JPH09509650A

JPH09509650A - 部位選択的局在，取込み機構，感受性および動態空間像を改善する酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカンとの金属イオンキレートからなる内用剤

Info

Publication number: JPH09509650A
Application number: JP7515277A
Authority: JP
Inventors: エフ．ラニィ，デビッド
Original assignee: アクセスファーマスーティカルズ，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-11-29
Filing date: 1994-11-29
Publication date: 1997-09-30
Also published as: CA2177468A1; EP0726781A1; NZ277928A; WO1995014492A3; AU1332495A; EP0726781B1; ATE204482T1; AU1262995A; JPH09509400A; NZ277415A; EP0731713A1; DE69428052D1; US5672334A; AU688838B2; AU696166B2; WO1995014491A3; CA2177470A1; WO1995014492A2; WO1995014491A2

Abstract

(57)【要約】この出願は、金属イオンキレートからなる試剤であって、そのキレートは金属イオンのキレーションに関与しない少なくとも１つの余分の塩基性またはカチオン性基を有し、サッカライド、オリゴサッカライド、ポリサッカライド、サルファイドおよびグリコサミノグリカンからなる群から選ばれ、選択的にオリゴサッカライドが過剰酸化されているアニオン性、親水性、水溶性の担体に結合している試剤である。この金属イオンのキレーターには、造影剤、診断剤または薬物を負荷させ、生体内部位への選択的結合を可能にすることができる。

Description

【発明の詳細な説明】部位選択的局在，取込み機構，感受性および動態空間像を改善する酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカンとの金属イオンキレートからなる内用剤本発明は，疾患部位における選択性，有効性，取込み機構および動態空間像を改善する内用の新規な組成物，試剤および方法に関する．本発明はまた疾患部位における生物医学的造影の選択性，感度，取込み機構および動態空間像の改善，映像コントラストおよびスペクトルの増強，それに限定されるものではないが，とくに磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）のコントラスト増強に使用される組成物，試剤および方法に関する．新規な組成物は（ａ）独特の非共有結合性化学結合によって調製され，さらに（ｂ）物理学的安定化によって増強される．他の組成物は共有化学結合によって調製されている．結合は，アニオン性または化学的に酸性で通常また有利には親水性のまたは実質的に完全な親水性の性質を有するサッカライド，サルファトイドおよびグリコサミノグリカンからなる担体へのカチオン性または化学的に塩基性の金属キレーターによるものである．活性成分と担体の結合はまた，非共有結合，物理的結合および共有結合の組合せによるものであってもよい．非共有結合は，それに限定されるものではないが，カチオン性または塩基性金属キレーターを適当な比率でアニオン性または酸性サッカライド担体と混合し，それにより原理的には金属キレーターの１または２以上のカチオン性（塩基性）基の酸性担体の１または２以上のアニオン性（酸性）基への静電力結合に基づき溶液状態および乾燥状態対合イオン塩を形成させることを包含する手段によって行うことができる．このような結合はさらに，水素結合ならびに，それらに限定されるものではないが，濃度，粘度，および様々な乾燥手段たとえば凍結乾燥を含む物理的因子によって安定化することができる．本発明に有用な担体物質には，それらに限定されるものではないが，天然および合成の，ネイティブなおよび修飾された，アニオン性もしくは酸性のサッカライド，ジサッカライド，オリゴサッカライド，ポリサッカライドおよびグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）が包含される．広範囲のその他の生物学的適合性のある水溶性および水分散性のアニオン性担体物質も使用できることは本技術分野の熟練者には明白であろう．水分散バリアーの欠如，好ましい初期の生体内分布および多価結合部位特性により，オリゴマーおよびポリマーの親水性および実質的に完全に親水性の担体物質がとくに，腫瘍，心脈管系梗塞および他のＴ１型ＭＲＩ造影剤の用途における常磁性，Ｔ１型，選択性ＭＲＩ造影剤に使用される試剤の好ましい担体に包含される．しかしながら，ある種の生物医学的造影への適用および治療的適用には両性および疎水性の担体が好ましいことは，本技術分野の熟練者には明らかであろう．本発明に有用な金属キレーターには，カチオン性，塩基性および塩基性アミン基を含有し，金属および金属イオン，遷移元素およびイオン，ならびにランタニド系元素およびイオンをキレートする金属キレーターが包含される．本質的には，カチオン性，塩基性およびアミン含有キレーターによるキレーションを受けることができる任意の単一原子の元素またはイオンも本発明に有用であることは，本技術分野の熟練者には明白であろう．本発明の目的では，カチオン性または塩基性金属キレーターは次のように定義され，金属イオン錯体からさらに区別される．すなわち，カチオン性または塩基性金属キレーターは，単一の金属原子またはイオンを部分的にまたは完全に取囲むことができる有機の，共有結合性，架橋−リガンド分子からなり，この場合，適当な金属もしくはイオンに対するキレーターの有効な形成定数は少なくとも約１０¹⁴である．キレーターはさらに，それまたはカチオン性もしくは塩基性を付与するその官能基（単数または複数），それらに限定されるものではないがたとえばアミン（単数または複数）が，製剤化に用いられる通常のｐＨにおいて完全にまたは実質的に完全に求電子性で，陽性に荷電またはプロトン化している場合，カチオン性または塩基性として定義される．製剤化のｐＨは，その性質上，哺乳類脊椎動物に見られる生理的ｐＨの範囲に正確に包含されるように選択される．これは通常，それらに限定されるものではないが，ｐＨ５〜８の範囲内である．アミンには，金属キレーター上の一級，二級，三級もしくは四級アミンまたはそれらの組合せが包含される．本明細書においては，詳述するように，親水性担体は水溶性であるか，水−有機溶媒混合物の水相に分配されるか，または製剤化に用いられる条件下に，半透明の水溶液，複合体，凝集体または微粒子分散液を形成する物質として定義される．担体はさらに，それが完全にもしくはほぼ完全に求核性であるか，またはその官能基（単数または複数）がカチオン性，塩基性またはアミン金属キレーターと相互作用可能な基（単数または複数）が製剤化用いられるｐＨにおいて完全にもしくはほぼ完全に陰性に荷電しているか，アニオン性であるかまたはイオン化している場合に，アニオン性または酸性として定義される．このようなアニオン性および酸性の基には，それらに限定されるものではないが，担体上のサルフェート，ホスフェートおよびカルボキシレートまたはそれらの組合せが包含される．新規な試剤組成物には，それらに限定されるものではないが，カチオン性または塩基性のクラス，通常，塩基性−アミン金属キレーター活性部またはキレート化された金属もしくは金属イオンを含む金属キレーター活性部を包含し，この場合，これらの活性部はさらに，それらに限定されるものではないが，親水性の，アニオン性もしくは酸性の，天然もしくは合成の，ネイティブな，修飾された，誘導体化されたおよび断片化された，アニオン性もしくは酸性のサッカライド，オリゴサッカライド，ポリサッカライド，サルファトイド，およびグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を包含する天然または合成の担体からなるアニオン性および酸性担体に結合する．アニオン性および酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカン担体は，グルコース，グルクロン酸，イズロン酸，グルコサミン，ガラクトース，ガラクトサミン，キシロース，マンノース，フコース，シアル酸，ペントース，および他の天然に存在する，半合成のもしくは合成のモノサッカライドまたは，アミン，サルフェート，カルボキシレート，シアリル，ホスフェート，ヒドロキシルもしくは他の側鎖基からなるそれらの化学的誘導体から構成されるモノマー単位を含有することができる．グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）は本質的には，細胞表面および組織マトリックスのプロテオグリカンの炭水化物部分からなる．それらは，天然に存在するプロテオグリカンから，化学的分離および抽出，ならびに場合により酵素手段によって誘導される［Lindahl ら（１９７８），引用により本明細書に導入される］．これらには，それらに限定されるものではないが，以下のタイプすなわちヘパリン，ヘパラン硫酸，デルマタン硫酸，コンドロイチン−４− 硫酸，コンドロイチン−６−硫酸，ケラタン硫酸，シンデカン，およびヒアルロネート，ならびに過剰硫酸化，超硫酸化，および以下にさらに説明するようなそれらの他の化学的誘導体が包含される．強酸性グリコサミノグリカンには，弱酸性のカルボキシレート基のみを含有してサルフェート基を含まないヒアルロネートを除き，上に掲げたクラスのすべてが包含される．グリコサミノグリカンの天然の原料には，それらに限定されるものではないが，ブタおよびウシの腸粘膜，肺臓，脾臓，膵臓，および各種の他の固形の実質臓器および組織が包含される．サルファトイドは，他を排除するものではないが，主として細菌および非哺乳動物源に由来する硫酸化サッカライド物質の第二のクラスを構成する．サルファトイドは通常，グリコサミノグリカンよりも鎖長が短く分子量も小さいが，合成的に修飾して（ａ）長い鎖長，（ｂ）単位サッカライドあたりの硫酸化の増加，（ｃ）様々な他の化学的側鎖基，または（ｃ）所望のリガンド結合性および部位選択的結合，インビボにおける取込みおよび蓄積性に好ましい他の性質を付与することができる．スクロースおよび他の短鎖オリゴサッカライドは天然および合成の原料から得ることができる．これらのオリゴサッカライドはカルボキシレート，ホスフェート，サルフェートもしくはシリル側鎖基またはそれらの組合せによる，ジサッカライド単位あたり約８個までのアニオン性または酸性置換基の置換割合での化学的または酵素的誘導体化によってアニオン性または酸性とすることができる．修飾されたグリコサミノグリカンは，上述のネイティブなグリコサミノグリカンの任意の種類および原料から誘導され，（１）グリコサミノグリカン断片，さらに特定すれば天然の原料から標準的イオン交換分離および溶媒分画法で直接単離される母体材料より鎖長を短くしたグリコサミノグリカン；（２）化学的に修飾してそれらの抗凝固活性を低下させたグリコサミノグリカン，すなわち，他を排除するものではないが通常，（ａ）過ヨード酸酸化ついで水素化ホウ素による還元，（ｂ）部分または完全脱硫酸，および（ｃ）非共有結合性２価または３価のカウンターイオン塩，他を排除するものではないが主としてさらに酸性が強いサルフェート官能基の他を排除するものではないが主としてカルシウム，マグネシウム，マンガン，鉄，ガドリニウムおよびアルミニウムイオンとの塩の形成，によって調製される「非抗凝固性」（ＮＡＣ）ＧＡＧを包含する．本発明の目的では，こような塩の特定のクラスには，上述のような，酸性サッカライドまたはグリコサミノグリカン担体の酸性またはサルフェート基と金属キレーターまたは金属含有金属キレーターの塩基性またはカチオン性基の間の静電力または対合イオン会合によって形成される塩が包含される．誘導体化された酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカンは通常，サッカライド単位上の様々な部位に対する様々な化学側鎖基の誘導体化によって調製される．これは化学的または酵素的手段によって実施できる．酵素的手段は高度に選択的な誘導体化が所望の場合に用いられる．得られる化学的および酵素的誘導体にはそれらに限定されるものではないが，（１）（ａ）カルボキシレート基，（ｂ）ヒドロキシル基および（ｃ）サルフェート基のエステル化：（２）非選択性の化学的または選択性の酵素的手段による過剰硫酸化；（３）アセチル化；ならびに（４）それらに限定されるものではないが（ａ）シアリル側鎖基の付加，（ｂ）フコシル側鎖基の付加，（ｃ）各種のカルボジイミド，無水物およびイソチオシアナート連結基による処理，および（ｄ）各種の他のリガンドの付加を包含する各種の他のリガンド誘導体の形成によって誘導体化された酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカンが包含される．サルフェートおよびシアリル側鎖基が存在する場合には，それらはサッカライドモノマーの任意の適合性位置に，またグリコサミノグリカンモノマーの任意の適合性位置に存在させることができる［Lindahl ら（１９７８），引用により本明細書に導入する］．得られたある種の誘導体化酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカンは抗凝固活性，部位局在パターン，クリアランスおよび他の生物学的性質に所望の変化を有する．グリコサミノグリカンのあるクラスと生物学的性質の間のこの関係の一例としては，ネイティブなサルフェート／カルボキシレート比が好ましくは０．７：１〜１．８：１の範囲，さらに好ましくは０．９：１〜１．５：１，典型的には１：１のデルマタン硫酸が，正常内皮細胞への結合は比較的低く，内皮細胞表面からの内因性ヘパラン硫酸の置換を回避し，血栓を含む疾患部位における誘導内皮に対しては比較的高い選択性を有し，主として腎臓経路による迅速な血漿クリアランスを示すことが報告され，一方，２：１〜３．７：１のより高いサルフェート／カルボキシレート比を有するヘパリンおよび過剰硫酸化デルマタン硫酸は，正常および誘導内皮の両者への結合が比較的高く，内因性内皮ヘパラン硫酸の置換が比較的に多く，またクリアランスはデルマタン類よりも遅いことが報告されている［Boneu ら（１９７８），引用により本明細書に導入する］．本発明において新たに記載され使用されるグリコサミノグリカンのデルマタン硫酸のクラス，とくに選択的に過剰硫酸化されたオリゴサッカライド配列を含有する新しい特定のクラスのデルマタン硫酸はさらに，会合または結合活性部の担体物質（すなわち，デルマタン硫酸−活性部，ＤＳ−活性部）として，極めて低い毒性とともに高い効力による独特の利点を有する．これは，それらの（ａ）比較的低いサルフェート／カルボキシレート比，０．７：１〜１．８：１の範囲，さらに好ましくは０．９：１〜１．５：１，最も典型的には１：１；（ｂ）極めて低い抗凝固活性−極めて低いＸａ因子および米局ヘパリン活性と無視できる抗トロンビンIIIへの結合に関連する；（ｃ）血小板凝集したがって血小板減少症誘導性が極めて低いか全くないこと−それらの比較的低いＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比とともに，約４５，０００ダルトン未満好ましくは約２５，０００ダルトン未満の最頻値分子量に関連する；（ｄ）インビボ代謝の実質的に完全な不存在；ならびに（ｅ）極めて速やかな血中および生体クリアランス，に関連する．これらのすべてについては，さらに以下に説明する．これらの性質から，正常組織および臓器における出血，代謝および生体内分解産物を生じないことによる極めて高い生体内安全性像が得られる．これらの性質およびそれらによって得られる安全性像により，デルマタン硫酸はすべての他のクラスのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）ならびに他のクラスの酸性サッカライド，オリゴサッカライド，ポリサッカライドおよびサルファトイド物質とは明らかに異なり（酸性およびアニオン性サッカライド物質との比較も合わせ），それらが，デルマタン硫酸の，これらの他のクラスの酸性およびアニオン性サッカライドを凌駕する，独特の驚くべき予期できない利点を提供するものである．さらに特定すれば，デルマタン硫酸は，他のグリコサミノグリカンポリ硫酸塩を凌駕するこれらの驚くべき予期できない利点を，２：１〜３．７：１の範囲のＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比および１０％以上の硫黄含量（重量ベース，それらのはるかに高いサルフェート含量を指示する）において示す．また，さらに特定すれば，全鎖長の全体を通して過剰硫酸化もしくはポリ硫酸化分子により構成されることなく選択的に過剰硫酸化されたオリゴサッカライド配列で補強された（それは２．０：１以上のＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比および１０％以上の硫黄含量によって特徴づけられる）新しい特定のクラスのデルマタン硫酸（以下に鎖長で記述される）は，内皮，組織マトリックスおよび疾患部位における標的細胞（腫瘍を含む）の選択的に誘導された受容体に，これらの新たな特定のデルマタン硫酸の相補性の選択的に過剰硫酸化されたオリゴサッカライド配列によってより強力に結合するという，さらに驚くべき予期できない利点を有する．すなわち，これらの新規な特定のデルマタン硫酸は，他の場合にはそれらの中等度に低い全体的ＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比および硫酸化ならびにそれらに関する極端に低い細胞および全身毒性や副作用像に基づいて期待される以上の驚くべき予期できない強力な部位局在能および部位標的化能を発揮する．本発明に独特な特定の場合では，酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカン担体の誘導体化は塩基性金属キレーター自体を伴っていてもよい．上述の一般的なクラスの担体はとくに本発明に適当であるが，広範囲のその他のネイティブな，誘導体化されたおよび他の方法で修飾された担体ならびにそれらの物理的製剤が本発明の様々な適用にとくに適当であることは本技術分野の熟練者には自明であろう．代表的な一例としては，グリコサミノグリカンの原料および種類，その鎖長ならびにサルフェート／カルボキシレート比は，（１）異なる小分子および大分子診断薬および薬物の組合せにおける至適製剤特性の提供；（２）疾患対正常内皮における担体の局在の修飾；（３）用量−関連副作用の最小化；（４）担体ならびに結合診断薬および薬物活性成分のクリアランス速度および経路の至適化のために，オプティマイズすることができる．活性成分および担体の非共有結合製剤では，共有結合化学接合体で可能な程度に比べて著しく高い活性成分対担体比が得られる．本発明においては，非共有結合により総製剤重量に対する活性成分［活性成分／（活性成分＋担体），w/w］は最低１５％，通常は約３０％(w/w)以上，好ましくは少なくとも約５０％(w/w) 頻繁には約７０〜９９％(w/w)とされる．共有結合では活性成分の割合は（ａ）非タンパク質小ポリマー担体の場合約１２％未満，（ｂ）抗体を含むペプチドおよびタンパク質担体の場合約７％未満，および（ｃ）抗体フラグメントの場合には約０．５〜２．０％に限定されるのが特徴である．この限界は，製剤化および生体内部位局在に有用な担体分子上の利用できる官能基の数に基づくものである．置換比の低い共有結合活性成分−担体製剤組成物は通常狭い範囲のある種の生体内適用に有用であり，置換比の高い非共有結合活性成分−担体製剤組成物は通常さらに広い範囲の他の生体内適用にも有用であることは本技術分野の熟練者には明白であろう．他を排除するものではないが一般的には，共有結合製剤は，低い総体内用量のみが必要とされ，非標的化用量分画のクリアランスが過度の毒性を生じることがなく高い接合体安定性が要求される，放射性核種による造影または治療的適用に有用である．他を排除するものではないが一般的には，非共有結合製剤は，高い総体内用量および部位局在用量を必要とし，投与された試剤の非局在分画の迅速なクリアランスが造影コントラストの最大化および全身毒性の最小化の目的での血漿クリアランスの促進および低バックグランドレベルの達成のために望ましい大部分の診断的造影への適用およびある種の高用量での治療的適用にとくに有用である．迅速なクリアランスは，非共有結合の物理的製剤の方が，担体からの活性成分の解離または放出を制御できるそれらの能力により付与しやすい．このような制御された放出により，診断または治療活性成分は，総投与用量の有意な分画の迅速な部位局在と同時に，プログラムされた速度でのその担体からの解離が可能になる．担体がポリマーであり，したがってクリアランスが遅い例では，これが活性成分のクリアランスを選択的に促進する．このような制御された放出は，活性成分が，生体酵素による切断に感受性のペプチドリンカーを含む化学的リンカーを介してそれらの担体に化学的に接合されている場合にも達成できることは本技術分野の熟練者には自明であろう．しかしながら，クリアランスを促進するこの手段では，（ａ）物理的製剤の場合よりもクリアランス時間ははるかに長くなり，（ｂ）個体間，健康時と疾患時また疾患のステージ間で通常異なる内因性酵素レベルおよびインヒビターに依存することになる．したがって物理的製剤は（ａ）高い有効荷重および（ｂ）クリアランスの促進の両観点から，化学的接合体を凌駕する実質的な利点を有する．本発明の製剤のこれらの性質は，従来の非選択性の，共有結合によって接合された活性成分一担体製剤に対して，さらに他の実質的な改善を提供する．得られた製剤は，（ａ）比較的高い投与用量が好ましいか必要なＭＲＩ造影およびスペクトル増強，超音波造影の増強，およびＸ線造影の増強，（ｂ）非標的化用量のクリアランスの増大が好ましいか必要な核医学もしくは放射性核種造影および治療，ならびに（ｃ）ある種の高用量の長期放出または作用持続療法が好ましいか必要な場合に広く有用である．このような治療剤としては，それらに限定されるものではないが，（ａ）急性血管性虚血，急性梗塞，急性血管傷害，ショック，低血圧，再狭窄，新生血管の増殖，実質細胞またはその他の病的増殖；ならびに（ｂ）以下の種類の疾患，すなわち血管性，実質性，間質性，内皮性，平滑筋，横紋筋，外膜性，免疫性，炎症性，細菌性，真菌性，ウイルス性，変性性，新生物性，遺伝性および酵素性疾患の処置のための広範囲の臓器部位および医学的適用に有用な治療剤が包含される．ＭＲＩ造影の増強は，部位選択的局在（以下参照）に加えて，活性成分の高い有効荷重および制御された放出が重要な独特の利点になる重要な適用の一つである．さらに他の利点は，近接水拡散および常磁性活性成分の結合を最大にする担体の親水性形態である．この最後に挙げた性質は，ＭＲＩ常磁性Ｔ１型造影剤が有効な常磁性緩和およびＴ１造影を達成するために局在する金属イオンから極めて短距離内への水拡散が妨害されないことを要求するので，至適な効力と最小の毒性のために必要である．さらに，ＭＲＩ造影の機械装置および映像の獲得は本来いずれも感受性が低く，臨床的に許容される最高の磁場強度および勾配ならびに至適の高周波パルス配位においても，これらの限界は解決されていない．ＭＲＩ常磁性試剤は，活性成分約２２％(w/w)までを含有する安定化リポソームとして調製されてきた．しかしながら，それらの疎水性脂質二重層はリポソーム核活性成分への水の拡散を著しく妨害する．これが，単位用量あたりのそれらの有効性を本発明の親水性制御放出担体に比較して低下させる．報告されているＭＲＩリポソーム製剤の他の欠点には，正常な肝臓および網内−貪食器官における局在は別として，それらには腫瘍，梗塞および組織部位内の他の病巣における有効な部位局在性が証明されていないことである．本発明の目的では，金属イオンは一般的に，常磁性Ｔ１型ＭＲＩ造影剤組成物およびその用途におけるキレーションに有用であり，それらには鉄，マンガン，クロム，銅，ニッケル，ガドリニウム，エルビウム，ユウロピウム，ジスプロシウムおよびホルミウムからなる群より選ばれる２価および３価のカチオンが包含される．放射性核種造影とその組成物および用途に，また放射線療法の組成物およびその用途に，一般に有用なキレート化された金属イオンにはガリウム，ゲルマニウム，コバルト，カルシウム，ルビジウム，イットリウム，テクネチウム，ルテニウム，レニウム，インジウム，イリジウム，白金，タリウムおよびサマリウムからなる群より選ばれる金属が包含される．中性子捕獲放射線療法に有用な金属イオンにはホウ素および大きな核断面積を有する他の金属が包含される．超音波造影およびＸ線造影組成物および用途に有用な金属イオンには，上掲の任意の金属イオン，とくに原子番号が鉄以上の金属イオンが包含される．本発明の目的において，生体内の鉄，銅またはその両者を（１）通常，新生血管に要求されるかまたは（２）局部的組織傷害の原因となりそれを増悪させるこれらの金属を局部的に利用不能にするために［Levineら（１９９３），引用により本明細書に導入する］，キレート化する治療用組成物および用途での試剤は，塩基性金属キレーターと担体を以下の形態で，すなわち（ａ）担体と金属イオンをもたないキレーター，および（ｂ）担体と，組成物の各塩基性金属キレーターへの金属イオン交換によって生体内金属をキレート化する場合には，以下の形成定数で組成物中に添加されキレート化されている金属イオン（下記参照）を有するキレーターのいずれかまたは両形態で包含する．組成物中にこのように弱くキレート化される金属イオンにはカルシウム，マンガン，マグネシウム，クロム，銅，亜鉛，ニッケル，鉄，アルミニウム，コバルト，ガドリニウムまたは他の交換可能なイオンからなる群より選択されるイオンが包含される．他の治療的使用のための組成物への包含が有用な金属イオンにはマグネシウム，マンガン，クロム，亜鉛およびカルシウム，鉄，銅ならびにアルミニウムからなる群より選択される２価および３価のカチオンが包含される．上述した金属イオン中の各種イオンが上に特定した以外の別の適応にも，塩基性金属キレーターと組合わせて使用できること，また上に掲げた以外の金属イオンがある条件下には上に掲げた用途および適応において有用である可能性のあることは，本技術分野の熟練者には自明であろう．本発明で記述される組成物は，成果および用途に驚くべき予期できない改善を与える．それらには，（１）生体外透析および生体内標的化の間における活性成分＋担体の高度な会合の維持；（２）疾患部位の誘導された内皮に対する活性成分＋担体の選択的結合；（３）静脈内注射後，疾患誘導内皮（組織学的に非孔性の内皮を含む）を越える担体＋金属キレーターの迅速選択的な内皮の結合，包囲および滲出による疾患部位における極めて迅速な（２〜７分）局在，；（４）疾患組織部位を通じて広範囲の取り込み；（５）疾患部位内における持続的（長時間〜日単位の）貯留とともに（６）非標的化分画の迅速な血漿クリアランス（分単位）；（７）疾患組織マトリックス内での適度に遅いポリマー拡散速度（これにより生存および非生存亜領域の灌流における差に基づく機能組織亜領域の判別が可能になる）；（８）躯幹部の固形腫瘍または急性の血管および心筋梗塞，ならびに脳および中枢神経系部位における選択的造影能の，選択性，感受性の実質的な改善，注射後極めて短時間および長時間の両間隔における腫瘍および梗塞の境界描写の改善ならびに肝臓および肺臓の場合を含めて小さな腫瘍転移の検出の改善；が包含される．診断薬および薬物の増強は多くの機構によって起こすことができる．その主要な機構は，１．疾患の組織部位への効果的な標的化；２．保存時および血漿通過時の両者における安定化；３．組織部位における曲線下面積の著しい増大をもたらす，疾患部位における貯留の延長；４．非標的化分画の迅速なクリアランス，これにより造影への適用におけるバックグランドシグナルの低下，ならびに治療的適用における正常臓器の暴露および全身毒性の低下；である．本発明の組成物および使用には，さらに５つの重要な利点がある．１．活性成分と担体の簡単な製剤化；２．保存時および血漿通過時における診断および薬物活性成分の安定化；３．迅速な部位局在と持続的な部位貯留；４．非標的化分画の迅速なクリアランス；５．天然原料からの低毒性炭水化物担体，および必要に応じて簡単な合成手段による修飾または誘導体化の利用．酸性またはカチオン性サッカライドおよびグリコサミノグリカンは，生体内における部位局在および貯留の独特な機構をもっている．それらは基底にある組織疾患によって微小血管バリヤー上に選択的に誘導される生体の内皮決定基に結合する．部位標的化の従来のアプローチは抗原決定基に向けられていた．しかしながら，これらの決定基は通常，組織内の隔離された部位，換言すれば内皮バリヤーを越えた血流の届かない内皮表面上にはない部位に位置し，血流中に注射された担体および試剤にはこれらの標的抗原の領域を認識し，そこに局在する有効な手段がない．他の言い方で言えば，従前のアプローチは疾患部位における効率的な滲出に要求される血管のアクセスコードの認識の失敗から生じる不適切な担体分布の大きな問題点に無知であった．したがって，これらの担体はそれらの結合活性成分の有効濃度で関連組織部位を効果的に負荷することはできなかった．グリコサミノグリカン，デルマタン硫酸および新しい特定のデルマタン硫酸を含めた酸性またはアニオン性サッカライドは，第一に疾患部位の血管内皮上の相補性受容体に結合することによって標的部位に局在し，極めて迅速に（約３分）担体およびそれに会合した活性成分の滲出を誘導し，ついで，基底にある組織マトリックスを通して広範囲に透過して疾患部位に選択的に担体−試剤の貯蔵槽を形成し（腫瘍を含めて−通常不規則に配置され腫瘍マトリックス内を灌流する微小血管から数百マイクロメーターの距離までの部位でも），第三に，最終標的細胞（腫瘍細胞を含めて）上の相補性受容体に結合して，腫瘍細胞によるＧＡＧ− 活性成分（ＤＳ−活性成分を含めて）のインターナリゼーションの誘導を招来する（以下の例参照）．疾患部位の生物学的アドレスは郵便アドレスの場合と同様の様式で調べることができる．この場合，有効な担体物質は（１）近位の組織疾患により誘導されるシグナル内皮の「国」アドレスをまず認識し，（２）次に局所的有効用量の診断および治療活性成分が細胞外組織マトリックスの「市」アドレスに滲出してそこに負荷され，（３）最後に，標的細胞および抗原の「町」アドレスに結合してそこに負荷される．部位への送達の従来のアプローチは，「国」および「市」アドレスをまず認識することなく「町」アドレスの認識を試みていたものである．酸性サッカライドおよびグリコサミノグリカン系が従来の抗原認識アプローチよりも実質的に良好に作動する理由は，それらは生体が組織疾患部位に白血球を誘引し標的化するために使用する新たに誘導されたシグナルを認識することによるものである．疾患が局所部位を襲った場合，それは，組織マトリックス内および内皮−血管界面における局所メディエーターのカスケードを開始させ，炎症および免疫細胞がその組織部位内に必要とする血液細胞および中央生体系にシグナルを送る．これらのメディエーターには，サイトカイン，化学誘引因子，細胞毒素，誘導された細胞表面の接着分子，セレクチンおよびインテグリン，ならびに各種組織由来のおよび血液がもつ可溶性細胞表面プロ凝固物質が包含される．白血球の蓄積は数分内に開始され，局所疾患の性質，重篤度および持続ならびに組織メディエーターおよび内皮経由シグナルの連続的な発生に依存して，数日から数週も持続することになる．これまでに報告され，詳細に総説されているように［Ranney（１９９０），Ra nney（１９９３），Bevilanquaら（１９９３），Bevilanquaら（１９９３），Tr avis（１９９３），Sharonら（１９９３），すべて引用により本明細書に導入する］，腫瘍，梗塞，感染症，炎症性疾患，血管障害，および他の病巣疾患は，このような宿主メディエーターまたはサイトカインの定住マクロファージおよび局所組織マトリックスからの放出を特徴的に誘導する．ある種の疾患においては，外因性のメディエーター，たとえば細菌性リポポリサッカライド（ＬＰＳ），ウイルスＲＮＡ，および腫瘍由来誘導因子たとえばＥＭＡＰII，ならびに化学誘引因子も放出される．その他にも解説すべきメディエーターはあるが，これまで確定されている主要なメディエーターを挙げれば，インターロイキン１（ＩＬ−１），腫瘍壊死因子（ＴＮＦ），血管内皮増殖因子／血管透過性因子（ＶＥＧＦ／ＶＰＦ），トランスホーミング増殖因子β（ＴＧＦβ），リポポリサッカライド（ＬＰＳ），一本鎖および二本鎖ヌクレオチド，各種インターフェロン，単球走化性タンパク質（ＭＣＰ），インターロイキン８（ＩＬ−８），インターロイキン３（ＩＬ−３），インターロイキン６（ＩＬ−６），腫瘍由来誘導因子および化学誘引性ペプチド（上述），各種プロスタグランジンならびにトロンボキサンが包含される．上に述べたメディエーターの一部には，メタロプロテイナーゼの産生および放出を誘導し，一方これらは，無傷のまたは部分的に切断されたインテグリン，ＲＤＧＳペプチド，ラミニン，コラーゲン，フィブロネクチン，およびグリコサミノグリカンの細胞表面核タンパク質成分を含む潜在的組織結合部位を暴露させる．ＶＥＧＦ／ＶＰＦおよび単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）を含めたサイトカイン，ならびに組織メタロプロテイナーゼおよびタンパク分解組織マトリックスフラグメントは，好中球，単球およびリンパ球を含む循環白血球を接着させる局所内皮を直接誘導する．誘導される内皮接着分子（アドヘシン）には，Ｐ−セレクチン（ｇｍｐ−１４０），Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１），細胞間細胞接着分子（ＩＣＡＭ−１），血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１），誘導性の細胞接着分子（ＩＮＣＡＭ−１），フォンビルブラント因子（ｖＷＦ，VIII因子抗原）が包含される（これらの各種の内皮アドヘシンを活性化する疾患状態については，下記参照）．内皮の接着性を間接的に増幅するその他のカスケードも活性化される．これらには，（１）凝固因子，とくにフィブロネクチン，組織因子，トロンビン，フィブリノーゲン，フィブリン，ならびにそれらの分裂産物，とくにフィブロネクチン分裂産物およびフィブリノペプチドＡ；（２）血小板由来因子：血小板活性化因子（ＰＡＦ），糖タンパク質IIｂ／IIIa複合体；（３）ＶＬＡ−４（超遅発抗原４）を含む白血球（ａ）Ｌ−セレクチンおよび（ｂ）インテグリン；ならびに（４）多くの補因子が包含される．前述の病的過程およびシグナルは，以下のように直接または間接に，酸性サッカライド（ＡＣ）およびグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を包含する酸性担体の結合および部位局在に関与する（以下の概説中では，想定される組織結合部位を「ＧＡＧ」および「ＡＣ」と呼ぶ）．１．局所組織疾患は上述のように局所サイトカインおよびメディエーターを誘導する．とくにサイトカイン，血管内皮増殖因子／血管透過性因子（ＶＥＧＦ／ＶＰＦ）はヒトおよび動物起源の多くのまたは大部分の腫瘍によって選択的に誘導され［Sengerら（１９９４），引用により本明細書に導入する］，それは，特異的内皮受容体を介して内皮細胞に直接作用する３４〜４２kDa ヘパリン−結合およびＧＡＧ−結合糖タンパク質であり［Jakeman ら（１９９３），引用により本明細書に導入する］，内皮の活性化を引き起こしてＧＡＧに結合できる付加的な新しい内皮受容体を誘導すること（下記参照）が最近報告されている．ＶＥＧＦ／ＶＰＦは化学的には塩基性増殖因子であり，線維芽細胞および他の細胞種に比較して内皮細胞に極めて高い選択性を有する［Sengerら（１９９４），Nicosi a ら（１９９４），引用により本明細書に導入する］．それは，多くのまたは大部分のヒトおよび動物腫瘍ならびにＡＩＤＳ関連カポジ肉腫における長期の内皮血管新生を刺激する鍵増殖因子であると考えられる［Connollyら（１９８９）， Weindel ら（１９９２），引用により本明細書に導入する］．ある場合には，ＶＥＧＦ／ＶＰＦはまた，より一過性の解剖学的に限定された創傷の治癒および血管再狭窄の血管形成過程に重要である［Sengerら（１９９４），Millerら（１９９４），Nicosia ら（１９９４），Berse ら（１９９２）すべて引用により本明細書に導入する］．ＶＥＧＦ／ＶＰＦおよび血小板由来増殖因子，ＰＤＧＦ−ＢＢは最近，インビトロで有意な血管新生促進作用を有する塩基性ＧＡＧ結合増殖因子群，すなわち，インビボにおいて補因子の不存在下に直接作用する因子群の唯一の種であることが報告されている［Nicosia ら（１９９４），引用により本明細書に導入する］．ＶＥＧＦ／ＶＰＦの作用は分子外表面上のあるペプチドに向けられた抗体で阻害され［Sioussatら（１９９３），引用により本明細書に導入する］，重要なことに，この阻害は動物の腫瘍をインビボにおいて抑制する［Kim ら（１９９３），引用により本明細書に導入する］．したがって，ＶＥＧＦ／ＶＰＦはいずれも，腫瘍および可能性として他の病変部においても，ＧＡＧ担体物質の結合の受容体標的を提供し，それを誘導する．２．これらのサイトカインおよびメディエーターは，ＧＡＧ／ＡＣに結合することが報告されているアルギニンに富む，８Kd，ヘパリン結合タンパク質のファミリーを構成するＶＥＧＦ／ＶＰＦ，ＭＣＰ（Yamamotoら，１９９４）およびＩＬ−８を含む組織化学誘引因子を誘導する［Huber ら（１９９１），引用により本明細書に導入する］．３．上記１のサイトカインおよびメディエーターは，局所内皮に，Ｐ−セレクチン，血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１），誘導性細胞接着分子（ＩＮＣＡＭ− １１０）およびフォンビルブラント因子（ｖＷＦ，VIII因子抗原）の発現を誘導し，これらはＧＡＧ／ＡＣの結合決定基であると報告され［Bevilanquaら（１９９３），Bevilanquaら（１９９３）］，Ｐ−セレクチンはＧＡＧに結合することが報告されている［Bevilanquaら（１９９３）］．４．それに限定するものではないがＶＬＡ−４を含むインテグリンは，様々な疾患過程で（下記参照）リンパ球を含む循環白血球上に誘導される．ＶＬＡ−４は（誘導された）内皮セレクチン，ＶＣＡＭ−１（上記３参照）上に明瞭な結合部位を有する．血漿中に豊富に存在し，組織部位にもあるフィブロネクチンは明瞭な別個の結合部位をＶＡＬ−４上に有する［Elicesら（１９９０）］．フィブロネクチンはＧＡＧ／ＡＣの特異的結合部位を有する［Bevilanquaら（１９９３）］ことから，これらの増幅工程はＧＡＧ／ＡＣの部位局在に強力な付加的機構を提供する．５．化学誘引因子，ＭＣＰおよびＩＬ−８，リンパ球インテグリン，ＶＡＬ− ４，血小板因子，ＰＡＦ，ならびに凝固因子，トロンビン，フィブロネクチン等は，それぞれ局所組織および血液から拡散し，誘導された内皮セレクチンに結合し，ＧＡＧ／ＡＣに対する初期の内皮Ｐ−セレクチン部位における接着性および活性化を増幅する［Elicesら（１９９０），Lorantら（１９９３）］．６．組織メタロプロテイナーゼは活性化されると，活性化内皮の基礎にある組織中にＧＡＧ／ＡＣに対する新たな結合部位を暴露する．これらの新しい組織結合部位は以下の通りである［Ranney（１９９０），Ranney（１９９２），Travis （１９９３），Bevilanquaら（１９９３）］：ａ．フィブリノネクチンフラグメントｂ．コラーゲンフラグメントｃ．ラミニンフラグメントｄ．ＲＧＤＳペプチドｅ．ＧＡＧの暴露されたコアタンパク質７．白血球は部位に誘引され，活性化され，付加的なタンパク分解酵素を放出する．これにより，上記６を増幅し，組織マトリックス内におけるＧＡＧ／ＡＣの結合部位の暴露をさらに増進する．８．ＧＡＧ／ＡＣ担体は上記１〜７に掲げた誘導または暴露された決定基に選択的に結合し，白血球の接着に特徴的なレクチン−炭水化物レベルにおいて誘導結合部位（レクチン）に特異的な免疫型局在を与える．９．担体物質が標的結合物質に対し多価結合を有する場合には，たとえば担体が酸性オリゴサッカライドもしくはポリサッカライドまたは酸性グリコサミノグリカンである場合を含めて，内皮表面の多価結合は担体および結合活性成分の迅速な滲出を誘導し，抗体，リポソームおよび１価結合物質たとえばホルモンおよび１価結合糖によって達成される場合に比べて基底にある組織マトリックスの負荷の実質的な増大を生じる． 10．誘導および暴露された組織結合部位へのＧＡＧ／ＡＣの接着は，ＧＡＧ／ＡＣおよびそれらの結合活性部分の血漿への逆拡散を低下させ，組織部位内への持続的貯留を与える． 11．ＧＡＧ／ＡＣからなる担体からの診断薬および薬物活性部分の制御された放出は疾患部位内で徐々に起こり，標的化された制御放出が得られる． 12．組織部位内の腫瘍細胞，微生物標的および傷害細胞標的はそれぞれ，誘導された腫瘍アニオン輸送経路，ＧＡＧ／ＡＣに対する微生物結合部位，およびタンパク分解により暴露された細胞表面コアタンパク質に基づいて，ＧＡＧ／ＡＣ＋結合診断薬または薬物活性部分を選択的に取り込むことができる［Ranney０７／８８０，６６０，０７／８０３，５９５および０７／６４２，０３３］−肝癌によるＦｅの取り込み，前立腺腺癌によるＣｒ４５の取り込み［Kjellen ら（１９７７）］． 13．担体が親水性または本質的に完全に親水性である場合には，これらの担体はそれらの結合活性成分を，腫瘍塊中の深部まで全体に腫瘍の通常不規則に配置された微小血管から離れた微小解剖学的部位にさえも移動（浸透）させ，また，各病巣を囲む通常約３０〜７５μm 厚の縁部からなる正常組織の小縁部中にも移動（浸透）させる．しかしながら，このような担体および／またはそれらに会合した活性物質（診断薬または治療薬）は組織部位内の異常細胞による選択的取り込み（インターナリゼーション）を受け，組織部位内の正常細胞による取り込みは選択的に回避され，その結果，ａ．診断的造影の適用の場合には，腫瘍または梗塞と周囲の正常組織の間の境界の極めてシャープな解像，ｂ．治療的適用の場合には，（１）縁部における疾患の波及に対する防御，（２）疾患部位内およびそれに隣接する正常細胞の細胞毒性薬物の取り込みの相対的保護，が達成される． 14．それらに限定されるものではないが，ＧＡＧ／ＡＣを含む親水性担体の場合，活性成分の非標的化分画は迅速なクリアランスを受けて毒性を示さず，ａ．造影の用途の場合には，バックグランドシグナルの強度，ｂ．すべての用途において，（１）正常臓器の暴露，および（２）全身性副作用が最小限に抑えられる．以上の説明に関して，腫瘍選択的ＧＡＧ結合サイトカイン，ＶＥＧＦ／ＶＰＦおよびＭＣＰは以下の３つの微小解剖学的位置，腫瘍細胞表面，腫瘍細胞外マトリックスおよび局所腫瘍新生血管内皮のすべてに存在することが知られている．したがって，これらのサイトカインは，３つの鍵腫瘍部位，腫瘍内皮，腫瘍細胞外マトリックスおよび腫瘍細胞本体のすべてでＧＡＧ−試剤の受容体標的を提供する．これらのサイトカインの腫瘍内皮における選択的存在は血管内に投与されたＧＡＧ−試剤の腫瘍微小血管への部位選択的結合およびＶＥＧＦ／ＶＰＦ「透過性化」内皮を横切るＧＡＧ−試剤の極めて迅速な（約３分）選択的滲出を可能にする．注：このような「透過性化」は最近，（ａ）著しく拡大し（正常内皮の特徴である標準的な１２０nm Palade 小胞以上に），数が著しく増加した（正常血管内皮以上）エンドソーム小胞による迅速な輸送［Sengerら（１９９３），引用により本明細書に導入する］および（ｂ）実際に精密ろ過多孔度の巨大分子および微粒子マーカーによって評価した解剖学的に非孔性の血管内皮からなることが現実に示されている．腫瘍細胞表面にＶＥＧＦ／ＶＰＦおよびＭＣＰサイトカインが存在することは，以下の一部の実施例に示すように，ＧＡＧ−試剤の選択的腫瘍細胞インターナリゼーションを説明するものかもしれない．重要な点は，大細胞外容量の腫瘍マトリックスにおけるこれらサイトカインおよび上記６のＧＡＧ結合ペプチドの存在は，ＭＲＩ造影増強に認められる（以下の例参照）ＧＡＧ会合試剤（金属キレートを含む）の大きな腫瘍組織貯蔵部を一部説明することである．このような試剤の比較的遅い（約７時間）血流への逆拡散はさらに，このような細胞外組織マトリックス受容体の存在を確証するものである．重要な点は，（１）細胞外貯蔵としてのＧＡＧ−試剤の長期腫瘍内貯留（デポ），（ｂ）この細胞外試剤の一部の腫瘍細胞内インターナリゼーション，および（ｃ）非標的化部分の極めて迅速な血液および生体クリアランスが，生体造影（ＭＲＩ造影の増強を含む）および治療に以下の，すなわち，（ａ）腫瘍選択性の増大，（ｂ）腫瘍における長期の高い「曲線下面積」（ＡＵＣ），（ｃ）血中における短い，低いＡＣｕ，（ｄ）局所および全身毒性の最小化という，驚くべき予期できない利点を提供することである．さらに，上記概説には，以下の（Ａ）サイトカインおよびメディエーター，ならびに（Ｂ）セレクチン，インテグリンおよびアドヘシンについて，上記の腫瘍に関する報告に加え様々な疾患状態での誘導が報告されていることを付記する［Bevilanquaら（１９９３）］．代表的な非腫瘍性誘導は以下の場合に認められる．Ａ．サイトカインおよびメディエーター１．ＭＣＰ：マウスの実験的自己免疫性脳脊髄炎［Ransohoff ら（１９９３）］２．ＩＬ−８：血管新生［Strieterら（１９９２）］３．ＰＡＦ：再灌流虚血心［Montrucchio ら（１９９３）］Ｂ．セレクチン，インテグリンおよびアドヘシン１．ＥＬＡＭ−１：ａ．急性および慢性の炎症ならびに同種移植片拒絶における肝門脈路内皮［Steinhoff ら（１９９３）］ｂ．急性虫垂炎を含む活動型炎症過程［Riceら（１９９２）］２．ＶＣＡＭ−１：ａ．サルＡＩＤＳ脳炎［Sassevilleら（１９９２）］ｂ．肝臓および膵臓の同種移植片拒絶［Bacci ら（１９９３）］３．ＩＮＣＡＭ−１１０：類肉腫を含む慢性炎症性疾患［Riceら（１９９１）］４．インテグリン，β１サブユニット細胞接着受容体：炎症性関節滑膜［Nikkari ら（１９９３）］以上から明らかなように，広範囲の多くの特定の種類の病巣性組織疾患が，腫瘍，心脈管系疾患，炎症性疾患，細菌およびウイルス（ＡＩＤＳ）感染症，中枢神経系変性障害，ならびに同種移植片拒絶を含めて，診断的および治療的使用の両者において本発明の担体および活性成分により処置できる．多くの他の疾患状態が本発明において開示された担体によって選択的に処置できることも本技術分野の熟練者には自明であろう．グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の部位選択性は，抗体標的化ではなく白血球標的化のレベルにおいて免疫機構を模倣しているように思われる．抗体は極めて高い特異性を有するので，それらは病巣の大部分の亜領域を認識しないのが特徴である（通常，６０％程度の腫瘍細胞が非結合性である）．最近，内皮Ｐ−セレクチンのＧＡＧ結合決定基の一つがシアリル Lewis Ｘとして同定されている．他は同定中である．とくにシアリル Lewis Ｘに特異的な利用可能の無価オリゴサッカライドには２つの大きな問題点がある．１．それらは合成または半合成手段によってのみ入手可能な極めて高価な材料で，したがって費用効率が悪い．２．それらはインビボ条件下では疾患部位に効率的に結合せず，これはこれらの部位にすでに結合している内因性干渉物質を置換する能力がモノマー結合物質にはないことによる．比較的に広い範囲のＧＡＧ特異性および疾患内皮，組織マトリックスおよび細胞上に存在するＧＡＧ結合部位の重剰性には２つの明らかな利点がある．１．ＧＡＧは，抗体（これらは通常，与えられたクラスの腫瘍内でも組織学的種類の１つのサブセットのみを標的とし，したがって通常，医学的および開発経費的な両観点から効果的ではない）に可能な範囲よりも広範囲の腫瘍および疾患の標的化を可能にする．２．ＧＡＧは，疾患の発症の初期から進行および退行期まで，はるかに長期間にわたって有効な点で突出している．抗体に比べて広い標的化の特異性にもかかわらず，ＧＡＧの好ましいクリアランスと正常細胞による取り込みの回避は，２種以上の疾患部位がその細胞外マトリックス内に標的化された診断薬／薬物の蓄積を受けても，全身性および局所性毒性を低減させる．ＧＡＧのポリマー性および多価結合性の両者が結合した診断薬／薬物の至適な部位局在に極めて重要である．ＧＡＧの分子量は一般に約８，０００〜４５，０００ＭＷ，好ましくは１０，０００〜２３，０００ＭＷ，さらに好ましくは，１３，０００〜１９，０００ＭＷであることが，１．血漿コンパートメントへの診断薬／薬物の初期生体分布を限定し，それによって部位標的化に利用される試剤の量を最大にするため，２．疾患部の内皮に既に結合している内因性干渉物質を置換するため，３．ＧＡＧ−診断薬／薬物の基底にある組織マトリックスへの能動的内皮転移を誘導するため，４．結合した活性成分の迅速なクリアランスを与え，その副作用を著しく低減するため，に重要である．発明の概要本発明は，アニオン性または化学的に酸性のサッカライド，サルファトイドおよびグリコサミノグリカンの親水性担体に会合したカチオン性または化学的に塩基性の金属キレーターからなる新規な試剤を包含する．本発明のある実施態様においては，試剤はまたキレート化された金属または金属イオンを含有する．担体への金属キレーターの結合は共有結合または非共有結合化学的または物理的手段によって安定化される．一部の実施態様においては新規な，非共有結合組成物は独特の高い荷重効率，および低くても約１５重量％金属キレーター，特徴的には約７０〜９９重量％金属キレーターの範囲の金属キレーター対担体比を与える．特異的な実施態様は，塩基性またはカチオン性金属キレーターとして，デフェロキサミン，フェリオキサミン，鉄−塩基性ポルフィン，鉄−トリエチレンテトラミン，ガドリニウムＤＴＰＡ−リジン，ガドリニウムＮ−メチル−１，３−プロパンジアミン（Ｎ−ＭＰＤ）−ＤＴＰＡ，ガドリニウムＤＯＴＡ−リジン，ならびにポルフィリン，ポルフィン，拡大ポルフィリン，テキサフィリンおよびサフィリンの誘導体とガドリニウムからなり，これらが一方では，１種または２種以上の酸性またはアニオン性サッカライドを包含し，また硫酸化スクロース，ペントサンポリサルフェート，デルマタン硫酸，９％までの硫黄含量を示し選択的にオリゴサッカライドが過剰硫酸化され実質的に精製されたデルマタン硫酸，過剰硫酸化デルマタン硫酸，過剰硫酸化コンドロイチン硫酸，ヘパラン硫酸，ウシヘパリン，ブタヘパリン，非抗凝固性ヘパリン，ならびに他のネイティブおよび修飾サッカライドおよびグリコサミノグリカンを包含する酸性またはアニオン性の担体に結合している．磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）のコントラスト増強方法は本発明の特定の実施態様であり，これらは，インビボでの血漿通過時における金属キレーターと担体の安定な結合に基づいて，金属キレーター組成物の極めて迅速な担体を介する部位選択的インビボ局在，および持続的な部位貯留を確実にし，静脈内注射後の部位局在を可能にする．迅速かつ選択的な内皮部位への結合，基底にある組織部位への迅速な滲出の促進，部位蓄積，持続的な部位貯留とともに非部位局在分画の迅速なクリアランスはまた，腫瘍および心脈管系梗塞の選択的ＭＲＩコントラスト増強における本発明の組成物の使用によって証明される．選択性，局在と細胞取り込みの機構，およびＭＲＩ造影感度の驚くべき予期できない改善は，標準的な常磁性強度を有する金属キレートで示される．本発明の組成物および方法の使用の更なる利点は，部位選択的内皮結合，滲出，組織マトリックス蓄積および細胞取り込み機構を確認する特殊な組織学的染色の結果を含む実施例（下記参照）中に詳述する．選択的局在とＭＲＩ造影効果はまた，常磁性金属キレーター活性成分が担体に結合した型で投与された場合に起こり，遊離型では起こらないことも示されている．その最も一般的な実施態様においては，本発明は，金属イオンに対するキレーターからなり，このキレーターはカチオン基を有し，アニオン性，親水性担体に結合している．別の実施態様においては，カチオン基を有する金属イオンに対するキレーターは，非共有結合性静電力結合によってアニオン性，親水性担体に結合している．そして，ある種の実施態様においては，本発明は，金属イオンに対する塩基性キレーターを包含する試剤からなり，このキレーターはカチオン基を有し，アニオン性，親水性担体に共有結合している．キレーターが担体に共有結合で結合していない本発明の特定の実施態様においては，上記キレーターは塩基性であってもよい．本発明のある実施態様においては，金属イオンに対するキレーターからなり，アニオン性親水性担体に結合しているカチオン基を有する試剤はさらにキレート化された金属イオンから構成されてもよく，とくに，それはさらに常磁性金属イオンから構成されてもよい．本発明の試剤とくに担体に非共有結合的に結合した金属イオンに対するキレーターからなる試剤は，少なくとも約１５重量％のキレーターを含有するとして定義することができる．好ましくは，キレーターは常磁性金属イオンに対して少なくとも約１０¹⁴の形成定数を有する．金属イオンからなる本発明の試剤は好ましくは，鉄，マンガン，クロム，銅，ニッケル，ガドリニウム，エルビウム，ユウロピウム，ジスプロシウムおよびホルミウムからなる群より選ばれる金属イオンから構成されることが好ましい．ある種の実施態様においては，本発明の試剤はホウ素，マグネシウム，アルミニウム，ガリウム，ゲルマニウム，亜鉛，コバルト，カルシウム，ルビジウム，イットリウム，テクネチウム，ルテニウム，レニウム，インジウム，イリジウム，白金，タリウムおよびサマリウムからなる群より選ばれる金属イオンから構成されてもよい．上掲の金属イオンと機能的に均等な他の金属イオンも包含され，請求の範囲の項に記載の発明の範囲および精神に含まれるものであることを理解すべきである．本発明のある好ましい実施態様においては，試剤は酸性のサッカライド，オリゴサッカライド，ポリサッカライドまたはグリコサミノグリカンである担体から構成される．担体はまた酸性グリコサミノグリカンまたはサルファトイドであってもよい．とくに担体は，それらに限定されるものではないがヘパリン，脱硫ヘパリン，グリシン接合ヘパリン，ヘパラン硫酸，デルマタン硫酸，９％までの硫黄含量を示し選択的にオリゴサッカライドが過剰硫酸化され実質的に精製されたデルマタン硫酸，ヒアルロン酸，ペントサンポリサルフェート，デキストラン硫酸，硫酸化シクロデキストリンまたは硫酸化スクロースとすることができる．本発明のある実施態様においては，キレーターは，鉄イオンのキレーターである．好ましくはキレーターはヒドロキサメートであり，さらに好ましくはデフェロキサミンである．ある好ましい実施態様においては，金属イオンとキレーターはフェリクロム，フェリオキサミン，エンテロバクチン，フェリマイコバクチンまたはフェリクリシンである．とくに好ましい実施態様においてはキレーターはデフェロキサミンであり，担体はヘパリンまたはヘパリンフラグメントであり，試剤はさらに鉄（III）からなる．別の実施態様においては，キレーターはデフェロキサミンであり，担体はデルマタン硫酸またはデルマタン硫酸フラグメントであり，試剤はさらにキレート化された鉄（III）からなる．ある実施態様においては，本発明はまたヘパリン，ヘパラン硫酸，デルマタン硫酸，９％までの硫黄含量を示し選択的にオリゴサッカライドが過剰硫酸化され実質的に精製されたデルマタン硫酸またはコンドロイチン硫酸からなる群より選ばれる担体に結合したデフェロキサミンからなり，さらに金属イオンから構成される．本発明の試剤はまた，ポルフィン，ポルフィリン，サフィリンまたはテキサフィリンであり，さらに金属イオン好ましくは鉄イオンまたはガドリニウムイオンからなるキレーターにより構成されてもよい．とくに好ましい実施態様においては，本発明の試剤は５，１０，１５，２０− テトラキス（１−メチル−４−ピリジル）−２１Ｈ，２３−ポルフィンであるキレーター，ヘパリンである担体およびキレート化された鉄イオンからなる．ある実施態様においてはキレーターはまた，ジエチレントリアミノ四酢酸のポリアミノカルボキシレートもしくは大環式および好ましくは塩基性もしくはアミン誘導体，またはさらに好ましくは１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ"'−四酢酸（ＤＯＴＡ）の塩基性もしくはアミン誘導体である．本発明の試剤においては，担体はまたさらに，疾患部位に選択的に誘導される内皮決定基に相補性であるとして定義することもできる．ある実施態様においては，本発明は，誘発磁気共鳴シグナルから生じる映像を増強するための映像増強剤またはスペクトル増強剤であり，試剤は１−エチル− ３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド，Ｎ−エトキシカルボニル −２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンまたはカルボニルジイミダゾールによってヘパリンに共有結合で接合したフェリオキサミンからなる．また，本発明は誘発磁気共鳴シグナルから生じる映像を増強するためのスペクトル増強剤であり，試剤はヘパリン，デルマタン硫酸，９％までの硫黄含量を示し選択的にオリゴサッカライドが過剰硫酸化され実質的に精製されたデルマタン硫酸またはコンドロイチン硫酸の一つに共有結合で接合したＧｄ（III）ジエチレントリアミン五酢酸からなる．他の選択では，本発明は，試剤は金属イオンおよびキレート化された金属イオンの塩基性キレーターからなり，このキレーターは，ヘパリン，脱硫ヘパリン，グリシン接合ヘパリン，ヘパラン硫酸，デルマタン硫酸，９％までの硫黄含量を示し選択的にオリゴサッカライドが過剰硫酸化され実質的に精製されたデルマタン硫酸，コンドロイチン硫酸，ヒアルロン酸，ペントサンポリサルフェート，デキストラン硫酸，硫酸化シクロデキストリンまたは硫酸化スクロースからなる群より選ばれる親水性の担体に非共有結合的静電力結合によって結合している生体造影用の試剤である．生体造影の増強剤は好ましくは，デフェロキサミン，キレート化されたＦｅ（III）および上記デフェロキサミンに結合したグリコサミノグリカン担体からなり，さらに好ましくはグリコサミノグリカン担体はデルマタン硫酸であり，および／またはＦｅ（III）は放射性医薬用金属イオンであり，とくに好ましくは放射性医薬用金属イオンは⁵⁹鉄または⁶⁷ガリウムである．別の好ましい実施態様においては，本発明は生体造影の増強剤であり，試剤はジエチレントリアミン五酢酸−リジン，キレート化されたＧｄ（III）および上記ジエチレントリアミン五酢酸−リジンに結合したグリコサミノグリカン担体からなる．また，本発明は生体造影の増強剤であり，試剤はＤＯＴＡ−リジン，キレート化されたＧｄ（III）および上記の１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ"'−四酢酸−リジン（ＤＯＴＡ−リジン）に結合したグリコサミノグリカン担体からなる．特定の実施態様においては，本発明は，デルマタン硫酸または９％までの硫黄含量を示し選択的にオリゴサッカライドが過剰硫酸化され実質的に精製されたデルマタン硫酸に非共有結合的静電力結合によって結合しているフェリオキサミンからなる試剤である．その他の好ましい実施態様においては，本発明はＭＲＩ造影およびスペクトルシフトを含む生体映像の増強剤であり，試剤はＮ−メチル−１，３−プロパンジアミンジエチレントリアミン五酢酸（Ｎ−ＭＰＤ−ＤＴＰＡ）にキレート化されたガドリニウム（III）からなり，Ｎ−ＭＰＤ−ＤＴＰＡは，グリコサミノグリカン，好ましくはデルマタン硫酸，とくに好ましくは新規な特殊のクラスのデルマタン硫酸，最も好ましくは選択的に過剰硫酸化されたオリゴサッカライド配列を含有する新規な特殊のクラスのデルマタン硫酸に，最も好ましくは対合イオンもしくは他の非共有結合手段により，または別法として好ましくは共有結合手段により結合もしくは会合している．以上にまたは請求の範囲の項に記載した本発明の試剤はさらに，無菌または滅菌されていて，少なくとも１種の緩衝剤，サッカライド，硫酸化サッカライド，または非経口投与に適した浸透圧を生成させるための塩との配合物として，および水溶液または所望の浸透圧をもつ水溶液の再構築に適当な凍結乾燥もしくは乾燥製剤として定義できることを理解すべきである．本発明の他の実施態様は，脊椎動物における磁気共鳴映像またはスペクトルを増強する方法において，金属イオンキレーター，上述のような担体および常磁性イオンからなる本発明の試剤の有効量を上記動物に投与することからなる方法である．とくに，本発明は誘発磁気共鳴シグナルから生じる生体内映像を増強する方法において，対象に常磁性イオンからなる本発明の試剤の有効量を投与し，対象を磁場および高周波パルスに暴露し，誘発された磁気共鳴シグナルから造影結果を取得する工程からなる方法である．別の実施態様においては，本発明は生体内映像を増強する方法において，対象にキレート化された金属イオンからなる本発明の試剤の有効量を投与し，生体を超音波またはＸ線に暴露し，シグナルの変化を測定して造影結果を取得する工程からなる方法である．他の実施態様においては，本発明は，生体映像を得る方法において，放射性同位元素である金属イオンからなる本発明の試剤の有効量を対象に投与し，シンチグラフのシグナルを測定して映像を得る方法である．他の実施態様においては，本発明は，本発明の試剤，好ましくは金属イオンからなる試剤の治療有効量を，対象に投与することからなる血管性疾患の処置方法である．図面の簡単な説明以下の図面は本発明の好ましい実施態様およびそれらのＭＲＩコントラストの増強における使用を例示する．これらの例は全く例示的なものであり，いかなる意味においても本発明の全範囲を制限するものではない．図１Ａは，ジエチレントリアミン四酢酸（ＤＴＰＡ）基質（例３参照）の対照赤外スペクトルである．図１ＢはＬ−リジンＨＣｌ基質（例３参照）の対照赤外スペクトルである．図１Ｃは，これらのＤＴＰＡおよびＬ−リジンＨＣｌ基質を化学的共有結合で連結させないで，２つの基質を物理的に混合した場合の（例３参照）の対照赤外スペクトルである．図１Ｄは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）連結によってＤＴＰＡに共有結合で接合させたＬ−リジン（例３参照）の実験的赤外スペクトルである．共有結合による接合の形成を指示する波数１２５０〜１７００の範囲の特徴的ピークにおける変化（高さ，幅およびスプリットの消失）に注意されたい．以下の図については，デルマタン硫酸担体は，選択的に過剰硫酸化されたオリゴサッカライド配列を有するが，全体的な過剰硫酸化はない新規な特定のクラスのデルマタン硫酸である（ＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比＝１：１，硫黄含量＝６．３重量％；Opocrin S.P.A.，Corlo Di Formigine，Italy により「４３５型」として供給されている）．図２Ａ，図２Ｂ，図３Ａ，図３Ｂ，図４Ａ，図４Ｂ，図４Ｃ，図４Ｄおよび図８Ａ，図８Ｂおよび図８Ｃは，例２および例５のように製造されたフェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的常磁性造影剤を，先に肝臓に同系の乳腺癌を接種して造影の時点で腫瘍の直径が１．０〜２．５cmであるFisher３４４雌性ラットに，フェリオキサミン用量０．１５５ミリモル／kgで静脈内注射（i.v.）し，その i.v.注射前（プレ）および後（ポスト）に１．０および１．５テスラにおいて実施したＴ１−強調ＭＲＩ像（ＴＲ／ＴＥ＝８００／４５，５５０／２３および６００／４５）を示す．図２Ａ．肝臓のプレコントラスト像（腫瘍はハッキリ見えない）．図２Ｂ．選択的常磁性造影剤，フェリオキサミン：デルマタン硫酸（０．１５５ミリモル／kg）i.v.の７注射後分（ＭＰＩ）における肝臓の映像．肝臓の右葉における腫瘍の著しいコントラスト増強，周囲の肝臓に対する極めてシャープな腫瘍の境界，および不連続に区分された腫瘍壊死のより濃厚な中央領域が認められ，腫瘍の灌流および異なる極めて小さい解剖学的亜領域内での空間的解像および評価機能を可能にする．図３Ａ．肝臓のプレコントラスト像（腫瘍は存在するがはっきり見えない）．図３Ｂ．フェリオキサミン活性成分単独（デルマタン硫酸担体なし）の７ＭＰＩにおける肝臓の映像．急性のコントラスト増強は極めてわずかのみかまたは存在しない．これは図２Ｂに見られた著明な腫瘍増強とは著しく異なり，これはデルマタン硫酸担体によるフェリオキサミン活性成分の結合がフェリオキサミン活性成分の腫瘍部位局在および腫瘍取り込みに必須であることを示している．図４Ａ．肝臓のプレコントラストＴ１像（ＴＲ／ＴＥ＝８００／４５）（乳房腫瘍は存在するがはっきり見えない）．図４Ｂ．フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的ＭＲＩ造影剤の２１ＭＰＩにおける肝臓の映像．主要な腫瘍塊の著しい増強と明瞭な腫瘍境界に注意．また，肝臓の左葉における小さな２mmの腫瘍転移の明るい増強が見られる．この転移はプレコントラストＴ１像では全く可視化されていない．図４Ｃ．フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的ＭＲＩ造影剤の３０ＭＰＩにおける肝臓の映像．主要な腫瘍および転移の持続的な増強に注意．図４Ｄ．フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的ＭＲＩ造影剤の４２ＭＰＩにおける肝臓の映像．長時間の造影後間隔においても，主要な腫瘍および転移の引き続き強力な増強に注目．持続的な高い感度で，両結節における腫瘍境界の引き続いての描写（選択性），それに加えて２−mmの肝臓転移内の中央部の極めて小さい非灌流領域の描写が認められる．図５．図４Ａ，図４Ｂ，図４Ｃおよび図４Ｄに示したのと同じ腫瘍動物からのＭＲＩ像強度の関心領域（ＲＯＩ）分析．上の線＝腫瘍ＲＯＩ，下の線＝肝臓のＲＯＩ，時点＝プレコントラスト，ならびにフェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的ＭＲＩ造影剤の１２，２７，４４および６４ＭＰＩ．腫瘍対肝臓の強度比は，（ａ）１２ＭＰＩのピーク時＝１１：１，（ｂ）２７〜６４ＭＰＩにわたる平均＝３．２：１−（ａ）および（ｂ）の両者は肝臓に比べて腫瘍の極めて良好な選択性をさらに指示している．強度は経時的に極めて緩徐にのみ消退し，Ｇｄ：ＤＴＰＡについて報告されている極めて迅速な，その部位におけるｔ_1/2約１２〜２０分の動態とは異なる（映像は示していない）．図６．Fisher３４４雌性ラットの肝臓接種部位から切除した同系乳腺癌のフォルマリン固定切片の特殊な組織学的染色（加熱フェロフェリシアニド反応）：フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的ＭＲＩ造影剤の７〜１０ＭＰＩの外側腫瘍縁部．（ａ）腫瘍内皮上部および内部における強い陽性，（ｂ）内皮下における強い陽性，（ｃ）腫瘍の細胞外マトリックスにおける中等度陽性，および（ｄ）腫瘍細胞内部位内での軽度〜中等度陽性のフェリオキサミン鉄に対する選択的染色に注目．図７Ａ．組織切片はフェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的ＭＲＩ造影剤の７〜１０ＭＰＩの中央腫瘍部から採取した以外は図６の場合と同じ腫瘍，染色，条件および造影後時間．有意な陽性染色が図６の場合とすべて同じ部位に存在．図７Ｂ．同一の種類および部位の乳房腫瘍を有する別の動物に，図６および図７Ａの場合と同じフェリオキサミン用量でフェリオキサミン活性成分単独のi.v. 注射後７〜１０ＭＰＩである以外は図７Ａと同一．陽性染色は全く存在しないことに注目されたい．これは，完全試剤（担体に結合した活性成分）と活性成分単独（遊離型活性成分）でのＭＲＩ造影の結果とよく相関する−（図２Ａおよび図２Ｂ対３）．図８Ａ．原発性肝臓乳房腫瘍を有するラットの肺臓領域のＴ１−強調像（ＴＲ／ＴＥ＝６００／４５）．肺臓転移（２−mm〜３−mm結節）がかすかに見えるのみのプレコントラストである．図８Ｂ．同じラットの１２ＭＰＩにおける肺臓領域．肺臓転移の選択的な明るい増強による腫瘍検出の感度（明晰度）の著しい改善に注意．腫瘍境界のシャープさにも注目．図８Ｃ．１７ＭＰＩにおける同じ肺臓領域．腫瘍の境界の持続的増強と持続的なシャープさに注意．比較すると，Ｇｄ：ＤＴＰＡの迅速な拡散速度が早期に急速な境界のぼやけを生じさせ，同時に肺臓転移の検出感度も低下させる．図９Ａ，図９Ｂ，図９Ｃ，図９Ｄ，図９Ｅ，図１０Ａ，図１０Ｂ，図１０Ｃ，図１０Ｄおよび図１０Ｅは，先に作成した皮膚嚢胞内に同系ＡＴ−１前立腺腺癌を接種して造影の時点で腫瘍の直径が１．０〜２．５cmであるCopenhagenラット［Hahnら（１９９３）］に，例２および例５のように製造されたフェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的常磁性造影剤の０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）用量での静脈内注射（i.v.）（図９Ａ，図９Ｂ，図９Ｃ，図９Ｄ，図９Ｅ），ならびに比較のためにガドリニウムＤＴＰＡジメグルミンの０．１５５ミリモル／ kgのＧｄ（III）用量でのi.v.注射（図１０Ａ，図１０Ｂ，図１０Ｃ，図１０Ｄ，図１０Ｅ）の前（プレ）および後（ポスト）に４．７テスラにおいて実施したＴ１−強調ＭＲＩ映像（ＴＲ／ＴＥ＝２５０／８）を示す．図９Ａ．フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的常磁性造影剤のプレコントラスト映像．図９Ｂ．フェリオキサミン濃度０．１６６ミリモル／mlの液体型フェリオキサミン：デルマタン硫酸の７ＭＰＩ．外縁部および腫瘍の肉茎から扇形に広がる血管列の強力な増強に注意．図９Ｃ．２０ＭＰＩであることを除き図９Ｂに同じ．図９Ｂにおけるエレメントの持続的な不連続な増強に注意．図９Ｄ．４０ＭＰＩであることを除き図９Ｃに同じ．持続的なコントラストおよび外縁部の描写に注意．図９Ｅ．６０ＭＰＩであることを除き図９Ｄに同じ．コントラストの消退も開始に注意．図１０Ａ．Ｇｄ：ＤＴＰＡジメグルミン非選択的造影剤に対するプレコントラスト映像．図１０Ｂ．Ｇｄ：ＤＴＰＡジメグルミンの７ＭＰＩ．この極めて初期の造影後間隔でも外縁部は十分に描写されていないことに注意．図１０Ｃ．２０ＭＰＩであることを除き図１０Ｂに同じ．全体に著しく早いコントラストの消退に注意．腫瘍の中央部の貧弱な灌流しかない（嚢胞性）領域に一部の試剤の分離が見られる（生体部位の造影に用いた場合，Ｇｄ：ＤＴＰＡには通常報告されている）．図１０Ｄ．４０ＭＰＩであることを除き図１０Ｃに同じ．増強はほぼバックグランドレベルに復帰していることに注意．図１０Ｅ．６０ＭＰＩであることを除き図１０Ｄに同じ．中央の嚢胞領域を除き，残ったコントラストはない．図１１Ａ，図１１Ｂ，図１１Ｃおよび図１１Ｄは，急性の９０−分心筋梗塞（左前下行冠状動脈結紮）ついで造影剤注入前約９０分に再灌流した German Shep herdイヌに例２および例５のように製造されたフェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的常磁性造影剤の０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）用量での静脈内注射（i.v.）した急速i.v.注入の前（プレ）および後（ポスト）に０．５テスラにおいて実施したＴ1-強調ＭＲＩＥＣＧ制御心脈管系造影を示す．図１１Ａ．プレコントラスト映像．図１１Ｂ．フェリオキサミン：デルマタン硫酸造影剤による梗塞，とくに梗塞の境界一辺縁域の推定される境界の描写における強力な増強を示す７ＭＰＩ．中央部のより濃厚な領域−推定される不可逆性の中央部梗塞域に注意．図１１Ｃ．持続的な強力な増強と上述の帯域を示す２０ＭＰＩ．図１１Ｄ．４０ＭＰＩ．中央域の充填を除き１１Ｃに同じ．有意な全体的コントラストの消退は認められない．注：（１）０．１５５ミリモル／kgのフェリオキサミン試剤単独の注射では検知可能な増強は得られない（映像は示していない）；（２）梗塞の大きさおよび位置は造影直後の二重色素注入法で証明する．図１２Ａ，図１２Ｂ，図１２Ｃおよび図１２Ｄは，ＡＴ−１前立腺腫瘍モデルのCopenhagenラットの４．７テスラにおけるＴ１−強調ＭＲＩ像を示す（図９Ａ，図９Ｂ，図９Ｃ，図９Ｄ，図９Ｅ，図１０Ａ，図１０Ｂ，図１０Ｃ，図１０Ｄおよび図１０Ｅの場合と同じ）が，ラットには凍結乾燥型（液体型との比較）のフェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的造影剤を投与前に０．４１５ミリモル／mlの鉄（III）のより高い濃度に水で再構築し，０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）の通常の用量でi.v.注射する．図１２Ａ．フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的常磁性造影剤のプレコントラスト映像．図１２Ｂ．凍結乾燥型を鉄（III）濃度０．４１５ミリモル／mlに再構築したフェリオキサミン：デルマタン硫酸の７ＭＰＩ．腫瘍の全外縁部のきわめて強力な増強に注意．図１２Ｃ．２０ＭＰＩであることを除き図１２Ｂに同じ．外縁部の持続的なきわめて強力な増強と描写に注意．図１２Ｄ．４０ＭＰＩであることを除き図１２Ｃに同じ．外縁部の持続的なきわめて強力な増強とともに，この時点では中央部腫瘍の明るさが上昇し始めていることに注意．また，４０分ではコントラストの消退は実際上見られない．図１３Ａ，図１３Ｂ，図１３Ｃおよび図１３Ｄは，ＡＴ−１前立腺腫瘍モデルのCopenhagenラットの４．７テスラにおけるＴ１強調ＭＲＩ像を示す（図１２Ａ，図１２Ｂ，図１２Ｃ，および図１２Ｄの場合と同じ）が，ラットには予め０．４１５ミリモル／mlのＧｄ（III）濃度に調整したＧｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ：デルマタン硫酸選択的造影剤の液体型を，０．１５５ミリモル／kgのＧｄ（ III）の通常用量でi.v.注射する．図１３Ａ．Ｇｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ：デルマタン硫酸選択的造影剤のプレコントラスト映像．図１３Ｂ．０．４１５ミリモル／mlにおけるＧｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ：デルマタン硫酸の７ＭＰＩ．全外縁部および中央部腫瘍の極度に強力な増強に注意．これはフェリオキサミンキレートのＲ１＝１．５〜１．８[mmol.sec]^-1に対してＧｄ：ＤＴＰＡキレートの高い常磁性強度Ｒ１＝４．３[mmol.sec]^-1に一致する．図１３Ｃ．２０ＭＰＩであることを除き図１３Ｂに同じ．外縁部の持続的なきわめて強力な絶対的増強に注意．また，中央部の血管列に強力な付加的な増強が認められる（嚢胞性分離とは区別される）．図１３Ｄ．４０ＭＰＩであることを除き図１３Ｃに同じ．外縁部の持続的な増強とともに，４０分では全体的な消退が始まるところであるが，絶対的な増強は全領域でフェリオキサミン：デルマタン硫酸に比較して同等またはそれ以上の明るさを残している．図１４Ａ，図１４Ｂ，図１４Ｃおよび図１４Ｄは，ＡＴ−１前立腺腫瘍モデルのCopenhagenラットの４．７テスラにおけるＴ１強調ＭＲＩ像を示す（図１３Ａ，図１３Ｂ，図１３Ｃ，図１３Ｄの場合と同じ）が，ラットには活性成分が過剰硫酸化デルマタン硫酸に非共有結合で結合されたフェリオキサミン：デルマタン硫酸選択的造影剤の凍結乾燥製剤を投与直前に０．３３２ミリモル／mlの鉄（II I）の濃度に水で再構築し，０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）の通常の用量で i.v.注射する．図１４Ａ．プレコントラスト．図１４Ｂ．７ＭＰＩ．図１４Ｃ．２０ＭＰＩ．図１４Ｄ．４０ＭＰＩ．ネイティブなデルマタン硫酸に結合したフェリオキサミン（上述）に比べて，腫瘍縁部の増強は同等もしくはわずかに強く，血管列の解像力は全時間を通じて大きかった．図１５Ａ，図１５Ｂ，図１５Ｃおよび図１５Ｄは，ＡＴ−１前立腺腫瘍モデルのCopenhagenラットの４．７テスラにおけるＴ１強調ＭＲＩ像を示す（図１３Ａ，図１３Ｂ，図１３Ｃ，図１３Ｄの場合と同じ）が，ラットには活性成分が過剰硫酸化コンドロイチン硫酸に非共有結合で結合されたフェリオキサミン選択的造影剤の凍結乾燥製剤を投与直前に０．３３２ミリモル／mlの鉄（III）の濃度に水で再構築し，０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）の通常の用量でi.v.注射する．図１５Ａ．プレコントラスト．図１５Ｂ．７ＭＰＩ．図１５Ｃ．２０ＭＰＩ．図１５Ｄ．４０ＭＰＩ．ネイティブなデルマタン硫酸に結合したフェリオキサミン（上述）に比べて，７ＭＰＩ時には腫瘍縁部の中等度に大きな増強および血管列の大きな解像力，ならびにその後の２つの時点ではわずかに強いのみの増強が認められる．図１６Ａ，図１６Ｂ，図１６Ｃおよび図１６Ｄは，ＡＴ−１前立腺腫瘍モデルのCopenhagenラットの４．７テスラにおけるＴ₁強調ＭＲＩ像を示す（図１３Ａ，図１３Ｂ，図１３Ｃ，図１３Ｄの場合と同じ）が，ラットには活性成分が非抗凝固ＧＡＧ，ヘパラン硫酸に非共有結合で結合されたフェリオキサミン選択的造影剤の凍結乾燥製剤を投与直前に０．３３２ミリモル／mlの鉄（III）の濃度に水で再構築し，０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）の通常の用量でi.v.注射する．図１６Ａ．プレコントラスト．図１６Ｂ．７ＭＰＩ．図１６Ｃ．２０ＭＰＩ．図１６Ｄ．４０ＭＰＩ．本質的にすべての他のＧＡＧ担体によって達成される鑑別縁部増強に比べて，実際上造影後のすべての時点での外縁部および腫瘍中央部の極めて均一な増強に注意．この性質はある種の診断的および／または治療的適用に有用である．図１７Ａは，ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸（Ｇｄ：ＤＴＰＡ）の対照ＩＲスペクトルである（例２１参照）．図１７Ｂは，Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン（ＭＰＤ）の対照ＩＲスペクトルである（例２１参照）．図１７Ｃは，各化学成分，Ｇｄ：ＤＴＰＡおよびＭＰＤの混合（および乾燥）溶液（モル比１：１）の対照ＩＲスペクトルである．図１７Ｄは，モル比１：１でＤＰＴＡに共有結合で接合させたＭＰＤ（例２１に記載）の実験的なＩＲスペクトルである．波数１４００の特徴的ピークの高さおよびスプリットの変化，ならびに波数３３００〜３６００における広い伸縮バンドの高さおよび形態の変化に注目されたい．これらは共有結合による接合の形成を指示する．図１８Ａは，先に肝臓に同系の乳房腺癌を接種して，造影の時点における腫瘍の直径が１．０〜２．５cmであるFisher３４４雌性ラットの肝臓領域を，一連のＴ１強調造影を実施する直前に（下記参照）１．０テスラで造影したＴ２増強ＭＲＩ探査像を示す（ＴＲ／ＴＥ＝２１００／８５）．このＴ２増強像は２つの腫瘍結節（肝臓の右後部）および１つの腫瘍浸潤（肝臓中央部）のおおよその位置を同定するために実施する．すべての腫瘍の増殖は剖検時に肉眼検査で確認する．図１８Ｂ，図１８Ｃ，図１８Ｄ，図１８Ｅおよび図１８Ｆは，先に肝臓に同系の乳腺癌を接種して，造影の時点で腫瘍の直径が１．０〜２．５cmであるFisher ３４４雌性ラットに，例２１および２２のようにして調製したＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸選択性造影剤の静脈内（i.v.）注射前（プレコントラスト）および注射後（ポストコントラスト）様々な時間で１．０テスラにおいて実施したＴ−１増強像を示す．図１８Ｂ．肝臓のＴ１プレコントラスト映像（腫瘍は見えない）．図１８Ｃ．Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸選択性造影剤，７ＭＰＩのＴ１肝臓映像．２つの固形腫瘍結節（肝臓の右後部）および１つの不規則な腫瘍浸潤（肝臓中央部）の極めて強力なコントラストの増強がＴ２増強探査造影（図１８Ａ）によって指示されたのと同一の位置に認められるが，腫瘍縁部におけるはるかに良好な解像力と腫瘍縁部におけるはるかに高いコントラスト勾配を示す．かなり小さいサイズの腫瘍結節および中央部の腫瘍浸潤の改善された解像はいずれも，Ｔ１様式にはＴ２様式のアーチファクト，すなわちＴ２パルス様式では現れるが好ましいＴ１様式では認められない実際の腫瘍縁部の外側の水の付加的縁部（コロナ）がないことによるものである．図１８Ｄおよび図１８Ｅ．Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸選択性造影剤（０．１５５ミリモル／kg）の２０および４０ＭＰＩにおけるＴ１肝臓映像．２つの固形腫瘍結節（肝臓の右後部）および１つの不規則な腫瘍浸潤（肝臓中央部）の引き続き極めて顕著なコントラストの増強と，引き続き極めて高度に腫瘍縁部の境界を画し，コントラストの消退は実質的に認められない．図１８Ｆ．２０および４０ＭＰＩにおけるＴ１肝臓映像．２つの固形腫瘍結節（肝臓の右後部）および１つの不規則な腫瘍浸潤（肝臓中央部）の引き続き極めて顕著なコントラストの増強が認められ，２つの固形腫瘍結節（肝臓の右後部）には４０ＭＰＩにわたって極めてわずかな腫瘍縁部のシャープさの低下，腫瘍コントラスト強度の極めて微小な低下（消退）を生じたのみで，腫瘍浸潤（肝臓中央部）の更なる光輝化と，無関係な周辺肝臓の極めて軽度のバックグランドの光輝化が見られた．図１９Ａ，図１９Ｂ，図１９Ｃ，図１９Ｄおよび図１９Ｆは，先に作成した皮膚嚢胞内に同系ＡＴ−１前立腺腺癌を接種して腫瘍の直径が１．０〜２．５cmの Copenhagenラット［Hahnら（１９９３）］に，４．７テスラにおいて（ＴＲ／ＴＥ＝２５０／８）造影を実施したＴ１強調映像を示す．図１９Ａ．Ｇｄ：ＭＰＤ＝ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸選択性造影剤に対するプレコントラスト映像．全身コイルではなく表面コイルを使用したため，腫瘍ならびに表在性背部脂肪および背部筋肉のみが見られる．図１９Ｂ．Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸選択性造影剤液体型のi. v.７ＭＰＩのポストコントラスト映像．全腫瘍塊の極めて強力な増強および腫瘍と基底にある正常組織の間の境界における極めて強い勾配に注意．図１９Ｃ．Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸選択性造影剤液体型のi. v.２０ＭＰＩのポストコントラスト映像．全腫瘍塊の極めて強力な増強および腫瘍と基底にある正常組織の間の境界における極めて強い勾配に注意．コントラストは腫瘍の中央部領域でわずかに低下し，腫瘍の新生血管列はこの時点で極めて良好に可視化される．図１９Ｄおよび図１９Ｆ．Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸選択性造影剤液体型のi.v.２０ＭＰＩのポストコントラスト映像．腫瘍のなお極めて強力な増強とくに腫瘍と基底にある正常組織の間の境界における極めて強いコントラスト勾配に注意．腫瘍中央部および外縁部のコントラスト強度（左の映像，動物から摘出）は中等度に低下している．極めて強力なＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸［Ｒ１＝７．８(mmol.sec)^-1］の高い局所濃度でのこれらの領域における腫瘍への進行的な蓄積により，Ｔ２効果が中央部および外部腫瘍領域の競合的な減光が生じ始めたことが明らかである（左の映像，例２６も参照）．基底縁部（右の映像）は，この基底部位における血漿への試剤のより迅速な逆拡散によってこのＴ２減光アーチファクトから比較的に保護されている．したがって，より中等度に低い用量が指示される．図２０は，ＡＴ−１前立腺腺癌（Copenhagenラットから）の特殊な組織化学的染色（マイクロ波増強プルシアンブルー金属−イオン染色）を示す．腫瘍組織はＭＲＩ造影の完了直後６０ＭＰＩで摘出し，新鮮時凍結し，切片化し，上述のようにまた例２６および図６と７に記載のように染色する．以下のようなＧｄ（II I）金属イオンに対する選択的染色陽性：（ａ）ほとんど全腫瘍細胞内の極めて強力な陽性（腫瘍細胞内部）：（ｂ）腫瘍細胞の核における強力な陽性−多くの細胞でただし全腫瘍細胞ではない（たとえば，グリッドマーカー「９」の下および映像の右側のグリッドマーカー「１０」の直ぐ左にある腫瘍細胞を参照）；（ｃ）中等度に陽性の新生血管内皮細胞（たとえば映像の頂部のグリッドマーカー「８」の直ぐ上−「線路」のように見える：およびグリッドマーカー「２」の直ぐ下）；ならびに（ｄ）弱い陽性ないし陰性の内皮下および細胞外マトリックス部位（＝腫瘍細胞と内皮リボンの間の空間）．細胞外マトリックスの低い６０− 分染色は，（ａ）６０分における金属イオンのより拡散した分布（図６および図７Ａの７分に対して），拡散した金属イオンは可視化がより困難であること（それらの小さい光学的染色病巣による）または（ｂ）初期に局在化した金属イオンの一部の血漿逆拡散の一方または両者によって生じるものと思われる．腫瘍内皮，腫瘍マトリックス，腫瘍細胞本体および腫瘍細胞の核におけるこれらの所見は，ＭＲＩならびに放射性核種診断および治療薬，さらに実際，他の種類の活性物質の選択性局在のための基盤を提供する．好ましい実施態様の詳細な説明本発明の多くの革新的な教示は，これらの革新的教示が有利に適用される生体内Ｔ１−型ＭＲＩ造影の増強の特定の問題についての現時点で好ましい実施態様をとくに参照しながら説明する．この増強は，その部位における至適な空間および動態像による常磁性金属キレートの部位特異的局在および持続的部位貯留によるものであり，一方同時に，非局在化用量分画のクリアランスの増大および毒性の最小化によるものである．しかしながら，この第一の実施態様は本明細書における革新的教示の多くの有利な用途の一例にすぎないことを理解すべきである．たとえば本明細書に開示される様々な種類の革新的組成物および方法はまた，金属キレートの部位送達および内因性生体金属のインシトゥキレーションに基づき，放射性核種造影剤，Ｘ線造影剤，超音波−音波造影増強剤ならびに広いスペクトルの治療剤の選択的局在およびクリアランスの増大に使用することができる．本明細書において具現化されるとくに興味のある治療剤および使用には，癌療法，心脈管系梗塞，再狭窄，動脈硬化，急性血栓症，微小血管疾患，炎症，ならびにそれらの発症または進行の一部として，本明細書に記載の新規な教示，組成物および使用による結合，接着，輸送および／または修飾を受けることが可能な血管成分を有する他の組織疾患に有用な活性物質および適応症がある．したがって，多くの他の組成物および使用が本発明により独特に採用できることは本技術分野の熟練者には自明であろう．以下の例は，本発明の好ましい実施態様，それらのＭＲＩ造影剤の増感における使用を例示するために提供される．これらの例は，純粋に例示的なものであり，いかなる意味においても本発明の完全な範囲を限定するものではない．本発明はとくに，磁気共鳴映像のための新規な造影剤の製造および利用について説明される．これらの新規な造影剤は，金属原子錯体とは区別される常磁性金属キレートから構成さて，現在開示されているキレートがグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合している．金属錯体のＧＡＧへの結合は，それらに限定されるものではないが，静電力相互作用（対合イオン），水素結合，ファンデワールス相互作用，共有結合による連結，またはこれらの相互作用の任意の組合せの形態を取る．これらの金属錯体−グリコサミノグリカン製剤の非経口投与後には，本明細書に記載の技術では，生物適合性の担体分子を利用して，会合した生物活性物質を血管傷害部位に送達する．本発明は，実質的に改善されたＭＲＩ像およびスペクトル増強を与える組成物および方法を提供し，それにより，腫瘍，心脈管系疾患，および血管または内皮接着成分に関連する他の疾患のＭＲＩハードウエアによる検出能力は著しく増大される．これらの改善は本発明では，キレート化された常磁性金属イオンを関心組織部位に選択的導入し，固定および勾配磁場による配向および適当な共鳴周波数の高周波場によるパルス再配向を受けやすい部位内に存在する水プロトンまたは他の拡散性核種のＴ１−型常磁性緩和の選択的（局部的）修飾を誘導し，それにより誘導磁気共鳴シグナルの造影コントラストの増強またはスペクトル増強のいずれかの形態での検知可能な修飾の起こさせることによって達成される．過去の開示［Ranney; 米国特許出願一連番号０７／８８０，６６０，１９９２年５月８日出願，米国特許出願一連番号０７／８０３，５９５，１９９２年４月３日出願，および米国特許出願一連番号０７／６４２，０３３，１９９１年１月１日出願］は（ａ）最も強力な単一金属イオン，ガドリニウム（III）の場合よりも大きな磁力；（ｂ）本明細書に開示された安定に架橋リガンドにキレート化された金属イオンよりも化学的および物理的不安定性のために強い効力を有する非架橋リガンドによって安定化された分子内カップリング多原子金属原子錯体；および（ｃ）ここに開示される常磁性金属キレーター活性部分に対す１価のカチオン性電荷のみの要求に比べて，アニオン性担体への結合のための「超常磁性」活性部分における２価のカチオン性電荷を要求する磁性物質の結合を取り扱っている．ＭＲＩの用途では，金属キレーターはまた適当な常磁性金属イオンたとえば好ましくは鉄（III）またはガドリニウム（III）で構成されるが，しかしながら，ある種の他の診断的および治療的組成物および使用のためには，ここに開示される金属キレーターは適当な金属イオンから構成されていても，またそれを回避してもよいことを理解すべきである．現時点で好ましいＭＲＩへの適用には，塩基性金属キレーターおよび製剤化のｐＨにおいて求電子性を有する金属キレーター，たとえばフェリオキサミン［Crumbliss，１９９１］，ポリアミノカルボキシレートキレーターの塩基性またはアミン誘導体，ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ），ならびにマクロ環式キレーターの塩基性またはアミン誘導体，１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ"'−四酢酸（ＤＯＴＡ）［Liら，１９９３；Brechbiel ら，１９８６］が好ましい．ある場合には，またこれらのおよび関連活性成分に結合したある種の強力な担体については，部位局在性が極めて著しいので，常磁性金属イオンの固有の効力（インビトロ常磁性Ｒ１）は至適な部位局在化造影コントラストまたはスペクトル増強効果を得るために決定的ではない．したがって，本発明は，キレート化されたＦｅ（III）イオンによって約１．６〜１．８(mmol.sec)^-1の強度またはＲ１緩和度を有する塩基性金属キレート，フェリオキサミンの顕著なＴ１映像造影効果を開示するものである．またＧｄ（III）の塩基性金属キレートも，すべてではないがある種のインビボ条件下には，ＤＴＰＡによってキレート化された場合にはそのより大きなインビトロＲ１，約４．０〜４．３(mmol.sec)^-1による大きな緩和度の可能性，ＤＯＴＡ［Geraldesら，１９８５］にキレート化された場合には中等度に高い可能性，ならびにある種のＤＴＰＡ誘導体，（ａ）ＤＴＰＡを上回る加速された水拡散および緩和を可能にし同時に（ｂ）好ましくはグルコサミノグリカンを含む酸性サッカライドに非共有結合で結合できる好ましいＤＴＰＡ−アミンおよびＤＴＰＡ−塩基性誘導体群の好ましい一つの実施態様としてＮ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＰＴＡ誘導体にＧｄ（III）がキレート化された場合にＲ１≧７．５(mmol.sec)^-1の高い緩和度をもつことが期待される．また，金属イオンには好ましくは２価または３価のカチオン，マンガン，クロムおよびジスプロシウム，好ましさは若干劣るが，銅，ニッケル，エルビウム，ユウロピウム，およびホルミウムのイオンが包含される．本発明の好ましいキレーターには，上述の強力な常磁性金属イオンのに対しては，少なくとも約１０¹⁴の形成定数を有し，塩基性もしくはカチオン基を有するキレーターが包含される．これらのキレーターには好ましくはフェリオキサミン，ＤＯＴＡ，ＤＴＰＡ，ポルフィン，ポルフィリン，サフィリンまたはテキサフィリンの塩基性またはアミン誘導体が包含される．これらは好ましくはＦｅ（II I）をキレートすること最も好ましくはＧｄ（III）をキレートことが可能で，同時に酸性基または酸性担体に主として対合イオン（静電力）手段により結合できる．たとえば，ある種のテキサフィリンは拡大されたマクロ環を有し，ある場合にはＧｄ（III）を安定にキレートする［Sesslerら，’０６５，Sesslerら，’ ７２０およびSesslerら，’４９８，引用により本明細書に導入する］．テキサフィリンおよびサフィリンは本発明では例示されないが，直前に引用した文献から，またここに開示され例示されたＦｅ（III）キレーター，５，１０，１５，２０ −テトラキス（１−メチル−４−ピリジル）−２１Ｈ，２３−ポルフィンから，類似のテキサフィリンおよびサフィリンならびにそれらの塩基性，カチオン性およびアミン誘導体，またここに開示されたポルフィン誘導体およびその類縁体ならびに塩基性，カチオン性およびアミン誘導体が本発明の開示および教示に包含され，ここに開示された酸性担体と組合せて使用できることは，本技術分野の熟練者には自明であろう．とくに（ａ）金属キレートの常磁性の強度，（ｂ）酸性担体に対する結合安定性，（ｃ）製剤の適合性，および（ｄ）生体適合性およびインビボにおけるクリアランスを合わせて考慮すべき問題である．親水性のキレーターおよび担体は，常に好ましくはないが，通常それらの典型的な好ましい製剤特性（凝集がない），生体分布特性（局在の過程での疎水性血漿および細胞膜構成成分への普遍的結合がない），ならびにクリアランスおよび毒性に関連する利点により好ましい．その他のキレーターには，ヒドロキサメート，フェリクロム，エンテロバクチン，フェリマイコバクチン，フェリクリシンおよびそれらの塩基性またはアミン誘導体が包含される．すべての誘導体は上掲の母体のキレーターに包含されるものとして定義される．好ましい担体には，製剤化に使用されるｐＨで定義されるアニオン性もしくは酸性の基を含有するかまたはそれによって構成されるモノマー，オリゴマーおよびポリマー物質が包含される．これらは通常，カルボキシレート基，さらに好ましくは酸性のさらに強いホスフェート基，最も好ましくはサルフェート基を含有するかまたはそれによって構成される．好ましい担体には，それらに限定されるものではないが，通常細菌または半合成起源の酸性サッカライド，オリゴサッカライド，ポリサッカライド，グリコサミノグリカンもしくはサルファトイド，または，本明細書においてはすべて母体の物質およびその範疇の名称に包含されるものとして定義される上述の物質の誘導体，修飾体もしくはフラグメントが包含される．したがって，好ましい担体には，以下の物質，ヘパリン，脱硫酸ヘパリン，グリシン接合ヘパリン，ヘパリン硫酸，デルマタン硫酸，コンドロイチン硫酸，ペントサンポリサルフェート，およびスクロースオクタサルフェートを含む硫酸化スクロース，ならびに，それらの誘導体，修飾体または修飾型が包含される．通常のＭＲＩ用の製剤および使用には好ましさは劣る担体として，硫酸化シクロデキストリン，デキストラン硫酸およびヒアルロン酸も包含されるが，これらはある種の特定の診断薬または薬物の製剤および使用にとくに適当な可能性がある．報告され試験されたすべての場合，酸性担体に対する塩基性アミンキレーターの非共有結合は，共有結合による接合によって得られるよりも活性物質の著しく高い荷重効率を示す．たとえば，好ましい塩基性キレーター，フェリオキサミンおよびＧｄ（III）ＤＴＰＡ−リジン，最も好ましいキレーター，Ｎ−メチル− １，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡ（Ｎ−ＭＰＤ−ＤＴＰＡ）はそれらの酸性グリコサミノグリカン担体に重量比≧７０％で結合する．ある場合には別の共有結合活性成分−担体接合体が好ましく，それらの好ましい例はＭＲＩへの適用について示すことにする．生体内で試験された本発明の特定の実施態様は，それらに限定されるものではないが（ａ）デフォルキサミン，（ｂ）フェリオキサミン，（ｃ）Ｇｄ（III）：ＤＴＰＡ−リジン，（ｄ）Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡ，および（ｅ）以下に例示するように，酸性グリコサミノグリカンに最も好ましくは非共有結合によって，また好ましくは共有結合によって結合する他の塩基性金属キレートの本明細書に例示される好ましい実施態様である．この場合の酸性グリコサミノグリカンには好ましくは，デルマタン硫酸，コンドロイチン硫酸，ヘパラン硫酸，およびヘパリンが包含され，これらには定義により，抗凝固活性を低下または部位結合性の改善．クリアランス増大または他の所望の製剤化もしくは生体内特性を与えるために行われる過剰硫酸化および修飾を含むそれらの誘導体または修飾体が包含される．しかしながら，ＭＲＩ造影剤の投与を象徴する高用量では，低毒性および至適安全域の観点から，とくに好ましい担体は，比較的低いＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比，０．７：１〜１．８：１，最も好ましくは０．９：１〜１．５：１，典型的には１：１，さらに比較的低い硫黄含量，好ましくは９％(w/w)未満，最も好ましくは４％〜７％(w/w)，通常は６．３〜６．４％(w/w) のデルマタン硫酸である．上述の高用量投与条件で最も好ましい担体物質は，全分子が全体的に過剰硫酸化されることなく選択されたオリゴヌクレオチド配列のみが過剰硫酸化さた新しい特定のクラスのデルマタン硫酸からなる（上に記載し定義されように）．本技術分野の熟練者には本開示から自明の別の好ましい試剤としてはＤＴＰＡ，およびＤＯＴＡのアルギニンおよびヒスチジン塩基性誘導体また各種テキサフィリン，サフィリン，ポルフィン，ポルフィリン，ＥＨＰＧが包含される．解像力によりＭＲＩへの適用に最も好ましい試剤はそれらのＧｄ（III）およびＦｅ（III）金属イオンからなり，また好ましくは上に開示したようなそれらの別の常磁性金属イオンキレートからなる．本発明における使用が最も好ましい担体物質は，ウロン酸（Ｌ−イズロン酸）含量に富み，その主要モノ硫酸化ジサッカライド配列（Ido-GalNAc4SO₃）に加え過剰硫酸化サッカライド配列(IdoA2SO₃-GalNAc4SO₃)と（IdoAGalNAc4,6SO₃）を包含する選択的に高度の硫酸化を有するオリゴサッカライド配列によって特徴づけられる新しいデルマタン硫酸のクラスであり（ジサッカライド分析ならびに¹ Ｈおよび¹³Ｃ磁性共鳴スペクトルの独特な相関によって評価），ヘパリン補因子 II活性が好ましくは２２０単位／mg以上と高く，しかしＸａ因子および抗トロンビンIII活性ならびに総抗凝固活性は低く（米局抗凝固アッセイによる標準ヘパリンの好ましくは１０％未満，最も好ましくは５％未満），ＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比は好ましくは０．７：１〜１．８：１の範囲，最も好ましくは０．９：１〜１．５：１と低く，硫黄含量は好ましくは９％未満，最も好ましくは４〜７％の範囲と低く，好ましくは最頻値分子量，１０，０００〜２３，０００ダルトン，最も好ましくは１３，０００〜１９，０００ダルトン−この分子量範囲の低値側は一般に静脈内投与後に正常臓器の血管コンパートメント内に担体が高度に貯留するために重要であり，この分子量範囲の高値側は一般に効率的な疾患部位への結合および取り込みに重要であり，一方さらに，注射後の早期の時間に低い血液造影バックグランドおよび低い体内残留を急速に達成するために重要な腎臓経路による極めて迅速な血液クリアランスを与える値である−を有する．前段に述べたデルマタン硫酸は，一例においては，以下の方法：（ａ）ウシ粘膜，ブタ皮膚または肺臓を含む動物の臓器または組織，この使用の場合には好ましくはウシ粘膜を粉砕し，ｐＨ５〜７において可能な限り短時間，パパインを包含するタンパク分解酵素で処理してタンパク質を除去し，（ｂ）粒子サイズ範囲０．３〜１．３mmの四級アンモニウム基で官能化された巨大網状スチレン−ジビニルベンゼンマトリックスを包含する強アニオン性（塩基性）交換樹脂抗体を通過させ，（ｃ）硫酸化ポリサッカライドをモル濃度０．７〜２．０の中性塩溶液で溶出させ，（ｄ）デルマタン硫酸を銅，鉄およびカルシウムを含む２価または３価の金属，好ましくは銅の低溶解性塩として結晶化させ，（ｅ）カチオン交換樹脂たとえばchelex １００型（Bio-Rad １４３−５８５２）によってナトリウム塩に再変換し，四級アンモニウム基で官能化された強塩基性アニオン交換樹脂（通常，樹脂の粒子サイズは１０マイクロメーター以下，架橋連鎖２〜８％）上クロマトグラフィーによって過剰硫酸化オリゴサッカライド配列を選択的に濃縮し，（ｆ）溶出液を逆浸透によって濃縮し，ついで（ｇ）得られた液体を凍結乾燥して微細な白色粉末を形成させる方法で調製できる．いかなる意味においても本発明の範囲を限定する意図ではないが，上記デルマタン種の一例は，文献に記載されているように，これらのデルマタン硫酸（サルフェート）の亜種を構成する［Mascellaniら，ＷＯ９３／０５０７４（１９９３），引用により本明細書に導入する；Mascellaniら（１９９３），引用により本明細書に導入する］．デルマタン硫酸のこの亜種の最も好ましい例の一つは，Opocrin S.P.A.，Via Pacino tti,３，Ｉ−４１０４０ Corlo Di Rormigine，Italyによって製造され供給されている４３５型ウシ粘膜デルマタン硫酸（サルフェート）である．それは，電荷抑制モルキュラーシーブクロマトグラフィーとＵＶ吸収分析によって測定して最頻値分子量約１７，５００〜１８，０００ダルトン，硫黄含量約６．２〜６．６％を有する．これらのデルマタン硫酸においては，その濃縮が高ヘパリン補因子 II活性と相関する過剰硫酸化サッカライド配列，(IdoA2SO₃-GalNAc4SO₃)および（IdoAGalNAc4,6SO₃）を含む高度の硫酸化を有するある種のオリゴサッカライド配列が選択的に濃縮されているにもかかわらず，上記の低い硫黄含量が生じる．上記２段における記載中において，（ａ）ウロン酸（Ｌ−イズロン酸）含量と前述の２，４−ジ硫酸化ジサッカライド配列の濃縮とともに（ｂ）好ましい分子量範囲，１０，０００〜２３，０００，最も好ましくは１３，０００〜１９，０００ダルトン，および（ｃ）低い総硫黄含量，通常４．５〜７重量％の範囲に相当する低いＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比は，驚くべき予期されなかった利点：（ａ）たとえば腫瘍内皮，腫瘍細胞外マトリックスおよび腫瘍細胞への，迅速な疾患部位結合，局在，取り込みおよび深部浸透；および（ｂ）誘発される血小板凝集，抗凝固および出血−これらはさらに高度の硫酸化および／または長い鎖長（さらに高い分子量）の担体，たとえば硫酸化，過剰硫酸化およびポリ硫酸化グリコサミノグリカンならびに天然および合成の硫酸化，過剰硫酸化およびポリ硫酸化ポリサッカライドおよびサルファトイド−さらに詳しくは硫黄含量１０％以上，米局ヘパリン型抗凝固活性１５〜１４５米局単位／mgまたはそれ以上の担体によって特徴的に誘発される−の低い副作用に相関する．好ましいデルマタン硫酸（上述）および最も好ましい新規な特殊デルマタン硫酸亜種（上述の特殊な方法によって調製）は，部位選択性診断薬または薬物の担体として使用した場合に，以前の古いすべてのデルマタン硫酸，すなわち（ａ）上述の特殊な構造をもたないこと，（ｂ）上述の単離および精製過程により製造されないこと，（ｃ）上述の好ましいオリゴサッカライド配列および選択的な硫酸化の匹敵する濃縮を与える別方法によって製造されないデルマタン硫酸とは明瞭に区別される．これらの好ましいデルマタン硫酸はまた，上述のように使用した場合，それらは構造的に異なるのみでなく，正常内皮に結合し，様々な程度の生体内代謝を受け，迅速かつ完全な血液および生体クリアランスを妨害する［Da wes ら（１９８９），引用により本明細書に導入する］ヘパリン，ヘパラン硫酸およびヘパリノイドの夾雑を実質的に含まない点で以前の古いすべてのデルマタン硫酸と明瞭に区別される．上述の新規な特殊デルマタン硫酸は，部位選択性診断約または薬物の担体として使用した場合，非デルマタン硫酸クラスのグリコサミノグリカン，すなわち（ａ）コンドロイチン硫酸ＡおよびＣ−これらはデルマタン硫酸のウロン酸（Ｌ−イズロン酸）糖をもたない［Waltonら，米国特許４，４８９，０６５；Maeda ら（１９９３），引用により両者を本明細書に導入する］，（ｂ）ヘパリン−これはウロン酸（Ｌ−イズロン酸）構造をもつが，高い抗凝固活性および正常内皮への高い結合性を有する［Cremersら（１９９４），Kal ishevskaya ら（１９８８），引用により両者を本明細書に導入する］，（ｃ）ヒアルロン酸−これは硫酸化されていないグリコサミノグリカンである，（ｄ）ポリ硫酸化グリコサミノグリカンおよび過剰硫酸化サルファトイドたとえばペントサンポリサルフェートを含む細菌のポリサルフェート−これらはすべて硫黄含量１０％以上であり，これがポリサルフェート誘発血小板凝集および細胞膜の変性／溶解による重大な生体内安全性の問題を引き起こし，またこのような細胞溶解の補因子として働き，これが正常細胞ならびに腫瘍細胞および他の病的細胞／臓器に，たとえばコンドロイチンポリサルフェートにより腫瘍細胞の直接毒性補因子「開口」としてとくに記載されている影響を生じ，その結果，コンドロイチンポリサルフェート誘発膜障害を起こす［Landsberger （１９９４）］点で非デルマタン硫酸クラスのグリコサミノグリカンとはより明瞭に区別されることは本技術分野の熟練者には自明であろう．すなわち，本発明における好ましい新規の特殊なデルマタンはそれ自体は重大な直接的細胞または膜障害を生じないデルマタンであり，疾患部位内皮への迅速な（３〜７分）選択性結合，迅速な（１０〜５分）内皮細胞輸送，腫瘍取り込み，深部マトリックス透過および結合した診断約または薬物の腫瘍細胞インターナリゼーションを誘発し，デルマタン硫酸事態またはその単独が中間標的細胞（たとえば内皮）または最終標的細胞（たとえば腫瘍）を障害することはない．この新規の特殊なデルマタン硫酸は，コンドロイチン硫酸ＡおよびＣ型とは，その高いＬ−イズロン酸（ウロン酸）含量に対してコンドロイチン硫酸ＡおよびＣでは比較的低い含量か全く存在しないことで，またその比較的低い最頻値分子量，通常２５，０００ダルトン未満に対して，コンドロイチン硫酸ＡおよびＣでは最頻値分子量は２５，０００ダルトン以上であり，明瞭に区別される．新規の特殊なデルマタン硫酸はその比較的に低い分子量により，結合または会合活性物質のための担体物質として使用された場合に，少なくとも３つの驚くべきまた予期できなかった利点がある．（ａ）担体および活性成分の主として腎臓経路による極めて迅速な血中クリアランス，血中ｔ_1/2は通常約２０〜１２０で用量増大の関数として極めて徐々に増加する，（ｂ）生体内の代謝は微小ないし皆無である−標準的なヘパリン，ヘパラン硫酸ならびにコンドロイチン硫酸ＡおよびＣと大きく異なる−担体材料のインビボ沈着および貯留の残留は極めて低い，（ｃ）疾患部位内皮を横切る最大の，迅速な血管への出現−最大の疾患部位および腫瘍へのアクセスのためたとえば内皮増殖因子／血管透過性因子（ＶＥＧＦ／ＶＰＦ）によって誘発および「透過化」された内皮を含む，結合または会合活性物質の取り込みおよび腫瘍細胞のインターナリゼーション．一方，この新規なクラスのデルマタン硫酸にはヘパリン型の抗凝固活性および出血の副作用はなく，以前には知られておらず，本技術分野の熟練者にも予期できなかった抗血栓性の付与に有用であることが認められ，この新規な特殊のクラスのデルマタン硫酸には，非共有結合または共有結合で結合したアミンまたは化学的に塩基性のキレーターもしくは金属キレートの極めて強力かつ効果的なインビボ担体として作用する驚くべきまた予期できなかった利点が付与される．さらに，この担体は活性成分を，非透過化および「透過化」血管内皮を通して腫瘍を含む疾患部位に選択的に局在させ，同時に非標的化担体および活性成分を主として腎臓経路での迅速なクリアランスを用量を増加させても極めて徐々にのみ増大する様式で促進する．これにより，副作用の低下と生体内貯留の現象のみでなく付加的な利点，（ａ）会合した常磁性金属キレートによる生体内造影の増強の目的で静脈内投与後の極めて初期における極めて低い造影バックグランド，および（ｂ）許容される安全性での顕著な用量上昇が可能という利点が付与される．これらの驚くべきまた予期できなかった利点は生体磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）の常磁性増強に特に有用である．これは造影装置および検出方法の感度が低く，したがって常磁性試剤の十分な局所部位濃度を沈着させためには，高静脈内用量の注射（約５０〜１００マイクロモル）が必要だからである．これは，好ましくは活性成分の担体への結合に無価方法を使用できて，担体の単位量に大量の活性成分を結合させることができる，新規な特殊のデルマタン硫酸を含めた担体材料の使用の利点が強調される．単位の担体に結合できる活性成分の量は好ましくは７０％以上［（活性成分＋担体）に対する活性成分の重量％］であるが，抗体系を含めた共有結合で結合した活性成分−ポリマー系の大部分では通常７〜１２％である．すなわち，新規な特殊のデルマタン硫酸の自己集合型，非共有結合製剤（ならびに共有結合製剤）特性は，付加的な驚くべきまた予期できなかった利点として，常磁性キレートのインビボ有効用量を投与し選択的に局在化させるのに必要なデルマタン硫酸の量を最小限にすることを可能にする．本発明は，固形腫瘍および心脈管系梗塞の増感のための新規なＭＲＩ造影剤の製造および利用を包含する．造影剤はカチオン性または塩基性の常磁性金属錯体が強酸性の好ましくはグリコサミノグリカンを包含するポリ硫酸化担体と会合して構成される．任意の酸性グリコサミノグリカンが使用できることは，本技術分野の熟練者には自明であろう．以下に記載する対合イオン系中では，グリコサミノグリカンとフェリオキサミン，グリコサミノグリカンとＤＴＰＡ−リジン，グリコサミノグリカンとＮ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡ，最も好ましくは上述の新規な特殊の亜種のデルマタン硫酸とＮ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡから構成される系が最も注目に値する．別の診断用および治療用組成物および適用が上述の場合と実質的に同様の組成物を用いて実行できることが想定される，たとえば，別の金属イオンが特定部位における金属イオン交換の目的でキレート化することができる．したがって，本発明の製剤には，マンガン，アルミニウム，ゲルマニウム，亜鉛，コバルト，カルシウム，白金等の金属イオンを含有させるかそれによって構成することができる．また，放射線および放射性核種療法の目的では，ホウ素，コバルト，ルビジウム，イットリウム，テクネチウム，ルテニウム，レニウム，インジウム，イリジウム，タリウム，サマリウム等の等の金属イオンを含有させるかそれによって構成することができる．とくに，⁵⁹Ｆｅおよび⁶⁷Ｇａ［Hashimoto ら（１９８３）；Janokiら（１９８３）］は腫瘍，血栓の核医学的造影の目的，および他の生物医学的造影の目的で，非放射性金属イオンの放射性核種型としての置換することができる．以上の考察は本発明の腫瘍な態様およびそれらのインビボ診断的および治療的適用における使用に特定して行われたが，以上の記述から本技術分野の熟練者には付加的な関連の組成物および使用方法が自明であろう．それらは本発明に包含されるものである．以下の実施例は本発明の好ましい実施態様の提示を包含する．以下の実施例中に開示された技術は本発明者らによって発見され，本発明の実施に際して良好に機能した技術を示すものであり，したがってその実施の好ましい様式を構成するものと考えられる．しかしながら，本技術分野の熟練者には本開示に照らせば，開示された特定の実施態様に多くの改変が可能であり，本発明の精神および範囲から逸脱することなく同じまたは類似の結果をさらに得ることが可能であると考えられる．以下の実施例は，とくに指定のない限り，デルマタン硫酸ならびにネイティブなデルマタン硫酸についての言及はすべて，全分子の全体的過剰硫酸化（超硫酸化）ではなく選択されたオリゴサッカライド配列のみが過剰硫酸化された新しい特定のクラスの（本明細書に記載され定義されたような）デルマタン硫酸を意味しとくに，Opocrin S.P.A.，Via Pacinotti,３，Ｉ−４１０４０ Corlo Di Form igine，Italyにより供給される新しい特殊な「４３５型」デルマタン硫酸を意味する．例１デフェロキサミン遊離塩基の調製およびフェリオキサミンの製剤における使用デフェロキサミンを塩基性金属キレーターとして利用する最終製剤中に存在する残留塩含量を最小にするため，場合により，デフェロキサミンの遊離塩基が使用される．これらの例では，デフェロキサミンは塩水溶液から既報［Ramirez ら（１９７３），引用により本明細書に導入される］のように２ＮＫＨＣＯ₃の添加によって沈殿させる．デフェロキサミンの飽和溶液（３２０mg／mL，２５℃ ）はデフェロキサミンメシレート塩を１．２５mLの医薬用水に溶解して調製する．この溶液を氷浴中で４℃に冷却し，２．５mLの２．０ＮＫＨＣＯ₃を加える．ガラス容器をステンレス鋼のスパーテルで擦って沈殿を開始させる．沈殿を遠心分離によって集め，氷冷水で反復洗浄し，ろ過する．粗製のデフェロキサミン遊離塩基を熱メタノールから連続再結晶して精製する．得られた純粋なデフェロキサミン遊離塩基を窒素気流下に乾燥する．調製されたデフェロキサミンの赤外スペクトルは上記引例の場合と一致する．フェリオキサミンは，デフェロキサミンに，鉄（III）とデフェロキサミン遊離塩基の化学量論モル比で塩化第二鉄を添加して形成される．これによりキレート化された鉄が得られ，残留するメシレートおよび塩素イオンは最小になる．例２フェリオキサミン−鉄（III）キレートの調製デフェロキサミンの鉄（III）キレートのバッチ量は以下のように調製される．すなわち，デフェロキサミンメシレート（メタンスルホネート）(Ciba-Geigy Limited，Basel，Switzerland)３９０ｇを医薬用水に溶解する．別法として，デフェロキサミンのクロリド塩も使用できる．Ｆｅ（Ｏ）ＯＨの形態の鉄イオンの高度に精製されたスラリー［Ｆｅ（Ｏ）ＯＨ粒子１３．４４％ w/v，Noah Technologies Corporation，San Antonio，Texas］３７２．９ｇを１８９９mLの水に懸濁し，絶えず攪拌しながらデフェロキサミンに添加する．得られた懸濁液を１〜24時間60℃に加熱し，ｐＨは０．１０ＮＮａＯＨを加え６．５〜７．９に周期的に調整する．フェリオキサミン錯体の形成は溶液への強い深赤褐色の発現によって明らかである．鉄（III）とデフェロキサミンの化学量論的キレーションは製造中の４３０nmにおける紫外−可視吸収スペクトルを化学量論的にキレート化されたフェリオキサミン標品と比較して確認する．バッチ溶液を室温に冷却し，４５００rpm（約２５００ｇ）で１５分間遠心分離して未反応または凝集Ｆｅ（Ｏ）ＯＨを除去する．この最終バッチ容量は所望のように，通常は最終容量２６００mLに調整される．残った痕跡量の未反応Ｆｅ（Ｏ）ＯＨを除去し同時に溶液を滅菌するため，上清をクラス１００層流フッド中０．２２μm Millipor e ＧＶ−型フィルターを通過させる．得られたバッチは，ついで使用するまで（以下の例参照），耐圧器に入れ密閉したガラス容器に４℃で保存する．フェリオキサミン（ＤＦｅ）の最終濃度は再度４３０nmにおける紫外−可視吸収スペクトル測定法によって測定する．鉄（III）のＩＣＰ−ＡＡ測定値に基づいてＲ１＝１．６(mmol.sec)^-1である．例３塩基性アミンキレーター：ジエチレントリアミン五酢酸−リジン（ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ）の調製ＤＴＰＡ５００mgを２０mLの医薬用水に溶解し，６０℃に加熱する．Ｌ−リジン塩酸塩粉末９３１mgを溶解するまで絶えず攪拌しながら添加する．別法として，リジンのεアミノ基におけるカルボジイミド中間体の反応（下記参照）を防止するために，Ｎ−ε−ｔ−Boc−Ｌ−リジンを使用することもできる．この場合はジメチルホルムアミド：水(５０：５０，w/v)に溶解する．溶液のｐＨは，０．１ＮＨＣｌを添加して４．７５に調整する．水溶性カルボジイミド，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）７３２．５ｇを２mLの水に溶解し，そのｐＨも上述のように調整する．このＥＤＣ溶液を，ＤＴＰＡ＋リジン混合溶液（上述）に，絶えず攪拌しｐＨを周期的に４．７５に調整しながら，２２℃で１時間を要して滴下して加え，反応が完結するまで約２時間，反応を進行させる．る．Ｎ−ε−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−リジンを使用した場合は（上記参照），Ｎ−ε−ｔ−Ｂｏｃ基をこの段階で，塩酸でｐＨ１．０〜２．０の酸性にして３０〜６０分攪拌し，加水分解する．ｐＨを必要に応じて４．７５に再調整し，反応溶液をロータリーエバポレーター中６０℃で 5mlに濃縮し，ＤＴＰＡ−リジン（ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ）誘導体を３容量のエタノールを加えて沈澱させる．注：これらの条件下では，使用したエタノール：水比ですべての個々の基質（上述）の溶解度は維持される．得られた沈殿は遠心分離２，５００×ｇで収穫し，エタノールで洗浄し，再遠心分離し，乾燥窒素気流上で乾燥する．リジンのＤＴＰＡへの共有結合は赤外（ＩＲ）スペクトルで確認する．得られた生成物はかすかに黄色を呈する．例４ＤＴＰＡ−Ｌｙｓのガドリニウム（III）金属キレートガドリニウム：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ［Ｇｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ］の製造ＤＴＰＡ−Ｌｙｓのガドリニウム（III）キレート，すなわち，Ｇｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓは既知量のＤＴＰＡ−Ｌｙｓを水に溶解し，必要に応じて０．１〜１．０Ｍに調製した塩化ガドリニウム保存溶液を化学量論量のＧｄ（III）が添加されるまで加える．１．０ＮＮａＯＨを加えてｐＨを７．０に調整する．別法として酸化ガドリニウムを加え，反応混合物を２４時間攪拌してもよい．酸化ガドリニウムを使用した場合は，１．０ＮＮａＯＨによる中和は必要ない．標準キシレノール橙滴定法［Lyleら（１９６３）］を用いて各バッチ毎にＬｙｓ−ＤＴＰＡ接合体を前滴定し，化学量論量のＧｄ（III）の添加のために最終キレーション生成物をチェックし，ガドリニウムの定量的ＩＣＰ原子吸収スペクトル分光法でさらに確認する．得られたＧｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓはエタノール（水１容量に対して３容量）を添加して沈殿させ，沈殿は遠心分離（上に同じ）で収穫し，アセトンで洗浄して遠心分離し，乾燥窒素気流上で乾燥する．得られた生成物は例３に記録したのと同じかすかな黄色を保持する．生成物水溶液のＲ１はＧｄ（III）のＩＣＰ−ＡＡ測定に基づいて４．２（mmol.sec）^-2である．例５デルマタン硫酸担体結合フェリオキサミンおよび脱重合デルマタン硫酸結合フェリオキサミンの対合イオン試剤の調製フェリオキサミン：デルマタン硫酸対合イオン試剤は，フェリオキサミンの水溶液（上記例２参照）と（ａ）最頻値ＭＷ約５，０００〜４５，０００のダルトンのデルマタン硫酸（Opocrin S.P.A.，Modena，Italy,４３５型，ウシ粘膜より，最頻値ＭＷ＝１８，０００ダルトン；およびScientific Protein Laboratorie s，Waunake，Wisconsin，ブタ粘膜より，最頻値ＭＷ＝１９，０００ダルトン）または（ｂ）脱重合デルマタン硫酸，最頻値ＭＷ＝約２，０００〜５，０００ダルトン（Opocrin S.P.A.，Modena，Italy,３７０型，ウシ粘膜より，４３５型出発原料から脱硫）のいずれかと適当な比で混合して調製する．フェリオキサミンとデルマタン硫酸の比の範囲はフェリオキサミン：デルマタン硫酸または脱重合デルマタン硫酸の低い１．９９（重量％）とフェリオキサミン：デルマタン硫酸または脱重合デルマタン硫酸の高い３０：７０（重量％）の間で調製する．０．１〜１．０ＮＮａＯＨを用いて，混合物のｐＨを５．５〜８に調整し，混合物は連続して０．５〜７２時間攪拌し，ｐＨを５．５〜８，通常は７．５に再調整する．フェリオキサミン：デルマタン硫酸混合物を０．２２μm のフィルターを通してろ過し，残った不溶性の酸化鉄および水酸化鉄を除去し，液体試剤を無菌にする．無菌試剤は液体として４℃で，または凍結乾燥粉末として（下記参照）保存する．更なる処理は，液体をガラスバイアルに充填し，１２０℃で１５分間オートクレーブで処理して実施する．別法として，更なる処理は，液体をガラスバイアルに充填し，−５０℃で凍結し，凍結乾燥して無菌凍結粉末を得ることにより行う．凍結乾燥バイアルに滅菌水を加えて再構築し，手で１〜５分間振盪すると，そのまま注射できる所望の濃度の再構築液体が得られる．得られた濃度のフェリオキサミンとデルマタン硫酸を，それぞれ標準逆相ＨＰＬＣおよびマクロ分子サイズ排除ＨＰＬＣによって測定し，バイアル中の量を確認する．多重バッチのフェリオキサミン：デルマタン硫酸試剤を製造した．代表的なバッチのインビトロ試験結果は次の通りである．フェリオキサミン：デルマタン硫酸比：７７．５：２２．５(w/w) 試剤の溶解度：５５０mg／ml 水：オクタノール分配：１７，６００（±２，７５０）：１フェリオキサミン濃度：０．１６６ミリモル／ml デルマタン硫酸の濃度：３２mg／ml デルマタン硫酸の分子量：Opocrin ３４５型，ＭＷ＝１８，０００デルマタン硫酸の硫酸／カルボキシレート比：１．０±０．１５フェリオキサミンおよびデルマタン硫酸の純度：公称±１０％ｐＨ：６．５〜７．９粘度：３．８〜４．２ポイズ浸透圧：４７５〜５２５ｍＯsm Ｒ１：６．５〜７．９(mmol.sec)^-1 オーバーサイズ粒子：小容量非経口剤米局指導値内抗凝固活性：４．５U.S.P.単位／mg（第１２改正米局アッセイ）デルマタン硫酸へのフェリオキサミン活性成分の結合：少なくとも９２％残留（２００容に対して３時間透析，５００ダルトン分子量カットオフ）加速条件下でのフェリオキサミン：デルマタン硫酸試剤のインビトロ安定性は次の通りである．（ａ）液体型は，前述の物理化学的およびＨＰＬＣパラメーターにより４℃，２２℃および４０℃で６カ月以上安定であり，６０℃，２〜６カ月でわずかに不安定，８０℃では１〜３日以内で有意に分解．（ｂ）液体型は上述のようにオートクレーブ処理が可能で，フェリオキサミンの分解は３％未満である．（ｃ）凍結乾燥型はオーバーサイズパラメーターを含む全パラメーター（上掲）について安定で，多年の保存期間にわたって安定であることが明らかである．例６ヘパリン結合フェリオキサミンの対合イオン試剤の調製フェリオキサミン：デルマタン硫酸対合イオン試剤は，フェリオキサミンの水溶液（上記例５参照）と（ａ）最頻値ＭＷ約８，０００ダルトンのウシ肺臓ヘパリンおよび（ｂ）最頻値ＭＷ＝約１０，０００〜２０，０００ダルトンのブタヘパリンのいずれかと適当な比で混合して調製される．フェリオキサミンとヘパリンまたはヘパリンフラグメントの比の範囲は，フェリオキサミン：ヘパリンまたはヘパリンフラグメントの低い１．９９（重量／重量％）とフェリオキサミン：フラグメントの高い３０：７０（重量／重量％）の間で調製する．０．１〜１．０ＮＮａＯＨを用いて，混合物のｐＨを５．５〜８に調整し，混合物は連続して０．５〜７２時間攪拌し，ｐＨを５．５〜８に再調整する．このフェリオキサミン：ヘパリン混合物を０．２２μmのフィルターを通してろ過し，残った不溶性の鉄酸化物および水酸化物を除去し，液体試剤を無菌にする．無菌試剤は４℃ で保存する．指示に従い，更なる処理は無菌の液体をガラスバイアルに充填し，凍結し凍結乾燥して，試剤を無菌凍結粉末にする．凍結乾燥バイアルに滅菌水を加え，手で１〜５分間振盪すると，そのまま注射できる所望の濃度の再構築液体が得られる．得られた濃度のフェリオキサミンとヘパリンを，それぞれ，標準逆相ＨＰＬＣおよびマクロ分子サイズ排除ＨＰＬＣによって測定し，バイアル中の量を確認する．例７グリシン誘導体化による非抗凝固ヘパリン担体の調製ヘパリンの抗凝固活性は，報告されているようにそのカルボキシレート基をグリシン残基で誘導体化することによって活性をほとんど無視できるまでに低下させることができる[Danishefsky ら（１９７１）；Danishefsky ら（１９７２）] .この非抗凝固性ヘパリン(Nac-heparin)はついで，改良グリコサミノグリカン担体として使用することができる．グリシン接合の現時点での一方法によれば，ヘパリン０．７５ｇを１００mlのビーカーに秤量し，２５mlの医薬用水に溶解する．グリシン０．７５ｇを加え，得られた溶液のｐＨを，０．１０ＮＨＣｌにより４．７５に調整する．１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）０．７５ｇを別の容器に秤量し，最小量の水を加えて可溶化し，０．１０ＮＨＣｌによりｐＨを４．７５に調整する．ＥＤＣ溶液をのアリコートをグリシン−グリコサミノグリカンの混合物に１時間を要して加える．ＥＤＣの各添加後，ｐＨを４．７５に調整してそれを維持させる．全部のＥＤＣの添加後に，反応をさらに２時間，絶えず攪拌し，周期的にｐＨを調整しながら進行させる．グリシン−ヘパリン接合体（Ｇｌｙ−ＨＥＰ）をついで３容量の無水エタノールを加えて沈殿させる．沈殿は遠心分離４，５００rpm （約２５００×ｇ）を１５分間行って集め．２０mlのアリコートのエタノールで３回洗浄し，再遠心分離する．例８グリコサミノグリカン，修飾および誘導体化グリコサミノグリカン：ヘパラン硫酸，非抗凝固ヘパリン，過剰硫酸化デルマタン硫酸，コンドロイチン硫酸，過剰硫酸化コンドロイチン硫酸，および細菌性サルファトイド，ペントサンポリサルフェートに結合したフェリオキサミンの対合イオン試剤の調製フェリオキサミンと各種のグリコサミノグリカン担体との対合イオン試剤は，フェリオキサミンの水溶液（上記の例５参照）と，以下のグリコサミノグリカン（ａ）ヘパラン硫酸塩，ＭＷ＝８，５００ダルトン，（ｂ）非抗凝固性ヘパリンＳＰＬ，++ＭＷ＝１０，５００ダルトン，（ｃ）過剰硫酸化デルマタン硫酸，ＭＷ＝１０，５００ダルトン，（ｄ）コンドロイチン硫酸，ＭＷ＝２３，４００ダルトン，（ｅ）過剰硫酸化コンドロイチン硫酸，ＭＷ＝１４，０００ダルトン，（ｆ）ペントサンポリサルフェート，ＭＷ＝２，０００ダルトンと適当な比で混合することにより調製する．フェリオキサミンとグリコサミノグリカンおよびサルファトイド担体の比は，スケール因子［(mEqサルフェート／mg上記担体)／(mE qサルフェート／mgウシ肺ヘパリン)］によって調整して［７７．５：２２．５％ (w/w)フェリオキサミン対担体］の荷重効率を与えるように準備する．０．１〜１．０ＮＮａＯＨを用いて，混合物のｐＨを５．５〜８に調整し，混合物は連続して０．５〜７２時間攪拌し，ｐＨを５．５〜８に再調整する．このフェリオキサミン：ヘパリン混合物を０．２２μm のフィルターを通してろ過し，残った不溶性の鉄酸化物および水酸化物を除去し，液体試剤を無菌にする．無菌試剤は４℃で保存する．指示に従い，更なる処理は無菌の液体をガラスバイアルに充填し，ついで凍結し凍結乾燥して，試剤を無菌凍結粉末にする．凍結乾燥バイアルに滅菌水を加え，手で１〜５分間混合すると，そのまま注射できる所望の濃度の再構築液体が得られる．得られた濃度のフェリオキサミンとヘパリンを，それぞれ，標準逆相ＨＰＬＣおよびマクロ分子サイズ排除ＨＰＬＣによって測定し，バイアル中の量を確認する．この適用では製造しなかったが，本実施例の教示を０７／８８０，６６０，０７／８０３，５９５および０７／６４２，０３３の以前の開示と組み合わせると，スクロースオクタサルフェートおよび硫酸化シクロデキストリンを包含するさらに他の酸性サッカライドとケラタン，サルフェートおよびヒアルロネートを包含する他のグリコサミノグリカン，ならびに細菌性サルファトイド，デキストラン硫酸を包含する他のサルファトイドとのフェリオキサミン錯体を同様に製造することができる． ^* ウシ肺臓ヘパリン，mEq SO₃ ^-／ｇ担体＝４．４例９デルマタン硫酸担体にＧｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓが結合した対合イオン試剤の製造Ｇｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ：デルマタン硫酸対合イオン試剤はＧｄ(III) :ＤＴＰＡ−Ｌｙｓの水溶液を，最頻値ＭＷ＝約５，０００〜４５，０００ダルトンのデルマタン硫酸（上記例５に同じ）および，とくにＭＷ＝１８，０００（ Opocrin S.P.A.，Modena，Italy,４３５型）のデルマタン硫酸と混合して，Ｇｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙs活性成分対デルマタン硫酸担体の比７５：２５％（重量／重量％）の最終溶液を形成させることによって調製される．得られた液体の数種の安定な試剤変動はＧｄ（III）：ＤＴＰＡ−Ｌｙｓの濃度０．１６６〜０．４１５ミリモル／ml，デルマタン硫酸の各濃度３３〜８７．５の範囲である．Ｇｄ（III）のＴ１緩和（Ｒ１）＝４．２．例１０塩基性鉄−ポルフィンキレートおよびヘパリンへの対合イオン結合の調製可溶性のテトラ塩基性ポルフィン，５，１０，１５，２０−テトラキス（１− メチル−４−ピリジル）−２１Ｈ−２３−ポルフィン，テトラ−ｐ−トシレート塩として４０mgを３０mgの塩化鉄（II）と２０mlのジメチルホルムアミド中で２時間還流する．鉄の錯化の証拠は赤〜暗緑色の形態に認められる．溶液を蒸発させて除去し，固体生成物を水に溶解する．ｐＨを７．５に調整して過剰の第二鉄イオンを不溶化し，ついで鉄−ポルフィン生成物をろ過する．鉄−ポルフィン錯体の２mg／ml溶液および約１００％の生成物の収率が誘導結合高周波プラズマ原子吸収によって確認される．水中での相当する反応は約70％の収率を与える．この鉄−ポルフィン錯体を，水に溶解したウシ肺臓ヘパリン約８Kdに１：２０〜２０：１（鉄−ポルフィン：ヘパリン）の範囲の比で加える．これにより沈殿のない澄明な溶液が得られる．分子量カットオフ３．５〜１２Kdのバッグを用いて水に対し，１６時間透析する．鉄−ポルフィン単独はほぼ完全に透析される．ＵＶ−可視分光分析滴定によれば最大結合はモル比１８：１（鉄−ポルフィン：ヘパリン）で起こる．用いられたウシ肺臓ヘパリンはモルあたり（またヘパリン鎖あたり）約１８の強酸性（サルフェート）基をもつことがわかっているので，これらの結果はヘパリンのサルフェート基への塩基性テトラアミンポルフィンの強いイオン性相互作用と安定な（透析に）結合を示している．例１１塩基性トリエチレンテトラアミン−鉄キレートのヘパリンおよびスクロースオクタサルフェートへの対合イオン結合の調製トリエチレンテトラアミンと鉄（III）の可溶性錯体は，１．０ｇのトリエチレンテトラアミン二塩酸塩(Syprine^TM)（Merck，West Point,ＰＡ）を水に溶解して酸性条件下（ｐＨ＝２）に１：１のモル比で塩化鉄を加えて澄明な黄色溶液を得ることによって製造される．０．１ＮＮａＯＨを用いてｐＨを６．８に調整すると赤色の溶液が得られ，鉄の錯化が指示される．この溶液には羽毛状の赤色の沈殿が生じ，鉄−トリエチレンテトラアミン錯体の分子間凝集を示している．（ａ）この得られた錯体の水分散液にウシ肺臓ヘパリンを加え，最終の錯体とヘパリンの比を９５：５〜５：９５（重量比）とする．６５：３５（錯体：ヘパリン）の比およびヘパリンがこれ以上多いと，ヘパリンは錯体を完全に可溶化する．この明らかな溶解はトリエチレンテトラアミン−鉄とヘパリンの間の対合イオン結合を示している．（ｂ）トリエチレンテトラアミン−鉄錯体の水性分散液に，最終錯体−スクロ −スオクタサルフェート（ＳＯＳ）の比を９５：５〜５：９５（重量比）となるようにＳＯＳを加える．６５：３５（錯体：ＳＯＳ）の比およびＳＯＳがこれ以上多いと，ＳＯＳは分散液をはるかに澄明にし，これはトリエチレンテトラアミン−鉄錯体とＳＯＳの間の対合イオン結合を示している．このＳＯＳ対合イオン系ではヘパリンの場合（上述）に比較して完全な澄明化は認められないが，これは，ヘパリンの場合に比べてＳＯＳ上のサルフェートの密度がはるかに高いことによるものであり，ＳＯＳ系における分子間水素結合の実質的な増加に符合する．直接の例示ではないが，同種系列Ｃ_xＨ_x+yＮ_x-yのポリアミンは鉄（III）とも安定な錯体を形成するが，本発明においてトリエチレンテトラアミン−鉄錯体およびＳＯＳに代えて使用できることが明らかである．デフォルキサミンとグリコサミノグリカン担体の共有結合接合対の調製求電子性アミン基をもつ基質は，報告されているように，酸性担体，酸性サッカライドならびに酸性グリコサミノグリカンの求核性カルボキシレート基に共有結合で接合する試剤である［Danishefsky ら（１９７１）；Danishefsky ら（１９７２）；Janokiら（１９８３），Axen（１９７４），Bartlingら（１９７４），Linら（１９７５）］．これらの引例に記載されたカップリング試剤は求核性攻撃に対してカルボキシレート基を活性化する．機構には，担体上でのカップリング試剤とカルボキシレート残基の反応から生じる活性化中間体の形成が包含される．中間体は通常，アミン官能基によって求核性攻撃を受ける．これにより，安定な共有結合接合体の形成が，通常は活性成分と担体の間のアミド結合を介して生じる．以下の例１２，１３および１４はフェリオキサミン−ヘパリン共有結合接合体の合成を記述する．この場合フェリオキサミンは３種の異なるカップリング試剤によって，ヘパリンと共有結合によって結合される．例１２１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）連結によるフェリオキサミン−ヘパリン共有結合接合体の調製例１で調製したフェリオキサミン水溶液２．０ｇに０．１０ＭＨＣｌを添加してｐＨを４．７５に調整する．ウシ肺臓ヘパリン（Heper-Kabi-Pharmacia，Fr anklin，ＯＨ）０．７５ｇを５．０mlの医薬用水に溶解し，絶えず攪拌しながらフェリオキサミンを添加する．得られた溶液のｐＨを０．１０ＭＨＣｌで４．７５に調整する．水溶性カルボジイミド，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）２ｇをシンチレーションバイアル中に秤量し，最小量の水に溶解し，０．１０ＭＨＣｌでｐＨを４．７５に調整する．ＥＤＣ溶液のアリコートを，フェリオキサミン−ヘパリンの混合物中に１時間を要してピペットで加える．ＥＤＣの各添加後に，０．１０ＭＨＣｌでｐＨを４．７５に維持する．すべてのＥＤＣを添加したのち，絶えず攪拌しながら反応をさらに２時間進行させる．フェリオキサミン−ヘパリン接合体を３容の無水エタノールを加えて沈殿させる．この沈殿を遠心分離４，５００rpm（約２５００×ｇ）を１５分間行って集め，２０mlのアリコートのエタノールで３回洗浄し，遠心分離する．複合体は水に再溶解して３容の無水エタノールで再沈殿させ，遠心分離する．最終生成物を集め，窒素上で乾燥させる．ヘパリンのフェリオキサミン誘導体化は，フェリオキサミンキレートの４３０nmにおけるＵＶ−可視吸収スペクトルおよびサイズ排除ＨＰＬＣクロマトグラフィーによるヘパリン分析によって確認する．例１３Ｅ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノン（ＥＥＤＱ）連結によるフェリオキサミン−ヘパリン共有結合接合体の調製Ｎ₂パージのための導入口および排出口を付した１００mlの三頸丸底フラスコにウシ肺臓ヘパリン（Heper-Kabi-Pharmacia，Franklin，ＯＨ）０．５０ｇを秤量する．絶えず攪拌しながら，無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２０mlを加え，得られた懸濁液を窒素を絶えず通じながら５０℃に加温する．３０モル過剰のＥ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノン（ＥＥＤＱ）約４３６．５mgを加え，得られた懸濁液を５０℃で３時間攪拌する．活性化されたＥＥＤＱ活性化ヘパリンを４，５００rpm（約２５００×ｇ）で１０分間遠心分離する．ペレットを無水ＤＭＦで繰り返し洗浄し，ついでアセトンで３回洗浄する．活性化された中間体は窒素気流下に乾燥させる．例１で調製した鉄錯体７６６．３mgを含有するフェリオキサミン溶液のアリコートを５０mlのビーカーにピペットで取り，無水ＤＭＦで２５mlに希釈する．別の５０mlのビーカーに既知量のＥＥＤＱ活性化ヘパリンを５０mlの無水ＤＭＦ中で絶えず攪拌して懸濁する．フェリオキサミンのＤＭＦ溶液をＥＥＤＱ活性化ヘパリン溶液に５分間を要し，徐々にピペットで加える．得られた懸濁液を４０℃ で３０時間続けて攪拌する．室温に冷却したのち，最終生成物を遠心分離で集め，無水ＤＭＦで３回，アセトンで３回洗浄し，窒素気流下に乾燥する．接合体の形成は例12と同様にして行った．例１４カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）連結によるフェリオキサミン−ヘパリン共有結合接合体の調製ウシ肺臓ヘパリン（Heper-Kabi-Pharmacia，Franklin，ＯＨ）の活性化中間体は３．０ｇのヘパリンを５０mlの三頸丸底フラスコ中に秤量し，２５mlの無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を絶えず攪拌しながら加える．カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）６８１．１mg（ヘパリンに対して１０モル過剰）を別のバイアルに秤量し，２０mlの無水ＤＭＦに溶解する．ＣＤＩのＤＭＦ溶液をＤＭＦ− ヘパリン懸濁液に加え，３０℃で１時間攪拌する．ＣＤＩ−活性化ヘパリンを遠心分離によって集め，アセトンで繰り返し洗浄して，未反応ＣＤＩと残ったＤＭＦを除去すし，窒素下に乾燥する．デフェロキサミン−ヘパリン接合体は５０mlの丸底フラスコ中にＣＤＩ−活性化ヘパリン１．０ｇを秤量し，これを２５mlの無水ＤＭＦ中に懸濁して調製する．例１で調製したデフェロキサミン２５０mgを別の丸底フラスコ中に秤量して２０mlの無水ＤＭＦに溶解する．ＣＤＩ−ヘパリン懸濁液にデフェロキサミンの遊離塩基溶液を徐々に加え，７５℃で１６時間続けて攪拌する．デフェロキサミン −ヘパリン接合体を遠心分離４，５００rpm（約２５００×ｇ）を１５分間行って集め，無水ＤＭＦで繰り返し洗浄し，アセトンで繰り返し洗浄し，窒素下に乾燥する．得られた生成物を水に溶解し，ＵＶ−可視スペクトルでその濃度を測定する．化学量論量のＦｅＣｌ₃水溶液を加え，得られた溶液のｐＨをゆっくり６．５に調整し，２時間攪拌する．深赤褐色の生成物が生じる．このデフェロキサミン−ヘパリン接合体を２，０００ＭＷカットオフのバッグを通して１６０容の水に対して透析して残留する基質および中間体から分離する．残留物を集め，ロータリーエバポレーターで濃縮する．誘導体化の確認は例１２および１３と同様に実施する．例１５ヘパリン−ジエチレントリアミン五酢酸共有結合接合体（ＤＴＰＡ−ヘパリンの製造ＤＴＰＡ−官能化担体は，水性媒体中，ジエチレントリアミン五酢酸二無水物（ｃＤＴＰＡＡ；Calbiochem-Bhering Corp.）と求核性官能基を含有する分子から調製する．ウシ肺臓ヘパリン（Heper-Kabi-Pharmacia，Franklin，ＯＨ）１．５ｇを７５．０mlの０．０５ＭＨＥＰＥＳ緩衝液に溶解し，ｐＨを０．１０ＭＮａＯＨにより７．０に調整する．ｃＤＴＰＡＡ４．５ｇ（ヘパリンに対して約１００モル過剰）を秤量し，２０等分（２２５mg）する．ｃＤＴＰＡＡのアリコートを，ヘパリン溶液に３〜５分毎に加えて，全ｃＤＴＰＡＡを添加する．ｃＤＴＰＡＡの添加時を通じて絶えず溶液のｐＨをモニタリングし，０．１０ＭＮａＯＨでｐＨを７．０に維持する．ｃＤＴＰＡＡの最後のアリコートを添加したのち，溶液をさらに３０分間攪拌する．ＤＴＰＡ−ヘパリン溶液を１，０００ＭＷバッグを通して１５０容に対して透析して非接合ＤＴＰＡを除去する．得られた接合体は３７℃で窒素下に蒸発させて濃縮し，４℃で保存する．例１６ＤＴＰＡ−ヘパリン共有結合接合体のガドリニウム（III）および鉄（III）キレートの調製例１５のＤＴＰＡ−ヘパリン接合体をさらにガドリニウム（III）または鉄（I II）とＤＴＰＡ基の常磁性金属キレートの形態で調製する．必要用量のＤＴＰＡ −ヘパリンを１２５mlのエルレンマイヤーフラスコにピペットで取り，１．５〜１０モル過剰の常磁性金属イオンオキシドをＧｄ₂Ｏ₃またはＦｅ（Ｏ）ＯＨとして加え，３７℃で２４〜３６時間攪拌して，ＤＴＰＡ基のも完全な占拠に十分な金属オキシドの可溶化が行われる．残った金属オキシドは４５００rpm（約２５００×ｇ）で遠心分離によって沈殿させ，生成物を Millipore０．２２μｍＧＶ −型フィルターでろ過し，１５０容に対して透析して未反応金属オキシドから分離する．キレート化金属イオンとヘパリンの濃度はそれぞれ誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）およびサイズ排除ＨＰＬＣで測定する．Ｇｄ（III）の場合には，化学量論的キレーションは標準キシレノール橙滴定によっても確認される［Lyleら（１９６３）］．例１７フェリオキサミン：デルマタン硫酸４３５型の毒性試験急性静注毒性試験は雄性および雌性ラットならびに雄性および雌性イヌを用いて１４日回復および剖検を行う．標準の０．０７５ミリモル／kg／分の静注速度では有意な全身性兆候は有効造影用量０．１５５ミリモル／kgの５〜１２．５倍の投与後にのみ認められる．ＬＤ₅₀は４．５ミリモル／kgよりはるかに大きく，この値は尾静脈注入法の技術的観点からの限界である．この速度で一部のラットは不都合な作用なく１０ミリモル／kgの注入が可能である．静注速度を０．０８０ミリモル／kgに故意に加速するとラットに死亡が認められ，ＬＤ₅₀は２．５〜３．０ミリモル／kgとなる．終了時の剖検では，２．２，３．０および４．５ミリモル／kg（各用量レベルにつき雄でｎ＝５，雌でｎ＝６）静注後いずれのラットにも異常は認められない．ピラミッド急性静注毒性試験はイヌにおけるプロトコール試験とし，注入速度は０．０１２ミリモル／kg，用量は０．５，１．２および２．２５に上昇させていく．急性の低血圧症候群が生じるが，軽度で可逆性である．死亡例はなく，終了時の剖検にも異常はない（雄ｎ＝２，雌ｎ＝２，いずれの動物も３つの用量レベルを投与される．休止間隔７２時間）．例１８フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択性造影剤：同種移植 Fisher ３４４雌性ラットにおける授乳時乳腺癌のＭＲＩ造影および特殊な組織化学的試験との相関図２Ａ，図２Ｂ，図３Ａ，図３Ｂ，図４Ａ，図４Ｂ，図４Ｃおよび図４Ｄに示すように，Ｔ１−強調ＭＲＩ造影（ＴＲ／ＴＥ＝８００／４５および５５０／２３）を先に同系の乳腺癌を套管針で肝臓に接種して造影の時点で腫瘍の直径が１．０〜２．５cmであるFisher３４４雌性ラットに，フェリオキサミン：デルマタン硫酸４３５型選択的常磁性造影剤（例５）を，フェリオキサの用量０．１５５ミリモル／kgで静脈内注射（i.v.）し，そのi.v.注射前（プレ）および後（ポスト）に１．０および１．５テスラにおいて実施する．腫瘍は標準Ｔ１−強調プレコントラスト映像でははっきり見られない．フェリオキサミン：デルマタン硫酸造影剤の投与後，腫瘍は（ａ）早期の注射後時間（７分）で急速に著しく増強されて（図２Ａ−Ｂ）；（ｂ）周囲の肝臓に対して極めてシャープな腫瘍の境界が表示され（図２Ａ，図２Ｂおよび図４Ａ，図４Ｂ，図４Ｃおよび図４Ｄ），腫瘍壊死の濃厚な中央部領域が不連続に描き出され（図２Ａ，図２Ｂ）（腫瘍の灌流および異なる極めて小さい解剖学的亜領域内での空間的解像および評価機能を可能にする）；（ｃ）６４注射後分（ＭＰＩ）よりも長く持続するコントラストを示し（図４Ａ，図４Ｂ，図４Ｃ，図４Ｄ，ＭＲＩ像；図５，定量的関心領域，ＲＯＩ分析），それとともに，長期の造影間隔後にも極めて良好に画された腫瘍境界が持続する．これらのＭＲＩ造影の，７ＭＰＩ腫瘍の新鮮な切片のマイクロ波増強鉄染色との相関は，フェリオキサミン活性成分の腫瘍部位局在はそれが担体に結合（非共有結合的）している場合にのみ生じ（図６Ａおよび図７Ａ），遊離型（活性部分単独）で投与された場合には起こらない（図３Ａ，図３Ｂ）．図８Ａ，図８Ｂおよび図８Ｃに認められるように，肝臓腫瘍の肺転移は，早期の造影後間隔において極めて小さい２−mm〜３−mmの結節が迅速に高感度に増強され，肺部位でも腫瘍のこの増強も長期に高感度で維持され，正常肺に対し極めてシャープな腫瘍境界が保持される．図８Ａ，図８Ｂおよび図８Ｃにに見られる維持間隔は生体臓器部位において通常報告されているＧｄ：ＤＴＰＡジメグルミンの場合よりはるかに長い．例１９フェリオキサミン：デルマタン硫酸選択性造影剤：同種移植Cpenhagen ラットにおける前立腺ＡＴ−１腺癌のＭＲＩ造影Ｇｄ（III）ＤＴＰＡとの比較図９Ａ，図９Ｂ，図９Ｃ，図９Ｄ，図９Ｅおよび図１０Ａ，図１０Ｂ，図１０Ｃ，図１０Ｄおよび図１０Ｅに示すように，Ｔ１−強調ＭＲＩ造影（ＴＲ／ＴＥ＝２５０／８）を先に作成した皮膚嚢胞内に同系ＡＴ−１前立腺腺癌を接種して造影の時点で腫瘍の直径が１．０〜２．５cmであるCopenhagenラット［Hahnら（１９９３）］に，例２および例５のように製造されたフェリオキサミン：デルマタン硫酸，４３５型選択性常磁性造影剤の０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）用量での静脈内注射（i.v.）（図９Ａ，図９Ｂ，図９Ｃ，図９Ｄ，図９Ｅ）ならびに比較のためにガドリニウムＤＴＰＡジメグルミンの０．１５５ミリモル／kg のＧｄ（III）用量でのi.v.注射（図１０Ａ，図１０Ｂ，図１０Ｃ，図１０Ｄ，図１０Ｅ）の前（プレ）および後（ポスト）に４．７テスラにおいて実施する．フェリオキサミン：デルマタン硫酸は腫瘍の外縁部に迅速な大きな増強を生じ，また腫瘍血管系の大部分をもつ腫瘍肉茎から扇状に延びる血管列にも迅速な大きな増強を生じる．Ｇｄ：ＤＴＰＡジメグルミン投与後には，比較して，早期の造影後間隔でも（７ＭＰＩ）外縁部はよく描写されていない．２０ＭＰＩの腫瘍全体では，著しく早期のコントラストの消退が起こり，一部の試剤は腫瘍中央部の灌流が貧弱な（嚢胞性）領域に隔離される（生体部位の造影に用いられた場合，Ｇｄ：ＤＴＰＡについて典型的に報告されているように）．４０ＭＰＩでは，増強はほぼバックグランドレベルに復帰し，中央部の嚢胞性領域を除いてコントラストの残存はない．例２０フェリオキサミン：デルマタン硫酸による急性イヌ心筋梗塞のＭＲＩ造影の増強図１１Ａ，図１１Ｂ，図１１Ｃおよび図１１Ｄに見られるように，Ｔ１−強調ＭＲＩのＥＣＧ制御心脈管系造影を行う．急性の９０−分心筋梗塞（左前下行冠状動脈結紮による）ついで造影剤注入前約９０分に再灌流したGerman Shepherd イヌにフェリオキサミン：デルマタン硫酸４３５型選択的常磁性造影剤の０．１５５ミリモル／kgの鉄（III）用量で静脈内に急速注入（i.v.）の前（プレ）および後（ポスト）に０．５テスラにおいて実施する．７ＭＰＩ時には，フェリオキサミン：デルマタン硫酸は梗塞域の強力な増強を与え，とくに回復の可能性がある梗塞の辺縁域と推定される梗塞の外方境界部を，不可逆性の中央部梗塞域と推定される中央部のより濃厚な領域とを識別させる．４０ＭＰＩまで，強力な増強が維持され，帯状の境界が存在する．担体を用いないで０．１５５ミリモル／ kgの注射されたフェリオキサミンでは増強は検知されないこれらの試験では，梗塞の大きさおよび位置はＭＲＩ造影直後に行われる二重色素注入法で証明される．各種硫酸化グリコサミノグリカンに結合したフェリオキサミン活性成分によるＭＲＩ腫瘍造影能力低い抗凝固活性，安全性および突出した部位局在化能に基づいて，ある種の別のグリコサミノグリカン担体およびある種の物理学的形態から得られる選択性のＭＲＩ造影剤を，結合フェリオキサミンの担体を介する腫瘍局在化の相対的インビボ効力で比較する．その高度な空間解像性および試剤局在における微妙な定量的差を検出する能力から，例１９のＡＴ−１前立腺腫瘍モデルを用いる．例２２ＤＴＰＡのＮ−メチル−１，３−プロパンジアミン誘導体およびガドリニウム（III）とのキレーション２５０mlの丸底フラスコに１８０mlの無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を加えジエチレントリアミン−五酢酸無水物（ＤＴＰＡ無水物）溶液を調製する．フラスコに側腕滴下ろ斗を装着し，電磁攪拌機を入れる．ＤＭＦを激しく攪拌しながら，５ｇ（１４ミリモル）のＤＴＰＡ無水物（Sigma Chemical Co.）を０．５ｇ部ずつ１時間で加える．得られた懸濁液を６０℃に１５分または溶液が澄明になるまで加温する．フラスコを加熱装置からはずし，溶液が４℃に平衡化するまで氷浴中に置く．ＭＰＤ−ＤＴＰＡ誘導体は１５mlのＤＭＦを１．４６ml（１４ミリモル）のＮ −メチル−１，３−プロパンジアミン（Sigma Chemical Co.）と混合して調製する．側腕滴下ろ斗中のＭＰＤ−ＤＭＦ混合物を冷（４℃）の激しく攪拌したＤＴＰＡ無水物溶液に滴下して加える．懸濁液を室温で一夜攪拌する．ＭＰＤ−ＤＴＰＡ誘導体は，２５００ｇで１０分間遠心分離して集め，アセトン（５×３００ ml）で繰り返し洗浄する．この段階の生成物は濃縮溶液中ではｐＨ３．０を示し，さらに精製するには溶液のｐＨは７．０でなければならない．生成物ＭＰＤ−ＤＴＰＡ誘導体を水に溶解し５ＮＮａＯＨでｐＨを７．０に調製する．生成物を凍結して１６時間乾燥する．凍結乾燥された物質を最小量（４０ml）の温（５０℃）メタノールに１５分間溶解し，室温に冷却し，１０容のアセトンで沈澱させる．沈澱を２５００ｇで１０分間遠心分離して集める．この物質を再び温メタノールに１５分間溶解し，１０容のアセトンで沈澱させ，２５００ｇで遠心分離して集める．沈澱をアセトンで繰り返し洗浄し，窒素下に乾燥し，真空乾燥器に保存する．ＭＰＤ−ＤＴＰＡ接合体の形成は赤外（ＩＲ）スペクトル（図１７Ａ，図１７Ｂ，図１７Ｃ参照）およびＨＰＬＣクロマトグラフィーで確認する．ＨＰＬＣはカチオン交換カラム（Dionex IonPac ＣＳ１４，４×２５０mm，８μｍ，カルボン酸型）を用い移動相はアセトニトリル−水（９９：１）中２０ｍＭメタンスルホン酸，ｐＨ１．８として行い，２２０nmでＵＶで検出する．これにより，よく分離しクロマトグラフィー的に純粋な（純度９９％以上）ピークが得られる．（ａ）ＤＴＰＡ３．７分，（ｂ）Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン（ＭＰＤとＤＴＰＡの２０：１モル比，ＭＰＤのＵＶ吸収は低く検出を要す）８．４分，（ｃ）ＤＴＰＡ（または加水分解されたＤＴＰＡ無水物）とＭＲＤの溶液混合物（モル比１：１）３．７分（ＤＴＰＡのみが検出される．ＭＰＤの吸光係数が低いことによる），および（ｄ）ＭＰＤ−ＤＴＰＡ接合体（モル比１：１）１５．６分．（ｄ）の生成物の純度はＨＰＬＣの吸収（２２０nm）から９３％以上である．Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡ（ＭＰＤ−ＤＴＰＡ）のキレート能は少量のアリコートを，１Ｍ酢酸アンモニア（ｐＨ５．５）緩衝液中０．１ＭのＧｄＣｌ₃５Ｈ₂Ｏで終点の比色指示薬としてキシレノール橙を用いて滴定して測定する．バルクのＭＰＤ−ＤＴＰＡを最小量に水（約３００mg／ml）に溶解し，ｐＨは５ＮＮａＯＨで＜４．０〜７．０に調整する．平均キレート能は約２２％（重量％）で，乾燥キレーターが極めて吸湿性なためわずかに変動する）．例２３ガドリニウム：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸の対合イオン製剤の調製ガドリニウム（Ｇｄ）：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸(新規の特殊４３５型デルマタン硫酸，Opocrin)はＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡとデルマタン硫酸の重量１０：１〜１：１０の範囲にわたって調製し，とくに好ましいモル比の一つ，６０％Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡと４０％デルマタン硫酸(w/w)（＝モル比４３：１）で調製する．これらの対合イオン製剤は所望量のデルマタン硫酸を４００mg ／mlの濃度に溶解し，例２２で調製したＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ中に攪拌しながら溶解することによって調製する．これにより，親水性の完全に澄明な溶液が得られ，レーザー光散乱分析(Nicomp Instrument)により分子の凝集は検出されない．ＧｄＭＰＤ−ＤＴＰＡとデルマタン硫酸の間の強力な対合イオン結合が確認され，透析（５００ＭＷカットオフバッグ，３時間，１５０容）および残留ＧｄをＩＣＰ原子吸収分析によって評価する（マスバランス＝９５％）．極めて強力な対合イオン結合が，６０：４０（Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ対デルマタン硫酸）で調製されたＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ対デルマタン硫酸のバッグ内のＧｄの残留は７３％で，同じモル比のＧｄ：ＤＴＰＡとデルマタン硫酸で調製した場合のＧｄ：ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸のバッグ内のはるかに低い２３％の残留と対照的である．デルマタン硫酸の定量は以前に報告されている極めて強力に結合するカチオン性染料，アザズレＡの結合（置換）の際に起こる６２０nmにおけるＵＶ吸収の低下を評価して行われる［Klein ら（１９８２）；Grant ら（１９８４）］．（ａ）Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ単独および（ｂ）６０：４０％(w/w)Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ対合イオン製剤のＲ１強度（Ｔ１緩和度）をＩＢＭＰＣ２０ミニスペクトロメーターを用いて評価したところ，いずれも７．８mmol^-1s^-1の測定値が得られる（ＩＣＰ原子吸収によるＧｄ濃度の平行測定に基づく）．Ｇｄキレート単独とデルマタン硫酸に結合したＧｄキレートのＲ１が等しいことは，デルマタン硫酸へのキレートの結合が水分散および常磁性の緩和を妨害していないことを指示する．さらに，Ｒ１の延長がないことは回転相関時間に増加がないことを指示し．したがってさらにＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ−デルマタン硫酸分子複合体のサイズが比較的小さいことを確証する（多分約５０，０００〜６０．０００ダルトン未満）．これはさらに，腫瘍の新生血管内皮の比較的にさらに（解剖学的におよび浸潤）無傷な部分さえも横切る高い腫瘍接近性と極めて迅速な腎臓クリアランスの驚くべき予期出来なかった，いずれも無傷の動物に観察される（下記参照）利点の基盤を確証する．この結果はレーザー光散乱により分子凝集が検知できない（上記参照）ことと相関する．この新規な製剤の著しく高いＲ１は何回も反復され，この新しいＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ接合体（また完全なデルマタン硫酸生成物の場合も）はＭＰＤ側鎖基を有するＧｄ：ＤＴＰＡ（Ｒ１＝約４[m mol.sec]^-1）に比較して高い水拡散に相関するように思われる．例２４ガドリニウム：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸の対合イオン製剤のマウス急性毒性例２２の製剤の一つ，Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸（Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡとデルマタン硫酸；４３５型デルマタン硫酸，Opocrin の比，６０：４０重量％）を，２０ｇの雄性 Balb/c マウス（ｎ＝６）の尾静脈注射による急性毒性試験を行った．注射を１０〜１２分にわたって実施した場合，平均ＬＤ₅₀ ＝１１．０ミリモル／kg（Ｇｄおよびキレーターの），３匹のマウスは平均９．９ミリモル／kgで生存し，３匹のマウスは平均１２．２ミリモル／kgで死亡した．注射をもっと急速に，２〜３分の間隔で実施した場合にはＬＤ₅₀の容量は中等度に低下した．これらの結果はＧｄ：ＤＴＰＡ（ジメグルミン）の場合，ＬＤ₅₀ ＝４．０ミリモル／kgとよく符合する．例２５６７Ｇａ−標識デフェロキサミン：デルマタン硫酸および１１１Ｉｎ−標識ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸の放射標識対合イオン製剤の急性血中クリアランスデルマタン硫酸担体はそれら自身の極めて迅速かつ完全な血中クリアランス特性を結合した活性物質（非共有結合で結合したキレート）に付与できるのか否かを評価するために，例２，５，２１および２２（上記）の製剤を放射性単一光子放射（ＳＰＥＣＴ）金属６７Ｇａまたは１１１Ｉｎを非放射性金属イオン，Ｆｅ（III）またはＧｄ（III）の代わりに結合するように修飾する．６７Ｇａの実験では約１．５５umole のデフェロキサミン（ＤＦｏ）−デルマタン硫酸(７７．５：２２重量％，ＤＳ４３５型，Opocrin)が６７Ｇａを塩化物からクエン酸塩の型に変換して室温，ｐＨ５．５〜６．５においてＤＦｏ：デルマタン硫酸と１０分インキュベートして，約８００uCi の６７Ｇａで標識される．約２００uCi の６７Ｇａでキレートされている０．３９umole のＤＦｏ：デルマタン硫酸をCope nhagen株ラットの尾静脈に注射し，約１時間にわたり一連のガンマ写真像を得（再度２４および４８時間にも），関心の（ＲＯＩ）心臓，上腹部領域および骨盤領域，血液，肝臓および腎クリアランスをそれぞれ分析する．血液クリアランス平均t_1/2＝１８分，迅速なｔ_1/2α成分は８分，ｔ_1/2β成分は３５分である．肝クリアランスは認められなかった．腎クリアランスは極めて早く，認められたすべてのクリアランスおよび急速な膀胱活性の招来を説明するものである．鼻，骨格軸または骨もしくは骨髄領域における有意な残留活性は認められない．６７ＧａＤＦｏ（デルマタン硫酸を含まない）単独を注射した対照実験でも極めて迅速な血中クリアランスを生じるが，試剤の有意な分画（約３０％）は全く速やかに（１０〜３０分）肝臓および腸に移動し，肝臓および結腸に高い臓器バックグランドを生じた．首の背部に移植されたＡＴ−１前立腺腺癌がある（直径１．０〜４．５cm）Co pen hagen ラットでは腫瘍は極めて急速に（約５分）核種剤で活性（光輝化）して，映像あたりの腫瘍のカウントは注射１５分後から常に血液および肝臓の値を越え，迅速かつ高感度で腫瘍が検出される．これは同じ腫瘍モデルにおけるＭＲＩ造影結果（例１９）と符合する．他の実験において，放射性核種のラットあたりの用量は一定に保持して，ＭＲＩ用量，用量の増加と治療効果の可能性，クリアランスの半減期に対する影響を評価するために，ＤＦｏ：デルマタン硫酸の用量を１．５５umole/kgから１５５umole/kg（０．１５５５mmol／kg）に１００倍に増大した．肉眼的評価によれば，クリアランスは試剤の用量が１００分の１の場合（前述）と酷似して，極めてわずかな約５分程度の延長が生じたに過ぎない．さらに別の実験では，放射標識ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸(６０：４０重量％ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸，４３５型，Opocrin)において用いられたｐＨ５．５〜６．５で１１１Ｉｎを酢酸塩に変換する．クリアランス時間および臓器クリアランスパターン（腎対肝）は６７ＧａＤＦｏ：デルマタン硫酸（上述）の場合に匹敵し，試験した場合，腫瘍への取込みは同様に迅速で明瞭である．これらの驚くべき予期できない利点を提供する．（ａ）デルマタン硫酸に非共有結合により（対合イオン結合）２つの異なる活性成分において，１００倍またはそれ以上の用量の増大にも極めて迅速なクリアランス．（ｂ）デルマタン硫酸担体の存在下には肝臓および腸へのクリアランスは回避される（デルマタン硫酸担体の不存在下にはない）．これはＭＲＩおよび放射性核種造影の血中，およびとくに重要であるが困難な肝臓および中央腹部の生体領域のバックグランドを低下させる利点がある．膀胱カテーテル施行時にも，胎盤領域が実質的なバックグランドがなく観察できる．さらに，少なくとも２オーダーの用量の増加にも血中および生体内クリアランスはは極めて徐々に増加するので重要な治療設計が可能になる．これらのクリアランスの特性はこの例および先に示した選択的な（腫瘍）取込みと相まって，選択性と生体内残留および全身性毒性の間の差を拡大する，驚くべき予期できない利点を提供する．例２６ガドリニウム：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡ：デルマタン硫酸（Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳ）選択性造影剤：同種移植Fisher３４４雌性ラットにおける授乳時乳腺癌のＭＲＩ造影および特殊な組織化学的試験との相関図２５Ａ，図２５Ｂ，図２５Ｃ，図２５Ｄ，図２５Ｅおよび図２５Ｆに示すように，Ｔ１−強調ＭＲＩ造影（ＴＲ／ＴＥ＝８００／４５）を例１８（上述）のように先に同系の乳腺癌を套管針で肝臓に接種したFisher３４４雌性ラットに，Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳ(ＤＳ＝４３５型，Opocrin)を用量０．１５５ミリモル／kgで静脈内注射（i.v.）し，そのi.v.注射前（プレ）および後（ポスト）に１．０テスラにおいて実施する．Ｔ２探査造影（ＴＲ＝２１００／８５）を一連のＴ１−強調造影に先立って実施して，おおよその位置と腫瘍結節を同定する（図１８Ａ）．これにより２つの固形腫瘍結節（右肝臓後部）と１つの不規則な腫瘍浸潤（肝臓中央領域）が明らかになる．腫瘍部位は以後に肉眼的検査によって確認される．これらの結節はＴ１（８００／４５）プレコントラスト(Pre) 映像（図１８Ｂ）では同定できないが，以後Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳを注射し，すべての３つの腫瘍結節が（ａ）早期の注射後時間（７分）で急速に著しく増強されて（図１８Ｃ）；（ｂ）迅速な持続する（６０分を通じて）周囲の無関係な肝臓に対してシャープな腫瘍の境界が表示され（図１８Ｃ，図１８Ｄ，び図１８Ｅ），６０分を通して長期の（持続する）コントラストを示し（図１８Ｆ），６０分注射後（ＭＰＩ）で腫瘍の境界にコントラストの勾配の極めて軽度の崩壊が見られる．この動物モデルでは，Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳによって生じるＭＲＩ造影の増強は，例１９のフェリオキサミン：デルマタン硫酸試剤による場合よりも著しく大きく（用量ベースでさらに強力）で，Ｇｄ：ＤＴＰＡ−リジン：デルマタン硫酸によって生じる効力よりも軽度ないし中等度大きく（用量ベースでさらに強力）で（例３，４および９で調製された，図１３Ａ，図１３Ｂ，図１３Ｃ，図１３Ｄ，相対効力については例２１および表２も参照）図１３Ａ，図１３Ａ，図１３Ａ，図１３Ａ），前述の両試剤は効力の低い金属キレート，すなわちＲ１はそれぞれ，１．６および４．２であり，これに対し本例のＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳはＲ１が７．８［mmol.sec］^-1である．また，本例の映像はｄＧ：ＤＴＰＡ（ジメグルミン）ならびに報告されている肝臓特異的Ｔ１およびＴ２造影剤のすべてに優る以下のすべての驚くべき予期しえない利点を示す．すなわち，（ａ）周囲の無関係な肝臓による実質的な取り込みはなく，腫瘍本体による取り込み，（ｂ）腫瘍選択性および感受性の増強，（ｃ）長期のまた即時の腫瘍による取込み，コントラストの消退や多重造影剤の注射を必要とすることなく多部位および多造影獲得による臨床的フレキシビリティーの改善，（ｄ）腫瘍境界におけるコントラストのシャープさおよび明るい勾配，腫瘍ステージおよび小さな腫瘍の検出の改善，（ｅ）小さな転移の検出の改善，（ｆ）小さな腫瘍壊死の濃厚な中央部領域が不連続に描き出され（図２Ａ，図２Ｂ）（腫瘍の灌流および異なる極めて小さい解剖学的亜領域内での空間的解像および評価機能を可能にする）；（ｃ）６４注射後分（ＭＰＩ）よりも長く持続するコントラストを示し（図４Ａ，図４Ｂ，図４Ｃ，図４Ｄ，ＭＲＩ像；図５，定量的関心領域，ＲＯＩ分析），それとともに，長期の造影間隔後にも極めて良好に画された腫瘍境界が持続する．これらのＭＲＩ造影の，７ＭＰＩ腫瘍の新鮮な切片のマイクロ波増強鉄染色との相関は，フェリオキサミン活性成分の腫瘍部位局在はそれが担体に結合（非共有結合的）している場合にのみ生じ（図６Ａおよび図７Ａ），遊離型（活性部分単独）で投与された場合には起こらない（図３Ａ，図３Ｂ）．図８Ａ，図８Ｂおよび図８Ｃに認められるように，肝臓腫瘍の肺転移は，早期の造影後間隔において極めて小さい２−mm〜３−mmの結節が迅速に高感度に増強され，肺部位でも腫瘍のこの増強も長期に高感度で維持され，正常肺に対し極めてシャープな腫瘍境界が保持される．図８Ａ，図８Ｂおよび図８Ｃにに見られる維持間隔は生体臓器部位において通常報告されているＧｄ：ＤＴＰＡジメグルミンの場合よりはるかに長い．実施例２７ガドリニウム：Ｎメチル１−１，３，プロパンジアミン− ＤＴＰＡ：デルマタンスルフェート（Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳ）選択的コントラスト剤；Syngeneic Copenh agenラットにおける前立腺ＡＴ−１腺癌のＭＲＩイメージング；及び特有な組織化学的ステインとの相互関係Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳ(ＤＳ＝４３Ｓ型，Opocrin)選択的コントラスト剤０．１５５mmol／kg（Ｇｄ（III）投与量）をSyngeneic Copenhagcnラットの皮膚ポウチ（実施例１８において説明及び参照）に成長させたＡＴ−１前立腺腺癌中に、実施例２１と２２に記載の通りに、静脈内注入（i.v.）する前(Pre )と後（post）とに、Ｔ１−重み付き(T1-weighted)イメージ（ＴＲ／Ｔｅ＝２５０／８０）を４．７ Tcslaにおいて実施する．Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳは注入後７分間目と２０分間目とに全腫瘍の迅速で，非常に強力なＴ１コントラスト強化を生じ、特に腫瘍リムにおいて、最も顕著には基底腫瘍リム(basal tumor rim）（腫瘍宿主ステージングが通常評価される）において４０ＭＰＩ及び６０ＭＰＩにおける腫瘍の連続的に強力なコントラスト強化を生じる．さらに実験的に評価すると、４０ＭＰＩ及び６０ＭＰＩにおいて出現する中央腫瘍領域の明らかな、中程度のコントラスト暗化(darkening)は、実際に、これらの腫瘍領域内でのコントラスト剤の過剰濃度を表し、Ｔ２* 効果を生じ、これは強力なＴ１明化(brightening)効果と競合して、これらの中央腫瘍領域におけるＴ１コントラストを人為的に暗化する．このＴ２* 人為効果（artifact）を，ＴＲ／ＴＥ＝２５００／２５０のＴ２パルスシーケンス（＝Ｔ２* 効果に選択的に感受性）を用いて、かつさらに遅延したポスト−コントラスト(post-contrast)時間における実質的なコントラスト暗化を観察することによって、検出し、評価する．このため、０．１５５mg／kgの注入量と組合せたＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳの非常に高いＲ１（先行作用剤(preceding agents)の全てに比べて）は、作用剤の非常に顕著な腫瘍吸収量(uptake)と、４．７ TeslaフィールドにおけるＴＲ／ＴＥ＝２５０／８０パルスシーケンスの常磁性反応特徴と共に、特に腫瘍の中央領域において、Ｇｄ：ＭＰＤＤＴＰＡ：ＤＳが経時的に累積するにつれて、腫瘍内に過度に高い局部的常磁性活性を生じる．リム、特に基底リムは、作用剤がこの基底部位においてはプラズマ(plasma)中に比較的迅速にバックディフュージョン(backdiffusion)するために、このＴ２* 暗化人為効果から比較的保護される．先行結果と考察とから、Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳキレートは本明細書で記載する他の作用剤の全てよりも実質的に強力なＴ１常磁性活性であるので、Ｇｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳによって最適のＴ１イメージングを行うためには、０．１５５mg／kgより低い投与量が適することが結論される．実施例２５において、３肝臓腫瘍小節の周囲の非関与(uninvolved)肝臓中の血液プールバックグラウンドのごく僅かな増強によって実証されるように、やや過剰投与量であると思われることに注目のこと。それにも拘わらず、これらの小節はあらゆるポスト −コントラスト時において（７〜６０ＭＰＩ）まだ例外的に良好に目視される。これらのＭＲＩイメージとＧｄ（III）金属イオンのマイクロ波強化プルシアンブルー染色との相関を、６０ＭＰＩにおいて摘出した（及び切片化と染色のために新たに凍結した）腫瘍塊の外側２／３に局在するＧｄ：ＭＰＤ−ＤＴＰＡ：ＤＳのＧｄ（III）に関して実施する（実施例１８に記載の通り）（図１８参照のこと）。これは殆ど全ての腫瘍細胞の強度に陽性の組織化学的染色を示し，有意な数の腫瘍細胞が核の陽性染色も示す（すなわち、金属イオンマーカーの核局在）。７分間目の腫瘍細胞（胸部）の少ない数の明るい染色に比べて（実施例１８）、６０分間目の殆ど全ての腫瘍細胞のこの非常に強力な染色と、７分間目の（胸部）腫瘍（実施例１８）では観察されず，６０分間目にここで観察された付加的な核局在とは、腫瘍細胞の内在化が１時間にわたって進行し、恐らく、デルマタンスルフェート結合金属キレートが有意な濃度で細胞外マトリックス内に留まる全時間にわたって進行すると思われ、腫瘍誘導血管新生ＭＲＩ内皮を横切って、極度に迅速でかつ選択的な血管外遊出によって、初期に、迅速に局部微細血管を介して負荷されることを強力に実証する−−−ＶＥＧＦ／ＶＰＦ等を含めた、ＧＡＧ結合受容体の腫瘍選択的誘導と内皮局在とに関しては上記明細書を参照のこと。悪性前立腺腫瘍に関してここで観察された内皮局在の驚くべき、意外な利益は悪性胸部腫瘍に関して実施例１８においても観察された。このことは、腫瘍誘導血管新生内皮並びに腫瘍細胞そのもの(proper)がＭＲＩコントラスト剤のデルマタンスルフェート結合（非共有結合を含む）種類の結合，ポンピング（pumpin g），血管外遊出及び腫瘍細胞内在化の標的であり、実際に、デルマタンスルフェート及びＧＡＧに同様に結合した他の活性剤の標的であると言う、上記実施例１８の驚くべき，意外な発見を確証する．腫瘍の内皮，腫瘍マトリックス、腫瘍細胞及び核における局在化及び累積に関するこれらの発見は、金属キレートであるか他の種類の活性物質であるかに拘わらず、治療剤を選択的に局在化することの根拠をさらに与えるものである。本発明の組成物及び方法は、好ましい態様により記載されているが、本発明の概念、精神及び範囲から逸脱することなく、本明細書に記載された組成物、方法及びその方法の工程又は一連の工程において、変更を行うことができることは、当業者にとって自明のことである。より具体的には、化学的にも生理学的にも関連した試薬を、本明細書に記載した試薬の代わりに用いて、同一の又は類似の結果が得られることは明らかであろう．このような当業者にとって自明である全ての類似の置換、修飾は、添付の請求の範囲に記載された発明の精神、範囲、概念に入るものと見なされる。以下の参考文献は上述の理由により、本明細書中に参照した関連部分において取り込まれるものとする。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年３月５日【補正内容】請求の範囲１．金属イオンキレートからな試剤であって，そのキレートは金属イオンのキレーションに関与しない少なくとも１つの過剰の塩基性またはカチオン性基を有し，サッカライド，オリゴサッカライド，ポリサッカライド，サルファトイドおよびグリコサミノグリカンからなる群より選ばれるアニオン性，親水性，水溶性の硫酸化された担体に結合している試剤であり，また選択的オリゴサッカライド過剰硫酸化からなる試剤．２．キレートは非共有結合によって担体に結合している「請求項１」の試剤３．担体は硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸である「請求項１または２」の試剤４．実質的に精製されたデルマタン硫酸はさらに分子量約８，０００ダルトン〜約４５，０００ダルトン，好ましく約１０，０００ダルトン〜約２３，０００ダルトン，さらに好ましくは約１０，０００ダルトン〜約２３，０００ダルトンを有するとして定義される「請求項３」の試剤５．デルマタン硫酸はさらにＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比０．７：１〜１．８：１，好ましくは０．９：１〜１．５：１を有するとして定義される「請求項３または４」の試剤．６．実質的に精製されたデルマタン硫酸は少なくとも約２００ U／mgのヘパリン補因子II活性を有する「請求項３〜５」の試剤．７．実質的に精製されたデルマタン硫酸は Ido-GalNAc4SO₃を含有し，さらにI doA2SO₃および IdoAGalNAc4,6SO₃からなる「請求項３〜６」の試剤．８．金属イオンキレートは常磁性金属イオンキレートである「請求項１〜６」の試剤．９．さらに少なくとも約１５重量％の金属イオンキレートとして定義される「請求項１〜８」の試剤． 10．鉄，マンガン，クロム，銅，ニッケル，ガドリニウム，エルビウム，ユロピウム，ジスプロシウム，ホルミウム，ホウ素，マグネシウム，アルミニウム，ガリウム，ゲルマニウム，亜鉛，コバルト，カルシウム，ルビジウム，イットリウム，テクネチウム，ルテニウム，レニウム，インジウム，イリジウム，白金，タリウム，錫およびサマリウムからなる群より選択される金属イオンからなるとしてさらに定義される「請求項１〜７」の試剤． 11．担体は選択的オリゴサッカライドが過剰硫酸化されたグリコサミノグリカンである「請求項１または２」の試剤． 12．グリコサミノグリカンはヘパリン，グリシン−接合ヘパリン，ヘパラン硫酸，ヒアルロン酸，ペントサンポリサルフェート，デキストラン硫酸，コンドロイチン硫酸，硫酸化シクロデキストリンおよび硫酸化スクロースからなる群より選択される「請求項１１」の試剤． 13．デルマタン硫酸はさらに硫黄含量は９％（重量／重量）未満を有するとして定義される「請求項１〜７」の試剤．グリコサミノグリカンはコンドロイチン硫酸である「請求項１２」の試剤． 14．金属イオンキレートのキレーターはヒドロキサメートである「請求項１〜７」の試剤． 15．金属イオンキレートはフェリクロム，フェリオキサミン，エンテロバクチン，フェリマイコバクチンまたはフェリクリシンである「請求項１〜７」の試剤． 16．金属イオンキレートはガドリニウム（III）：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡである「請求項１〜７」の試剤． 17．金属イオンキレートはフェリオキサミンであり，担体は選択的オリゴサッカライドの過剰硫酸化からなるヘパリンまたはヘパリンフラグメントである「請求項１または２」の試剤． 18．金属イオンキレートはさらにポルフィン，ポリフィリン，サフィリンまたはテキサフィリンからなるとして定義される「請求項１〜７」の試剤． 19．さらに鉄イオンまたはガドリニウムイオンからなるとして定義される「請求項１８」の試剤． 20．金属イオンキレートのキレーターは５，１０，１５，２０−テトラキス（１−メチル−４−ピリジル）−２１Ｈ，２３−ポルフィンであり，担体は選択的オリゴサッカライドの過剰硫酸化からなるヘパリンであり，試剤はさらにキレート化された鉄イオンからなる「請求項１または２」の試剤． 21．金属イオンキレートはさらにポリアミノカルボキシレートまたはマクロ環からなるとして定義される「請求項１〜７」の試剤． 22．ポリアミノカルボキシレートはジエチレントリアミン五酢酸の塩基性またはアミン誘導体である「請求項２１」の試剤． 23．マクロ環は１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ ”，Ｎ'"−四酢酸（ＤＯＴＡ）の塩基性またはアミン誘導体である「請求項２１」の試剤． 24．ポリアミノカルボキシレートはＮ−メチル−１，３−プロパンジアミン− ＤＴＰＡである「請求項２２」の試剤． 25．担体は疾患部位に選択的に誘導される内皮決定基である「請求項１〜７」の試剤． 26．生体映像を増強する試剤あって，試剤はデフェロキサミン，キレート化したＦｅ（III）および上記デフェロキサミンに結合したグリコサミノグリカン担体からなる試剤． 27．生体映像を増強する試剤あって，試剤はジエチレントリアミノ五酢酸−リジン，キレート化したＧｄ（III）およびジエチレントリアミノ五酢酸−リジンに結合したグリコサミノグリカン担体からなる試剤． 28．生体映像を増強する試剤あって，試剤はＤＯＴＡ−リジン，キレート化したＧｄ（III）および上記１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ'"−四酢酸−リジン（ＤＯＴＡ−リジン）に結合したグリコサミノグリカン担体からなる試剤． 29．硫黄含量は９％（重量／重量）までであり選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸に結合したガドリニウム（ III）：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡからなる試剤． 30．金属イオンキレートのキレーターはジアミン化学側鎖基またはジアミン化学側鎖基誘導体からなる「請求項１〜７」の試剤． 31．非経口投与に適当な浸透圧を生じるための少なくとも１種の緩衝剤，サッカライド，硫酸化サッカライド，もしくは塩の配合物としてさらに，また水溶液もしくは所望の浸透圧を有する水溶液の再構築に適当な凍結乾燥もしくは乾燥製剤であって無菌的もしくは滅菌されているとしてさらに定義される「請求項１〜３０」の試剤． 32．脊椎動物における誘導磁気共鳴映像またはスペクトルを増強する方法において，その動物に「請求項４８，４９，５０または５２」の試剤の有効量を投与することからなる方法． 33．誘導磁気共鳴シグナルから生じるインビボ映像を増強する方法において「請求項１〜４，４０〜４８，５０または５２」の試剤の有効量を対象に投与し，対象を磁場および高周波パルスに暴露し，誘導された磁気共鳴シグナルを獲得して造影効果を得る工程からなる方法． 34．生体内映像を増強する方法において，「請求項１〜４，４０〜４８，５０または５２」の試剤の有効量を投与し，生体を超音波またはＸ線に暴露し，シグナルの修飾を測定して造影効果を得る工程からなる方法． 35．「請求項５０」の試剤を製造する方法において硫黄含量は９％（重量／重量）までであり選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸を濃度４００mg／mlに溶解しガドリニウム（III）：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡと混合する工程からなる方法． 36．試剤を０．２２μm の滅菌フィルターでろ過してろ液を滅菌する工程カラさらになる「請求項５６」の方法．

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．金属イオンキレートからなり，そのキレートは金属イオンのキレーションに関与しない少なくとも１つの過剰の塩基性またはカチオン性基を有し，アニオン性，親水性，水溶性担体に結合している試剤．２．金属イオンキレートからなり，そのキレートは金属イオンのキレーションに関与しない少なくとも１つの過剰の塩基性またはカチオン性基を有し，アニオン性，親水性，水溶性担体に対合イオン静電力結合によって非共有結合で結合している試剤．３．金属イオンキレートからなり，そのキレートは金属イオンのキレーションに関与しない少なくとも１つの過剰の塩基性またはカチオン性基を有し，アニオン性，親水性，水溶性担体に共有結合で結合している試剤．４．金属イオンキレートからなり，そのキレートは金属イオンのキレーションに関与しない少なくとも１つの過剰の塩基性またはカチオン性基を有し，硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸に結合している試剤．５．硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸は少なくとも約２００ U／mgのヘパリン補因子II活性を有する「請求項４」の試剤．６．硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸は Ido-GalNAc4SO₃を含有し，さらに IdoA2SO₃および IdoAGalNAc4,6SO₃からなる「請求項４」の試剤．７．金属イオンキレートは常磁性金属イオンキレートである「請求項１〜６」の試剤．８．さらに少なくとも約１５重量％の金属イオンキレートとして定義される「請求項１〜６」の試剤．９．鉄，マンガン，クロム，銅，ガドリニウム，エルビウム，ユロピウム，ジスプロシウムおよびホルミウムからなる群より選択される金属イオンからなるとして定義される「請求項１〜７」の試剤． 10．ホウ素，マグネシウム，アルミニウム，ガリウム，ゲルマニウム，亜鉛，コバルト，カルシウム，ルビジウム，イットリウム，テクネチウム，ルテニウム，レニウム，インジウム，イリジウム，白金，タリウム，錫およびサマリウムからなる群より選択される金属イオンからなるとして定義される「請求項１〜８」の試剤． 11．担体は硫酸化されたサッカライド，オリゴサッカライド，サルファトイドまたはグリコサミノグリカンである「請求項１〜３」の試剤． 12．担体はグリコサミノグリカンである「請求項１〜３」の試剤． 13．グリコサミノグリカンはヘパリン，脱硫ヘパリン，グリシン−接合ヘパリン，ヘパラン硫酸，デルマタン硫酸，硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸，ヒアルロン酸，ペントサンポリサルフェート，デキストラン硫酸，硫酸化シクロデキストリンおよび硫酸化スクロースからなる群より選択される「請求項１２」の試剤． 14．グリコサミノグリカンはコンドロイチン硫酸である「請求項１２」の試剤． 15．グリコサミノグリカンは硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸である「請求項１２」の試剤． 16．硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸はさらに分子量約８，０００ダルトン〜約４５，０００ダルトンを有するとして定義される「請求項１５」の試剤． 17．硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸はさらに分子量約１０，０００ダルトン〜約２３，０００ダルトンを有するとして定義される「請求項１５」の試剤． 18．硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸はさらに分子量約１３，０００ダルトン〜約１９，０００ダルトンを有するとして定義される「請求項１５」の試剤． 19．デルマタン硫酸はさらに２００ U／mgを越えるヘパリン補因子II活性を有するとして定義される「請求項１５」の試剤． 20．デルマタン硫酸はさらにＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比０．７１〜１．８：１を有するとして定義される「請求項１５」の試剤． 21．デルマタン硫酸はさらにＳＯ₃ ^-／ＣＯＯ^-比０．９：１〜１．５：１を有するとして定義される「請求項１５」の試剤． 22．デルマタン硫酸はさらに硫黄含量は９％（重量／重量）未満を有するとして定義される「請求項１５」の試剤． 23．金属イオンキレートは少なくとも約１０¹⁴の常磁性金属イオン形成定数を有する「請求項１〜４」の試剤． 24．金属イオンキレートは鉄キレートである「請求項１〜４」の試剤． 25．金属イオンキレートのキレーターはヒドロキサメートである「請求項１〜４」の試剤． 26．金属イオンキレートはフェリクロム，フェリオキサミン，エンテロバクチン，フェリマイコバクチンまたはフェリクリシンである「請求項１〜４」の試剤． 27．金属イオンキレートはフェリオキサミンである「請求項１〜４」の試剤． 28．金属イオンキレートはガドリニウム（III）：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡである「請求項１〜４」の試剤． 29．金属イオンキレートはフェリオキサミンであり，担体はヘパリンまたはヘパリンフラグメントである「請求項１〜４」の試剤． 30．金属イオンキレートはフェリオキサミンであり，担体は硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸である「請求項１〜４」の試剤． 31．金属イオンキレートはガドリニウム（III）：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡであり，担体は硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸である「請求項１〜４」の試剤． 32．金属イオンキレートはさらにポルフィン，ポリフィリン，サフィリンまたはテキサフィリンからなるとして定義される「請求項１〜４」の試剤． 33．さらに鉄イオンまたはガドリニウムイオンからなるとして定義される「請求項１〜４」の試剤． 34．金属イオンキレートのキレーターは５，１０，１５，２０−テトラキス（１−メチル−４−ピリジル）−２１Ｈ，２３−ポルフィンであり，担体はヘパリンであり，試剤はさらにキレート化された鉄イオンからなる「請求項１〜４」の試剤． 35．金属イオンキレートはさらにポリアミノカルボキシレートまたはマクロ環からなるとして定義される「請求項１〜４」の試剤． 36．ポリアミノカルボキシレートはジエチレントリアミノ四酢酸の塩基性またはアミン誘導体である「請求項３５」の試剤． 37．マクロ環は１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ ”，Ｎ'"−四酢酸（ＤＯＴＡ）の塩基性またはアミン誘導体である「請求項３５」の試剤． 38．ポリアミノカルボキシレートはＮ−メチル−１，３−プロパンジアミン− ＤＴＰＡである「請求項３５」の試剤． 39．担体は疾患部位に選択的に誘導される内皮決定基である「請求項１〜４」の試剤． 40．誘導磁気共鳴シグナルから生じる映像を増強する映像増感剤またスペクトル増強剤であって，その試剤は１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド，Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンまたはカルボニルジイミダゾールによってヘパリンに共有結合によって接合したフェリオキサミンからなる試剤． 41．誘導磁気共鳴シグナルから生じる映像を増強するスペクトル増強剤であって，その試剤はヘパリンまたは硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸に共有結合で接合したＧｄ（III）ジエチレントリアミン四酢酸からなる試剤． 42．インビボ造影用の試剤であって，金属イオンの塩基性キレーターおよびキレートした金属イオンからなり，キレーターは，ヘパリン，脱硫ヘパリン，グリシン−接合ヘパリン，ヘパラン硫酸，デルマタン硫酸，硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸，ヒアルロン酸，ペントサンポリサルフェート，デキストラン硫酸，硫酸化シクロデキストリンおよび硫酸化スクロースからなる群より選択される親水性の担体に非共有結合性静電力によって結合している試剤． 43．デフェロキサミン，キレート化したＦｅ（III）および上記デフェロキサミンに結合したグリコサミノグリカン担体からなる生体映像を増強する試剤． 44．ジエチレントリアミン五酢酸−リジン，キレート化したＧｄ（III）およびジエチレントリアミン五酢酸−リジンに結合したグリコサミノグリカン担体からなる生体の映像を増強する試剤． 45．ＤＯＴＡ−リジン，キレート化したＧｄ（III）および上記１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ'"−四酢酸−リジン（ＤＯＴＡ−リジン）に結合したグリコサミノグリカン担体からなる生体映像を増強する試剤． 46．グリコサミノグリカン担体は硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸である「請求項４３〜４５」の試剤． 47．硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸に非共有結合静電力によって結合したフェリオキサミンからなる試剤． 48．硫黄含量は９％（重量／重量）までで選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸に結合したＮ−メチル−１，３ −プロパンジアミン−ＤＴＰＡからなる試剤． 49．さらにガドリニウム（III）からなる「請求項４８」の試剤． 50．硫黄含量は９％（重量／重量）までであり選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸に結合したガドリニウム（ III）：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡからなる試剤． 51．金属イオンキレートのキレーターはジアミン化学側鎖基またはジアミン化学側鎖基誘導体からなる「請求項１〜４」の試剤． 52．非経口投与に適当な浸透圧を生じるための少なくとも１種の緩衝剤，サッカライド，硫酸化サッカライド，もしくは塩の配合物としてさらに，また水溶液もしくは所望の浸透圧を有する水溶液の再構築に適当な凍結乾燥もしくは乾燥製剤であって無菌的もしくは滅菌されているとしてさらに定義される「請求項１〜４，４０〜４８または５０」の試剤． 53．脊椎動物における誘導磁気共鳴映像またはスペクトルを増強する方法において，その動物に「請求項４８，４９，５０または５２」の試剤の有効量を投与することからなる方法． 54．誘導磁気共鳴シグナルから生じるインビボ映像を増強する方法において「請求項１〜４，４０〜４８，５０または５２」の試剤の有効量を投与し，対象を磁場および高周波パルスに暴露し，誘導された磁気共鳴シグナルを獲得して造影効果を得る工程からなる方法． 55．生体内映像を増強する方法において，「請求項１〜４，４０〜４８，５０または５２」の試剤の有効量を投与し，生体を超音波またはＸ線に暴露し，シグナルの修飾を測定して造影効果を得る工程からなる方法． 56．「請求項５０」の試剤を製造する方法において硫黄含量は９％（重量／重量）までであり選択的なオリゴサッカライド過剰硫酸化を有する実質的に精製されたデルマタン硫酸を濃度４００mg／mlに溶解しガドリニウム（III）：Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン−ＤＴＰＡと混合する工程からなる方法． 57．試剤を0．２２μmの滅菌フィルターでろ過してろ液を滅菌する工程カラさらになる「請求項５６」の方法．