JPH09511235A

JPH09511235A - ９−デオキソタキサン化合物

Info

Publication number: JPH09511235A
Application number: JP7523511A
Authority: JP
Inventors: クライン，ラリー・エル; ヨン，クリントン・エム; リー，レピング
Original assignee: アボツト・ラボラトリーズ
Priority date: 1994-03-09
Filing date: 1995-03-01
Publication date: 1997-11-11
Also published as: MX9603891A; US5440056A; GR3036286T3; IL112880A0; DK0749432T3; EP0749432A1; WO1995024402A1; PH31271A; PT749432E; AU688946B2; DE69520880D1; CA2182103A1; DE69520880T2; EP0749432B1; US5616740A; AU3104795A; KR970701708A; ES2158093T3; ATE201019T1

Abstract

(57)【要約】式（Ｉ）［式中、−ＯＲ¹は、アルカノイルまたはパクリタクセルのＣ−１３側鎖を含み；Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁶は、種々の組み合わせにおいて酸素化されているか水素であり；Ｒ⁴およびＲ⁵はアシル基である。］を有する化合物ならびにその製造法、上記化合物を含む薬剤組成物および腫瘍増殖の阻害に使用するための方法。

Description

【発明の詳細な説明】９−デオキソタキサン化合物発明の背景本発明は、植物に由来する化学療法化合物に関する。特に、本発明は、Taxus canadensisから単離される天然物質から合成される脱酸素化パクリタクセル（pa clitaxel）化合物およびそれから合成されるパクリタクセルの新規類似体に関する。テルペンのタキサン科に属し、「TAXOL」の商標で知られるパクリタクセルは、広範囲の癌に対する化学療法剤として興味深い。パクリタクセルは、最初にイチイ属のTaxus brevifoliaから誘導され、臨床試験で進行性の乳癌および卵巣癌に対して活性であることが示され、予備研究では、多数の他の腫瘍に対して有望な活性を示した。パクリタクセルの研究、開発および臨床試験の現状の要約は、 Rotherberg，Curr．Opin．Invest．Drugs，2(12):1269-1277（1993）に記載されており、パクリタクセル分野における合成の試みは、D.G.I. Kingston in Prog ．Chem．Org．Nat．Prod.，61:1-206（1993）で検討されている。構造式：を有するパクリタクセルはかなりの治療効果を示したが、その天然に存在する量が不足していること、および能力のより高い細胞増殖抑制剤に対する必要性から、研究者たちは、代わりの源および該化合物の類似体の探究を行なっている。パクリタクセルを組織および細胞培養で産生するための試みがいくつか成されている。該化合物およびその関連類似体の全化学的合成は試みられているが、まだ達成していない。バッカチン IIIおよびセファロマンニンなどの天然のパクリタクセル前駆体のパクリタクセル自体またはその類似体への化学的変換が報告されているが、潜在的に活性なタキサン類の産生に対する別の方法は今もなお要求されている。ある研究の方向は、より豊富なタキサン前駆体である１３− アセチル−９−ジヒドロバッカチン IIIに焦点を当てている。それは、1993年10 月28日にWO 93/21173 として公開された国際出願 No.PCT/US93/03532（参考文献として本明細書に包含される。）に記載されているように、広く分布しているカナディアンイチイ Taxus canadensis から得ることができる。この９−ジヒドロ修飾が、パクリタクセルの新しい一連の類似体の合成を可能にしている。７−デオキシ、１０−デスアセトキシおよび７，１０−ジデオキシパクリタクセル誘導体など、バッカチン部分のＣ−７およびＣ−１０位の修飾も記載されている。７−デオキシバッカチンまたは７−デオキシパクリタクセル誘導体は、19 93年 2月 4日に公開された国際公開（ＰＣＴ）WO 93/02064 および J．Org．Che m．58:3798-3799(1993)に記載されている。１０−デスアセトキシパクリタクセル誘導体は、国際公開（ＰＣＴ）WO 93/06093(1993 年 4月 1日公開)；米国特許 No.5,248,796(1993 年 9月29日発行)；欧州特許出願 EP 558959(1993年 9月 8 日公開)；J．Org．Chem．58:2927-2928(1993)；および Tetrahedron Lett．34(3 1):4921-24(1993)に記載されている。７，１０−ジデオキシパクリタクセル誘導体は、J．Org．Chem． 58:5028-5029（1993）および Tetrahedron Lett．34(43):6845-6848(1993)に記載されている。いくつかの特許および特許出願、すなわち、米国特許 No.4,876,399 、5,015, 744 および 5,175,315ならびに国際公開（ＰＣＴ）WO 93/20036は、９−デオキソタキサンを一般的に開示するものである。これらの開示は、９−デオキソ化合物を一般的に示しているが、これらの化合物をどのようにして合成するかに関する開示はなく、９−デオキソタキサンの特定の実施例（予言的または実際の実施例）もない。従って、これらの開示は、そのような化合物の合成の試みの動機づけに過ぎない。実際、潜在的に優れた生物学的または薬学的性質を有する９−脱酸素化化合物が合成できれば、化学者および薬学者にとってかなり有益である。従って、本発明の目的は、そのような化合物およびそれらの合成法を提供することである。発明の要旨本発明の一発明では、下記構造式（Ｉ）：を有する９−脱酸素化タキサン化合物およびそのプロドラッグを開示する。これらの化合物は、癌および白血病の治療または治療に使用するためのパクリタクセル誘導体の合成において有用である。式（Ｉ）のＲ¹は、アルカノイルまたは式：［式中、Ｒ⁷は水素、アルキル、フェニル、置換フェニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、フェノキシまたは置換フェノキシであり；Ｒ⁸ は水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、フェニル、置換フェニル、α−ナフチル、β−ナフチルまたはヘテロアリールであり；Ｒ⁹は水素、アルカノイル、置換アルカノイルまたはアミノアルカノイルである。］のラジカルである。式（Ｉ）のＲ²、Ｒ³およびＲ⁶は、独立して、ヒドロキシ、水素、アルコキシ、アルカノイルオキシまたはアミノアルカノイルオキシである。式（Ｉ）のＲ⁴は、アルキル、アルカノイル、アミノアルカノイルまたはアロイルである。式（Ｉ）のＲ⁵は、アルキル、アルカノイル、アミノアルカノイルまたはアロイルである。本発明の第二の発明では、上記化合物の合成法および合成において有用な新規中間体を開示する。該中間体は、メチル１３−アセチル−９−ジヒドロバッカチンIII ９−Ｏ−キサンテート；９−デオキソバッカチンIII ；１３−｛（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン｝−９−デオキソバッカチンIII ；７−Ｏ−トリエチルシリル−９−デオキソバッカチンIII ；１３−アセチル−９−デオキソバッカチンIII ７−チオカルボニルイミダゾリド；７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII ；１３−｛（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン｝−７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII ；７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII １０−チオカルボニルイミダゾリド；１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII ；および１３−｛（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン｝−１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII である。そのような中間体（化合物２、３、４、８、９、１０、１２、１３、１４および１６）は、反応図式Ｉ、IIおよび IIIに示す。発明の詳細な説明本発明の化合物は、構造式（Ｉ）（Ｒ¹〜Ｒ⁹は上記で定義した通りである。）を有する９−デオキソタキサンおよびその誘導体を含む。本発明化合物の中で特に挙げられる化合物は、Ｒ¹がパクリタクセルのＣ−１３側鎖すなわち式：を有するラジカルである化合物である。これらの化合物および本明細書全体においては、下記定義を適用する。本明細書で使用する「アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖飽和炭化水素から水素原子を１個除くことによって得られる一価の基を意味し、非限定的にメチル、エチル、ｎ−およびイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−、イソ−およびｔ−ブチル、ペンチルならびにヘキシルが挙げられる。本明細書で使用する「アルカノイル」は、親分子部分にカルボニル基を介して結合した上記で定義したアルキル基を意味し、非限定的にアセチル、プロピオニル、ブタノイルおよびイソブタノイルが挙げられる。本明細書で使用する「アルコキシ」は、親分子部分に酸素原子を介して結合した上記で定義したアルキル基を意味し、非限定的にメトキシ、エトキシ、イソ−プロポキシ、ブトキシおよびｔ−ブトキシが挙げられる。本明細書で使用する「アルコキシアルキル」は、親分子部分に上記で定義したアルキル基を介して結合した上記で定義したアルコキシ基を意味する。本明細書で使用する「アロイル」は、親分子部分にカルボニル（−Ｃ（Ｏ）− ）またはチオカルボニル（−Ｃ（Ｓ）−）を介して結合したフェニル環を意味する。フェニル環は、未置換でもよく、または、ハロゲン、ハロアルキル、アルキル、アミノおよびアルコキシから独立して選択される１〜５個の置換基で置換されていてもよい。本明細書で使用する「アミノアルカノイル」は、１〜３個のアミノ基で置換された上記で定義したアルカノイル基を意味し、非限定的に２−アミノプロパノイル、４−アミノブタノイルおよび６−アミノヘキサノイルが挙げられる。さらに、アミノ基は所望により、天然のアミノ酸のペプチジル残基ならびにそれから形成されるジ−およびトリペプチド残基で置換されていてもよい。本明細書で使用する「アミノアルキル」は、アミノまたは下記で定義する置換アミノで置換された上記で定義したアルキル基を意味する。本明細書で使用する「ハロゲン」は、ブロモ（Ｂｒ）、クロロ（Ｃｌ）、フルオロ（Ｆ）およびヨード（Ｉ）から選択される置換基を意味する。本明細書で使用する「ハロアルキル」は、１〜３個のハロゲン原子で置換された上記で定義したアルキル基を意味し、非限定的にフルオロメチル、トリフルオロメチルおよび２−フルオロエチルが挙げられる。本明細書で使用する「ヒドロアルキル」は、ヒドロキシ基で置換された上記で定義したアルキル基を意味する。本明細書で使用する「Ｎ−保護された」または「Ｎ−保護する」は、アミノ基またはアミノ酸もしくはペプチドのＮ−末端を合成中の望ましくない反応から保護したり、化合物に対するエキソペプチダーゼの攻撃を防いだり、化合物の溶解性を増加させるための保護基の使用を意味し、非限定的にスルホニル；アセチル、ピバロイルおよびベンゾイルなどのアシル；ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）などのアルコキシカルボニル；ならびに自体Ｎ−保護されてもよいＬ−またはＤ−アミノアシル残基などの基の使用が挙げられる。他の例は、Th e Peptides，E．Gross and J．Meienhofer，Vol．3，Academic Press（1981）に記載されており、これは参考文献として本明細書に包含される。本明細書で使用する「プロドラッグ」は、例えば血液中での加水分解などによりin vivo で迅速に変換されて式（Ｉ）の親化合物を生じる化合物を意味する。 T．Higuchiおよび V．Stellaは、“Prodrugs as Novel Delivery Systems”，A. C.S. Symposium Series，Vol．14，American Chemical Society(1975)（参考文献として本明細書に包含される。）で、プロドラッグの概念に関して徹底的検討を行なっている。カルボキシル基を含む化合物に対するプロドラッグとして有用なエステルの例は、“Bioreversible Carriers in Drug Design: Theory and Ap plication”，ed．E.B. Roche，Pergamon Press（1987）（参考文献として本明細書に包含される。）の 14 〜 21 頁に見ることができる。本明細書で使用する「プロドラッグエステル基」は、生理学的条件下で加水分解されるいくつかのエステル形成基を意味する。プロドラッグエステル基の例としては、リン酸エステル、ピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、フタリジル、インダニルおよびメトキシメチルならびに当業界で公知の他の基が挙げられる。本明細書で使用する「保護基」は、当業界で周知の用語であり、合成中の望ましくない反応および分解を防ぐ、化学変換を受ける化合物の官能基上の置換基を意味する。例えば、T.H.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis， ”John Wiley & Sons(1981)（参考文献として本明細書に包含される。）参照。本明細書で使用する「置換アルカノイル」は、ヒドロキシ、スルフヒドリル、アルコキシ、カルボキシおよびハロゲンなどの１〜３個の基で置換された上記で定義したアルカノイル基を意味する。本明細書で使用する「置換アルコキシ」は、ヒドロキシ、スルフヒドリル、アルコキシ、チオアルコキシ、カルボキシ、アミノおよびハロゲンなどの１〜３個の基で置換された上記で定義したアルコキシ基を意味する。本明細書で使用する「置換アミノ」は、１個または２個のアルキル基で置換されたアミノ基を意味し、非限定的にｔ−ブチルアミノ、ベンジルアミノおよびＮ，Ｎ−ジメチルアミノが挙げられる。本明細書で使用する「置換フェニル」は、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ベンジルオキシ、チオアルコキシ、ヒドロキシ、アルカノイル、カルボキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロおよび−ＯＳＯ₃Ｈから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を意味する。本明細書で使用する「置換フェノキシ」は、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ベンジルオキシ、チオアルコキシ、ヒドロキシ、アルカノイル、カルボキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロおよび−ＯＳＯ₃Ｈから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されたフェノキシ基を意味する。本明細書で使用する「チオアルコキシ」は、上記で定義したアルコキシ基において、酸素原子が硫黄原子で置き替わった基を意味する。本発明の化合物の代表例としては以下のものが挙げられる。１３−アセチル−９−デオキソバッカチン III；９−デオキソパクリタクセル；１３−アセチル−７−デオキシ−９−デオキソバッカチン III；７−デオキシ−９−デオキソパクリタクセル；１３−アセチル−１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソバッカチン III；および１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソパクリタクセル。これらの化合物のうち好ましいのは、９−デオキソパクリタクセル、７−デオキシ−９−デオキソパクリタクセルおよび１０−デスアセトキシ−７−デオキシ −９−デオキソパクリタクセルである。本発明の薬剤組成物は、上記化合物の１種以上を医薬的に許容されうる担体とともに含む。「医薬的に許容されうる」は、確実な医学判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを生じることなくヒトおよび下等動物の組織と接触して使用するのに適することを意味し、適度の有効性／リスク比とつり合っている。本明細書で使用する「医薬的に許容されうる担体」は、非毒性で、不活性固体、半固体または液体のフィラー、希釈剤、カプセル化材料またはあらゆる種類の処方助剤を意味する。医薬的に許容されうる担体として作用することができる物質のいくつかの例としては、ラクトース、グルコースおよびショ糖などの糖；コーンスターチおよび馬鈴薯澱粉などの澱粉；セルロースならびにナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；トラガカント粉末；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび座薬ワックスなどの賦形剤；ピーナツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸：発熱物質を含まない水；等張性生理的食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコールならびにリン酸塩緩衝液が挙げられ、また、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの他の毒性のない相溶性潤滑剤、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、芳香剤、香料、保存剤および酸化防止剤も調剤者の判断に従って組成物に存在させることができる。本発明の薬剤組成物は、ヒトおよび他の動物に、経口、直腸内、非経口、槽内、膣内、腹腔内、局所（例えば、粉末、軟膏または点滴剤による）、口腔内、または経口もしくは鼻腔内噴霧により投与することができる。経口投与用の液体形状としては、医薬的に許容されうるエマルジョン、ミクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルが挙げられる。液体組成物は、活性化合物の他に、当業界で通常使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤（エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ピーナツ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ひまし油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルならびにそれらの混合物など）を含むことができる。経口用組成物は、不活性希釈剤の他に、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、芳香剤および香料などのアジュバントを含むこともできる。注射用製剤、例えば、滅菌した注入可能な水性または油性懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、公知技術に従って作ることができる。滅菌した注入可能な製剤は、非毒性の非経口的に許容されうる希釈剤または溶媒中の滅菌した注入可能な溶液、懸濁液またはエマルジョン（例えば、１，３−ブタンジオールにおける溶液など）であってもよい。使用できる許容可能なビヒクルおよび溶媒としては、水、リンゲル溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液が挙げられる。さらに、滅菌した不揮発性油は通常、溶媒または懸濁媒体として使用される。この場合、合成モノ−またはジグリセリドなどの不揮発性油も使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射用製剤に使用される。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターにより濾過するか、または滅菌剤を、使用前に滅菌水または他の注入可能な滅菌媒体に溶解または分散することができる滅菌固体組成物の形態で混入することにより滅菌することができる。薬剤の効果を長く持続させるために、しばしば、皮下または筋肉内注射による薬剤の吸収を遅くするのが好ましい。これは、水溶性の低い結晶性またはアモルファス物質の液体懸濁物を使用することにより達成することができる。その場合、薬剤の吸収速度はその溶解速度に依存し、溶解速度は、結晶の大きさおよび結晶形に依存すると考えられる。あるいは、非経口投与される薬剤の吸収は、薬剤を油性ビヒクルに溶解するか懸濁することによりおくらせることができる。注入可能なデボー製剤は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解可能なポリマー中で薬剤のミクロカプセル化マトリックスを形成することにより作られる。薬剤とポリマーとの比および使用する特定のポリマーの種類に応じて、薬剤の放出速度を調節することができる。他の生分解可能なポリマーの例としては、ポリ（オルソエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。注入可能なデボー製剤はまた、体組織と相溶性のあるリポゾームまたはミクロエマルジョンに薬剤を捕捉させることによって作られる。直腸または膣内投与用組成物は、好ましくは座薬であり、それは、本発明の化合物を、室温では固体であるが、体温では液体であり、従って、直腸または膣腔内で溶解して活性化合物を放出する非刺激性の適切な賦形剤または担体（ココアバター、ポリエチレングリコールまたは座薬ワックスなど）と混合することにより作ることができる。同様の種類の固体組成物も、ラクトース（乳糖）および高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を軟質および硬質充填ゼラチンカプセルにおけるフィラーとして使用して製造することができる。活性化合物はまた、上記した１種以上の賦形剤を使用してミクロカプセル化形状にすることもできる。錠剤、糖衣丸、カプセル、ピルおよび顆粒状の固体投与組成物は、製剤分野で周知の腸溶性コーティング、徐方性コーティング、および他のコーティングなどのコーティングおよび外皮を使用して作ることができる。そのような固体投与組成物では、活性化合物をショ糖、ラクトースまたは澱粉などの少なくとも１種の不活性希釈剤と混合することができる。そのような投与組成物はまた、通常そうであるように、不活性希釈剤以外に他の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースなどの錠剤化潤滑剤および他の錠剤化助剤を含むことができる。カプセル、錠剤およびピルの場合、それらの投与組成物は、緩衝剤を含むこともできる。それらは所望により、乳化剤を含んでもよく、また、腸管のある部分で活性成分のみを、または活性成分を優先的に、所望により遅延した方法で、放出する組成物にすることもできる。使用できる包埋用組成物の例としては、ポリマー状物質およびワックスが挙げられる。本発明の化合物の局所投与または経皮投与用形態としては、軟膏、泥膏、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、噴霧剤、吸入剤または絆創膏が挙げられる。活性化合物を滅菌条件下で医薬的に許容されうる担体および必要と考えられる保存剤または緩衝剤とともに混合する。点眼剤、点耳剤、眼の軟膏、粉末および溶液も、本発明の範囲内である。軟膏、泥膏、クリームおよびゲルは、本発明の活性化合物の他に、動植物の脂肪、油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物などの賦形剤を含むことができる。粉末および噴霧剤は、本発明の化合物の他に、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を含むことができる。噴霧剤は、さらに、クロロフルオロ炭化水素などの通常の推進薬を含むことができる。経皮用絆創膏は、さらに、化合物の体への放出が調節されるという利点を有する。そのような投与組成物は、化合物を適切な媒体に溶解または分散させることにより作ることができる。吸収促進剤を使用して化合物の皮膚への流出を高めることもできる。速度は、速度調節膜を付与するか、化合物をポリマーマトリックスまたはゲルに分散させることにより調節することができる。本発明方法は、ヒトまたは下等動物の腫瘍の治療法を含み、該方法は、そのような治療を必要とする患者に、治療的に有効な量の本発明化合物を、治療効果を達成するのに必要な量および回数投与することを含む。本発明化合物の「治療的に有効な量」は、医学的処置に適する適度の有効性／リスク比で腫瘍を治療するのに十分な量を意味する。しかし、理解されるように、本発明の化合物および組成物の一日の総用量は、確かな医学判断の範囲内で、主治医によって決定される。特定の患者に対する治療的に有効な特定の用量は、治療中の疾患およびその疾患の症状；使用する特定化合物の活性；使用する特定組成物；患者の年齢、体重、一般健康状態、性および食事制限；投与回数、投与法および使用する特定化合物の排出速度；治療期間；使用する特定化合物と併用する薬；ならびに医学分野で周知の因子などの種々の因子に依存する。ヒトまたは他の哺乳類に１回または何回かに分けて投与される本発明化合物の一日の総用量は、例えば、0.001 〜 50 mg/ kg 体重、より一般的には、0.01〜25 mg/kg体重である。１回に投与する組成物は、そのような量またはその約量を含んで一日の用量を満たすようにする。一般に、本発明による治療指針は、そのような治療を必要とするヒトに一日につき約 10 mg〜約 1000m g の本発明化合物を１回または多数回に分けて投与することを含む。より一般的には、本発明方法は、腫瘍を本発明化合物に、所望の効果を得るのに必要な濃度および回数でさらすことにより、哺乳類の腫瘍の増殖を阻止することを含む。式（Ｉ）の上記化合物を９−ジヒドロ−１３−アセチルバッカチン III（化合物１）から製造する本発明の方法は、下記工程を含む：（ａ）９−ジヒドロ−１３−アセチルバッカチン IIIをチオアシル化して９−チオアシル化合物を得る；（ｂ）工程（ａ）の物質を脱酸素化する；（ｃ）１３−位を脱アセチル化する；（ｄ）工程（ｃ）の生成物のＣ−１３位に適切な側鎖を付加する；および（ｅ）工程（ｄ）の生成物を選択的に脱保護する。７−デオキシ−９−デオキソタキサン化合物の製造法は、下記工程を含む：（ａ）９−ジヒドロ−１３−アセチルバッカチン IIIをチオアシル化して９−チオアシル化合物を得る；（ｂ）工程（ａ）の生成物脱酸素化する；（ｃ）工程（ａ）および（ｂ）を７−位で繰り返す；（ｄ）１３−位を脱アセチル化する；（ｅ）工程（ｄ）の生成物Ｃ−１３位に適切な側鎖を付加する；および（ｆ）工程（ｅ）の生成物を選択的に脱保護する。７−デオキシ−９−デオキソ−１０−デスアセトキシタキサン化合物の製造法は、下記工程を含む：（ａ）９−ジヒドロ−１３−アセチルバッカチン IIIをチオアセチル化して９− チオアシル化合物を得る；（ｂ）工程（ａ）の生成物を脱酸素化する；（ｃ）工程（ａ）および（ｂ）を７−位で繰り返す；（ｄ）１０−位を脱アセチル化する；（ｅ）工程（ａ）および（ｂ）を１０−位で繰り返す；（ｆ）１３−位を脱アセチル化する；（ｇ）工程（ｆ）の生成物のＣ−１３位に適切な側鎖を付加する；および（ｈ）工程（ｇ）の生成物を選択的に脱保護する。特に、本発明の化合物１は、Taxus canadensisを針状または小枝に粉砕したものからアルコール抽出によって得ることができることが分かった。次いでこの抽出物を、始めにアセトン、メタノール、ヘキサン、ヘプタンおよび水から成る溶媒系に分配して脂肪および脂質を除去して、通常の分離技術を使用して精製する。脂肪を取り除いた粗抽出物をさらに、メタノール、塩化メチレン、クロロホルム、酢酸エチルおよび水から成る溶媒系にさらに数回分配する。塩化メチレンまたはクロロホルムおよび酢酸エチルから成る溶媒系に可溶である抽出物画分は化合物１を含む。上記画分はさらに、ヘキサン、メタノール、塩化メチレン、クロロホルム、トルエンおよび水または適切な水性緩衝剤から成る溶媒系を使用して、遊星形（pl anet）コイル向流クロマトグラフィー（ＰＣＣＣ）により精製することができる。種々の画分は、パクリタクセル、セファロマンニンおよびバッカチン IIIなどのいくつかのタキサン誘導体を含む。溶媒を化合物１を含む画分から除去し、メタノールまたはエタノールおよび水から再結晶して、純粋な化合物を白色結晶として得る。所望により、パクリタクセル、バッカチンおよび他の関連化合物も、種々のクロマトグラフィー画分から単離することができる。本発明化合物には非対称中心が存在する可能性がある。本発明は、種々の立体異性体およびそれらの混合物も包含している。特定の立体化学の出発化合物は市販されており、あるいは、下記に詳述する方法で製造して、有機化学分野では周知の技術により分割する。一般に、式（Ｉ）の化合物は、化合物１のＣ−９をチオアシル化剤で処理した後、水素化スズ還元を行なって反応図式Ｉに示す化合物を得ることにより合成できる。さらに、チオアシル／還元工程は、９、１４などの場合と同様に、３のＣ −７、Ｃ−１０およびＣ−１の他のヒドロキシに対して行なうことができる。これらのデオキシ化合物はまた、１０および１２の場合と同様に、Ｃ−１３の脱アセチルを行なうことができ、Ｃ−１３ヒドロキシは、適切な側鎖のラクタムまたはアセトニド形によって上述したように処理し、側鎖の保護基を脱離し、側鎖の窒素をアシル化して最終的な９−デオキソ類似体を得ることができる。下記反応図式Ｉに示す方法の特定の例として、１３−アセチル−９−ジヒドロバッカチン III（１）をリチウムヘキサメチルジシルアジド、二硫化炭素およびヨウ化メチルで処理してＣ−９メチルキサンテート２を得る。化合物２は、トリブチルスズまたはトリス（トリメチルシリル）シランまたは他の三置換スズ剤で処理することにより脱酸素化を行って化合物３を得、次いで、メチルリチウムで処理して１３−位のアセチル基を除去することにより化合物４を得る。化合物４は、７−位のヒドロキシ保護基とともに示す。化合物４は次いで、適切に保護された側鎖誘導体（例えば、（３Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−アシル−３−Ｏ−（１−エトキシエチル）−４−フェニル−２−アゼチジノン（５）または（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ −保護−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン（６）など）と反応させる。次いで、中間体５を使用するときは保護基を穏和な酸（例えば、１％ＨＣｌ／エタノールまたはメタノールなど）で脱離し、あるいは、中間体６を使用するときは接触水素添加を行なう。中間体６を使用する場合、脱保護の後、３’−アミノアシル化（例えば、無水安息香酸による処理など）を行なうと、式（Ｉ）の所望の９−デオキソタキサン、この場合は９−デオキソパクリタクセル（７）が得られる。（中間体５を使用する場合、Ｒは所望のアシル基、すなわち、パクリタクセル類似体の場合はベンゾイルである。）あるいは、脱酸素化工程を化合物３に対して繰り返すことにより、９−デオキソ−７−デオキシ化合物９を得ることができる。化合物９のさらに緻密な反応を反応図式 II に示す。化合物９をメチルリチウムで処理して１３−アセチル保護基を脱離すると、化合物１０が得られる。化合物１０は次いで、適切に保護された側鎖誘導体（例えば、（３Ｒ，４Ｓ）−Ｎ− アシル−３−Ｏ−（１−エトキシエチル）−４−フェニル−２−アゼチジノン（５）または（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−保護−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３ −フェニルイソセリン（６）など）と反応させる。次いで、化合物５を使用するときは保護基を穏和な酸（例えば、１％ＨＣｌ／エタノールまたはメタノールなど）で脱離し、あるいは、化合物６を使用するときは水素添加を行なう。中間体６を使用する場合、脱保護の後、３’−アミノアシル化を行なうと、式（Ｉ）の所望の９−デオキソ−７−デオキシタキサンが得られる。無水安息香酸を使用すると、９−デオキソ−７−デオキシパクリタクセル（１１）が得られる。（中間体５を使用する場合、Ｒは所望のアシル基、すなわち、パクリタクセル類似体の場合はベンゾイルである。）あるいは、１３−アセチル保護基を脱離して（例えば、メチルリチウムにより）、化合物１２を得る。脱酸素化工程を化合物１２に対して繰り返すと、９−デオキソ−７，１０−ジデオキシ化合物１４が得られる。化合物１４は次いで、適切に保護された側鎖誘導体（例えば、（３Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−アシル−３−Ｏ−（１−エトキシエチル）−４−フェニル−２−アゼチジノン（５）または（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−アシル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン（６）など）と反応させる。次いで、化合物５を使用するときは保護基を穏和な酸（例えば、１％ＨＣｌ／エタノールまたはメタノールなど）で脱離し、あるいは、化合物６を使用するときは水素添加を行なう。中間体６を使用する場合、脱保護の後、３’−アミノアシル化を行なうと、式（Ｉ）の所望の９−デオキソ−７，１０−ジデオキシタキサンが得られる。無水安息香酸をアシル化剤として使用すると、９−デオキソ−７−デオキシ−１０−デスアセトキシパクリタクセル（１５）が得られる。（中間体５を使用する場合、Ｒは最終物質の所望のアシル基、すなわち、パクリタクセル類似体の場合はベンゾイルである。）反応図式 IIIは、９−デオキソ−７−デオキシ−１０−デスアセトキシパクリタクセルの合成における中間体６（（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−保護−Ｎ，Ｏ−（１− メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン）の使用を説明する。脱酸素化１３−脱アセチル化バツカチン III（１４）を側鎖前駆体６（Ｒ^*はベンジルオキシカルボニルなどの窒素保護基である。）と反応させると化合物１６が得られる。窒素保護基を脱離し（例えば、Ｒ^*がベンジルオキシカルボニルの場合は接触水素添加により）、次いで、側鎖アミノ基をアシル化して（例えば、無水安息香酸により）最終生成物（１５）を得る。理解されるように、バッカチン III構造上のいくつかのヒドロキシ基に影響を及ぼす脱酸素化ならびに選択的保護および脱保護工程は、必要であれば工程の順序または工程数を変えて行なうことができ、反応図式Ｉおよび II は、そのような変更を含むものである。上記説明は、下記の実施例を参照することにより、より理解することができる。下記実施例では、これらの合成で使用する特定の試薬および条件を詳細に記載する。これらの実施例は、説明のためのものであり、本発明を限定するものではない。なお、次の略号を使用する。ＡＩＢＮ：２，２’−アゾビス− （２−メチルプロピオニトリル）；ＣＨ₂Ｃｌ₂：塩化メチレン；ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；ＬＨＭＤＳ：リチウムヘキサメチルジシルアジド；ＭｅＯＨ：メタノノール；およびＴＨＦ：テトラヒドロフラン。実施例１メチル１３−アセチル−９−ジヒドロバッカチン III ９−Ｏ−キサンテート（反応図式Ｉ、化合物（２）） −25℃、窒素下でＴＨＦ（100 ml）に溶解した１３−アセチル−９−ジヒドロバッカチン III（１）（1 g 、1.58ミリモル）に、ＬＨＭＤＳ（3.5 ml、1 M ＴＨＦ溶液、3.5 ミリモル）を添加し、次いで、15分後に二硫化炭素（0.33 ml 、 5.2 ミリモル）、５分後にヨウ化メチル（0.33 ml 、5.2 ミリモル）を添加した。１時間後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。反応を pH 7 のリン酸塩緩衝液の添加により停止し、有機相を酢酸エチルと混合し、分離、脱水、真空蒸発を行なった。残渣を、97:3のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製すると、0.66 g(58%)のメチル１３ −アセチル−９−ジヒドロバッカチン III ９−Ｏ−キサンテート（２）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz） δ 8.1(d，2H，ArH)，7.62(t，1H，ArH)，7.49(t，2H，ArH)，6.88(d，1H，H-9) ，6.43(d，1H，H-10)，6.18(t，1H，H-13)，5.92(d，1H，H-2)，4.99(d，1H，H- 5)，4.45(t，1H，H-7)，4.32(d，1H，H-20_a)，4.19(d，1H，H-20_b)，3,1(d,1H,H -3)，2.7〜2.6(m，1H，H-6_a)，2.63(s，3H，SMe)，2.3(s，3H，OAC)，2 22(d，1 H，H-14_a)，2.2(s，3H，OAc)，2.01(s，3H，OAc)，1.99(d，3H,ビニル-CH₃)，2. 05 〜 1.8(m，2H，H-6_b，H-14_b)，1.84(s，3H，CH₃)，1.61(s，3H，CH₃)，1.25( s，3H，CH₃)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 738（Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₃）⁺ 実施例２１３−アセチル−９−デオキソバッカチン III（反応図式Ｉ、化合物（３））実施例１で得た化合物（0.66 g、0.92ミリモル）および２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオニトリル）(ＡＩＢＮ、30 mg)のトルエン（20 ml）溶液を10 0℃、窒素下で攪拌し、これに、水素化トリ−ｎ−ブチルスズ（0.3 ml、1.12ミリモル）を滴下した。30分後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。pH 7のリン酸塩緩衝液を添加することにより反応を停止し、有機相を酢酸エチルと混合し、分離、脱水、真空蒸発を行なった。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（95:5のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、0.535 g（95%）の標記化合物（３）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、 300 MHz）δ8.1(d，2H，ArH)，7.61(t，1H，ArH)，7.48(t，2H，ArH)，6.17(t， 1H，H-13)，5.93(d，1H，H-10)，5.77(d，1H，H-2)，4.97(d，1H，H-5)，4.29(d ，1H，H-20_a)，4.13(d，1H，H-20_b)，4.04(t，1H，H-7)，3.03(d，1H，H-3)，2. 58(ddd，1H，H-6_a)，2.38(brs，1H，H-70H)，2.31〜2.66(m，2H，H-9)，2.27(s ，3H，4-OAc)，2.23〜2.19(m，2H-14)，2.19(s，3H，13-OAc)，2.09(s，3H，10- OAc)，1.85(d，3H，ビニル-CH₃)，1.88 〜 1.8(m，1H，H-6_b)，1.72(s，3H，CH₃ )，1.4(s，3H，19-CH₃)，1.26(s，3H，CH₃)実施例３９−デオキソバッカチン III 実施例２で得た化合物（0.188 g 、 1.37ミリモル）のＴＨＦ(40 ml)溶液を− 78℃、窒素下で攪拌し、これに、メチルリチウム（1.4 M エーテル溶液，1 ml、6.2 ミリモル）を滴下した。45分後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。400 mlのpH 7のリン酸塩緩衝液および酢酸エチルに添加することにより反応を停止し、有機相を分離、脱水、真空蒸発した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（95:5のＣＨＣｌ₃− ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、70 mg（40%）の標記化合物（４）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300MHz）δ 8.13(d，2H，ArH)，7.61(t，1H，ArH) ，7.48(t，2H，ArH)，5.9(dd，1H，H-10)，5.73(d，1H，H-2)，4.95(d，1H，H-5 )，4.8(m，1H，H-13)，4.3(d，1H，H-20_a)，4.14(d，1H，H-20_b)，4.07(dd，1H ，H-7)，3.1(d，1H，H-3)，2.68(ddd，1H，H-6_a)，2.35〜2.0(m，4H，H9，H14) ，2.27(s，3H，OAc)，2.1(s，3H，OAc)，2.01(d，3H,ビニル-CH₃)，1.83(ddd，1 H，H-6_b)，1.69(s，3H，CH₃)，1.4(s，3H，19-CH₃)，1.26(s，3H，CH₃)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 573（Ｍ＋Ｈ）⁺，590（Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₃）⁺ 実施例４７−Ｏ−トリエチルシリル−９−デオキソバッカチン III（反応図式Ｉ、化合物（４））実施例３で得た化合物（４）（70 mg，0.12 ミリモル）を、25℃で、トリエチルアミン（0.2 ml，1.43ミリモル）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ， 5 mg）および塩化トリエチルシリル（0.1 ml，0.58ミリモル）／ＣＨＣｌ₃(1 ml )と混合した。３時間後、混合物を緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮して得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（97:3のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、76 mg （90%）の標記化合物（４）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz）δ 8 ,13(d，2H，ArH)，7.61(t，1H，ArH)，7.48(t，2H，ArH)，5.82(dd，1H，H-10) ，5.75(d，1H，H-2)，4.9(d，1H，H-5)，4.77(m，1H，H-13)，4.3(d，1H，H-20_a )，4.14(d，1H，H-20_b)，4.02(dd，1H，H-7)，3.13(d，1H，H-3)，2.51(ddd，1H ，H-6_a)，2.45〜2.0(m，4H，H9，H14)，2.27(s，3H，OAc)，2,13(s，3H，ビニル -CH₃)，2.05(s，3H，OAc)，1.85(ddd，1H，H-6_b)，1.67(s，3H，CH₃)，1.4(s， 3H，19-CH₃)，1,18(s，3H，CH₃)，0.99(t，9H，Si-C-CH₃)，0.6〜0.7(m，6H，Si -CH₂)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 686（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例５９−デオキソパクリタクセル（反応図式Ｉ，化合物（７））実施例４で得た化合物である７−Ｏ−トリエチルシリル−９−デオキソバッカチン III（45 mg，0.06 ミリモル）のＴＨＦ溶液（25℃）に、水素化ナトリウム（60重量% ，40 mg，0.9ミリモル）、次いで、Georg ら，Bioorganic & Medicin al Chemistry Letters 2(4):295(1992)または Ojimaら，J．Org．Chem．56:1681 (1991)(各々、参考文献として本明細書に包含される。)の記載に従って合成した（３Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−Ｏ−（１−エトキシエチル）−４−フェニル−２−アゼチジノン（化合物５）（133 mg，0.36 ミリモル）を添加した。７時間後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。混合物を緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮して得られた残渣を、25℃で1 % ＨＣｌ／メタノール（2 ml）と直接混合した。２時間攪拌した後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了し、緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、分取薄層クロマトグラフィー（0.5 mm）（93:7のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、17 mg (30%) の標記化合物が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz）δ 8.09(d ，2H，ArH)，7.82(d，2H，ArH)，7.61(t，1H，ArH)，7.55〜7.3(m，11H，ArH，N H)，6.1(t，1H，H-13)，5.86(m，2H，H-10，H-3')，5.78(d，1H，H-2)，4.93(d ，1H，H-5)，4.75(t，1H，H-2')，4.39(d，1H，2'-OH)，4.29(d，1H，H-20_a)，4 .15(d，1H，H-20_b)，3.94(brt，1H，H-7)，2.99(d，1H，H-3)，2.58(m，1H)，2. 37（dd，1H)，2.29(s，3H，OAc)，2.1(s，3H，OAc)，2.3〜1.5(m，7H)，1.7(d， 3H，ビニル -CH₃)，1.6(s，3H，CH₃)，1.4(s，3H，CH₃)，1.2(s，3H，CH₃) ；ＭＳ（ＦＡＢ／Ｋ⁺）ｍ／ｅ 878（Ｍ＋Ｋ）⁺ 実施例６１３−アセチル−９−デオキソバッカチン III ７−チオカルボニルイミダゾリド（反応図式Ｉ、化合物（８））実施例２で得られた化合物である１３−アセチル−９−デオキソバッカチン I II（0.78 g，1.27ミリモル）、チオカルボニルジイミダゾリド（0.5 g，2.8ミリモル）およびＤＭＡＰ(20 mg)のトルエン（5 ml）溶液を100℃に加熱した。３時間後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。混合物を緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（97:3のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、0.81g (88%) の標記化合物が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz ）δ 8.4(brs，1H，イミド)，8.1(d，2H，ArH)，7.67(brs ，1H，イミド)，7.62(t，1H，ArH)，7.5(t，2H，ArH)，7.1(brs，1H，イミド)， 6.19(t，1H，H-13)，5.94(dd，1H，H-7)，5.86(dd，1H，H-10)，5.82(d，1H，H- 2)，5.0(d，1H，H-5)，4.(d，1H，H-20_a)，4.19(d，1H，H-20_b)，3.27(d，1H，H -3)，2.95(ddd，1H，H-6_a)，2.32(s，3H，OAc)，2.21(s，3H，OAc)，2.0〜2.45( m，5H)，1.94(s，3H，OAc)，1.91(d，3H，ビニル-CH ₃)，1.71(m，1H)，1,7(s， 3H，CH ₃)，1.69(s，3H，CH₃)，1.25(s，3H，CH ₃)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 725（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例７１３−アセチル−９−デオキソバッカチン III（反応図式II、化合物（９））実施例６で得られた化合物（0.81 g，1.12ミリモル）およびＡＩＢＮ (20 mg) のトルエン（5 ml）溶液を100℃、窒素下で攪拌し、これに水素化トリ−ｎ−ブチルスズ（0.33 ml，l.23ミリモル）を滴下した。１５分後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。混合物を緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（98:2のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、0.63 g (94%)の標記化合物が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz）δ 8.1(d，2H，ArH)，7.6(t，1H，ArH)，7.49(t，2H，Ar H)，6.15(t，1H，H-13)，6.05(dd，1H，H-10)，5.72(d，1H，H-2)，4.9(d，1H， H-5)，4.3(d，1H，H-20_a)，4.1(d，1H，H-20_b)，3.07(d，1H，H-3)，2.6(dd，1H ，H-6_a)，2.29(s，3H，OAc)，2.22〜1.2(m，11H)，2.2(s，3H，OAc)，2.07(s，3 H，OAc)，1.9(d，3H，ビニル -CH₃)，1.7(s，3H，CH₃)，1.46(s，3H，CH₃)，1.2 2(s，3H，CH₃)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 599（Ｍ＋Ｈ）⁺，616 （Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₃）⁺ 実施例８７−デオキソ−９−デオキソバッカチン III（反応図式II、化合物（１０）） −78℃、窒素下で攪拌した実施例７で得られた化合物（0.817 g，1.36 ミリモル）のＴＨＦ(140 ml)溶液に、メチルリチウム（1.4 M エーテル溶液，2.44 ml ，3.4ミリモル）を滴下した。２時間後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。pH 7のリン酸塩緩衝液 (400 ml) および酢酸エチルに混合物を添加することにより反応を停止し、有機層を分離して、脱水、真空蒸発した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（96:4のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、0.21 g (27%)の７−デオキソ−９−デオキソバッカチン III （１０）および 0.22 g (31%)の１０−デアセチル−７−デオキシ−９−デオキソバッカチン III（１２）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.1(d，2H ，ArH)，7.6(t，1H，ArH)，7.48(t，2H，ArH)，6.02(dd，1H，H-10)，5.7(d，1H ，H-2)，4.94(d，1H，H-5)，4.77(brt，1H，H-13)，4.3(d，1H，H-20_a)，4.13(d ，1H，H-20_b)，3.12(d，1H，H-3)，2.58(dd，1H，H-6_a)，2.27(s，3H，OAc)，2. 35〜1.5(m，9H)，2.08(s，3H，OAc)，2.07(s，3H,ビニル -CH，)，1.65(s，3H， CH₃)，1.46(s，3H，CH₃)，1.08(s，3H，CH₃)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 5 57（Ｍ＋Ｈ）⁺，574 （Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₃）⁺ 実施例９７−デオキソ−９−デオキソパクリタクセル（反応図式II、化合物（１１））７−デオキソ−９−デオキソバッカチン III（１０）（24 mg，0.043ミリモル）のＴＨＦ（1 ml）溶液（25℃）に、水素化ナトリウム（60重量%，20 mg，0.46 ミリモル）、次いで、Georg ら，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2 (4):295(1992)またはOjimaら，J．Org，Chem．56:1681(1991) に従って合成した（３Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−Ｏ−（１−エトキシエチル）−４−フェニル−２−アゼチジノン（化合物５）（48 mg，0.141 ミリモル）を添加した。2 4時間後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。混合物を緩衝液( 200 ml)および酢酸エチルに添加することにより、反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮して得られた残渣を、25℃で1 % ＨＣｌ／メタノール ( 1 ml) と直接混合した。３時間攪拌した後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了し、緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、分取薄層クロマトグラフィー (0.25 mm)（97:3のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、5.76 mg (1 6.2 %)の標記化合物が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz ）δ 8.13(d ，2H，ArH)，7.82(d，2H，ArH)，7.61(t，1H，ArH)，7.53〜7,25(m，11H，ArH， NH)，6.1(t，1H，H-13)，5.98(dd，1H，H-10)，5.83(dd，1H，H-3')，5.85(d，1 H，H-2)，4.96(d，1H，H-5)，4.77(d，1H，H-2')，4.42(brs，1H，OH)，4.3(d， 1H，H-20_a)，4.15(d，1H，H-20_b)，3.03(d，1H，H-3)，2.58(dd，1H)，2.37(dd ，1H)，2.3(s，3H，OAc)，2.25〜1.5(m，7H)，2.05(s，3H，OAc)，1.7(d，3H，ビニル-CH ₃)，1.67(s，3H，CH₃)，1.48(s，3H，CH₃)，1.19(s，3H，CH₃)；ＭＳ（ＦＡＢ／Ｋ⁺）ｍ／ｅ 862（Ｍ＋Ｋ）⁺ 実施例１０７−デオキソ−９−デオキソバッカチン III １０−チオカルボニルイミダゾリド（反応図式II、化合物（１３））実施例８で得た１０−デアセチル−７−デオキソ−９−デオキソバッカチン I II（１２）（165 mg，0.32ミリモル）、チオカルボニルイミダゾリド（114 mg， 0.64ミリモル）およびＤＭＡＰ (16 mg)のトルエン (3 ml) 溶液を82℃に加熱した。１時間後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。混合物を緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（96:4のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、180 mg (90%) の標記化合物が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ 、300 MHz ）δ 8.25(brs，1H，イミド)，8.12(d，2H，ArH)，7.61(t，1H，Ar H)，7.5(t，2H，ArH)，7.49(brs，1H，イミド)，7.13(brs，1H，イミド)，5.71( d，1H，H-2)，5.34(dd，1H，H-10)，4.97(d，1H，H-5)，4.8(t，1H，H-13)，4.3 2(d，1H，H-20_a)，4.13(d，1H，H-20_b)，3.23(d，1H，H-3)，2.8(ddd，1H)，2.2 9(s，3H，OAc)，2.4〜1.6(m，9H)，2.05(s，3H,ビニル-CH ₃)，1.65(s，3H，CH₃ ），1.48(s，3H，CH₃），1.15(s，3H，CH₃)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 62 5（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例１１１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソバッカチン III（反応図式 II、化合物（１４）） 100 ℃、窒素下で攪拌した実施例１０で得た化合物（180 mg，0.28ミリモル）およびＡＩＢＮ (25 mg)のトルエン (5 ml) 溶液に、水素化トリ−ｎ−ブチルスズ (0.28 ml，１ミリモル) を滴下した。１時間後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了した。混合物を緩衝液および酢酸エチルで反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（95:5のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、102 mg (71%) の標記化合物が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ 、300 MHz）δ 8.14(d，2H，ArH)，7.6(t，1H，ArH)，7.48(t，2H，ArH)，5.72 (d，1H，H-2)，4.94(d，1H，H-5)，4.73(brq，1H，H-13)，4.32(d，1H，H-20_a) ，4.16(d，1H，H-20_b)，3.35(d，1H，H-3)，2.79(dd ，1H)，2.3(s，3H，OAc)， 2.35〜1.5(m，9H)，1.9(s，3H，ビニル -CH₃)，1.5(s，3H，CH ₃)，1.41(s，3H ，CH₃)，1.1(s，3H，CH₃)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 499（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例１２１３−｛（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン｝−１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソパクリタクセル（反応図式II、化合物（１６）でＲがベンジルオキシカルボニルの場合）実施例１１で得た化合物（20 mg，0.04 ミリモル）、ＤＭＡＰ（9.8 mg，0,08 ミリモル）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（32 mg，0.15 ミリモル）、および（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリンに対する Commercon，A.，Bezard，D.，Bernard，F.，Bourzat ，J.D．Tetrahedron Lett.，33:5185 (1992) （参考文献として本明細書に包含される。）の方法と同様にして合成した（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン（48 m g，0.13 ミリモル）のトルエン (2 ml) 溶液を 80 ℃、窒素下で３時間加熱した。混合物を緩衝液およびＣＨＣｌ₃で反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（60:40のヘキサン− ＥｔＯＡｃで溶離）により精製すると、10 mg (30 %)の標記化合物が得られた。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz ）δ 8.07(d，2H，ArH)，7.6(t，2H，ArH)，7 .46(t，2H，ArH)，7.4〜7.1(m，10H，ArH)，6.8(brs，1H，H-3')，6.17(t，1H， H-13)，5.87(dd， 1H)，5.7(d，1H，H-2)，5.24(brd，1H，H-3')，5.1〜4.8(brs，2H，ArCH ₂)，4. 91(d，1H，H-5)，4.88〜4.55(d，1H，H-2')，4.25(d，1H，H-20_a)，4.08(d，1H ，H-20_b)，3.21(d，1H，H-3)，2.82(m，1H)，2.25〜1.4(m，7H)，1.77(s，6H)， 1.55(s，6H)，1.39(s，3H)，1.23(s，3H)；ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）ｍ／ｅ 836 （Ｍ＋Ｈ）⁺，853 （Ｍ＋ＮＨ₄）⁺ 実施例１３１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソパクリタクセル（反応図式 II、化合物（１５））実施例１２で得た化合物 (5 mg，0.006 ミリモル) および10 % Ｐｄ／Ｃ (10 mg)の 30%ＭｅＯＨ／水における懸濁物を1.5 時間、バルーン水素添加分解にかけた。反応混合物を濾過し、無水安息香酸 (6 mg，0.026 ミリモル) を添加した。３時間攪拌した後、薄層クロマトグラフィー分析により反応が完了し、緩衝液およびＣＨＣｌ₃で反応停止した。有機抽出物を洗浄し、脱水、真空濃縮した後、分取薄層クロマトグラフィー (0.25 mm)（95:5のＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨで溶離）により精製すると、1.6 mg (35 %) の標記化合物が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、300 MHz ）δ 8.1(d，2H，ArH)，7.85(d，2H，ArH)，7.6(t，1H ，ArH)，7.55〜7.25(m，11H，ArH，NH)，6.05(t，1H，H-13)，5.87(dd，1H，H-3 ')，5.76(d，1H，H-2)，4.98(d，1H，H-5)，4.88(brs，1H，H-2'-OH)，4.74(d， 1H，H-2')，4.3(d，1H，H-20_a)，4.17(d，1H，H-20_b)，3.14(d，1H，H-3)，2.68 (m，1H)，2.4〜1.5(m，9H)，2.29(s，3H，OAc)，1.5(s，3H，ビニル-CH ₃)，1.4 3(s，3H，CH₃)，1.4(s，3H，CH₃)，1.13(s，3H，CH₃)実施例１４ in vitroでの腫瘍細胞の細胞毒性アッセイ本発明化合物の腫瘍系 A549 （ヒト乳癌）および P-388（マウス白血病）に対する in vitro 細胞毒性活性をテストした。IC₅₀は、下記に記載するプロトコールに従って、培養細胞に対する細胞毒性活性を比色アッセイにより測定して得た。３日間のマイクロタイターアッセイを使用して、ある範囲の薬物濃度にさらした培養細胞の増殖阻害を測定した。代謝活性は、細胞がテトラゾリウム染料であるＭＴＴ（臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）を定量可能な着色した最終物質（可視スペクトルの 570 nm で吸収）に還元する能力によって測定した。生き残った細胞がＭＴＴ染料を還元する。テスト化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、最初にアールバランス塩溶液、次いで培養培地により、テストすべき化合物の最高濃度の２倍に希釈した。この濃縮ストックから、２倍に連続希釈した溶液を 96 ウェルマイクロタイタートレイで調製した。各ウェルは、所望の最終濃度の２倍の化合物を含む。各濃度について３回テストし、薬物を含まない３個のコントロールと比較した。細胞の増殖は、化合物の希釈に使用したものと同じ培地で行い、次いで、トリプシン処理により細胞を採取した。これは、吸引による培地の除去；細胞単層のアールバランス塩溶液による２回の洗浄；トリプシン (0.05 %) ／ＥＤＴＡ (0. 53 mM ；各 25 cm²につき、約0.2 ml)の添加、傾斜による単層の被覆、次いで薄いフィルム状溶液のみを残してのトリプシンの除去；単層が分離するまで（視覚による、および／または顕微鏡による観察によって測定）の室温でのインキュベーション；牛胎児血清を含む培地の添加によるトリプシン作用の停止および細胞の再懸濁；細胞のかたまりの分離を助けるための磨砕；ならびに電気的細胞計数器（例えば、Coulter 計数器）または１アリコートの細胞懸濁物のトリパンブルー (通常の生理的食塩水における 0.4 %溶液) との混合による 1 ml 当たりの細胞数の測定および血球計数器による生存細胞の計数を伴った。採取して、生存細胞数を測定した後、細胞密度を 25,000 細胞／mlに調整した。次いで、その細胞を含む接種物（0.1 ml）を各ウェルに添加して、各ウェルにつき、2,500 細胞の最終濃度とした。接種物を添加して、テスト化合物を所望の最終濃度に希釈した。次いで、マイクロタイタートレイを、5 % の二酸化炭素を含む湿潤雰囲気下、 36 ℃で３日間インキュベートした。３日後、5 mg/ml のＭＴＴ／リン酸塩緩衝生理的食塩水の 20 マイクロタイターを各ウェルに添加した。トレイを再びインキュベーターに戻して2〜4 時間インキュベートし、生き残っている細胞によって染料を還元した。培地および未還元染料を吸引により除去した。ＤＭＳＯを各ウェルに添加し、分光光度計により 570 nm での吸収が測定できるように、染料還元の水不溶性着色最終物質を溶解した。IC₅₀を、570 nmでの吸収が薬物処理していないコントロールの値の 50 % になるのに必要なテスト化合物の濃度として測定した。下記表３に示すテストの結果は、本発明の化合物の細胞毒性活性を示す。理解されるように、上記の詳細な記載およびそれに伴う実施例は、単なる例示であり、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の範囲は、添付の請求の範囲およびそれと同等のものによってのみ定義される。開示した態様の種々の変更および改良は当業者には明らかであり、本発明の精神および範囲を逸脱しない限り行なうことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者リー，レピングアメリカ合衆国、イリノイ・60031、ガニー、ウエストフイールド・ドライブ・2041

Claims

【特許請求の範囲】１．下記式：［式中、Ｒ¹は、アルカノイルまたは式：（式中、Ｒ⁷は水素、アルキル、フェニル、置換フェニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、フェノキシおよび置換フェノキシから成る群から選択され；Ｒ⁸は水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、フェニル、置換フェニル、α−ナフチル、β−ナフチルまたはヘテロアリールであり；Ｒ⁹は水素、アルカノイル、置換アルカノイルおよびアミノアルカノイルから成る群から選択される。）のラジカルであり；Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁶は、独立して、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノアルカノイルおよびアルカノイルオキシから成る群から選択され；Ｒ⁴は、アルキル、アルカノイル、アミノアルカノイルまたはアロイルから成る群から選択され；Ｒ⁵は、アルキル、アルカノイル、アミノアルカノイルおよびアロイルから成る群から選択される。］を有する化合物またはそのプロドラッグ。２．Ｒ¹が式：を有するラジカルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。３．Ｒ²が水素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。４．Ｒ²が水素であることを特徴とする請求項２に記載の化合物。５．Ｒ³が水素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。６．Ｒ³が水素であることを特徴とする請求項２に記載の化合物。７．Ｒ²およびＲ³がともに水素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。８．Ｒ²およびＲ³がともに水素であることを特徴とする請求項２に記載の化合物。９．Ｒ¹およびＲ⁴がアセチルであり、Ｒ²がアセトキシであり、Ｒ⁵がヒドロキシであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。１０．下記化合物：１３−アセチル−９−デオキソバッカチン III；９−デオキソパクリタクセル；１３−アセチル−７−デオキシ−９−デオキソバッカチン III；７−デオキシ−９−デオキソパクリタクセル；１３−アセチル−１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソバッカチン III；および１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソパクリタクセルから成る群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。１１．下記化合物：メチル１３−アセチル−９−ジヒドロバッカチンIII ９−Ｏ−キサンテート；９−デオキソバッカチンIII ；１３−｛（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン｝−９−デオキソバッカチンIII ；７−Ｏ−トリエチルシリル−９−デオキソバッカチンIII ；１３−アセチル−９−デオキソバッカチンIII ７−チオカルボニルイミダゾリド；７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII ；１３−｛（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン｝−７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII ；７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII １０−チオカルボニルイミダゾリド；１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII ；および１３−｛（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ，Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−フェニルイソセリン｝−１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソバッカチンIII から成る群から選択される中間体。