JPH09509647A

JPH09509647A - ２′，５′−オリゴアデニレート−２′，３′−シクロホスフェート

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Publication number: JPH09509647A
Application number: JP7509512A
Authority: JP
Inventors: イー．ブドウスキ，エドワルド; エー．ガフリロフ，アレクサンドル; ディー．ピバシャン，アーマン
Original assignee: イー．ブドウスキ，エドワルド; エー．ガフリロフ，アレクサンドル
Priority date: 1993-09-24
Filing date: 1993-09-24
Publication date: 1997-09-30
Also published as: US5739013A; KR100332250B1; KR960704911A; EP0721457B1; DE69324826D1; DK0721457T3; EP0721457A1; GR3030863T3; WO1995008555A1; US5962431A; ES2133412T3

Abstract

(57)【要約】本発明は式（Ｉ）｛式中、０≦ｎ≦10、特に≧０〜10、好ましくは１又は２。｝の新規の２′，５′−オリゴアデニレート−２′，３′−シクロホスフェートこれらの活性物質を含む医薬及びそれらの適用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】２′，５′−オリゴアデニレート−２′，３′−シクロホスフェート本発明は、その３′末端にシクロホスフェート基をもち、そしてその５′末端に遊離のOH基をもつ２′，５′オリゴアデニレート、これらの化合物の製造方法、これらを含有する医薬調製物並びに外部乳頭腫症（external papillomatoses ）の治療におけるこれらの化合物の使用に関する。本発明は、新規の化学物質、すなわち以下の一般式：｛式中、０≦ｎ≦10、特に０≧〜10、好ましくは１又は２である。｝をもつ２′ ，５′オリゴアデニレート２′，３′−シクロホスフェートに関する。特に、式中、ｎ＝１又は２である化合物が、医療目的、すなわち、パピローマ・ウィルスにより引き起こされる皮膚及び上皮病変の局所的治療のために、有利に、使用されることができる。パポバウイルス科（family papova viridae）のパピローマ・ウイルスにより引き起こされる乳頭腫症は、ヒトと動物集団において広く生じる感染である。60 種を超えるヒト・パピローマ・ウイルスが現在知られている。これらのウイルスの全ては、同じように構築される。このゲノムは、そのウイルスの細胞内顕出に必要な他のタンパク質及びビリオン・タンパク質をコードする、800 塩基対をもつ２本鎖共有結合閉環形態DNA をもつ。パピローマウイルスのゲノムは、多くの世代の経過にわたりエピソーム（episomes）の形態で（細胞当り十数個のコピー）その感染された細胞内で再複製される。成熟ビリオンの形成は、分化の最終段階まで細胞内に生じない。永続性条件下、パピローマ・ウイルス・ゲノムの第１遺伝子だけが発現される。それらは、最終的に、その細胞の表現型における変化を引き起こし、そしてこのやり方で乳頭腫症の形成を導く。ウイルスのタイプ及び他の要因に依存して、感染された細胞内で細胞ゲノムにそれ自体を付着させるためのウイルス・ゲノムの特定部分における特異的な変化が存在する。これが次に悪性腫瘍の引き金を引くことができる。ヒトにおけるかなりの数の腫瘍が乳頭腫症の悪性腫瘍の結果であるという事実が知られている。従って、それらは、永続性の潜伏ウイルス感染の結果を表す。悪性腫瘍に関しては、性感染肛門性器（anogenifal）乳頭腫症が最も危険なものの中の１つである（M．Spitzer，0best．Gynecol.1989 vol．73 N．3 303-307; H．zur Hausen，A．Schneider，“The Role of Papillomaviruse s in Human Anogenital Cancer.”in The Papovaviridae．（N.P． Alzman ed. ）1987 vol 2．p．245-263; H．zur Hausen，“Papillomaviruses as Carcinoma viruses.”in Adv．in Virus Oneology．（G．Klein ed.）1989 vol．8 p．1-26 を参照のこと。）。乳頭腫症は、前癌性疾患として容易に診断されるので、多くの腫瘍の顕出が悪性状態への変態前に、感染細胞内で生じた良性乳頭腫症の治療により防止されることができる。現在、乳頭腫症の治療のための最も重要な方法は、乳頭腫の外科手術的除去並びに電気−、冷温、又はレーザー焼灼壊死化（cauterizing necrotisation）である（“Virus infections: etiology，epidemiology，clinics，pathogenesis and diagnosis”，Rep．Col．of Scient．Public.，Sverdlovsk，1985（in Russ ian）を参照のこと。）。液体酸素、酸及びそれらの混合物（硝石、シュウ酸及び乳酸等）がこの目的のために使用されるが、それらは周囲の健康な組織の壊死をも引き起こし、そして適用部位の上に傷の形成を導き、そしてしばしば、古いものが除去された付近に新たな乳頭腫の出現及び再発を導く（S.A．Bashi“Cryotherapy versus podophy llin in the treatment of genital warts”，Int．J．Dermatol．1985 vol．24 N．8 p．535-536を参照のこと。）。ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）とインターフェロン（interferon）を使用する乳頭腫症における医療方法の有効性は小さく、そして治療的投与量が投与される場合でさえも、さらにかなりの副作用及び後作用を合併する。ポドフィリン（podophyllin）の生物学的活性は、コルヒチン（colchicine）に匹敵するその抗分裂効果により説明されることができる。その使用は、しばしば局所的反応（炎症、アレルギー接触皮膚炎、場合により皮膚の侵食、その他）並びに不所望の後作用、例えば末梢神経障害（peripheral neuropathy）、頻呼吸（tachyprea）、血尿（hematuria）、及び自然流産（abortus spoutaneus）を誘発する（K.R．Beutner“Podophyllotoxin in the Treatment of Genital Huma n Papillomavirus Infections”，Seminars in Dermatology.1987 vol．6，N．1 p．10-18を参照のこと。）。乳頭腫症の治療におけるインターフェロンの使用は、限定された有効性だけをもち、そしてこの治療のために使用される投与量は、免疫系の抑制並びに自己免疫疾患の誘発等を導くことができる。（F.G．Bruins，A.J.C． von den Brule， R．Mulinik，G.M.M．Walboomers，C.J．Meijer，R． illemze，J．Invest．Derm atol．1989，vol．93，N．4，p．544-545; M．Foldvan，A．Moreland，M．Nezei ,ibid，p．550; G．Gross，Roussaki，ibid.，p．553; M．Niimuura，ibid．p． 567を参照のこと。）。２，５′オリゴアデニレート（2.5Ａ）の合成アナログは、免疫抑制活性を示すことが知られており、そして外科移植のために先に推奨されている。オリゴアデニレートは、インターフェロンにより引き起こされる効果の仲介物質としての免疫抑制剤よりも特異的に、かつ、一般的にの両方においてより毒性が低く、そしてより高く有効であることが測定されている（A．Kimchi et al.米国特許第 4 378352号（1983）を参照のこと。）。同一効果が、モルフォリン基を含む最終合成された2.5Ａによっても達成される（R．Torrence et al.米国特許第 4515781号（1985）参照のこと。）。少なくとも３つのアデノシン断片をもつ2.5Ａアナログはインビトロにおけるウイルス・タンパク質合成の活性阻害剤であることが知られている（Jan M．Ker r et al.米国特許第4,21,P,746（1980）を参照のこと。）。 2.5Ａオリゴ３′デオキシアデニレートのいくつかの合成アナログ及びそれらの誘導体は、単純ヘルペス及びエプスタイン−バール−ウイルスによる動物細胞の感染及び形質転換を特に阻害するが、既に感染した又は形質転換された細胞の場合には不活性である（R.I．Suhadolnik et al，US Patent 4464359（1984）; R.I．Suhadolnik et al．US Patent 4539313（1985）; R.I．Suhadolnik et al. ，US Patent 4708935（1987）を参照のこと。）。サイトメガロウイルス（cytomegalovirus）、Ｂ型肝炎ウイルス（hepatitis B virus）及び水痘−帯状庖疹ウイルス（varicella zoster viruses）により引き起こされる感染性疾患を治療するために2.5Ａを使用することもできる（EP-B-12 1 635（Au．No．J．Dk．Fi．Fr．Es.）1984を参照のこと。）。パピローマウイルスにより引き起こされる皮膚及び上皮病変を治療するための選択的効果をもつ有効な医薬を利用することができるようにする研究が行われている。本発明の目的は、式（Ｉ）：｛式中、０≦ｎ≦10、特に≧０〜10、好ましくは１又は２｝に合う２′，５′オリゴアデニレート２′，３′シクロホスフェートを製造することにより達成される。本発明の目的は、以下詳細に説明するように、ポリ（Ａ）から出発して上記新規化合物を製造する方法でもある。これらの化合物は、２′（３′）アデノシン・モノホスフェートの化学的重合により馴染みのある手順（A.M．Miche1son in The Chemilstry of the Nucleosi des and Nucteotides，（Academ1c Press）1963 p．418 and 419参照）を使用して、不正規の２′，５′及び３′，５′ヌクレオチド間結合をもつポリ（Ａ）から出発して理解されたやり方で製造されることができる。B.intermedius（EC．3.1.4.23）からのリボヌクレアーゼによるこのポリマー内の３′，５′結合のその後の分裂は、末端２′，３′シクロホスフェート基を含む混合物を含むさまざまな長さの２′ ，５′オリゴアデニレート及びモノマーを導く。別の段階手順を上記と同じ結果を得るために使用することができる：１．それぞれのオリゴマーが２′，３′シクロホスフェートと３′モノホスフェートの混合物を表す一連の２′，５′オリゴアデニレートを導くリボヌクレアーゼＴ２（又は類似のリボヌクレアーゼ）によるポリ（Ａ）の分解、及び２．末端３′ホスフェート基の、２′，３′のシクロホスフーェト基への変換を導く、バッファー水溶液中の 100倍過剰のBrCNによる上記混合物の処理。これらの２つの合成方法を以下のように図示することができる。２′，５′オリゴアデニレートの得られた混合物を分析し、そして所望のオリゴヌクレオチドを式（Ｉ）に従ってHPLCを使用して精製する。単離化合物として末端２′，３′シクロホスフェート基をもつ２′，５′アルゴアデニレートは先に記載されていない。２′，５′オリゴアデニレート内の２ ′（３′）ホスフェート基と２′，３′シクロホスフェート基の両方が細胞酵素によるこれらの化合物の加水分解を有効に防ぐ。５′トリホスフェート基を含む天然２′，５′オリゴアデニレートに比較したときの２′，３′シクロホスフェート・アナログの有効性は、ホスホジエステラーゼによる細胞酵素による加水分解に対する抵抗性と低い電荷のために細胞透過についてのより大きな能力により説明されることができる。本発明において使用されるべき２′，５′オリゴアデニレートは、中性塩の水溶液又は水に溶解され、そして２週間にわたり１日当り１回又は２回皮膚病変（通常、扁平いぼ（flat warts）、足底いぼ（sole warts）、コンジローム（cond yloma）、等）に適用されることができる。有効成分の濃度は10^-4〜10^-7Ｍである。コンジロームの上記処置は成長を止め、そして新たな形成は全くなく、そしてほとんどの場合、古いコンジロールは４〜６週間以内に減少された。普通のいぼの場合には、丘疹（papulas）が第１週の終わりまでに平らに広がり、そして処置開始後２〜４週間目に完全に消失する。扁平いぼをもつ患者は処置開始後１ヶ月間で完全に治癒された。乳頭腫の治療の経過において、より小さな乳頭腫が消失しながら1.5〜２週間後に新規の形成が減少する。皮膚病変の完全な減少は１ヶ月以内に生じた。きずあとのしるしは一つもなかった。この治癒は、毒性−アレルジー反応又は他の副作用も伴わなかった。この処理溶液中の活性オリゴアデニレートの濃度は、インターフェロン誘導細胞についてよりも２オーダーの大きさであるが、適用された溶液の全量は、一般的に1.0mlの下にある。全てのオリゴアデニレートが吸収される場合でさえ、細胞及び体液（血液、尿、等）中の得られた平均濃度は、非誘導細胞内のものよりもかなり下にある。使用される化合物の濃度は、正常細胞内のそれらの天然アナログのもの、及び適用領域の周辺近くの組織内だけのものよりも一時的にのみ（適用直後に）高いであろう。２′，５′オリゴアデニレートは、生物において細胞の内部と外部においてリボヌクレアーゼとホスファターゼにより容易に分解される。最終生成物は、細胞内のその平均濃度が10^-3Ｍ下である普通の細胞代謝を表す、アデニル酸とアデノシンを含む。式（Ｉ）に対応するオリゴアデニレートとそれらを含む混合物の両方を、パピローマウイルスにより誘導された皮膚と上皮病変の治療において使用することができる。乳頭腫症を治療するための、本発明に基づく２′，５′オリゴアデニレートの低投与量の表在局所的適用は広く有効であり、負の皮膚反応又は全身的副作用は全く観察されなかった。この病変の治療の効果は、患者の80％以上において完全な減少であった。３ヶ月間の観察期間の終わりにおいて、再発の証拠は全く存在しなかった。本発明に基づく調製物は、表在局所的適用のために適当なさまざまな形態において投与されることができる。これらは、標準的な技術を使用して医薬適合性担体と個々の化合物又はそれらの混合物を注意して混合又は溶解させることにより製造される。適用（外皮膚、粘膜組織、等）のための調製物の所望の形態に依存して、担体の形態はかなり変化することができる。ほとんどの多様な医薬媒質、例えば液体担体、例えば水、ジメチル・スルホキシド、アルコール、グリコール、等を含み又は含まないもの又はポマード、軟膏及び硬膏を、調製物を製造するために費用することができる。便利には、これらの調製物を単一投与量単位において製薬することが特に有用である。表現“単一投与量単位（single-dese unit ）”とは、その各１が、必要な医薬担体と併合されるとき所望の治療効果を達成するように計算された活性成分の特定量を含むような物理的に別々の単位をいう。乳頭腫症の治療における単一の適用のための対応投与量は、（直径３−５mmの）丘疹当り10^-9〜10^-8Ｍの活性成分（ｎ＝１及び／又は２）でなければならない。治療の全経過時間は、日用適用により30日間までである。以下の実施例は、オリゴヌクレオチド混合物と個々の２′，５′オリゴアデニレートの製造を説明する。２′，５′オリゴアデニレートの化学−酵素的合成、精製及び分析全反応を室温において行う。ａ）ポリ（Ａ）の合成：Ｈ⁺ 形態における0.9ｇ（2.5mmol）のアデノシン２′（３′）モノホスフェートと1.2ml（2.6mmol）のトリ−ｎ−オクチルアミンを30mlのメタノール／エタノール（１：１）に溶解し、そしてこの溶液を数時間撹拌する。次に非溶解部分をガラス・フィルターを使用して濾別し、そしてその濾液をロータリー・エバポレーターを使用して蒸発乾固させる。得られた固体を次に10ml無水ジオキサン中に溶解し、そしてロータリー・エバポレーターを使用して蒸発乾固させる。両手順を２回繰り返す。次に得られた固体を５ml無水ジオキサン中に溶解し、そしてその混合物をマグネチック・スターラーにより撹拌しながら0.77ml（3.75mmol）のジフェニルホスホリルクロライドをその上に滴下する。得られた混合物を、0.77 mlのジフェニルホスホリルクロライドと3.2mlのトリ−ｎ−オクチルアミンを添加した後１時間撹拌し、そしてその混合物をさらに４時間撹拌する。次にこの反応混合物を、撹拌しなから、５容のヘキサン／エーテル（４：６）に注ぐ。次に沈殿をガラス・フィルターを使用して濾別し、同一混合液、そして次にエーテルにより洗浄し、そして真空中で乾燥させる。得られたものは、不正規の２′，５ ′及び３′，５′−ヌクレオチド間結合をもつポリアデニレートの白色粉末である。この混合物の一般式は、（Ａ２′（３′）Ｐ−）_nＡ＞Ｐ｛ｎ＝10｝である。次に乾燥ポリマー混合物を12mlの水に溶解し、そしてそのpHを濃アンモニア溶液を添加することにより9.3に調製する。次に３容のエタノールを添加し、そしてそのpHを5M HClの添加により3.0に調整する。この混合物を−18℃において保存するときに形成される沈殿を遠心分離により取り出し、75％エタノールにより洗浄し、そして空気流中で乾燥させる。このモノマーのかなりの部分が残る。ｂ）バイナーゼ（binase）による分裂による３′，５′ヌクレオチド間結合の選択的分裂ａ）から得られた沈殿物を40mlのH₂Oに溶解し、そしてこのpHをトリス−塩基の３Ｍ溶液により7.0に調整し、その後２mlの、バチルス・インターメディアス（Bacillus Intermedius）RNAse（バイナーゼ、E.C．3.1.4.23）の溶液（150Ｅ／mg）を添加し、そして次に10〜12時間撹拌する。次にこの酵素を、同一容量のクロロホルム／イソアミルアルコール（24：１）を使用して抽出する。得られた水相は、アデノシンの２′，３′シクロホスフェートと２′，５′オリゴアデニレートの混合物を含む。ｃ）個々の化合物の単離：個の成分を分離するための手順は、HCO₃形態におけるDEAE spheron 1000（16 ×600mm，120ml）を使用してイオン交換クロマトグラフィーに基づく。ポリ（Ａ）酵素的分割生成物を除タンパクし、そして次にロータリー・エバポレーター内で８〜10倍に濃縮する。10容のエタノールを添加し、そしてその混合物を−18℃ において12時間放置する。遠心分離（3000rpmにおいて10〜20分間）後、その沈殿を水に溶解し、そして上記カラム上にロードする（260nmにおいて吸光度25,00 0〜50,000Ｅ）。このカラムを水と0.05Ｍトリエチル・アンモニウム・ビカーボネート（pH8.0）により洗浄した後、この生成物を、上記塩の線形グラジエントにおいて溶出する（0.1〜0.8Ｍ、全容量１Ｌ）。このように分離された個々の化合物を含む画分をロータリー・エバポレーター内で蒸発乾固させ、そして上記バシファー成分を完全に除去するために凍結乾燥させる。 HPLCを、以下に説明するように個々の化合物の最終的精製のために使用する（半調製用カラム上約2000Ｅ吸光度のコーティング）。HPLCを使用した溶液の脱塩を水中での洗浄後小さなDEAEカラム上での10〜20倍希釈溶液の吸収により達成する。少量の１Ｍトリエチル・アンモニウム・ビカーボネートによる溶出とその溶液の凍結乾燥をその後に行う。ｄ）HPLCクロマトグラフィーによる２′，５′オリゴアデニレートの精製と分析：イオン交換クロマトグラフィーを、NH₃ diasorb カラム（８μｍ、４×150mm 分析用、及び10μｍ 9.2×250mm 最終調製精製用）：線形グラジエント；溶出液Ａ−20％ Me0H；Ｂ−２Ｍ AmAc，20％ MeOH、１分当り２％Ｂ；流速（一定時間当りの流量）−上記分析用カラムについて0.7ml／分、そして上記調製用について４ml／分（図１〜３）を用いて行う。検出は260nmにおいてUV監視装置による。 260nmの吸光度に基づき、上記混合物は、40〜50％のモノマー、約20％〜30％のジアデニレート、約５％〜15％のトリアデニレート、２％〜８％のテトラアデニレート、及び２％〜７％のより大きなオリゴアデニレートを含む。この平均モル吸光係数は、アデノシン残基当り15×10³であり、トリマーについては36.8×1 0³であり、そしてテトラマーについては45.8×10³であった。ｅ）個々の化合物の組成の測定：各化合物を、そのシクロホスフェート基の開環のためにpH1.0（37℃において１時間）保ち、そして次にバクテリアのアルカリ性ホスファターゼにより脱リン酸化し、そしてそのヌクレオチド間結合のアルカリ加水分解に供す（0.3M NaOH ，20 ℃48時間）。その最終生成物の関係（アデノシン対アデノシン２′（３′ ）ホスフェート）をHPLCにより達成した。意図された結果は、先に与えられたものと密に一致する：ダイマーについてはAdo：AMP＝１：１、トリマーについては１：２、そしてテトラマーについては１：３である。標準偏差は５％未満であった。それらのHPLCの移動性及びNMR スペクトル（³¹Ｐ及び ¹Ｈ）により２′，３′ シクロホスフェート基の酸開環により作られた化合物は、その対応オリゴアデニレートの普通の２′（３′）ホスフェートと同一であった。他方において、得られた２′（３′）ホスフェートは、BrCN（100倍モル過剰）の効果のために室温において水溶液中の対応オリゴアデニレートの生成物２′，３′シクロホスフェートに定量的に変換された。ｆ）ヌクレオチド間結合タイプの決定：新たなバイナーゼ（binase）による個々の２′，５′オリゴアデニレートの２ ′，３′シクロホスフェートの処理は、ポリアデニル酸アデノシン２′，３′シクロホスフェートへの完全分離を導く条件下で操作され；HPLC分離特性及び³¹P NMR スペクトルにおける変化が全くない。末端シクロホスフェート基（20〜21ppm）と２′，５′−ヌクレオチド間ホスフェート（0.02〜0.4ppm）に対応するピークだけが、ダイマーについて１：１の、トリマーについて１：２の、そしてテトラマーについて１：３の関係において³¹ P NMRスペクトルにおいて決定された。標準偏差は２％未満であった。３′，５′結合（１％未満のヌクレオチド間ホスフェート）は、テトラマーについてのみ示された。オリゴアデニレートは、水（10-²Ｍまで）、ジメチルスルホキシド、水性エタノール又はグリセロール中に容易に溶解する無色の化合物である。それらは、４ ℃における中性水溶液中に数ヶ月間及び冷凍溶液（−20℃）中に溶解されて又は凍結乾燥状態で永久に残存する。薬理学的実施例上記医薬調製物の臨床的研究を、乳頭腫症患者について行った。処置を、0.1m l NaClにより所要濃度に希釈された対応化合物のNa−又はトリエチル・アンモニウム塩によった。その最終溶液中の有効化合物の濃度は、上述のモル吸光係数に従って260nmにおけるその吸光度を使用して達成された。これらの結果を以下に記載する。これらの実施例は本発明を説明するのに役立つが、これを限定するものではない。実施例１２′，５′トリアデニレート２′，３′シクロホスフェートの臨床テスト（ｎ＝１，AIII）。女性患者Ｍ．（1958）診断：会陰部にある４つの角ばったコンジローム（ｄ＝１〜２mm，ｈ＝２〜８mm）皮膚色、赤むけの（raw）、弾力性、そしてしばしば痛むもの。疾患：膣炎（colpitis）を伴う。コンジローム当り約50μｍ AIII（10-⁴Ｍ）の日用適用。４日目に、全てのコンジロームが、しわ表面を示し；８日目までに、それらは完全に消失した。８週間後に再発は全く観察されなかった。女性患者Ｐ．（1950）の診断：会陰部にある14のコンジローム（ｄ＝２〜８mm，ｈ＝２〜５mm）、弾力、皮膚色、そしてしばしば痛むもの。２週間にわたりコンジローム当り50μｍ AIII（10^-4Ｍ）の日用適用。６日目までに、全てのコンジロームが１／２〜１／３程しぼんだ。10日目までに、８のコンジロームがその皮膚にいかなる痕跡をも残さずに完全に消失した。残りの６つのコンジロームは未だ存在し、そして処置後３〜４週間それらの元のサイズを回復した。処置はさらに続けられなかった。処置終了後10週間変化は全く観察されなかった（再発、新たなコンジロームの形成は全くなかった）。女性患者Ｃ．（1958）の診断：足の親指の下側にある足裏いぼ（ｄ＝５mm，ｈ＝３mm）、小さく（compact）、周囲組織と同じ色の、外表面がざらざらし、そして歩くときにかなり痛むもの。いぼ当り50μｍ AIII（10^-4Ｍ）の日用適用。６日目にそのいぼは柔らかくなり、そしてそのいぼの表面は機械的にこすり落された。10日目までに、このいぼは完全に消失し、そして歩くことはいずれの痛みも引き起こさなかった。12週間後の診断において、再発は全く観察されなかった。患った皮膚表面領域は周囲組織から区別することができなかった。女性患者Ｃ．（1926）の診断：７つの乳頭腫が喉の前と右側にあり、２つが大きく（ｄ＝３と２mm，ｈ＝2.5mm、暗褐色）そして５つが小さい（ｄ＝0.8〜1.5m m，ｈ＝0.8〜1.5mm、皮膚色）ものであった。この乳頭腫は閉経の間1982年に現れた。２週間乳頭腫当り約50μｍ AIII（10^-4Ｍ）の日用適用。５日目に小さな乳頭腫がうすく、しぼんで、そして平らになった。さらなる変化は観察されなかった。処置後２〜３週間、乳頭腫はそれらの元の形態とサイズを回復した。実施例２２′，５′テトラアデニレート２′，３′シクロホスフェートの臨床テスト（ｎ＝２，AIV）。女性患者Ｓ、27歳の診断：胃に普通のいぼ、臍の下３cm、灰色、突出、直径２〜３mm。このいぼをAIV（10^-5Ｍ）の１〜３滴により毎日処置した。処置開始後７〜10日目に、すべてのいぼはしぼみ、そして平らになった。処置終了後３週間の間に、これらのいぼの中の１が完全に消失し、そして処置終了後４週間目に他の全ても消失した。きず跡のようなものの変化はその皮膚に全くなかった。多数のいぼをもつ７の他の患者、コンジローム（６患者）、普通のいぼ（３患者）及び非同定いぼ（４患者）をAIVの水溶液（10^-5Ｍ）により２週間毎日処置した。コンジロームは、外性器及び胸の上にあり、手首、体、そして脚の上にもあった。ほとんどのケースにおいて、コンジロームといぼ（特に前者）は、処置後６〜９日間でしぼんだ。処置後１〜２週間又は処置の間、３患者は、既にコンジロームを全くもたず、そして２患者がもはや普通のいぼを示さなかった。１患者は、処置後凡そ６週間に腋窩の下の６つのコンジローム全てを完全に失った。２つのケースにおいては、外性器上の小さなコンジローム（ｄ＜３mm，全11）が処置の間又は処置後に消失し、同一領域内の大きなもの（ｄ＞５mm、第１ケースにおいて２つ、第２ケースにおいて３つ）が処置後２〜６週間の間にそれらの元のサイズを回復し、そして形成された。６つの非同定いぼの中の２が処置後２〜３週間の間に消失したが、他は全く反応を示さなかった。陰性反応、その皮膚上のきず跡又は再発は処置の間又はその後８〜12週間の間に１のケースにおいては観察されなかった。実施例３混合物Ａ（２′，５′オリゴアデニレート２′，３′シクロホスフェートの混合物）の臨床テスト（ｎ＞０）。２患者をテストした。１は首に３つの普通のいぼ（３〜４mm）をもち、そして他はその脚の内側に２つの尖圭コンジローム（comdylomata acuminata）をもつ。それぞれのいぼを混合物Ａの10^-4 Ｍ水溶液の１〜２滴により毎日塗った。処置９日目に、全ての普通のいぼが消失した。１つの小さなコンジロームは処置７日後に消失し、他は処置後３週間の間に、すなわち処置開始後５週間の間に消失した。達成された結果は、ヒト・パピローマウイルスにより引き起こされる皮膚と上皮病変の治療のための研究及び手順の下での本化合物の高い有効性をはっきりと示す。２′，５′オリゴアデニレートによるパピローマウイルスの処置は、痛みのある又は炎症性反応により又は症状の主観的又は客観的悪化を単一ケースにおいて伴わなかった。ひじょうに低い投与量における２′，５′オリゴアデニレートの高い臨床的有効性及び表在局所的反応及び全身的副作用の非存在並びに常習性（recidivism）の欠如は、乳頭腫症の治療を考えるに当っての本化合物の利点を立証する。乳頭腫症の治療における同様の結果が、既に馴染みのある化合物、すなわち中性アデノシン残基及び３−末端アデノシン残基上に２′（３′）ホスフェート基（シリーズＢ）又は遊離の２′と３′ヒドロキシル基（シリーズＣ）をもつ２′ ，５′オリゴアデニレートを使用しても達成された。これらのケースにおいては、両単離化合物、例えば、トリマー及びテトラマー又は他のオリゴマーとそれらの混合物（トリマーＢとＣ、テトラマーＢとＣ、混合物ＢとＣ）が外部パピローマウイルスの治療において広く有効であることが証明された。図面の説明図１：混合物Ａ（２′，５′オリゴアデニレート２′，３′，シクロホスフェート）のHPLC分析。カラム：diasorb NH₂，４×150mmの移動相：Ａ−20％ CH₃0H;Ｂ−2 0％CH₃OH 中2M AcONH₄；流速：0.7mｌ／分；０′−２′−１％Ｂ，２′−14′− 0.5％Ｂ／分，14′−50′−２％Ｂ／分。260nmにおける検出。260nmにおける吸収に対応する混合物の組成：23％モノマー（8.7分），22.5％ダイマー（17.5分），14％トリマー（23分），6.8％テトラマー（26.8分）。図２：精製された２′，５′トリマー（Ａ）とテトラマー（Ｂ）２′，３′シクロホスフェートのHPLC分析。カラム、移動相の組成及び流速は図１におけるものと同じ、グラジエント−２％Ｂ／分。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ピバシャン，アーマンディー. アメリカ合衆国，コネチカット 06511, ニューヘイブン，ホウランシーストリート 132 【要約の続き】

Claims

【特許請求の範囲】１．以下の一般式：｛式中、０≦ｎ≦10、特に≧０〜10、好ましくは１又は２。｝をもつ２′，５′ オリゴアデニレート２′，３′シクロホスフェート。２．アデノシン２′（３′）ホスフェートが不正規の３′，５′及び２′，５ ′ヌクレオチド間結合をもつポリ（Ａ）に重合し、そしてこのポリマーがバチルス・インターメディアス（B．intermedius）由来のRNAse（E.C.3.1.4.23）により処理されるような同定可能なやり方で区別される、請求項１に記載の化合物の製造方法。３．パピローマウイルスにより引き起こされる良性又は前癌性の皮膚及び粘膜病変のための医薬調製物であって、請求項７に記載の化合物の中の１を含み又はその中でそれが、医薬として適当な担体又は溶媒と併合された活性成分であるような混合物を含むような医薬調製物。