JPH0961355A - 光軸移動型蛍光光度測定装置及び測定方法 - Google Patents
光軸移動型蛍光光度測定装置及び測定方法Info
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- JPH0961355A JPH0961355A JP22183895A JP22183895A JPH0961355A JP H0961355 A JPH0961355 A JP H0961355A JP 22183895 A JP22183895 A JP 22183895A JP 22183895 A JP22183895 A JP 22183895A JP H0961355 A JPH0961355 A JP H0961355A
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Abstract
前処理操作が不要になる蛍光光度測定装置を提供するこ
とを目的とする。 【解決手段】本発明に係る光軸移動型蛍光光度測定装置
は、溶液試料を蛍光光度法で分析する装置において、光
源1からの光を特定の波長に分光する励起側分光器2
と、励起側分光器2からの光を試料セル3へ伝送する励
起光側光ファイバ7と、試料セル内で発生する蛍光を蛍
光側分光器4へ伝送する蛍光側光ファイバ8と、蛍光側
分光器で分光した蛍光を入力し、記録計6へ出力する光
電子増倍管5を具備し、励起光側光ファイバ7の光軸、
又は蛍光側光ファイバ8の光軸を、試料セル3に対して
移動可能とすることを特徴とする。
Description
する溶液中の蛍光物質を測定する蛍光光度測定装置に関
する。
に示す。蛍光光度法は、蛍光物質を含む試料溶液を注入
した石英製の試料セルに励起光を照射し、それによって
発生する蛍光の強度及びスペクトルから定量・定性分析
を行なうものである。
分光器2で単色光に分光され、試料セル3内の試料溶液
に照射される。この光のエネルギによって励起された電
子が、再び基底状態に遷移する際に蛍光を発生する。こ
の光を励起光の光軸と垂直方向に設置された蛍光側分光
器4に取り込み、目的とする波長のみを光電子増倍管5
に導入する。この光電子増倍管5で光のエネルギが電気
信号に変換され、蛍光強度に応じた出力が記録計6に表
示される。
部のランタノイドに限られるため、蛍光を発生しない物
質については、化学反応により蛍光物質へ変化させて分
析する必要がある。この蛍光光度法は溶液の性状(共存
物質の有無等)の影響を非常に受け易い分析法であり、
測定にあたっては、試料の前処理に十分な注意が必要で
ある。
度法に比べて感度が高く、蛍光を発生する物質が限られ
ているため、目的とする成分を選択的に測定することが
できる。しかし、この蛍光スペクトルは、共存する物質
による消光作用や試料溶液の性質による影響を受けるこ
とが多い。
液に照射する場合、その励起光を吸収する物質が共存す
ると、その物質の存在量によって、蛍光物質の励起に費
やされる光のエネルギが変動し、それに伴い蛍光強度も
変動する。
が共存する場合も、その物質の存在量によって蛍光強度
が変動する。従って、蛍光光度法を用いて正確な分析値
を得るためには、このような消光作用を引き起こす物質
を除去する前処理が必要であるという問題がある。
る装置および方法、すなわち妨害物質を除去する前処理
を行なわずに蛍光分析を行なうことができる蛍光光度測
定装置および方法を提供することを目的とする。
置は、溶液試料を蛍光光度法で分析する装置において、
(A)光源からの光を特定の波長に分光する励起側分光
器と、(B)前記励起側分光器からの光を、試料セルへ
伝送する励起光側光ファイバと、(C)前記試料セル内
で発生する蛍光を蛍光側分光器へ伝送する蛍光側光ファ
イバと、(D)前記蛍光側分光器で分光した蛍光を入力
し、記録計へ出力する光電子増倍管を具備し、(E)前
記励起光側光ファイバの光軸、又は蛍光側光ファイバの
光軸を、試料セルに対して移動可能とすることを特徴と
する。 (第2の手段)本発明に係る光軸移動型蛍光光度測定装
置は、溶液試料を蛍光光度法で分析する装置において、
(A)光源からの光を特定の波長に分光する励起側分光
器と、(B)前記励起側分光器からの光を、試料セルへ
伝送する励起光側光ファイバと、(C)前記試料セル内
で発生する蛍光を蛍光側分光器へ伝送する蛍光側光ファ
イバと、(D)前記蛍光側分光器で分光した蛍光を入力
し、記録計へ出力する光電子増倍管を具備し、(E)前
記試料セルを、励起光側光ファイバの光軸、又は蛍光側
光ファイバの光軸に対して、移動可能とすることを特徴
とする。 (第3の手段)本発明に係る蛍光光度測定方法は、溶液
試料を蛍光光度法で分析する方法において、光源からの
光を特定の波長に分光する励起側分光器と、前記励起側
分光器からの光を試料セルへ伝送する励起光側光ファイ
バと、前記試料セル内で発生する蛍光を蛍光側分光器へ
伝送する蛍光側光ファイバと、前記蛍光側分光器で分光
した蛍光を入力し、記録計へ出力する光電子増倍管を具
備する装置を用いて、(A)前記励起光側光ファイバの
光軸を試料セルに対して移動することにより、又は蛍光
側光ファイバの光軸を試料セルに対して移動することに
より、試料セル内における光路長と蛍光強度との関係を
求め、(B)横軸に試料セル内における光路長を、縦軸
に蛍光光度をとった関係図を作成し、(C)前記関係図
により、試料セル内における光路長が0である場合の蛍
光光度を求めることにより、試料セル内の共存物質によ
る蛍光吸収又は励起光の吸収のない条件での蛍光強度を
得ることを特徴とする。
法で分析する装置および方法において、試料溶液中を通
過する励起光の光軸及びその試料から発生する蛍光の計
測位置を自由に可変できる光学システム、並びにその測
定データから共存物質による消光作用を補正できる方法
(プログラム)を具備した光軸移動型蛍光光度測定装置
を適用することで蛍光測定に妨害となる共存物質を除去
する前処理操作を不要とした。
蛍光光度測定装置において、共存物質による励起光及び
蛍光の吸収がある試料溶液を分析する場合に、光軸を移
動させて、複数のデータを取得し、それらを解析するこ
とにより、共存物質による消光作用を補正する。
測定する場合、その試料中に消光作用を生じる物質の有
無を確認すること、及びそれらの物質が共存する場合は
除去するための前処理操作が必要であったが、本発明装
置及び方法を利用することにより上記操作をなくし、迅
速かつより信頼性の高い分析値を得ることが可能になっ
た。
に示す。図1は、本発明の光軸移動型蛍光光度測定装置
の全体構成図を示す。本発明の基本構成は、光源1と、
励起側分光器2と、試料セル3と、蛍光側分光器4と、
光電子増倍管5と、記録計6及び光軸を任意に選定する
ための光ファイバ7、8により構成される。
ら試料セルへ光を伝送するためのもので、出口側先端に
は光を平行化するレンズが設置されている。また、光源
には、励起光の強度を高くするためにレーザを使用し
た。
光側光ファイバ7と蛍光側光ファイバ8は試料セルを中
心に垂直に設置されている。これらの光ファイバは任意
にその照射位置及び測光位置を選定できるように移動で
きるようになっている。
定にし(すなわち図2のyを一定にし)、蛍光側光ファ
イバ8の位置を移動させて(すなわち図2のxを変化さ
せ)蛍光を測定する概念図を示したもので、その測定結
果を図5に示す。
口より遠くなれば(例えば図3において、位置aから位
置bへ移動すれば)蛍光強度が減少する傾向を示してい
る。これは試料中に共存する物質が励起光を吸収するた
めに、蛍光の測定位置に到達する励起光強度が減少する
ためと考えられる。
料セルの端から蛍光測定位置までの励起光の光路長(す
なわち図2のxに対応する光路長)をとり、減少してい
る直線と、縦軸とが交差する点を求めれば、共存物質に
よる励起光の吸収のない条件での蛍光強度を得ることが
できる。
にして(すなわち図2のxを一定にし)励起光側光ファ
イバ7の位置を移動させて(すなわち図2のyを変化さ
せ)蛍光を測定する概念図を示したもので、その測定結
果を図6に示す。
料セル側面から遠くなるほど(例えば図4において、位
置cから位置dへ移動すれば)蛍光強度は減少する傾向
を示している。
するためと考えられ、上記と同様に、縦軸に蛍光強度、
横軸に試料セル側面からの蛍光の光路長(すなわち図2
のyに対応する光路長)をとり、減少している直線と、
縦軸との交点を求めれば共存物質による蛍光吸収のない
条件での蛍光強度を得ることができる。
溶液中に励起光や蛍光を吸収する物質が共存しても、そ
の影響を補正することが可能となる。上記の実施の形態
では、励起光側光ファイバ7の位置を移動させて、ある
いは蛍光側光ファイバ8の位置を移動させて、光軸を移
動させる方法を選定したが、試料の性状、装置の構成条
件によっては、試料セルを移動させて光路長を変化させ
る方法もある。
で、以下に記載するような効果を奏する。 (1)共存する妨害物質を除去するための前処理操作が
不要になる。そのため分析作業の迅速化、及び分析廃液
の低減化を図ることができる。 (2)共存物質による消光作用を補正することができ
る。そのため、より信頼性の高い分析値を得ることがで
きる。 (3)自由に光路長を設定することができる。そのため
計測レンジを容易に変更することができる。
光光度測定装置の全体構成図。
説明図。
の説明図。
Claims (3)
- 【請求項1】 溶液試料を蛍光光度法で分析する装置に
おいて、(A)光源(1)からの光を特定の波長に分光
する励起側分光器(2)と、(B)前記励起側分光器
(2)からの光を、試料セル(3)へ伝送する励起光側
光ファイバ(7)と、(C)前記試料セル(3)内で発
生する蛍光を蛍光側分光器(4)へ伝送する蛍光側光フ
ァイバ(8)と、(D)前記蛍光側分光器(4)で分光
した蛍光を入力し、記録計(6)へ出力する光電子増倍
管(5)を具備し、(E)前記励起光側光ファイバ
(7)の光軸、又は蛍光側光ファイバ(8)の光軸を、
試料セル(3)に対して移動可能とすることを特徴とす
る光軸移動型蛍光光度測定装置。 - 【請求項2】 溶液試料を蛍光光度法で分析する装置に
おいて、(A)光源(1)からの光を特定の波長に分光
する励起側分光器(2)と、(B)前記励起側分光器
(2)からの光を、試料セル(3)へ伝送する励起光側
光ファイバ(7)と、(C)前記試料セル(3)内で発
生する蛍光を蛍光側分光器(4)へ伝送する蛍光側光フ
ァイバ(8)と、(D)前記蛍光側分光器(4)で分光
した蛍光を入力し、記録計(6)へ出力する光電子増倍
管(5)を具備し、(E)前記試料セル(3)を、励起
光側光ファイバ(7)の光軸、又は蛍光側光ファイバ
(8)の光軸に対して移動可能とすることを特徴とする
光軸移動型蛍光光度測定装置。 - 【請求項3】 溶液試料を蛍光光度法で分析する方法に
おいて、 光源(1)からの光を特定の波長に分光する励起側分光
器(2)と、 前記励起側分光器(2)からの光を試料セル(3)へ伝
送する励起光側光ファイバ(7)と、 前記試料セル(3)内で発生する蛍光を蛍光側分光器
(4)へ伝送する蛍光側光ファイバ(8)と、 前記蛍光側分光器(4)で分光した蛍光を入力し、記録
計(6)へ出力する光電子増倍管(5)を具備する装置
を用いて、(A)前記励起光側光ファイバ(7)の光軸
を試料セル(3)に対して移動することにより、又は蛍
光側光ファイバ(8)の光軸を試料セル(3)に対して
移動することにより、試料セル内における光路長と蛍光
強度との関係を求め、(B)横軸に試料セル内における
光路長を、縦軸に蛍光光度をとった関係図を作成し、
(C)前記関係図により、試料セル内における光路長が
0である場合の蛍光光度を求めることにより、試料セル
内の共存物質による蛍光吸収又は励起光の吸収のない条
件での蛍光強度を得ることを特徴とする蛍光光度測定方
法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP22183895A JP3448135B2 (ja) | 1995-08-30 | 1995-08-30 | 光軸移動型蛍光光度測定装置及び測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP22183895A JP3448135B2 (ja) | 1995-08-30 | 1995-08-30 | 光軸移動型蛍光光度測定装置及び測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0961355A true JPH0961355A (ja) | 1997-03-07 |
JP3448135B2 JP3448135B2 (ja) | 2003-09-16 |
Family
ID=16772993
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP22183895A Expired - Lifetime JP3448135B2 (ja) | 1995-08-30 | 1995-08-30 | 光軸移動型蛍光光度測定装置及び測定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3448135B2 (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002267933A (ja) * | 2001-03-13 | 2002-09-18 | Olympus Optical Co Ltd | レーザ顕微鏡 |
JP2003014647A (ja) * | 2001-07-04 | 2003-01-15 | System Instruments Kk | プローブ物質を載せた導波路法による蛍光測定方法 |
JP2012058047A (ja) * | 2010-09-08 | 2012-03-22 | Hitachi High-Technologies Corp | 分光蛍光光度計、分光蛍光光度計の測定方法および試料セル切替え装置 |
CN106568754A (zh) * | 2016-11-06 | 2017-04-19 | 浙江大学 | 一种用于测量液体样本多光子荧光光谱的光学系统 |
CN109490274A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-19 | 齐鲁工业大学 | 一种用于研究酶在皮革中单向传质的实验装置及使用方法 |
-
1995
- 1995-08-30 JP JP22183895A patent/JP3448135B2/ja not_active Expired - Lifetime
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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JP2003014647A (ja) * | 2001-07-04 | 2003-01-15 | System Instruments Kk | プローブ物質を載せた導波路法による蛍光測定方法 |
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CN109490274B (zh) * | 2019-01-04 | 2023-06-09 | 齐鲁工业大学 | 一种用于研究酶在皮革中单向传质的实验装置及使用方法 |
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---|---|
JP3448135B2 (ja) | 2003-09-16 |
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