JPH10212238A - 血清及び癌転移抑制剤 - Google Patents
血清及び癌転移抑制剤Info
- Publication number
- JPH10212238A JPH10212238A JP9344498A JP34449897A JPH10212238A JP H10212238 A JPH10212238 A JP H10212238A JP 9344498 A JP9344498 A JP 9344498A JP 34449897 A JP34449897 A JP 34449897A JP H10212238 A JPH10212238 A JP H10212238A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- serum
- metastasis
- cells
- compound
- carbon atoms
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Heterocyclic Compounds Containing Sulfur Atoms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 一般式（Ｉ）
【化１】
（式中、Ｒ1 は炭素原子数１〜６のアルキル基を示し，
Ｒ2 は炭素原子数１〜１０のアルキル基、炭素原子数３
〜７のシクロアルキル基又は酸素原子、硫黄原子若しく
は窒素原子から選択される１〜３個の同一又は異なって
も良いヘテロ原子を有する５〜６員複素環を示し、該５
〜６員複素環は同一又は異なっても良いハロゲン原子又
は炭素原子数１〜６のアルキル基から選択される１以上
の置換基を有することもできる。Ａは−ＣＨ2 ＣＨ
2 −、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2 ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）−、又は−ＣＨ2 −を示し、Ｘ
は−Ｏ−又は−ＮＨ−を示す。）で表される化合物を動
物に投与して得られる血清及び該血清を有効成分として
含有する癌転移抑制剤。 【効果】 一般式（Ｉ）で表される化合物を投与して得
られる分子量１０，０００〜５０，０００の画分の血清
は、癌転移抑制作用を有しており医薬品として有用であ
る。
Ｒ2 は炭素原子数１〜１０のアルキル基、炭素原子数３
〜７のシクロアルキル基又は酸素原子、硫黄原子若しく
は窒素原子から選択される１〜３個の同一又は異なって
も良いヘテロ原子を有する５〜６員複素環を示し、該５
〜６員複素環は同一又は異なっても良いハロゲン原子又
は炭素原子数１〜６のアルキル基から選択される１以上
の置換基を有することもできる。Ａは−ＣＨ2 ＣＨ
2 −、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2 ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）−、又は−ＣＨ2 −を示し、Ｘ
は−Ｏ−又は−ＮＨ−を示す。）で表される化合物を動
物に投与して得られる血清及び該血清を有効成分として
含有する癌転移抑制剤。 【効果】 一般式（Ｉ）で表される化合物を投与して得
られる分子量１０，０００〜５０，０００の画分の血清
は、癌転移抑制作用を有しており医薬品として有用であ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は一般式（Ｉ）；
【化２】 （式中、Ｒ1 は炭素原子数１〜６のアルキル基を示し，
Ｒ2 は炭素原子数１〜１０のアルキル基、炭素原子数３
〜７のシクロアルキル基又は酸素原子、硫黄原子若しく
は窒素原子から選択される１〜３個の同一又は異なって
も良いヘテロ原子を有する５〜６員複素環を示し、該５
〜６員複素環は同一又は異なっても良いハロゲン原子又
は炭素原子数１〜６のアルキル基から選択される１以上
の置換基を有することもできる。Ａは−ＣＨ2 ＣＨ
2 −、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2 ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）−、又は−ＣＨ2 −を示し、Ｘ
は−Ｏ−又は−ＮＨ−を示す。）で表される化合物を投
与して得られる血清及び該血清を有効成分として含有す
る癌転移抑制剤に関する。
Ｒ2 は炭素原子数１〜１０のアルキル基、炭素原子数３
〜７のシクロアルキル基又は酸素原子、硫黄原子若しく
は窒素原子から選択される１〜３個の同一又は異なって
も良いヘテロ原子を有する５〜６員複素環を示し、該５
〜６員複素環は同一又は異なっても良いハロゲン原子又
は炭素原子数１〜６のアルキル基から選択される１以上
の置換基を有することもできる。Ａは−ＣＨ2 ＣＨ
2 −、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2 ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）−、又は−ＣＨ2 −を示し、Ｘ
は−Ｏ−又は−ＮＨ−を示す。）で表される化合物を投
与して得られる血清及び該血清を有効成分として含有す
る癌転移抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】一般式（Ｉ）で表される化合物は、特公
昭６３−６６２８７号公報で制癌剤、特開平６−７２８
７１号公報で癌転移抑制剤、及び特開平２−２２３５７
８号公報で肝臓疾患治療薬として有用であることが記載
されている。
昭６３−６６２８７号公報で制癌剤、特開平６−７２８
７１号公報で癌転移抑制剤、及び特開平２−２２３５７
８号公報で肝臓疾患治療薬として有用であることが記載
されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】癌の原発巣に対する外
科療法、放射線療法などがめざましい進展をとげている
が、癌転移に対しては何ら有効な手段のないのが現状で
ある。癌の転移は原発巣からの癌細胞の遊離、脈管を介
しての移動、臓器への接着、湿潤・増殖等の過程を経て
成立する。中でも転移が問題となる臓器としては、例え
ば肺、肝臓、消化器等があげられ、癌転移抑制剤の開発
が強く望まれている。
科療法、放射線療法などがめざましい進展をとげている
が、癌転移に対しては何ら有効な手段のないのが現状で
ある。癌の転移は原発巣からの癌細胞の遊離、脈管を介
しての移動、臓器への接着、湿潤・増殖等の過程を経て
成立する。中でも転移が問題となる臓器としては、例え
ば肺、肝臓、消化器等があげられ、癌転移抑制剤の開発
が強く望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意検討し
た結果、一般式（Ｉ）で表される化合物を投与して得ら
れる血清が癌転移抑制作用を示すことを見いだし、本発
明を完成したものである。更に詳細に説明すると、マウ
ス、ラット、ウサギ、サル、ヒトなどの哺乳動物に一般
式（Ｉ）で表される化合物０．０００１〜８０ｍｇ／ｋ
ｇ／ｄａｙを６〜６０日間連日強制経口投与し、最終投
与２４時間後に各個体より採血し、血液を遠心分離器に
かけて上清を採取して血清を得ることができる。得られ
た血清を遠心分離による限外濾過によって分子量１００
００以下、１００００以上５００００以下および５００
００以上の３つに分画したところ、分子量１００００〜
５００００以下の画分に癌転移抑制作用があることを見
いだした。又、活性成分は熱に対して不安定であり６０
℃以上で３０分加熱するとその活性が失活する。
た結果、一般式（Ｉ）で表される化合物を投与して得ら
れる血清が癌転移抑制作用を示すことを見いだし、本発
明を完成したものである。更に詳細に説明すると、マウ
ス、ラット、ウサギ、サル、ヒトなどの哺乳動物に一般
式（Ｉ）で表される化合物０．０００１〜８０ｍｇ／ｋ
ｇ／ｄａｙを６〜６０日間連日強制経口投与し、最終投
与２４時間後に各個体より採血し、血液を遠心分離器に
かけて上清を採取して血清を得ることができる。得られ
た血清を遠心分離による限外濾過によって分子量１００
００以下、１００００以上５００００以下および５００
００以上の３つに分画したところ、分子量１００００〜
５００００以下の画分に癌転移抑制作用があることを見
いだした。又、活性成分は熱に対して不安定であり６０
℃以上で３０分加熱するとその活性が失活する。
【０００５】一般式（Ｉ）で表される化合物において、
炭素原子数１〜６のアルキル基としては、直鎖又は分枝
状のアルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロ
ピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル
基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ
−ヘキシル基等が、炭素数１〜１０のアルキル基として
は、直鎖又は分枝状のアルキル基、例えばメチル基、エ
チル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｓ−ブチル
基、ｔ−ブチル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｎ−
ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オ
クチル基、ｎ−デシル基等が、炭素数３〜７のシクロア
ルキル基としては、例えばシクロプロピル基、シクロペ
ンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等が挙
げられる。酸素原子、硫黄原子若しくは窒素原子から選
択される１〜３個の同一又は異なっても良いヘテロ原子
を有する５〜６員複素環としては１，３−チアゾール、
１，３，４−チアジアゾール、１，２，３−チアジアゾ
ール、ピリジン等を挙げることができる。
炭素原子数１〜６のアルキル基としては、直鎖又は分枝
状のアルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロ
ピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル
基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ
−ヘキシル基等が、炭素数１〜１０のアルキル基として
は、直鎖又は分枝状のアルキル基、例えばメチル基、エ
チル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｓ−ブチル
基、ｔ−ブチル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｎ−
ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オ
クチル基、ｎ−デシル基等が、炭素数３〜７のシクロア
ルキル基としては、例えばシクロプロピル基、シクロペ
ンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等が挙
げられる。酸素原子、硫黄原子若しくは窒素原子から選
択される１〜３個の同一又は異なっても良いヘテロ原子
を有する５〜６員複素環としては１，３−チアゾール、
１，３，４−チアジアゾール、１，２，３−チアジアゾ
ール、ピリジン等を挙げることができる。
【０００６】一般式（Ｉ）で表される化合物は、特公昭
５５ー５６７０８号公報、特開平２−２２３５７８号公
報等に記載の方法に準じて製造することができる。次
に、本発明で使用される化合物の代表例を第１表に示す
が、本発明はこれらのみに限定されるものではない。 一般式（Ｉ）；
５５ー５６７０８号公報、特開平２−２２３５７８号公
報等に記載の方法に準じて製造することができる。次
に、本発明で使用される化合物の代表例を第１表に示す
が、本発明はこれらのみに限定されるものではない。 一般式（Ｉ）；
【化３】
【０００７】
【表１】
【０００８】
【表２】
【０００９】次に、一般式（Ｉ）で表される化合物の製
造例を以下に示す。 製造例１ ジメチル １，３ージチオールー２ーイリデンマロネー
ト（化合物番号１）の製造。 マロン酸ジメチル５．２８ｇ（０．００４モル）、二硫
化炭素３．６６ｇ（０．００４８モル）をジメチルスル
ホキシド２５mlに溶解し、氷冷下で４５％水酸化カリウ
ム水溶液１０．９ｇを滴下し、室温で２０分間攪拌し
た。得られた反応液を４０％クロロアセトアルデヒド１
９．６ｇと氷酢酸２．８８ｇの混合液に５℃以下で滴下
し、同温で３０分間攪拌した。反応液を氷水中に注ぎ、
酢酸エチルで２回抽出し、水で洗浄した。抽出液を硫酸
マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去してジメチ
ル ３ーヒドロキシ−１，３ージチオールー２ーイリデ
ンマロネートを得た。得られた化合物とトリエチルアミ
ンをジオキサン２０mlに溶解し、０℃でメタンスルホニ
ルクロリド６．９ｇ（０．００６モル）をゆっくり滴下
した。 滴下後、室温で１０分間攪拌し、続いて１０分
間加熱還流した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で
溶媒を留去し得られた残渣をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精
製して融点１２５〜１２９℃の結晶４．０ｇ（収率４３
％）を得た。
造例を以下に示す。 製造例１ ジメチル １，３ージチオールー２ーイリデンマロネー
ト（化合物番号１）の製造。 マロン酸ジメチル５．２８ｇ（０．００４モル）、二硫
化炭素３．６６ｇ（０．００４８モル）をジメチルスル
ホキシド２５mlに溶解し、氷冷下で４５％水酸化カリウ
ム水溶液１０．９ｇを滴下し、室温で２０分間攪拌し
た。得られた反応液を４０％クロロアセトアルデヒド１
９．６ｇと氷酢酸２．８８ｇの混合液に５℃以下で滴下
し、同温で３０分間攪拌した。反応液を氷水中に注ぎ、
酢酸エチルで２回抽出し、水で洗浄した。抽出液を硫酸
マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去してジメチ
ル ３ーヒドロキシ−１，３ージチオールー２ーイリデ
ンマロネートを得た。得られた化合物とトリエチルアミ
ンをジオキサン２０mlに溶解し、０℃でメタンスルホニ
ルクロリド６．９ｇ（０．００６モル）をゆっくり滴下
した。 滴下後、室温で１０分間攪拌し、続いて１０分
間加熱還流した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で
溶媒を留去し得られた残渣をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精
製して融点１２５〜１２９℃の結晶４．０ｇ（収率４３
％）を得た。
【００１０】本発明成分は、癌転移抑制剤として、経口
投与、若しくは非経口投与（筋肉内、皮下、静脈内等）
により投与される。好ましくは経口投与によって人に投
与される。本発明成分はそれ自体癌転移抑制剤となりう
るので、組成物中に活性血清成分は一般に０．０１〜１
００％（重量）含まれる。投与量は症状、年齢、性別、
体重、投与形態等によって異なるが、成人の場合通常１
日あたり０．００１〜１０００mgである。
投与、若しくは非経口投与（筋肉内、皮下、静脈内等）
により投与される。好ましくは経口投与によって人に投
与される。本発明成分はそれ自体癌転移抑制剤となりう
るので、組成物中に活性血清成分は一般に０．０１〜１
００％（重量）含まれる。投与量は症状、年齢、性別、
体重、投与形態等によって異なるが、成人の場合通常１
日あたり０．００１〜１０００mgである。
【００１１】本発明の血清を癌転移抑制剤として使用す
る場合、凍結保存又は凍結乾燥して長期保存に耐えられ
る製品にすることができる。又、経口又は非経口投与に
適した剤型に、例えば液剤、錠剤（糖衣錠、フィルムコ
ーティング錠等を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル（ソ
フトカプセルを含む）、注射剤、懸濁剤、乳化剤等に医
薬製剤上の常法に従い製剤することができる。以下に本
発明の実施例、試験例を示すが、本発明はこれらに限定
されるものではない。
る場合、凍結保存又は凍結乾燥して長期保存に耐えられ
る製品にすることができる。又、経口又は非経口投与に
適した剤型に、例えば液剤、錠剤（糖衣錠、フィルムコ
ーティング錠等を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル（ソ
フトカプセルを含む）、注射剤、懸濁剤、乳化剤等に医
薬製剤上の常法に従い製剤することができる。以下に本
発明の実施例、試験例を示すが、本発明はこれらに限定
されるものではない。
【００１２】実施例１ 血清の採取 ６週齢雌性高血圧自然発症ラット（以下、ＳＨＲラット
という：オリエンタル酵母工業（株）) に第１表記載の
化合物Ｎｏ．２を０．１、１及び１０mg/kg/day 、化合
物Ｎｏ．１０を１及び１０mg/kg/day 、化合物Ｎｏ．１
４を１０mg/kg/day の各用量で５６日間連日強制経口投
与した。投与開始７日後にリン酸緩衝化生理食塩水（以
下、ＰＢＳという）（−）に浮遊させたＳＨＲラツト自
然発生乳癌由来細胞株（以下、ＳＳＴ−２細胞という）
１×１０6 個／匹を左側背部皮下に皮下移植した。最終
投与２４時間後に各個体より採血し、血液を２５００rp
mで２０分間遠心分離器にかけて上清を採取し、血清を
得た。各個体から採取した血清は、投与量ごとに１本に
まとめた。
という：オリエンタル酵母工業（株）) に第１表記載の
化合物Ｎｏ．２を０．１、１及び１０mg/kg/day 、化合
物Ｎｏ．１０を１及び１０mg/kg/day 、化合物Ｎｏ．１
４を１０mg/kg/day の各用量で５６日間連日強制経口投
与した。投与開始７日後にリン酸緩衝化生理食塩水（以
下、ＰＢＳという）（−）に浮遊させたＳＨＲラツト自
然発生乳癌由来細胞株（以下、ＳＳＴ−２細胞という）
１×１０6 個／匹を左側背部皮下に皮下移植した。最終
投与２４時間後に各個体より採血し、血液を２５００rp
mで２０分間遠心分離器にかけて上清を採取し、血清を
得た。各個体から採取した血清は、投与量ごとに１本に
まとめた。
【００１３】実施例２ 血清の採取 ＳＨＲラットに実施例１と同様に各用量で５６日間連日
強制経口投与し、最終投与２４時間後に各個体より採血
し、血液を２５００rpm で２０分間遠心分離器にかけて
上清を採取し、血清を得た。各個体から採取した血清
は、投与量ごとに１本にまとめた。
強制経口投与し、最終投与２４時間後に各個体より採血
し、血液を２５００rpm で２０分間遠心分離器にかけて
上清を採取し、血清を得た。各個体から採取した血清
は、投与量ごとに１本にまとめた。
【００１４】試験例１ 癌細胞浸潤抑制作用 １）供試細胞 ｉ）血管内皮細胞株（以下、ＲＬＥ細胞という）はデュ
ベコの変形イーグル培地（Dubecco's Modified Eagle M
edium 、以下、ＤＭＥＭという：日水製薬（株）製）に
ウシ胎児血清（Fetal Bovine Serum：以下、ＦＢＳとい
う）を１０％添加した培地にて培養した。 ii) ＳＳＴ−２細胞はイーグル培地（Eagle's minimum
essential Medium、以下、ＥＭＥＭという：日水製薬
（株）製）にＦＢＳを７％添加した培地にて培養した。
ベコの変形イーグル培地（Dubecco's Modified Eagle M
edium 、以下、ＤＭＥＭという：日水製薬（株）製）に
ウシ胎児血清（Fetal Bovine Serum：以下、ＦＢＳとい
う）を１０％添加した培地にて培養した。 ii) ＳＳＴ−２細胞はイーグル培地（Eagle's minimum
essential Medium、以下、ＥＭＥＭという：日水製薬
（株）製）にＦＢＳを７％添加した培地にて培養した。
【００１５】２）インベーション アッセイ（Invasion
Assay） ゼラチンコートを施した６ｗｅｌｌプレートにＲＬＥ細
胞を播種し、２４時間ＣＯ2 インキュベー夕内にて培養
した。ＲＬＥ細胞を血清不含ＤＭＥＭ培地にて２回洗浄
し、培地を実施例１に従って得られたラット血清４０％
添加ＤＭＥＭ培地に交換して内皮細胞をラツト血清にて
２４時間前処理した後、ラツト血清添加培地のままＳＳ
Ｔ−２細胞を重層播種した。癌細胞播種４８時間後に１
０％中性ホルマリンＰＢＳ（−）溶液にて固定した。３
００倍の位相差顕微鏡下にて内皮細胞の下に浸潤した癌
細胞のコロニーをカウントした。３００倍５視野分を１
区画とし、４区画／Well分カウントした。１連性、結果
を図１に示した。インベーション アッセイの培地中の
ＦＢＳを化合物投与ＳＨＲ血清にて置換（４０％添加）
すると浸潤コロニー数は化合物投与により減少した。
Assay） ゼラチンコートを施した６ｗｅｌｌプレートにＲＬＥ細
胞を播種し、２４時間ＣＯ2 インキュベー夕内にて培養
した。ＲＬＥ細胞を血清不含ＤＭＥＭ培地にて２回洗浄
し、培地を実施例１に従って得られたラット血清４０％
添加ＤＭＥＭ培地に交換して内皮細胞をラツト血清にて
２４時間前処理した後、ラツト血清添加培地のままＳＳ
Ｔ−２細胞を重層播種した。癌細胞播種４８時間後に１
０％中性ホルマリンＰＢＳ（−）溶液にて固定した。３
００倍の位相差顕微鏡下にて内皮細胞の下に浸潤した癌
細胞のコロニーをカウントした。３００倍５視野分を１
区画とし、４区画／Well分カウントした。１連性、結果
を図１に示した。インベーション アッセイの培地中の
ＦＢＳを化合物投与ＳＨＲ血清にて置換（４０％添加）
すると浸潤コロニー数は化合物投与により減少した。
【００１６】試験例２ 血清の癌細胞浸潤抑制作用発現
に及ぼす加熱処理による影響 ０mg/kg/day(溶媒対照）及び１mg/kg/day 投与し実施例
１に従って得られた血清をウオーターバスにて４５、６
０又は８０℃で３０分間加熱し、冷却した後に血清無添
加のＤＭＥＭに４０％となるように添加し、試験例１と
同様にして湿潤コロニー数を計測した。結果を図２に示
した。化合物Ｎｏ．２投与血清の癌細胞浸潤抑制作用
は、４５℃、３０分加熱処理では影響されないが、６０
℃以上で３０分加熱処理することによって失活した。
に及ぼす加熱処理による影響 ０mg/kg/day(溶媒対照）及び１mg/kg/day 投与し実施例
１に従って得られた血清をウオーターバスにて４５、６
０又は８０℃で３０分間加熱し、冷却した後に血清無添
加のＤＭＥＭに４０％となるように添加し、試験例１と
同様にして湿潤コロニー数を計測した。結果を図２に示
した。化合物Ｎｏ．２投与血清の癌細胞浸潤抑制作用
は、４５℃、３０分加熱処理では影響されないが、６０
℃以上で３０分加熱処理することによって失活した。
【００１７】試験例３ 血清の癌細胞浸潤抑制作用発現
に及ぼす分子量分画による影響 化合物Ｎｏ．２を１mg/kg/day 投与して実施例１に従っ
て得られた血清を遠心分離による限外濾過によって、お
おまかに分子量１００００以下、１００００以上５００
００以下及び５００００以上の３つに分画し、血清無添
加のＤＭＥに各分画が未処理血清４０％添加と同量にな
るように添加し、試験例１と同様にして浸潤コロニー数
を計測した。結果を図３に示した。また、対照として未
分画の血清を使用した。癌細胞浸潤抑制作用は、分子量
１００００以上５００００以下の分画においてのみ認め
られた。
に及ぼす分子量分画による影響 化合物Ｎｏ．２を１mg/kg/day 投与して実施例１に従っ
て得られた血清を遠心分離による限外濾過によって、お
おまかに分子量１００００以下、１００００以上５００
００以下及び５００００以上の３つに分画し、血清無添
加のＤＭＥに各分画が未処理血清４０％添加と同量にな
るように添加し、試験例１と同様にして浸潤コロニー数
を計測した。結果を図３に示した。また、対照として未
分画の血清を使用した。癌細胞浸潤抑制作用は、分子量
１００００以上５００００以下の分画においてのみ認め
られた。
【００１８】試験例４ 化合物Ｎｏ．２投与ラツト血清
（以下、本発明血清という）の癌細胞浸潤抑制作用発現
に及ぼす投与回数および原発巣の影響 化合物Ｎｏ．２投与開始直前、２、９、１４、２１回投
与２４時間後及び最終投与２４時間後に各個体の経静脈
より採血し、血液を２５００rpm で２０分間遠心分離器
にかけて上清を採取し血清とし、血清は個体別にインベ
ーション アッセイに供し、試験例１と同様にして浸潤
コロニー数を計測した。担癌群の個体には投与開始７日
後にＰＢＳ（−）に浮遊させたＳＳＴ−２細胞１×１０
6 個／匹を左側背部皮下に皮下移植した。結果を図４及
び５に示した。本発明血清の癌細胞浸潤抑制作用は、癌
細砲（原発巣）の有無に関わらず、１４回投与２４時間
後（担癌ラツトの場合、癌細胞移植７日後に相当する）
まで増強され、その後は平衡（プラトー）に達してい
る。
（以下、本発明血清という）の癌細胞浸潤抑制作用発現
に及ぼす投与回数および原発巣の影響 化合物Ｎｏ．２投与開始直前、２、９、１４、２１回投
与２４時間後及び最終投与２４時間後に各個体の経静脈
より採血し、血液を２５００rpm で２０分間遠心分離器
にかけて上清を採取し血清とし、血清は個体別にインベ
ーション アッセイに供し、試験例１と同様にして浸潤
コロニー数を計測した。担癌群の個体には投与開始７日
後にＰＢＳ（−）に浮遊させたＳＳＴ−２細胞１×１０
6 個／匹を左側背部皮下に皮下移植した。結果を図４及
び５に示した。本発明血清の癌細胞浸潤抑制作用は、癌
細砲（原発巣）の有無に関わらず、１４回投与２４時間
後（担癌ラツトの場合、癌細胞移植７日後に相当する）
まで増強され、その後は平衡（プラトー）に達してい
る。
【００１９】試験例５ 本発明血清フラクションの癌細
胞浸潤作用 （１）試験動物 ＳＨＲラット及び雄性日本白色種ウサギ（北山ラベス
（株）） （２）供試ＳＨＲ血清 ＳＨＲに投与溶媒（５％アラビアゴム水溶液）又は化合
物Ｎｏ．２（１０mg/kg/day)を１４日間連日強制経口投
与し、最終投与２４時間後に採血した。各血液を２５０
０rpm で２０分間遠心分離機にかけて上清を採取し、溶
媒投与ＳＨＲ血清（以下、コントロール血清という。）
及び本発明血清とした。 （３）供試細胞 ・血管内皮細胞株（ＲＬＥ細胞）：ＤＭＥＭ及びハムス
Ｆ１２培地（Ham's Ｆ１２：日水製薬（株））の１：１
混合培地（以下、基礎培地という）にＦＢＳを１０％添
加した培地にて培養した。 ・ＳＳＴ−２細胞 ：試験例１−ｉｉ）と同じ方法で培
養した。
胞浸潤作用 （１）試験動物 ＳＨＲラット及び雄性日本白色種ウサギ（北山ラベス
（株）） （２）供試ＳＨＲ血清 ＳＨＲに投与溶媒（５％アラビアゴム水溶液）又は化合
物Ｎｏ．２（１０mg/kg/day)を１４日間連日強制経口投
与し、最終投与２４時間後に採血した。各血液を２５０
０rpm で２０分間遠心分離機にかけて上清を採取し、溶
媒投与ＳＨＲ血清（以下、コントロール血清という。）
及び本発明血清とした。 （３）供試細胞 ・血管内皮細胞株（ＲＬＥ細胞）：ＤＭＥＭ及びハムス
Ｆ１２培地（Ham's Ｆ１２：日水製薬（株））の１：１
混合培地（以下、基礎培地という）にＦＢＳを１０％添
加した培地にて培養した。 ・ＳＳＴ−２細胞 ：試験例１−ｉｉ）と同じ方法で培
養した。
【００２０】（４）血清の限外濾過画分の作製 遠心分離方式限外濾過器〔CENTRICUT U-51（分画分子量
５万／１万）、倉敷紡績（株））の上室にコントロール
血清又は本発明血清を入れ、２５００ppm （約１５００
Ｇ）で４時間遠心分離し、中段のサンプルカップよりサ
ンプルを回収して各血清の１万〜５万画分とした。 （５）抗コントロール血清抗体を吸着させたカラムの作
製 コントロール血清の１万〜５万画分とフロイントの完全
アジュバント（Freund's Complete Adjuvant）の等量混
合物を約２週間おきに３回ウサギの背部皮内に投与し
た。ウフタロニー法（Ouchterlony method）で抗体価の
上昇を確認し、最終投与９日後に全血液を採取し、遠心
分離により血清を得た。得られたウサギ血清から免疫グ
ロブリンの分離精製剤（Immuno Assist MG-PP ：関東化
学（株））を用いてウサギ抗コントロール血清抗体（以
下、ウサギＩｇＧという）を分離精製した。作製したウ
サギＩｇＧをシアン化臭素活性化セファローズ（ＣＮＢ
ｒ−activated Sepharose 4B：ファルマシア社）に結合
させ、カラムに充填した。
５万／１万）、倉敷紡績（株））の上室にコントロール
血清又は本発明血清を入れ、２５００ppm （約１５００
Ｇ）で４時間遠心分離し、中段のサンプルカップよりサ
ンプルを回収して各血清の１万〜５万画分とした。 （５）抗コントロール血清抗体を吸着させたカラムの作
製 コントロール血清の１万〜５万画分とフロイントの完全
アジュバント（Freund's Complete Adjuvant）の等量混
合物を約２週間おきに３回ウサギの背部皮内に投与し
た。ウフタロニー法（Ouchterlony method）で抗体価の
上昇を確認し、最終投与９日後に全血液を採取し、遠心
分離により血清を得た。得られたウサギ血清から免疫グ
ロブリンの分離精製剤（Immuno Assist MG-PP ：関東化
学（株））を用いてウサギ抗コントロール血清抗体（以
下、ウサギＩｇＧという）を分離精製した。作製したウ
サギＩｇＧをシアン化臭素活性化セファローズ（ＣＮＢ
ｒ−activated Sepharose 4B：ファルマシア社）に結合
させ、カラムに充填した。
【００２１】（６）各血清から抗コントロール血清抗体
非吸着各分の採取 コントロール血清又は本発明血清の１万〜５万画分２０
ｍｌをカラムにかけて（流出速度：０．５ｍｌ／分程
度）吸着させた。その後、カップリングバッファー〔Co
upling buffer(0.5M NaCl 含有0.1M NaHCO3 : pH=8.3)
を約７０ｍｌ（吸光度(280nm) が０．０４以下になるま
で〕を流した。尚、抗体結合蛋白質を全て吸着させるた
めにこの溶出液を再度カラムにかけ、初期抽出液の吸光
度(280nm)が一定になるまでこの操作を繰り返した。最
終操作で得られた抽出液を各ＳＨＲ血清の抗コントロー
ル血清抗体アフィニティーカラム非吸着画分（コントロ
ール血清の非吸着画分又は本発明血清非吸着画分）とし
た。遠心分離方式限外濾過器〔CENTRICUT U-10 (分画分
子量１万）、倉敷紡績（株）〕を用いて約２ｍｌに濃縮
した後、その半量（約１ｍｌ）をカップリングバッファ
ーにて５ｍｌにメスアップし、使用時まで−８０℃で保
存した。
非吸着各分の採取 コントロール血清又は本発明血清の１万〜５万画分２０
ｍｌをカラムにかけて（流出速度：０．５ｍｌ／分程
度）吸着させた。その後、カップリングバッファー〔Co
upling buffer(0.5M NaCl 含有0.1M NaHCO3 : pH=8.3)
を約７０ｍｌ（吸光度(280nm) が０．０４以下になるま
で〕を流した。尚、抗体結合蛋白質を全て吸着させるた
めにこの溶出液を再度カラムにかけ、初期抽出液の吸光
度(280nm)が一定になるまでこの操作を繰り返した。最
終操作で得られた抽出液を各ＳＨＲ血清の抗コントロー
ル血清抗体アフィニティーカラム非吸着画分（コントロ
ール血清の非吸着画分又は本発明血清非吸着画分）とし
た。遠心分離方式限外濾過器〔CENTRICUT U-10 (分画分
子量１万）、倉敷紡績（株）〕を用いて約２ｍｌに濃縮
した後、その半量（約１ｍｌ）をカップリングバッファ
ーにて５ｍｌにメスアップし、使用時まで−８０℃で保
存した。
【００２２】（７）インベーション アッセイ ゼラチンコートを施した１２wellプレートにＲＬＥ細胞
を播種し、４８時間ＣＯ2 インキュベーター内にて培養
したＲＬＥ細胞を血清不含ＤＭＥＭ培地にて２回洗浄
し、培地を各処理培地（第６図の脚注参照）に交換して
内皮細胞を２４時間前処理した後、各処理培地のままＳ
ＳＴ−２細胞を重層播種した。癌細胞播種４８時間後に
１０％中性ホルマリンＰＢＳ（−）溶液にて固定した。
３００倍の位相差顕微鏡下にて内皮細胞の下に浸潤した
癌細胞のコロニーをカウントした。３００倍５視野分を
１区画とし、４区画／well分カウントした。アッセイは
全て５連で実施した。結果を第６図に示す。本発明血清
の非吸着画分を添加した際の浸潤コロニー数は、コント
ロール血清の非吸着画分の浸潤コロニー数と比較して有
意に減少していた。
を播種し、４８時間ＣＯ2 インキュベーター内にて培養
したＲＬＥ細胞を血清不含ＤＭＥＭ培地にて２回洗浄
し、培地を各処理培地（第６図の脚注参照）に交換して
内皮細胞を２４時間前処理した後、各処理培地のままＳ
ＳＴ−２細胞を重層播種した。癌細胞播種４８時間後に
１０％中性ホルマリンＰＢＳ（−）溶液にて固定した。
３００倍の位相差顕微鏡下にて内皮細胞の下に浸潤した
癌細胞のコロニーをカウントした。３００倍５視野分を
１区画とし、４区画／well分カウントした。アッセイは
全て５連で実施した。結果を第６図に示す。本発明血清
の非吸着画分を添加した際の浸潤コロニー数は、コント
ロール血清の非吸着画分の浸潤コロニー数と比較して有
意に減少していた。
【００２３】
【発明の効果】一般式式（Ｉ）で表される化合物を投与
して得られる分子量１０，０００〜５０，０００の画分
の血清は、癌転移抑制作用を有しており医薬品として有
用である。
して得られる分子量１０，０００〜５０，０００の画分
の血清は、癌転移抑制作用を有しており医薬品として有
用である。
【図１】化合物投与と侵潤コロニー数との関係を示すグ
ラフである。
ラフである。
【図２】血清の癌細胞浸潤抑制作用発現に及ぼす加熱処
理による影響を示すグラフである。
理による影響を示すグラフである。
【図３】血清の癌細胞浸潤抑制作用発現に及ぼす分子量
画分による影響を示すグラフである。
画分による影響を示すグラフである。
【図４】浸潤コロニー数に及ぼすNo.2投与回数の影響
（担癌ラット）を示すグラフである。
（担癌ラット）を示すグラフである。
【図５】浸潤コロニー数に及ぼすNo.2投与回数の影響
（正常ラット）を示すグラフである。
（正常ラット）を示すグラフである。
【図６】インベーションアッセイでの癌細胞浸潤に及ぼ
すアフィニティーカラム非吸着画分の影響を示すグラフ
である。
すアフィニティーカラム非吸着画分の影響を示すグラフ
である。
Claims (2)
- 【請求項１】 一般式（Ｉ）； 【化１】 （式中、Ｒ1 は炭素原子数１〜６のアルキル基を示し，
Ｒ2 は炭素原子数１〜１０のアルキル基、炭素原子数３
〜７のシクロアルキル基又は酸素原子、硫黄原子若しく
は窒素原子から選択される１〜３個の同一又は異なって
も良いヘテロ原子を有する５〜６員複素環を示し、該５
〜６員複素環は同一又は異なっても良いハロゲン原子又
は炭素原子数１〜６のアルキル基から選択される１以上
の置換基を有することもできる。Ａは−ＣＨ2 ＣＨ
2 −、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2 ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）−、又は−ＣＨ2 −を示し、Ｘ
は−Ｏ−又は−ＮＨ−を示す。）で表される化合物を動
物に投与して得られる血清。 - 【請求項２】 請求項１記載の血清を有効成分として含
有することを特徴とする癌転移抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9344498A JPH10212238A (ja) | 1996-11-29 | 1997-11-29 | 血清及び癌転移抑制剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8-334730 | 1996-11-29 | ||
| JP33473096 | 1996-11-29 | ||
| JP9344498A JPH10212238A (ja) | 1996-11-29 | 1997-11-29 | 血清及び癌転移抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10212238A true JPH10212238A (ja) | 1998-08-11 |
Family
ID=26574920
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9344498A Pending JPH10212238A (ja) | 1996-11-29 | 1997-11-29 | 血清及び癌転移抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10212238A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0909758A1 (en) * | 1997-10-17 | 1999-04-21 | SSP Co., Ltd. | Dithiolylidene acetamide derivatives |
-
1997
- 1997-11-29 JP JP9344498A patent/JPH10212238A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0909758A1 (en) * | 1997-10-17 | 1999-04-21 | SSP Co., Ltd. | Dithiolylidene acetamide derivatives |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hansson et al. | Immunohistochemical detection of macrophages and T lymphocytes in atherosclerotic lesions of cholesterol-fed rabbits. | |
| EP0089062B1 (en) | Immunoprophylactic and immunotherapeutic agent | |
| US4002602A (en) | Ubiquitous immunopoietic polypeptide (UBIP) and methods | |
| Tatsuta et al. | Different regulatory mechanisms for serum amyloid A and serum amyloid P synthesis by cultured mouse hepatocytes. | |
| Dabrowski et al. | Plasma membrane cholesterol regulates human lymphocyte cytotoxic function | |
| US5389530A (en) | Methods for the production of antibodies and induction of immune responses to tumor-associated ganagliosides by immunization with gangloiside lactones | |
| JPH1081666A (ja) | フタルイミド誘導体又はその塩、それらの製造方法及びそれらを含有する医薬組成物 | |
| WO1992019239A1 (en) | Treatment of aberrant cellular states with biomodulators | |
| US4167557A (en) | Ubiquitous immunopoietic polypeptide (UBIP) and methods | |
| US5238837A (en) | Superoxide dismutase derivatives | |
| Hoffmann et al. | Endotoxin-induced serum factor controlling differentiation of bone-marrow-derived lymphocytes. | |
| JPH05502434A (ja) | 医薬組成物およびその用途 | |
| JP2002519303A (ja) | 脂質動員性を有する糖タンパク質およびその治療的適用 | |
| JPH10212238A (ja) | 血清及び癌転移抑制剤 | |
| Bodenheimer Jr et al. | Characterization of a new monoclonal antibody to rat macrophages and Kupffer cells | |
| JP3030312B2 (ja) | 成熟肝実質細胞増殖因子（ｉ） | |
| Nakamura et al. | Two types of growth inhibitor in rat platelets for primary cultured rat hepatocytes | |
| FI109026B (fi) | Menetelmä uusien immuunivastetta heikentävien trans-syklopentanyylipuriinianalogien valmistamiseksi | |
| KR20110022679A (ko) | 급성 및 만성 염증성 질환 치료용 5-(4-메탄설포닐-페닐)-티아졸 유도체 | |
| EP0128374B1 (en) | Preventive and healing composition for diseases due to lipoxygenase metabolic products | |
| NL8403083A (nl) | 1,2-dithiolaanderivaten, werkwijzen voor hun bereiding, farmaceutische preparaten die ze bevatten en hun toepassing. | |
| US5958966A (en) | Treatment of aberrant cellular states with biomodulators | |
| WO2023182657A1 (ko) | 항-fetuin-b 항체 및 해당 항체를 유효 성분으로 포함하는 근육질환의 예방, 치료 또는 개선용 조성물 | |
| WO1999047546A1 (fr) | Derives d'hydroxyproline | |
| US6294172B1 (en) | Monoclonal antibodies with specificity for membrane-associated antigens |