii）直接溶出液に対応するフラクションを回収する（ＮaＣlの不在）。見かけの分子量が約３２〜３５kＤaである当該膜タンパクは、以下の工程によって得ることができる：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７ . ５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質（好都合には、炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）に懸濁させ；（ｖ）（iv）で得た懸濁液を約２００,０００ｘｇで遠心分離にかけ、上清を回収し；（vi）（ｖ）で得た上清のpＨを、好都合には、リン酸塩緩衝液（pＨ７）に対して透析することにより、約pＨ７に低下させ；（vii）（vi）で得た調製物を、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、リン酸塩緩衝液（pＨ７）中）を用いてＳＰ−セファロースカラム上で陽イオン交換クロマトグラフィーに付し；次いで、（vii）０.２５〜０.３１ＭＮaＣlにおいて溶出したフラクションを回収する。本発明の５４kＤa、５０kＤa、３２kＤaおよび３０kＤaタンパクは、おそらく、内在膜タンパクまたは膜に関連するタンパクである。５４kＤaタンパクは、抗カタラーゼ抗体と反応せず、ウェスタンブロット法においても、ドットブロット法においても反応しない。３０kＤaタンパクは、抗ウレアーゼＡサブユニット抗体と反応せず、ウェスタンブロット法においても、ドットブロット法においても反応しない。３２kＤaタンパクは、アルカリ性タンパクであることを示す；その分子量は、ある実験条件下でわずかに大きい、例えば約３５kＤaであると思われる。ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）菌株（ＡＴＣＣ４３５７９）の５０k ＤaタンパクのＮ−末端配列は、以下のとおりである（一文字記号）：ＭＫＥＫＦＮＲＴＫＰＨＶＮＩＧＴＩＧＨＶＤＨ。この情報は、上記で示した方法に従って精製することができる等価なタンパクがわずかに異なるＮ−末端配列を有することができるという事実を排除しない。というのは、該タンパクが別の細菌株から誘導されるかもしれないからである。かかる差異は、実際には、同一種内で一般的に遭遇する対立遺伝子的変化（allelic variance）の現象を反映する。例えば、細菌種は、通常、マイナーな対立遺伝子的特徴においてお互いに異なる菌株のグループによって表される。種々の菌株において同一の生物学的機能を満たすポリペプチドは、全ての菌株について異ならないアミノ酸配列を有する。かかる対立遺伝子的変化は、ＤＮＡにも存在する。アミノ酸配列のレベルでの対立遺伝子的差異は、生物学的機能を変化させない、アミノ酸の１つ以上の置換、欠失または付加からなっている。「生物学的機能」とは、（たとえ該機能が絶対的に不可欠なものでなくても）該タンパクが自然に存在する細胞の生存に関係するタンパクの機能を意味すると解される。例えば、ポーリンの機能は、外部環境中に存在する化合物を細胞の内側に進入させることである。該生物学的機能は、抗原機能とは異なる。タンパクは、１つ以上の生物学的機能を有してもよい。本発明の課題は、ヘリコバクター（Ｈelicobacter）属の細菌、例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）、ヘリコバクター・ヘイルマニイ（Ｈ．heil manii）、ヘリコバクター・フェリス（Ｈ．felis）およびヘリコバクター・ムステレ（Ｈ．mustelae）から前記のプロセスの１つに従って精製されてもよい実質的に精製された形態のタンパクでもある。本発明の課題は、前記プロセスのうちの１つに従って精製することができるヘリコバクター（Ｈelicobacter）タンパクに抗原性により類似している範囲における、実質的に精製された形態のタンパクまたはポリペプチドでもある。ポリペプチドに関する場合、該ポリペプチドは、特に、自然に存在し、かつ、精製された形態が前記プロセスのうちの１つに従って得られてよいタンパクの、断片化によって、または、１つ以上のアミノ酸の突然変異によって、例えば、欠失、付加または置換によって、誘導されたポリペプチドである。かかるポリペプチドは、特に、ペプシンまたはトリプシンなどのプロテアーゼによる酵素的消化によって得られてよい。かかるポリペプチドは、前記プロセスのうちの１つに従って精製される必要がない。本明細書では、分子のサイズ（アミノ酸鎖の長さ）および起こりうる翻訳後修飾とは無関係に「タンパク」および「ポリペプチド」なる用語を用いる。該明細書では、以下、「ポリペプチド」なる用語は、断片化または突然変異によりタンパクから誘導された生成物を表す。本発明のタンパクまたはポリペプチドは、前記プロセスに従って精製することができるヘリコバクター（Ｈelicobacter）タンパクに対して生じた単一特異性抗体によって認識することができる。この特異的抗原性は、多くの方法に従って明らかにされる；例えば、ウェスタンブロット法（Towbin et al.，PNAS（1979 ）76: 4350）、ドットブロット法およびＥＬＩＳＡ。ウェスタンブロット法では、例えば精製された調製物の形態または細菌抽出物の形態のいずれかの、試験しようとする生成物を、Laemmli U．K.，Nature（197 90）227: 680に開示されているようなＳＤＳ−Ｐageゲル電気泳動（１０％ポリアクリルアミド）に付す。ニトロセルロース膜での移動後、細菌抽出物の形態の生成物を、１：５０〜１：５０００、好ましくは１：１００〜１：５００の希釈範囲で希釈された単一特異性高度免疫血清と一緒にインキュベートする。試験生成物に対応するバンドが前記で確立された範囲に含まれる希釈液の１つで反応性を示すとすぐに特異的抗原性が示される。ＥＬＩＳＡでは、試験しようとする生成物は、好ましくはウエルを被覆するために用いられる。好ましくは、精製された調製物が用いられるが、全抽出物を用いることもできる。すなわち、１０μg／mlのタンパクを含有する調製物１００ μlを９６ウエルプレートのウエルに分配する。該プレートを３７℃で２時間、次いで、４℃で一晩インキュベートする。該プレートを、０.０５％Ｔween ２０を含有するＰＢＳ（リン酸塩緩衝化生理食塩水）バッファー（ＰＢＳ／Ｔweenバッファー）で洗浄する。該ウエルを、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ２５０μlで飽和させる。全体を３７℃で１時間インキュベートし、次いで、該プレートをＰＢＳ／Ｔweenバッファーで洗浄する。単一特異性ウサギ抗血清を、０.５％ＢＳＡを含有するＰＢＳ／Ｔweenバッファー中で連続希釈する。希釈液１００μlを各ウエルに添加する。該プレートを３７℃で９０分間インキュベートし、次いで、洗浄する。該プレートを標準的な方法に従って可視化する。例えば、ウサギイムノグロブリンに対するコンジュゲートペルオキシダーゼ−ヤギイムノグロブリンをウエルに添加する。インキュベーションを３７℃で９０分間続け、次いで、該プレートを洗浄する。適切な基質との反応を発生させる。該反応を比色定量分析によって測定する（分光分析法によって測定した吸光度）。これらの条件下、ＯＤ値１が少なくとも１：５０、好ましくは少なくとも１：５００の希釈液に関連する場合に正の反応が観察される。光学密度を測定する適切な波長は、基質に依存する。ドットブロット法では、好ましくは、試験しようとする生成物の精製された調製物を用いるが、全抽出物を用いることもできる。すなわち、１００μg／mlのタンパクを含有する試験しようとするタンパクの調製物を５０mＭＴris−ＨＣl （pＨ７.５）中で２回連続希釈する。各希釈液１００μlを９６ウエルドットブロット装置［バイオラド（Ｂiorad）］において０.４５μmのニトロセルロース膜に適用する。真空下に放置して、バッファーを除去する。５０mＭＴris−ＨＣl（pＨ７.５）の添加によりウエルを洗浄し、膜を風乾させる。該膜をブロッキングバッファー（５０mＭＴris−ＨＣl（pＨ７.５）、０.１５ＭＮaＣl、１０g／lスキムミルク）で飽和させ、次いで、１：５０〜１：５０００、好ましくは１：５０〜１：５００の範囲で希釈した単一特異性抗血清と一緒にインキュベートする。該反応を標準的な方法に従って可視化する。例えば、ウサギイムノグロブリンに対するコンジュゲートペルオキシダーゼ−ヤギイムノグロブリンをウエルに添加する。インキュベーションを３７℃で９０分間続け、次いで、該プレートを洗浄する。適切な基質との反応を発生させる。該反応を比色定量分析またはケミルミネッセンスによって測定する。これらの条件下、少なくとも１：５０、好ましくは少なくとも１：５００の希釈液に関連して、比色定量分析による可視化については直接的にニトロセルロースシート上での、またはケミルミネッセンスによる可視化については写真フィルム上での、スポットのレベルで色が観察されると、反応は正である。特定の具体例によると、本発明のタンパクは、特に、ヘリコバクター（Ｈelic aobacter）からの精製によって得られるか、または、異種系における組換えルートにより発現される（本発明のポリペプチドについての場合でもある）。発現された場合、タンパクは、最初の菌株から誘導される対応するタンパクのものと同一ではない翻訳後修飾を示す。本発明のタンパクまたはポリペプチドの治療効果または予防効果は、標準的な方法に従って、例えば、マウス／ヘリコバクター・フェリス（Ｈ．felis）モデルなどを用いて粘膜免疫応答の誘発または治療効果または防御効果を有する免疫応答の誘発を測定することによって、ならびに、以下の注意［該タンパクがヘリコバクター・フェリス（Ｈ．felis）以外の種から誘導される場合、ヘリコバクター・フェリス（Ｈ．felis）菌株の代わりに、該タンパクが誘導され、このために適する種に属するヘリコバクター（Ｈelicaobacter）菌株を用いるべきである］をするという条件で（他の実験条件は、同一のままである）Lee e tal.，Eu r．J．Gastroenterology & Hepatology，(1995)，7：303またはLee et al.，J． Infect．Dis．(1995)172: 161に開示されている方法によって評価される。例えば、防御効果または治療効果を誘発するためのヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．py lori）タンパクから断片化により誘導されるポリペプチドの能力は、代わりにヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）菌株を用いることによって試験される。かかる菌株は、例えば、Kleanthous et al.，Abstr．presented at the VIIIth In ternational Workshop on Gastroduodenal Pathology 7-9th July 1995，Edinbu rgh，Scotlandによって提案されている。防御効果は、胃組織における感染が対照グループと比較して減少すると観察される。感染は、ウレアーゼ活性、細菌負荷または白血球浸潤を試験することによって評価される。例えば、攻撃誘発の後に胃組織におけるウレアーゼ活性の減少が見られる場合、それが完全に破壊されなくても、部分的な防御があると評価するのは道理に基づいている。したがって、本発明は、（ｉ）本発明のタンパクまたはポリペプチドおよび希釈剤または担体からなる組成物；特に（ii）活性成分としての予防的または治療的観点から有効な量のタンパクまたはポリペプチドからなる、特にヘリコバクター（Ｈelicobacter）感染の予防用または治療用の医薬組成物；（iii）治療剤または予防剤としての本発明のタンパクまたはポリペプチドの使用；（iv）ヘリコバクター（Ｈelicobacter）感染の予防薬または治療薬の調製のための本発明のタンパクまたはポリペプチドの使用；ならびに（ｖ）免疫応答を生じさせるように本発明のタンパクまたはポリペプチドの免疫学的に有効な量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物におけるヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori ）、ヘリコバクター・ヘイルマニイ（Ｈ．heilmanii）、ヘリコバクター・フェリス（Ｈ．felis）およびヘリコバクター・ムステレ（Ｈ．mustelae）などのヘリコバクター（Ｈelicobacter）に対する免疫応答を誘発するための方法；特に（vi ）予防的または治療的に有効な量の本発明のタンパクまたはポリペプチドを個体に投与することからなるヘリコバクター（Ｈelicobacter）感染の予防方法または治療方法にも関する。本発明の方法および医薬組成物は、ヘリコバクター（Ｈelicobacter）感染、したがって、かかる感染に関連する胃腸疾患を治療または予防することができる。該胃腸疾患は、特に、慢性および萎縮性急性胃炎；消化性潰瘍、例えば、胃潰瘍および十二指腸潰瘍；胃癌；慢性消化不良；難治性非潰瘍性消化不良；腸上皮化生ならびにある種のリンパ腫（例えば、低級ＭＡＬＴリンパ腫）である。本発明の組成物は、ワクチンの技術分野で使用される、特に、粘膜（例えば、眼球、鼻、口、胃、腸、直腸、膣または尿道）表面を介する慣用的な経路によって、または、非経口（例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内または腹腔内）経路によって投与されてもよい。投与経路の選択は、本発明のタンパクまたはポリペプチドに関連するアジュバントなどの多くのパラメーターに依存する。例えば、粘膜アジュバントを用いる場合、鼻経路または口経路が好ましい。脂質製剤を用いる場合、非経口経路、好ましくは皮下経路または筋肉内経路が選択される。本発明の組成物は、本発明のタンパクまたはポリペプチドに加えて少なくとも１つの、ウレアーゼアポ酵素、またはこのウレアーゼのサブユニット、フラグメント、同族体、突然変異体もしくは誘導体などの他のヘリコバクター（Ｈelicobacter）抗原からなってもよい。本発明の組成物の使用については、本発明のタンパクまたはポリペプチドは、タンパクまたはポリペプチドの標的化を促進するかまたは免疫応答を増強するように、リポソーム、好ましくは、中性もしくは陰イオンリポソーム、マイクロスフェア、ＩＳＣＯＭＳまたはウイルス様粒子（ＶＬＰ）中でまたはこれを用いて製剤化されてもよい。当業者は、困難なくこれらの化合物を得る；例えば、Lipo somes: A Practical Approach，RRC New ED，IRL press（1990）を参照。リポソーム以外のアジュバントを用いてもよい。多くは、当業者に知られている。かかるアジュバントを以下に挙げる：非経口投与については、特に、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムおよびヒドロキシリン酸アルミニウムなどのアルミニウム化合物が挙げられる。抗原は、標準的な方法によりアルミニウム化合物上に吸着されるかまたは沈殿する。非経口投与のためにはイムノケム（ImmunoＣhem）（マサチューセッツ州ハミルトン）からのＲＩＢＩなどの他のアジュバントを用いてもよい。粘膜投与については、特に、細菌毒素、例えば、コレラ毒素（ＣＴ）、耐熱性イー・コリ（Ｅ．coli）毒素（ＬＴ）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃlo stridium diffcile）毒素および百日咳毒素（ＰＴ）ならびにこれらの毒素の無毒化形態（サブユニット、トキソイドまたは突然変異体）が挙げられる。例えば、ＣＴのＢサブユニット（ＣＴＢ）および少量のＣＴを含有する調製物を用いてもよい。これらの毒素のフラグメント、同族体および誘導体も、アジュバント活性を保持する限り、同様に適切である。好ましくは、低下した毒性を有する突然変異体が用いられる。かかる突然変異体は、例えば、WO 95/17211（Ａrg−７− Ｌys ＣＴ突然変異体）、WO 95/34323（Ａrg−９−Ｌys Ｇlu−１２９−Ｇly ＰＴ突然変異体）およびWO 96/6627（Ａrg−１９２−Ｇly ＬＴ突然変異体）に開示されている。イー・コリ（Ｅ．coli）、サルモネラ・ミネソタ（Ｓalmonella minnesota）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓalmonella typhimurium）またはシゲラ・フレクスネリ（Ｓhigella flexneri）などの主要細菌リポ多糖（ＭＰＬＡ）のような他のアジュバントを粘膜投与のために用いてもよい。粘膜投与および非経口投与の両方に有用なアジュバントとしては、特に、ポリホスファジン（WO 95/2415）、ＤＣ−chol（３−ベーター［Ｎ−(Ｎ',Ｎ'−ジメチルアミノメタン)カルバモイル］コレステロール（USP 5 283 185およびWO 96/ 14831）およびＱＳ−２１（WO 88/9336）が挙げられる。投与は、単投与として、または、ある期間の後に１回または数回繰り返される投与として行われてもよい。適切な投与量は、例えば、当業者が決定することができるような、処置される個体（成人または子供）、ワクチン抗原自体、投与モードおよび回数、アジュバントの存在または不在およびアジュバントが存在する場合のアジュバントのタイプならびに所望の効果（例えば、防御または治療）などの種々のパラメーターに従って変化する。一般に、本発明の抗原は、１０μg 〜５００mg、好ましくは１mg〜２００mgの範囲の量で投与されてもよい。特に、非経口投与は、１mgを超えるべきではなく、好ましくは１００μgを超えるべきではないことが示される。高投与量は、例えば経口用に処方されてもよい。製剤とは無関係に、経口経路によりヒトに投与されるタンパクの量は、例えば、投与当たり約１〜１０mgであり、４週間おきに少なくとも３回の投与が推奨される。本発明の組成物は、慣用的な方法で調製されてもよい。特に、本発明のタンパクまたはポリペプチドは、医薬的に許容される希釈剤または担体、例えば、水またはリン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）などの生理食塩水と合わせられ、所望により、例えば組成物を経口投与または胃内投与しようとする場合には０.１〜０.５Ｍの、重炭酸ナトリウムなどの重炭酸塩を補足してもよい。一般に、希釈剤または担体は、投与のモードおよび経路ならびに標準的な製薬プラクティスに基づいて選択される。医薬的に許容され、医薬製剤における使用に必要である希釈剤および担体は、Remington's Pharmaceutical Sciences、当該技術分野における標準的な参考テキストおよびＵＳＰ／ＮＰに開示されている。より詳細な方法では、例えば、経口経路により本発明のタンパクまたはポリペプチドを投与することが提案される。このために、本発明のタンパクまたはポリペプチドは、胃液による分解から抗原を保護するために、ゼラチンカプセル中に単独でまたは他のヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）タンパクの存在下で被包化されるか、または、重炭酸ナトリウムの存在下で投与されてもよい。かかる製剤は、既に、医薬組成物のために用いられている（Black et al.，Dev．Biol ．Stand．(1983)，53: 9）。該タンパクは、他の文献に開示されている方法に従ってＰＬＧＡマイクロスフェア（グリコール酸および乳酸コポリマー）中に被包化されてもよい（Eldridge et al.，Curr．Top．Microbiol．Immuno.（1989）14 6: 59）;該タンパクは、広範に開示されている慣用的な方法に従って製造されたリポソーム中に被包化されてもよい（Liposomes: a practical approach，Ed．RRC New，D．Rickwood & B．D．Hames，1990，Oxford University Press，ISBN 0-1 9-963077-1）。別法としては、本発明のタンパクまたはポリペプチドは、非経口経路によって投与されてもよい。これを行うために、本発明のタンパクまたはポリペプチドは、完全に慣用的な手段でアルミニウムゲル上に吸着される。pＨが６.５付近であるバッファー中、１mg／mlの溶液のタンパクを、ＡＬ⁺⁺⁺で測定した１０mg／ml の水酸化アルミニウムと１時間接触させる。該調製物の最終組成は、以下のとおりである：ＰＢＳ中、タンパク５０μg／ml、ＡＬ⁺⁺⁺２５０μg／ml、メルチオレート（merthiolate）１／１０,０００。経口投与の場合、先の投与から４週間おきに３回注射するのが推奨される。本発明のポリペプチドは、診断薬としても、例えば、血液試料などの生物学的試料中の抗ヘリコバクター抗体の存在を検出するためにも有用である。このために、かかるポリペプチドは、好都合には、５〜８０個のアミノ酸、好ましくは、１０〜５０個のアミノ酸からなっている。本発明のポリペプチド試薬は、用いられる診断方法に従って、標識化されていてもいなくてもよい。診断方法は、本明細書の最初の方に記載している。他の態様によると、本発明は、本発明のタンパクまたはポリペプチドを認識することができる単一特異性抗体を提供するものである。「単一特異性抗体」とは、単一のヘリコバクター（Ｈelicobacter）タンパクと優先的に反応することができる抗体を意味すると解される。かかる抗体は、免疫原として実質的に精製されたタンパクを用いて得ることができるのみである。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい；モノクローナル抗体は、キメラ的（例えば、ヒト定常部に関連するネズミ起源の可変部からなる）であるか、または人体に適応させる（超可変部だけは、動物起源のもの、例えばネズミ起源のものである）および／または単一鎖である。ポリクローナル抗体は、モノクローナル抗体と同様に、例えばＦ(ab)'２またはＦabフラグメントのような免疫グロブリンフラグメントの形態であってもよい。本発明の抗体は、例えばＩgＧまたはＩgＡなどのイソタイプのものであってもよい；ポリクローナル抗体は、単一のイソタイプのものまたはそれらの全てまたはいくつかの混合物であってもよい。以下、本明細書では、「単一特異性抗体」および「単一特異性抗血清」なる用語は、互換性をもって用いられる。本発明のタンパクに対して指向される抗体は、生産され、次いで、例えば、ウェスタンブロット法、ドットブロット法またはＥＬＩＳＡ分析法などの標準的な免疫学的アッセイを用いて同定される（例えば、Coligan et al.，Current Prot ocols in Immunology（1994）John Wiley & Sons Inc.，New York，NY; Antibod ies: A laboratory Manual，D．Lane，(1988)Harlow Ed.を参照）。本発明の抗体は、診断において、および、本発明のタンパクもしくはポリペプチドの大規模な精製のためのアフィニティークロマトグラフィーにおいて有用である；かかる抗体は、受動免疫法において治療薬として非常に有用でもある。したがって、本発明は、（ｉ）本発明の抗体またはポリペプチドからなる、生物学的試料におけるヘリコバクター（Ｈelicobacter）の存在を検出するための試薬；および（ii）生物学的試料を本発明の抗体またはポリペプチドと接触させて、免疫複合体を形成させ、所望により、未結合物質を除去し、試料と本発明の抗体またはポリペプチドとの間で形成された免疫複合体を、試料または試料が回収された器官におけるヘリコバクター（Ｈelicobacter）の存在のインジケーターとして検出する、生物学的試料におけるヘリコバクター（Ｈelicobacter）の存在を検出するための診断方法を提供するものである。容易に理解され得るように、本発明の抗体は、胃抽出物におけるヘリコバクター（Ｈelicobacter）の存在についての試験を可能にする。診断試験において用いるためには、試薬は、遊離形態で提供されるか、または、固体支持体上に固定化されていてもよい。該固体指示体は、管、ビーズまたはウエルなどの当該技術分野で一般的に用いられる支持体であってよい。固定化は、直接的手段または間接的手段によって得られる。直接的手段は、支持体と試薬との間の受動的吸着（非共有結合）または共有結合からなる。「間接的手段」とは、試薬と相互に関係することができる抗試薬化合物をまず固体支持体に結合させることを意味する。例えば、ポリペプチド試薬を用いる場合、該試薬を結合することができる抗体は、生物学的試料において存在する抗体の認識に関係しないポリペプチドのエピトープに結合することができることを条件として、抗試薬として用いられる。間接的手段は、リガンド−受容体系を介して、例えば、ビタミンなどの分子をポリペプチド試薬上に融合させ、次いで、固体形態で対応する受容体を固定化することによって、行われてもよい。これは、例えば、ビオチン−ストレプトアビジン系などによって説明される。別法としては、間接的手段は、例えば、化学的手段などによりペプチドテールを試薬に付加し、次いで、融合された生成物を受動的吸着またはペプチドテールの共有結合により固定化することによって用いられる。本発明は、生物学的試料を、本発明の単一特異性抗体を用いてアフィニティクロマトグラフィーに付すことを特徴とする、生物学的試料から本発明のタンパクまたはポリペプチドを精製するための方法にも関する。このためには、抗体は、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよく、好ましくは、ＩgＧタイプのものである。精製されたＩgＧは、一般的に用いられる方法に従って抗血清から調製される（例えば、Coligan et al. を参照）。抗体を融合させる標準的な方法と同様に、慣用的なクロマトグラフィー支持体は、例えば、Antibodies: A Laboratory Manual，D．Lane，Harlow Ed．(1988) に開示されている。すなわち、生物学的試料、好ましくは、バッファー溶液を、好ましくは生物学的試料の希釈に用いられるバッファーで平衡化されたクロマトグラフィー材料に適用して、本発明のタンパクまたはポリペプチド（抗原）を該材料に吸着させることができる。本発明の抗体に関連するゲルまたは樹脂などの該クロマトグラフィー材料は、浴またはカラムの形態で提供される。未結合のままの成分を洗浄によって除去し、次いで、該抗原を、例えばグリシンバッファーまたはグアニジン −ＨＣlなどのカオトロピック剤もしくは塩リッチ濃縮物（例えば、３ＭＭgＣl₂ ）を含有するバッファーなどの適切な溶離バッファー中で溶離する。溶出したフラクションを回収し、次いで、例えば２８０nmで吸光度を測定することによって、抗原の存在を検出する。かかる精製工程は、例えば、全抽出物からタンパクを精製するために用いてよい。しかしながら、抗体が完全には単一特異性でない場合、精製しようとするタンパクの量に関してイムノアフィニティクロマトグラフィーに付される物質を予め豊富化するのが望ましい。例えば、かかる工程は、ＳＰ−セファロース上での精製の工程からなる前記工程に従って得られるような３２kＤaタンパクの精製を行うために用いてよい。本発明の治療的または予防的有用性は、本発明のタンパクまたはポリペプチドについて前記で提案されたLee et al．による防御試験に従って示される。したがって、本発明の課題は、（ｉ）本発明の単一特異性抗体および希釈剤または担体からなる物質の組成物；特に、（ii）治療的または予防的観点から有効な量の本発明の単一特異性抗体からなる医薬組成物；（iii）ヘリコバクター（Ｈelico bacter）感染の治療薬または予防薬の調製における本発明の単一特異性抗体の使用；ならびに（iv）ヘリコバクター（Ｈelicobacter）感染（例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈelicobacter pylori）、ヘリコバクター・フェリス(Ｈelico bacter felis)、ヘリコバクター・ムステレ（Ｈelicobacter mustelae）またはヘリコバクター・ヘイルマニイ（Ｈelicobacter heilmanii））の治療または予防を必要とする個体に治療的または予防的に有効な量の本発明の抗体を投与することを特徴とする、ヘリコバクター（Ｈelicobacter）感染の治療方法または予防方法でもある。このためには、単一特異性抗体は、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよく、好ましくは（有力的には）、ＩgＡイソタイプのものである。受動的免疫化方法に関して、該抗体は、好都合には重炭酸塩バッファーの存在下、経口経路または胃内経路によって、粘膜経路によって、例えば、胃粘膜のレベルで、哺乳動物に投与される。本発明の単一特異性抗体は、単一の活性成分として、または、ヘリコバクター（Ｈelicobacter）ポリペプチドの各々に特異的な少なくとも１つの単一特異性抗体からなる混合物として投与されてよい。この方法で用いられるべき抗体の投与量は、当業者によって容易に決定され得る。例えば、投与量は、抗体１００〜１０００mgの日用量で１週間、または、投与量は、１日３回投与される抗体１００〜１０００mgからなる投与量で２〜３日間によって特徴付けられる。本発明の抗体からなる医薬組成物は、本発明のタンパクまたはポリペプチドからなる組成物について前記した規則に従って調製される。同様に、同一の医薬的指示が適用される。以下の図面を引用して以下に本発明を説明する：図１は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）膜フラクションＩ、IIおよび IIIの調製のための方法の概要を示す。図２は、１０％ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動に付し、クマシーブルーで染色することによる該膜フラクションＩ、IIおよびIIIの分析を示す。負荷した試料は、膜フラクションＩ（レーン２）、膜フラクションII（レーン３）、膜フラクションIII（レーン４）および分子量マーカー（レーン１）である。図３は、１０％ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動に付し、クマシーブルーで染色することによる分取用ゲルから精製したタンパクの分析を示す（レーン３〜７）。負荷した試料は、ＨpＰ１フラクション（レーン３）、ＨpＰ２フラクション（レーン４）、ＨpＰ４フラクション（レーン５）、ＨpＰ５フラクション（レーン６）、ＨpＰ６フラクション（レーン７）、分子量マーカー（レーン１および８）および膜フラクションＩ（レーン２）である。図４は、フラクション７および９（Ｑ−セファロース上での溶離の後に得られた）のＤＥＡＥ−セファロース上でパッセージから得たフラクションの分析を示す。該フラクションを１０％または１２.５％ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動により分離し、クマシーブルーで染色した。負荷した試料は、フラクション７（レーン２Ａ）、フラクション７.１（レーン３Ａ）、フラクション７.２（レーン４Ａ）、フラクション９（レーン２Ｂ）、フラクション９.１（レーン３Ｂ）、フラクション９.２（レーン４Ｂ）、フラクション９.３（レーン５Ｂ）および分子量マーカー（kＤa）（レーン１Ａおよび１Ｂ）である。図５は、１０％ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動に付し、クマシーブルーで染色した後の、膜フラクションIIIのＱ−セファロースカラム上でのクロマトグラフィーから得られたＤフラクションの電気泳動プロフィル（レーン３）およびフラクションＤのＡ−セファロースカラム上でのクロマトグラフィーから得られたフラクションＤ'の電気泳動プロフィル（レーン４）を示す。レーン１は、分子量マーカーに相当し、レーン２は、膜フラクションIIIに相当する。実施例１：膜フラクションの調製１Ａ − 培養１０リットルの発酵槽中、液体媒質中、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori ）菌株ＡＴＣＣ４３５７９を培養した。グリセロール中の微生物の冷凍試料を用いて、いわゆる「二相」培地（６％ヒツジ新鮮血液を含有するコロンビア寒天中の固相および２０％ウシ胎児血清を含有するダイズトリプカーゼ中の液相）を含有する７５cm²フラスコに接種した。微好気性条件下、２４時間の培養の後、この培養物の液相を用いて、ヒツジ血液の不在下の二相培地中、いくつかの７５cm²フラスコに接種した。２４時間の培養の後、液相を、１０g／リットルのベーターシクロデキストリンを含有する液体ダイズトリプカーゼ培地中、２リットルのバイオファーメンターに接種することができた。ＯＤ１.５−１.８のこの培養物を、液体培地中、１０リットルの発酵槽に接種した。２４時間の培養の後、４℃で３０分間、４０００ｘｇで遠心分離にかけて、細菌を収穫した。発酵槽中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylo ri）ＡＴＣＣ４３５７９の培養物１０リットルから細菌約２０〜３０g（湿重量）を得ることができた。１Ｂ − ｎ−オクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＧ）による抽出上記で得られた微生物のペレットを、培養物のリットル当たり、ＰＢＳ（リン酸塩緩衝化生理食塩水；リットル当たり、ＮaＣl ７.６５０g、リン酸二ナトリウム０.７２４g、リン酸一カリウム０.２１０g；pＨ７.２）５００mlで洗浄した。次いで、微生物を、同一条件下、再度、遠心分離にかけた。得られた細菌ペレット（Ｃ₁）を、１％のＯＧ溶液［シグマ（Ｓigma）］（培養物のリットル当たり３０ml）に再懸濁させた。細菌懸濁液を、室温で１時間、磁気撹拌しつつインキュベートし、次いで、４℃で３０分間、１７,６００ｘｇで遠心分離にかけた。該ペレット（Ｃ₂）を次の処理のために貯蔵した。得られた上清（Ｓ₂）を、４℃で一晩、磁気撹拌しつつ、¹/₂に希釈したＰＢＳ１リットルに対して２回透析した（ＭＷＣＯ＝１００００Ｄa、Ｓpectra／por）。透析の間に形成された沈殿物を、４℃で３０分間、２６００ｘｇで遠心分離にかけて回収した。上清（Ｓ_2d）を除去し、膜タンパクを含有するペレット（Ｃ_s2 _d ）を−２０℃で貯蔵した。１Ｃ − 微生物の破壊ＯＧで処理した微生物の遠心分離後に得られたペレット（Ｃ₂）を２０mＭＴr is−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）および１００μＭペファブロック（Ｐefabloc ）（バッファーＡ）に再懸濁させ、次いで、ウルトラ−ターラックス（Ｕltra-t urrax）（３８２１、ジャンク・アンド・クンゲル（Ｊanke ＆Ｋungel））によりホモジナイズした。得られたホモジネートをリゾチーム（最終０.１mg／ml）およびＥＤＴＡ（最終１mＭ）に暴露した。該ホモジネートを、４℃で２分間、３回、音波処理し（プローブφ＝０.５cm 、パワー＝２０％、ソニファイヤー４５０ブランソン（Ｓonifier ４５０Ｂran son））、次いで、４℃で３分間、２１０,０００ｘｇで超遠心分離にかけた。細胞質タンパクおよび周縁細胞質タンパクを含有する上清（Ｓ₃）を除去し、ペレットを回収し、バッファーＡで洗浄し、次いで、４℃で３０分間、２１０,０００ｘｇで超遠心分離にかけた。上清（Ｓ₄）の除去後、ペレット（Ｃ₄）を−２０ ℃で貯蔵した。このペレットは、イントリンジック（intrinsic）膜タンパクおよび周辺膜タンパクを含有した。周辺膜タンパクを除去するために、ペレットＣ₄を２回洗浄することによって、この方法を続けた。ペレットＣ₄を５０mＭＮaＣＯ₃バッファー（pＨ９.５）、１００μＭペファブロック（Ｐefabloc）（バッファーＢ）に再懸濁させた。懸濁液を、４℃で３０分間、２１０,０００ｘｇで超遠心分離にかけた。上清（Ｓ₅ ）を除去し、次いで、ペレット（Ｃ₅）を、前記と同一条件下で、洗浄し、超遠心分離にかけた。上清（Ｓ₆）の除去後、実質的にイントリンジック膜タンパクを含有するペレット（Ｃ₆）を−２０℃で貯蔵した。以下、フラクションＣ４、Ｃ６およびＣ_s2dを、各々、膜フラクションＩ、II およびIIIと称する。１Ｄ − 膜フラクションの分析 Laemmli法（1970）に従って、ＳＤＳの存在下、ポリアクリルアミドゲル電気泳動により種々の膜フラクションを分析した。クマシーブルー染色の後、タンパクを可視化した。各フラクションの主要なタンパクを考えると、ＳＤＳ−ＰＡＧＥプロフィル（図２）は、膜フラクションＩが膜フラクションIIに非常に類似していることを示した。他方、これらの２つは、膜フラクションIIIと実質的に異なった。膜フラクションＩのプロフィルは、各分子量８７kＤa、７６kＤa、６７kＤa、５４kＤa、５０kＤa、４７kＤaおよび３２〜３５kＤaの７つの主要なタンパクバンドを示した（レーン２）。抗ureＢ抗体または抗カタラーゼ抗体の存在下でのウェスタンブロット法により、６７kＤaのバンドは、ウレアーゼのＢサブユニットに相当し、５４kＤaのデンドは、カタラーゼに相当することを示した。これらの２つのタンパクは、フラクションIIのプロフィル（レーン３）には存在しない。というのは、炭酸塩緩衝液での洗浄は、膜にあまり関連しないタンパクを除去するからである。膜フラクションIIIのタンパクプロフィルについてと同様に、７６kＤa、６７kＤa、５０kＤaおよび３０kＤaの４つの主要なバンドの存在を示した（レーン４）。実施例２：分取用ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる膜フラクションＩのタンパクの精製５％スタッキングゲルおよび１０％セパレーティングゲルを用いて、Laemmli 法（1970）に従ってポリアクリルアミドゲル上で電気泳動を行った。膜フラクションをバッファーＡに再懸濁させ、次いで、２Ｘ試料バッファーで２分の１に希釈した。該混合物を９５℃で５分間加熱した。タンパク約１９mgを大きさ１６× １２cmおよび厚み５mmのゲル上に負荷した。５０Ｖで２時間、予備移動を行い、６５Ｖで一晩、移動させた。該ゲルをクマシーブルーＲ２５０（限外濾過に付した水中０.０５％）で染色して、バンドを良好に可視化した。主要なバンドＨpＰ１、ＨpＰ２、ＨpＰ４、ＨpＰ５およびＨpＰ６を外科用メスで切断し、２５mＭＴris−ＨＣl（pＨ８.８）、８Ｍ尿素、１０％ＳＤＳ、１００μＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）および１００μＭペファブロック（Ｐefabloc）を含有する抽出バッファー（バッファーＣ）１０ml または２０mlの存在下、ウルトラ−ターラックス（Ｕltra-turrax）中で粉砕した。各粉砕生成物を、室温で、７barの気圧下、押し出し機の助けにより、ミリポア（Ｍilipore）ＡＰ２０プレフィルター（φ_filter＝４.７cm、φ_pore＝２０ μm）上で濾過した。各粉砕生成物をバッファーＣ５〜１０mlで洗浄し、上記のとおり濾過した。各々対応する粉砕生成物から得た２つの濾液を合わせた。各濾液を、３倍容量の、７５％メタノールおよび７５％イソプロパノールの５０：５０混合物で沈殿させ、次いで、７０ＴＦＴローター（Ｊ８−５５、ベックマン（Ｂeckman））上、１０℃で１６時間、２４０,０００ｘｇで超遠心分離にかけた。各ペレットを、１０mＭＮaＰＯ₄（pＨ７.０）、１ＭＮaＣl、０.１％サルコシル、１００μＭＰＭＳＦ、１００μＭペファブロック（Ｐefabloc）および６Ｍ尿素を含有する可溶化バッファー（バッファーＤ）２ml中にを取った。溶解した試料を、連続して、４Ｍ尿素および０.１％サルコシルを含有するバッファーＤ１００mlに対して、２Ｍ尿素および０.５％サルコシルを含有するバッファーＤ１００mlに対して、次いで、尿素を含まず０.５％サルコシルを含有するバッファーＤ１００mlに対して２回、透析した。該透析は、室温で１時間、磁気撹拌しつつ行った。最終透析物を氷浴中で３０分間インキュベートし、次いで、４ ℃で１０分間、低速で遠心分離にかけた（バイオフュージ（Ｂiofuge）Ａ、ヘレウス・セパテク（Ｈeraeus Ｓepatech））。上清を回収し、０.４５μmのミリポアフィルター上で濾過し、−２０℃で貯蔵した。各フラクションについてＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を行った（図３）。各フラクションの電気泳動プロフィルの分析は、フラクションＨpＰ１、ＨpＰ２およびＨpＰ４がこれらのフラクショの各々について単一のゲルバンド（各々、８７kＤa、７６kＤaおよび５４kＤa）を有する純粋なものであることを示した。フラクションＨpＰ５は、４７kＤaのバンドで僅かに汚染されている５０kＤa に高い強度のバンドを有した；同様に、フラクションＨpＰ６は、３５kＤaのバンドで僅かに汚染されている３２kＤaに高い強度のバンドを有した。実施例３：膜フラクションＩからの３０kＤa、５０kＤaおよび５４kＤaの膜タンパクの精製３Ａ − Ｑ−セファロースカラム上での陰イオン交換クロマトグラフィー製造者［ファルマシア（Ｐharmacia）］の推奨に従って、４０mlのＱ−セファロースカラム（φ＝２.５cm、ｈ＝８cm）を調製した。該カラムを、１００μＭペファブロック（Ｐefabloc）および０.１％ツィッタージェント（zwittergent ）３−１４を含有する５０mＭＮaＣＯ₃バッファー（pＨ９.５）で洗浄し、次いで、平衡化させた。カラムの流出口で２８０nmでＵＶ検出することによりクロマトグラフィーをモニターした。膜フラクションＩの予め溶解させたタンパク１４０mgをカラムに負荷し、次いで、２８０nmでの吸光度が安定するまで、平衡化バッファー（５０mＭＮaＣＯ₃ （pＨ９.５）、１００μＭペファブロック（Ｐefabloc）および０.１％ツィッタージェント（zwittergent）３−１４）で洗浄した。平衡化バッファー中０.１〜０.５ＭＮaＣl勾配液によりタンパクを溶離し（１０倍Ｖ_T）、０.５および１ＭＮaＣlを含有する平衡化バッファーで洗浄した（２倍Ｖ_T）。回収したフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、それらの電気泳動プロフィルに従って種々のプールに合わせ、次いで、−２０℃で貯蔵した。該フラクションは、以下のとおりである：タンパク評価により、タンパクの５３％が０〜０.５ＭＮaＣl勾配液で溶離され、タンパクの１４％がカラムに付着せず、タンパクの３３％が１ＭＮaＣlにおける洗浄の間に溶離されたことが判明した。カラムに結合しなかったタンパクは、pＨ７.５で正に荷電されるアルカリ性タンパクに相当し、一方、１ＭＮaＣ lで溶離されたタンパクは、このpＨで非常に荷電される酸性タンパクに相当する。フラクション７および９の精製を以下のとおり続けた。３Ｂ − ＤＥＡＥ−セファロースカラム上での陰イオン交換クロマトグラフィーによるフラクション７および９のタンパクの分離約１０mlのゲル容量について製造者［ファルマシア（Ｐharmacia）］の推奨に従ってＤＥＡＥ−セファロースカラムを調製した（φ＝１.５cm、ｈ＝５cm）（ゲルのml当たりタンパク最大１０mg）。該カラムを、１００μＭペファブロック（Ｐefabloc）および０.１％ツィッタージェント（zwittergent）３−１４を含有する５０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７.５）で洗浄し、次いで、平衡化させた。前記のとおりカラムの流出口で２８０nmでのＵＶ検出によりクロマトグラフィーをモニターした。タンパク１０mgを含有する平衡化バッファー（５０mＭＴris−ＨＣl（pＨ７. ５）、１００μＭペファブロック（Ｐefabloc）および０.１％ツィッタージェント（zwittergent）３−１４）に対して予め透析したフラクション７をＤＥＡＥ −セファロースカラム上に負荷した。次いで、２８０nmでの吸光度が安定するまで、該カラムを平衡化バッファーで洗浄した。平衡化バッファー中０〜０.５ＭＮaＣl勾配液によりタンパクを溶離し（１０倍Ｖ_T）、次いで、１ＭＮaＣlを含有する平衡化バッファーで洗浄した（２倍Ｖ_T）。回収した回収したフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、次いで、それらのタンパクプロフィルに従って種々のプールに合わせ、−２０℃で貯蔵した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、該フラクション７.１（直接溶出液）は、関心のあるものであることが判明した。タンパク３１mgを含有するフラクション９について同様の精製を繰り返した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、各々０.１〜０.２５ＭＮaＣl、０.３〜０.４ＭＮa Ｃlおよび１ＭＮaＣlで溶出したフラクション９.１、９.２および９.３は、関心のあるものであることが判明した。フラクション７について（図４Ａ）、得られた結果により、３０kＤaのタンパクだけ（レーン３；フラクション７.１）が豊富化され、ＤＥＡＥ−セファロースカラムを介するパッセージの後に部分的に分離され、他のタンパクは、分離されなかったことが判明した。フラクション９について（図４Ｂ）、電気泳動プロフィルは、５４kＤaおよび１５kＤaの２つのタンパク（レーン３および５；フラクション９.１および９.３）が分離され、５０kＤaのタンパクが豊富化された（レーン４；フラクション９.２）ことが判明した。フラクション９.１の５４kＤa のタンパクは、抗カタラーゼ抗体と反応しなかった。実施例４：膜フラクションＩからの３２kＤaの膜タンパクの精製膜フラクションＩを５０mＭＮaＣＯ₃バッファー（pＨ９.５）に、室温で３０分間、撹拌しつつ溶解させた。次いで、該懸濁液を、＋４℃で３０分間、２００ ,０００ｘｇで遠心分離にかけた。上清を５０mＭＮaＰＯ₄バッファー（pＨ７. ４）に対して透析し、次いで、予め同一のバッファーで平衡化させたＳＰ−セファロースカラム上に負荷した。同一のバッファーでカラムを洗浄した後、該カラムを０〜０.５ＭＮaＣl勾配液に付した。０.２６Ｍ〜０.３１Ｍで溶出したフラクションは、３２kＤaのタンパクを含有した。実施例５：フラクションＨpＰ５およびＨpＰ６に対する高度免疫血清の調製ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）の主要な膜タンパクに対して特異的なポリクローナル血清を、分取用ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって精製した抗原ＨpＰ５およびＨpＰ６で各々ウサギを高度免疫化することにより得た。フロイント完全アジュバント中に乳化膜タンパク５０μgを含有する調製物で第一注射Ｄ０（皮下マルチサイトおよび筋肉内）を行い、次いで、フロイント不完全アジュバント中の膜タンパク２５μgの注射によりブースターＤ２１およびＤ４２を行った。該動物をＤ６０で殺した。得られた血清を５６℃で３０分間補体除去し、０.２２μmの多孔性の膜（ミリポア）上で濾過することにより滅菌した。抗ＨpＰ５抗血清は、実施例３で得たフラクション９.２において単離した５０ kＤaタンパクと反応させた。抗ＨpＰ６抗血清は、実施例４で得たＳＰ−セファロース上で０.２６〜０.３１ＭＮaＣlで溶出したフラクションにおいて単離した３２kＤaタンパクと反応した。前記免疫化方法を用いて、実施例３で精製したタンパクの各々に対する抗血清を生産させることは非常に明白である。これらの実施例において得られた調製物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上での分取用電気泳動に好都合に付すことができる。タンパクバンドは、免疫化のための調製物を得るように前記のとおり処理される。実施例６：ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）からのカタラーゼの精製実施例１Ａの記載に従って、培養を行った。洗浄した細菌ペレットを、１００ μＭＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオリドシグマ（Ｓigma））を含有する５０mＭリン酸ナトリウムバッファー（pＨ７.５）（バッファーＡ）に、ミリリットル当たり０.１g（湿重量）の最終濃度で再懸濁させた。該懸濁液を、ウルトラターラックス（Ｕltraturrax）タイプのミキサーによりホモジナイズした。次いで、細菌ペレットを、直径１.８cmのプローブを装着したソニファィヤー（Ｓonifier）タイプの装置（ブランソン（Ｂranson））により音波処理によって破壊した。音波処理は、断続的に、音波処理１分および氷上での静置１分で行った。１０分の音波処理は、懸濁液中の微生物５gを完全に破壊するのに充分であった。かくして得られた溶解物を、４℃で１５分間、４０００ｇで遠心分離にかけた。懸濁液を回収し、次いで、再度、４℃で３０分間、１００,０００ｇで遠心分離にかけた。この第２の遠心分離からの上清（Ｓ２）をクロマトグラフィー精製のために回収した。この方法で調製したフラクションＳ２は、Hazell et al．（前掲）の技術またはBeer & Sizer，J．Biol．Chem.（1952）195: 133の技術に従って測定すると、全「カタラーゼ」酵素活性の約９０％を保持していた。該フラクションＳ２を、予めバッファーＡで平衡化させたＳ−セファロースカラム（ファルマシア（Ｐharmacia））上に負荷した。該カラムを同一のバッファ々で洗浄した。該タンパクについて２８０nmでＵＶ検出器により、カタラーゼについて酵素活性により該クロマトグラフィーをモニターした。未結合タンパクの除去後（基線に戻された２８０nmでの吸光度）、次いで、カラムをバッファーＡ中０〜１ＭＮaＣlで洗浄した。カタラーゼ活性ピークに対応するフラクションを回収し、分子量切断が１００,０００ダルトンである膜を装着したアミコン（Ａmicon）タイプ濃縮セル中で濃縮した。得られた濃縮フラクションを、予めＰＢＳバッファーで平衡化したセファクリル（Ｓephacryl）Ｓ−３００ＨＲカラム上に負荷した。カタラーゼ活性を含有するフラクションを合わせ、１mg／mlに濃縮し、ＰＢＳバッファーに対して透析した。最終溶液を０.２２μmの多孔性の膜上で濾過し、−７０℃で貯蔵した。精製したタンパクは、以下の特徴を有した：（ｉ）ペルオキシダーゼ活性の不在下、典型的なカタラーゼ酵素活性。（ii）血液タンパクの典型的な可視スペクトル、４０６nmでのソレット（Ｓor et）ピークならびに５２０nm〜５５０nmのアルファおよびベータピーク。（iii）以下のＮ−末端配列を有するＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける５４kＤaでの単量体形態。実施例７：イムノアフィニティによる５０kＤaの膜タンパクの精製７.Ａ − ＩgＧの精製実施例５で調製したフラクションＨpＰ５に対する高度免疫血清を、予め１００mＭＴris−ＨＣl（pＨ８.０）中で平衡化させたタンパクＡセファロース４高速カラム（Ｐrotein ＡＳepharose ４Ｆast Ｆlow column）［ファルマシア（Ｐharmacia）］上に負荷した。樹脂を１０倍カラム容量の１００mＭＴris− ＨＣl（pＨ８.０）で、次いで、１０倍カラム容量の１０mＭＴris−ＨＣl（pＨ８.０）で洗浄した。ＩgＧを０.１Ｍグリシンバッファー（pＨ３.０）で溶離した。ＩgＧをフラクション５mlとして回収し、これに１ＭＴris−ＨＣl（pＨ８. ０）０.２５mlを添加した。２８０nmで溶出液の光学密度を測定し、ＩgＧを含有するフラクションを合わせ、所望により、−７０℃で冷凍した。７.Ｂ − カラムの調製ファルマシア（Ｐharmacia）によって製造された適当な量のＣＮＢr−活性化セファロース４Ｂゲル（乾燥ゲル１ｇにより水和ゲル約３.５mlが得られ、ゲルの許容量がゲルのml当たりＩgＧ５〜１０mgであることが知られている）（ref ：１７−０４３０−０１）を１mＭＮaＣlバッファーに懸濁させた。次いで、該ゲルを、少量の１mＭＨＣlを添加することによってブフナーの助けにより洗浄した。用いた１mＭＨＣlの総量は、ゲルのg当たり２００mlであった。精製したＩgＧを、５０倍容量の５００mＭリン酸ナトリウムバッファー（pＨ７.５）に対して２０＋５℃で４時間透析した。次いで、該透析物を５００mＭリン酸ナトリウムバッファー（pＨ７.５）中で最終濃度３mg／mlに希釈した。ＩgＧをゲルと一緒に、５＋３℃で一晩、回転式撹拌しつつインキュベートした。ゲルをクロマトグラフィーカラム中に置き、２倍カラム容量の５００mＭリン酸塩バッファー（pＨ７.５）で洗浄した。次いで、ゲルを管の中に移し、室温で、１００mＭエタノールアミン（pＨ７.５）中で撹拌しつつインキュベートした。次いで、２倍カラム容量のＰＢＳで洗浄した。ゲルをＰＢＳメルチオレート（merthiolate）１／１０,０００中に貯蔵した。初期ＩgＧ溶液と直接溶出液＋洗液との間で２８０nmでの光学密度の差異を測定することによって、ゲルに結合したＩgＧの量を測定した。７.Ｃ − 抗原の吸着および溶出５０mＭＴris−ＨＣl（pＨ８.０）、２mＭＥＤＴＡ中の抗原のタンパク調製物、例えば、膜フラクションＩまたはII（実施例１Ｃで得られ、ツィッタージェントに溶解したフラクションＣ４またはＣ６）を、０.４５μmの膜を介して濾過し、次いで、５０mＭＴris−ＨＣl（pＨ８.０）、２mＭＥＤＴＡで予め平衡化したカラム上に約１０ml／時の流速で負荷した。次いで、カラムを２０倍容量の５０mＭＴris−ＨＣl（pＨ８.０）、２mＭＥＤＴＡで洗浄した。別に、吸着は、浴中で行った；インキュベーションを５＋３℃で一晩撹拌しつつ続けた。ゲルを、２〜６倍容量の１０mＭリン酸ナトリウムバッファー（pＨ６.８）で洗浄した。抗原を１００mＭグリシンバッファー（pＨ２.５）で溶離した。溶出液をフラクション３mlに収穫し、これに１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（pＨ８.０）１５０μlを添加した。各フラクションの光学密度を２８０nmで測定した；抗原を含有するフラクションを一緒に合わせ、−７０℃で貯蔵した。１０％ＳＤＳ−Ｐageゲル上での電気泳動による分析は、５０kＤaで唯一のバンドを示した。実施例８：イムノアフィニティによる３２kＤaの膜タンパクの精製実施例４の記載に従って０.２６〜０.３１ＭＮaＣlで溶出したフラクションの精製を続けるために、フラクションＨpＰ６に対する抗血清を用いて実施例７を繰り返した。溶離後に回収した、およびタンパクを含有するフラクションを単一の調製物に合わせた；後者を１０％ゲル上でＳＤＳ−Ｐage電気泳動により分析した。単一のバンドが３２kＤaで出現した。実施例９：凝集検査９.Ａ − 培養 −７０℃でグリセロール中で貯蔵したヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）ＡＴＣＣ４３５７９の菌株（アメリカ合衆国ミズーリ州ロックヴィル、パークローン・ドライブ１２３０１番のＡＴＣＣから入手可能）を、二相培地を含有する２５cm²のフラスコに接種した。二相培地は、６％ヒツジ新鮮血液を補足したコロンビア寒天１０mlからなる固相および２０％ウシ胎児血清を含有するダイズトリプカーゼブロス［ディフコ（Ｄifco）］３mlからなる液相からなる。該フラスコを「ジェナーバッグ」（generbag）と称される密封バッグ（ＢＢＬ）中に置き、マイクロエアー・システム（Ｍicroaer Ｓystem）（ＢＢＬ）により得られた微好気性条件下（８〜１０％ＣＯ₂、５〜７％Ｏ₂および８５〜８７％Ｎ₂）、３７℃で４８時間、ゆっくりと回転式振盪しつつインキュベートした。この４８時間培養物を用いて、二相培地を含有するフラスコに再度接種した。６００nmでのこの培養物の最初の吸光度は、０.１５〜０.２であった。該フラスコを前記と同様の条件下でインキュベートした。４８時間後、細菌懸濁液を試験管に移した。この培養物の吸光度を測定し、６００nmで３.０〜３.５であった。グラム染色後、顕微鏡下で微生物の出現をチェックした。９.Ｂ − 抗血清実施例５で得た抗血清を０.４５μmの膜上で濾過して、使用前に存在する場合の小さな凝集物を除去した。９.Ｃ − 凝集検査黒い底のイムノプレシピテーションプレート（プロラボ（Ｐrolabo）ref．１００５０）上で、第１ウエル中で生理食塩水２０μl、中央ウエル中で免疫化前に回収した血清２０μl、第３ウエル中で抗血清２０μlを沈殿させた。３つのウエルの各々にヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）の細菌懸濁液２０μlを添加し、次いで、密封した丸いチップを有するパスツールピペットの助けにより混合した。凝集の開始は、混合のせいぜい５分後、拡大鏡下で観察された。凝集は、混合物が大きな凝集物からなる透明溶液の形態で出現する場合に完全である。生理食塩水または予備免疫化血清による負の対照は、濁ったままであり、細菌懸濁液が無傷であることを明らかにした。フラクションＨpＰ５に対する抗血清およびフラクションＨpＰ６に対する抗血清は、非常に強い凝集反応を示した。試験条件下、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌は、迅速に凝集し、該反応は、１分後に完了した。この結果により、５０kＤaおよび３２kＤaのタンパクがおそらくヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）の表面で暴露されることが判明した。実施例１０：５４kＤa、５０kＤa、３０kＤaおよび３２kＤaの膜タンパクの防御効果のデモンストレーション実施例３に記載したクロマトグラフィーによって、または実施例８に記載したイムノアフィニティーによって精製した５４kＤa、５０kＤaまたは３０kＤaの抗原、または実施例７に記載したイムノアフィニティーによって精製した５０kＤa の抗原（好ましい）１μg、５μg、２５μg、５０μgまたは１００μgで胃内経路により、６〜８週齢のスイス・ウェブス（Ｓwiss Ｗebster）マウス［ニューヨーク州ジャーマンタウンのタコニック・ラブズ（Ｔaconic Ｌabs）］約１０匹のグループを免疫化した。該抗原をＰＢＳ中または０.２４Ｍ重炭酸ナトリウムを含有するＰＢＳ中で希釈した。抗原をコレラ毒（ＣＴ）［サンディエゴのカルビオケム（Ｃalbiochem）］５もしくは１０μgまたは非耐熱性毒（ＬＴ）［フロリダ州コーラル・ゲイブルズのベルナ・プロダクツ（Ｂerna Ｐroducts）］で補足した。マウスをまずイソフルランで麻酔し、次いで、カニューレにより約０. ５mlの容量で投与した。７〜１０日間隔で各マウスに４回投与した。最後の投与の２週間後、胃内経路により投与したヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）ＯＲＶ２００２菌株（ＰＢＳ２００μl中生菌１×１０⁷個；ＯＤ₅₅₀約０.５）の単投与でマウスを攻撃誘発した。抗原を投与せず対照として供されるグループに同様に攻撃誘発した。攻撃誘発の２週間後、マウスを殺した。防御のパーセンテージは、ウレアーゼ活性を測定することによって、または、Lee et al．（上掲）に開示されているような組織学により細菌負荷を評価することによって、または、直接ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）の定量的培養によって測定した。５４kＤa、５０kＤa、３０kＤaおよび３２kＤaのタンパクの各々について、これらの条件下、対照グループと比較して、２５μgで免疫化したマウスのほとんどにおいて感染負荷の実質的な減少を観察することが可能であった；これは、５４kＤa、５０kＤa、３０kＤaおよび３２kＤaのヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．py lori）抗原が少なくとも部分的に防御的であると結論を出すことができる；最も良好な結果は、３２kＤaのタンパクで得られた（約１００％防御）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 1/22 Ｃ０７Ｋ 16/12 16/12 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/04 Ｃ１２Ｑ 1/04 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/53 33/569 Ｆ 33/569 Ａ６１Ｋ 37/02 //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｑ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims

【特許請求の範囲】１．ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）膜フラクションから得ることができ、ＳＤＳの存在下で１０％ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動後の分子量が約５４、５０、３２〜３５または３０kＤaである（ただし、分子量が５４kＤaである場合、該タンパクは、抗カタラーゼ抗血清と反応しない）、実質的に精製された形態のヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）タンパク。２．見かけの分子量が約５４kＤaであり、以下の工程：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７ .５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質に懸濁させ；（ｖ）該膜フラクションを、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液を用いてＱ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し、次いで、１ＭＮaＣl で洗浄し；（vi）１ＭＮaＣlによる洗浄の初めに溶出したフラクションを回収し、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液を用いてＤＥＡＥ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し；（vii）０.１〜０.２５ＭＮaＣlで溶出したフラクションを回収することによって得ることができる請求項１記載のタンパク。３．見かけの分子量が約５０kＤaであり、以下の工程：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７ .５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質に懸濁させ；（ｖ）該膜フラクションを、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液を用いてＱ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し、次いで、１ＭＮaＣl で洗浄し；（vi）１ＭＮaＣlによる洗浄の初めに溶出したフラクションを回収し、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液を用いてＤＥＡＥ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し；（vii）０.３〜０.４ＭＮaＣlで溶出したフラクションを回収することによって得ることができる請求項１記載のタンパク。４．Ｎ−末端配列として配列番号１で示されるアミノ酸配列を有する請求項３記載のタンパク。５．見かけの分子量が約３０kＤaであり、以下の工程：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７ .５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質に懸濁させ；（ｖ）該膜フラクションを、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液を用いてＱ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し；（vi）０.２８〜０.３５ＭＮaＣlで溶出したフラクションを回収し、０〜０. ５ＭＮaＣl勾配液を用いてＤＥＡＥ−セファロースカラム上で陰イオン交換クロマトグラフィーに付し；（vii）直接溶出液に対応するフラクションを回収すること（ＮaＣlの不在）によって得ることができる請求項１記載のタンパク。６．見かけの分子量が約３２〜３５kＤaであり、以下の工程：（ｉ）ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）細菌を１％ｎ−オクチルβ−Ｄグルコピラノシドで抽出し、次いで、遠心分離にかけ；（ii）細菌ペレットを回収し、リゾチームで処理し、音波処理に付し、次いで、遠心分離にかけ、（iii）遠心分離ペレットを回収し、２０mＭＴris−ＨＣlバッファー（pＨ７ .５）で洗浄し、次いで、遠心分離にかけ、（iv）遠心分離ペレットからなる膜フラクションを回収し、水性媒質（好都合には、炭酸塩緩衝液（pＨ９.５）中）に懸濁させ；（ｖ）（iv）で得た懸濁液を約２００,０００ｘｇで遠心分離にかけ、上清を回収し；（vi）（ｖ）で得た上清のpＨを約pＨ７に低下させ（好都合には、リン酸塩緩衝液（pＨ７）に対して透析することにより）；（vii）（vi）で得た調製物を、０〜０.５ＭＮaＣl勾配液（好都合には、リン酸塩緩衝液（pＨ７）中）を用いてＳＰ−セファロースカラム上で陽イオン交換クロマトグラフィーに付し；次いで、（vii）０.２５〜０.３１ＭＮaＣlにおいて溶出したフラクションを回収することによって得ることができる請求項１記載のタンパク。７．請求項１〜６のいずれか１項記載のタンパクに対して生じた抗血清によって認識され得る実質的に精製した形態の、ヘリコバクター（Ｈelicobacter）タンパクまたは断片化および／または突然変異により該タンパクから誘導されたポリペプチド。８．活性成分として請求項１〜７のいずれか１項記載のタンパクまたはポリペプチドからなる、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）感染の予防用または治療用医薬組成物。９．請求項１〜７のいずれか１項記載のタンパクまたはポリペプチドを認識することができる単一特異性抗体。１０．活性成分として請求項９記載の単一特異性抗体からなる、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．pylori）感染の予防用または治療用医薬組成物。１１．生物学的試料を請求項９記載の抗体または請求項７記載のポリペプチドと接触させ、免疫複合体を形成させ、所望により未結合物質を除去し、該試料と抗体またはポリペプチドとの間で形成された免疫複合体を検出することを特徴とする、生物学的試料中のヘリコバクター（Ｈelicobacter）の存在を検出することができる診断方法。１２．生物学的試料を、請求項９記載の単一特異性抗体を用いてアフィニティークロマトグラフィーに付すことを特徴とする、生物学的試料からの請求項１〜７のいずれか１項記載のタンパクまたはポリペプチドの精製方法。