JPH10507460A

JPH10507460A - 炎症、自己免疫疾患、アレルギー疾患治療用の結合性物質

Info

Publication number: JPH10507460A
Application number: JP8513642A
Authority: JP
Inventors: ーイヴ・マーセル・ポールバンフォイ、ジーン; ーヘンチョズ、シビルルコーネット
Original assignee: グラクソ・グループ・リミテッド
Priority date: 1994-10-25
Filing date: 1995-10-20
Publication date: 1998-07-21
Also published as: EP1018517A2; ATE198895T1; HU223006B1; EP0788514A1; PT788513E; AU3843595A; JP3323508B2; EP1018517A3; AU698158B2; IL115733A; AU710369B2; US20040022783A1; KR20040058016A; AU3867995A; FI971756A; WO1996012742A1; NO971902L; DK0788513T3; CN1171119A; CA2203364A1

Abstract

(57)【要約】ＣＤ２１，ＣＤ１１ｂ，ＣＤ１１ｃに結合し、内皮細胞上で発現される７０〜８５ＫＤａ蛋白に結合し，または内皮細胞上に発現される１１５ＫＤａ蛋白に結合する結合性物質は、炎症、自己免疫疾患、アレルギー疾患の治療および予防に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】炎症、自己免疫疾患、アレルギー疾患治療用の結合性物質本発明は、炎症、自己免疫疾患、アレルギー疾患治療に使用することが可能な特殊な結合性物質に関する。ＣＤ２３（ＦＣεＲII）は、Ｃレクチン族のタイプII分子であり、Ｃレクチン族には、また、リンパ球ホーミング受容体（ＭＥＬ−１４）および内皮系白血球接着分子−１（ＥＬＡＭ−１）が含まれる。ＣＤ２３（ＦＣεＲII）は、ＩｇＥの低親和性受容体である。ヒトにおいては、濾胞性樹状突起細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージを含む多様なタイプの造血細胞が、その表面にＣＤ２３を発現する。ＣＤ２３分子は、生物学的液体中に溶解した形でも見られる。可溶性のＣＤ２３（ｓＣＤ２３）分子は、膜貫通受容体の蛋白分解による切断によって形成される。ＣＤ２３は、細胞接着の媒介、ＩｇＥおよびヒスタミン分泌の調整、Ｂ細胞のアポトーシスからの救済、骨髄細胞の増殖調整等の多面的な活性を持つ。これらの機能的な活性は、細胞結合性ＣＤ２３またはｓＣＤ２３の特異的リガンドへの結合を介して媒介される。後者は、サイトカイン様の働きを示す（Conr ad,D.H.Annu Rev.Immunol 8,623-645,1990）;Delespesse,G.,et al.,AdvImmunol 49,149-191(1991);Bonnefoy,J.Y.,et al.,Curr Opin Immunol 5,944-947,(1993 ))。 CD23の発現が増加することについては、多くの炎症性疾患で観察されてきた。ＣＤ２３は、慢性の滑膜炎の患者の滑膜炎生検において確認されている。また、ｓＣＤ２３はリュウマチ様関節炎患者の血清、滑膜体液中において、通常の範囲を超えた濃度で測定できる(Bansal,A.S.Oliver,Ｗ.,Marsh,M.N.Pumphrey,R.S.,a nd Wilson,P.B.,Immonology 79,285-289(1993);Hellen,E.,A.,Rowlands,D.C.,Ha nsel,T.T.,Kitas,G.D.,and Crocker,J.J.,Clin Pathol 44,293-296(1991);Choma rat,P.,Brioloay,J.,Banchereau,J.,& Miossec,P., Arthritis Rheum 86,234-242(1993);Bansal,A.,et al.,Clin Exp Immunol 89,45 2-455(1992);Rezonzew,R.,& Newkik,M.M.,Clin Immunol Immunopathol 71,156-1 63(1994))。加えて、リュウマチ性関節炎患者の血清ｓＣＤ２３のレベルは、疾患の状態の程度に関係し、血清のリュウマチ因子と相関している(Bansal.A.S.,e t al.,Clin Exp Rheumatol 12,281-285(1994))。炎症前のサイトカインは、リュウマチ性関節炎において特に重要であるように思える。また、ＴＮＦーαおよびＩＬ−１βが関節の節破壊に中心的な役割を果たすのではないかとの仮説が提示されている(Brennan,F.M.,Chantry,D.,Jackson,A,Maini,R.,& Feldman,M.,Lance t 2,244-247(1989);Brennan,F.,M.,Maini,R.M.&Feldman M.,Br J.Rheumatol 31, 193-298(1992))。 CD23-CD21の相互作用は、ＩｇＥ産生を制御する役割を担っていると考えられてきた(Flores-Romo L.et al.,Science 261 1038-1041(1993);Aubry et al.,Nat ure 358,505-507(1992).) ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃは、多くの細胞-細胞相互作用および細胞-マトリックス相互作用に関与する接着性分子である。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１／ＣＤ１８（夫々ＣＤ１１ｂとＣＤ１８との結合、およびＣＤ１１ｃとＣＤ１８との結合）は、ＣＤ５４，フィブリノーゲン、Ｘ因子，ＬＰＳ，ＣｏｎＡおよびザイモサン(zymosan)（Springer,T.A.Nature 346,425-434(1990)）を含む幾つかのリガンドと結合することが報告されている。しかしながら、これらの結合分子の役割は完全にはわかっていない。また、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８は、ＭＡＣ−１およびｐ１５０、９５としても夫々知られている。それらは、β₂インテグリン・ファミリーのメンバーである（ときには、Leu −CAM、即ち、白血球細胞接着分子としても知られいる）。該ファミリーのメンバーの中には、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８としても知られる）も含まれる。ＥＰ０２０５４０５は、ヒト・イムノグロブリンＥ結合因子（ＩｇＥ−ＢＦ）と交叉反応するＩｇＥ（ＦＣεＲ）のリンパ細胞受容体に対する、Ｍａｂｓおよびその誘導体を開示していると言われている。ＷＯ９３／０４１７３は、ＦＣＥＬ（低親和性ＩｇＥ受容体ＦＣεＲII）またはＦＣＥＨ（高親和性受容体ＦＣεＲＩ）のどちらかと結合することできるが、ＦＣＦＬまたはＦＣＥＨの残りの一つとは実質的に結合できないポリペプチドを開示していると言われている。ＦＣＥＬまたはＦＣＥＨ特異的ポリペプチドを用いたアレルギー疾患の治療（但し、ＦＣＥＨ特異的ポリペプチドはＦＣＥＨとの交叉結合できず、ヒスタミン分泌を誘導することができない）が主張されている。ＥＰ０２６９７２８は、ヒトリンパ球ＩｇＥ受容体に対するＭａｂｓを開示していると言われている。ＥＰ０２５４９５８５は、ヒトＢリンパ球上のＩｇＥ（ＦＣεＲ）に対する表面受容体を認識するＭａｂｓを開示していると言われている。ＷＯ９３／０２１０８は、治療的用途のためにプライマタイズされた抗体(pri matised antibody)を開示していると言われている。本願発明者らは意外にも、ＣＤ２１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃに対する結合性物質、内皮細胞上に発現された７０−８５ＫＤａ蛋白に対する結合性物質、または、内皮細胞上に発現される１１５ＫＤａ蛋白に対する結合性物質が、種々の疾患の治療または予防、特に、関節炎の治療または予防に有用であり得ることを発見した。ＣＤ２１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃについて論じた膨大な論文が出版されていたにも拘わらず、本願以前にはこのような有用性を裏付けるデータは、提出されていなかった。本願によれば、炎症、自己免疫疾患、アレルギー疾患の治療および予防に使用するための、ＣＤ２１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃに対する結合性物質、内皮細胞上に発現される７０−８５ＫＤａ蛋白に対する結合性物質、または、内皮細胞上に発現される１１５ＫＤａ蛋白に対する結合性物質が提供される。結合性物質は、蛋白と該蛋白に結合するリガンドとの間の相互作用を阻止することによって作用すると思われる。インビトロ分析、たとえば、ラジオ・イムノアッセイ等は、このような阻止効果を研究するのに使用できるであろう。この結合性物質は、単離された形態または薬学的組成物の一部の何れで存在してもよい。望ましくは無菌形状とする。一般的に言えば、ＣＤ２１，ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃに特異的であって、内皮細胞上に発現される７０〜８５ＫＤａの蛋白（たとえば、内皮細胞上に発現される７６ｋＤａ，８０ｋＤａ，８５ｋＤａ蛋白）に対する結合性物質、または、内皮細胞上に発現される１１５ＫＤａ蛋白に対する結合性物質が、ここに開示される治療／予防に有用である。好ましい結合性物質には、抗体、抗体の断片、抗体もしくは抗体断片からなる人工構築物、または抗体もしくは抗体断片の結合を模倣するようにデザインされた人工構築物が包含される。このような結合性物質は、文献（Dougall et al.in Tibtech 12,372-379(1994)）で議論されている。結合性物質には、完全抗体、Ｆ（ａｂ'）₂断片、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、ＳｃＦｖ断片、その他の断片、ＣＤＲペプチドおよび模倣物が含まれる。これらは当業者によって得られかつ調製することができる。たとえば、酵素消化（ＩｇＧ分子をペプシンまたはペパインで開裂させる）を用いて、Ｆ（ａｂ'）₂断片およびＦａｂ断片を得ることができる。以下の説明において、「抗体等」というときは、上記に述べた可能性のすべてが含まれるものとする。組み換え抗体も使用可能である。該抗体は、擬人化抗体またはキメラ抗体であってもよい。そのＣＤＲｓが抗体の可変ドメインのフレームワークとは異なる種に由来している擬人化抗体の典型的な製造法は、ＥＰ−Ａ−０２３９４００に開示されている。ＣＤＲｓは、ラットまたはマウスのモノクローナル抗体起源でもあってもよい。改造抗体(alterd antibody)における可変ドメインのフレームワーク部分および定常ドメインは、ヒト抗体起源であり得る。このような擬人化抗体は、これを人に投与したときに、人ががラット抗体またはマウス抗体に対して呈する免疫反応と比較して、無視できる程度の抗体反応を誘発するに過ぎない。或いはまた、抗体は、例えばＷＯ８６／０１５３３に記載のタイプのようなキメラ抗体でもよい。ＷＯ８６／０１５３３によるキメラ抗体は、抗原結合領域および非イムノグロブリン領域からなる。抗原結合領域は、抗体の軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインである。典型的には、該キメラ抗体は軽鎖および重鎖の両方の可変ドメインを含む。非イムノグロブリン領域は、Ｃ末端で、抗原結合領域と融合する。この非イムノグロブリン領域は、典型的には非イムノグロブリン蛋白であり、酵素領域、既知の結合特異性を有する蛋白由来の領域、蛋白トキシン由来の領域、または実際に遺伝子によって発現される何れかの蛋白に由来する領域であればよい。キメラ抗体の二つの領域は、開裂可能なリンカー配列を経て連結されてもよい。該抗体は、ラットまたはマウス可変領域（キメラ抗体の場合）またはＣＤＲｓ（擬人化抗体の場合）を有するヒトＩｇＧ、たとえば、ＩｇＧ１,ＩｇＧ２,ＩｇＧ３,ＩｇＧ４；ＩｇＭ；ＩｇΛ；ＩｇＥ；またはＩｇＤである。ＷＯ９３／０２１０８に開示されているプライマタイジング技法も使用可能である。抗体またはその誘導体以外の他の好ましい結合性物質は、Ｘ因子（すなわち、因子１０）、エプスタイン・バー・ウイルス、またはエプスタイン・バー・ウイルスの一部である。完全なウイルスを医学的治療に使用する場合、それらは、一般的には非伝染性の形態で供与される。これは、弱独化および変異といった当業者に既知の技法を使用して達成される。当業者が理解するように、特定の結合性物質が記載される場合、該物質の誘導体もまた使用可能である。「誘導体」という用語には、記載された該結合性物質に対して一つまたはそれ以上のアミノ酸の置換、欠失、または挿入があるが、未だ記載された抗体活性を保持しているような該物質の変種が含まれる。好ましくは、これらの誘導体は、前記特定の結合性物質との間で実質的なアミノ酸配列の同一性を有している。アミノ酸配列の同一性の程度は、ベストフィット（bestfit）(Smith and Wate rman,Advances in Applied Mathematics,482-489(1981))等のプログラムを使用して計算され、如何なる二つの配列間においても最良の類似部分を見つけることが可能である。このアラインメントは、アミノ酸類似性マトリックス（例えば文献（Schwarz and Dayhof(1979),Atlas of Protein Sequence and Structure,Day hof,M.O.,Ed pp353-358）に記載されているようなマトリックス）を使用して得られるスコアを最大にすることに基づいている。配列の同一性の程度は、少なくとも５０％が好ましく、少なくとも７５％がより好ましい。少なくとも９０％または少なくとも９５％の配列同一性が最も好ましい。にもかかわらず、高度の配列同定は必ずしも必要ではないと当業者は考えるであろう。何故なら、蛋白のある特質を実質的に変えたり、または悪影響を与えることなく、種々のアミノ酸が同様の特質を持つ他のアミノ酸によってしばしば代替され得るからである。これらは、「保存的な」アミノ酸変化と呼ばれることがある。このように、アミノ酸であるグリシン、バリン、ロイシンまたはイソロイシン（脂肪族水酸基側鎖を有するアミノ酸））は、互いに他を置換することができる。お互いに他を置換できる他のアミノ酸には、たとえば、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；リジン、アルギニンおよびヒスチジン（塩基側鎖を有するアミノ酸）；アスパルテートおよびグルタメート（酸側鎖を有するアミノ酸）;アスパラギンおよびグルタメート（アミノ側鎖を有するアミノ酸）、シスチンおよびメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）がある。このように、「誘導体」の用語には、或るアミノ酸配列の変種であって、該配列に対する一以上の「保存的」変化を含んだ変種も含まれ得るものである。本発明は、本発明による結合性物質の断片またはその誘導体であって、その結合活性を依然として保持している断片をも含むものである。好ましい断片は、少なくとも１０アミノ酸の長さを持つものであるが、もつと長くてもよい（たとえば、５０または１００アミノ酸の長さ）。本発明の結合性物質は幾つかのヒト疾患の治療または予防に有用であると信じられており、これら疾患には関節炎、紅斑性狼瘡、マシモトス(mashimotos)甲状腺炎、多発性硬化症、糖尿病、ブドウ膜炎、皮膚炎、乾癬、じんま疹、ネフローゼ症候群、糸状体腎炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローエン(Crohn's)症、ショグレン(Sjogren's)症候群、アレルギー、喘息、関節炎、湿疹、ＧＶＨ、ＯＰＤ、インスリン炎、気管支炎（特に慢性気管支炎）、糖尿病（特に、タイプ１糖尿病）が含まれる。それらは、ＣＤ２３と様々なリガンド間の相互作用、例えばＣＤ２３とＣＤ２１との間、ＣＤ２３とＣＤ１１ｂとの間、ＣＤ２３とＣＤ１１ｃとの間、ＣＤ２３と上記７０〜８５ＫＤａの内皮細胞蛋白（８０または８５ＫＤａ内皮細胞蛋白でもよい）との間、またはＣＤ２３と１１５ＫＤａ内皮蛋白（７０〜８５ＫＤａ内皮蛋白に関与すると信じられる）との間の相互作用を研究するのに有用であろう。一以上の上記相互作用がインビボで生じると信じれらている。これらの相互作用を阻止できる抗体または他の結合性物質は、特に好ましい。何故なら、これら抗体等は、サイトカイン媒介炎症効果を低減または軽減する上で特に適切であると信じられているからである。また、それらはＢ細胞悪性腫瘍、たとえば、慢性リンパ性白血病、毛髪細胞白血病に対しても有用である。本願の結合性物質は、特にリュウマチ様関節炎の治療および予防に使用される。理論に拘泥するものではないが、下記の説明が可能である。リュウマチ様関節炎症滑膜において、マクロファージはＣＤ２３並びにβ₂インテグリンＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃの両方を発現し、この組織において可能な同型相互作用を引き起こすことができる。更に、可溶性ＣＤ２３分子の滑膜への拡散、およびそのインテグリン・リガンドへの結合もまた可能である。それゆえ、陽性活性ループを含むＣＤ２３-ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１１ｃの相互作用が、インビボで起こり得る。それがリュウマチ様関節炎患者に存在するならば、疾患の悪化、および慢性化の病因機構の幾つかを説明できるであろうし、また関節に局在化したときに、マクロファージ自身がＣＤ２３分子、β₂−インテグリンＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃ、並びに前炎症性サイトカインＴＮＦ−α、ＩＬ−１β およびＩＬ−６が関与する経路を通じて炎症を維持したり、悪化させたりすることができるという仮説が支持されることになるであろう。本発明者らは、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃと結合するＣＤ２３がＸ因子によって阻止されることを発見したが、これはＸ因子がＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃに結合するからである。このように、本発明は、ＣＤ１１ｂおよび／またはＣＤ１１ｃに結合するＣＤ２３を阻止するための、Ｘ因子またはその断片の使用を包含する。抗ＣＤ２３治療のもう一つの作用機構には、ＩｇＥ免疫反応を阻止することが包含される。先に公表された研究において、抗ＣＤ２３抗原でラットのインビボ処理を行なうと、おそらくはＩｇＥにコミットされたＢ細胞の完璧な分化に必要なＣＤ２３ −ＣＤ２１相互作用を阻止することによって、ＩｇＥ生産の抗原特異的阻止が行われる事が示された（Flores-Romo et al.,Science 261,1038-1041(1993)）。本発明は、このような反応を阻止する、ＣＤ２１に対する結合性物質（例えばエプスタイン・バーウイルスまたはその一部）をも包含する。構造的には、ＣＤ２１蛋白は、１５のヒトＢリンパ球の細胞外ドメイン(Moore et al.，「ヒトＢリンパ細胞のエプスタイン・バー・ウイルスＣ３ｄ受容体（補体受容体タイプ２）をコードするｃＤＮＡの分子クローニング」(Proc Natl A cd Sci USA 84、9194(1987))、または「短コンセンサス・リピート（ＳＣＲｓ）」と呼ばれる６０〜７５アミノ酸からなる１６の繰り返し単位（Weis et al．「Ｃ３ｄ、エプスタイン・バー・ウイルスに対するヒトＢリンパ細胞受容体の構造、およびＣ３／Ｃ４結合蛋白のファミリーの他のメンバーに対する関係」，J Ex p Med 167:1047(1988)）で構成され、その後に膜貫通ドメイン（２４アミノ酸）および３４アミノ酸の細胞質内領域が続く。細胞質外ＳＣＲｓが欠損したＣＤ２１変異物（Carel et al．「Ｃ３ｄ／エプスタイン・バー・ウイルス受容体（ＣＲ２／ＣＤ２１）リガント結合、内面化、およびウイルス感染に対する構造的要求」、J Biol Chem 265,12293(1990)）を使用して、本発明者らは、ＣＤ２３がＣＤ２１上のＳＣＲｓ５〜８および１〜２に結合することを最近発見した。ＳＣＲｓ５〜８に対するＣＤ２３の結合は、Ａｓｎ２９５および３７０上の炭水化物を包含するレクチン様相互作用である。対照的に、ＳＣＲｓ１〜２へのＣＤ２３結合は、蛋白−蛋白の相互作用である（Aubry et al．「Ｄ２３は、ＣＤ２１上のＮ−リンクオリゴサッカライドを含む新規機能性細胞外ドメインと相互作用する」、J.Immunol 152:5806(1994)）。本発明者らは、ＣＤ２１の他のリガンド（ＥＢＶ，Ｃ３ｄ，ＩＦＮ−α）による、ＣＤ２１へのＣＤ２３の結合に対する効果およびＩＬ−４の存在下でのＩｇ産生の調整に対する効果について現在テストを行っている。ＥＢＶ粒子およびＥＢＶ起源のペプチドのみが、ＣＤ２１へのＣＤ２３の結合を阻止できた。更に、ＥＢＶ−ペプチドはＩｇＥおよびＩｇＧ４産生を選択的に減少させ、ＩｇＭ産生を増加させた。これらのデータによって、ＣＤ２１上のＥＢＶ結合部位へのＣＤ２３の結合が、ＩＬ−４存在下でのヒトＩｇ産生を選択的に調節することが示される。従って、本発明はＣＤ２１に対するＣＤ２３の結合を阻止するために、エプスタイン・バー・ウイルスまたはその一部を使用することをその範囲に包含する。エプスタイン・バー・ウイルスの一部は、好ましくは糖タンパクｇｐ３５０／ｇｐ２２０またはその断片である。或いは、この糖蛋白の未糖化型またはその断片を使用してもよい。ここでも理論に拘泥するものではないが、本発明は前炎症性サイトカインのデノボ合成を抑制することによって、効果的な治療を達成することを可能にするものと思われる。これは、炎症組識にすでに存在するサイトカイン分子を単に直接中和する従来の抗体使用とは対照的である。なお、当該分野において、多数の抗体、ならびにこれら抗体が治療に有効であるといわれる多くの可能な疾患を列記した推論的な出版物があるが、その可能な組み合わの殆どについて、適切な証拠またはデータは提供されていない。このような出版物の一つはＷＯ０９３／０２１０８であり、これは主に特殊なキメラ抗体の産生に向けられている。本発明は、特定の分子に対する結合性物質を提供しており、また、ここで提示するデータおよび説明を考慮すれば、これら物質は一定の疾病の治療または予防における有用性が明瞭に示されているいる点において、このような出版物とは明らかに異なるものである。本発明の結合性物質はまた、非ＩｇＥ媒介性疾患を含むアレルギー疾患の治療または予防にも、特定の用途を有している。本発明の結合性物質は、潰瘍性大腸炎の治療および予防に使用され得る。本発明の結合性物質はまた、クローエン疾患(Crohn'disease)の治療および予防にも使用され得る。本発明の結合性物質は、単独で用いてもよく、またはステロイド、シクロポリン等の免疫抑制剤、または抗リンパ球抗体等の抗体と組み合わせて、より好ましくは耐性誘発剤、抗自己免疫剤または抗炎症剤と組み合わせて用いてもよい。これには、ＣＤ４＋Ｔ細胞阻止剤（例えば抗ＣＤ４抗体（好ましくは、ブロキング抗体または非枯渇性抗体）、抗ＣＤ８抗体、ＴＮＦ拮抗剤（例えば、抗ＴＮＦ抗体）またはＴＮＦ阻害剤（たとえば、可溶性ＴＮＦ受容体またはＮＳＡＩＤｓ等の薬剤）が含まれる。本発明の結合性物質は、通常は滅菌された薬学的に許容され得る組成物の一部として供給される。この薬学的組成物は、患者に対する望ましい投与法に応じて、如何なる適切な形態であってもよい。単位投与形態で提供されてもよく、キットの一部として提供されてもよい。このようなキットには、通常（必ずしもではない）使用の指示が含まれている。結合性物質の投与は、一般的には非経腸的に投与され、例えば、静脈内、筋肉内、または皮下に投与される。該結合性物質は、通常、注射または点滴によって投与される。このような目的のため、結合性物質は、薬学的に許容され得るキャリアまたは希釈剤を含む薬学的組成物中に製剤化される。適切なキャリアまたは希釈剤（例えば等張食塩水）なら何でも使用することができ、例えば等張生理食塩水溶液が挙げられる。銅に誘発される開裂を回避するために、金属キレート剤等の安定剤を加えてもよい。適切なキレート剤は、ＥＤＴＡ，ＤＴＰＡまたはクエン酸ナトリウムであろう。上記の結合性物質は経口的に、或いは、呼吸器系疾患では特にスプレイで経鼻腔的に投与される。該結合性物質は、特に皮膚疾患を治療するためには、クリームまたは軟膏として製剤化されてもよい。それらは、春季カタル(vemal conjunctivitis)等の疾患の治療用に用いるために、眼下投与用の点眼薬として製剤化されてもよい。注射可能な溶液として、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油等をはじめとする賦形剤を使用してもよい。薬学的組成物には、保存剤、溶解剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香料、塩（本発明の物質自身、薬学的に許容され得る塩の形で投与されてもよい）、緩衝剤、コーテング剤または、抗酸化剤を含んでいてもよい。薬学的組成物は、また、治療学的に活性な他の薬剤を含んでいてもよい。本発明物質の適切な投与量は、治療すべき疾患または疾病、投与経路、被治療者の年齢および体重等の因子によっても異なる。何れかの特定の投与量に拘束されることなく、例えば非経口投与については、本発明の結合性物質(通常は、上記のように薬学的組成物の一部として存在する)の１日投与量0.01-50mg/kgが、典型的成人を治療するのには適切であろう。より好ましくは0.05-10mg/kg、例えば0.1-2mg/kgのようなの投与量が適切である。この投与量は、適宜頻繁に繰り返し投与してもよい。一週間に７回の投与が一般的であろう。もし、副作用が起こったら、投与量および／または投与頻度を減らすことができる。薬学的組成物に配合する典型的な単位投与量は、少なくとも結合性物質が１mg 、適切には、1〜1000mgである。次のような試験も、本発明の範囲に含まれる。第一は、内皮細胞上に発現されるＣＤ２１,ＣＤ１１ｂ,ＣＤ１１ｃまたは、７０〜８５または１１５ＫＤａの蛋白と結合する特定の物質が、炎症、自己免疫疾患、アレルギー性疾患等の炎症の治療に有効であるか否かを決定するための試験である。第二は、該物質が、ＣＤ２３とＣＤ１１ｂとの相互作用、ＣＤ２３とＣＤ１１ｃとの相互作用、ＣＤ２３とＣＤ２１との相互作用、ＣＤ２３と内皮細胞上に発現される７０〜８５ＫＤａもしくは１１５ＫＤａ蛋白との相互作用を阻止できるか否かを決定するための試験である。この試験は、適切な分子を発現する細胞系を使用することによって、化合物または分子をスクリーニングするために使用できる。好ましくは、ＣＤ１１ｂはＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８として用いられ、またＣＤ１１ｃはＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８として使用される。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８は、細胞表面に同時発現することができる。例えば、蛋白−非蛋白分析（蛋白と化合物または糖との相互作用を分析する）、蛋白−蛋白分析、または蛋白−細胞分析等のように、適切な如何なる試験技術をも使用することができる。次に、単なる例示としてのみ添付した図面を参照して、本発明を説明する。図１ａは、ＣＤ１４陽性血液単核細胞と結合しているＣＤ２３リポゾームを示す。図１ｂは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上においてアフィニティー精製された種々のＣＤ２３蛋白を示す。図２は、一定のモノクローナル抗体を使用して得た活性化された血液単核球に結合するＣＤ２３リポゾームの阻害パーヤンテージを示す。図３は、種々のトランスフェクトとされた細胞に対するＣＤ２３リポソームの結合を示す。図４は、ＣＤ１２−ＣＤ１１ｂ相互作用およびＣＤ２３−ＣＤ１１ｃ相互作用に対する、種々の物質の効果を示す。図５は、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃに結合するＣＤ２３によって引き起こされる、単核球における亜硝酸塩産生および酸化バーストに対する効果を示す。図６は、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃへの組み換えＣＤ２３の結合が、単核球によるサイトカインの産生を増加させることを示す。図７ａは、種々のＣＤ２１リガンドによる、ＲＰＭＩ８２２６細胞へのＣＤ２３-リポソームの結合阻害を示す。図７ｂは、ＣＤ２１に結合するＥＢＶペプチドによる、ＩＬ−４に誘導されたＩｇＥ産生およびＩｇＧ４産生の阻害を示す。図７ｃは、ＣＤ２１に結合するＥＢＶペプチド結合による、イムノグロブリン産生の調節を示す。図７ｄは、ＣＤ２１に結合するＣ３ペプチドによって、ＩｇＥ産生阻害が起こらないことを示す。図８は、抗ＣＤ２３ＭＡｂの存在に起因した、ＣＤ２３リポソームの一定の内皮細胞に対する結合阻害を示す。実施例下記の実施例の幾つかにおいて、「ip」、「id」および「n」の用語が使用されている。これらは「腹腔内」、「皮内」、「動物数」を夫々示している。実施例１〜６ＣＤ２３とＣＤ１１ｂ、およびＣＤ２３とＣＤ１１ｃとの相互作用実施例１〜６および添付図面（後述部参照）は、ＣＤ２３とＣＤ１１ｂおよび／またはＣＤ１１ｃとの相互作用を示す。これらの実施例において、蛍光リポソーム中に取り込まれた完全長の組み換えＣＤ２３は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８またはＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８の何れかをコードするｃＤＮＡを形質導入されたＣＯＳ細胞には結合するが、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８を発現する形質導入体には結合しないことが分かった。ＣＤ２３リポソームと、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８またはＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８を形質導入されたＣＯＳ細胞との間の相互作用は、それぞれ抗ＣＤ１１ｂまたは抗ＣＤ１１ｃによって、および抗ＣＤ２３モノクローナル抗体によって特異的に阻害された。このリガンド・ペアリングの機能的重要性は、組み換えＣＤ２３または抗ＣＤ１１ｂおよび抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体の何れかを用いて単核球上のＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃをトリガーすることによって、亜硝酸イオン（ＮＯ₂）、酸化生成物（Ｈ₂Ｏ₂）および、前炎症性サイトカイン類(ＩＬ−３，ＩＬ−６およびＴＮＦα)の著しい増大が引き起こされた事実により実証された。これらのＣＤ２３に媒介される活性は、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃおよびＣＤ２３に対するモノクローナル抗体のＦａｂ断片によって低減された。これらの結果によって、表面接着分子ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃは、ＣＤ２３に対する受容体であり、また、この新規のリガンドペアリングが、単核の重要な活性を調節することが実証された。下記の考察では、実験デザインおよび実施例１〜６（下記）の背景にある理論的根拠を簡単に説明する。全血液単核細胞を、蛍光リポソーム中に取り込まれた組み換え完全長ＣＤ２３と共にインキュベートし、フローサイトメトリー（Pochon,S et al.J.Exp.Med.1 76,389-398(1992)）で分析した。ＣＤ２３リポソームに結合した分画（実施例１、図１ａ）は、二重染色で可視化することによって、ＣＤ１４陽性細胞（すなわち単核球）からなることが示された。単核球がＣＤ２３リポソームを結合できることを確かめるために、血液単核細胞は、ＦＡＣＳによってＣＤ１４陽性細胞集団とＣＤ１４陰性細胞集団とに選別された（実施例１、図１ａ）。ＣＤ２３-リポソームは、ＣＤ１４陽性細胞集団にのみ結合することが分かった（実施例１、図１ａ）。単核球は、ＣＤ２３の既知のリガンドである膜ＩｇＥおよびＣＤ２１ (表示せず)の何れをも発現しないことがわかったので、単核球がＣＤ２３の別の受容体を発現するかどうかを調査した。単核球を細胞溶解させ、細胞抽出物を可溶性の組み換えＣＤ２３を結合させたアフィニティーカラム上で精製した。抽出された物質のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび銀染色分析を行い、約８０および１６０ｋＤａ分子量のバンドがあることが解明された（実施例１、図１ｂ）。この分子量範囲内の抗原を認識し、かつ単核球上に発現されると報告されている抗体についを、その抗体の単核球に結合するＣＤ２３リポソームを阻害する能力を調べるために、ＦＡＣＳによるテストを行った（実施例２、図２）。抗ＣＤ１１ｂおよび抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体は、効力の程度は異なるが、共に単核球に結合するＣＤ２３−リポソーム結合を阻害した（実施例２、図２）。抗ＣＤ１３、抗ＣＤ４９ｄ，抗ＣＤ２１（単核球上では発現されない）および抗ＣＤ１１ａ（接着分子β２インテグリン族の第三メンバー）は、有意な効果を示さなかった（実施例２、図２）。ＭＨＣクラスI、クラスII、ＣＤ１４、およびＣＤ４５の夫々に対する抗体（すべて単核球上で高度に発現する）についても、それらのＣＤ２３リポソーム結合に対する効果をテストした。しかし、どれも効果は見られなかった(表示せず)。抗ＣＤ１８モノクローナル抗体は、ＣＤ２３結合に対する部分的阻害を示した。これは、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃ分子中の立体障害か、あるいは抗ＣＤ１８Ｍａｂ結合すると同時に構造変化が誘導されたことによるものであろう。ＣＤ２３アフィニティーカラムから抽出された該単核球起源の蛋白は、抗ＣＤ１１ｃ（実施例１、図１ｂ）および抗ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８抗体(表示せず)との免疫反応性を有していた。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１１ｂのα鎖が、ＣＤ２３の受容体であることを確認するために、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃをコードする完全長ｃＤＮＡｓが、ＣＤ１８ｃＤＮＡと共にＣＯＳ細胞中に一時的に形質導入された。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８を発現する形質導入体は、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８(実施例３、図３)を発現する形質導入体とは対照的に、共にＣＤ２３リポソームを結合することがわかった。これは、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃ間の相同性の程度が、ＣＤ１１ａに対するこれらの相同性よりも高いことによって説明され得る。この相互作用の特異性は、抗ＣＤ１１ｂモノクローナル抗体、抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体および抗ＣＤ２３モノクローナル抗体を使用することによるＣＤ２３リポソーム結合の阻害によって実証された。同様の結果が、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８(表示せず)を発現するＢＨＫ細胞を使用して得られた。更に、ＣＤ２３相互作用の特異性の証拠として、βサブユニットをコードする遺伝子中の変異によってβ２インテグリン発現を欠失している、白血球接着欠陥患者由来の活性化された血液単核球は、ＣＤ２３リポソーム(表示せず)を結合することができなかったことがあげられる。これらのデータを併せて考慮すると、ヒト正常単核球および形質導入体上において、ＣＤ２３がＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃと相互作用することが実証される。ＣＤ１１ｂおよびCＤ１１ｃは、多くの細胞-細胞間相互作用および細胞-マトリックス間の相互作用に関与する接着分子である。これらの実施例によって、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８は、ＣＤ２３に結合できることによって付加的な接着作用を示すことが分かる。ＣＤ２３は、Ｘ因子に近似したエピトープまたは同一のエピトープを認識すると思われる。このことは、単核球 (表示せず)上でのＣＤ１１ｂまたはＣＤ１１ｃの表面発現に影響を与えずに、投与量に依存してＣＤ２３リポソーム結合（実施例４、図４）を阻害することができるＸ因子の能力から分かる。テストした他のリガンドは何の影響も示さなかった。ＣＤ２３は、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃとの相互作用においてＣタイプのレクチンとして作用するのかも知れない。ＥＤＴＡは、ＣＤ２３の結合に必要なＣａ²⁺をキレートすることによって、および／または、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃとリガンドとの結合に必要な二価のカチオンをキレートすること（Altier i,D.C.J.Immunol.147,1891-1898(1991)）によって、単核球に対するＣＤ２３の結合を減少させる(実施例４、図４)。ノイラミニダーゼではなくツニカマイシン (tunicamycin)が単核球へのＣＤ２３の結合を低下させる能力を有することから分かるように、ＣＤ２３−ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１１ｃの相互作用には、シアル酸ではなく糖が関係するようだ。ＣＤ２３は、細胞外に、インテグリン受容体の共通認識部位とは逆方向に、アミノ酸トリプレット（Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ）(Kik utani,H.et al.Cell 47,867-885(1986))を有している。そこで、このトリプレットと相対して向けられたポリクローナル抗体の効果を、単核球に対するＣＤ２３の結合を阻害するその能力についてテストした。阻害は観測されず、フィブリノーゲンによる阻害もないことが確認された（実施例４、図４）。ＣＤ２３のレクチン・ドメインにおいて結合しているＩｇＥは、単核球に対するＣＤ２３の結合を部分的に阻害する（実施例４、図４）。ＣＤ２３とＣＤ２１との相互作用について観測されてきたことを想起すると、これらの結果は、ＣＤ２３が部分的に糖および蛋白構造を認識するＣタイプ・レクチンとして作用しているように見えることを示している（Aubry,J-P,et al.J.Immunol.152,58065813(1994)）。ＣＤ２３とＣＤ１１ｂまたはＣＤ１１ｃとの相互作用の機能的重要性を評価するために、我々は、ＣＤ２３−ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１１ｃの相互作用が、単核球をトリガーして、一酸化窒素、Ｈ₂Ｏ₂およびびサイトカイン等の前炎症媒介物質を分泌させるかどうかを調査した。可溶性の組み換えＣＤ２３、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または抗ＣＤ１１ｃ抗体を用いて正常単核球をトリガーすると、二酸化窒素の発生が増加し、一酸化窒素の経路の活性化がしめされた(Moncada,S.,Palmer,R.M .J.& Higgs,E.A.Pharmacol.Rev.43,109-144(1991))。亜硝酸塩産生におけるＣＤ２３の効果は、抗ＣＤ２３モノクローナル抗体のＦａｂ断片およびニトロアルギニン（一酸化窒素合成経路の特異的阻害剤）によって阻害された（実施例５、図５）。酸化的バーストもまた、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃを通じて調節されることが分かった。というのは、単核球中において、可溶性の組み換えＣＤ２３、抗ＣＤ１１ｂ抗体および抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体が、全てヒドロエチジンの臭化エチジウムへの酸化を引き起こしたからである（実施例５、図５ｂ）。これは、抗ＣＤ１１ｂモノクローナル抗体が単核球において酸化的バーストを誘導するという知見を確認しかつ発展させるものである（Trezzni,C.,Schue pp,B.,Maly,F.E.& Jungi,T.W.Brit.J.Haematol.77,16-24(1991)）。ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃに対して結合するＣＤ２３は、血液単核球中の初期の特異的Ｃａ²⁺流入に関係している（表示せず）。活性化されたマクロファージは、前炎症性サイトカイン重要な供給源であるので、我々は、単核球によるこのようなサイトカイン産生についての可溶性組替えＣＤ２３、並びに抗ＣＤ１１ｂモノクローナル抗体および抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体の効果を評価した。可溶性組み換えＣＤ２３、抗ＣＤ１１ｂ、および抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体は、ＩＬ−１β、ＩＬ６、およびＴＮＦαの効果的な刺激物質であった。再び、抗ＣＤ１１ｂモノクローナル抗体、抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体および抗ＣＤ２３モノクローナル抗体のＦａｂ断片を使用することによって、誘導の特異性が実証された（実施例６、図６）。面白いことに、ＩＬ−１およびＴＮＦαは、ＣＤ２３リポソームの単核球に対する結合を誘導するに効果的な物質であった。これによって、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃの刺激および調節を介するサイトカイン自己分泌ループの可能性が示唆されるた。実施例１ａ）ＣＤ２３リポソームは、ＣＤ１４陽性血液単核細胞に結合する（図１ａ参照）血液単核細胞を抗ＣＤ１４モノクローナル抗体（Becton Dickinson Erembodeg em,Belgium）で染色し、続いて、ヒツジＦＩＴＣに結合された、マウスＩｇＧおよびＩｇＭ（Bioart,Meudon,France）に対するＦ（ａｂ'）₂抗体で染色して、ＣＤ１４陽性およびＣＤ１４陰性細胞集団にＦＡＣＳ選別した(F ACStar Plus Becton Dickinson)。上記抗体は、ＰＢＳ，0.5％BSA,および0.05％の窒化ナトリウム中に希釈して用いた。次いで、選択された細胞は0.5％BSA、0.1 ％の窒化ナトリウム、2mM CaCl₂,140mM NaCl,20mM ヘペス(Hepes),pH7で希釈されたＣＤ２３-リポソームまたは対照（グリコホリンＡ）-リポソームで染色され、２時間４℃（Pochon,S.et al.J.Exp.Med.176 389-398(1992)）インキュベートされた。洗浄後、細胞（5,000事例／コンデイション）をＦＡＣＳで分析した。ｂ）ＣＤ２３親和精製血液単核球蛋白の見かけ分子量および抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体による免疫反応性（図１ｂ参照）血液単核細胞の溶解物を、ＣＤ２３カラム上でアフィニティー精製し、抽出蛋白をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離し、ニトロセルロース上に移した。分子マーカーを左側に示した。該ゲルを銀染色した（左のレーン）。フィルターを、アイソタイプ適合抗体（真中レーン）または抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体（ＢＵ１５、右レーン）の何れかと共にインキュベートし、次にホースラデイッシュ・パーオキシダーゼ結合ヒツジ抗マウス抗体(Kpl;Gaithersburg,assachusetts)と共にインキュベートした。実施例２抗ＣＤ１１ｂおよび抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体は、活性化された血液単核球に対するＣＤ２３リポソームの結合を低減する（図２参照）単核球を単核細胞からフィコールで濃縮し、２ｍＭのグルタミンおよび１０％の熱失活させたＦＣＳ(Flow Laboratories,Irvine，Scotland)を補給したＲＰＭＩ１６４０(Seromed,Berhn Germany)中で、一晩,プラスチックに接着させた。次に、活性化された単核球を異なるモノクローナル抗体（αＣＤ）またはアイソタイプが適合した対照（ＣＴＲＬ）(Becton Dickinson)の存在下において、ＣＤ２３-リポソームと共にインキュベートし、その全てを1０μｇ／ｍｌでテストした。抗ＣＤ１１aモノクローナル抗体25.3、およびＢ−Ｂ１５は、イムノテック（Luminy,France)およびセロテック(Oxford,UK)より夫々入手した。抗ＣＤ１１ｂモノクローナル抗体４４はセロテックから、モングラン1(mon.gran 1)はジャンセン(Janssen)(Beerse,Belgium)から、Ｌｅｕ−１５はベクトン・デイッキンソン（Becton Dickinson）(Erembodegem,Belgium)から、また（Bear1）はセララボ（Sera-lab Ltd）(Sussex GB)から入手した。抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体3.9はセロテックから、ＳＬ９はセララボから、ＢＵ−１５はザ・バインディングサイト(The binding Site)(Birmingham)から入手した。抗ＣＤ１３（ＳＪ１Ｄ１）モノクローナル抗体、抗ＣＤ１８（ＢＬ５）モノクローナル抗体、抗ＣＤ２３（ｍＡｂ２５）モノクローナル抗体および抗ＣＤ４９ｄ（ＨＰ２．１）モノクローナル抗体はイムノテックから入手した。抗ＣＤ２１モノクローナル抗体ＢＬ１３はイムノテックから、ＯＫＢ７はオルト社(Ortho)から、ＢＵ−３３はマックレナン氏(Dr.MacLennan)(Birmingham,University,UK)から、ＨＢ−５はＡＴＣＣから，ＯＫＢ７は、オルト診断システム社(Ortho Diagnostic System I nc)(Raritan,NJ)から入手した。抗ＣＤ１４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ１６および抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、ベクトン・デイッキンソン社から入手た。細胞をＦＡＣＳで分析し、平均の蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した。代表的な実験データを提示する。コントロールリポソームで染色された細胞のＭＦＩは６．５であり、ＣＤ２３リポソームで染色された細胞のＭＦＩは８４．５であった。算術線形ＭＦＩ値を使用した阻害パーセントは、下記式によって計算された。実施例３ＣＤ２３リポソームは、組み換えトランスフェクタント上のＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８のα鎖に結合する（図３参照）ＣＤ１１ａをコードするｃＤＮＡ（Corbi,A.L.Miller,L.J.,O'Connor,K.Larso n,R.S.& Springer,T.A.EMBO J.6,4023-4028(1987)）を、ｐＣＤＮＡ１(Invitrog en,San Diego,CA)中に再クーロン化した。ＣＤ１１ｂのｃＤＮＡ(Corti A.L.,Ki shimoto,T.K.Miler,L.J.& Springer,T.A.J.Biol.Chem.263 12403-12411(1988)) およびＣＤ１８（Kishimoto,T.K.O'Oconnor,K,Lee,A.Roverts,T.M.& Springer,T .A.Cell 48,681-690(1987))は、ｐＣＤＭ８（Seed,B..,Nature 329 840-842(198 7)）中に再クローン化された。ＤＮＡのアリコット２０μｌを、Gene Pulser機（Bio-Rad,Richmond,CA）および０．４ｃｍキュベットを使用した電気穿孔法（２６０Ｖ，９６０μＦＤ）により、２０ｍＭヘペス(Hepes)ｐＨ７．４，１５０ｍＭ、ＮａＣｌ中で、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ）に形質導入した。β２インテグリンの該細胞表面での発現を得るために、ＣＤ１１ａ、ｂ、ｃをＣＤ１８と共に同時形質導入した。対照は、単一鎖の形質導入で行った。形質導入の４８時間後に、ＣＯＳ細胞を抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１１ｂ、および抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体で染色するか、或いはアイソタイプ適合モノクローナル抗体（コントロール）で染色し、ＦＩＴＣでラベルしたヒツジ抗マウス抗体で染色した。夫々のモノクローナル抗体で染色することによって、１０〜１５％の細胞が、ＣＤ１１ａ，ｂ，ｃ，またはＣＤ１８を発現することがわかった。ＣＤ２３リポソームで染色する前に、β２インテグリンを発現する細胞のパーセンテージを高めるために、ＣＤ１８陽性トランスフェクトされたＣＯＳ細胞がＦＡＣＳ選別された。次に、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８，ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８，およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８形質導入体を、ＣＤ２３リポソーム（トレース２）または対照（グリコホリンＡ）-リポソーム（トレース１）と共にインキュベートした。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８形質導入体およびＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８形質導入体に対するＣＤ２３リポソームの結合が、抗ＣＤ１１ｂモノクローナル抗体（トレース４）、抗ＣＤ２３モノクローナル抗体（トレース５）および抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体（トレース６）を使用して夫々阻止されたことにより、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃとＣＤ２３との相互作用の特異性が実証された。ＣＤ２３リポソームの結合は、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８形質導入体上では観測されなかった。抗ＣＤ１１ａモノクローナル抗体の効果は見られなかった（トレース３）。実施例４ＣＤ２３−ＣＤ１１ｂ，ＣＤ１１ｃの相互作用の構造的特徴（図４参照）（ａ）糖および二価のカチオンの関与精製された活性化血液単核球を、ツニカマイシン（１０μｇ／ｍｌ）で４８時間、またはノイラミナーゼ（０．１Ｕ／ｍｌ；両者共Boehringer Mannheim,Mann hein,Germany）で４５分処理処理し、または未処理のままとした。次に、細胞はＣＤ２３リポソームまたは対照リポソームと共に、ＥＤＴＡ（５ｍＭ，上左パネル）、Ｃａ²⁺、Ｍｎ²⁺（１−１０ｍＭ，上右パネル）の存在または非存在下でインキュベートされた。（ｂ）Ｘ因子は、ＣＤ２３の単核球に対する結合を阻止しない精製され活性化された血液単核球を、Ｘ因子（０．１−１０Ｕ／ｍｌ、シグマ）（下左パネル）、フィブリノーゲン（５０μｇ／ｍｌ、シグマ）、精製された組み換えＩＣＡＭ−１（我々の実験室で生産）、ＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ、シグマ）、ヒト血清オプソニン化されたザイモサン（１ｍｇ／ｍｌ;シグマ）、ＩｇＥ（５０μｇ／ｍｌ；The binding Site Bimingham）またはＲＧＤペプチドに対するポリクローナル抗体（１／５００，ＡＴＣＣ）（下、右パネル）の存在下または非存在下で、ＣＤ２３リポソームと共にインキュベートした。細胞をＦＡＣＳで分析し、ＭＦＩを測定した。阻止パーセンテージは、実施例２と同様に計算された。実施例５組み換えＣＤ２３は、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃと特異的に結合させることによって、単核球によるａ;窒化物、ｂ;酸化的バーストを増加させる単核球をa;４日間、３７℃、またはb;一晩、可溶性組み換えＣＤ２３（Graber P.et al.,J.Immunol.Methods 149 215-226(1992)）（５０ｎｇ／ｍｌ）、抗ＣＤ１１ａ（クローン２５．３）、抗ＣＤ１１ｂ（クローン４４）、抗ＣＤ１１ｃ（クローンＢＵ−１５）モノクローナル抗体（すべて、１０μｇ／ｍｌで）の存在下または非存在下でインキュベートした。産生した一酸化窒素の量（図５ａに示す）を評価するために、文献(Green et a l.,Annu Rev..Immonol.2,199-218(1984))に従い、安定な最終産物ＮＯ，ＮＯ₂ ^- 、ＮＯ₃ ^-について培養上清を試験した。ＣＤ２３に媒介されるＮＯ₂ ^-産生の増加は、抗ＣＤ２３モノクローナル抗体（ｍａｂ２５）（１０μｇ／ｍｌでテストされた）のＦａｂ断片によるＮＯ₂ ^-産生の阻害、およびニトロアルギニン（Ｎ-Ａｒｇ１ｍＭ）（シグマ社）によるに阻害によって実証された。活性化された単核球は、ヒドロエチジン(Molecular probes,Eugiene,OR)（０. ３μｇ／ｍl）と共に３７℃で３０分インキュベートされ（Rothe G.et al.,J.Le ukoc.Biol.47 440-448(1990)）、ＦＡＣＳで分析された。刺激された単核球の赤蛍光の増加パーセンテージは、未処理の単核球と比較して示される（図５ｂ参照）。酸化バーストの起こった単核球は、未処理の単核球に比べて赤蛍光信号の増加が見られ、これはヒドロエチジンの臭化エチジウムへの酸化を反映している（ Lacal,P.M.et al.Biochem.J.268 707-712(1990)）。単核球のＭＦＩ値のみ、１５９＋／−１０であった。６実験の平均＋／−ＳＤ値を提示してある。単核球で呼吸バーストを誘導することが知られているＣｏｎＡは、陽性対照として使用された。ＣＤ２３とＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃとの相互作用の特異性は、抗ＣＤ１１ｂモノクローナル抗体（クローン４４）、抗ＣＤ１１ｃモノクローナル抗体（クローンＢＵ−１５）および抗ＣＤ２３モノクローナル抗体（ｍＡｂ２５）（１０μｇ／ｍｌでテストされた）のＦａｂ断片によって、ＣＤ２３に媒介されるＨ₂Ｏ₂産生の増加が阻害されたことによって実証された。実施例６ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃに対する組み換えＣＤ２３結合によって、単核球のサイトカイン産生が特異的に増加する（図６参照）単核球を一晩、３７℃で、可溶性組み換えＣＤ２３（Graber P.et al., J.Immunol.Methods 149 215-226(1992)）（５０ｎｇ／ｍｌ）、抗ＣＤ１１ａ（クローン２５．３）、抗ＣＤ１１ｂ（クローン４４）、抗ＣＤ１１ｃ（クローンＢＵ−１５）、抗ＣＤ２３（ｍＡｂ２５，イムノテックより入手;公開ヨーロッパ特許出願EP-A-0269728で検討されている）、ＣｏｎＡ（シグマ）（すべて１０ μｇ／ｍｌ）、ＬＰＳ（１ｎｇ／ｍｌ）（シグマ）、又はＰＭＡ（５ｎｇ／ｍｌ）(Calbiochem,la Jolla,CA)の存在下または非存在下でインキュベートした。サイトカインを培養上澄み液中、特異的エライザ（ＥＬＩＳＡ）法によって測定した。エライザ法の感度の限界は、ＩＬ−１β（Ferrua et al.,J.Immunol.Method s 114 41-48(1988)）で０．０５ｎｇ／ｍｌ、TNFα(Medgenix,Biotechnie,Rungi s,F)で０．０１ｎg／ｍｌ、ＩＬ−６(Manie et al.,Eur Cytokine,Netw.4 51-56 (1993))で０．０１ｎｇ／ｍｌ未満である。ＣＤ２３とＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃの相互作用の特異性が、ＣＤ２３に媒介されるサイトカイン産生が、抗ＣＤ１１ｂ（クローン４）、抗ＣＤ１１ｃ（クローンＢＵ−１５）、抗ＣＤ２３（ｍＡｂ２５）モノクローナル抗体（1０μｇ／ｍｌでテストされた)のＦａｂ断片によって阻害されたことによって実証された。４実験の平均の＋／−ＳＤ値を提示してある。実施例７下記物質および方法が、この実験に使用された。細胞系ヒツジ赤血球によるロゼット形成によって、扁桃腺または単核球細胞をＴ細胞サブ集団およびＢ細胞サブ集団に分離した。該Ｂ細胞系ＲＰＭＩ８２２６は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection)(ATCC，Rockville,MD)から入手し、ＰＲＭＩ１６４０完全培地で培養した。ペプチドおよびＣＤ２１リガンドＣＤ２１に結合することが知られているＥＢＶｇｐ３５０およびＣ３（Servis et al．「Ｃ３合成ペプチドは、ヒトＣＲ２陽性リンパ芽球Ｂ細胞の成長を促す」， J.Immunol 142:2207(1989)）から、二つのペプチドを合成した。PepEBV(TGEDPGF FNVEIC-NH-2)を、FastMoc化学を使用したＡＢＩ４３１Ａ合成機で生産した。Pep C3(GKQLYNVEATSYAC-NH2)は、ネオシステム社(Strasbourg,France)から入手した。先に記載されているようにして（Carel et al.(1990)supra）、凝集Ｃ３ｄ、ｇを調製した。蔗糖勾配精製されたＥＢＶはアドバンストバイオケミストリーズ社(Columbia,ML)から入手し、またＩＦＮ−αはシグマ社(St Louis,MO)から入手した。リポソーム調製ＣＤ２３リポソームは、５０ｎモルの蛍光染料ＤｉＯ１８（Molecular Probes ,Eugene,OR）と混合された合成リン脂質ＰＯＰＣ（Avanti Polarlipids inc.Ala baster AL）１０μモルを使用して、先に記載されたようにして調製された(Poch on et al，「蛍光リポソームに再構築された組み換えＣＤ２３を使用したイムノグロブリンＥ（ＣＤ２３）の低親和性受容体の第二リガンドの実証」J.Exp Med 176;389(1992))。次に、精製組み換えＣＤ２３またはコントロール蛋白であるグリコホリンＡ（各０．２μモル）と共に、ヘペス(HEPES)緩衝液に対して透析された。フローサイトメトリーリポソーム結合分析細胞（１０⁵）をリポソーム懸濁液５０μｌ中に再懸濁し、0.5％BSA、0.1％のＮａＮ₃、2mM CaCl₂,140mM NaCl,20mMヘペス(Hepes),pH7中で１０倍に希釈し、4 ℃で２時間インキュベートした。ＦＡＣＳｔａｒｐｌｕｓ(Becton Dickinon Erembodeggen,Belgium)上での分析の前に、細胞を二回洗浄した。ＣＤ２３リポソームとＥＢＶ，ＥＢＶペプチフド、ＩＮＦ−α、Ｃ３ペプチド、およびＣ３ｄ、ｇとの競合ＲＰＭＩ８２２６細胞をグリコホリン・リポソームと共に、またはＣＤ２３リポソームおよびＥＢＶ（１ｘ１０⁵から１ｘ１０⁹粒／ｍｌ）、ＥＢＶペプチド、およびＣ３ペプチド(５０nMから５０μM)、凝集Ｃ３ｄ、ｇ（４ｎｇ／ｍｌから１μｇ／ｍｌ）、およびＩＮＦーα（１０００Ｕ／ｍｌ）と共に、２時間４ ℃で共インキュベートした。細胞は上記に記載したように分析された。ＩＬ４誘導Ｉｇ生産分析細胞を１０⁶／ｍｌで、１４日間トランスフェリン、牛インスリン、オレイン酸、リノレン酸、パルミチン酸、ＢＳＡ（全てシグマ社より）、および１０％ＦＣＳ（Flow Laboratories,Irvine,Scotland）を補充したイスコーブ(Iscove's) 培地中で、クラーセンら(Claassen et al.)（「組み換えインターロイキン４に誘導される単核細胞ＩｇＥ合成を高める細胞培養システム」、J.Immunol Method s 126;213(1990)）に記載されているようにしてインキュベートした。ＩＬ−４のみ（２００Ｕ／ｍｌ）またはIL-4＋抗ＣＤ４０（１μｇ／ｍｌ）（Serotec Lt d.Oxford,UK）と共に全ＰＢＭＮＣを使用して、あるいは、精製された扁桃腺Ｂ細胞をＩＬ−４および抗ＣＤ４０と共に使用して分析を行った。IgE，Ｇ，Ａ，およびＭを特異的エライザ法（ＥＬＩＳＡ法）によって、先に記載されているようにして定量した（Bonnefoy et al.，「抗ＣＤ２３／ＦｃエプシロンＲIIモノクローナル抗体サブセットによるヒトインターロイキン４の誘導されるIgE合成の阻害」、Eur I Immunol 20;139(1990)。ＩｇＧ４は、エライザ法で次のように測定した。重炭酸イオン緩衝液、ｐＨ９．６中に１０μｇ／ｍｌで希釈されたマウス抗ヒトＩｇＧ４抗体(Southern Biotechnology,Brimingham)を、９６ウエルのプレート（１００μｌ／ウエル）中において被覆を一晩行った。ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ（２００μｌ／ウエル）で２時間室温で飽和させた。テストサンプルをＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡおよび０．１％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（１００μｌ／ウエル）中で希釈し、一晩４℃で、インキュベートした。ＰＢＳ＋ツイーンで洗浄された後、ＰＢＳ／ＢＳＡ＋ツイーン中で1／５０００に希釈されたパーオキシダーゼでラベルされたシープ抗ヒトＩｇＧ４抗体（Vital products,St.Louis MO ）を１時間室温にて添加した。ＰＢＳ＋ツイーンで洗浄した後、o-フェニレン・ジアミン(Sigma)を添加し、比色反応を２ＭのＨ₂ＳＯ₄で停止させた。プレートを最終的に４９２ｎｍで読み取った。得られた結果を下記で考察したヒトＣＤ２１は、先に記載されたように、補体システムＣ３ｄ，ｇおよびｉＣ３ｂ蛋白の受容体であり（Weis et al，「ヒトＢリンパ球のＣ３ｄ受容体（ＣＲ２）としての１４５、０００分子量の膜蛋白の同定」、Proc Natil Acad Sci US A 81:881(1984)）、ＥＢＶのｇｐ３５０／２２のエンベロープ糖蛋白の受容体であり（Nemerow et al，「Ｂ細胞のＥＢＶ／Ｃ３ｄ受容体に対するＥＢＶ（エプスタイン・バー・ウイルス）の接着を媒介するウイルス性糖蛋白としてのｇｐ３５０の同定:ｇｐ３５０およびＣ３補体断片Ｃ３ｄの配列相同性」J.Virol 61:14 16(1987)；Tanner et al．「接着、キャッピング、エンドサイトシイスを媒介するＢリンパ球Ｃ３ｄ受容体に結合するエプスタイン・バー・ウイルスｇｐ３５０／２２０」、Cell 50 203(1987)）、またＩＦＮ−αの受容体である（Delcayre et al，「エプスタイン・バー・ウイルス／補体Ｃ３ｄ受容体は、インターフェロンα受容体である」EMBO J 10:919(1991)）。そこで、我々は、ＣＤ２１発現細胞、即ちＲＰＭＩ８２２６細胞に対するＣＤ２３リポソームの結合を阻止するそれらの能力について、これら全ＣＤ２１リガンドをテストした（Pochon et al (1992)上記）。ＥＢＶの完全な粒子は、その投与量に依存した形で、ＣＤ２１に対するＣＤ２３の結合を阻止できた。これは図７ａに示されており、この図は幾つかのＣＤ２１リガンドによって、ＰＲＭＩ８２２６に対するＣＤ２３リポソームが阻止されたことを示している。［ＲＰＭＩ８２２６細胞は、ＣＤ２３リポソーム又はグリコホリンーリポソーム、および種々の濃度のＥＢＶ（粒子／ｍｌ）、ＰｅｐＥＢＶ、およびＰｅｐＣ３（μＭ）と共に２時間、コインキュベートされた。阻害パーセントは下記のようにして計算される。グリコホリン-リポソームのＭＦＩは、ＣＤ２３-リポソームのＭＦＩから差し引かれた。挿入物＝グリコホリン・リポソーム（トレース１）又はＣＤ２３リポソームのみ（トレース３）、又はＥＢＶ粒子（上）、ＰｅｐＥＢＶ（中）、ＰｅｐＣ３（下）（トレース２）の存在下で染色されたＲＰＭＩ８２２６細胞のＦＡＣＳプロフィル。結果は、代表的な実験からとった］。ＣＤ２３リポソーム結合の阻止についてテストされた他のＣＤ２１のリガンドのうち、ＥＢＶのみがＣＤ２３の結合を低下させた。ＥＢＶは、ＣＤ２１のＳＣＲ２と結合するのに対して、ＳＣＲｓ５−８（この後部領域ではＣＤ２３が糖に結合している）には結合しないことが報告されているけれども、完全なＥＢＶ粒子によってＣＤ２３結合は完全に阻止されることが観察された（上記のAubry et al(1994)）。このＣＤ２３結合の完全な阻止は、ウイルス粒子のサイズによるか又は、ＥＢＶがＣＤ２１分子の形を変更できるという事実によるものであろう。この阻止が、ウイルス粒子による立体障害に起因することを除外するために、我々は、ＣＤ２１に結合することが知られているｇｐ３５０／２２０ペプチドの影響をテストした（Servis et al(1989)上記）。このＥＢＶペプチドは、その投与量に依存した形で、ＣＤ２１へのＣＤ２３の結合を最高５５％の阻害率で阻止できた（図７ａ）。これらの実験では、ＥＢＶペプチド結合がＣＤ２３結合部位に近いこと、およびＣＤ２３の結合を部分的にブロックすることが示唆される。これらのデータによって、ＣＤ２３がＣＤ２１に結合するという我々の先の知見が確認され（Aubry et al，「ＣＤ２１は、ＣＤ２３のリガンドであり、ＩｇＥの産生を調節する」Nature 358:505(1982)）、またＳＣＲ２が恐らくＣＤ２３と相互作用する領域であることを示して、その知見は更に発展された。これとは対照的に、Ｃ３ｄ上のＣＤ２１結合部位に対応するＣ３ペプチド（上記のServis et al(1989)）（図７ａ）は、凝集Ｃ３ｄ、ｇ、およびＩＦＮα（データ表示せず）は、ＲＰＭＩ８２２６細胞に対するＣＤ２３の結合を阻止することができない。このことは、ＳＣＲｓ１および３〜４（Ｃ３およびＩＦＮαが夫々結合する）がＣＤ２３結合に関与していないかも知れないことを示唆する。ＣＤ２１へのＥＢＶの結合には、ＣＤ２１のＳＣＲ２のグリコシル化は必要とされない（Moor e et al,「二つの繰り返し短配列を含む可溶性ＣＲ２（ＣＤ２１）インビトロおよびインビボでのエプスタイン・バー・ウイルス感染の阻害」、J.Virol 67:355 9(1991)）。同様に、ＳＣＲ２領域へのＣＤ２３の結合は、糖には無関係である(上記のAubry et al(1994)）。このことは、非グリコシル化された合成ペプチドが、ＣＤ２１へのＣＤ２３の結合を低減できるという我々の知見と一致する。従って、ＣＤ２３はＣＤ２１上のＳＣＲ２における結合部位と結合するが、この結合部位はＥＢＶ結合部位に近接しているか又は同一であり、Ｃ３ｄ，ｇおよびＩＮＦ-αについて先に記載された結合部位とは異なる。ＣＤ２３は、Ｂ細胞上のＣＤ２１と結合することによって、ＩｇＥ産生を積極的に調節することが先に示されている（Aubry et al(1992)上記）。ＥＢＶペプチドがＣＤ２１に対するＣＤ２３の結合を阻止するという観測に基づいて、我々は、ＩｇＥ産生におけるこのＥＢＶペプチドの効果を調査した。該ＥＢＶペプチドは、ＩＬ−４誘導ＩｇＥの産生を投与量に依存した形で阻止できた。これは図７ｂに示されており、この図は、ＣＤ２１に結合するＥＢＶペプチドによって、ＩＬ−４に誘導されたＩｇＥおよびＩｇＧ４産生が阻害されることを示ている。［ＰＢＬまたは精製された扁桃腺Ｂ細胞（１０⁶／ｍｌ）を１４日間、ＩＬ−４単独（２００Ｕ／ｍ）で、または抗ＣＤ４０抗体（１μｇ／ｍｌ）存在下において、ＥＢＶペプチドの濃度を増しながらインキュベートした。ＩｇＥおよびＩＧｇ４が特異的エリザ法で測定され、代表的な一つの実験の平均値＋／−ＳＤが提示されている（ｎ＝４）。この効果は、Ｔ細胞依存性およびＴ細胞非依存性のＩｇＥ産生システムにおいて観察され（図７ｂ）、ここではＴ細胞の補助(T-cell help)が抗ＣＤ４０抗体で置換されている。このことによって、Ｔ細胞がなくても、ＣＤ２３-ＣＤ２１は同型のＢ-Ｂ細胞相互作用によってＩｇＥ産生を調節できるという我々の先の観測が確認される（Henchoz et al，「抗ＣＤ２１モノクローナル抗体のサブセットによるヒトＩｇＥ産生の刺激：ε転写物を調整する共信号の必要性）81:285 (1994)）。何故なら、Ｂ細胞はＣＤ２３およびＣＤ２１分子の両方を発現できるからである。完全なＥＢＶは、Ｔ細胞またはＣＤ４０Ｌのように、ＩｇＥスイッチ用の任意のシグナルを出すことが報告されている（Thyphronitis et al，「エプスタイン・バー・ウイルスに感染した精製ヒトＢリンパ球による分泌は、インターロイキン４によって刺激され、インターフェロンγによって抑制される」,Proc Natl Acad Sci USA 86;5590(1989)）。ＥＢＶ粒子とは対照的に、ＥＢＶペプチドは多分、膜ＣＤ２１と架橋することはできないであろうから、ＩｇＥ産生を増加させることはできない。ＥＢＶペプチドはむしろ阻害的であり、ＣＤ２３−ＣＤ２１の相互作用を抑制することによってＩｇＥ産生を低減する。ＩＬ−４は、ＩｇＥと同様にＩｇＧ４を誘導することが知られているので（Lu ndgren et al,「インターロイキン４は、ヒトＢ細胞においてＩｇＥおよびＩｇＧ４の合成を誘導する」Eur J Immunol 19:1311(1989)）、我々は、ＩＬ−４に誘導されたＩｇＧ４産生におけるＥＢＶペプチドの影響を調査した。図７ｂに示すように、ＥＢＶペプチドはまた、投与量に依存した形でＩｇＧ４を阻害することができた。この観測によって、ＣＤ２３−ＣＤ２１の相互作用がＩｇＧ４産生をも制御することが示唆される。次に、他のＩｇクラスの産生におけるＥＢＶペプチドの効果について調査がなされた。ポリクローナルＩｇＧおよびＩｇＡ産生については、何等有意な影響は見られなかった。これは図７ｃに示されており、この図はＣＤ２１に結合するＥＢＶペプチドによってイムノグロブリン産生を変更できることを示している。［ＰＢＬまたは精製された扁桃腺Ｂ細胞（１０⁶／ｍｌ）を１４日間、ＩＬ−４単独（２００Ｕ/ｍｌ）または抗ＣＤ４０抗体（１μｇ／ｍｌ）の存在下で、EBVペプチドの濃度を増しながらインキュベートした。Ｉｇは、特異的なエリザ法で測定され、代表的な一つの実験の平均値＋／−ＳＤが提示されている（ｎ＝４）。］これとは対照的に、特に全PBLを使用したときに、ＥＢＶペプチドの存在下で、ＩｇＭ産生は著しく増加した（図７ｃ）。全てのＣＤ２１リガンドが、ＩｇＥ／ＩｇＧ４産生を制御するわけではない。ＣＤ２１に結合するＣ３ペプチドは、ＩｇＥおよびＩｇＧ４産生を阻害しなかった（図示せず）。これは図７ｄに示されており、この図はＣＤ２１と結合するＣ３ペプチドによるＩｇＥ産生の阻害がないことを示している。［精製された扁桃腺Ｂ細胞は１４日間、ＩＬ−４単独（２００Ｕ/ｍｌ）または抗ＣＤ４０抗体（１ μｇ／ｍｌ）の存在下で、EBVペプチドの濃度を増しながらインキュベートされた。ＩｇＥは特異的エリザ法で測定され、代表的な一つの実験の平均値＋／−ＳＤが提示されている（ｎ＝４）。］Ｃ３ペプチドは、ＣＤ２３結合を阻害しなかった（図７ａ）。これらの結果によって、ＣＤ２３−ＣＤ２１のペアリングとＩｇＥ／ＩｇＧ４産生との相関が再び強調された。IFNαはＣＤ２１へのＣＤ２３の結合に対して何の影響も与えなかったけれども（図示せず）、IFNαがＩｇＥ産生を阻害することは既に公知であるので、ＩＦＮαはテストされなかった（Pene et al，「正常ヒトリンパ球によるＩｇＥ産生は、ＩＬ−４によって誘導され、αインターフェロン、βインターフェロン、γインターフェロンおよびプロスタフランデインＥ２によって抑制される」Proc natl Acd Sci USA 85:8166(1988)）。従って結論として、本研究は、ＥＢＶペプチドがＣＤ２１と結合するＣＤ２３を低減し、ＩｇＥおよびＩｇＧ４の産生をヒトＢ細胞によって選択的に低減することを示している。実施例８ＣＤ２３は、内皮細胞に結合する内皮細胞系（ＬＴ２、Endolethium vol.2,p191-201,1994）または精製されたヒト臍帯細静脈内皮細胞を、ＣＤ２３リポソーム（ＣＤ２３Ｌ）と共に、または対照のグリコホリン・リポソーム（Ｌ−Ｇｌｙ）と共にインキュベートした。結合の特異性は、抗ＣＤ２３ｍＡｂ（mAb２５＝ａ-ＣＤ２３）によるＣＤ２３リポソーム結合の阻害によって実証された。細胞はFACSによって分析され、またＭＦＩが測定された。結果は図８に示される。 LT２起源の蛋白は、ＣＤ２３アフィニティーカラム上で精製された。１１５ｋＤａおよび７６ｋＤａの二つのバンドが確認された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 ＡＢＬＡ６１Ｋ 39/395 ＡＢＬＡＢＭＡＢＭＡＣＤＡＣＤＡＤＡＡＤＡＡＤＰＡＤＰＣ０７Ｋ 14/05 Ｃ０７Ｋ 14/05 16/46 16/46 (31)優先権主張番号９５１３４１５．１ (32)優先日 1995年６月30日 (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＫＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ルコーネットーヘンチョズ、シビルスイス国、ジュネーブ、1228 プランーレーカテス、カーズ・ポスタル 674、シュマン・デ・オー 14、グラクソ・ウェルカム・リサーチ・アンド・ディベロップメント・エス・エー

Claims

【特許請求の範囲】１．炎症、自己免疫疾患、アレルギー疾患の治療および予防に使用するための、ＣＤ２１，ＣＤ１１ｂ，ＣＤ１１ｃに結合し、内皮細胞上で発現される７０〜８５ＫＤａ蛋白に結合し，または内皮細胞上に発現される１１５ＫＤａ蛋白に結合する結合性物質。２．前記結合性物質が、抗体、抗体の断片、抗体もしくは抗体の断片を含む人工構築物、模倣物、またはこれら結合性物質の何れかの誘導体である請求項１に記載の結合性物質。３．擬人化抗体またはキメラ抗体である、請求項１又は２に記載の結合性物質４．エプスタイン・バー・ウイルス、Ｘ因子、エプスタイン・バー・ウイルスの一部（グリコシル化型でも非グリコシル化型でもよい）、Ｘ因子の断片、またはこれら結合性物質の何れかの誘導体である請求項１に記載の結合性物質。５．エプスタイン・バー・ウイルスのｇｐ３５０／２２０糖蛋白、非グリゴシル化型の対応蛋白、上記の糖蛋白もしくは蛋白の断片、またはこれら結合性物質の何れかの誘導体である、請求項４に記載の結合性物質。６．該結合性物質が、アミノ酸配列ＴＧＥＤＰＧＦＦＮＶＥＩＣを有するペプチド、その断片、または該ペプチドもしくは該断片の誘導体である請求項５に記載の結合性物質。７．ＣＤ２３と、ＣＤ２３にインビボで結合するリガンドとの相互作用を阻止する、請求項１〜６の何れか１項に記載の結合性物質。８．関節炎、紅斑性狼瘡、全身性紅斑性狼瘡、マシモトス（Mashimotos）甲状腺炎、多発性硬化症、糖尿病、ブドウ膜炎、皮膚炎、乾癬、じんま疹、ネフローゼ症候群、糸状体腎炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローエン(Crohn's) 症、ショグレン(Sjogren's)症候群、アレルギー、喘息、湿疹、ＧＶＨ、ＣＯＰＤ、気管支炎、インスリン炎、鼻炎、又は糖尿病の治療に使用するための、請求項１〜７の何れか１項に記載の結合性物質。９．関節炎、アレルギー、潰瘍性大腸炎、又はクローエン(Crohn's)症の治療に使用するための、請求項１から７の何れか１項に記載の結合性物質。１０．リューマチ様関節炎の治療に使用するための、請求項９に記載の結合性物質。１１．ＣＤ２１，ＣＤ１１ｂ，ＣＤ１１ｃに結合し、または内皮細胞上で発現される７０〜８５ＫＤａ蛋白に結合し、または内皮細胞上に発現される１１５ＫＤａ蛋白に結合する結合性物質の使用であって、関節炎、紅斑性狼瘡、全身性紅斑性狼瘡、マシモトス（Mashimotos）甲状腺炎、多発性硬化症、糖尿病、ブドウ膜炎、皮膚炎、乾癬、じんま疹、ネフローゼ症候群、糸状体腎炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローエン(Crohn's)症、ショグレン(Sjogren's)症候群、アレルギー、喘息、湿疹、ＧＶＨ、ＣＯＰＤ、気管支炎、インスリン炎、鼻炎または糖尿病の治療用医薬を製造するための使用。１２．請求項１１に記載の結合性物質の使用であって、関節炎、アレルギー、潰瘍性大腸炎、又はクローエン(Crohn's)症の治療用薬剤の製造のための使用。１３．請求項１２に記載の結合性物質の使用であって、リューマチ様関節炎の治療用薬剤の製造のための使用。１４．請求項１〜７の何れか１項に記載の結合性物質と、薬学的に許容され得るキャリアとを含有する薬学的組成物。１５．実質的に明細書中に記載したものである、請求項１に記載の結合性物質。１６．炎症、自己免疫疾患、アレルギー疾患を治療する方法であって、ＣＤ２１，ＣＤ１１ｂ，ＣＤ１１ｃに結合し、内皮細胞上で発現される７０〜８５ｋＤａの蛋白に結合し、または内皮細胞上に発現される１１５ｋＤａ蛋白に結合する結合性物質の有効量を、患者に対して投与することを具備した方法。