JPH09505804A

JPH09505804A - 抗ウイルス剤としてのフラビン誘導体

Info

Publication number: JPH09505804A
Application number: JP7511518A
Authority: JP
Inventors: オデュアアユコ、ワシントン
Original assignee: ラドパスリミテッド
Priority date: 1993-10-19
Filing date: 1994-10-19
Publication date: 1997-06-10
Also published as: CA2174552A1; AP620A; HRP940688A2; GB9421099D0; BG100599A; PL314008A1; CZ113796A3; MD960168A; JO1866B1; AU7943794A; MA23356A1; WO1995011028A1; BR9407862A; NO961547L; EP0739208A1; CN1140992A; UY23844A1; CO4520283A1; PE5596A1; AP9400695A0

Abstract

(57)【要約】抗ウイルス剤としてヒトに投与される種々のフラビン誘導体を開示する。とくに好ましい具体例は、リボフラビンおよびリボフラビン誘導体である。

Description

【発明の詳細な説明】抗ウイルス剤としてのフラビン誘導体本発明は、抗ウイルス剤およびウイルス感染、とくにＨＩＶ感染に引き起こされる病的な影響を、ヒトおよび動物患者の処置において緩和するかまたは治癒するための前記抗ウイルス剤の用途に関する。数種のＨＩＶ−１株の感染に対するその効能を評価するために、本発明の化合物の詳細な研究を行なった。それら化合物は、ＨＩＶに対して、急性的に感染させた（acutely infefcted）細胞も慢性的に感染させた（chronically infected）細胞も双方において同様の活性を有する。これは、ＨＩＶ感染の治療に現在用いられているほかの化合物とはほんの臨時に関連するだけ２重特性であるが、しかし、ＨＩＶの複製サイクルの初期に作用してｖＤＮＡの宿主染色体への組込みをブロックする化合物によって、デ・ノバ（denova）（急性的）感染の細胞を処置してもよい。この組込みとは、感染症が慢性状態に入ることを意味する。したがって、ＨＩＶの組込み後（post− integration）に作用する化合物は、慢性的に感染した細胞の阻害剤である。たとえば、ジドブジン（Zidovudine（ＡＺＴ））はＨＩＶのデ・ノバ感染に対してのみ活性があり、慢性的に感染させた細胞に対しては有意な活性を有さない。ＨＩＶ（（＋）（positive）鎖ＲＮＡウイルスである）の遺伝子発現の阻害剤は、それゆえＨＩＶ慢性感染細胞に効力を有するのであろう。ＨＩＶはヒトに影響を及ぼす（＋）鎖ＲＮＡウイルスである。このウイルスは、表面レセプターＣＤ４へビリオンが吸着することにより、細胞膜へ付着する。そのビリオンはそののち細胞膜を貫通して通過し、細胞の細胞質へ入りこむ。そののち、ビリオンの脱外被が細胞質でおこり、それによりウイルスのエンベロープおよびゲノムの外被タンパクが、細胞質中へウイルスのＲＮＡを放出する。そこでの逆転写により、宿主細胞の遺伝子材料から二本鎖ＤＮＡの転写物が生産される。これが宿主細胞の核へ侵入し、宿主細胞染色体ＤＮＡに組込まれる。ｖＲＮＡ複製物の生産に引き続いて転写が行われ、細胞質で翻訳されて新しいウイルスタンパク質を産生する。つぎに、後者は細胞表面の内側でｖＲＮＡとともに集まり、宿主細胞から放出される新しいウイルス粒子を産生する。ＨＩＶは通常初期の無症候の段階に関連する。この初期の無症候の段階は、ＨＩＶの病気の初期の兆候がおこる前に、長年続くこともある。細胞死を引きおこす多くの見解が提案された。アポトーシスがそのうちの１つである。これは細胞内の酸化剤−抗酸化剤（oxidant−antioxidant）の適切な平衡を保とうとする細胞内過程を含む、多くの生理的または病理的な過程においての細胞のプログラム死の形態学的に特有の形態である。Ｔ細胞の細胞死はこの平衡をとる過程と密接に関係がある。ＨＩＶ感染はこの平衡を乱し、細胞死が選ばれると徐々に考えられている。通常の様式で細胞が成長して分裂するかどうかを決定するときのもうひとつ決定的要因は細胞内ＡＴＰ濃度である。ＡＴＰの低い細胞内レベルは虚血性の死に関連する。Ｔ−リンパ球はとくに細胞内ＡＴＰレベルの枯渇に対して弱い。ＨＩＶ感染は、細胞のＡＴＰレベルに応答して細胞の過程である細胞の酸化的リン酸化を妨げているのかもしれない。原因がいずれにせよ、結局は細胞死によりＡＩＤＳを引きおこすレベルまで細胞の枯渇が導かれるであろう。抗ウイルスの研究の分野における現在の研究の多くは、酵素をコードする特定のウイルスのターゲティングに関係する。この研究から発見された化合物は、原則的に、細胞の過程に対して低い毒性を有するべきである。ＨＩＶ感染の治療における臨床試験での化合物の長期の使用は、当初望んだ程度の効果を与えず、したがって新しい研究法が必要とされている。リボフラビンは既知の化合物であり、また、Ｅ１０１、ラクトフラビン、リボフラビン、リボフラビナム、ビタミンＢ₂、ビタミンＧ、７,８−ジメチル−１０−（１′−Ｄ−リビチル（ribityl）イソアロキサジンおよび３,１０−ジヒドロ−７,８−ジメチル−１０−（Ｄ−リボ−２,３,４, ５,−テトラ−ヒドロキシペンチル）ベンゾプテリジン−２,４−ジオン、として様々に知られている。リボフラビンは前記のようにかまたはそのリン酸ナトリウムもしくは酪酸エステル塩として、前者の例では代表的には二水和物の塩として商業的に入手可能である。また、ほかのビタミンとの様々な混合物で入手することも可能であり、すべて本質的には、ビタミンＢ欠乏症を処置するためのものである。そのような混合物では、リボフラビンの用量は、０. ５から１０ｍｇのあいだで変わり、１日あたり薦められる用量は３０ｍｇである。リボフラビンの用途について不利な効果は報告されていない。しかしながら、相当な用量のリボフラビンは、ある実験用のテストの妨害をするかもしれない尿の明るい黄（bright yellow）の変色を導く。ヒトが必要とするリボフラビンは、しばしばエネルギー摂取量に関係するが、安静時の代謝の必要量とより親密に関係するように思われる。毎日約１.３から１.８ｍｇのリボフラビンを食事で摂取することが薦められ、換言すれば、基本的には４２００kj（１０００kcal）の食事につき５５０μｇのリボフラビン摂取が薦められる（国際連合食糧農業機関（ＦＡＯ）／世界保健機関（ＷＨＯ）共同専門グループ（Ｅxpert Ｇroup）、Ｔech.Ｒep.Ｓer.Ｗld１１１th Ｏrg.Ｎo. ３６２、１９６７の報告による）。許容しうる１日のリボフラビン摂取量の評価は、体重ｋｇあたり５００μｇまでである。国際連合食糧農業機関（ＦＡＯ）／世界保健機関（ＷＨＯ）共同食品添加物専門委員会（Ｅxpert Ｃommittee on Ｆood Ａdditives）、Ｔech.Ｒep. Ｓer、ＷＨＯ.Ｎo.４４５、１９７１の第１３報告参照。水溶性ビタミンであるリボフラビンは、食物からエネルギーを利用することが必須である。活性型のリン酸化された形である、フラビンモノ−ヌクレオチドおよびフラビンアデニンジヌクレオチドは、酸化的／還元的代謝反応での補酵素として含まれる。ほかの様々なフラビン類およびその誘導体もまた、矯正剤として知られている。驚くべきことに、ほかのフラビン類およびその誘導体と同様に、従来用いられていたまたは薦められていた用量よりもかなり多い用量でのリボフラビンの投与は、様々な感染、とくにＨＩＶの管理および処置にきわめて効果的でありうるということが、現在わかった。その化合物の構造は、細胞内での酸化的リン酸化の過程に関係することを示している。本発明の化合物が、ＨＩＶと同じターゲットを優先的に標的に定め、それゆえウイルスを生ずる能力を含む感染の発現に抵抗するかまたは妨害するということが可能となる。したがって、本発明の１つの観点は、ウイルス感染の管理および処置用薬剤の製造のための、フラビンとくにリボフラビンまたはその誘導体の用途を提供する。さらに、あるフラビン類およびその誘導体が薬剤として、さらに一般的意味においてリボフラビン（酵素の補因子ビタミンとして知られる）を用いる薬剤として知られていない限り、本発明の第２のより広い観点は、抗ウイルス剤として用いるためのそのようなあるフラビン類またはその誘導体を提供する。本発明の用途において、リボフラビンまたはほかのフラビンは、それ自体または誘導体として用いることが可能であり、またフラビン誘導体は、ヒトまたは動物に用いても安全である誘導体であればいかなる誘導体であってもよい。しかしながら、リボフラビンのばあい、好ましくは誘導体はリボフラビンの塩であり、さらに好ましくはリボフラビンの塩はリン酸リボフラビンナトリウムまたはリボフラビンテトラブチレートである。最も好ましくは、フラビンまたは誘導体は高い純度のものであり、また疑似成分の混入は避けるべきである。より一般的な用語では、本発明に用いられるフラビンまたは誘導体は、式（I ）：（式中、ＸはまたはＣＨ₃（ルミフラビン）を表わす）で示される化合物として定義することができる。さらに前記式（Ｉ）において基Ｘはアルキル、または水素または芳香族もしくはほかの環状炭化水素基であってもよい。さらには、本発明の用途は、（Ａ）式：のルミクローム、（Ｂ）式：のロゼオフラビン（Roseoflavin）、（Ｃ）Ｂ−ヒドロキシフラビン（Ｂ−Ｈydroxyflavine）、アロキサジン（allox azines）またはそれらのほかの誘導体：（式中、Ｒはリビチル、アルキル、または水素、Ｘは水酸基、臭素、塩素、−ＳＨ、ＯＡｌｋまたはＳＡｌｋを表わす）のようなフラビン類または誘導体を用いると考えられてもよい。前記のいくつかの具体例は、（式中、Ｒは前記と同じ）である。（Ｄ）８α−Ｎ（３）−ヒスチジルフラビン類（histidylflavins）（式中、Ｒはリボフラビン誘導体のためのリビチル側鎖を示す）。（Ｅ）８αＮ（１）−ヒスチジルフラビン類：（式中、Ｒはリボフラビン誘導体のためのリビチル側鎖を示す）。（Ｆ）８α−システイニルフラビンチオエーテル類、（Ｇ）６−Ｓ−システイニルフラビンチオエーテル類、（Ｈ）ルミフラビン類、（式中、ルミフラビン自身のためにはＲ₁＝Ｒ₄＝Ｈ、Ｒ₂＝Ｒ₃＝ＣＨ₃）。（Ｉ）５−デアザフラビン類（５−Deazaflavins）。これらは、以下の式：（式中、置換基は以下の定義のとおりである：）で示されてもよく、およびそれについての誘導体はつぎのようである：のようなその誘導体でもよい。（Ｊ）リボフラビン、ＦＭＮ、およびＦＡＤの５−カルバ−５−デアザ（５−ca rba−５−deaza）および１−カルバ−１−デアザ類似体これらはリボフラビン類似体（Ｘ）、５−カルバ−５−デアザリボフラビン類似体（ＸＩ）、および１−カルバ−１−デアザリボフラビン類似体（ＸＩＩ）により説明することもあり、つまり：である。（Ｋ）フラビン１,Ｎ⁶−エチエノアデニンジヌクレオチド（Ｌ）シゾフラビン類および誘導体前記は、シゾフラビン類の化学構造であり、リボフラビンからの形成を示す。ＳＦ₂およびＳＦ₁はそれぞれ、７,８−ジメチル−１０−（２,３,４−トリヒドロキシ−４−ホルミルブチル）イソアロキサジンおよび７,８−ジメチル−１０ −（２,３,４−トリヒドロキシ−４−カルボキシブチル）イソアロキサジンとして同定しうる。ほかのフラビン類は３−カルボキシメチルリボフラビン３−カルボキシメチルＦＭＮ７−アミノ−１０−（１′−Ｄ−リビチル）イソアロキサジン８−アミノ−７,１０−ジメチルイソアロキサジン８α（Ｓ−メルカプトプロピオン酸）リボフラビン８α（Ｓ−メルカプトプロピオン酸）ＦＭＮ８α（Ｎ−アミノヘキシル）ＦＭＮ９−アゾベンゾイルＦＭＮ１０−（ω−カルボキシアルキル）７,８−ジメチルイソアロキサジンにより示されることができる。本発明の用途では、リボフラビンのようなフラビン、またはその誘導体は、一般に用いられるまたは薦められる用量より相当多くの、高用量を用いるのが好ましい。このように、典型的に臨床試験におけるリボフラビンまたはほかのフラビンは、本発明では１日あたり少なくとも約１〜約１００またはそれより多くの（たとえば１０またはそれより多く）ｍｇ／ｋｇ体重の投薬計画（regime）で用いる。加えて、本発明にしたがう好ましい用途は、医薬が経口投与形態、とくにカプセル（たとえば、２部（two-part））として用いる。加えて、またはかわりに、本発明はウイルス感染の管理および処置において、ならびに組成物がここに記載もしくは定義されたリボフラビン、またはその誘導体のようなフラビンを５０ｍｇまたはそれ以上（たとえば５０〜２００または５０〜１００ｍｇなどの５０〜３００ｍｇ）のような少なくとも約３５ｍｇの単位投用量からなる単位投薬形態において、薬学的または獣医学的に許容しうる希釈剤、賦形剤もしくはキャリアとともに使用するための薬学的または獣医学的組成物からなる。本発明にしたがう組成物は、好ましくは単位投用量が約３５ｍｇ〜約１０００ｍｇにおけるものである。さらに好ましくは、単位投用量は約２５０〜５００ｍｇである。加えて、本発明にしたがう組成物は経口または注射可能な形態であることが好ましい。これに関連の範囲内で、好ましい組成物は滅菌水における溶液としてのものである。本発明はまた、ウイルス感染の管理および処置に用いるための医薬の製造法であって、抗ウイルス用途のためのリボフラビンのようなフラビン、または酪酸エステル塩のような誘導体を製剤化することからなる方法も含む。ありがたいことに、前記の記載にしたがう方法は、ここに記載された１またはそれ以上の追加の特徴を用いて実施することもできる。さらに、本発明は抗ウイルス治療において同時に、別個に、または連続して使用するための組み合わされた製剤として抗ウイルス活性を有するほかの化合物類とともに、抗ウイルス剤としてリボフラビンのようなフラビン、またはその誘導体を含有するプロダクトを含む。また、前記の記載にしたがうプロダクトは、本発明において記載するところの１またはそれ以上のほかの特定の特徴を含むものでありうる。さらに、本発明はリボフラビンのようなフラビンまたはその誘導体の有効量を経口または非経口投与することからなる、ウイルス感染処置のための方法を含む。本発明にしたがう方法では好ましくは、投与される量は、１〜１００（たとえば、少なくとも１０）ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。さらに、本方法はウイルスがヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶであるばあいにとくに有用である。再び、本発明にしたがう方法は、本発明に記載する１またはそれ以上のほかの特定の特徴を含みうる。最も好ましくは、フラビン−アデニンジヌクレオチド、ルミフラビン、ルミクローム、またはとくに、式を以下にのべるリボフラビンテトラブチレートである。イン・ビトロアッセイ以下のイン・ビトロアッセイを本発明にしたがう化合物のＨＩＶに対する抗ウイルス活性を研究するために用いた。１急性の感染アッセイ１.１標準（Ｓtandard）急性アッセイヒト免疫不全ウイルスＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−１１１Ｂ）の高力価のウイルス株を、１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ1640を増殖培地として用い、Ｈ９細胞中で増殖させた。細胞の残がいを低速遠心によってとり除き、必要となるまで上清を−７０℃で貯蔵した。代表的なアッセイにおいて、Ｃ８１６６Ｔ−リンパ芽球（Ｔ−lymphoblastoid）細胞を１０ＴＣＩＤ₅₀ＨＩＶ−１と３７℃、９０分間インキュベートし、そののちリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で３回洗浄した。２×１０⁵ 細胞のアリコートを６ｍｌの培養チューブで１.５ｍｌの増殖培地に再懸濁し、試験化合物を０.２〜２００μＭの対数希釈で、ただちに加えた。試験化合物を７０％エタノールに溶解し、培養におけるアルコールの最終濃度は１％未満であった。培養は５％ＣＯ₂において３７℃で７２時間インキュベートし、２００μ ｌの上清を各培養から取り、すべてのコアタンパク質を等しく認識する市販のＥＬＩＳＡ（コールター・エレクトロニクス・エルティーディー（Ｃoulter Ｅlec tronicsＬｔｄ）製、ルートン（Ｌuton）、イギリス国）を用いてＨＩＶｐ２４コア抗原に対する４５０ｎｍの光学密度測定によりアッセイした（キンチントン（Ｋinchington）ら１９８９年、ロバーツ（Ｒoberts）ら１９９０年）。ＩＣ₅₀ 値を決定するため、標準曲線を１％未満アルコールを含む非処理培養から描いた。ＡＺＴおよびｄｄＣを内部（internal）対照として用いた。アッセイは二重に実施した。１.２培地枯渇（depleted）アッセイ標準アッセイ系において、アッセイ前に培養細胞を採取し、分けて、そして約１８〜２４時間新鮮な培地を与えた。新鮮な培地の添加は、細胞が対数増殖期に入るのを刺激する。培地を枯渇させた条件における相互影響（cofluence）に達する細胞の効果を調査するため、培養細胞を標準急性アッセイに用いる前に７２、４８および２４時間で育て、分けた。１.３光暴露アッセイ新鮮に溶解した試験化合物の試料を２つのアリコートに分けた。それらを標準急性アッセイに付す前に２時間明所（daylight）または暗所のいずれかに置いた。１.４プレインキュベーションアッセイ標的細胞をＨＩＶ−１の感染前に２００〜０.２μＭの対数希釈で試験化合物と１８／２４時間プレインキュベートした。そののち各試料濃度を個別に標準急性アッセイ用とした。２慢性感染細胞に対するアッセイ２.１標準慢性アッセイＨＩＶ−１ｒｆに慢性的に感染したＨ９細胞（Ｈ９ｒｆ）を細胞外ウイルスをとり除くため培地で３回洗浄し、３日間試験化合物（２００〜０.２μＭ）とインキュベートした。そののち、急性感染標準アッセイで記述したように、４５０ｎｍの光学密度測定により、ｐ２４抗原を決定した。ＩＣ₅₀値を決定するため、１％アルコールを含有する非処理培養から標準曲線を描いた。ＲＯ３１−８９５９（ロシュ（Ｒoche）、プロテアーゼインヒビター）を内部対照として用いた。アッセイは二重に実施した。２.２培地枯渇アッセイ標準アッセイにおいて、アッセイ前に培養細胞を採取し、分けて、そして約１８〜２４時間新鮮な培地を与えた。新鮮な培地の添加は、細胞が対数増殖期に入るのを刺激する。枯渇させた培地の条件における相互影響に達する細胞の効果を調査するため、標準急性アッセイに使用する前に、培養細胞を７２、４８および２４時間で育て、分けた。２.３光暴露アッセイ新鮮に溶解した試験化合物の試料を２つのアリコートに分けた。それらを標準慢性アッセイに付す前に、２時間明所または暗所のいずれかに置いた。３毒性アッセイ化合物の毒性を試験するため、２×１０⁵非感染細胞のアリコートを同じ対数希釈で試験化合物と７２時間培養した（１.１および２.１）。そののち、培地で細胞を洗浄し、Ｃ¹⁴タンパク質加水分解産物を含有する２００μｌの増殖培地に再懸濁した。細胞を５または２０時間後に採取し、Ｃ¹⁴取込みを測定した。非処理細胞を対照群として用いた。アッセイは以下の表１で確認される化合物を適用した：初期のアッセイを、予備段階の結果（preliminaryresults）を達成するため表２に記載された多くの化合物に関して実施した。表２におけるＩＣ₅₀の結果を確認した；それらは再び実施した（re−run）従来のアッセイと一致しない。アッセイの結果を以下の図面を形成するグラフおよびつぎに続く表２〜１０において示す。図１：化合物Ｆ２,Ｆ４（最初の抗原アッセイ）およびＦ５についての濃度（μ Ｍ）に対する４５０ｎｍにおける抗原の光学密度。ＯＤ0.371における点線はＩＣ₅₀（活性）を示す。図２：化合物Ｆ１およびＦ３についての濃度（μＭ）に対する４５０ｎｍにおける抗原の光学密度（ＯＤ）。ＯＤ０.３７１における点線はＩＣ₅₀（活性）を示す。図３：化合物Ｆ２,Ｆ３,Ｆ４（最初の毒性アッセイ）およびＦ５についての濃度（μＭ）に対するＣ¹⁴取り込み（ｄｐｍ）で示された毒性。６０３５ｄｐｍにおける点線はＣＣ₅₀（非毒性）を示す。図４：化合物Ｆ１についての濃度（μＭ）に対するＣ¹⁴取りこみ（ｄｐｍ）で示された毒性。６０３５ｄｐｍにおける点線はＣＣ₅₀（非毒性）を示す。図５：化合物Ｆ４（２番目の抗原アッセイ）についての濃度（μＭ）に対する４５０ｎｍにおける抗原の光学密度（ＯＤ）。ＯＤＯ.３７１における点線はＩＣ₅ ₀ （活性）を示す。図６：化合物Ｆ４（２番目の毒性アッセイ）についての濃度（μＭ）に対するＣ¹⁴ 取りこみ（ｄｐｍ）で示される毒性。６０３５ｄｐｍにおける点線はＣＣ₅₀（非毒性）を示す。図７：Ｆ６およびＦ７化合物についての濃度（μＭ）に対する４５０ｎｍにおける抗原の光学密度（ＯＤ）。ＯＤ０.３７１における点線はＩＣ₅₀（活性）を示す。図８：Ｆ６およびＦ７化合物についての濃度（μＭ）に対するＣ¹⁴取りこみ（ｄｐｍ）で示された毒性。６０３５ｄｐｍにおける点線はＣＣ₅₀（非毒性）を示す。図９：抗原対照（ｄｄＣ）表に示すように、試験化合物はＨＩＶに急性および慢性的に感染した細胞に対する活性について評価された。抗ウイルス性（ＩＣ₅₀）および毒性（ＣＣ₅₀）のデータを以下に示す。実験のほかのシリーズでは、感染前に新鮮な培地を７２、４８および２４時間添加した細胞培養において化合物を試験した。本実験は、活動的に分裂している状態および休止状態において化合物の細胞に対する効果を調査するために実施した。本データは、休止時に細胞が前記試験化合物に対してより感受性を有するであろうことを示唆する。安定性、標的細胞のプレインキュベーションおよびアフリカのＨＩＶ−１単離物への活性に対する光効果もまた調査した。２時間の光暴露は化合物の活性に影響がなかった。前記標的細胞とのプレインキュベーションはその活性を増強し、前記アフリカＨＩＶ−１単離物に対し有意な活性を示した。化合物Ｆ７に観察される末端（end points）における変異（variation）は、標的リンパ芽球細胞の特性によるためであろう。同調培養においてさえ、細胞のサブ−ポピュレーションの代謝状態において微妙な変化があるかもしれない。このことは、アッセイからアッセイへの対になった（paired）抗ウイルス性および毒性値において観察される末端における変化（shift）を反映している（表３）。表５および６の表にした結果は、活動または静止状態における細胞培養は前記化合物に対して異なった感受性を有することを示す。患者の治療患者３５名を治療下においた。３０名を引き続いて医療の往診（medical visi ts）を行なった。ｉ）患者の概活的状況追跡調査のためにやって来た３０名中２０名の患者は、自分の概括的状況における改善を報告した。これらの大多数は、倦怠感、食欲および体重に関する限り、改善を報告した。治療のあいだ、新しい皮慮部位が発達しないと報告する者もいたが、２名の患者は、皮慮の後退部位（regression of skin lesions）での皮疹の改善をも報告した。１名の患者もまた、不能症（療法の開始に先立つ３ケ月間あらわれていた）における改善も報告したが、一方で２名のほかの患者は長期にわたる鼻感冒が止まったことを報告した。 ii）病気の往診（sick visits）ほとんどの患者は、予定外の病気の往診に対して診療所には来なかった。１.１名の患者は、治療上ずっと続いていた敗血症性の関節炎のみならず再発生腫瘍も有していた。２.２名の患者が再発生下気道炎を有し、治療の第２週のあいだ１人は明白な気管支性肺炎が発生していた。ＡＡＦＢＳに対して繰返されたスミアは陰性であり続けた。３.２名の患者は、局所微候のない発熱があり、マラリア寄生虫に対し、繰返された血管スミアは陰性であった。これらの患者の１名は、アモキシシリンに対してよく反応し、現在無熱性である。４.１名の患者は、治療の第３週のあいだ胃腸炎を有していた。５.口腔性カンジダ症および外陰性腔炎が２名の患者により報告され、一連のナイスタチンペッサリーおよび錠剤を終らせるやいなや、外陰性腔炎は再発している。６.２名の患者もまた、陰部単純庖疹の再発を報告している。 iii）毒性報告されたほとんどの患者の毒性は治療の最初の２週間に生じ、一過性であった。２名の患者は治療の第１週のあいだ平均して４日間のかゆみを経験し、助けとなる投薬なしに自然に治った。４名の患者は、治療の最初の２週のあいだに、緩漫な下痢を報告した。これは平均して４日間であった。このことは、それが副作用またはＨＩＶ感染の自然徴候であるかのあいだに起因すると考える困難な症状であった。しかし、治療の第１週におけるその見かけの一致性およびその一過性の性質は、それを副作用であることを支持するには理にかなっている。１名の患者は嗜眠状態を報告し、ほかの患者は、自分の尿の黒ずみを報告した。ＭＳＵは正常であった。２名の患者は、腹部不快感を報告した。 iv）実験結果３名の患者は、治療の第２〜３週のあいだ、肝臓病の臨床的徴候なしに、肝酵素において一過性の上昇を有した。しかし、前記酵素レベルはいつも正常に戻った。前記の臨床試験結果は、カプセル型での経口投与による化合物Ｆ７を用いて数週間、一般に（currently）進行中であった臨床試験の予備的な結果である（前記カプセルは以下の実施例４に記載したカプセルである）。投薬は：用量レベル１：２分割投薬において経口的に１日あたり１ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル２：２分割投薬において経口的に１日あたり２ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル３：２分割投薬において経口的に１日あたり１０ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル４：２分割投薬において経口的に１日あたり１５ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル５：２分割投薬において経口的に１日あたり２０ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル６：２〜３分割投薬において経口的に１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル７：２〜３分割投薬において経口的に１日あたり４０ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル８：２〜３分割投薬において経口的に１日あたり５０ｍｇ／ｋｇ体重用量レベル９：２〜３分割投薬において経口的に１日あたり１００ｍｇ／ｋｇ体重以下の特殊な実施例は、本発明にしたがい考察した組成物を説明するものである。実施例１ウイルス感染処置における１日あたり１回の投与に、１０ｍｇのリボフラビンの単位投薬を提供するための製剤は以下のように調製されうる。リボフラビン−５−リン酸１０ｍｇ滅菌水２ｍｌ実施例２ウイルス感染処置における１日あたり１回の投与に、３０ｍｇのリボフラビンの単位投薬を提供するための製剤は以下のように調製されうる。リボフラビン−５−リン酸３０ｍｇ滅菌水２ｍｌ実施例３実施例１および２の製剤と同様の製剤を各々以下の用量で調製しうる。１０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、および５０ｍｇ／ｍｌそれらは２ｍｌまたは５ｍｌのいずれかの単位量の滅菌水においておよび有効成分：リボフラビン５′リン酸リボフラビンフラビンアデニンジヌクレオチドルミフラビンルミクロームまたはその混合物にもとづいて調製しうる。実施例４以下のカプセルが製剤化された。サイズ：２５ｍｇ５０ｍｇ１００ｍｇ２００ｍｇ４００ｍｇタイプ：２部分ハードゼラチン（２−part hardgelatin）組成物：結晶質のフェニルセルロース（microcrystallinecellulose Ph、Eu r）１６６.４／１５６.７／１１８.６／１０８.７／５０ｍｇと化合物Ｆ７との混合物で１９１.４／２０６.７／２１８.６／３０８.７／４５０ｍｇのカプセル重量が与えられた。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９５年１２月１９日【補正内容】（請求の範囲第１項ないし第１８項を以下のように補正する。）請求の範囲１．フラビン化合物がリボフラビン−５′−リン酸、フラビンアデニンジヌクレオチド、ルミフラビン、ルミクローム、リボフラビンテトラニコチネートまたはリボフラビンテトラブチレートであることを特徴とする、フラビン化合物または２種以上からなるそれらの混合物の、ＨＩＶ感染に起因する疾患の予防または治療のための処置用医薬の製造のための用途。２．フラビン、フラビン誘導体または２種以上からなるそれらの混合物の、ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置用医薬の製造のための用途。３．リボフラビン誘導体がリボフラビン塩である請求の範囲第２項記載の用途。４．リボフラビン塩がリン酸リボフラビンナトリウムまたはリボフラビンテトラブチレートである請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかに記載の用途。５．フラビンまたはフラビン誘導体が一般式：（式中、Ｒは水素またはアルキルを表わし、Ｒ₁およびＲ₄は各々独立して水素、アルキル、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシル、アルキルチオ、チオールまたは任意に置換される芳香族もしくは非芳香族チッ素複素環を表わし、Ｘは（i）水素、リビチル、アルキル、水素または芳香族もしくは非芳香族炭素環を表わすか、（ii）一般式： −ＣＨ₂−（ＣＨＯＨ）_n−Ｙ（式中、ｎは３または４の整数であり、Ｙは−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは −ＣＯＨまたは式：で示される基である）で示され、Ｒは水素またはアルキルを表わし、Ｗ₁およびＷ₂は、それぞれ独立してアルキル、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシル、アルキルチオ、チオールまたは任意に置換される芳香族もしくは非芳香族チッ素複素環を表わす）で示される化合物である請求の範囲第２項記載の用途。６．フラビンまたはフラビン誘導体が一般式：（式中、Ｘは（i）水素、リビチル、アルキル、水素または芳香族もしくは非芳香族炭素環を表わすか、（ii）一般式： −ＣＨ₂−（ＣＨＯＨ）_n−Ｙ（式中、ｎは３または４の整数であり、Ｙは−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは −ＣＯＨまたは式：で示される基である）で示され、Ｒは水素またはアルキルを表わし、Ｗ₁およびＷ₂は、それぞれ独立してアルキル、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシル、アルキルチオ、チオールまたは任意に置換される芳香族もしくは非芳香族チッ素複素環を表わす）で示される化合物である請求の範囲第２項記載の用途。７．フラビンまたはフラビン誘導体が一般式：（式中、Ｒ₁は水素またはアルキル基を表わし、Ｒ₂はアルキル基またはリビチル基、およびＲ₃は水素または、アルキル基での外側の炭素環の一置換もしくは二置換を表わす）で示される化合物である請求の範囲第２項記載の用途。８．フラビンまたはフラビン誘導体がルミクローム、ロゼフラビン、ヒドロキシフラビン、アロキサジンもしくはその誘導体、８α−Ｎ（３）−ヒスチジルフラビン、８α−Ｎ（１）−ヒスチジルフラビン、８α−システイニルチオエーテル、６α−Ｓ−システイニルチオエーテル、ルミフラビン、５−デアザフラビン、５−カルバ−５−デアザもしくは１−カルバ−１−デアザリボフラビン類似体、ＦＭＮもしくはＦＡＤ、フラビン−１,Ｎ⁶−エテノアデニンジヌクレオチド、９ −メチルフラビン、９−フェニルフラビン、９−ベンジルフラビン、９−シクロヘキシルフラビン、６,９−ジメチルフラビン、６,７,９−トリメチルフラビン、９−オキシエチルフラビン、９−ジオキシプロピルフラビン、６,８,９−トリメチルフラビン、ラクロフラビン、フラビン−９−カルボン酸、６,７−ジメチルフラビン−９−カルボン酸、またはシザフラビンである請求の範囲第２項記載の用途。９．投薬計画が少なくとも１日あたり約１０ｍｇ／ｋｇ体重で行なわれる請求の範囲第１項ないし第８項のいずれかに記載の用途。 10．医薬が注射可能な形態である請求の範囲第１項ないし第９項のいずれかに記載の用途。 11．ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置に有用な医薬の製造に使用するためのフラビンまたはフラビン誘導体。 12．請求の範囲第１１項記載および第２項ないし第８項のいずれかに記載のフラビンまたはフラビン誘導体。 13．フラビンまたはフラビン誘導体からなることを特徴とする、ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置用の医薬組成物。 14．フラビンまたはフラビン誘導体が請求の範囲第３項ないし第８項のいずれかに記載されたものである請求の範囲第１３項記載の組成物。 15．組成物が薬学的または獣医学的に許容しうる希釈剤、賦形剤またはキャリアとともに少なくとも約３５ｍｇの単位投与量のフラビンまたはフラビン誘導体からなる請求の範囲第１２項または第１３項に記載の組成物。 16．単位投与量が約３５ｍｇから約１０００ｍｇである請求の範囲第１５項記載の組成物。 17．単位投与量が約２５０ｍｇから５００ｍｇである請求の範囲第１６項記載の組成物。 18．組成物が注射可能な形態である請求の範囲第１５項ないし第１７項のいずれかに記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．フラビン、フラビン誘導体または２種以上からなるそれらの混合物の、ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置用医薬の製造のための用途。２．フラビン誘導体がリボフラビンまたはリボフラビン誘導体である請求の範囲第１項記載の用途。３．リボフラビン誘導体がリボフラビン塩である請求の範囲第２項記載の用途。４．リボフラビン塩がリン酸リボフラビンナトリウムまたはリボフラビンテトラブチレートである請求の範囲第３項記載の用途。５．フラビンまたはフラビン誘導体が一般式：（式中、Ｒは水素またはアルキルを表わし、Ｒ₁およびＲ₄は各々独立して水素、アルキル、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシル、アルキルチオ、チオールまたは任意に置換される芳香族もしくは非芳香族チッ素複素環を表わし、Ｘは（i）水素、リビチル、アルキル、水素または芳香族もしくは非芳香族炭素環を表わすか、（ii）一般式： −ＣＨ₂−（ＣＨＯＨ）_n−Ｙ（式中、ｎは３または４の整数であり、Ｙは−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは −ＣＯＨまたは式：で示される基である）で示され、Ｒは水素またはアルキルを表わし、Ｗ₁およびＷ₂は、それぞれ独立してアルキル、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシル、アルキルチオ、チオールまたは任意に置換される芳香族もしくは非芳香族チッ素複素環を表わす）で示される化合物である請求の範囲第１項記載の用途。６．フラビンまたはフラビン誘導体が一般式：（式中、Ｘは（i）水素、リビチル、アルキル、水素または芳香族もしくは非芳香族炭素環を表わすか、（ii）一般式： −ＣＨ₂−（ＣＨＯＨ）_n−Ｙ（式中、ｎは３または４の整数であり、Ｙは−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは −ＣＯＨまたは式：で示される基である）で示され、Ｒは水素またはアルキルを表わし、Ｗ₁およびＷ₂は、それぞれ独立してアルキル、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシル、アルキルチオ、チオールまたは任意に置換される芳香族もしくは非芳香族チッ素複素環を表わす）で示される化合物である請求の範囲第１項記載の用途。７．フラビンまたはフラビン誘導体が一般式：（式中、Ｒ₁は水素またはアルキル基を表わし、Ｒ₂はアルキル基またはリビチル基、およびＲ₃は水素または、アルキル基での外側の炭素環の一置換もしくはニ置換を表わす）で示される化合物である請求の範囲第１項記載の用途。８．フラビンまたはフラビン誘導体がルミクローム、ロゼフラビン、ヒドロキシフラビン、アロキサジンもしくはその誘導体、８α−Ｎ（３）−ヒスチジルフラビン、８α−Ｎ（１）−ヒスチジルフラビン、８α−システイニルチオエーテル、６α−Ｓ−システイニルチオエーテル、ルミフラビン、５− デアザフラビン、５−カルバ−５−デアザもしくは１−カルバ−１−デアザリボフラビン類似体、ＦＭＮもしくはＦＡＤ、フラビン−１,Ｎ⁶−エテノアデニンジヌクレオチド、９−メチルフラビン、９−フェニルフラビン、９−ベンジルフラビン、９−シクロヘキシルフラビン、６,９−ジメチルフラビン、６,７,９−トリメチルフラビン、９−オキシエチルフラビン、９−ジオキシプロピルフラビン、６,８,９−トリメチルフラビン、ラクロフラビン、フラビン−９−カルボン酸、６,７−ジメチルフラビン−９−カルボン酸、またはシザフラビンである請求の範囲第１項記載の用途。９．投薬計画が少なくとも１日あたり約１０ｍｇ／ｋｇ体重で行なわれる請求の範囲第１項ないし第８項のいずれかに記載の用途。 10．医薬が注射可能な形態である請求の範囲第１項ないし第９項のいずれかに記載の用途。 11．ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置に有用な医薬の製造に使用するためのフラビンまたはフラビン誘導体。 12．請求の範囲第１１項記載および第２項ないし第８項のいずれかに記載のフラビンまたはフラビン誘導体。 13．フラビンまたはフラビン誘導体からなることを特徴とする、ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置用の医薬組成物。 14．フラビンまたはフラビン誘導体が請求の範囲第２項ないし第８項のいずれかに記載されたものである請求の範囲第１３項記載の組成物。 15．組成物が薬学的または獣医学的に許容しうる希釈剤、賦形剤またはキャリアとともに少なくとも約３５ｍｇの単位投与量のフラビンまたはフラビン誘導体からなる請求の範囲第１２項または第１３項に記載の組成物。 16．単位投与量が約３５ｍｇから約１０００ｍｇである請求の範囲第１５項記載の組成物。 17．単位投与量が約２５０ｍｇから５００ｍｇである請求の範囲第１６項記載の組成物。 18．組成物が注射可能な形態である請求の範囲第１５項ないし第１７項のいずれかに記載の組成物。 19．組成物が滅菌水において溶液の形態である請求の範囲第１８項記載の組成物。 20．薬物投与手順において医療従事者が扱いうる、容器から患者または投与デバイスに供給するためのフラビンまたはフラビン誘導体を含有する容器であって、ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置用の医薬としての該フラビンまたはフラビン誘導体の使用の指示説明を備えている、薬学的な封じ込めと即時的な前投与のための容器。 21．（ａ）薬学的使用のために製剤化されたフラビンまたはフラビン誘導体、と（ｂ）該フラビンまたはフラビン誘導体の、ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置用の医薬の製造のための用途、または該処置のための用途のための指示の併用。 22．処置が指示を参考にした、ＨＩＶ感染の処置である請求の範囲第２１項記載の併用。 23．ＨＩＶ感染が慢性感染である請求の範囲第２２項記載の併用。 24．抗ウイルス剤として使用するためにフラビンまたはフラビン誘導体を製剤化することからなる、ウイルス感染の管理および処置に使用するための医薬の製造法。 25．抗ウイルス治療において同時に、別個に、または連続して使用するための組み合された製剤としての、抗ウイルス活性を有するほかの１種以上の化合物とともに抗ウイルス剤としてのフラビン、またはフラビン誘導体。 26．ウイルス感染に起因する疾患にかかっている患者に有効量のフラビンまたはフラビン誘導体を治療的に投与する、またはウイルス感染の危機下の患者に有効量のフラビンまたはフラビン誘導体を予防的に投与することからなる、ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置方法。 27．投与量が患者の体重１ｋｇあたり少なくとも約１ｍｇから約１０ｍｇまたはそれ以上である請求の範囲第２項記載の方法。 28．抗ウイルス剤として使用するためのいかなる薬学的有用性も知られていないフラビンまたはフラビン誘導体。 29．ウイルス感染に起因する疾患の予防または治療のための処置に使用するためのフラビンまたはフラビン誘導体。 30．請求の範囲第９項記載および第１項ないし第８項のいずれかに記載のフラビンまたはフラビン誘導体。 31．細胞のターゲットおよび任意にウイルスのターゲットを有する薬剤であって、ＨＩＶに慢性的にまたは急性的に感染しているホ乳類細胞の細胞代謝に対して細胞内的に作用し、ウイルスによる無症候および無症候後のフェーズにおいて細胞に対するウイルス感染の効果をブロックするまたは相殺するフラビンまたはフラビン誘導体である薬剤であり、少なくとも慢性感染段階での、ホ乳類対象におけるＨＩＶ感染の処置に用いるための抗ウイルス剤。 32．薬剤がリボフラビン誘導体である請求の範囲第３１項記載の抗ウイルス剤。 33．フラビンまたはフラビン誘導体をＨＩＶに感染したホ乳類患者に投与する治療計画により患者を処置したのちに該患者の細胞を採取し、ウイルス感染の活性および／または進行を測定するため細胞試料を該患者の体から外部に分離してアッセイを行なうことからなるイン・ビトロでの診断アッセイ法。