JPH09512842A

JPH09512842A - 脱脂質化しかつ精製したｄ２５ポリサッカリド化合物の標品およびこれを含有する注射可能組成物

Info

Publication number: JPH09512842A
Application number: JP7523887A
Authority: JP
Inventors: バンズ，ハンス; デュラン，ジャック; キュドネ，クロード−アラン; ノルミエ，ジェラール; ル、パープ，アラン
Original assignee: ピエール、ファーブル、メディカマン
Priority date: 1994-03-16
Filing date: 1995-03-15
Publication date: 1997-12-22
Also published as: CA2185663A1; EP0750640A1; AU2075595A; FR2717483A1; FR2717483B1; WO1995025128A1

Abstract

(57)【要約】分子量が約３４ＫＤであり、クレブシエラ・ニウモニエの膜プロテオグリカンから抽出された、脱脂質化精製したポリサッカリド化合物Ｄ２５の標品（preparation）。このポリサッカリド化合物は、脱脂質化および精製されていて、この化合物を含有する水溶液は、もはやＣ₁₆脂肪酸および遊離ないし該化合物と結合したペプチドを含んでいない。この化合物の標的化特性を前提として、この標品の像形成での用途も開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物の標品およびこれを含有する注射可能組成物本発明はＤ２５から誘導された新規化合物に関するものである。また本発明はこの新規化合物の製法に関するものである。また本発明は特に水溶液の形の前記化合物の標品(preparation)に関するものである。また本発明は特に感染症、炎症および腫瘍病巣の像形成、診断および治療に使用される前記化合物を含有する組成物に関するものである。これらの組成物は特に静脈経由で投与される注射可能組成物である。最後に本発明は、前記化合物と、標識試薬と、安定化佐薬とから成る共凍結乾燥物を含むキットに関するものであり、このキットは水溶液を成し、この水溶液が標識化要素との単なる混合によって本発明による組成物を成し、この組成物中において脱脂質化精製されたＤ２５誘導体が検出可能要素によって標識されるように成された診断用キットに関するものである。Ｄ２５と呼ばれる生成物はバクテリア膜プロテオグリカンから抽出されたポリサッカリド化合物である。このポリサッカリド化合物は最初に特願第８４／１３８４４号および第８６／０６７６５号に記載された。このＤ２５ポリサッカリド化合物は、好ましくは、Collection Nationale del 'Institut Pasteur に＃１４５−Ｉ−ＩＰで登録された莢膜で被覆された野生型の非病原性菌種クレブシエラ・ニウモニエ(Klebsiella pneumoniae)biotype A から分離される。この分子は最初、フランス特願第８４／１３８４４号および第８６／０６７６５号に記載のようにその免疫刺激性に関して研究された。フランス特願第８９／０３０３４号において、化合物Ｄ２５はマクロファージに対する親和性を有し、また炎症および腫瘍病巣を認識して結合しマクロファージをその近傍において動員するベクトル試剤と記載されている。フランス特願第８９／０３０３４号は、適当な放射性トレーサ、特に^99mTcによって標識付けした後に吸入によるシンチグラフィー像形成するためのエアロゾル組成物の中にＤ２５を使用する方法を記載している。Ｄ２５分子は脂質部分を含み、この脂質部分は分子を自発的に肺障壁を横断させる本質的要素であると記載されている。これらの先行特許出願において、Ｄ２５は一方において１０単糖の単量体ユニットの反復から成る線形ポリサッカリド分子鎖と、他方において２つの短いペプチド分子鎖が結合した単一のさらに複雑な結合配列を含むと記載されている。線形ポリサッカリド分子鎖の反復単量体ユニットは、下記の割合のピランおよびフランの形のガラクトースのみ含有すると記載されている：３ β Ｇａｌｐ、３ α Ｇａｌｐ，２ βＧａｌｆ、および２ α Ｇａｌｆ。線形ポリサッカリド分子鎖の末端に単一の結合構造が固着される。この結合構造はグルコース、ガラクトース、グルコースアミン、ヘプトースおよびマンノデオキシオクツロソン酸残基を含む。２つの短いペプチド分子鎖がこの構造に結合されている。これらの特願に記載のように、実際にＤ２５の製造工程は、単一結合構造の一端位置に配置された２つのグルコースアミン上に、それぞれＮ−グルコシド連鎖によって、Ｄ２５の質量の約１．５％を代表する２つのβ−ヒドロキシミリスチン酸がグラフト重合された生成物を生じる。Ｄ２５の質量の約０．５％を代表するＣ₁₆（パルミチン）脂肪酸のトレースがエステル化形態または遊離形態でこれらのβ−ヒドロキシミリスチン酸に組合わされている。分子に対して両親媒性を与えて、リポソームの存在を必要とせずまた他の薬剤形態の使用を必要とせず肺胞界面活性成分と融着する事により分子をエアロゾル経路を通して肺障壁を横断させるのは、これらの脂肪酸の存在である。Ｃ₁₆遊離脂肪酸は脂肪親和性佐薬として作用する。また分子上に疎水性極が存在する事は単球およびマクロファージの膜との相互作用において本質的役割を果たしＤ２５をレセプタにアクセスさせこれらの細胞に対して結合させる。エアロゾル経路はミリメートルサイズの病理学的病巣を表示するが、このエアロゾル経路の欠点は、直接に放射性エアロゾル（フェイシャル・バルク）の服用によって、または嚥下後の消化系中にあるいは肺粘膜−繊毛間隙中に放射性エアロゾルが不可避的に存在する事によって汚染された二、三の解剖学的区域の検査が不可能になる事である。吸入技術と組合わされたこのようなエアロゾル経路の欠点は「全身」像形成を不可能とする。さらに放射性エアロゾルの服用を診断の目的で大規模に使用する事は、患者そのものの皮膚汚染に伴なう誤陽性反応のリスクを避けるために注意しなければならないので問題である。このような理由から、注射可能な形態の開発がその後研究されていた。しかしＤ２５分子の一端の強い親油性の結果、この分子が水性媒質中において受ける疎水性相互作用により、１５０ＫＤより大きな見掛け分子量を有するミセル（または「ポリマー」）が形成される。このような「ポリマー」形態は３４ＫＤ単量体形態を有するＤ２５溶液中において平衡し、３０重量％に達する。エアロゾル経路においては、これらのミセル凝集体が肺界面活性成分の中に解離し、次にこの自由形態で肺障壁を横断する。系統的分布は、マクロファージを動員する炎症、感染または腫瘍病理病巣の十分な像形成を可能とする。他方、静脈経路においては、これらのミセルが肝臓および脾臓の網膜−内皮細胞系によって非常に急速に取り上げられて、その中に結合される。従ってフランス特許第９０／０２９５７号は、ミセル形態の存在を低減させるようなＤ２５の変更を提案する。この特許第９０／０２９７５号において提案された変更は、分子の親油性を低減させ従ってミセルの形成を低減させるように、ターゲット細胞の特異認識に関与しないエステル化（Ｃ₁₆）脂肪酸を選択的に除去するにある。またフランス特願ＦＲ第９０／２０７５号に記載のＤ２５誘導体は約２％の「ポリマー」残基を含むので、注射用組成物はリンパ経路によってのみ注射する事ができる。正常な神経節(ganglion)および炎症または腫瘍増殖中に増大した神経節中のマクロファージ集団の存在の結果として、実際にこの細胞型のターゲット剤として脱脂Ｄ２５をリンパ経路で使用して検出感度を極大値にする事となった。脱脂Ｄ２５は皮下注射またはリンパ管内注射され、リンパ流によって搬送され、次に病理的神経節の中に集中されて可視化される。リンパ系統中の残留ポリマーは問題がない。神経節のろ過効果が「ポリマー」を第１神経節の中に保留して、モノマー形態のみが他の神経節リレーまで進行して次に全身循環の中に入るからである。このようなリンパ経路を通してのＤ２５の使用は、従来使用されていたコロイド剤またはナノ粒状剤などの巨大分子化合物が第１病理神経節を閉塞してリンパ系統全体へのアクセスを不可能とするような欠点を除去する。さらに２つの特許第８９／０３０９４号および第９０／０２９５７号に記載のように、有効成分の^99mTcなどの放射性トレーサによる標識が塩化物（SnCl₂）またはフッ化物（SnF₂）の形の第１スズイオン（Sn²⁺）によって使用時点で得られる事になった。Ｄ２５の標識条件とこの条件の安定性の欠損がＤ２５の静脈注射を制限する他の理由である。Ｄ２５はSnF₂より強力な^99mTcアクセプターであるが、余分量のSnF₂と組合わされたスズコロイドの形成が標識されたスズコロイドの存在の原因となる。しかしこれはエアロゾルの場合には問題でない。肺がコロイドのフィルタとして作用し、コロイドは系統的循環の中に到達しないからである。他方、前述のように、静脈注射の場合、コロイドは直接に血液流の中に入り、直ちに肝臓および脾臓によって捕捉され、その中に非常に長時間留まる。さらに、標識の安定性の欠損の結果、テクニチウムと血清タンパク質との交換、または甲状腺による遊離テクニチウムの集中が生じる。これは、生成物の均一な全身拡散が得られると同時に肝臓および甲状腺のような器官中の受動的固定を避ける必要のある「全身像形成の目的」と完全に相容れない。本発明の目的は、マクロファージの標的化によって特に感染症、炎症および腫瘍の病巣を像形成し、診断し、治療するために静脈注射する事のできる組成物を提供するにある。さらに詳しくは本発明の目的は、化合物の生分布を改良すると共にミセル形態の血液／脾臓吸収を防止し、また特に^99mTcによるその安定な生体中標識を可能とする新規なＤ２５化合物製剤を得るにある。そのため、本発明の目的は、「単量体」形態のみを保持するように特許ＦＲ第９０／０２９５７号に記載の部分的脱脂質化Ｄ２５の「ポリマー」形態を分離するのみならず、「単量体」形態がミセルの自発的形成を避けるように安定されると共にこの化合物Ｄ２５の標的特性を保持するように成された製剤を得るためＤ２５分子とその環境を変成するにある。従って本発明の主題は、Klebsiella pneumoniaebiotype Aから誘導された膜プロテオグリカンからの抽出によって得ることができる約３４ＫＤの分子量を有する脱脂質化精製Ｄ２５ポリサッカリド化合物の標品において、前記標品が前記化合物のミセル形態を含有しないように前記ポリサッカリド化合物を脱脂質化し精製されている事を特徴とする標品である。本発明の他の実施態様によれば、本発明の主題は、Klebsiella pneumoniae biotype Aから誘導された膜プロテオグリカンからの抽出によって得られる約３４ＫＤの分子量を有する脱脂質化精製Ｄ２５ポリサッカリド化合物の標品において、前記標品が遊離形態または化合物と結合した形態のパルミチン脂肪酸およびペプチドを含有しないように前記化合物が脱脂質化され精製される事を特徴とする製剤に関するものである。本明細書において用語「標品」とは、前記化合物の水溶液、特に無発熱性の注射液またはこの水溶液の凍結乾燥物を意味するものとする。また本発明は、脱脂質化または精製によって化学的に変成され、特にマクロファージに対する特異的結合に関する生成物の特性を破壊しないように、Ｄ２５の疎水性を完全に除去する事なくこの疎水性を低減させる事によりＤ２５の水溶液中の「重合」を防止する事のできる新規Ｄ２５誘導体を提供するにある。本発明の他の主題は、Klebsiella pneumoniae biotype A から誘導された莢膜プロテオグリカンからの抽出によって得られる約３４ＫＤの分子量を有する脱脂質化精製Ｄ２５ポリサッカリド化合物において、下記の式（Ｉ）によって表わされるもの、である。この式において、［ＰＳ］はポリサッカリド（多糖類）分子鎖を示す。ポリサッカリド分子鎖の配列の分析の結果、［ＰＳ］配列は下記のように約３０回繰り返される（１→３）連鎖によって連結された２つの規則的に交代するジサッカリド配列から成り、 −［→３）αＤＧａｌ_p（１→３）βＤＧａｌ_f（１−］→， −［→３）αＤＧａｌ_p（１→３）βＤＧａｌ_p（１−］→ この配列の末端に３グルコース残基、１ガラクトース残基、２ヘプトース残基および１マンノデオキシオクツロソン酸残基とから成る単一の結合構造を有する線形ポリサッカリド分子鎖として特定する事ができた。この単一結合構造が式(Ｉ) に示される２つの末端グルコースアミンに結合され、その上にそれぞれβ−ヒドロキシミリスチン酸がＮ−グルコシド結合されている。この単一結合構造の仮説式は下記である。これらのアミド結合によって末端ジグルコースアミンに結合された２つのβ− ヒドロキシミリスチン脂肪酸がマクロファージ標的特性を与えるために必要かつ十分であり、またこの点に関して２つの組合わされたペプチドとパルミチン脂肪酸の不存在は必要でないと思われる。さらにエステル化Ｃ１６脂肪酸およびペプチドの定量的除去は、先行技術の脱脂Ｄ２５形態中に残存する補体の活性化のための非常に低い容量を完全に除去する事を可能とする。これらの望ましくない残存免疫刺激性は、補体系統の深刻な欠乏を示す患者にとって不都合である。最後に、化合物Ｄ２５に組合わされたペプチドの除去は末端ピロリン酸基をデマスキングさせ、この基は、先行技術のＤ２５と比較して本発明による化合物について見られるテクニチウム標識の安定性に対して責任を有する。このピロリン酸基の選択的除去により、この基が細胞レセプタの特異認識に関与しないが、化合物の標識付けに際して^99mTcの高親和性結合に対して責任を有する事が示された。脱脂質後においても、本発明の化合物は２つのβ−ヒドロキシミリスチン脂肪酸を保持している。従って、本発明の化合物は両親媒性を保持し、これが潜在的に溶液中のミセル形成を誘発する。しかし、これらのミセルの形成はイオン環境に依存し、また低濃度の塩の添加により水溶液中のミセルの形成に決定的に対抗できると思われる。従って本発明による化合物の製剤は生理学的に受容される塩を、水溶液の形で低いイオン強度を示すような低モル濃度で含有する。ＮａＣｌ以外の塩を使用する事ができるが、ＮａＣｌが完全に適当であると思われる。ＮａＣｌは、テクニチウム標識操作に際して、等滲透性を生じまた発生器からのテクニチウムを溶離するために服用前に使用される塩と同一の塩だからである。ＮａＣｌのモル濃度はかなり広い。０．１５Ｍ（等滲透性）においてミセル形成がなお見られないからである。特定の実施態様において、本発明による水溶液は１ｍＭ乃至０．１５Ｍの濃度のＮａＣｌ塩を含有する。この脱脂Ｄ２５誘導体の製法は先行技術に記載されているように、下記の段階を特徴とする。（ａ）グラム陰性バクテリア菌株のバクテリア溶解物（ライセート）から粗製膜プロテオグリカンを抽出する。（ｂ）段階（ａ）からの粗製膜プロテオグリカンをアルカリ加水分解によって可溶化し、水溶液中の可溶性プロテオグリカンを回収する。（ｃ）ポリサッカリド化合物を分離し、必要なら、分離された分画中に存在するタンパク質を除去する。（ｄ）適当有機溶剤を使用して、前記ポリサッカリド化合物と組合わされた遊離脂肪酸を抽出する。使用できるグラム陰性菌種のうち、Klebsiella pneumoniae，Serratia marces cens およびEscherichia coliが、特に前述のような Collection Nationale de cultures de Microorganismes(CNCM)に＃１４５−Ｉ −ＩＰで登録されているKlebsiella pnerumoniaeが、挙げられる。先行技術に記載の方法の特定の実施態様においては、下記の段階が実行される。（ａ）グラム陰性バクテリア菌株から粗製膜プロテオグリカンを抽出する。この粗製プロテオグリカンを、バクテリア溶解物の遠心分離後に得られた上澄み液の中に捕集する。（ｂ）段階（ａ）からの粗製膜プロテオグリカンを特にアルカリヒドロキシによるアルカリ加水分解によって可溶化し、好ましくは０．３乃至１Ｍ、好ましくは０．５乃至０．７５Ｍのモル濃度の水酸化ナトリウムを使用し、９０℃以下、好ましくは５０乃至６０℃、例えば５６℃の温度で、好ましくは攪拌しながら処理を少なくとも１時間続ける。（ｃ）冷却後に、懸濁液を酸、例えば塩化水素酸によって中和し、必要なら溶液中に存在するタンパク質の酵素加水分解を特にプロテイナーゼによって実施する。（ｄ）次にＤ２５ポリサッカリド化合物をアルコール析出によって精製して、例えば遠心分離により捕集する。（ｅ）適当な有機溶剤、例えばクロロフォルムまたはクロロフォルムとメタノールとの混合物を使用して遊離脂肪酸を抽出し、例えばＤ２５ポリサッカリド化合物の析出物を有機溶剤の中に攪拌しながら分散させ、次に溶剤を除去し、最後に析出物を同一溶剤によって洗浄する。（ｆ）析出物を水中に取り上げ、本発明による脱脂質化されたＤ２５の溶液を遠心分離によって澄明化し、次に上澄み液を捕集し、最後に、（ｇ）さらにアルカリ性加水分解を実施し、次に冷却後に酸、例えば塩化水素酸によって懸濁液を中和し、デオキシコール酸ナトリウムを溶液に対して０．５％を越えない割合で添加し、次にポリサッカリド化合物を析出し、析出物を水中に取り上げ、得られた脱脂Ｄ２５化合物を分画化または超ろ過によって分離する。本発明による化合物は、特願ＦＲ第９０／０２９５７号に記載の前記方法によって得られた脱脂質化Ｄ２５ポリサッカリド化合物を下記の特定条件で精製する事によって得られた。最後のアルカリ加水分解後に得られた溶液のミセル分画を防止または低減させるための前記段階（ｇ）のデオキシコール酸塩処理の代わりに、第２アルカリ加水分解後に得られた溶液のＨＰＬＣクロマトグラフィー段階を特定の穏和な塩条件でまた適当なクロマトグラフィーサポートを使用して実施した。このクロマトグラフィー操作は、一方では、ミセルまたは凝集体の形成に対応する１００ＫＤ以上の見掛け比重を有する分画を排除する事ができるが、他方では約３４ＫＤの理論比重で本発明によるポリサッカリド化合物を溶離できるように、クロマトグラフィーサポートとの疎水性相互作用を防止する事ができる。ポリマーを排除するための他の理論的アプローチ、例えば超遠心分離、二価カチオン塩による塩析、または超ろ過法が開発されたが、特異条件で使用されるクロマトグラフィーのみが、Ｃ１６脂肪酸またはペプチドがもはや組合わされていない本発明による脱脂精製誘導体を含むＤ２５溶液を安定な「単量体」形態で得る事を可能とした。またこの方法は他の利点を有する。まず、ＨＰＬＣクロマトグラフィーは工業規模への移行が容易である。また人体に静脈注射される物質の製造における問題点の１つは最終生成物中の内毒素による汚染物を分離するにある。ところでＤ２５はＬＰＳ富化グラム陰性菌から来る。これそのものが解毒されたＬＰＳアナログであって、試剤（酵素）および製造工程環境（建物、施設など）がこの型の汚染物を導入する可能性がある。この点に関して、本発明による方法において特にプロセスの最後に実施されるクロマトグラフィーは「ポリマー」形態を除去すると共にこのような汚染物を除去する事ができる。本発明による低イオン強度化合物の他の利点はクロマトグラフィーサポートとの相互作用を防止するにある。塩濃度の増大はクロマトグラフィーサポートとの相互作用を生じ、このような相互作用が生成物の溶離を妨害する。２０ｍＭのＮａＣｌを含有する本発明による製剤は下記の二、三の理由から特に望ましい。 −まず、このような塩濃度がクロマトグラフィー段階において最大の溶解力を得させ、従って工業用途において、最大サイズのサンプルの処理を可能とする。 −次に、この濃度が、本発明による化合物の工業生産と対応の放射性薬剤の次の製造段階に対応して、最終製品中の正確な最終ＮａＣｌ濃度を直接に得る事を可能とする。本発明の他の新規アスペクトによれば、容易に標識づけされる注射用製品が、本発明による化合物と、標識試薬と、安定化佐薬との単一の共凍結乾燥物の形とする事ができる。この共凍結乾燥物が水溶液を成し、使用直前にこの水溶液を実際の標識要素と混合して、検出可能要素によって標識された前記化合物の水溶液を成す事ができる。凍結乾燥化された形の製品は溶液中よりも安定である。共凍結乾燥の開発は本発明の重要な新規なアスペクトである。ＳｎＦ₂は、ペルテクニタートイオンを低減させるその能力によって^99mTc分子を標識付けるための公知の標識試剤である。中性媒質中のその安定性の故に、これは本発明による化合物と相容性である。しかし、ＳｎＣｌ₂はそうでなく、これは酸性媒質の中においてのみ安定であるが、本発明の化合物は酸性媒質中においては不安定である。従ってＳｎＦ₂は^99mTc化合物の標識のために選定されるが、コロイドの形成を防止または制限するための制限的条件のもとに使用される。安定剤としてのアスコルビン酸の存在は、同時的に交換可能のテクニチウム量を低減させる事により、酸性状態＋５の^99mTcと本発明による化合物の弱アクセプター部位との間の錯体の安定性を増大する。Ｄ２５の弱アクセプター部位はポリサッカリド上に露出されたヒドロキシ基などの感応基である。本発明の他の特徴によれば、本発明によるキットは、そのまま標識される製品を製造するための単一ボトルキットである。これは先行技術の２ボトルキットに対して多くの利点を有する。 −簡単な標識手順の故に使い勝手がよい、 −エラーリスクが少ないので安全性の増大、 −静脈経路による像形成のための標識品質の改良。実際に、静脈注射の目的は、遊離^99mTcによる甲状腺または胃などのターゲット器官の不必要な照射と、特に肝臓による標識スズコロイドの吸収による不都合な結合とを避けて、「全身」像形成を達成するにある。しかし、余分量のスズは自発的にコロイドを形成し、このコロイドが肝臓と結合する。従って、正確に標識に必要な量のＳｎＦ₂を使用すべきである。不幸にしてこれは放射性薬剤の安定性と両立せず、また絶対量のスズが使用されるのみならず標識に際して瞬間的に濃縮するという事実と両立しない。従って、標識品質が非常に劣化し、遊離テクニチウムが甲状腺の中に結合され、アルブミンと組合わされたその分画によってバックグランドノイズを導入しシンチグラフィーの特異性とコントラストを低下させるにいたる下限が存在する。これらのパラメータを満足させるために２つのボトルを使用すれば、２溶液を混合する際に正確に必要な量以上のスズ濃度を使用する事となり、また標識に際しての操作手順数が増加し、空気と接触するＳｎ²⁺の酸化のリスクがあり、これがコロイドの形成を助長する。従って単一ボトルでの使用はこれらのすべてのリスクを最小限になし、また使用されるＳｎＦ₂量を正確に最小限に低減させる事ができる。従って標識操作全部が溶液の転送なしで、同一ボトルの中で、空気の不存在において実施される。さらに実験の示すように、共凍結乾燥物としての最終製品の安定性が著しく増大され、永い使用期限を有する事ができる。生体標識の安定性の増大はピロリン酸基のデマスキングと関連がある。本発明による化合物のこの生体標識安定性はさらにアスコルビン酸を使用する配合によって改善される。アスコルビン酸は酸性状態＋５に成された^99mTcと本発明による化合物の弱アクセプター部位（ピロリン酸基、およびその他のアクセプター基）との間の錯体の安定性を増大する。従って本発明の主題は、本発明による部分的に脱脂質化されたＤ２５化合物を含む事を特徴とする像形成、診断または治療用組成物にある。本発明の好ましい実施態様において、この組成物はマクロファージの標的化によって炎症および腫瘍、感染性病巣の像形成、診断または治療のために使用される。本発明による組成物は静脈注射する事ができ、また特に皮下または胸膜経由でリンパ経路により、またはエアロゾル経路で服用する事ができる。本発明による組成物が生体内または生体外診断および像形成に使用される場合、本発明によるポリサッカリド化合物は、放射性、常磁性または蛍光要素などの検出要素をもって標識される。また前記ポリサッカリド化合物は間接的に検出可能とする事ができる。すなわち、この化合物は、前記のようにそれ自体検出可能の要素によって標識された物質を介して検出され、この物質がポリサッカリド化合物を特異的に認識しまた結合する事ができる。本発明による前記の生成ポリサッカリド化合物を特異的に認識し結合する物質については前記化合物に対して生産された抗体とする事ができる従って本発明による生体内または生体外診断または像形成キットは本発明による脱脂質化精製Ｄ２５ポリサッカリド化合物とこの化合物の標識手段とを含み、あるいは本発明による脱脂精製Ｄ２５ポリサッカリド化合物と、この化合物を認識する物質と、この物質の標識手段とを含む。本発明による脱脂質化精製Ｄ２５誘導体の１つの用途は、この試剤を放射性同位元素に結合した場合にシンチグラフィー像形成またはパーオペラチブ検出である。実際に放射性核種は手動案内プローブによって可視化されまたはパーオペラチブ計数によって検出される。後者の場合は計数による診断であって像形成ではない。本発明による適当な放射性元素として、シンチグラフィーによって検出される放射性核種、例えばテクニチウム^99mTc、または非制限的に¹²³および¹¹¹インジュウムを挙げる事ができる。本発明による脱脂精製Ｄ２５誘導体は、ガドリニウムなどの常磁性試剤と結合して、磁気共鳴像形成(ＭＲＩ)のコントラストプロダクトを成す事ができる。さらに詳しくは、本発明による脱脂質化精製Ｄ２５を含む注射組成物は、マクロファージの標的化によりリンパ経路の感染性、炎症および腫瘍病巣の像形成、診断および治療に特に適している。本発明による化合物のリンパシンチグラフィーは、縦隔神経節(mediastinal g anglion)の像形成に関するものである。マクロファージの標的化による本発明の化合物の診断用途は特に下記の炎症性疾患に関するものである。すなわち、原始的肺腺維症、塵肺症、結合中の肺腺維症、ザルコイドージス、薬剤関連肺疾患、アレルギー性肺疾患、肺シストーシス、喘息、炎症性リウマチ性関節炎、深部感染性病巣、全身疾患、移植および挿入（バイオ物質）。また本発明の化合物の診断応用は腫瘍病理、例えばリクルート・マクロファージの標的化による転移の早期発見、および細胞上に表現された本発明の化合物の特異レセプタ、例えばガラクトースレセプタＭＡＣ−２の標的化によるメラノーマ転移(metastases)の早期特異発見である。この特異レセプタの表現は重態因子に関連する。実際にメラノーマ細胞上に表現された新規な特異レセプタが確認され、これらのレセプタは結合（ポリガラクトース分子鎖）中の分子の他の部位を含み、本発明の化合物と細胞膜との相互作用に必要な疎水性極そのものが残存している。このような癌腫学における特異表示にとって重要なこのような用途はそれまで開示されていなかった。特異的にメラノーマ転移を標的とする競合生成物は存在しないので、本発明による化合物はメラノーマの標的化に特に有効である。他の像形成技術（ＮＭＲ、Ｘ線スキャノグラフィー）は解剖学的ではあるが非特異性の情報を与え、その現在の感度はこの癌の急激な予後を変更できるほどに早期に発見するには不十分である。従って本発明の主題は、特にメラノーマおよび同一レセプタを表現する他の腫瘍、特に結腸癌の像形成診断のための化合物である。最後に、本発明の化合物は、マクロファージを標的化する特性を有するので、明かに治療目的として、標的放射線治療のためのベクトル反応剤、細胞傷害物質のベクトル反応剤、または免疫試剤、および／または免疫変調試剤または抗炎症試剤のベクトル反応剤として使用する事ができる。最後に本発明による脱脂質化精製Ｄ２５は、その抗内毒素ショック特性の故に、薬剤として直接に使用する事もできる。本発明による化合物の標的化特性と関連して、他の治療用途も可能である。二、三の用途において本発明の化合物は放射性元素で標識付けられる。これは例えば、標識化合物と結合する腫瘍病理病巣の適当エミッターによる局所的放射線治療の場合である。従来は、静脈経路（この型の治療において唯一の可能な経路）によるＤ２５の過剰な肝臓結合がこの用途を可能としなかった。また本発明の主題は、本発明による脱脂質化精製Ｄ２５化合物の誘導体、および前記と同様の用途におけるその利用である。これらの誘導体は酸化誘導体であって、本発明によるＤ２５の酸化誘導体は、線形ポリサッカリド化合物のガラクトフラノース（Ｇａｌｆ）残基がラビノースに転化された化合物、およびアミド、エステルまたはその他の型の誘導体、並びにその塩と第４アンモニウム誘導体を含む。アミド、エステルまたはその他の型の誘導体、並びにその塩と第４アンモニウム誘導体はＤ２５の半合成誘導体であって、特願第８６／０６７６５号および第８７／０５６６９０号に記載されている。また線形ポリサッカリド化合物のガラクトフラノース（Ｇａｌｆ）残基がラビノースに転化された化合物が特願第８７／０５６９０号に記載されている。本発明のその他の利点および特徴は下記の記述例からさらに明かとなろう。下記において、本発明の化合物の薬理学的特性を完全に除去しまた放射性同位元素、特にＴｃに対する親和性を増大して静脈注射と両立するように本発明により補足的精製と化学的変成とを受けた部分的脱脂質化Ｄ２５化合物を「Ｊ００１」と呼ぶ。付図において、第１図は人体の白血球に対するＪ００１ＦＩＴＣの結合結果を示す図、第２図はＢＡＬマクロファージおよび相異なる２３人の被検者（平均値）からの血液単球に対するビオチン化Ｊ００１の種々用量における結合結果を示す図、第３図はＢＡＬマクロファージおよび健康なボランティアー（平均値）の白血球に対する結合によるビオチン化Ｊ００１の細胞分布を示す図、また第４図乃至第６図は相異なるメラノーマ細胞系に対するビオチン化Ｊ００１の結合を示す図である。例１：有効成分Ｊ００１の製法１）清澄化バクテリア溶解物の製造発酵槽の中で液体媒質中で標準条件により培養する事によってKlebsiella pne umoniaeの生物量を得る。唯一の特異条件は、生物学的構造を保持するため、指数段階の末期に急激に４℃まで冷却する事によって成長を阻止するにある。低温で連続遠心分離により生物量を培養媒質から分離し、次に遠心分離によって洗浄する。細胞コンセントレートをフリーザ中に貯蔵して処理を待つ。反応器中でコンセントレートを解氷し、ＭｇＣｌ２（１０ｍＭ）とＮａＣｌ（１５ｍＭ）とを含む４℃のｐＨ７．０のｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（１０ｍＭ）の中に懸濁させて、懸濁液リットルあたり乾燥細胞５０ｇに等しい最終濃度を得る。工業バッチの製造は、操作あたり乾燥細胞１乃至３ｋｇ当量を使用する。次に懸濁液リットルあたり、５ｍｇのＤＮａｓｅを加える。次に微生物細胞を、APV-Manton Gaulin型の工業用磨砕器中を連続通過させる事によって破壊する。このようにして得られたバクテリア溶解物に対して４℃で Sharples分離器上で15,000×ｇで第１連続清澄化処理を実施し、未破壊細胞と破壊残留物とを除去する。遠心分離ペレットを除去し、上澄み液を捕集する。これが清澄化溶解物を成す。２）膜分画の分離酢酸によってｐＨ４．２±０．２まで酸性化された清澄バクテリア溶解物を４ ℃で３０分間放置する。Sharples分離器上で15,000×ｇで連続遠心分離を実施して不純物の沈澱物を除去する。膜分画を含む乳白色の上澄み液をＮａＯＨによって中和し、10,000ダルトンのカットオフを有する膜上で超ろ過により蒸留水に対する等体積まで透析した。抵抗が１０００Ωｃｍ^-1に達した時、出発乾燥細胞当量ｋｇあたり６リットルまで体積を濃縮した。ビューレット反応テスト後に、蒸留水によって希釈する事によりタンパク質タイターを１０ｍｇ／ｍｌに調整する。このようにして得られたKlepsiella pneum oniae膜懸濁液を次に有効成分Ｊ００１の抽出と精製のために使用する。３）注射モノマー形態を得るための有効成分Ｊ００１の製法ａ）第１アルカリ加水分解この段階は細胞膜を可溶化して粗製Ｄ２５を分離し、大部分のエステル化脂肪酸を加水分解するにある。前記のようにして得られた膜懸濁液に対して濃縮水酸化ナトリウムをゆっくり攪拌しながら、０．５Ｍのモルに達するまで加える。次に溶液を５６℃にもたらし、攪拌しながらこの温度に１時間保持する。常温まで急速冷却した後に、溶液を塩化水素酸によって中和する。ｂ）酵素加水分解この段階はタンパク質不純物を除去し、第１アルカリ加水分解後に残留するペプチドグリカン残留物を消化するにある。中和された溶液に対して１０ｍＭのｔｒｉｓ緩衝液とＥＤＴＡｑｓ１ｍＭとを添加する。ｐＨを７．５に調整する。次に４００ｍｇ／ｌのプロテイナーゼＫと１００ｍｇ／ｌのリゾチームとの存在において酵素消化を２時間、３７℃で実施する。ｃ）アルコール析出による粗製Ｄ２５の分離 −２０℃に予冷された２体積のエタノールによる析出によって粗製Ｊ００１を分離する。析出物を＋４℃で３０分間放置した後に、Sharples装置上で遠心分離により捕集する。ｄ）脱脂質この段階は、さきに第１アルカリ加水分解によって脱エステル化された脂肪酸を粗製Ｄ２５から抽出するにある。直ちに、アルコールペレットを常温で、ホモジナイザー（Ｔｕｒｒａｘ型）を使用して、出発乾燥細胞１ｋｇあたり１リットルの割合のクロロフォルム：メタノール（３：１）混合物中に分散させる。（前記のすべての体積は生物量の乾燥細胞１ｋｇあたりで示される）。析出物を＃３焼結ロート上に捕集し、そこで同様のクロロフォルム：メタノール（３：１）混合物５００ｍｌを潅注し、次に窒素流で乾燥する。乾燥残留物を１５００ｍｌの蒸留水の中に分散させ、一夜４℃で攪拌し続ける。脱脂されたＤ２５の吸収溶液を６０分間、30,000×ｇの遠心分離によって清澄化し、10,000ダルトンのカットオフを有する膜上で5000Ωｃｍ^-1まで透析する。その体積を蒸留水によって1500mlに調整する。ｅ）第２アルカリ加水分解これは、この段階においていくつかの目的を有する。(１)脱脂質化されたＤ２５の生成液中に残存するＣ１６脂肪酸を定量的に脱エステル化する。（２）会合しているペプチドを除去する。（３）脱脂質後に形成されたミセル形態を除去する。（４）処理中に、特に酵素消化中に導入された内毒素汚染物を破壊する。および（５）残留ポリマーのレベルを最大限低下させる。濃縮水酸化ナトリウムを前記の透析物に対して０．５Ｍの最終モル度を得るように添加する。この溶液を５６℃に成し、この温度に１時間、攪拌しながら保持する。常温まで急速冷却後に、溶液を塩化水素酸によって中和する。ｆ）分子ふるいクロマトグラフィーこのクロマトグラフィーは、ミセルの形成を防止するように分子相互作用を低減させる条件のもとに、適当多孔度のクロマトグラフィーサポート上で実施され、この精製段階はＪ００１の製造に際して形成された残留ポリマー形態全部を排除ピークにおいて除去する事ができる。第２アルカリ加水分解後に中和された溶液を、10,000ダルトンのカットオフを有する膜上で透析する事により２０ｍＭのＮａＣｌと平衡させる。イオン平衡に達した時、２０−３０ｍｇ／ｍｌの最終Ｊ００１濃度を有するまで体積が濃縮される。この溶液がクロマトグラフィーカラムに加えられるサンプルを成す。クロマトグラフィー条件は下記である。すなわち、６０ｃｍの高さまでＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００で充填され、無菌の非発熱条件で２０ｍＭのＮａＣｌと平衡させた直径２０ｃｍの工業用パイレックスカラム。加えられたサンプルはゲル体積の３乃至５％に対応する。溶離は、２０ｍＭＮａＣｌの中で、２０６ｎｍのＵＶによる連続検出と屈折率とによって実施された。自動パイロットシステムにより、脱脂質化Ｄ２５の単量体形態を排除ポリマーピークの溶離直後に捕集した。このクロマトグラフィー段階の収率はＪ００１の単量体形態で９０％の区域にある。この段階において使用されたサポート（ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００）はその分離特性のみの故に選択されたのではない。このサポートは、内毒素の破壊とＢＳＥリスクとに関して有効とされる高濃度アルカリ処理によって脱汚染されるという利点をも持つ。この点は、良好な製造現場環境の観点から重要である。ｇ）有効成分Ｊ００１の無菌化と貯蔵クロマトグラフィー中に捕集された分画は、事後のミセル形成を防止するために２０ｍＭのＮａＣｌの中に貯蔵される。同様の理由から、この分画は分子凝集を促進する可能性のある中間親液化段階を受けない。０．２２μｍ膜を通してのろ過による無菌処理と品質検査のためのサンプル除去後に、溶液をフリーザの中に貯蔵する。このようにして冷凍された無菌の非発熱性溶液は、下記において「Ｊ００１Ｃ」と呼ばれる放射性同位元素でそのまま標識される水溶液を形成する事のできるすべての成分を含有する共凍結乾燥物の製造に使用される有効成分Ｊ００１の溶液である。例２：Ｊ００１Ｃの製造１）Ｊ００１Ｃの製剤についての戦略（注射可能な経路）１．１）Ｊ００１Ｃの基本的な組成物 −Ｊ００１１．０ｍｇ（有効成分） −ＳｎＦ₂ ０．０８０ｍｇ（標識試薬） −ＮａＣｌ１．０ｍｇ（Ｊ００１Ｙモノマー安定剤） −アスコルビン酸０．５０ｍｇ（^99mTcでの標識安定剤）配合成分の変量限度： −Ｊ００１０．１００〜２．０ｍｇ −ＳｎＦ₂ ０．０４０〜０．１ｍｇ −ＮａＣｌ０．５０〜２．０ｍｇ −アスコルビン酸０．２０〜０．８０ｍｇ０．０４０ｍｇ未満の量のＳｎＦ₂では放射性薬品の安定性は保証されないので、標識の為には０．０４０ｍｇが限界閾である。アスコルビン酸の量が０．８０ｍｇより多いと、^99mＴｃとアスコルビン酸との結合が観察される。１．１．１）ＳｎＦ₂標識試薬市販のジェネレータから得られるテクネチウムは、過テクネチウム酸ナトリウムに相当する安定な化学的な状態にある。テクネチウムは、Ｊ００１受容体部位と複合体を形成させる為に、使用時に還元しなければならない。LIN,M.,S.(1975 )‐^99mＴｃによる蛋白質の標識‐Radiopharm．Int．Symp．1974(Subramanian，R hodes，Cooper及びSaad編、pp．36-48に従って、二価の錫を用いて過テクネチウム酸塩アニオンを還元する方法を採用した。この段階では、二つの重要な点を頭に入れておかなければならない。それは、Ｊ００１の安定条件と相容れる錫塩の選択、及び放射性元素で標識された錫のコロイドの形成を最小限とする限界条件である。ＳｎＣｌ₂はＴｃＯ^- ₄ の還元に最も一般的に用いられる化合物であるが、残念なことに、水酸化物の形成を防ぐ為にｐＨ＜３．５の塩酸媒質中で安定化しなければならない。これは、Ｊ００１の安定性とは全く相容れないことである。弱酸性の媒質中では、マクロファージ受容体との特異的な結合に関係するＪ００１の親脂質油性の極が加水分解する。ＳｎＦ₂は中性のｐＨで安定であるという利点を有しているので、これを選んだ。限界条件は、標識の質の物理的、及び生物学的測定により設定される。以下の方法を、対照方法、及び研究方法として用いた：紙を用いた薄層放射線クロマトグラフィーと放射線ＨＰＬＣによる放射化学的純度の測定。この純度は、標識後少なくとも６時間は９７％より高くなければならない。コロイド含有率をコントロールする為の拡散排除ＨＰＬＣクロマトグラフィー。粒径分布を分析する為のレーザー粒度測定、及び多角レーザー拡散。肝脾臓結合のパーセンテージ（限界閾）、及び身体に於ける生成物の分布を測定する為の、ラット、及びウサギに於ける生分布のin vivoの研究。系統的な研究から演繹される変量の限界から、Ｊ００１の量とはかかわりなく、ＴｃＯ^- ₄の定量的還元を確実に行うことのできるＳｎＦ₂の最低限の量は、標識を行う際、１ボトルにつきＳｎＦ₂約２０μｇであることが分かる。Ｊ００１が１ｍｇ存在している場合、６時間の間、放射化学的濃度を９７％より高く安定に保つ為には、ＳｎＦ₂を少なくとも４０μｇ添加すべきであり、またＪ００１Ｃの安定性を２〜３年間保つ為には、ＳｎＦ₂を６０μｇ添加すべきである。従って、ＳｎＦ₂の変量限界は、最低４０μｇ〜最大１００μｇである。Ｊ００１Ｙ１ｍｇに対するＳｎＦ₂の最適量は８０μｇである。１．１．２）ＮａＣｌ分子間反応、及びミセルの形成を減少させて、分子状態にあるＪ００１を確実に安定化させる為に、ＮａＣｌを製剤中に導入した。グリシンや燐酸塩バッファーのような他の成分についても研究を行った。グリシンはＪ００１のミセルの形成を低減させるのに効果的ではあるが、脳、及び副腎中での非特異的な結合による^99mＴｃでのアスコルビン酸の標識付けをもたらす。燐酸塩バッファーは、in vivoでは使用できない。骨幹端、及び骨幹レベルの、骨中での^99mＴｃとＪ００１との非特異的な結合をもたらすからである。ミセル化を防ぐ為に、濃度２０ｍＭのＮａＣｌをＪ００１の精製の最終段階に既に導入している（すなわち、ＮａＣｌ１．１６ｍｇ／ｍｌ）。標識付けは、ＮａＣｌを０．９％含む生理食塩水中で行う。Ｊ００１Ｃ１ボトルに対して最適なＮａＣｌの量は１ｍｇである。１．１．３）アスコルビン酸Ｊ００１Ｙのin vitroでの標識を安定化させ、またin vivoでＪ００１の弱受容体部位と血液蛋白質との間の^99mＴｃの交換を制限する為に、様々な還元剤、特にゲンチシン酸、及びアスコルビン酸について研究した。標識した生成物を注射した後、３０分後にラットとウサギの血清をＨＰＬＣ放射線クロマトグラフィーにかけたところ、アスコルビン酸だけが^99mＴｃの交換を約５０％減少させることができることが分かった。しかしながら、過剰アスコルビン酸の^99mＴｃによる標識付け、及び脳や副腎中での非特異的な結合を防ぐ為に、アスコルビン酸の投与量は、０．８０ｍｇ以下にとどめなければならない。Ｊ００１Ｃ１ボトルに対するアスコルビン酸の最低量は約０．２０ｍｇであり、それ以下では、「in vivo」での標識の安定性が低下する。この量は、ヒトでの実験では通常７４０ＭＢｑ（２０ｍＣｉ）であるが、実験の目的により調節することができる。標準的な操作法によれば、この調節は日常的な操作であり、全ての核医学センターで実験を行う際になされていることである（^99mＴｃの半減期＝６時間）。１．３）Ｊ００１Ｃ製剤を評価する為に行った研究例Ｊ００１Ｃの製剤の開発を有効にする為に様々な研究を行った。用いた技法により、in vitro及びin vivoでの^99mＴｃによる標識の安定性、コロイド、もしくは凝集体の配合、及び健康な身体中での生成物の分布が評価可能となる。ａ）標識付けの１時間後、及び６時間後に於ける、紙を用いた放射線クロマトグラフィーによる放射化学的純度の測定ワットマン紙を用い、メタノール／水（体積比８０／２０）液で放射線クロマトグラフィーにより測定した場合、選んだ製剤の放射化学的純度は常に９７％を越えている。ｂ）放射化学的純度、^99mＴｃと結合していないか、もしくは結合しているアスコルビン酸の存在をコントロールする為の、製剤の賦形剤の機能をもつＴＳＫ２０００カラムを用いた排除拡散ＨＰＬＣ放射線クロマトグラフィー得られたクロマトグラムから、燐酸グリシンの存在下では、遊離^99mＴｃが８．９％存在している場合、^99mＴｃがアスコルビン酸（５４．８％）に転移する為に、Ｊ００１に対応するピーク（３６．３％）についての放射化学的濃度が極めて不十分であることが明確に分かる。ｃ）Ｊ００１Ｃをアスコルビン酸と共に、もしくはアスコルビン酸なしに静脈注射した後３０分後のラットの血清の、ＴＳＫ２０００カラムを用いた排除拡散ＨＰＬＣ放射線クロマトグラフィー標識した生成物をアスコルビン酸と共に、もしくはアスコルビン酸なしに静脈注射した後３０分後に抜き取ったラットの血清の放射線クロマトグラムにより、^99m Ｔｃによる標識付けの「in vivo」での安定化に対するアスコルビン酸の有利な役割を証明することができた。アスコルビン酸の存在下では、遊離した、もしくは血清蛋白質と交換可能な^99mＴｃの分画がかなり減少する。ｄ）ラットに於ける生分布の研究健康な動物における生分布を、体重が２５０ｇの雄のウィスターラット（１バッチにつき３匹）を用いて研究する。標識した生成物をアスコルビン酸と共に、もしくはアスコルビン酸なしに静脈注射した後３０分後に、測定を行う。標的器官：コロイドの結合に関しては肝臓、及び脾臓、in vivoで解離した遊離^99mＴｃの分画を検出する為に胃、及び甲状腺、並びにマクロファージを標的化するのに生物学的利用性のある分画を評価する為の血液。得られた結果の例を、下記の表１に示す。全ての場合に於いて、肝臓、及び甲状腺に於ける結合は顕著ではなく、感知可能な量の遊離^99mＴｃが存在していないことを示している。アスコルビン酸の添加は、肝臓−脾臓での結合を減少させ、また全血液中の生物学的利用性のある分画を増加させるのに、非常に有利な効果がある。２）Ｊ００１Ｃの工業的な製造方法この例は、基本的な製剤の工業的なバッチの製造を示すものである（示した値はＪ００１Ｃのボトル１０００本についてのものである）。作業場の環境の質は、良好な製造業務に従って、無菌で無発熱性の凍結乾燥製品の製造に適していなければならない。作業中に二価の錫が酸化するのを防ぐ為に、特に、作業場を不活性ガスでフラッシングしたり、溶液を予めガス抜きするなどの、あらゆる適当な予防手段をとらなければならない。第一段階：溶解注射可能な製剤用の水（ｐｐｉ）１０００ｍｌを、５リッターのパイレックス製の反応器に導入し、その後、媒質のガス抜きを行う為に、ろ過して殺菌した窒素ガスを、撹拌を一定に行いながら吹き込む。バブリングと撹拌を行いながら、ＮａＣｌを４２０ｍｇ、その後アスコルビン酸を５００ｍｇ、最後にＳｎＦ₂を８０ｍｇ、順に溶解させた。数分間バブリングを続けた後、ガス導入孔を液面上に持っていき、バブリングの代わりにフラッシングさせる。Ｊ００１は両親媒性を有しているので、バブリングしながらＪ００１を導入すると、その後の操作の妨げとなるような大量の泡が生じる。Ｊ００１を２ｍｇ／ｍｌと２０ｍＭのＮａＣｌを含むＪ００１の溶液５００ｍｌを、予め真空下でガス抜きして導入する。窒素でフラッシングしながら、静かに撹拌を続けて均質化する。第二段階：無菌ろ過上で得られた溶液を、直ぐに窒素下で０．２２μｍの膜でろ過して殺菌する。フィルターが完全であるかどうか、ろ過後にチェックしなければならない。第三段階：（無菌遮断しての）ボトルへの小分け予め殺菌した１５ｍｌのガラス製のボトルを、ステンレススチール製の凍結乾燥用の板に並べる。液体窒素をこの板に導入して瞬時に凍結させ、不活性な環境を作る。ボトルは、溶液を入れる前に、窒素、もしくは好ましくはアルゴンを注入してパージする。その後溶液を２ｍｌ、それぞれのボトルに入れ、溝付きの栓でボトルにふたをする。その後直ぐに、予め冷却した凍結乾燥器のタンクに板ごと移す。第四段階：凍結乾燥この方法の重要なポイントは、成分、とりわけアスコルビン酸の性質の故に、特に凍結乾燥段階に関係している。液体窒素中で急激に凍結させれば製品の安定性は保証されるが、これでは結晶化の状態を適切にチェックすることができず、また製品の凍結乾燥が十分にできない。特定の最適化を行わなければならなかったが、これは、真空下におく前の段階を観察することの重要性を示すものである。その理由は、−４５℃付近の一定の温度で２時間ボトルを保持すると確実に結晶形が平衡化し、アスコルビン酸の存在下で間違いなく凍結乾燥がなされるからである。その後、混合物の共融点を考慮しながら、通常の条件下で凍結乾燥を行う。凍結乾燥が終了した後、凍結乾燥器室を開ける前に、凍結乾燥器室中で真空下でボトルに栓をする。その後、ボトルを集めて光の入らない場所に保存する。例３：マクロファージ標的化特性Ｊ００１は単核細胞と、またその親脂質性端を介してマクロファージと選択的に結合する能力を有している。実際、分子のこの部分を選択的に除去すると、結合能力が全で失われる結果となる。Ｊ００１がヒトの血液の白血球とin vitroで結合する能力を、Ｊ００１の蛍光誘導体、及び特定の抗体を用いて、細胞蛍光光度法により広く研究した。その結果を図１に示す。５μｇ／ｍｌ未満の濃度で、Ｊ００１はヒトの単核細胞と特異的に結合する。マクロファージへの成熟に伴い、またホルボールエステル、もしくはガンマインターフェロンにより誘発される活性化に伴い、Ｊ００１の結合が増す。結合の特異性は、無標識Ｊ００１との競合テストにより確認された。チオグリコレートを注射した後に得られるマウスの炎症性マクロファージのＪ００１との結合能力は、もともとのマクロファージよりも大きい。３７℃に於いては、結合したＪ００１は、その受容体を経て、極めて急速に細胞中に内在化する。Ｊ００１受容体としての膜抗原の単核細胞に対する役割を、血清不在下でビオチン化したＪ００１を用いて調べた。これらの受容体の特性付けを行う為に、単核細胞の膜抗原に対して特異的な様々な単一クローン抗体との結合と比較して検討した。ＨＬＡ抗体のクラスＩもしくはクラスＩＩ、ＦＲｃ抗体ガンマＩＩＩ（Ｃ１６）、ＣＤ１１ａ抗体、ＣＤ１１ｃ抗体、又はＣＤ１１ＣＤ／１８インテグリンの抗 β鎖抗体と共に細胞を予めインキュベートしても、ビオチン化したＪ００１の結合には、いかなる特異的な抑制も生じない。一方、細胞をＣＤ−１４抗体、もしくはＣＤ１１ｂ抗体（それぞれ５３％、及び４１％）と共に予めインキュベートすると、全てのＣＤ１１ｂ、もしくはＣＤ１４単一クローン抗体がＪ００１の結合を抑制することができないことから、はっきりとエピトープに限定されて、顕著な抑制が観察される。ＣＤ１１ｂ抗体とＣＤ１４抗体とを組み合わせることにより、抑制が７０％増大する。結果を、下記の表２に示す。この表は、ビオチン化したＪ００１とヒトの血液の単核細胞との特異的な結合の、単一クローン抗体による抑制を示すものである。表２中、「△ＭＦＩ」は「バックグラウンドノイズ」を補正した平均蛍光強度の大きさに相当する。Ｊ００１と単核細胞との特異的な結合は、この結合がＣＤ１１ａ抗体、ＣＤ１１ｃ抗体、及びＣＤ１８抗体により抑制されないので、接着性分子族に共通のＣＤ１１／ＣＤ１８β鎖、もしくはＬＦＡ−１のα鎖を介しては生じないことが結果から明らかに分かる。しかしながら、ＣＲ３（ＣＤ１１ｂ）のα鎖、及びＣＤ１４分子は、Ｊ００１の単核細胞への結合に関与する。これらの結果を確認する為に臨床的な研究を行い、Ｊ００１と、気管支肺房洗浄により得られる細胞や様々な肺の炎症性疾患の患者の血液から得られる細胞との結合を評価できるようになった。ヒトの白血球との結合を、過剰の（１０倍）の無標識Ｊ００１の存在下で、三種類の異なる濃度のビオチン化したＪ００１を用いて、直接細胞蛍光光度法により研究した。結果から、結合は濃度に依存し、また過剰の無標識Ｊ００１の存在下で完全に抑制されることが分かる。それは、余り分化していない単核細胞より、気管支肺房洗浄により得られる細胞で著しい。マクロファージ単核細胞との結合は、その他のタイプの細胞で見られるよりずっと大きい。結果を図２、及び図３に示す。例４メラノーマ細胞標的化特性１）細胞および培養条件８細胞系（lines）ないしクローンのヒトメラノーマを使用した。３細胞株（c ell lines）を、前記のように（JacubovichおよびDore，1979年）、３人の患者の転移リンパ神経節（metastated lymphatic ganglion）から分離した（１、２および３）。２および３は腫瘍を発生させる能力がきわめて高く、一方１はヌードマウスに対してこの能力がきわめて低い（Berthier-Vergneら、1985年）。クローン４、５、６、７および８は、すべて３細胞株から得られたものである。細胞株８は、転移の可能性が低く、一方他の５クローンは、免疫抑制新生ラットに対して転移の可能性が高い（BaillyおよびDore、1991年）。これらの細胞は、１０％ウシ胎児血清含有マッコイ修飾培地（SIGMA，St．Queutin Fallavier，フランス）で培養し、トリプシンＰＢＳ−ＥＤＴＡ（１／５０００）緩衝液で放出させた。２）文献 − Jacubovich R．およびDore J.F−悪性メラノーマ細胞株の培地中の腫瘍関連抗原−１９７９年−Cancer Immunol．Immunother．7、59-64。 − Berthier-Vergnes O，PortoukalianおよびDore J.F−異なった腫瘍形成性のヒトメラノーマ細胞株での細胞表面グリコプロテインの発現−１９８５−Int．J ．Cencer． − Bailly M．およびDore J.F−免疫抑制新生ラットでのヒト腫瘍自然転移。ヒトメラノーマ転移性クローンおよび変異体の多選択−１９９１−Int．J．Cancer ．49、750-757。３）ビオチン化Ｊ００１のメラノーマ細胞への結合。細胞系の起源ラボラトリー・オブ・イミュノロジーアンド・エクスペリメンタル・キャンサロロジー、Dr．Dore，INSERM．試薬 Immunobiol．vol 186，p183-198（1992）（Z.Hmama et al）記載の方法に従ってビオチン化したＪ００１。非ビオチン化Ｊ００１バッチｐ２４２。操作条件は、上記文献 Z,Hmama et al記載のものである。ΔＩＭＦ結果（クリアＩＭＦ、すなわちバックグランドノイズを消去）全結合非ビオチン化Ｊ００１の過剰の存在下でのビオチン化Ｊ００１の結合。特異結合全結合−特異結合結果は、図４および５の表および図６に示してある。表（図４および５）に示し、またグラフ（図６）に要約した結果は、供試ヒトメラノーマ細胞株に特定的に結合し、しかも投与量に比例してそうであること、を明らかにして示すものである。細胞株８は転移能力が低いのであるが、それはインビトロでずっと低活性でＪ００１と結合するということが見られるのは興味深いことである。例５：免疫刺激特性の除去Ｄ２５の免疫刺激特性は、シンチグラム診断薬にとって望ましいものではない。常法によれば、このタイプの分子については、観察される免疫刺激活性はレセプターとの結合に対して連続的であり、また、一般にこの結合と不可分である。Ｊ００１分子の最適化の新規性は、これを特定的にいえば、Ｄ２５の薬学上の特性が完全に除かれ、しかも同時に目的細胞への結合能が無変化である、という事実にある。このことは、免疫刺激特性に対して責を負うエステル化脂肪酸および高濃度では補体の活性化につながることのある重合体状の形態の除去、厳密な制御の下に行なうことによる製造法において、特に事実である。重要な安定性の免疫薬学的検討を、Ｊ００１をＫ．ニウモニエ由来の膜から単離した種々のフラクションと比較することによって、行なった。膜プロテオグリカン（ＭＰＧ）はＤ２５（部分的に脱脂質化したもの）の抽出の際の出発物質となるものであるところ、その特性を現実のＤ２５のそれについて、次いでＪ００１のそれについて、特に検討した。標的細胞レセプターとの結合に責を負う親油性末端の選択的水解のあとに得られたＪ００１のポリサッカリド鎖（ＧＣ−ＡＰＧ）が、この検討においてネガティブ対照として働いた。すなわち、それが除去されると、結合および細胞活性化能力が完全に失なわれる。Ｄ２５について高濃度の際に観察された補体活性化特性は、１００ｋＤａより大きい集体の重合体状形体の残分が存在することに因る。それを選択的クロマトグラフィーによるＪ００１の精製の工程において除去すると、これらの特性が完全に除かれる。免疫刺激特性は、それ自身、分子の親油性末端の組成に厳密に依存しており、特にエステル化脂肪酸の存在に依存している。Ｊ００１の最適化製造条件では、脂肪酸を定量的に除去し、同時に、アミド結合によって付着しかつ標的細胞レセプターの認識に厳密に必要な２Ｃ１４β−ＯＨ脂肪酸ならびに^99mＴｃによる安定な標識化を生じさせるホスフェート、就中ピロホスフェート基を必須的に残存させることが実現される。Ｄ２５中に保存されている膜プロテオグリカンの特徴的特性のうち、下記のものを選択すべきである。 − Ｂリンパ球のポリクローナル活性化、 − Ｔリンパ球の活性化の不存在、 − マクロファージのきわめて強い活性化。これは、マクロファージの酸化性代謝の増加およびサイトカインたとえばＩＬ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−α、ＩＬ−６その他の放出、を映すものである。これらのサイトカインは、マクロファージの活性化に特徴的な標識であり、またＤ２５の親炎症性および免疫刺激特性を反映するものである。Ｊ００１標品中のエステル化脂肪酸を厳密な制御下に除去すると、免疫刺激特性のすべてを全体的に除去することができる。これは、アミド結合を介して末端ジグルコサミンに結合しているβ−ＯＨ−Ｃ１４酸のみが誘導できないものである。これらの諸条件の下で得られたＪ００１の新規性は、Ｊ００１がその活性のすべてが失われるにもかゝわらず、マクロファージ結合能のすべてを保有しているということである。これは、バクテリア由来の分子のこの種のものに一般的なことではない。１）培地中の粘着ヒト単球によるサイトカインの分泌の測定粘着ヒト単球を、供試産物の存在下に２４時間培養する。上清中のサイカインの濃度を、次いでＥＬＩＳＡ法で測定する。供試産物は、下記の通りである。（−）標準培地バックグランドノイズ（−）ＧＣ−ＡＰＧ（Ｊ００１Ｙの多糖鎖）ネガティブ対照（−）Ｊ００１Ｙ（−）Ｄ２５（−）ＰＧＭ−ｐ（Ｄ２５およびＪ００１への出発物質）（−）Ｓｍ−ＲｅＬＰＳ−ポジティブ対照（Ｓ．ティフィムリウムからのＬＰＳ、シグマ）これらの結果は、ＰＧＭ−ＫｐおよびＤ２５と比較したときの、ヒト単球の活性化によるサイトカインの誘導についてのＪ００１の活性の喪失を示すものである。２）ＢＡＬＢ／ｃマウスの脾細胞のポリクローナル活性化の測定脾細胞を、供試産物の存在下に１０⁶Ｃ／ｍｌで培養する。細胞増殖を、７２時間培養の最後の２４時間にわたって［³Ｈ］ＴｄＲの取り込みを計測することによって測定した。イムノグロブリンの分泌は、６日間の培養後に、ＥＬＩＳＡによって測定する。供試産物のすべてを、１００μｇ／ｍｌの最終濃度で試験する。結果これらの結果は、マウスＢリンパ球のポリクローナル活性化に関してＰＧＭ −Ｋｐ（出発物質）およびＤ２５と比較したときのＪ００１の活性の喪失を確認するものである。例６放射性薬剤Ｊ００１Ｃの像形成への応用１）炎症性病状の実験モデルについての像形成 1.1）ニュージーランドラビットおよびカニクイザル（Cynomolgus monkeys）の免疫学的関節炎のモデルについてＪ００１のシンチグラフへの可能性の検討この実験的病状のモデルは、Cosden et al「卵白アルブミンによる慢性関節炎の発生」−Ann．Rheum．Dis．1971，30、307-315、により、フロイント・コンプリート・アジュバントの存在下に、卵白アルブミンを動物（s．c．経路でこの抗原に対して予め感作したもの）に関節内注射することによって、誘導する。これによって、局所化した慢性関節炎が得られる。その際、見るべき関連オデマ（odema ）はなく、また炎症が慢性となると、すなわち誘導後２〜３週間して、多くのマクロファージを含む免疫適応性細胞が補充される。このモデルは、膝関節上で健康域とよく区別された病巣を得る可能性を提供するものである。なお、ここで、健康域は反側方に位置して各動物に対して対照領域を成しており、またこの対照領域によってシンチグラフ化の正確な測定がもたらされる。シンチグラフは、３週〜６週令の３〜４ｋｇの２匹の雄ラビットおよび４ｋｇおよび６ｋｇの２匹の雄ザルについて、関節炎誘導に続いて行なった。２ｍＣｉ（３７ＭＢｑ）の^99mTＴｃ-Ｊ００１Ｃ（０．０５０〜０．２００ｍｇのＪ００１に相当）の静脈内注射後３時間してから、ナトリウムペントバルビタールで麻酔した動物を腹側からの投射によるシンチグラフ検査に付した。シーメンス・オービター７５ガンマカメラに高解像平行コリメータを取りつけたもので、１２８ ×１２８ピクセルのマトリックス中に２分間の像を記録する。シンチグラフデータの処理、ならびに目的領域に対しての標準手法によるシンチグラフ比Ｒの定量化、をシーメンス・ミクロデルタ・コンピュータ・システムによって実施する。サルについて得られた像は、病状のある右膝関節（シンチグラフ比２．２）上に、リンパ液排出腫脹（lymphatic drainage ganglion）のポジテイブ像形成と共に、きわめて強い結合病巣を示している。健康な反側方の膝関節は、見るべき関節活性を示さない。Ｊ００１Ｃの静脈注射から３時間後、および右膝関節に対する関節炎誘導から１ケ月後に、関節の病変に高度のシンチグラフコントラストが見られ（Ｒ＝２．２）、また鼠径部の排出腫脹にきわめて顕著な結合が見られる。同様な結果が、関節炎罹患ラビットの場合に、Ｊ００１の３７０〜２５９０ＭＢｑ／ｍｇ（１０〜７０ｍＣｉ／ｍｇ）の比活性で標識したＪ００１の標品について、すなわち動物当り２００〜２９０μｇのＪ００１の投与量につき、７４ＭＢｑ（２ｍＣｉ）の注射に対して、得られる。Ｊ００１Ｃの静脈内注射から３時間後および右膝関節に対する関節炎の誘導から１ケ月後に、関節の病変に高度のシンチグラフコントラスト（Ｒ＝２．８）が見られる。２）メラノーマ像形成 2.1）ヌードマウスに接木したヒトメラノーマの実験モデルヌードマウスにその左鼠径部にヒトメラノーマ細胞株ＴＷ１２（Dr.J.F.Dore- Centre Leon Bernard-Lyon）を５×１０⁵細胞を皮下注射して３週間後に、その動物には６−８ｍｍ径の腫瘍が発生する。この段階で、眼窩後腔にＪ００１Ｃを静脈注射してこれをシンチグラフに付す。注射してから３時間後に、高解像度像形成により、腫瘍域にＪ００１Ｃが有意に結合することが、きわめてはっきりしたシンチグラフコントラスト（Ｒ＝１．６）をもって示される。 2.2）メラノーマの臨床例の説明患者：ＦＯＲ…ＴＨ（obs No.401）、男性、３６才。（１）右後背方の小節形の胸郭メラノーマ。ブレスラウ（Breslow）インデックス＝２．１およびグレード＝ＩＶ（Clark）。（２）処置：外科的切除、その後ムフォラン（Muphoran）治療（２回）。（３）再発（Recidivation）：右腋窩再発の診断。（４）注射可能経路経由のＪ００１Ｃによるシンチグラフィー手順（ｉ）７４ＭＢｑ（２ｍＣｉ）の^99mＴＣで標識したＪ００１Ｃ０．１００ｍｇを注射、（ii）注射の１時間後に腹側（ＦＡ）および背側（ＦＰ）から投射による、２分間利得（acquisition）。１２８×１２８ピクセルマトリックス装着の高解像度平行コリメーター付きガンマカメラ使用。結果アデノパシーに対応する右腋窩くぼみでの過結合。１時間での結合インデックス＝１．７および２時間での結合インデックス＝２．５。１０．１２．９１に行なった腫脹治療は、（３．５×２．５×１．５ｃｍ）の転移腫脹をはっきりと示す。例７：Ｊ００１の抗ＬＰＳ特性Ｊ００１がＤ２５の結合特性を保存し、またマクロファージとレセプター上において（ＬＰＳ（ＣＤ１１ｂ−ＣＤ１４）のそれと一部共通）免疫活性なしで結合するという事実は、内毒素ショックに対する保護においての抗ＬＰＳ治療特性の可能性を追及するのに与って力があった。インビトロで得られた結果の見地から、共通レセプターのレベルでの単純な競合は、見出された活性のすべてを説明するものではないようである。もしそれがＬＰＳのマクロファージへの結合を完全に阻止しないのであれば、Ｊ００１は、ＬＰＳの活性の特徴的標識であるＴＮＦαの産生を永く阻止することの反映である「後結合信号（postbinding signaling）」効果を有するように見える。ＬＰＳに関しての拮抗特性１．ヒト単球血清不在下の単離された単核細胞培養液について、Ｊ００１は５種の異なる供試ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦ産生を阻害する。２．マウス脾臓リンパ球Ｊ００１は、ＬＰＳにより誘導される成長の阻害を誘導する。この効果は、Ｊ００１を細胞培養液にＬＰＳを添加してから２４時間までの間に添加することによって観察される。同様の効果が観察されるとしても、抗ＩｇＭ抗体については表われ方はより全身的ではない。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年１月２５日【補正内容】請求の範囲１．分子量が約３４ＫＤで、クレブシエラ・ニウモニエ由来の膜プロテオグリカンからの抽出によって得ることができる、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物の標品であって、このポリサッカリド化合物が脱脂質化および精製されて、該標品がミセル型の該化合物を含んでいないことを特徴とする、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物の標品。２．請求項１による、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物であって、この化合物が脱脂質化および精製されて、該標品が、パルミチン脂肪酸および遊離形または該化合物と会合したペプチドを含んでいないことを特徴とする、脂肪質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物。３．請求項１または２による標品であって、それが、生理学的に受入れ可能な塩を低モル濃度で含んでいて、その水溶液においてイオン強度が低いものであること、を特徴とする、標品。４．請求項１または２による標品であって、それが、１ｍＭ〜０．１５Ｍの濃度でＮａＣｌ塩を含有すること、を特徴とする、標品。５．請求項１または２による標品であって、それが、約２０ｍＭの濃度でＮａＣｌ塩を含有すること、を特徴とする、標品。６．請求項１〜５の１項による、分子量が約３４ＫＤで、クレブシエラ・ニウモニエ由来の膜プロテオグリカンの抽出によって得ることができる、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物が下式で示すことができることを特徴とする、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物。ここで、［ＰＳ］はポリサッカリド鎖を表わす。７．請求項６による、分子量が約３４ＫＤで、クレブシエラ・ニウモニエ由来の膜プロテオグリカンから抽出することができるＤ２５ポリサッカリド化合物であって、線状ポリサッカリド鎖［ＰＳ］が、下記の（１→３）結合で結合する２種の交番反覆二糖類配列からなっていることを特徴とする、Ｄ２５ポリサッカリド化合物。 −［→３）αＤＧａｌ_p（１→３）βＤＧａｌ_f（１−］→， −［→３）αＤＧａｌ_p（１→３）βＤＧａｌ_p（１−］→ たゞし、その末端には３グルコース残基、１ガラクトース残基、２ヘプトース残基および１マンノデオキシオクツロソン酸残基があり、この単一結合構造は式（Ｉ）中に示される２つの末端グルコサミンに付着していて、その各々にＮ−グリコシドアミド結合を介してβ−ヒドロキシミリスチン酸が付着している。８．像形成、診断または治療のための組成物であって、それが先行請求項の１項による脱脂質化しかつ精製した化合物の標品を含有することを特徴とする、組成物。９．マクロファージを標的とすることを介して、感染性、炎症性および腫瘍性の病巣の像形成および診断をするための、請求項８による組成物。１０．メラノーマおよび同一レセプターを表現する化の腫瘍、特に結腸ガン、の像形成および診断をするための、請求項８による組成物。１１．請求項６〜１０の１項による組成物であって、それが静脈注射可能なものであることを特徴とする、組成物。１２．請求項８〜１０の１項による組成物であって、それがリンパ径路で、特に皮下的にまたは胸内的に、注射可能であることを特徴とする、組成物。１３．請求項８〜１０の１項による組成物であって、それがエアゾル径路で投与可能であることを特徴とする、組成物。１４．請求項８〜１３の１項による診断または像形成組成物であって、ポリサッカリド化合物が検知可能な要素たとえば放射性、常磁性、または蛍光性要素によって標識されていることを特徴とする、診断または像形成組成物。１５．請求項１３および１４のいずれかによる組成物であって、放射性要素がシンチグラフィーで検知可能な放射核種であることを特徴とする、組成物。１６．請求項１５による組成物であって、放射核種が^99mテクネチウム、¹²³ ヨウ素または¹¹¹インジウムであることを特徴とする、組成物。１７．請求項１〜７の１項による化合物の薬品としての使用。１８．内毒素ショックに対する保護での薬品としての、請求項１７による化合物の使用。１９．標的放射治療用の媒介剤としての治療目的への、細胞毒物質の媒介への、あるいは免疫原性もしくは抗炎症性物質の媒介への、請求項１〜７の１項による化合物の使用。２０．請求項１〜７の１項による水溶液中の化合物の標識用であって、該化合物の共凍結乾燥物、標識用試薬および安定性賦形剤を含有してなる、単一ボトルキット。２１．テクネチウムによる標識用の請求項１９によるキットであって、それが標識用試薬としてフッ化スズ（ＳｎＦ₂）を、安定性賦形剤としてアスコルビン酸を含有するものであること、を特徴する、キット。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 51/00 9637−4ＢＣ１２Ｐ 19/04 51/06 0276−2ＪＧ０１Ｎ 33/53 ＳＣ１２Ｐ 19/04 9454−4ＣＡ６１Ｋ 49/02 ＡＧ０１Ｎ 33/53 //(Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:22） (72)発明者ノルミエ，ジェラールフランス国ビルフランシュ−ド−ロラゲ、ルート、ド、トゥールーズ、15 (72)発明者ル、パープ，アランフランス国ランジェ、リニエール、ド、トゥーレンス、ラ、セルマンティエール（番地なし)

Claims

【特許請求の範囲】１．分子量が約３４ＫＤで、クレブシエラ・ニウモニエ由来の膜プロテオグリカンからの抽出によって得ることができる、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物の標品であって、このポリサッカリド化合物が脱脂質化および精製されて、該標品がミセル型の該化合物を含んでいないことを特徴とする、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物の標品。２．分子量が約３４ＫＤで、クレブシエラ・ニウモニエ由来の膜プロテオグリカンからの抽出によって得ることができる、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物であって、この化合物が脱脂質化および精製されて、該標品が、パルミチン脂肪酸および遊離形または該化合物と会合したペプチドを含んでいないことを特徴とする、脂肪質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物。３．請求項１または２による標品であって、それが、生理学的に受入れ可能な塩を低モル濃度で含んでいて、その水溶液においてイオン強度が低いものであること、を特徴とする、標品。４．請求項１または２による標品であって、それが、１ｍＭ〜０．１５Ｍの濃度でＮａＣｌ塩を含有すること、を特徴とする、標品。５．請求項１または２による標品であって、それが、約２０ｍＭの濃度でＮａＣｌ塩を含有すること、を特徴とする、標品。６．分子量が約３４ＫＤで、クレブシエラ・ニウモニエ由来の膜プロテオグリカンの抽出によって得ることができる、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物であって、それが下式で示すことができることを特徴とする、脱脂質化しかつ精製したＤ２５ポリサッカリド化合物。ここで、［ＰＳ］はポリサッカリド鎖を表わす。７．請求項６による、分子量が約３４ＫＤで、クレブシエラ・ニウモニエ由来の膜プロテオグリカンから抽出することができるＤ２５ポリサッカリド化合物であって、線状ポリサッカリド鎖［ＰＳ］が、下記の（１→３）結合で結合する２種の交番反覆二糖類配列からなっていることを特徴とする、Ｄ２５ポリサッカリド化合物。 −［→３）αＤＧａｌ_p（１→３）βＤＧａｌ_f（１−］→， −［→３）αＤＧａｌ_p（１→３）βＤＧａｌ_p（１−］→ たゞし、その末端には３グルコース残基、１ガラクトース残基、２ヘプトース残基および１マンノデオキシオクツロソン酸残基があり、この単一結合構造は式（Ｉ）中に示される２つの末端グルコサミンに付着していて、その各々にＮ−グリコシドアミド結合を介してβ−ヒドロキシミリスチン酸が付着している。８．像形成、診断または治療のための組成物であって、それが先行請求項の１項による脱脂質化しかつ精製した化合物の標品を含有することを特徴とする、組成物。９．マクロファージを標的とすることを介して、感染性、炎症性および腫瘍性の病巣の像形成および診断をするための、請求項８による組成物。１０．メラノーマおよび同一レセプターを表現する化の腫瘍、特に結腸ガン、の像形成および診断をするための、請求項８による組成物。１１．請求項６〜１０の１項による組成物であって、それが静脈注射可能なものであることを特徴とする、組成物。１２．請求項８〜１０の１項による組成物であって、それがリンパ径路で、特に皮下的にまたは胸内的に、注射可能であることを特徴とする、組成物。１３．請求項８〜１０の１項による組成物であって、それがエアゾル径路で投与可能であることを特徴とする、組成物。１４．請求項８〜１３の１項による診断または像形成組成物であって、ポリサッカリド化合物が検知可能な要素たとえば放射性、常磁性、または蛍光性要素によって標識されていることを特徴とする、診断または画像形成組成物。１５．請求項１３および１４のいずれかによる組成物であって、放射性要素がシンチグラフィーで検知可能な放射核種であることを特徴とする、組成物。１６．請求項１５による組成物であって、放射核種が^99mテクネチウム、¹²³ ヨウ素または¹¹¹インジウムであることを特徴とする、組成物。１７．請求項１〜７の１項による化合物の薬品としての使用。１８．内毒素ショックに対する保護での薬品としての、請求項１７による化合物の使用。１９．標的放射治療用の媒介剤としての治療目的への、細胞毒物質の媒介への、あるいは免疫原性もしくは抗炎症性物質の媒介への、請求項１〜７の１項による化合物の使用。２０．請求項１〜７の１項による水溶液中の化合物の標識用であって、該化合物の共凍結乾燥物、標識用試薬および安定性賦形剤を含有してなる、単一ボトルキット。２１．テクネチウムによる標識用の請求項１９によるキットであって、それが標識用試薬としてフッ化スズ（ＳｎＦ₂）を、安定性賦形剤としてアスコルビン酸を含有するものであること、を特徴する、キット。