JPH0940694A - 肝炎ｇｂウイルスの合成ペプチド及びその使用 - Google Patents
肝炎ｇｂウイルスの合成ペプチド及びその使用Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、種々の診断及び治療の用途に有用
な肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)合成ペプチド、ＨＧＢＶ
核酸またはアミノ酸配列を用いるキット、並びに、ＨＧ
ＢＶに特異的に結合する抗体を提供する。また、ＨＧＢ
Ｖペプチドからポリクローナル抗体またはモノクローナ
ル抗体を産生する方法も提供する。 【解決手段】 アミノ酸配列またはそのフラグメントか
ら成り、前記配列が正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされ
ていることにより特徴づけられていて、前記ゲノムがポ
リタンパク質をコードする読取り枠（ＯＲＦ）を有し、
前記ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及び
ＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたアミノ酸
配列に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸配列
から成るポリペプチドであって、合成手段によって調製
されることを特徴とする肝炎ＧＢウイルス（ＨＧＢＶ）
に由来の精製ポリペプチド及び上記精製ポリペプチドを
用いた肝炎ＧＢウイルスの診断試薬、検出キット及び抗
体の産生方法。
な肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)合成ペプチド、ＨＧＢＶ
核酸またはアミノ酸配列を用いるキット、並びに、ＨＧ
ＢＶに特異的に結合する抗体を提供する。また、ＨＧＢ
Ｖペプチドからポリクローナル抗体またはモノクローナ
ル抗体を産生する方法も提供する。 【解決手段】 アミノ酸配列またはそのフラグメントか
ら成り、前記配列が正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされ
ていることにより特徴づけられていて、前記ゲノムがポ
リタンパク質をコードする読取り枠（ＯＲＦ）を有し、
前記ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及び
ＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたアミノ酸
配列に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸配列
から成るポリペプチドであって、合成手段によって調製
されることを特徴とする肝炎ＧＢウイルス（ＨＧＢＶ）
に由来の精製ポリペプチド及び上記精製ポリペプチドを
用いた肝炎ＧＢウイルスの診断試薬、検出キット及び抗
体の産生方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、普遍的にはヒト肝炎を
誘発する一群の感染性ウイルス因子に由来の合成ペプチ
ドに関し、より特定的には肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)
に特異的に結合する合成ペプチド及びこれらの合成ペプ
チドの使用に関する。
誘発する一群の感染性ウイルス因子に由来の合成ペプチ
ドに関し、より特定的には肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)
に特異的に結合する合成ペプチド及びこれらの合成ペプ
チドの使用に関する。
【０００２】肝炎は、血液製剤の輸注、臓器移植及び血
液透析によってドナーからレシピエントに伝播する最も
重大な疾患の１つである。肝炎はまた、汚染した食品及
び水の摂取によって伝播することもでき、対人接触によ
って伝播することもある。ウイルス肝炎には異なるウイ
ルス遺伝子及び異なる複製方法をもつ一群のウイルス因
子が存在し、種々の伝播経路を介して種々の重篤度の肝
障害を示す肝炎の発病原因となることが知られている。
いくつかの症例では、黄疸、肝圧痛、または、アスパラ
ギン酸トランスアミナーゼ(ＡＳＴ)、アラニントランス
アミナーゼ(ＡＬＴ)及びイソクエン酸デヒドロゲナーゼ
(ＩＳＤ)のような肝トランスアミナーゼ類のレベル上
昇、のような患者の明白な症状によって急性ウイルス肝
炎の臨床診断を確定できる。他の症例では、急性ウイル
ス肝炎を臨床的に確定できない。肝炎のウイルス因子と
しては、肝炎Ａ型ウイルス(ＨＡＶ)、肝炎Ｂ型ウイルス
(ＨＢＶ)、肝炎Ｃ型ウイルス(ＨＣＶ)、肝炎デルタウイ
ルス(ＨＤＶ)、肝炎Ｅ型ウイルス(ＨＥＶ)、エプスタイ
ン・バールウイルス(ＥＢＶ)及びサイトメガロウイルス
(ＣＭＶ)がある。
液透析によってドナーからレシピエントに伝播する最も
重大な疾患の１つである。肝炎はまた、汚染した食品及
び水の摂取によって伝播することもでき、対人接触によ
って伝播することもある。ウイルス肝炎には異なるウイ
ルス遺伝子及び異なる複製方法をもつ一群のウイルス因
子が存在し、種々の伝播経路を介して種々の重篤度の肝
障害を示す肝炎の発病原因となることが知られている。
いくつかの症例では、黄疸、肝圧痛、または、アスパラ
ギン酸トランスアミナーゼ(ＡＳＴ)、アラニントランス
アミナーゼ(ＡＬＴ)及びイソクエン酸デヒドロゲナーゼ
(ＩＳＤ)のような肝トランスアミナーゼ類のレベル上
昇、のような患者の明白な症状によって急性ウイルス肝
炎の臨床診断を確定できる。他の症例では、急性ウイル
ス肝炎を臨床的に確定できない。肝炎のウイルス因子と
しては、肝炎Ａ型ウイルス(ＨＡＶ)、肝炎Ｂ型ウイルス
(ＨＢＶ)、肝炎Ｃ型ウイルス(ＨＣＶ)、肝炎デルタウイ
ルス(ＨＤＶ)、肝炎Ｅ型ウイルス(ＨＥＶ)、エプスタイ
ン・バールウイルス(ＥＢＶ)及びサイトメガロウイルス
(ＣＭＶ)がある。
【０００３】ＨＢＶ表面抗原(ＨＢｓＡｇ)の存在に基づ
いて輸血用血液をスクリーニングする特異的血清学的ア
ッセイが１９６０年代の後半から利用可能になり、受血
者の輸血後肝炎(ＰＴＨ)の発生を減らすという成果があ
ったが、ＰＴＨはかなりの割合で発生を続けている。
Ｈ.Ｊ.Ａｌｔｅｒら,Ａｎｎ .Ｉｎｔ.Ｍｅｄ.７７:６９
１−６９９(１９７２);Ｊ.Ｊ.Ａｌｔｅｒら,Ｌａｎｃｅ
ｔii:８３８−８４１(１９７５)。研究者らは、従来公
知のヒト肝炎の原因ウイルス(ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ
及びＥＢＶ)の接触に無関係なウイルス肝炎の原因とな
る「非Ａ非Ｂ肝炎(ＮＡＮＢＨ)」と呼ばれる新しい因子
の研究に着手した。例えば、Ｓ.Ｍ.Ｆｅｉｎｓｔｏｎｅ
ら,Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ.Ｊ.Ｍｅｄ.２９２:７６７−７７０
(１９７５);Ａｎｏｎｙｍｏｕｓ ｅｄｉｔｏｒｉａｌ,
Ｌａｎｃｅｔ ii:６４−６５(１９７５);Ｆ.Ｂ.Ｈｏｌ
ｌｉｎｇｅｒ ｉｎ Ｂ.Ｎ.Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ.Ｍ.
Ｋｎｉｐｅら,Ｖｉｒｏｌｏｇｙ,Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓ
ｓ,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,ｐｐ.２２３９−２２７３(１９９
０)参照。
いて輸血用血液をスクリーニングする特異的血清学的ア
ッセイが１９６０年代の後半から利用可能になり、受血
者の輸血後肝炎(ＰＴＨ)の発生を減らすという成果があ
ったが、ＰＴＨはかなりの割合で発生を続けている。
Ｈ.Ｊ.Ａｌｔｅｒら,Ａｎｎ .Ｉｎｔ.Ｍｅｄ.７７:６９
１−６９９(１９７２);Ｊ.Ｊ.Ａｌｔｅｒら,Ｌａｎｃｅ
ｔii:８３８−８４１(１９７５)。研究者らは、従来公
知のヒト肝炎の原因ウイルス(ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ
及びＥＢＶ)の接触に無関係なウイルス肝炎の原因とな
る「非Ａ非Ｂ肝炎(ＮＡＮＢＨ)」と呼ばれる新しい因子
の研究に着手した。例えば、Ｓ.Ｍ.Ｆｅｉｎｓｔｏｎｅ
ら,Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ.Ｊ.Ｍｅｄ.２９２:７６７−７７０
(１９７５);Ａｎｏｎｙｍｏｕｓ ｅｄｉｔｏｒｉａｌ,
Ｌａｎｃｅｔ ii:６４−６５(１９７５);Ｆ.Ｂ.Ｈｏｌ
ｌｉｎｇｅｒ ｉｎ Ｂ.Ｎ.Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ.Ｍ.
Ｋｎｉｐｅら,Ｖｉｒｏｌｏｇｙ,Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓ
ｓ,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,ｐｐ.２２３９−２２７３(１９９
０)参照。
【０００４】静注薬使用者における急性ＮＡＮＢＨの多
重発症、輸血後ＮＡＮＡＨ罹患患者の多様な潜伏期間、
チンパンジーの交差抗原投与実験の結果、感染チンパン
ジーの超微細構造的肝病理学、種々の推定因子のクロロ
ホルム耐性の違い、などを含む複数の系統の疫学的及び
実験的な証拠は、非経口伝播する２つ以上のＮＡＮＢ因
子の存在を示唆した。Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓｔａｇ,Ｇａｓ
ｔｒｏｅ ｎｔｅｒｏｌｏｇｙ,８５:４３９−４６２(１
９８３);Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓｔａｇ,Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ
ｅｒｏｌｏｇｙ,８５:７４３−７６８(１９８３);Ｆ.
Ｂ.Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.１
４２:４００−４０７(１９８０);Ｄ.Ｗ.Ｂｒａｄｌｅｙ
ｉｎ Ｆ.Ｃｈｉｓａｒｉ,ｅｄ．,Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉ
ｎ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｒｅｓ ｅａｒｃｈ,Ｍａｓｓｏ
ｎ,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,ｐｐ.２６８−２８０(１９８４);
及びＤ.Ｗ.Ｂｒａｄｌｅｙら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.
１４８:２５４−２６５(１９８３)。
重発症、輸血後ＮＡＮＡＨ罹患患者の多様な潜伏期間、
チンパンジーの交差抗原投与実験の結果、感染チンパン
ジーの超微細構造的肝病理学、種々の推定因子のクロロ
ホルム耐性の違い、などを含む複数の系統の疫学的及び
実験的な証拠は、非経口伝播する２つ以上のＮＡＮＢ因
子の存在を示唆した。Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓｔａｇ,Ｇａｓ
ｔｒｏｅ ｎｔｅｒｏｌｏｇｙ,８５:４３９−４６２(１
９８３);Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓｔａｇ,Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ
ｅｒｏｌｏｇｙ,８５:７４３−７６８(１９８３);Ｆ.
Ｂ.Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.１
４２:４００−４０７(１９８０);Ｄ.Ｗ.Ｂｒａｄｌｅｙ
ｉｎ Ｆ.Ｃｈｉｓａｒｉ,ｅｄ．,Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉ
ｎ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｒｅｓ ｅａｒｃｈ,Ｍａｓｓｏ
ｎ,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,ｐｐ.２６８−２８０(１９８４);
及びＤ.Ｗ.Ｂｒａｄｌｅｙら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.
１４８:２５４−２６５(１９８３)。
【０００５】急性肝炎を発症した外科医から採取した血
清サンプルをシシザル(タマリン、Ｓｕｇｕｉｎｕｓ ｓ
ｐｅｃｉｅｓ)に接種すると肝炎を誘発することが判明
した。４匹のシシザル全部が接種後数週以内に肝酵素の
レベル上昇を示し、これは、外科医の血清中の因子がシ
シザルに肝炎を発症させたことを示唆する。ヒト以外の
種々の霊長類の連続継代は、この肝炎が伝播性因子に原
因することを証明し、濾過試験は、この因子が本来ウイ
ルス性であることを示唆した。外科医及びシシザルのこ
れらの肝炎症例の原因となる伝播性因子を「ＧＢ因子」
と命名した。Ｆ.Ｄｅｉｎｈａｒｄｔら,Ｊ.Ｅｘｐｅｒ.
Ｍｅｄ.１２５:６７３−６８８(１９６７);Ｆ.Ｄｉｅｎ
ｈａｒｄｔら,Ｊ.Ｅｘｐｅｒ.Ｍｅｄ .,前出;Ｅ.Ｔａｂ
ｏｒら,Ｊ.Ｍｅｄ.Ｖｉｒｏｌ.５:１０３−１０８(１９
８０);Ｒ.Ｏ.Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎら,Ｖｉｒａｌ ａ
ｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓｉ
ｎ Ｎｏｎｈｕｍａｎ Ｐｒｉｍａｔｅｓ,Ａｌａｎ Ｒ.
Ｌｉｓｓ,Ｉｎｃ.,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,ｐｐ.２２１−２２
４(１９８３)。
清サンプルをシシザル(タマリン、Ｓｕｇｕｉｎｕｓ ｓ
ｐｅｃｉｅｓ)に接種すると肝炎を誘発することが判明
した。４匹のシシザル全部が接種後数週以内に肝酵素の
レベル上昇を示し、これは、外科医の血清中の因子がシ
シザルに肝炎を発症させたことを示唆する。ヒト以外の
種々の霊長類の連続継代は、この肝炎が伝播性因子に原
因することを証明し、濾過試験は、この因子が本来ウイ
ルス性であることを示唆した。外科医及びシシザルのこ
れらの肝炎症例の原因となる伝播性因子を「ＧＢ因子」
と命名した。Ｆ.Ｄｅｉｎｈａｒｄｔら,Ｊ.Ｅｘｐｅｒ.
Ｍｅｄ.１２５:６７３−６８８(１９６７);Ｆ.Ｄｉｅｎ
ｈａｒｄｔら,Ｊ.Ｅｘｐｅｒ.Ｍｅｄ .,前出;Ｅ.Ｔａｂ
ｏｒら,Ｊ.Ｍｅｄ.Ｖｉｒｏｌ.５:１０３−１０８(１９
８０);Ｒ.Ｏ.Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎら,Ｖｉｒａｌ ａ
ｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓｉ
ｎ Ｎｏｎｈｕｍａｎ Ｐｒｉｍａｔｅｓ,Ａｌａｎ Ｒ.
Ｌｉｓｓ,Ｉｎｃ.,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,ｐｐ.２２１−２２
４(１９８３)。
【０００６】ＧＢ因子がヒトのＮＡＮＢＨの原因因子で
あること、及び、ＧＢが複数の研究所で試験された既知
のＮＡＮＢＨ因子の近縁でないことは示唆されたが、Ｇ
Ｂ因子に関する確定的または最終的な研究はまだ例がな
く、ウイルス因子の発見も分子的な特性決定もなされた
ことはない。Ｆ.Ｄｅｉｎｈａｒｄｔら,Ａｍ.Ｊ.Ｍｅ
ｄ.Ｓｃｉ.２７０:７３−８０(１９７５);及びＪ.Ｌ.Ｄ
ｉｅｎｓｔａｇら,Ｎａｔｕｒｅ,２６４:２６０−２６
１(１９７６)。また、Ｅ.Ｔａｂｏｒら,Ｊ.Ｍｅｄ.Ｖｉ
ｒｏｌ,前出;Ｅ.Ｔａｂｏｒら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄ ｉ
ｓ.１４０:７９４−７９７(１９７９);Ｒ.Ｏ.Ｗｈｉｔ
ｔｉｎｇｔｏｎら,前出;及びＰ.Ｋａｒａｙｉａｎｎｉ
ｓら,Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ,９;１８６−１９２(１９８
９)も参照。
あること、及び、ＧＢが複数の研究所で試験された既知
のＮＡＮＢＨ因子の近縁でないことは示唆されたが、Ｇ
Ｂ因子に関する確定的または最終的な研究はまだ例がな
く、ウイルス因子の発見も分子的な特性決定もなされた
ことはない。Ｆ.Ｄｅｉｎｈａｒｄｔら,Ａｍ.Ｊ.Ｍｅ
ｄ.Ｓｃｉ.２７０:７３−８０(１９７５);及びＪ.Ｌ.Ｄ
ｉｅｎｓｔａｇら,Ｎａｔｕｒｅ,２６４:２６０−２６
１(１９７６)。また、Ｅ.Ｔａｂｏｒら,Ｊ.Ｍｅｄ.Ｖｉ
ｒｏｌ,前出;Ｅ.Ｔａｂｏｒら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄ ｉ
ｓ.１４０:７９４−７９７(１９７９);Ｒ.Ｏ.Ｗｈｉｔ
ｔｉｎｇｔｏｎら,前出;及びＰ.Ｋａｒａｙｉａｎｎｉ
ｓら,Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ,９;１８６−１９２(１９８
９)も参照。
【０００７】初期の研究は、ＧＢ因子が既知のいかなる
ヒト肝炎ウイルスにも近縁でないことを示した。Ｓ.Ｍ.
Ｆｅｉｎｓｔｏｎｅら,Ｓｃｉｅ ｎｃｅ １８２:１０２
６−１０２８(１９７３);Ｐ.Ｊ.Ｐｒｏｖｏｓｔら,Ｐｒ
ｏｃ.Ｓｏ ｃ.Ｅｘｐ.Ｂｉｏｌ.Ｍｅｄ. １４８:５３２
−５３９(１９７５);Ｊ.Ｌ.Ｍｅｌｎｉｃｋ,Ｉｎｔｅｒ
ｖｉｒ ｏｌｏｇｙ １８:１０５−１０６(１９８２);Ａ.
Ｗ.Ｈｏｌｍｅｓら,Ｎａｔｕｒｅ ２４３;４１９−４２
０(１９７３);及びＦ.Ｄｅｉｎｈａｒｄｔら,Ａｍ.Ｊ.
Ｍｅｄ.Ｓｃｉ.,前出。しかしながら、ＧＢ因子がヒト
の肝炎感染を誘発するウイルスであるのか、または、Ｇ
Ｂ因子がＧＢ血清によって活性化され、活性化されると
他のシシザルに容易に継代されて肝炎を誘発するシシザ
ルの潜伏性ウイルスであるのか、という疑問が生じた。
また、キヌザル(マーモセット)ではＧＢ陽性血清の接種
後に臨床肝炎を発症した割合は少なかった(５２匹中４
匹、７.６％)。これは、これらの動物が自然免疫されて
いること、従ってＧＢ因子がキヌザルのウイルスであり
得ることを示唆する。Ｗ.Ｐ.Ｐａｒｋｓら,Ｊ.Ｉｎｆｅ
ｃｔ.Ｄｉｓ. １２０:５３９−５４７(１９６９);Ｗ.
Ｐ.Ｐａｒｋsら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ . １２０:５４
８−５５９(１９６９)。形態学的研究の結果は画一的で
なく、1つの研究においては、免疫電子顕微鏡によって
ＧＢ因子が２０−２２ｎｍのサイズ分布の免疫複合体を
形成し、パルボウイルスの球状構造に類似していること
が観察されたと報告され、別の研究においては、免疫電
子顕微鏡によってＧＢ陽性シシザルの肝ホモジェネート
から得られたデータが正二十面体の対称をもつ３４−３
６ｎｍの凝集体の検出を示し、これはＧＢ因子がカリチ
ウイルス様ウイルスであることを示唆すると報告されて
いる。例えば、Ｊ.Ｄ.Ａｌｍｅｉｄａら,Ｎａｔｕｒｅ,
２６１:６０８−６０９(１９７６);Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓｔ
ａｇら,Ｎａｔｕｒｅ,前出。
ヒト肝炎ウイルスにも近縁でないことを示した。Ｓ.Ｍ.
Ｆｅｉｎｓｔｏｎｅら,Ｓｃｉｅ ｎｃｅ １８２:１０２
６−１０２８(１９７３);Ｐ.Ｊ.Ｐｒｏｖｏｓｔら,Ｐｒ
ｏｃ.Ｓｏ ｃ.Ｅｘｐ.Ｂｉｏｌ.Ｍｅｄ. １４８:５３２
−５３９(１９７５);Ｊ.Ｌ.Ｍｅｌｎｉｃｋ,Ｉｎｔｅｒ
ｖｉｒ ｏｌｏｇｙ １８:１０５−１０６(１９８２);Ａ.
Ｗ.Ｈｏｌｍｅｓら,Ｎａｔｕｒｅ ２４３;４１９−４２
０(１９７３);及びＦ.Ｄｅｉｎｈａｒｄｔら,Ａｍ.Ｊ.
Ｍｅｄ.Ｓｃｉ.,前出。しかしながら、ＧＢ因子がヒト
の肝炎感染を誘発するウイルスであるのか、または、Ｇ
Ｂ因子がＧＢ血清によって活性化され、活性化されると
他のシシザルに容易に継代されて肝炎を誘発するシシザ
ルの潜伏性ウイルスであるのか、という疑問が生じた。
また、キヌザル(マーモセット)ではＧＢ陽性血清の接種
後に臨床肝炎を発症した割合は少なかった(５２匹中４
匹、７.６％)。これは、これらの動物が自然免疫されて
いること、従ってＧＢ因子がキヌザルのウイルスであり
得ることを示唆する。Ｗ.Ｐ.Ｐａｒｋｓら,Ｊ.Ｉｎｆｅ
ｃｔ.Ｄｉｓ. １２０:５３９−５４７(１９６９);Ｗ.
Ｐ.Ｐａｒｋsら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ . １２０:５４
８−５５９(１９６９)。形態学的研究の結果は画一的で
なく、1つの研究においては、免疫電子顕微鏡によって
ＧＢ因子が２０−２２ｎｍのサイズ分布の免疫複合体を
形成し、パルボウイルスの球状構造に類似していること
が観察されたと報告され、別の研究においては、免疫電
子顕微鏡によってＧＢ陽性シシザルの肝ホモジェネート
から得られたデータが正二十面体の対称をもつ３４−３
６ｎｍの凝集体の検出を示し、これはＧＢ因子がカリチ
ウイルス様ウイルスであることを示唆すると報告されて
いる。例えば、Ｊ.Ｄ.Ａｌｍｅｉｄａら,Ｎａｔｕｒｅ,
２６１:６０８−６０９(１９７６);Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓｔ
ａｇら,Ｎａｔｕｒｅ,前出。
【０００８】最近になって、２種類の肝炎原因ウイル
ス、即ち、主として非経口伝播するＨＣＶと、腸内伝播
するＨＥＶとが発見され報告された。例えば、Ｑ.Ｌ.Ｃ
ｈｏｏら,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２４４;３５９−３６２(１９
８９);Ｇ.Ｋｕｏら,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２４４:３６２−３
６４(１９８９);欧州特許公開Ｎｏ.０３１８２１６(１
９８９年５月３１日公開);Ｇ.Ｒ.Ｒｅｙｅｓら,Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ,２４７:１３３５−１３３９(１９９０)。(１
つまたは複数の)ＮＡＮＢＨ因子を原因とするＰＴＨの
大部分及び輸血に原因しない急性ＮＡＮＢＨの多数の症
例の原因はＨＣＶである。匿名編集者,Ｌａｎｃｅｔ ３
３５:１４３１−１４３２(１９９０);Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓ
ｔａｇ,Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ｏｇｙ ９９:１１
７７−１１８０(１９９０);及びＭ.Ｊ.Ａｌｔｅｒら,Ｊ
ＡＭＡ ２６４:２２３１−２２３５(１９９０)。
ス、即ち、主として非経口伝播するＨＣＶと、腸内伝播
するＨＥＶとが発見され報告された。例えば、Ｑ.Ｌ.Ｃ
ｈｏｏら,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２４４;３５９−３６２(１９
８９);Ｇ.Ｋｕｏら,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２４４:３６２−３
６４(１９８９);欧州特許公開Ｎｏ.０３１８２１６(１
９８９年５月３１日公開);Ｇ.Ｒ.Ｒｅｙｅｓら,Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ,２４７:１３３５−１３３９(１９９０)。(１
つまたは複数の)ＮＡＮＢＨ因子を原因とするＰＴＨの
大部分及び輸血に原因しない急性ＮＡＮＢＨの多数の症
例の原因はＨＣＶである。匿名編集者,Ｌａｎｃｅｔ ３
３５:１４３１−１４３２(１９９０);Ｊ.Ｌ.Ｄｉｅｎｓ
ｔａｇ,Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ｏｇｙ ９９:１１
７７−１１８０(１９９０);及びＭ.Ｊ.Ａｌｔｅｒら,Ｊ
ＡＭＡ ２６４:２２３１−２２３５(１９９０)。
【０００９】ドナーサンプル中のＨＣＶ抗体を検出する
ことによって、ＮＡＮＢＨ感染血液の７０〜８０％は供
血系から除去できるが、ＨＣＶの発見及び検出が肝炎伝
播の完全防止を果たすことはできなかった。Ｈ.Ａｌｔ
ｅｒら,Ｎｅｗ Ｅｎｇ.Ｊ.Ｍｅｄ.３２１:１４９４−１
５００(１９８９)。最近の刊行物は、ＰＴＨの原因とな
る別の肝炎因子並びにＰＴＨ非関連の急性及び／または
慢性の肝炎の集団発生の原因となる別の肝炎因子が果た
して存在するのかという疑問を提起している。例えば、
１９８８年から１９９０年にフランスで実施された臨床
予想調査でモニターされた１８１人の患者のうち、合計
１８のＰＴＨ症例が検出されている。試験したこれらの
１８人中の１３人の患者が抗ＨＣＶ抗体、ＨＢｓＡｇ、
ＨＢＶ及びＨＣＶ核酸の陰性を示した。この調査に携わ
った研究者らは、ＰＴＨの発症に非Ａ、非Ｂ、非Ｃ因子
の存在が重要であり得ると推測した。Ｖ.Ｔｈｉｅｒｓ
ら,Ｊ.Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １８:３４−３９(１９９
３)。また、１９８５年から１９８８年にドイツで実施
された別の調査でモニターされた１,４７６人の患者の
うち、報告されたＰＴＨ症例中の２２例はＨＢＶまたは
ＨＣＶの感染に無関係であった。Ｔ.Ｐｅｔｅｒｓら,
Ｊ.Ｍｅｄ.Ｖｉｒｏｌ.３９:１３９−１４５(１９９
３)。
ことによって、ＮＡＮＢＨ感染血液の７０〜８０％は供
血系から除去できるが、ＨＣＶの発見及び検出が肝炎伝
播の完全防止を果たすことはできなかった。Ｈ.Ａｌｔ
ｅｒら,Ｎｅｗ Ｅｎｇ.Ｊ.Ｍｅｄ.３２１:１４９４−１
５００(１９８９)。最近の刊行物は、ＰＴＨの原因とな
る別の肝炎因子並びにＰＴＨ非関連の急性及び／または
慢性の肝炎の集団発生の原因となる別の肝炎因子が果た
して存在するのかという疑問を提起している。例えば、
１９８８年から１９９０年にフランスで実施された臨床
予想調査でモニターされた１８１人の患者のうち、合計
１８のＰＴＨ症例が検出されている。試験したこれらの
１８人中の１３人の患者が抗ＨＣＶ抗体、ＨＢｓＡｇ、
ＨＢＶ及びＨＣＶ核酸の陰性を示した。この調査に携わ
った研究者らは、ＰＴＨの発症に非Ａ、非Ｂ、非Ｃ因子
の存在が重要であり得ると推測した。Ｖ.Ｔｈｉｅｒｓ
ら,Ｊ.Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １８:３４−３９(１９９
３)。また、１９８５年から１９８８年にドイツで実施
された別の調査でモニターされた１,４７６人の患者の
うち、報告されたＰＴＨ症例中の２２例はＨＢＶまたは
ＨＣＶの感染に無関係であった。Ｔ.Ｐｅｔｅｒｓら,
Ｊ.Ｍｅｄ.Ｖｉｒｏｌ.３９:１３９−１４５(１９９
３)。
【００１０】新規な独自的肝炎原因ウイルス群をコード
する合成ペプチド、これらの合成ペプチドから作製され
上記のウイルスに特異的に結合する抗体、及び、これら
の物質を使用する診断薬及びワクチンの同定及び提供は
多大な利益をもたらすであろう。このような物質は、急
性及び／または慢性のウイルス肝炎のより正確な医学的
診断能力を著しく向上させ、提供された血液及び臓器中
のＨＧＢＶを検出することによってより安全な血液及び
臓器の提供を可能にする。
する合成ペプチド、これらの合成ペプチドから作製され
上記のウイルスに特異的に結合する抗体、及び、これら
の物質を使用する診断薬及びワクチンの同定及び提供は
多大な利益をもたらすであろう。このような物質は、急
性及び／または慢性のウイルス肝炎のより正確な医学的
診断能力を著しく向上させ、提供された血液及び臓器中
のＨＧＢＶを検出することによってより安全な血液及び
臓器の提供を可能にする。
【００１１】
【発明の概要】本発明は、アミノ酸配列またはそのフラ
グメントから成る肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に由来の
精製ポリペプチドを提供する。かかる配列の特徴は、正
鎖ＲＮＡゲノムによりコードされていて、該ゲノムがポ
リタンパク質をコードする読取り枠(ＯＲＦ)を有し、該
ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧ
ＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたアミノ酸配列
に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸配列から
成ることであり、該ポリペプチドは合成手段によって合
成されている。この精製ポリペプチドは配列番号５及び
１１から成るグループ、配列番号１９、２０、２１及び
２２から成るグループ、配列番号２３及び２４から成る
グループ、または配列番号２から選択される。
グメントから成る肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に由来の
精製ポリペプチドを提供する。かかる配列の特徴は、正
鎖ＲＮＡゲノムによりコードされていて、該ゲノムがポ
リタンパク質をコードする読取り枠(ＯＲＦ)を有し、該
ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧ
ＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたアミノ酸配列
に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸配列から
成ることであり、該ポリペプチドは合成手段によって合
成されている。この精製ポリペプチドは配列番号５及び
１１から成るグループ、配列番号１９、２０、２１及び
２２から成るグループ、配列番号２３及び２４から成る
グループ、または配列番号２から選択される。
【００１２】また、少なくとも１つの肝炎ＧＢウイルス
(ＨＧＢＶ)エピトープに対する抗体が提供される。かか
る抗体は合成手段によって調製されたポリペプチドを利
用して作製される。抗体はポリクローナル抗体またはモ
ノクローナル抗体である。
(ＨＧＢＶ)エピトープに対する抗体が提供される。かか
る抗体は合成手段によって調製されたポリペプチドを利
用して作製される。抗体はポリクローナル抗体またはモ
ノクローナル抗体である。
【００１３】ＨＧＢＶ抗原中に存在する少なくとも１つ
のＨＧＢＶエピトープを有するポリペプチドを収容した
容器から成り、該ポリペプチドが合成手段によって調製
されていることを特徴とする試験サンプル中の肝炎ＧＢ
ウイルス(ＨＧＢＶ)の抗原または抗体の存在を判定する
ためのアッセイキットが提供される。ポリペプチドは、
正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされていることにより特
徴づけられていて、該ゲノムがポリタンパク質をコード
する読取り枠(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧ
ＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグル
ープから選択されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の
同一性を有するアミノ酸配列から成ることを特徴とす
る。ポリペプチドは配列番号５及び１１から成るグルー
プ、配列番号１９、２０、２１及び２２から成るグルー
プ、配列番号２３及び２４から成るグループまたは配列
番号２から選択される。
のＨＧＢＶエピトープを有するポリペプチドを収容した
容器から成り、該ポリペプチドが合成手段によって調製
されていることを特徴とする試験サンプル中の肝炎ＧＢ
ウイルス(ＨＧＢＶ)の抗原または抗体の存在を判定する
ためのアッセイキットが提供される。ポリペプチドは、
正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされていることにより特
徴づけられていて、該ゲノムがポリタンパク質をコード
する読取り枠(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧ
ＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグル
ープから選択されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の
同一性を有するアミノ酸配列から成ることを特徴とす
る。ポリペプチドは配列番号５及び１１から成るグルー
プ、配列番号１９、２０、２１及び２２から成るグルー
プ、配列番号２３及び２４から成るグループまたは配列
番号２から選択される。
【００１４】本発明はまた、ＨＧＢＶ抗原に特異的に結
合する抗体を収容した容器から成り、該抗原がＨＧＢＶ
の配列に少なくとも約６０％の配列類似性を有する配列
によってコードされるＨＧＢＶエピトープを含み、該抗
体が合成手段によって調製されたポリペプチドを利用し
て作製されることを特徴とする、試験サンプル中の肝炎
ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)の抗原または抗体の存在を判定
するキットを提供する。抗体は固相に結合され得る。
合する抗体を収容した容器から成り、該抗原がＨＧＢＶ
の配列に少なくとも約６０％の配列類似性を有する配列
によってコードされるＨＧＢＶエピトープを含み、該抗
体が合成手段によって調製されたポリペプチドを利用し
て作製されることを特徴とする、試験サンプル中の肝炎
ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)の抗原または抗体の存在を判定
するキットを提供する。抗体は固相に結合され得る。
【００１５】ＨＧＢＶを含有している疑いのある試験サ
ンプル中の肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)抗原を検出する
方法は、試験サンプルと、少なくとも１つのＨＧＢＶ抗
原に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントと
を、抗体／抗原複合体の形成に十分な時間及び条件下で
接触させ、該抗体含有複合体を検出する段階から成り、
該抗体が合成手段によって調製されたポリペプチドを利
用して産生されることを特徴とする。抗体は固相に結合
され得る。抗体はモノクローナル抗体またはポリクロー
ナル抗体である。
ンプル中の肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)抗原を検出する
方法は、試験サンプルと、少なくとも１つのＨＧＢＶ抗
原に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントと
を、抗体／抗原複合体の形成に十分な時間及び条件下で
接触させ、該抗体含有複合体を検出する段階から成り、
該抗体が合成手段によって調製されたポリペプチドを利
用して産生されることを特徴とする。抗体は固相に結合
され得る。抗体はモノクローナル抗体またはポリクロー
ナル抗体である。
【００１６】本発明は更に、肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢ
Ｖ)抗体を含有している疑いのある試験サンプル中の該
抗体を検出するために、プローブポリペプチドと試験サ
ンプルとを抗体／抗原複合体の形成に十分な時間及び条
件下で接触させる段階と、プローブポリペプチドを含有
する該複合体を検出する段階とから成る方法を提供す
る。該ポリペプチドは少なくとも一つのＨＧＢＶエピト
ープを含有し、該エピトープはアミノ酸配列またはその
フラグメントからなり、該アミノ酸配列は正鎖ＲＮＡゲ
ノムによりコードされていることにより特徴づけられて
いて、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠
(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、Ｈ
ＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択
されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有す
るアミノ酸配列から成る。プローブポリペプチドは固相
に結合され得る。固相はビーズ、マイクロタイターウエ
ル、試験管壁、ニトロセルロース片、磁性ビーズ及び非
磁性ビーズから成るグループから選択される。ポリペプ
チドは、ＨＧＢＶの少なくとも１つのエピトープをコー
ドする合成ペプチドでありかつ正鎖ＲＮＡゲノムにより
コードされていることにより特徴づけられていて、該ゲ
ノムがポリタンパク質をコードする読取り枠(ＯＲＦ)を
有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ
及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたアミ
ノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸
配列から成ることを特徴とする。配列は、正鎖ＲＮＡゲ
ノムによりコードされていることにより特徴づけられて
いて、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠
(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、Ｈ
ＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択
されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有す
るアミノ酸配列から成ることを特徴とする。ポリペプチ
ドは配列番号５及び１１から成るグループ、配列番号１
９、２０、２１及び２２から成るグループ、配列番号２
３及び２４から成るグループまたは配列番号２から選択
される。
Ｖ)抗体を含有している疑いのある試験サンプル中の該
抗体を検出するために、プローブポリペプチドと試験サ
ンプルとを抗体／抗原複合体の形成に十分な時間及び条
件下で接触させる段階と、プローブポリペプチドを含有
する該複合体を検出する段階とから成る方法を提供す
る。該ポリペプチドは少なくとも一つのＨＧＢＶエピト
ープを含有し、該エピトープはアミノ酸配列またはその
フラグメントからなり、該アミノ酸配列は正鎖ＲＮＡゲ
ノムによりコードされていることにより特徴づけられて
いて、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠
(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、Ｈ
ＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択
されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有す
るアミノ酸配列から成る。プローブポリペプチドは固相
に結合され得る。固相はビーズ、マイクロタイターウエ
ル、試験管壁、ニトロセルロース片、磁性ビーズ及び非
磁性ビーズから成るグループから選択される。ポリペプ
チドは、ＨＧＢＶの少なくとも１つのエピトープをコー
ドする合成ペプチドでありかつ正鎖ＲＮＡゲノムにより
コードされていることにより特徴づけられていて、該ゲ
ノムがポリタンパク質をコードする読取り枠(ＯＲＦ)を
有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ
及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたアミ
ノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸
配列から成ることを特徴とする。配列は、正鎖ＲＮＡゲ
ノムによりコードされていることにより特徴づけられて
いて、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠
(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、Ｈ
ＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択
されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有す
るアミノ酸配列から成ることを特徴とする。ポリペプチ
ドは配列番号５及び１１から成るグループ、配列番号１
９、２０、２１及び２２から成るグループ、配列番号２
３及び２４から成るグループまたは配列番号２から選択
される。
【００１７】医薬として許容される賦形剤中の薬理学的
有効用量の免疫原性ＨＧＢＶポリペプチドまたはそのフ
ラグメントから成る肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)感染治
療用ワクチンも提供される。このワクチンは、ポリペプ
チドが正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされていることに
より特徴づけられていて、該ゲノムがポリタンパク質を
コードする読取り枠(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質
がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成
るグループから選択されたアミノ酸配列に少なくとも３
５％の同一性を有するアミノ酸配列から成ることを特徴
とし、また、該ポリペプチドが合成手段によって調製さ
れたポリペプチドを利用して作製されることを特徴とす
る。
有効用量の免疫原性ＨＧＢＶポリペプチドまたはそのフ
ラグメントから成る肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)感染治
療用ワクチンも提供される。このワクチンは、ポリペプ
チドが正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされていることに
より特徴づけられていて、該ゲノムがポリタンパク質を
コードする読取り枠(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質
がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成
るグループから選択されたアミノ酸配列に少なくとも３
５％の同一性を有するアミノ酸配列から成ることを特徴
とし、また、該ポリペプチドが合成手段によって調製さ
れたポリペプチドを利用して作製されることを特徴とす
る。
【００１８】更に、少なくとも１つのＨＧＢＶエピトー
プを含む単離された免疫原性ポリペプチドまたはそのフ
ラグメントを免疫応答を生じさせるに十分な量で個体に
投与する段階から成り、該ポリペプチドが合成手段によ
って調製されたポリペプチドを利用して産生されること
を特徴とする肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に対する抗体
の産生方法が提供される。
プを含む単離された免疫原性ポリペプチドまたはそのフ
ラグメントを免疫応答を生じさせるに十分な量で個体に
投与する段階から成り、該ポリペプチドが合成手段によ
って調製されたポリペプチドを利用して産生されること
を特徴とする肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に対する抗体
の産生方法が提供される。
【００１９】ＨＧＢＶの配列またはそのフラグメントか
ら成る肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)のエピトープをコー
ドしている合成ペプチドの特徴は、上記配列が正鎖ＲＮ
Ａゲノムによりコードされていることにより特徴づけら
れていて、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取
り枠(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−
Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループか
ら選択されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性
を有するアミノ酸配列から成ることである。ポリペプチ
ドは配列番号５及び１１から成るグループ、配列番号１
９、２０、２１及び２２から成るグループ、配列番号２
３及び２４から成るグループまたは配列番号２から成る
グループから選択される。請求項３２に記載の合成ポリ
ペプチドは固体担体に結合され得る。
ら成る肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)のエピトープをコー
ドしている合成ペプチドの特徴は、上記配列が正鎖ＲＮ
Ａゲノムによりコードされていることにより特徴づけら
れていて、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取
り枠(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−
Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループか
ら選択されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性
を有するアミノ酸配列から成ることである。ポリペプチ
ドは配列番号５及び１１から成るグループ、配列番号１
９、２０、２１及び２２から成るグループ、配列番号２
３及び２４から成るグループまたは配列番号２から成る
グループから選択される。請求項３２に記載の合成ポリ
ペプチドは固体担体に結合され得る。
【００２０】更に、肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に由来
のポリペプチドまたはそのフラグメントから成り、該ポ
リペプチドまたはそのフラグメントがＨＧＢＶの少なく
とも１つのエピトープをコードしかつ正鎖ＲＮＡゲノム
によりコードされていることにより特徴づけられてい
て、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠
(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、Ｈ
ＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択
されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有す
るアミノ酸配列から成り、該ポリペプチドが合成手段に
よって産生されることを特徴とする診断試薬が提供され
る。ポリペプチドは配列番号５及び１１から成るグルー
プ、配列番号１９、２０、２１及び２２から成るグルー
プ、配列番号２３及び２４から成るグループまたは配列
番号２から選択される。 〔発明の詳細な説明〕
のポリペプチドまたはそのフラグメントから成り、該ポ
リペプチドまたはそのフラグメントがＨＧＢＶの少なく
とも１つのエピトープをコードしかつ正鎖ＲＮＡゲノム
によりコードされていることにより特徴づけられてい
て、該ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠
(ＯＲＦ)を有し、該ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、Ｈ
ＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択
されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有す
るアミノ酸配列から成り、該ポリペプチドが合成手段に
よって産生されることを特徴とする診断試薬が提供され
る。ポリペプチドは配列番号５及び１１から成るグルー
プ、配列番号１９、２０、２１及び２２から成るグルー
プ、配列番号２３及び２４から成るグループまたは配列
番号２から選択される。 〔発明の詳細な説明〕
【００２１】本発明は、非Ａ、非Ｂ、非Ｃ、非Ｄ及び非
Ｅの肝炎原因因子であり、集合的に「肝炎ＧＢウイル
ス」または「ＨＧＢＶ」ウイルスと呼ばれている新たに
確認された病因因子のキャリクタリゼーションを提供す
る。本発明は、ＨＧＢＶ病因因子の存在を判定する方
法、従来未単離のウイルス因子のゲノムから新しく合成
された抗原を検出するためにヒトまたはシシザルのＨＧ
ＢＶ感染個体から採取した感染血清、血漿または肝ホモ
ジェネートから病因因子の核酸を作製する方法、非感染
個体に比較したときに感染個体中でのみ検出される産物
を産生するクローンを選択する方法を提供する。
Ｅの肝炎原因因子であり、集合的に「肝炎ＧＢウイル
ス」または「ＨＧＢＶ」ウイルスと呼ばれている新たに
確認された病因因子のキャリクタリゼーションを提供す
る。本発明は、ＨＧＢＶ病因因子の存在を判定する方
法、従来未単離のウイルス因子のゲノムから新しく合成
された抗原を検出するためにヒトまたはシシザルのＨＧ
ＢＶ感染個体から採取した感染血清、血漿または肝ホモ
ジェネートから病因因子の核酸を作製する方法、非感染
個体に比較したときに感染個体中でのみ検出される産物
を産生するクローンを選択する方法を提供する。
【００２２】本発明は、本文中に開示したように、モノ
クローナル抗体を作製するときに合成ペプチドの少なく
とも１つを免疫原として使用するモノクローナル抗体の
作製方法を提供する。このようなモノクローナル抗体は
ＨＧＢＶの少なくとも１つのエピトープに特異的に結合
する。
クローナル抗体を作製するときに合成ペプチドの少なく
とも１つを免疫原として使用するモノクローナル抗体の
作製方法を提供する。このようなモノクローナル抗体は
ＨＧＢＶの少なくとも１つのエピトープに特異的に結合
する。
【００２３】本発明は、ＨＧＢＶの抗原または抗体の存
在及び／または量の検出に使用できる試薬を含むキット
を提供する。このような試薬は、適当な容器に収容され
た約３〜５個またはそれ以上のアミノ酸から成るＨＧＢ
Ｖ由来のアミノ酸配列を含むポリペプチドから成る。本
文中に記載のような種々のアッセイフォーマットに適し
た他のキットも本発明によって提供される。
在及び／または量の検出に使用できる試薬を含むキット
を提供する。このような試薬は、適当な容器に収容され
た約３〜５個またはそれ以上のアミノ酸から成るＨＧＢ
Ｖ由来のアミノ酸配列を含むポリペプチドから成る。本
文中に記載のような種々のアッセイフォーマットに適し
た他のキットも本発明によって提供される。
【００２４】本発明の他の目的は、固相に結合された少
なくとも１つのＨＧＢＶエピトープから成るポリペプチ
ド、及び、固相に結合したＨＧＢＶエピトープに対する
抗体を提供することである。
なくとも１つのＨＧＢＶエピトープから成るポリペプチ
ド、及び、固相に結合したＨＧＢＶエピトープに対する
抗体を提供することである。
【００２５】本発明はまた、本発明によって提供される
合成ポリペプチド及び本文中に記載の抗体を種々のフォ
ーマットで利用し、いずれのフォーマットでもアッセイ
中にシグナル発生化合物を使用するアッセイを提供す
る。検出手段としてシグナル発生化合物を使用しないア
ッセイも提供される。記載のいずれのアッセイも通常は
抗原または抗体または双方を検出するものであり、試験
サンプルと本発明で提供された少なくとも１つの試薬と
を接触させて少なくとも１つの抗原／抗体複合体を形成
し、複合体の存在を検出する段階を含む。これらのアッ
セイを本文中に詳細に記載する。
合成ポリペプチド及び本文中に記載の抗体を種々のフォ
ーマットで利用し、いずれのフォーマットでもアッセイ
中にシグナル発生化合物を使用するアッセイを提供す
る。検出手段としてシグナル発生化合物を使用しないア
ッセイも提供される。記載のいずれのアッセイも通常は
抗原または抗体または双方を検出するものであり、試験
サンプルと本発明で提供された少なくとも１つの試薬と
を接触させて少なくとも１つの抗原／抗体複合体を形成
し、複合体の存在を検出する段階を含む。これらのアッ
セイを本文中に詳細に記載する。
【００２６】ＨＧＢＶエピトープを含む免疫原性合成ペ
プチドから成るＨＧＢＶ感染治療用ワクチンも本発明に
包含される。有効なワクチンはこれらの免疫原性合成ペ
プチドを利用し得る(例えば、本文中に開示された合成
ペプチドと組換え抗原と天然型ウイルス抗原とのカクテ
ルを同時または異なる時期に投与する)。これらのいく
つかは単独で使用されてもよく、また、もっと後の時期
に補足の免疫原性エピトープを提示してもよい。ＨＧＢ
Ｖエピトープを含有する単離された免疫原性合成ポリペ
プチドを、被接種個体中で免疫応答を生じさせるに十分
な量で個体に投与する段階から成るＨＧＢＶ抗体の産生
方法も提供される。
プチドから成るＨＧＢＶ感染治療用ワクチンも本発明に
包含される。有効なワクチンはこれらの免疫原性合成ペ
プチドを利用し得る(例えば、本文中に開示された合成
ペプチドと組換え抗原と天然型ウイルス抗原とのカクテ
ルを同時または異なる時期に投与する)。これらのいく
つかは単独で使用されてもよく、また、もっと後の時期
に補足の免疫原性エピトープを提示してもよい。ＨＧＢ
Ｖエピトープを含有する単離された免疫原性合成ポリペ
プチドを、被接種個体中で免疫応答を生じさせるに十分
な量で個体に投与する段階から成るＨＧＢＶ抗体の産生
方法も提供される。
【００２７】本文中で使用される「肝炎ＧＢウイルス」
または「ＨＧＢＶ」なる用語は集合的に、ヒトの非Ａ、
非Ｂ、非Ｃ、非Ｄ、非Ｅ肝炎の原因ウイルス種、及びこ
れらに由来の弱毒菌または欠陥干渉粒子を意味する。こ
の用語は、汚染した食物、飲料水などによって伝播され
る急性ウイルス肝炎、対人接触(性的伝播、呼吸器及び
非経口経路)または静注薬の使用を介して伝播されるＨ
ＧＢＶを原因とする肝炎を包含する。本文中に記載され
た方法によって、ＨＧＢＶ感染個体を同定し得る。ＨＧ
ＢＶ単離物を個々に「ＨＧＢＶ−Ａ」、「ＨＧＢＶ−
Ｂ」及び「ＨＧＢＶ−Ｃ」として特定する。本文中に記
載のように、ＨＧＢＶゲノムはＲＮＡから成る。ＨＧＢ
Ｖのヌクレオチド配列及び推定アミノ酸配列の分析は、
このグループのウイルスがフラビウイルス科のウイルス
と同様のゲノム編成を有していることを明らかにした。
全面的にではないが主としてゲノム編成の類似性に基づ
いて、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅ
ｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅ
ｓは、この科が３つの属、即ち、フラビウイルス、ペス
ティウイルス及び肝炎Ｃグループから構成されると提唱
している。アミノ酸レベルの類似性研究は、肝炎ＧＢウ
イルスのサブクローンが肝炎Ｃウイルスとの間で少なく
はあるがある程度の配列類似性を有することを明らかに
した。本発明で提供される情報に基づいてＨＧＢＶの他
の菌株を十分に分類し得る。
または「ＨＧＢＶ」なる用語は集合的に、ヒトの非Ａ、
非Ｂ、非Ｃ、非Ｄ、非Ｅ肝炎の原因ウイルス種、及びこ
れらに由来の弱毒菌または欠陥干渉粒子を意味する。こ
の用語は、汚染した食物、飲料水などによって伝播され
る急性ウイルス肝炎、対人接触(性的伝播、呼吸器及び
非経口経路)または静注薬の使用を介して伝播されるＨ
ＧＢＶを原因とする肝炎を包含する。本文中に記載され
た方法によって、ＨＧＢＶ感染個体を同定し得る。ＨＧ
ＢＶ単離物を個々に「ＨＧＢＶ−Ａ」、「ＨＧＢＶ−
Ｂ」及び「ＨＧＢＶ−Ｃ」として特定する。本文中に記
載のように、ＨＧＢＶゲノムはＲＮＡから成る。ＨＧＢ
Ｖのヌクレオチド配列及び推定アミノ酸配列の分析は、
このグループのウイルスがフラビウイルス科のウイルス
と同様のゲノム編成を有していることを明らかにした。
全面的にではないが主としてゲノム編成の類似性に基づ
いて、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅ
ｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅ
ｓは、この科が３つの属、即ち、フラビウイルス、ペス
ティウイルス及び肝炎Ｃグループから構成されると提唱
している。アミノ酸レベルの類似性研究は、肝炎ＧＢウ
イルスのサブクローンが肝炎Ｃウイルスとの間で少なく
はあるがある程度の配列類似性を有することを明らかに
した。本発明で提供される情報に基づいてＨＧＢＶの他
の菌株を十分に分類し得る。
【００２８】複数の系列の証拠が、ＨＧＢＶ−ＣがＨＣ
Ｖの遺伝子型でないことを証明する。第一に、配列ＨＧ
Ｂ−Ｃ含有血清中のＨＣＶ抗体の存在を試験した。ＨＣ
Ｖに接触または感染した個体の常套的な検出方法は、Ｈ
ＣＶ−１の３つ以上の領域に由来の抗原を使用する抗体
検査に依存している。これらの検査では、ＨＣＶの既知
の遺伝子型に対する抗体を検出し得る(例えば、Ｓａｋ
ａｍｏｔｏら,Ｊ.Ｇｅ ｎ.Ｖｉｒｏｌ.７５:１７６１−
１７６８(１９９４)及びＳｔｕｙｖｅｒら,Ｊ.Ｇｅｎ.
Ｖｉｒｏｌ.７４:１０９３−１１０２(１９９３)参
照)。ＨＣＶ特異的ＥＬＩＳＡでは、８症例中の６例で
ＧＢ−Ｃ配列を含有する血清の検出に成功しなかった。
第二に、ＨＣＶ抗体に対して血清陰性であった複数のヒ
ト血清は高感度ＲＴ−ＰＣＲアッセイによってＨＣＶゲ
ノムＲＮＡに陽性を示した(Ｓｕｇｉｔａｎｉ,Ｌａｎｃ
ｅｔ,３３９:１０１８−１０１９(１９９２)。このアッ
セイでは、ＨＧＢ−Ｃ配列を含有する８つの血清サンプ
ル中の７つでＨＣＶ ＲＮＡの検出に成功しなかった(表
Ａ)。従って、ＨＧＢＶ−Ｃは、血清学的アッセイ及び
分子アッセイの双方に基づいてＨＣＶの遺伝子型でな
い。
Ｖの遺伝子型でないことを証明する。第一に、配列ＨＧ
Ｂ−Ｃ含有血清中のＨＣＶ抗体の存在を試験した。ＨＣ
Ｖに接触または感染した個体の常套的な検出方法は、Ｈ
ＣＶ−１の３つ以上の領域に由来の抗原を使用する抗体
検査に依存している。これらの検査では、ＨＣＶの既知
の遺伝子型に対する抗体を検出し得る(例えば、Ｓａｋ
ａｍｏｔｏら,Ｊ.Ｇｅ ｎ.Ｖｉｒｏｌ.７５:１７６１−
１７６８(１９９４)及びＳｔｕｙｖｅｒら,Ｊ.Ｇｅｎ.
Ｖｉｒｏｌ.７４:１０９３−１１０２(１９９３)参
照)。ＨＣＶ特異的ＥＬＩＳＡでは、８症例中の６例で
ＧＢ−Ｃ配列を含有する血清の検出に成功しなかった。
第二に、ＨＣＶ抗体に対して血清陰性であった複数のヒ
ト血清は高感度ＲＴ−ＰＣＲアッセイによってＨＣＶゲ
ノムＲＮＡに陽性を示した(Ｓｕｇｉｔａｎｉ,Ｌａｎｃ
ｅｔ,３３９:１０１８−１０１９(１９９２)。このアッ
セイでは、ＨＧＢ−Ｃ配列を含有する８つの血清サンプ
ル中の７つでＨＣＶ ＲＮＡの検出に成功しなかった(表
Ａ)。従って、ＨＧＢＶ−Ｃは、血清学的アッセイ及び
分子アッセイの双方に基づいてＨＣＶの遺伝子型でな
い。
【００２９】ＨＧＢ−Ｃの予想翻訳産物のヘリカーゼ領
域内部の一部分と、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ、ＨＣ
Ｖ−１及びフラビウイルス科の別の成員とをアラインメ
ントさせ、次いで、アラインした配列の系統発生学的分
析を行うと、ＨＧＢＶ−ＣがＨＣＶグループのどの成員
よりもＨＧＢＶ−Ａに緊密に関連していることが示唆さ
れる。ＨＧＢＶ−Ｃの配列とＨＧＢＶ−Ａの配列とは
０.４２の進化距離を示すが、これはＨＧＢＶ−ＣとＨ
ＧＢＶ−Ｂとの間の０.９２の進化距離よりも分散が少
ない。従って、ＨＧＢＶ−ＡとＨＧＢＶ−ＣとがＧＢウ
イルスの１つのサブグループの成員であり、ＧＢＶ−Ｂ
は独立したサブグループの一員であると考えることがで
きる。種々のＨＣＶ単離物から得られたヘリカーゼ配列
の系統発生学的分析によれば、これらの単離物ははるか
に分散の少ないグループを形成し、０.２０の最大進化
距離を示すことが判明する。ＨＣＶグループとＨＧＢＶ
グループとを比較すると、各グループの任意の２つの配
列間の最小進化距離が０.６９であることが判明する。
上記に報告された距離の値を使用して、系統発生樹を作
成した。これらのウイルス間の比較的高い分散度は、Ｇ
Ｂウイルスが肝炎Ｃグループ内部の単なるタイプまたは
サブタイプでないことを示唆する。むしろ、これらのウ
イルスはそれ自体の系統発生グループ(または複数グル
ープ)を構成している。ＨＣＶウイルスゲノムの小部分
に由来の配列情報を用いた系統発生分析は、新規な単離
物を遺伝子型グループに帰属させる適格な方法であるこ
とが判明した(Ｓｉｍｍｏｎｄｓら,Ｈｅｐａｔｏｌｏｇ
ｙ １９:１３２１−１３２４(１９９４)。常用の分析で
は、代表的なＨＣＶ単離物から得られるヘリカーゼ遺伝
子内部の１１０個のアミノ酸の使用によって、これらの
単離物を夫々の遺伝子型に適正に分類した(Ｓｉｍｍｏ
ｎｄｓら,Ｊ.Ｇｅｎ.Ｖｉｒｏｌ.７５:１０５３−１０
６１(１９９４)。従って、上記の進化距離は恐らく、Ｇ
Ｂウイルスと肝炎Ｃウイルスとの間の高い分散度を正確
に反映している。
域内部の一部分と、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ、ＨＣ
Ｖ−１及びフラビウイルス科の別の成員とをアラインメ
ントさせ、次いで、アラインした配列の系統発生学的分
析を行うと、ＨＧＢＶ−ＣがＨＣＶグループのどの成員
よりもＨＧＢＶ−Ａに緊密に関連していることが示唆さ
れる。ＨＧＢＶ−Ｃの配列とＨＧＢＶ−Ａの配列とは
０.４２の進化距離を示すが、これはＨＧＢＶ−ＣとＨ
ＧＢＶ−Ｂとの間の０.９２の進化距離よりも分散が少
ない。従って、ＨＧＢＶ−ＡとＨＧＢＶ−ＣとがＧＢウ
イルスの１つのサブグループの成員であり、ＧＢＶ−Ｂ
は独立したサブグループの一員であると考えることがで
きる。種々のＨＣＶ単離物から得られたヘリカーゼ配列
の系統発生学的分析によれば、これらの単離物ははるか
に分散の少ないグループを形成し、０.２０の最大進化
距離を示すことが判明する。ＨＣＶグループとＨＧＢＶ
グループとを比較すると、各グループの任意の２つの配
列間の最小進化距離が０.６９であることが判明する。
上記に報告された距離の値を使用して、系統発生樹を作
成した。これらのウイルス間の比較的高い分散度は、Ｇ
Ｂウイルスが肝炎Ｃグループ内部の単なるタイプまたは
サブタイプでないことを示唆する。むしろ、これらのウ
イルスはそれ自体の系統発生グループ(または複数グル
ープ)を構成している。ＨＣＶウイルスゲノムの小部分
に由来の配列情報を用いた系統発生分析は、新規な単離
物を遺伝子型グループに帰属させる適格な方法であるこ
とが判明した(Ｓｉｍｍｏｎｄｓら,Ｈｅｐａｔｏｌｏｇ
ｙ １９:１３２１−１３２４(１９９４)。常用の分析で
は、代表的なＨＣＶ単離物から得られるヘリカーゼ遺伝
子内部の１１０個のアミノ酸の使用によって、これらの
単離物を夫々の遺伝子型に適正に分類した(Ｓｉｍｍｏ
ｎｄｓら,Ｊ.Ｇｅｎ.Ｖｉｒｏｌ.７５:１０５３−１０
６１(１９９４)。従って、上記の進化距離は恐らく、Ｇ
Ｂウイルスと肝炎Ｃウイルスとの間の高い分散度を正確
に反映している。
【００３０】本文中で使用される「同一性」なる用語
は、各ゲノム上の適当な場所におけるＨＧＢＶのアミノ
酸配列と別の(１つまたは複数の)菌株のアミノ酸配列と
の正確な一致を意味する。また、「類似性」なる用語は
一般に、適当な場所におけるＨＧＢＶのアミノ酸配列と
別の(１つまたは複数の)菌株の配列との間で、アミノ酸
が等しいかまたは同様の化学的及び／または物理的特
性、例えば電荷もしくは疎水性を有していることを意味
する。Ｗｏｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ,Ｖｅｒｓｉｏｎ ８(Ｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ,Ｍａｄｉｓｏ
ｎ,Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ,５３７１１)の可用プログラ
ム、例えばＧＡＰプログラムは、２つのポリヌクレオチ
ドまたは２つのポリペプチド配列間の同一性及び類似性
の双方を計算し得る。２つの配列間の同一性及び類似性
を計算するための他のプログラムも当業界で公知であ
る。
は、各ゲノム上の適当な場所におけるＨＧＢＶのアミノ
酸配列と別の(１つまたは複数の)菌株のアミノ酸配列と
の正確な一致を意味する。また、「類似性」なる用語は
一般に、適当な場所におけるＨＧＢＶのアミノ酸配列と
別の(１つまたは複数の)菌株の配列との間で、アミノ酸
が等しいかまたは同様の化学的及び／または物理的特
性、例えば電荷もしくは疎水性を有していることを意味
する。Ｗｏｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ,Ｖｅｒｓｉｏｎ ８(Ｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ,Ｍａｄｉｓｏ
ｎ,Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ,５３７１１)の可用プログラ
ム、例えばＧＡＰプログラムは、２つのポリヌクレオチ
ドまたは２つのポリペプチド配列間の同一性及び類似性
の双方を計算し得る。２つの配列間の同一性及び類似性
を計算するための他のプログラムも当業界で公知であ
る。
【００３１】更に、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂまたは
ＨＧＢＶ−Ｃの菌株を同定するために以下のパラメータ
ーを単独でまたは組み合わせて使用し得る。現在ではＨ
ＧＢＶ菌株が遺伝的に近縁であると考えられるようにな
ったので、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−ＢまたはＨＧＢＶ
−Ｃとこれらの肝炎ＧＢウイルスのいずれか１つの株と
の間のゲノムのヌクレオチドの配列の同一性は約４５％
以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約８０
％以上であろうと予測される。
ＨＧＢＶ−Ｃの菌株を同定するために以下のパラメータ
ーを単独でまたは組み合わせて使用し得る。現在ではＨ
ＧＢＶ菌株が遺伝的に近縁であると考えられるようにな
ったので、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−ＢまたはＨＧＢＶ
−Ｃとこれらの肝炎ＧＢウイルスのいずれか１つの株と
の間のゲノムのヌクレオチドの配列の同一性は約４５％
以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約８０
％以上であろうと予測される。
【００３２】また、現在ではＨＧＢＶ菌株が遺伝的に近
縁であると考えられるようになったので、ＨＧＢＶ−Ａ
と１つのＨＧＢＶ−Ａ株との間のゲノム配列の同一性は
アミノ酸レベルで約３５％以上、好ましくは約４０％以
上、より好ましくは約６０％以上、更に好ましくは約８
０％以上であると予想される。更に、少なくとも約１３
ヌクレオチドの対応する連続配列が存在し、これは２つ
以上の連続配列の組み合わせとして提示されてもよい。
また、ＨＧＢＶ株が遺伝的に近縁であると考えられるよ
うになったので、ＨＧＢＶ−Ｂと１つのＨＧＢＶ−Ｂ株
との間のゲノム配列の同一性はアミノ酸レベルで約３５
％以上、好ましくは約４０％以上、より好ましくは約６
０％以上、更に好ましくは約８０％以上であると予測さ
れる。更に、少なくとも約１３ヌクレオチドの対応する
連続配列が存在し、これは２つ以上の連続配列の組み合
わせとして提示されてもよい。また、ＨＧＢＶ菌株は遺
伝的に近縁であると考えられるようになったので、ＨＧ
ＢＶ−Ｃと１つのＨＧＢＶ−Ｃ株との間のゲノムの配列
の同一性はアミノ酸レベルで約３５％以上、好ましくは
約４０％以上、より好ましくは約６０％以上、更に好ま
しくは約８０％以上であると予測される。更に、少なく
とも約１３ヌクレオチドの対応する連続配列が存在し、
これは２つ以上の連続配列の組み合わせとして提示され
てもよい。
縁であると考えられるようになったので、ＨＧＢＶ−Ａ
と１つのＨＧＢＶ−Ａ株との間のゲノム配列の同一性は
アミノ酸レベルで約３５％以上、好ましくは約４０％以
上、より好ましくは約６０％以上、更に好ましくは約８
０％以上であると予想される。更に、少なくとも約１３
ヌクレオチドの対応する連続配列が存在し、これは２つ
以上の連続配列の組み合わせとして提示されてもよい。
また、ＨＧＢＶ株が遺伝的に近縁であると考えられるよ
うになったので、ＨＧＢＶ−Ｂと１つのＨＧＢＶ−Ｂ株
との間のゲノム配列の同一性はアミノ酸レベルで約３５
％以上、好ましくは約４０％以上、より好ましくは約６
０％以上、更に好ましくは約８０％以上であると予測さ
れる。更に、少なくとも約１３ヌクレオチドの対応する
連続配列が存在し、これは２つ以上の連続配列の組み合
わせとして提示されてもよい。また、ＨＧＢＶ菌株は遺
伝的に近縁であると考えられるようになったので、ＨＧ
ＢＶ−Ｃと１つのＨＧＢＶ−Ｃ株との間のゲノムの配列
の同一性はアミノ酸レベルで約３５％以上、好ましくは
約４０％以上、より好ましくは約６０％以上、更に好ま
しくは約８０％以上であると予測される。更に、少なく
とも約１３ヌクレオチドの対応する連続配列が存在し、
これは２つ以上の連続配列の組み合わせとして提示され
てもよい。
【００３３】本文中に記載の組成物及び方法は、予想さ
れる種々のＨＧＢＶ株の診断薬及びワクチンのを調製を
可能にし、また、抗ウイルス剤のスクリーニング手順に
使用し得る。この種に包含される他の菌株がウイルス分
類学者によって同定され得るための十分な情報が提供さ
れている。本発明に包含される配列はＨＧＢＶによって
コードしていると考えられる。これらの配列は、免疫原
性ウイルスエピトープが存在するであろう読取り枠を含
む。既知の他の肝炎原因ウイルスに比較したとき、この
エピトープはＨＧＢＶに特有である。エピトープの独自
性は、ＨＧＢＶと免疫反応性であり、肝炎Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ及びＥウイルスと免疫反応性でないことによって決定
される。免疫反応性の判定方法は当業界で公知であり、
例えば、ラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)、エンザイムリ
ンクトイムノソルベントアッセイ(ＥＬＩＳＡ)、血球凝
集反応(ＨＡ)、蛍光偏光イムノアッセイ(ＦＰＩＡ)など
があり、また適当な方法のいくつかの例が本文中に記載
されている。
れる種々のＨＧＢＶ株の診断薬及びワクチンのを調製を
可能にし、また、抗ウイルス剤のスクリーニング手順に
使用し得る。この種に包含される他の菌株がウイルス分
類学者によって同定され得るための十分な情報が提供さ
れている。本発明に包含される配列はＨＧＢＶによって
コードしていると考えられる。これらの配列は、免疫原
性ウイルスエピトープが存在するであろう読取り枠を含
む。既知の他の肝炎原因ウイルスに比較したとき、この
エピトープはＨＧＢＶに特有である。エピトープの独自
性は、ＨＧＢＶと免疫反応性であり、肝炎Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ及びＥウイルスと免疫反応性でないことによって決定
される。免疫反応性の判定方法は当業界で公知であり、
例えば、ラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)、エンザイムリ
ンクトイムノソルベントアッセイ(ＥＬＩＳＡ)、血球凝
集反応(ＨＡ)、蛍光偏光イムノアッセイ(ＦＰＩＡ)など
があり、また適当な方法のいくつかの例が本文中に記載
されている。
【００３４】指定配列、例えばＨＧＢＶ ｃＤＮＡまた
はＨＧＢＶゲノム「に由来の」ポリヌクレオチドという
表現は、ヌクレオチド配列の１つの領域に対応する、即
ちこの領域に類似または相補的な概して少なくとも約６
ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約８ヌクレオチ
ド、より好ましくは少なくとも約１０〜１２ヌクレオチ
ド、更に好ましくは少なくとも約１５〜２０ヌクレオチ
ドの配列から成るポリヌクレオチド配列を意味してい
る。好ましくは、ポリヌクレオチドを由来させる領域の
配列は、ＨＧＢＶゲノムに特有の配列と類似または相補
的である。配列がＨＧＢＶゲノムに特有の配列に相補的
であるか又は類似であるかは、当業者に公知の方法で決
定され得る。指定配列の独自性を判定する方法として例
えばデータバンクの配列比較を使用し得る。配列を由来
させた領域の非限定例としては、特異的エピトープをコ
ードする領域、非翻訳及び／または非転写領域がある。
はＨＧＢＶゲノム「に由来の」ポリヌクレオチドという
表現は、ヌクレオチド配列の１つの領域に対応する、即
ちこの領域に類似または相補的な概して少なくとも約６
ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約８ヌクレオチ
ド、より好ましくは少なくとも約１０〜１２ヌクレオチ
ド、更に好ましくは少なくとも約１５〜２０ヌクレオチ
ドの配列から成るポリヌクレオチド配列を意味してい
る。好ましくは、ポリヌクレオチドを由来させる領域の
配列は、ＨＧＢＶゲノムに特有の配列と類似または相補
的である。配列がＨＧＢＶゲノムに特有の配列に相補的
であるか又は類似であるかは、当業者に公知の方法で決
定され得る。指定配列の独自性を判定する方法として例
えばデータバンクの配列比較を使用し得る。配列を由来
させた領域の非限定例としては、特異的エピトープをコ
ードする領域、非翻訳及び／または非転写領域がある。
【００３５】得られるポリヌクレオチドは必ずしもＨＧ
ＢＶのヌクレオチド配列に物理的に由来しなくてもよ
く、ポリヌクレオチドを由来させる(１つまたは複数の)
領域の塩基配列によって与えられる情報に基づいた化学
合成、複製または逆転写もしくは転写などを非限定例と
する任意の方法で作製してもよい。更に、指定配列の領
域に対応する領域の組み合わせを予定の用途に合うよう
に当業界で公知の方法で修飾してもよい。
ＢＶのヌクレオチド配列に物理的に由来しなくてもよ
く、ポリヌクレオチドを由来させる(１つまたは複数の)
領域の塩基配列によって与えられる情報に基づいた化学
合成、複製または逆転写もしくは転写などを非限定例と
する任意の方法で作製してもよい。更に、指定配列の領
域に対応する領域の組み合わせを予定の用途に合うよう
に当業界で公知の方法で修飾してもよい。
【００３６】指定核酸配列またはＨＧＢＶゲノムに由来
の「ポリペプチド」または「アミノ酸」配列は、配列中
にコードされているか、または、少なくとも３〜５個の
アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜１０個のアミ
ノ酸、更に好ましくは１５〜２０個のアミノ酸から成る
配列の一部分にコードされている、ポリペプチドのアミ
ノ酸配列に等しいアミノ酸配列を有するポリペプチドを
意味する。または、配列中にコードされたポリペプチド
と免疫学的に同じポリペプチドを意味する。
の「ポリペプチド」または「アミノ酸」配列は、配列中
にコードされているか、または、少なくとも３〜５個の
アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜１０個のアミ
ノ酸、更に好ましくは１５〜２０個のアミノ酸から成る
配列の一部分にコードされている、ポリペプチドのアミ
ノ酸配列に等しいアミノ酸配列を有するポリペプチドを
意味する。または、配列中にコードされたポリペプチド
と免疫学的に同じポリペプチドを意味する。
【００３７】本文中で使用された「合成ペプチド」なる
用語は、天然にもしくはライブラリー形態では随伴して
いるポリペプチドの全部または一部分をその起原もしく
は操作が原因で随伴していないか、及び／または天然に
随伴するポリヌクレオチド以外のポリヌクレオチドを随
伴している、当業者に公知の方法で化学合成できる、任
意の長さのアミノ酸の重合形態を意味している。これら
の合成ペプチドは種々の用途に有用である。
用語は、天然にもしくはライブラリー形態では随伴して
いるポリペプチドの全部または一部分をその起原もしく
は操作が原因で随伴していないか、及び／または天然に
随伴するポリヌクレオチド以外のポリヌクレオチドを随
伴している、当業者に公知の方法で化学合成できる、任
意の長さのアミノ酸の重合形態を意味している。これら
の合成ペプチドは種々の用途に有用である。
【００３８】「組換えポリペプチド」または「組換え抗
原」なる用語は互換的に使用されており、天然にもしく
はライブラリー形態では随伴しているポリペプチドの全
部または一部分をその起原もしくは操作が原因で随伴し
ていないか及び／または天然に随伴するポリヌクレオチ
ド以外のポリヌクレオチドを随伴している、ゲノム由
来、半合成または合成された少なくとも１つのポリペプ
チドを意味する。このポリペプチドは必ずしもＨＧＢＶ
の指定核酸配列またはＨＧＢＶゲノムから翻訳される必
要はない。通常は組換え発現系によって作製される。
原」なる用語は互換的に使用されており、天然にもしく
はライブラリー形態では随伴しているポリペプチドの全
部または一部分をその起原もしくは操作が原因で随伴し
ていないか及び／または天然に随伴するポリヌクレオチ
ド以外のポリヌクレオチドを随伴している、ゲノム由
来、半合成または合成された少なくとも１つのポリペプ
チドを意味する。このポリペプチドは必ずしもＨＧＢＶ
の指定核酸配列またはＨＧＢＶゲノムから翻訳される必
要はない。通常は組換え発現系によって作製される。
【００３９】本文中で使用される「ポリヌクレオチド」
なる用語は、任意の長さのヌクレオチドの重合形態、リ
ボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドを意味
する。この用語は、分子の一次構造だけに関する。従っ
てこの用語は、二本鎖及び一本鎖ＤＮＡ、二本鎖及び一
本鎖ＲＮＡを包含する。また、メチル化及び／またはキ
ャッピングよるポリヌクレオチドの修飾、及び非修飾形
態を包含する。
なる用語は、任意の長さのヌクレオチドの重合形態、リ
ボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドを意味
する。この用語は、分子の一次構造だけに関する。従っ
てこの用語は、二本鎖及び一本鎖ＤＮＡ、二本鎖及び一
本鎖ＲＮＡを包含する。また、メチル化及び／またはキ
ャッピングよるポリヌクレオチドの修飾、及び非修飾形
態を包含する。
【００４０】「精製ウイルスポリペプチド」は、実質的
に遊離したＨＧＢＶポリペプチドまたはそのフラグメン
ト、即ちウイルスポリペプチドが天然に随伴している細
胞成分を約５０％未満、好ましくは約７０％未満、更に
好ましくは約９０％未満含有するＨＧＢＶポリペプチド
またはそのフラグメントを意味する。
に遊離したＨＧＢＶポリペプチドまたはそのフラグメン
ト、即ちウイルスポリペプチドが天然に随伴している細
胞成分を約５０％未満、好ましくは約７０％未満、更に
好ましくは約９０％未満含有するＨＧＢＶポリペプチド
またはそのフラグメントを意味する。
【００４１】本文中で使用される「ポリペプチド」なる
用語は、アミノ酸の分子鎖を示し、特定の長さの物質を
意味しない。従って、ペプチド、オリゴペプチド及びタ
ンパク質がポリペプチドの定義に包含される。しかしな
がらこの用語は、ポリペプチドの発現後修飾物、例えば
グリコシル化物、アセチル化物、リン酸化物、などを意
味しない。
用語は、アミノ酸の分子鎖を示し、特定の長さの物質を
意味しない。従って、ペプチド、オリゴペプチド及びタ
ンパク質がポリペプチドの定義に包含される。しかしな
がらこの用語は、ポリペプチドの発現後修飾物、例えば
グリコシル化物、アセチル化物、リン酸化物、などを意
味しない。
【００４２】「組換え宿主細胞」、「宿主細胞」、「細
胞」、「細胞系」「細胞培養物」及び単細胞体として培
養された微生物または高等真核細胞系を示す同様の用語
は、組換えベクターまたは他の導入ＤＮＡのレシピエン
トとして使用できるまたは使用されている細胞を意味し
ており、形質転換された原細胞の本来の子孫を包含す
る。
胞」、「細胞系」「細胞培養物」及び単細胞体として培
養された微生物または高等真核細胞系を示す同様の用語
は、組換えベクターまたは他の導入ＤＮＡのレシピエン
トとして使用できるまたは使用されている細胞を意味し
ており、形質転換された原細胞の本来の子孫を包含す
る。
【００４３】「読取り枠」または「ＯＲＦ」なる用語
は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の
領域を意味する。この領域は、コーディング配列の一部
分を表してもよくまたは全部を表してもよい。
は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の
領域を意味する。この領域は、コーディング配列の一部
分を表してもよくまたは全部を表してもよい。
【００４４】「コーディング配列」は、適当な調節配列
のコントロール下に置かれたときにｍＲＮＡに転写され
るか及び／またはポリペプチドに翻訳されるポリヌクレ
オチド配列を意味する。コーディング配列の境界は５'
末端の翻訳開始コドンと３'末端の翻訳終了コドンとに
よって決定される。コーディング配列の非限定例として
は、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ及び組換えポリヌクレオチド配
列がある。
のコントロール下に置かれたときにｍＲＮＡに転写され
るか及び／またはポリペプチドに翻訳されるポリヌクレ
オチド配列を意味する。コーディング配列の境界は５'
末端の翻訳開始コドンと３'末端の翻訳終了コドンとに
よって決定される。コーディング配列の非限定例として
は、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ及び組換えポリヌクレオチド配
列がある。
【００４５】「によって／として免疫学的に同じ」なる
用語は、(１つまたは複数の)指定ポリペプチド通常はＨ
ＧＢＶタンパク質中に存在しこれらに特有の(１つまた
は複数の)エピトープ及び(１つまたは複数の)ポリペプ
チドの存在を意味する。免疫学的同一性は、抗体結合及
び／または結合の競合によって決定され得る。これらの
技術は当業者に公知であり、また本文中にも記載されて
いる。エピトープの独自性はまた、エピトープをコード
するポリヌクレオチド配列をＧｅｎＢａｎｋのような既
知のデータバンクでコンピューターサーチし、他の既知
タンパク質とアミノ酸配列を比較することによって判定
できる。
用語は、(１つまたは複数の)指定ポリペプチド通常はＨ
ＧＢＶタンパク質中に存在しこれらに特有の(１つまた
は複数の)エピトープ及び(１つまたは複数の)ポリペプ
チドの存在を意味する。免疫学的同一性は、抗体結合及
び／または結合の競合によって決定され得る。これらの
技術は当業者に公知であり、また本文中にも記載されて
いる。エピトープの独自性はまた、エピトープをコード
するポリヌクレオチド配列をＧｅｎＢａｎｋのような既
知のデータバンクでコンピューターサーチし、他の既知
タンパク質とアミノ酸配列を比較することによって判定
できる。
【００４６】本文中で使用される「エピトープ」なる用
語は、ポリペプチドの抗原決定基を意味する。恐らく
は、エピトープが３個のアミノ酸をエピトープに特有の
空間的コンホメーションで含む。概して、エピトープは
少なくとも５個のこのようなアミノ酸から成り、より一
般的には、少なくとも８〜１０個のアミノ酸から成る。
空間的コンホメーションの検査方法は当業界で公知であ
り、例えば、ｘ線結晶学及び二次元核磁気共鳴がある。
語は、ポリペプチドの抗原決定基を意味する。恐らく
は、エピトープが３個のアミノ酸をエピトープに特有の
空間的コンホメーションで含む。概して、エピトープは
少なくとも５個のこのようなアミノ酸から成り、より一
般的には、少なくとも８〜１０個のアミノ酸から成る。
空間的コンホメーションの検査方法は当業界で公知であ
り、例えば、ｘ線結晶学及び二次元核磁気共鳴がある。
【００４７】ポリペプチドに内包される特異的エピトー
プの抗体認識によってポリペプチドが抗体と結合すると
きはポリペプチドは抗体と「免疫反応性」である。免疫
反応性は、抗体結合、より特定的には抗体結合のキネテ
ィックスによって、及び／または抗体に対するエピトー
プを含む(１つまたは複数の)既知のポリペプチドを(１
つまたは複数の)コンペティターとして用いる結合の競
合によって判定され得る。ポリペプチドが抗体と免疫反
応性であるか否かを判定する方法は当業界で公知であ
る。
プの抗体認識によってポリペプチドが抗体と結合すると
きはポリペプチドは抗体と「免疫反応性」である。免疫
反応性は、抗体結合、より特定的には抗体結合のキネテ
ィックスによって、及び／または抗体に対するエピトー
プを含む(１つまたは複数の)既知のポリペプチドを(１
つまたは複数の)コンペティターとして用いる結合の競
合によって判定され得る。ポリペプチドが抗体と免疫反
応性であるか否かを判定する方法は当業界で公知であ
る。
【００４８】本文中で使用される「ＨＧＢＶエピトープ
を含む免疫原性ポリペプチド」なる用語は、天然産生Ｈ
ＧＢＶポリペプチドまたはそのフラグメント、及び他の
手段、例えば化学合成もしくは組換え生物中でのポリペ
プチドの発現などによって調製されたポリペプチドを意
味する。
を含む免疫原性ポリペプチド」なる用語は、天然産生Ｈ
ＧＢＶポリペプチドまたはそのフラグメント、及び他の
手段、例えば化学合成もしくは組換え生物中でのポリペ
プチドの発現などによって調製されたポリペプチドを意
味する。
【００４９】「処理」なる用語は、予防及び／または治
療を意味する。
療を意味する。
【００５０】本文中で使用された「個体」なる用語は、
脊椎動物、特に哺乳動物種の成員を意味し、その非限定
例としては、飼育動物、遊猟用動物、霊長類及びヒトが
ある。より特定的にはシシザル及びヒトを意味する。
脊椎動物、特に哺乳動物種の成員を意味し、その非限定
例としては、飼育動物、遊猟用動物、霊長類及びヒトが
ある。より特定的にはシシザル及びヒトを意味する。
【００５１】本文中で使用される「プラス鎖」(または
「＋鎖」)なる用語は、ポリペプチドをコードする配列
を含む核酸を意味する。「マイナス鎖」(または「−
鎖」)なる用語は、「プラス」鎖の配列に相補的な配列
を含む核酸を意味する。
「＋鎖」)なる用語は、ポリペプチドをコードする配列
を含む核酸を意味する。「マイナス鎖」(または「−
鎖」)なる用語は、「プラス」鎖の配列に相補的な配列
を含む核酸を意味する。
【００５２】ウイルスの「正鎖ゲノム」なる用語は、Ｒ
ＮＡまたはＤＮＡのいずれであるかにかかわりなく、
(１つまたは複数の)ウイルスポリペプチドをコードする
一本鎖ゲノムを意味する。
ＮＡまたはＤＮＡのいずれであるかにかかわりなく、
(１つまたは複数の)ウイルスポリペプチドをコードする
一本鎖ゲノムを意味する。
【００５３】「試験サンプル」なる用語は、アナライト
のソースとなる個体の身体成分(例えば該当抗体または
該当抗原)を意味する。これらの成分は当業界で公知で
ある。これらの試験サンプルは、本文中に記載の本発明
の方法によって試験できる生物サンプルを包含し、例え
ば、ヒト及び動物の全血、血清、血漿、脳脊髄液、尿、
リンパ液のような体液、涙、唾液、母乳、白血球、ミエ
ローマのような呼吸器、腸管、尿生殖管の種々の外分泌
物、細胞培養上清のような生物流体、固定組織標本、固
定細胞標本がある。
のソースとなる個体の身体成分(例えば該当抗体または
該当抗原)を意味する。これらの成分は当業界で公知で
ある。これらの試験サンプルは、本文中に記載の本発明
の方法によって試験できる生物サンプルを包含し、例え
ば、ヒト及び動物の全血、血清、血漿、脳脊髄液、尿、
リンパ液のような体液、涙、唾液、母乳、白血球、ミエ
ローマのような呼吸器、腸管、尿生殖管の種々の外分泌
物、細胞培養上清のような生物流体、固定組織標本、固
定細胞標本がある。
【００５４】本文中に記載の手順で合成ペプチドを合成
した後、ＨＧＢＶに対する抗原または抗体の存在を検出
する本文中に記載のような独特のアッセイを開発するた
めに合成ペプチドを使用し得る。これらの組成物はま
た、当業者が望むＨＧＢＶの免疫原性エピトープに特異
的に結合する特異的合成ペプチドによってモノクローナ
ル抗体及び／またはポリクローナル抗体を開発するため
に使用され得る。また、当業界で公知の以下の方法によ
ってワクチンを開発するために少なくとも１つの本発明
の合成ペプチドを使用することもある。
した後、ＨＧＢＶに対する抗原または抗体の存在を検出
する本文中に記載のような独特のアッセイを開発するた
めに合成ペプチドを使用し得る。これらの組成物はま
た、当業者が望むＨＧＢＶの免疫原性エピトープに特異
的に結合する特異的合成ペプチドによってモノクローナ
ル抗体及び／またはポリクローナル抗体を開発するため
に使用され得る。また、当業界で公知の以下の方法によ
ってワクチンを開発するために少なくとも１つの本発明
の合成ペプチドを使用することもある。
【００５５】アッセイに使用される試薬はバイアルまた
は瓶のような１つまたはそれ以上の容器と共に検査キッ
トの形態で提供され、各容器はアッセイに使用されるモ
ノクローナル抗体のような個別試薬またはモノクローナ
ル抗体のカクテルまたはポリクローナル抗体を収容して
いる。緩衝剤、対照、などの当業者に公知の他の成分を
このような検査キットに包含させてもよい。
は瓶のような１つまたはそれ以上の容器と共に検査キッ
トの形態で提供され、各容器はアッセイに使用されるモ
ノクローナル抗体のような個別試薬またはモノクローナ
ル抗体のカクテルまたはポリクローナル抗体を収容して
いる。緩衝剤、対照、などの当業者に公知の他の成分を
このような検査キットに包含させてもよい。
【００５６】本文中で使用される「アナライト」なる用
語は、試験サンプル中に存在する検出すべき物質を意味
する。アナライトは、天然の特異的結合相手(例えば抗
体)が存在しているかまたは特異的結合相手を調製でき
るいかなる物質でもよい。従って、アナライトは、アッ
セイ中に１つまたはそれ以上の特異的結合相手に結合し
得る物質である。「アナライト」はまた、任意の抗原性
物質、ハプテン、抗体及びこれらの組み合わせを包含す
る。アナライトは、特異的結合対の成員であるから、ビ
タミンＢ１２を測定するために特異的結合対の成員とし
て内因子タンパク質を使用したり、葉酸を測定するため
に葉酸塩結合タンパク質を使用したりまたは糖質を測定
するために特異的結合対の成員であるレクチンを使用し
たりするように、天然の特異的結合相手(対)を用いて検
出することができる。アナライトとしては、タンパク
質、ペプチド、アミノ酸、ヌクレオチド標的などがあ
る。
語は、試験サンプル中に存在する検出すべき物質を意味
する。アナライトは、天然の特異的結合相手(例えば抗
体)が存在しているかまたは特異的結合相手を調製でき
るいかなる物質でもよい。従って、アナライトは、アッ
セイ中に１つまたはそれ以上の特異的結合相手に結合し
得る物質である。「アナライト」はまた、任意の抗原性
物質、ハプテン、抗体及びこれらの組み合わせを包含す
る。アナライトは、特異的結合対の成員であるから、ビ
タミンＢ１２を測定するために特異的結合対の成員とし
て内因子タンパク質を使用したり、葉酸を測定するため
に葉酸塩結合タンパク質を使用したりまたは糖質を測定
するために特異的結合対の成員であるレクチンを使用し
たりするように、天然の特異的結合相手(対)を用いて検
出することができる。アナライトとしては、タンパク
質、ペプチド、アミノ酸、ヌクレオチド標的などがあ
る。
【００５７】本発明は、特異的結合成員を利用するアッ
セイを提供する。本文中で使用される「特異的結合成
員」なる用語は、特異的結合対の成員を意味する。特異
的結合対は、２つの異なる分子から成り、一方の分子が
化学的または物理的手段を介して他方の分子に特異的に
結合して形成される。従って、常用のイムノアッセイの
抗原抗体特異的結合対に加えて、他の特異的結合対とし
は、ビオチンとアビジン、糖質とレクチン、互いに相補
的なヌクレオチド配列、エフェクター分子とレセプター
分子、補因子と酵素、酵素阻害物質と酵素、などがあ
る。更に、特異的結合対として、原特異的結合成員の類
縁体、例えばアナライト類縁体がある。免疫反応性の特
異的結合成員としては、抗原、抗原フラグメント、モノ
クローナル及びポリクローナルの抗体及び抗体フラグメ
ント、その複合体などがあり、組換えＤＮＡ分子によっ
て形成されたものも含む。本文中で使用された「ハプテ
ン」なる用語は、抗体に結合できるがキャリアータンパ
ク質に結合しなければ抗体形成を誘発できない部分抗原
または非タンパク性結合成員を意味する。
セイを提供する。本文中で使用される「特異的結合成
員」なる用語は、特異的結合対の成員を意味する。特異
的結合対は、２つの異なる分子から成り、一方の分子が
化学的または物理的手段を介して他方の分子に特異的に
結合して形成される。従って、常用のイムノアッセイの
抗原抗体特異的結合対に加えて、他の特異的結合対とし
は、ビオチンとアビジン、糖質とレクチン、互いに相補
的なヌクレオチド配列、エフェクター分子とレセプター
分子、補因子と酵素、酵素阻害物質と酵素、などがあ
る。更に、特異的結合対として、原特異的結合成員の類
縁体、例えばアナライト類縁体がある。免疫反応性の特
異的結合成員としては、抗原、抗原フラグメント、モノ
クローナル及びポリクローナルの抗体及び抗体フラグメ
ント、その複合体などがあり、組換えＤＮＡ分子によっ
て形成されたものも含む。本文中で使用された「ハプテ
ン」なる用語は、抗体に結合できるがキャリアータンパ
ク質に結合しなければ抗体形成を誘発できない部分抗原
または非タンパク性結合成員を意味する。
【００５８】本文中で使用される「捕獲試薬」なる用語
は、サンドイッチアッセイでアナライトに特異的、また
は競合アッセイで指示試薬もしくはアナライトに特異
的、または間接アッセイでそれ自体がアナライト特異的
な補助特異的結合成員に特異的、であるような非標識特
異的結合成員を意味する。捕獲試薬をアッセイ実施前ま
たはアッセイ実施中に固相材料に直接または間接に結合
させることができ、これによって固定化した複合体を試
験サンプルから分離できる。
は、サンドイッチアッセイでアナライトに特異的、また
は競合アッセイで指示試薬もしくはアナライトに特異
的、または間接アッセイでそれ自体がアナライト特異的
な補助特異的結合成員に特異的、であるような非標識特
異的結合成員を意味する。捕獲試薬をアッセイ実施前ま
たはアッセイ実施中に固相材料に直接または間接に結合
させることができ、これによって固定化した複合体を試
験サンプルから分離できる。
【００５９】「固相」(「固体支持体」)は当業者に公知
であり、反応トレーのウエル壁、試験管、ポリスチレン
ビーズ、磁気ビーズ、ニトロセルロース片、膜、ラテッ
クス粒子のような微粒子、ヒツジ(または他の動物)の赤
血球、硬膜細胞、などがある。「固相」は限定的ではな
く、当業者によって選択され得る。従って、ラテックス
粒子、微粒子、磁性または非磁性のビーズ、膜、プラス
チック管、マイクロタイターウエルの壁、ガラスまたは
シリコンチップ、ヒツジ(または他の適当な動物)の赤血
球及び硬膜細胞はすべて好適例である。固相にペプチド
を固定化する適当な方法としては、イオン性、疎水性、
共有結合性などの相互作用がある。本文中で使用された
「固相」なる用語は、不溶性であるかまたは以後の反応
によって不溶性にできる任意の材料を意味する。固相
は、捕獲試薬を吸引し固定化する固有の能力に基づいて
選択され得る。または、固相が、捕獲試薬を吸引し固定
化する能力を有する追加のレセプターを保持し得る。追
加のレセプターとしては、捕獲試薬自体に対して逆符号
電荷をもつ荷電物質または捕獲試薬に結合した荷電物質
に対して逆符号電荷をもつ荷電物質がある。更に別の選
択要因として、レセプター分子は、固相に固定化(結合)
され特異的結合反応を介して捕獲試薬を固定化する能力
を有する任意の特異的結合成員でもよい。レセプター分
子は、アッセイ実施前またはアッセイ実施中に捕獲試薬
を固相材料に間接結合させ得る。従って固相は、プラス
チック、プラスチック誘導体、磁性もしくは非磁性の金
属、ガラスまたはシリコンから成る試験管、マイクロタ
イターウエル、シート、ビーズ、微粒子、チップの表
面、ヒツジ(または他の動物)の赤血球、硬膜細胞及び当
業者に公知の他の構造のいずれでもよい。
であり、反応トレーのウエル壁、試験管、ポリスチレン
ビーズ、磁気ビーズ、ニトロセルロース片、膜、ラテッ
クス粒子のような微粒子、ヒツジ(または他の動物)の赤
血球、硬膜細胞、などがある。「固相」は限定的ではな
く、当業者によって選択され得る。従って、ラテックス
粒子、微粒子、磁性または非磁性のビーズ、膜、プラス
チック管、マイクロタイターウエルの壁、ガラスまたは
シリコンチップ、ヒツジ(または他の適当な動物)の赤血
球及び硬膜細胞はすべて好適例である。固相にペプチド
を固定化する適当な方法としては、イオン性、疎水性、
共有結合性などの相互作用がある。本文中で使用された
「固相」なる用語は、不溶性であるかまたは以後の反応
によって不溶性にできる任意の材料を意味する。固相
は、捕獲試薬を吸引し固定化する固有の能力に基づいて
選択され得る。または、固相が、捕獲試薬を吸引し固定
化する能力を有する追加のレセプターを保持し得る。追
加のレセプターとしては、捕獲試薬自体に対して逆符号
電荷をもつ荷電物質または捕獲試薬に結合した荷電物質
に対して逆符号電荷をもつ荷電物質がある。更に別の選
択要因として、レセプター分子は、固相に固定化(結合)
され特異的結合反応を介して捕獲試薬を固定化する能力
を有する任意の特異的結合成員でもよい。レセプター分
子は、アッセイ実施前またはアッセイ実施中に捕獲試薬
を固相材料に間接結合させ得る。従って固相は、プラス
チック、プラスチック誘導体、磁性もしくは非磁性の金
属、ガラスまたはシリコンから成る試験管、マイクロタ
イターウエル、シート、ビーズ、微粒子、チップの表
面、ヒツジ(または他の動物)の赤血球、硬膜細胞及び当
業者に公知の他の構造のいずれでもよい。
【００６０】また、固相が、検出抗体によって接近され
得る十分な多孔性を有しており且つ抗原と結合する適当
な表面親和性を有している任意の適当な多孔性材料物質
から成り得ることも予測され、本発明の範囲に包含され
る。一般には微孔性構造が好ましいが、水和状態でゲル
構造をもつ材料も使用され得る。すべての材料は、フィ
ルム、シートもしくはプレートのような適当な形態で使
用でき、または、紙、ガラス、プラスチックフィルムも
しくは布のような適当な不活性担体にコート、接着また
は積層されてもよい。ニトロセルロースの多孔性構造
は、モノクローナル抗体も含む極めて多様な試薬に対し
て優れた吸収性及び吸着性を有している。ナイロンも同
様の特性を有しており、やはり好適である。上述のよう
な多孔性固体支持体は厚み約０.０１〜０.５ｍｍ、好ま
しくは約０.１〜ｍｍのシートの形態であるのが好まし
い。細孔サイズは広範囲に選択し得るが、好ましくは約
０.０２５〜１５ミクロン、特に約０.１５〜１５ミクロ
ンである。このような支持体の表面は、支持体と抗原ま
たは抗体との共有結合を生じさせる化学的プロセスによ
って活性化され得る。しかしながら一般には、十分には
解明されていない疎水性の力によって多孔性材料に吸着
されることによって抗原または抗体の不可逆性結合が得
られる。また、適当な固体支持体は米国特許出願第２２
７,２７２号に記載されている。
得る十分な多孔性を有しており且つ抗原と結合する適当
な表面親和性を有している任意の適当な多孔性材料物質
から成り得ることも予測され、本発明の範囲に包含され
る。一般には微孔性構造が好ましいが、水和状態でゲル
構造をもつ材料も使用され得る。すべての材料は、フィ
ルム、シートもしくはプレートのような適当な形態で使
用でき、または、紙、ガラス、プラスチックフィルムも
しくは布のような適当な不活性担体にコート、接着また
は積層されてもよい。ニトロセルロースの多孔性構造
は、モノクローナル抗体も含む極めて多様な試薬に対し
て優れた吸収性及び吸着性を有している。ナイロンも同
様の特性を有しており、やはり好適である。上述のよう
な多孔性固体支持体は厚み約０.０１〜０.５ｍｍ、好ま
しくは約０.１〜ｍｍのシートの形態であるのが好まし
い。細孔サイズは広範囲に選択し得るが、好ましくは約
０.０２５〜１５ミクロン、特に約０.１５〜１５ミクロ
ンである。このような支持体の表面は、支持体と抗原ま
たは抗体との共有結合を生じさせる化学的プロセスによ
って活性化され得る。しかしながら一般には、十分には
解明されていない疎水性の力によって多孔性材料に吸着
されることによって抗原または抗体の不可逆性結合が得
られる。また、適当な固体支持体は米国特許出願第２２
７,２７２号に記載されている。
【００６１】「指示試薬」は、ＨＧＢＶに対する特異的
結合成員に結合(付着)させた外部手段によって検出でき
る測定可能シグナルを発生し得るかまたは発生する「シ
グナル発生化合物」(ラベル)から成る。ここで使用され
る「特異的結合成員」は、特異的結合対の一方の成員を
意味する。特異的結合対は異なる２つの分子から成り、
一方の分子が化学的または物理的手段を介して他方の分
子に特異的に結合する。ＨＧＢＶに対する特異的結合対
の抗体成員であることに加えて、指示試薬はまた、ビオ
チンまたは抗ビオチン、アビジンまたはビオチン、糖質
またはレクチン、互いに相補的なヌクレオチド配列、エ
フェクターまたはレセプター分子、酵素補因子及び酵
素、酵素阻害物質または酵素、などのようなハプテン−
抗ハプテン系を含む任意の特異的結合対の一方の成員か
ら成り得る。免疫反応性の特異的結合成員としては抗
体、抗原、または、サンドイッチアッセイでＨＧＢＶ、
競合アッセイで捕獲試薬、間接アッセイで補助特異的結
合成員、に結合し得る抗体／抗原複合体から成り得る。
結合成員に結合(付着)させた外部手段によって検出でき
る測定可能シグナルを発生し得るかまたは発生する「シ
グナル発生化合物」(ラベル)から成る。ここで使用され
る「特異的結合成員」は、特異的結合対の一方の成員を
意味する。特異的結合対は異なる２つの分子から成り、
一方の分子が化学的または物理的手段を介して他方の分
子に特異的に結合する。ＨＧＢＶに対する特異的結合対
の抗体成員であることに加えて、指示試薬はまた、ビオ
チンまたは抗ビオチン、アビジンまたはビオチン、糖質
またはレクチン、互いに相補的なヌクレオチド配列、エ
フェクターまたはレセプター分子、酵素補因子及び酵
素、酵素阻害物質または酵素、などのようなハプテン−
抗ハプテン系を含む任意の特異的結合対の一方の成員か
ら成り得る。免疫反応性の特異的結合成員としては抗
体、抗原、または、サンドイッチアッセイでＨＧＢＶ、
競合アッセイで捕獲試薬、間接アッセイで補助特異的結
合成員、に結合し得る抗体／抗原複合体から成り得る。
【００６２】可能な種々の「シグナル発生化合物」(ラ
ベル)としては、発色団、酵素のような触媒、フルオレ
セイン及びローダミンのような蛍光化合物、ジオキセタ
ン、アクリジニウム、フェナントリジニウム及びルミノ
ールのような化学発光化合物、放射性元素、並びに、直
接可視ラベルがある。酵素の例としては、アルカリホス
ファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラク
トシダーゼ、などがある。特定ラベルの選択は決定的で
はなく、単独でまたは１種以上の追加物質と共にシグナ
ルを発生できるものであればよい。
ベル)としては、発色団、酵素のような触媒、フルオレ
セイン及びローダミンのような蛍光化合物、ジオキセタ
ン、アクリジニウム、フェナントリジニウム及びルミノ
ールのような化学発光化合物、放射性元素、並びに、直
接可視ラベルがある。酵素の例としては、アルカリホス
ファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラク
トシダーゼ、などがある。特定ラベルの選択は決定的で
はなく、単独でまたは１種以上の追加物質と共にシグナ
ルを発生できるものであればよい。
【００６３】他の種々の固相を利用する他の実施態様も
予測され本発明の範囲に包含される。例えば、審査中の
米国特許出願第１５０,２７８号(対応欧州出願公開０３
２６１００)及び米国特許出願第３７５,０２９号(対応
欧州出願公開０４０６４７３)に記載されているよう
な、固定化可能な反応複合体を負荷電ポリマーによって
固定化するイオン捕獲手順を、高速溶液相免疫化学反応
を生じさせるために本発明に従って使用し得る。固定化
可能な免疫複合体を、負荷電ポリアニオン／免疫複合体
と先に処理した正荷電多孔性マトリックスとの間のイオ
ン性相互作用によって反応混合物の残部から分離し、審
査中の米国特許出願第９２１,９７９号(対応欧州特許出
願公開第０２７３,１１５号)に記載された化学発光シグ
ナル測定値を得るシステムのような公知の種々のシグナ
ル発生システムを用いて検出する。
予測され本発明の範囲に包含される。例えば、審査中の
米国特許出願第１５０,２７８号(対応欧州出願公開０３
２６１００)及び米国特許出願第３７５,０２９号(対応
欧州出願公開０４０６４７３)に記載されているよう
な、固定化可能な反応複合体を負荷電ポリマーによって
固定化するイオン捕獲手順を、高速溶液相免疫化学反応
を生じさせるために本発明に従って使用し得る。固定化
可能な免疫複合体を、負荷電ポリアニオン／免疫複合体
と先に処理した正荷電多孔性マトリックスとの間のイオ
ン性相互作用によって反応混合物の残部から分離し、審
査中の米国特許出願第９２１,９７９号(対応欧州特許出
願公開第０２７３,１１５号)に記載された化学発光シグ
ナル測定値を得るシステムのような公知の種々のシグナ
ル発生システムを用いて検出する。
【００６４】また、本発明方法は、固相が(磁性または
非磁性の)微粒子から成る全自動または半自動の微粒子
法を利用するシステムでの使用に適用できる。このよう
なシステムとしては、審査中の米国特許出願第４２５,
６５１号及び第４２５,６４３号(夫々欧州特許出願公開
第０４２５６３３号及び第０４２４６３４号に対応)に
記載されたものがある。
非磁性の)微粒子から成る全自動または半自動の微粒子
法を利用するシステムでの使用に適用できる。このよう
なシステムとしては、審査中の米国特許出願第４２５,
６５１号及び第４２５,６４３号(夫々欧州特許出願公開
第０４２５６３３号及び第０４２４６３４号に対応)に
記載されたものがある。
【００６５】イムノアッセイに使用する走査型プローブ
顕微鏡観察法(ＳＰＭ)も、本発明のモノクローナル抗体
を応用し易い技術である。走査型プローブ顕微鏡法、特
に原子間顕微鏡法では、例えば本発明のモノクローナル
抗体の少なくとも１つから成る捕獲相が固相に付着し、
固相の表面に存在し得る抗原／抗体複合体を走査型プロ
ーブ顕微鏡を用いて検出する。走査型トンネル顕微鏡法
を使用すると、多くのイムノアッセイシステムで抗原／
抗体複合体を検出するために通常は使用しなければなら
ないラベルが不要になる。特異的結合反応をモニターす
るためにＳＰＭを多様な方法で使用し得る。例えば、特
異的結合相手の一方の成員(本発明のモノクローナル抗
体から成るアナライト特異的物質)を走査適正表面に結
合させる。アナライト特異的物質を当業者に公知の方法
に従ってプラスチックまたは金属表面の固相から成る試
験片に吸着によって結合させてもよい。または、試験片
がプラスチック誘導体、金属、シリコンまたはガラスの
固相から成る場合には、特異的結合相手(アナライト特
異的物質)を試験片に共有結合させ得る。共有結合方法
は当業者に公知であり、特異的結合相手を試験片に不可
逆的に結合させる種々の手段を含む。試験片がシリコン
またはガラスの場合、特異的結合相手を結合させる前に
表面を活性化しなければならない。また、審査中の米国
特許出願第１５０,２７８号(１９８８年１月２９日出
願)、第３７５,０２９号(１９８９年７月７日出願)に記
載された技術及び化学を用いて試験片の表面に特異的結
合相手を固定化するためにポリ電解質相互作用を使用し
てもよい。好ましい結合方法は共有結合手段によるもの
である。特異的結合成員を結合させた後、血清、タンパ
ク質のような材料または表面を、非特異的結合を最小に
する他のブロッキング剤によって更に処理してもよい。
また、製造現場または使用時点でアッセイ目的に対する
適性を確認するために、表面を走査してもよい。走査プ
ロセスは試験片の特異的結合特性を変質させないと予測
される。
顕微鏡観察法(ＳＰＭ)も、本発明のモノクローナル抗体
を応用し易い技術である。走査型プローブ顕微鏡法、特
に原子間顕微鏡法では、例えば本発明のモノクローナル
抗体の少なくとも１つから成る捕獲相が固相に付着し、
固相の表面に存在し得る抗原／抗体複合体を走査型プロ
ーブ顕微鏡を用いて検出する。走査型トンネル顕微鏡法
を使用すると、多くのイムノアッセイシステムで抗原／
抗体複合体を検出するために通常は使用しなければなら
ないラベルが不要になる。特異的結合反応をモニターす
るためにＳＰＭを多様な方法で使用し得る。例えば、特
異的結合相手の一方の成員(本発明のモノクローナル抗
体から成るアナライト特異的物質)を走査適正表面に結
合させる。アナライト特異的物質を当業者に公知の方法
に従ってプラスチックまたは金属表面の固相から成る試
験片に吸着によって結合させてもよい。または、試験片
がプラスチック誘導体、金属、シリコンまたはガラスの
固相から成る場合には、特異的結合相手(アナライト特
異的物質)を試験片に共有結合させ得る。共有結合方法
は当業者に公知であり、特異的結合相手を試験片に不可
逆的に結合させる種々の手段を含む。試験片がシリコン
またはガラスの場合、特異的結合相手を結合させる前に
表面を活性化しなければならない。また、審査中の米国
特許出願第１５０,２７８号(１９８８年１月２９日出
願)、第３７５,０２９号(１９８９年７月７日出願)に記
載された技術及び化学を用いて試験片の表面に特異的結
合相手を固定化するためにポリ電解質相互作用を使用し
てもよい。好ましい結合方法は共有結合手段によるもの
である。特異的結合成員を結合させた後、血清、タンパ
ク質のような材料または表面を、非特異的結合を最小に
する他のブロッキング剤によって更に処理してもよい。
また、製造現場または使用時点でアッセイ目的に対する
適性を確認するために、表面を走査してもよい。走査プ
ロセスは試験片の特異的結合特性を変質させないと予測
される。
【００６６】「サンドイッチ」イムノアッセイ及びプロ
ーブアッセイなどの他の種々のアッセイフォーマットを
使用し得る。例えば、本発明のモノクローナル抗体は、
試験サンプル中にＨＧＢＶタンパク質が存在するなら
ば、この存在を判定するために種々のアッセイシステム
で使用され得る。これらのモノクローナル抗体のフラグ
メントも使用できる。例えば、第一のアッセイフォーマ
ットでは、固相にコートしておいたポリクローナルまた
はモノクローナルの抗ＨＧＢＶ抗体またはそのフラグメ
ントまたはこれらの抗体の組み合わせを、ＨＧＢＶタン
パク質を含有しているかもしれない試験サンプルと接触
させて１つの混合物を形成する。この混合物を抗原／抗
体複合体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベー
トする。次に、ＨＧＢＶ領域に特異的に結合するモノク
ローナル抗体またはポリクローナル抗体またはそのフラ
グメントまたはこれらの抗体の組み合わせから成りシグ
ナル発生化合物を結合させた指示試薬を抗原／抗体複合
体と接触させて第２混合物を形成する。次に、この第２
混合物を抗体／抗原／抗体複合体の形成に十分な期間及
び条件下でインキュベートする。試験サンプル中に存在
し固相に捕獲されたＨＧＢＶ抗原が存在するならば、こ
の存在をシグナル発生化合物によって発生した測定可能
シグナルを検出することによって判定する。試験サンプ
ル中に存在するＨＧＢＶ抗原の量は発生シグナルに比例
する。
ーブアッセイなどの他の種々のアッセイフォーマットを
使用し得る。例えば、本発明のモノクローナル抗体は、
試験サンプル中にＨＧＢＶタンパク質が存在するなら
ば、この存在を判定するために種々のアッセイシステム
で使用され得る。これらのモノクローナル抗体のフラグ
メントも使用できる。例えば、第一のアッセイフォーマ
ットでは、固相にコートしておいたポリクローナルまた
はモノクローナルの抗ＨＧＢＶ抗体またはそのフラグメ
ントまたはこれらの抗体の組み合わせを、ＨＧＢＶタン
パク質を含有しているかもしれない試験サンプルと接触
させて１つの混合物を形成する。この混合物を抗原／抗
体複合体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベー
トする。次に、ＨＧＢＶ領域に特異的に結合するモノク
ローナル抗体またはポリクローナル抗体またはそのフラ
グメントまたはこれらの抗体の組み合わせから成りシグ
ナル発生化合物を結合させた指示試薬を抗原／抗体複合
体と接触させて第２混合物を形成する。次に、この第２
混合物を抗体／抗原／抗体複合体の形成に十分な期間及
び条件下でインキュベートする。試験サンプル中に存在
し固相に捕獲されたＨＧＢＶ抗原が存在するならば、こ
の存在をシグナル発生化合物によって発生した測定可能
シグナルを検出することによって判定する。試験サンプ
ル中に存在するＨＧＢＶ抗原の量は発生シグナルに比例
する。
【００６７】または、固体支持体に結合させたポリクロ
ーナル抗体またはモノクローナル抗体またはそのフラグ
メントあるいはこれらの抗体の組み合わせと、試験サン
プルと、シグナル発生化合物と結合させたＨＧＢＶ抗原
に特異的に結合するモノクローナル抗体またはポリクロ
ーナル抗体またはそのフラグメントあるいはこれらの抗
体の組み合わせを含む指示試薬とを接触させて１つの混
合物を形成する。この混合物を抗体／抗原／抗体複合体
の形成に十分な期間及び条件下でインキュベートする。
試験サンプル中に存在し固相に捕獲されたＨＧＢＶタン
パク質が存在するならば、この存在をシグナル発生化合
物によって発生された測定可能シグナルを検出すること
によって判定する。試験サンプル中に存在するＨＧＢＶ
タンパク質の量は発生シグナルに比例する。
ーナル抗体またはモノクローナル抗体またはそのフラグ
メントあるいはこれらの抗体の組み合わせと、試験サン
プルと、シグナル発生化合物と結合させたＨＧＢＶ抗原
に特異的に結合するモノクローナル抗体またはポリクロ
ーナル抗体またはそのフラグメントあるいはこれらの抗
体の組み合わせを含む指示試薬とを接触させて１つの混
合物を形成する。この混合物を抗体／抗原／抗体複合体
の形成に十分な期間及び条件下でインキュベートする。
試験サンプル中に存在し固相に捕獲されたＨＧＢＶタン
パク質が存在するならば、この存在をシグナル発生化合
物によって発生された測定可能シグナルを検出すること
によって判定する。試験サンプル中に存在するＨＧＢＶ
タンパク質の量は発生シグナルに比例する。
【００６８】選択可能な別のアッセイフォーマットで
は、少なくとも２つの本発明のモノクローナル抗体の１
つまたは組み合わせをＨＧＢＶタンパク質に対する抗体
を検出するための競合プローブとして使用し得る。例え
ば、単独または組み合わせ形態のＨＧＢＶタンパク質を
固相にコートし得る。次いで、ＨＧＢＶ抗原に対する抗
体を含むと予想される試験サンプルを、シグナル発生化
合物と少なくとも１つの本発明のモノクローナル抗体と
から成る指示試薬と共に、固相に対して試験サンプルと
指示試薬との抗原／抗体複合体が形成されるかまたは固
相に対して指示試薬の抗原／抗体複合体の形成に十分な
期間及び条件下でインキュベートする。固相に対するモ
ノクローナル抗体の結合の減少を定量的に測定し得る。
ＮＡＮＡ、非Ｃ、非Ｄ、非Ｅ肝炎の陰性が確認された試
験サンプルから発生したシグナルに比較した測定可能な
シグナルの低下は、試験サンプル中の抗ＨＧＢＶ抗体の
存在の指標となる。
は、少なくとも２つの本発明のモノクローナル抗体の１
つまたは組み合わせをＨＧＢＶタンパク質に対する抗体
を検出するための競合プローブとして使用し得る。例え
ば、単独または組み合わせ形態のＨＧＢＶタンパク質を
固相にコートし得る。次いで、ＨＧＢＶ抗原に対する抗
体を含むと予想される試験サンプルを、シグナル発生化
合物と少なくとも１つの本発明のモノクローナル抗体と
から成る指示試薬と共に、固相に対して試験サンプルと
指示試薬との抗原／抗体複合体が形成されるかまたは固
相に対して指示試薬の抗原／抗体複合体の形成に十分な
期間及び条件下でインキュベートする。固相に対するモ
ノクローナル抗体の結合の減少を定量的に測定し得る。
ＮＡＮＡ、非Ｃ、非Ｄ、非Ｅ肝炎の陰性が確認された試
験サンプルから発生したシグナルに比較した測定可能な
シグナルの低下は、試験サンプル中の抗ＨＧＢＶ抗体の
存在の指標となる。
【００６９】更に別の検出方法では、本発明のモノクロ
ーナル抗体またはポリクローナル抗体の各々を使用し
て、固定組織切片及び固定細胞中のＨＧＢＶ抗原を免疫
組織化学分析によって検出し得る。これらの抗体を直接
標識(フルオレセイン、コロイド金、西洋ワサビペルオ
キシダーゼ、アルカリホスファターゼなど)するか、ま
たは、第２の標識抗種抗体を用いて標識(上記の種々の
ラベル)することによって疾患の組織病理を追跡する細
胞化学的分析も本発明の範囲内に包含される。
ーナル抗体またはポリクローナル抗体の各々を使用し
て、固定組織切片及び固定細胞中のＨＧＢＶ抗原を免疫
組織化学分析によって検出し得る。これらの抗体を直接
標識(フルオレセイン、コロイド金、西洋ワサビペルオ
キシダーゼ、アルカリホスファターゼなど)するか、ま
たは、第２の標識抗種抗体を用いて標識(上記の種々の
ラベル)することによって疾患の組織病理を追跡する細
胞化学的分析も本発明の範囲内に包含される。
【００７０】更に、これらのモノクローナル抗体は、Ｃ
ＮＢｒ活性化セファロースと同様のマトリックスに結合
でき、細胞培養物または血液及び肝臓のような生体組織
から特異的ＨＧＢＶタンパク質をアフィニティ精製する
ため、例えば組換え及び天然型ウイルスＨＧＢＶ抗原及
びタンパク質を精製するために使用され得る。
ＮＢｒ活性化セファロースと同様のマトリックスに結合
でき、細胞培養物または血液及び肝臓のような生体組織
から特異的ＨＧＢＶタンパク質をアフィニティ精製する
ため、例えば組換え及び天然型ウイルスＨＧＢＶ抗原及
びタンパク質を精製するために使用され得る。
【００７１】本発明のモノクローナル抗体はまた、治療
目的または他の同様の用途に適したキメラ抗体を作製す
るために使用され得る。
目的または他の同様の用途に適したキメラ抗体を作製す
るために使用され得る。
【００７２】ＨＧＢＶ抗原を検出するためにモノクロー
ナル抗体またはそのフラグメントは個々に提供され得
る。また、本発明で提供されるモノクローナル抗体(及
びそのフラグメント)の組み合わせを、本発明の少なく
とも１つの抗ＨＧＢＶ抗体と各々が異なる結合特異性を
有する他のＨＧＢＶ領域に対する抗体との混合物即ち
「カクテル」の成分として一緒に使用してもよい。従っ
て、このカクテルは、ＨＧＢＶタンパク質に対する本発
明のモノクローナル抗体とＨＧＢＶゲノムの他の抗原決
定基に対する他のモノクローナル抗体とを含む。
ナル抗体またはそのフラグメントは個々に提供され得
る。また、本発明で提供されるモノクローナル抗体(及
びそのフラグメント)の組み合わせを、本発明の少なく
とも１つの抗ＨＧＢＶ抗体と各々が異なる結合特異性を
有する他のＨＧＢＶ領域に対する抗体との混合物即ち
「カクテル」の成分として一緒に使用してもよい。従っ
て、このカクテルは、ＨＧＢＶタンパク質に対する本発
明のモノクローナル抗体とＨＧＢＶゲノムの他の抗原決
定基に対する他のモノクローナル抗体とを含む。
【００７３】アッセイフォーマットで使用され得るポリ
クローナル抗体またはそのフラグメントは、特異的ＨＧ
ＢＶ領域またはアッセイで使用される他のＨＧＢＶタン
パク質に特異的に結合しなければならない。使用される
ポリクローナル抗体は好ましくは、哺乳動物起原であ
り、ヒト、ヤギ、ウサギまたはヒツジの抗ＨＧＢＶポリ
クローナル抗体を使用し得る。極めて好ましくは、ポリ
クローナル抗体はウサギの抗ＨＧＢＶポリクローナル抗
体である。アッセイで使用されるポリクローナル抗体
は、単独で使用してもよくまたはポリクローナル抗体の
カクテルとして使用してもよい。アッセイフォーマット
で使用されるカクテルは、異なるＨＧＢＶ特異性を有す
る複数のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体
から成るので、ＨＧＢＶ感染の診断、鑑別及び予後判定
に有用であり、また、ＨＧＢＶタンパク質の分化及び特
異性の研究に有用であろう。
クローナル抗体またはそのフラグメントは、特異的ＨＧ
ＢＶ領域またはアッセイで使用される他のＨＧＢＶタン
パク質に特異的に結合しなければならない。使用される
ポリクローナル抗体は好ましくは、哺乳動物起原であ
り、ヒト、ヤギ、ウサギまたはヒツジの抗ＨＧＢＶポリ
クローナル抗体を使用し得る。極めて好ましくは、ポリ
クローナル抗体はウサギの抗ＨＧＢＶポリクローナル抗
体である。アッセイで使用されるポリクローナル抗体
は、単独で使用してもよくまたはポリクローナル抗体の
カクテルとして使用してもよい。アッセイフォーマット
で使用されるカクテルは、異なるＨＧＢＶ特異性を有す
る複数のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体
から成るので、ＨＧＢＶ感染の診断、鑑別及び予後判定
に有用であり、また、ＨＧＢＶタンパク質の分化及び特
異性の研究に有用であろう。
【００７４】本文中に記載された合成ペプチドを使用す
るアッセイ及びすべてのＨＧＢＶウイルスに共通の他の
組換えまたは天然型ペプチドを使用することによってＨ
ＧＢＶグループのウイルスが検出できることも予測され
本発明の範囲に包含される。また、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧ
ＢＶ−Ｂ、ＨＧＢＶ−Ｃまたは更に別のＨＧＢＶウイル
スに由来の種々のエピトープを同定する種々の合成、組
換えまたは天然型ペプチドをアッセイフォーマットで使
用することも本発明の範囲に包含される。後者の場合、
これらのペプチドを１つの固相にコートしてもよくまた
は各個のペプチドを微粒子のような個別の固相にコート
し、次いで組み合わせてペプチド混合物を形成し、これ
を以後のアッセイに使用してもよい。このようなアッセ
イフォーマットの変形は当業者に公知であり、後述す
る。
るアッセイ及びすべてのＨＧＢＶウイルスに共通の他の
組換えまたは天然型ペプチドを使用することによってＨ
ＧＢＶグループのウイルスが検出できることも予測され
本発明の範囲に包含される。また、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧ
ＢＶ−Ｂ、ＨＧＢＶ−Ｃまたは更に別のＨＧＢＶウイル
スに由来の種々のエピトープを同定する種々の合成、組
換えまたは天然型ペプチドをアッセイフォーマットで使
用することも本発明の範囲に包含される。後者の場合、
これらのペプチドを１つの固相にコートしてもよくまた
は各個のペプチドを微粒子のような個別の固相にコート
し、次いで組み合わせてペプチド混合物を形成し、これ
を以後のアッセイに使用してもよい。このようなアッセ
イフォーマットの変形は当業者に公知であり、後述す
る。
【００７５】別のアッセイフォーマットにおいては、Ｈ
ＧＢＶに対する抗体及び／または抗原の存在を以下の同
時アッセイで検出し得る。試験サンプルを、固相に結合
させた第１アナライト特異的な第１の結合成員から成る
第１アナライトの捕獲試薬と第２固相に結合させした第
２アナライト用の第１結合成員から成る第２アナライト
の捕獲試薬とに同時に接触させて混合物を形成する。こ
の混合物を捕獲試薬／第１アナライト複合体と捕獲試薬
／第２アナライト複合体との形成に十分な期間及び条件
下でインキュベートする。このように形成されたこれら
の複合体を次に、シグナル発生化合物で標識した第１ア
ナライト特異的結合対の成員から成る指示試薬と、シグ
ナル発生化合物で標識した第２アナライト特異的結合対
の成員から成る指示試薬とに接触させて第２混合物を形
成する。この第２混合物を、捕獲試薬／第１アナライト
／指示試薬複合体と捕獲試薬／第２アナライト／指示試
薬複合体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベー
トする。一方または双方の固相に形成された複合体に関
して発生したシグナルを試験サンプル中の１種またはそ
れ以上のアナライトの存在の指標として検出することに
よって１種またはそれ以上のアナライトの存在を判定す
る。このアッセイフォーマットにおいては、ヒト発現系
に由来のタンパク質を、哺乳類発現系に由来のタンパク
質から本文中に開示のごとく産生されたモノクローナル
抗体と同様に利用し得る。このようなアッセイ系は、
「１種またはそれ以上のアナライトを検出するための同
時的アッセイ(Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ａｓｓａｙ
ｆｏｒ ＤｅｔｅｃｔｉｎｇＯｎｅ ｏｒ Ｍｏｒｅ
Ａｎａｌｙｔｅｓ)」という名称の審査中の米国特許
出願第０７／５７４,８２１号(対応欧州特許出願公開第
０４７３０６５号)により詳細に記載されている。
ＧＢＶに対する抗体及び／または抗原の存在を以下の同
時アッセイで検出し得る。試験サンプルを、固相に結合
させた第１アナライト特異的な第１の結合成員から成る
第１アナライトの捕獲試薬と第２固相に結合させした第
２アナライト用の第１結合成員から成る第２アナライト
の捕獲試薬とに同時に接触させて混合物を形成する。こ
の混合物を捕獲試薬／第１アナライト複合体と捕獲試薬
／第２アナライト複合体との形成に十分な期間及び条件
下でインキュベートする。このように形成されたこれら
の複合体を次に、シグナル発生化合物で標識した第１ア
ナライト特異的結合対の成員から成る指示試薬と、シグ
ナル発生化合物で標識した第２アナライト特異的結合対
の成員から成る指示試薬とに接触させて第２混合物を形
成する。この第２混合物を、捕獲試薬／第１アナライト
／指示試薬複合体と捕獲試薬／第２アナライト／指示試
薬複合体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベー
トする。一方または双方の固相に形成された複合体に関
して発生したシグナルを試験サンプル中の１種またはそ
れ以上のアナライトの存在の指標として検出することに
よって１種またはそれ以上のアナライトの存在を判定す
る。このアッセイフォーマットにおいては、ヒト発現系
に由来のタンパク質を、哺乳類発現系に由来のタンパク
質から本文中に開示のごとく産生されたモノクローナル
抗体と同様に利用し得る。このようなアッセイ系は、
「１種またはそれ以上のアナライトを検出するための同
時的アッセイ(Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ａｓｓａｙ
ｆｏｒ ＤｅｔｅｃｔｉｎｇＯｎｅ ｏｒ Ｍｏｒｅ
Ａｎａｌｙｔｅｓ)」という名称の審査中の米国特許
出願第０７／５７４,８２１号(対応欧州特許出願公開第
０４７３０６５号)により詳細に記載されている。
【００７６】更に別のアッセイフォーマットでは、試験
サンプル中の抗ＨＧＢＶの存在を検出するために合成ペ
プチドを使用し得る。例えば、試験サンプルを、少なく
とも１つの合成ペプチドを結合させた固相と共にインキ
ュベートする。これらを抗原／抗体複合体の形成に十分
な期間及び条件下で反応させる。インキュベーション
後、抗原／抗体複合体を検出する。選択されたアッセイ
系次第では検出を容易にするために指示試薬を使用して
もよい。別のアッセイフォーマットにおいては、試験サ
ンプルを、本文中に記載のごとく作製した合成ペプチド
を結合させた固相と接触させ、また、好ましくは指示試
薬で標識したタンパク質特異的なモノクローナル抗体ま
たはポリクローナル抗体と接触させる。抗体／抗原複合
体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベーション
後、固相を遊離相から分離し、固相または遊離相中のラ
ベルをＨＧＢＶ抗体の存在の指標として検出する。本発
明のタンパク質を利用する他のアッセイフォーマットも
計画できる。これらのアッセイでは、試験サンプルを、
第１ソースに由来の少なくとも１つの抗原を結合させた
固相と接触させ、固相と試験サンプルとを抗原／抗体複
合体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベート
し、次いで固相と標識抗原とを接触させる段階から成
る。標識抗原は第１ソースとは異なる第２ソースに由来
する。例えば、大腸菌のような第１ソースに由来する特
定のＨＧＢＶ抗原に対する組換えタンパク質を固相上の
捕獲抗原として使用し、このように準備した固相に試験
サンプルを添加し、種々のソース(即ち本発明の合成ペ
プチド)に由来の試験サンプル中のアナライトに特異的
に結合するポリペプチドを指示試薬の一部として使用す
る。同様に、固相上の組換え抗原と指標相中の合成ペプ
チドとを併用することも可能である。第１ソースに由来
のＨＧＢＶ特異的抗原を捕獲抗原として利用し、異なる
第２ソースに由来のＨＧＢＶ特異的抗原を利用するアッ
セイフォーマットも計画できる。従って、組換え抗原の
多様な組み合わせ、本文中に開示された合成ペプチド、
精製されたウイルスタンパク質などの使用も本発明の範
囲内に包含される。上記及びその他のアッセイは、本出
願人らの共有米国特許第５,２５４,４５８号に記載され
ている。該文献の記載内容は本明細書に含まれるものと
する。
サンプル中の抗ＨＧＢＶの存在を検出するために合成ペ
プチドを使用し得る。例えば、試験サンプルを、少なく
とも１つの合成ペプチドを結合させた固相と共にインキ
ュベートする。これらを抗原／抗体複合体の形成に十分
な期間及び条件下で反応させる。インキュベーション
後、抗原／抗体複合体を検出する。選択されたアッセイ
系次第では検出を容易にするために指示試薬を使用して
もよい。別のアッセイフォーマットにおいては、試験サ
ンプルを、本文中に記載のごとく作製した合成ペプチド
を結合させた固相と接触させ、また、好ましくは指示試
薬で標識したタンパク質特異的なモノクローナル抗体ま
たはポリクローナル抗体と接触させる。抗体／抗原複合
体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベーション
後、固相を遊離相から分離し、固相または遊離相中のラ
ベルをＨＧＢＶ抗体の存在の指標として検出する。本発
明のタンパク質を利用する他のアッセイフォーマットも
計画できる。これらのアッセイでは、試験サンプルを、
第１ソースに由来の少なくとも１つの抗原を結合させた
固相と接触させ、固相と試験サンプルとを抗原／抗体複
合体の形成に十分な期間及び条件下でインキュベート
し、次いで固相と標識抗原とを接触させる段階から成
る。標識抗原は第１ソースとは異なる第２ソースに由来
する。例えば、大腸菌のような第１ソースに由来する特
定のＨＧＢＶ抗原に対する組換えタンパク質を固相上の
捕獲抗原として使用し、このように準備した固相に試験
サンプルを添加し、種々のソース(即ち本発明の合成ペ
プチド)に由来の試験サンプル中のアナライトに特異的
に結合するポリペプチドを指示試薬の一部として使用す
る。同様に、固相上の組換え抗原と指標相中の合成ペプ
チドとを併用することも可能である。第１ソースに由来
のＨＧＢＶ特異的抗原を捕獲抗原として利用し、異なる
第２ソースに由来のＨＧＢＶ特異的抗原を利用するアッ
セイフォーマットも計画できる。従って、組換え抗原の
多様な組み合わせ、本文中に開示された合成ペプチド、
精製されたウイルスタンパク質などの使用も本発明の範
囲内に包含される。上記及びその他のアッセイは、本出
願人らの共有米国特許第５,２５４,４５８号に記載され
ている。該文献の記載内容は本明細書に含まれるものと
する。
【００７７】他のアッセイシステムは、特異的抗体とウ
イルスタンパク質(ペプチドなど)との接触によって、ウ
イルスゲノム(またはそのフラグメント)を収容している
ＨＧＢＶウイルス粒子またはサブウイルス粒子と特異的
に結合し得る抗体(ポリクローナル、モノクローナルま
たは天然産生)を利用する。捕獲されたこの粒子を次
に、ＬＣＲまたはＰＣＲのような方法によって分析し
て、試験サンプル中にウイルスゲノムが存在するか否か
を判定する。この方法によって検定され得る試験サンプ
ルは、血液、肝臓、痰、尿、糞便、唾液、などである。
このような抗原捕獲増幅方法を用いる利点は、特異的抗
体の使用によって試験標本中の他の分子からウイルスゲ
ノムを分離できることである。このような方法は、審査
中の米国特許出願第０８／１４１,４２９号に記載され
ている。
イルスタンパク質(ペプチドなど)との接触によって、ウ
イルスゲノム(またはそのフラグメント)を収容している
ＨＧＢＶウイルス粒子またはサブウイルス粒子と特異的
に結合し得る抗体(ポリクローナル、モノクローナルま
たは天然産生)を利用する。捕獲されたこの粒子を次
に、ＬＣＲまたはＰＣＲのような方法によって分析し
て、試験サンプル中にウイルスゲノムが存在するか否か
を判定する。この方法によって検定され得る試験サンプ
ルは、血液、肝臓、痰、尿、糞便、唾液、などである。
このような抗原捕獲増幅方法を用いる利点は、特異的抗
体の使用によって試験標本中の他の分子からウイルスゲ
ノムを分離できることである。このような方法は、審査
中の米国特許出願第０８／１４１,４２９号に記載され
ている。
【００７８】本発明を好ましい固相の使用に関して説明
したが、本発明の抗体、タンパク質、ペプチドのような
試薬を非固相アッセイシステムで使用することも予測さ
れる。これらのアッセイシステムは当業者に公知であ
り、本発明の範囲内に包含されると考えられる。
したが、本発明の抗体、タンパク質、ペプチドのような
試薬を非固相アッセイシステムで使用することも予測さ
れる。これらのアッセイシステムは当業者に公知であ
り、本発明の範囲内に包含されると考えられる。
【００７９】
【材料及び方法】一般技術 特に注釈がない限り、分子生物学、微生物学、組換えＤ
ＮＡ及び免疫学の分野で慣用の公知の技術及び方法を本
発明の実施に使用する。このような技術は文献に説明及
び詳述されている。例えばＪ.Ｓａｍｂｒｏｏｋら,Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ:Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ,２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ,Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ,Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇＨａｒｂｏｒ,Ｎ.Ｙ.(１９８９);Ｄ.Ｎ.Ｇｌｏｖ
ｅｒ,ｅｄ.,ＤＮＡ Ｃｌｏ ｎｉｎｇ,Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ
ａｎｄ II,(１９８５);Ｍ.Ｊ.Ｇａｉｔ ｅｄ.,Ｏｌｉ
ｇｏｎ ｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ,(１９
８４);Ｂ.Ｄ.Ｈａｍｅｓら,ｅｄｓ.,Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,(１９８４);Ｂ.
Ｄ.Ｈａｍｅｓら,ｅｄｓ.,Ｔｒａｎｓｃｒｉｐ ｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｔｒａ ｎｓｌａｔｉｏｎ,(１９８４);Ｒ.Ｉ.Ｆ
ｒｅｓｈｎｅｙ ｅｄ.,Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ,(１９８６);Ｉｍｍｏｂｉｌｉ ｚｅｄ Ｃｅｌ
ｌｓ ａｎ ｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ,ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ(１９
８６);Ｂ.Ｐｅｒｂａｌ,Ａ Ｐａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄ
ｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ,(１９８
４);ｔｈｅｓｅｒｉｅｓ,Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ,ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ,Ｉｎｃ.,
Ｏｒｌａｎｄｏ,Ｆｌｏｒｉｄａ;Ｊ.Ｈ.Ｍｉｌｌｅｒ
ら,ｅｄｓ.,Ｇｅ ｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒ
ｓ Ｆｏｒ ＭａｍｍａｌｉａｎＣｅｌ ｌｓ,Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ,Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ,Ｎ.Ｙ.(１９８７);Ｗ
ｕら,ｅｄｓ.,Ｍｅｔｈｏｄ ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ ｏ
ｇｙ,Ｖｏｌ.１５４ ａｎｄ １５５;Ｍａｙｅｒら,ｅｄ
ｓ.,Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ
Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ,Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ,Ｌｏｎｄｏｎ(１９８
７);Ｓｃｏｐｅｓ,Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆ ｉｃａｔ
ｉｏｎ:Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ,２ｎｄ ｅｄ.,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ,Ｎ.
Ｙ.;及びＤ.Ｗｅｉｒら,ｅｄｓ.,Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏ
ｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ,
Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ−IV(１９８６);Ｎ.Ｌｉｓｉｔｉｓ
ｙｎら,Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９:９４６−９５１(１９９
３)。
ＮＡ及び免疫学の分野で慣用の公知の技術及び方法を本
発明の実施に使用する。このような技術は文献に説明及
び詳述されている。例えばＪ.Ｓａｍｂｒｏｏｋら,Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ:Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ,２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ,Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ,Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇＨａｒｂｏｒ,Ｎ.Ｙ.(１９８９);Ｄ.Ｎ.Ｇｌｏｖ
ｅｒ,ｅｄ.,ＤＮＡ Ｃｌｏ ｎｉｎｇ,Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ
ａｎｄ II,(１９８５);Ｍ.Ｊ.Ｇａｉｔ ｅｄ.,Ｏｌｉ
ｇｏｎ ｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ,(１９
８４);Ｂ.Ｄ.Ｈａｍｅｓら,ｅｄｓ.,Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,(１９８４);Ｂ.
Ｄ.Ｈａｍｅｓら,ｅｄｓ.,Ｔｒａｎｓｃｒｉｐ ｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｔｒａ ｎｓｌａｔｉｏｎ,(１９８４);Ｒ.Ｉ.Ｆ
ｒｅｓｈｎｅｙ ｅｄ.,Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ,(１９８６);Ｉｍｍｏｂｉｌｉ ｚｅｄ Ｃｅｌ
ｌｓ ａｎ ｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ,ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ(１９
８６);Ｂ.Ｐｅｒｂａｌ,Ａ Ｐａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄ
ｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ,(１９８
４);ｔｈｅｓｅｒｉｅｓ,Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ,ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ,Ｉｎｃ.,
Ｏｒｌａｎｄｏ,Ｆｌｏｒｉｄａ;Ｊ.Ｈ.Ｍｉｌｌｅｒ
ら,ｅｄｓ.,Ｇｅ ｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒ
ｓ Ｆｏｒ ＭａｍｍａｌｉａｎＣｅｌ ｌｓ,Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ,Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ,Ｎ.Ｙ.(１９８７);Ｗ
ｕら,ｅｄｓ.,Ｍｅｔｈｏｄ ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ ｏ
ｇｙ,Ｖｏｌ.１５４ ａｎｄ １５５;Ｍａｙｅｒら,ｅｄ
ｓ.,Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ
Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ,Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ,Ｌｏｎｄｏｎ(１９８
７);Ｓｃｏｐｅｓ,Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆ ｉｃａｔ
ｉｏｎ:Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ,２ｎｄ ｅｄ.,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ,Ｎ.
Ｙ.;及びＤ.Ｗｅｉｒら,ｅｄｓ.,Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏ
ｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ,
Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ−IV(１９８６);Ｎ.Ｌｉｓｉｔｉｓ
ｙｎら,Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９:９４６−９５１(１９９
３)。
【００８０】本文中に提示されたＨＧＢＶ配列から検索
される配列(及びその相補的配列)、及びその任意の部分
の配列は、合成方法を用いるか、または、合成方法と本
文中に記載の方法と同様の方法を用いる部分配列の検索
とを併用することによって調製できる。
される配列(及びその相補的配列)、及びその任意の部分
の配列は、合成方法を用いるか、または、合成方法と本
文中に記載の方法と同様の方法を用いる部分配列の検索
とを併用することによって調製できる。
【００８１】抗原性ポリペプチドの調製及び固相との結
合 ポリペプチドの抗原性領域またはフラグメントは一般に
比較的小さく、通常は約８〜１０アミノ酸またはそれ以
下の長さである。５個という少ないアミノ酸から成るフ
ラグメントも抗原性領域を特性決定し得る。これらのセ
グメントはＨＧＢＶ抗原の領域に対応し得る。ＨＧＢＶ
のゲノム配列またはｃＤＮＡ配列に基づいて、ＨＧＢＶ
ポリペプチドの短いセグメントをコードする核酸配列を
融合タンパク質としてまたは単離ポリペプチドとして組
換え発現させ得る。これらの短いアミノ酸配列はまた、
化学合成によって得られる。化学合成された小さいポリ
ペプチドは、提供された合成ポリペプチドが抗原性であ
るにはあまりにも小さいが正しいエピトープを提供する
ような正しい構造である限り適当な担体分子に結合して
使用できる。結合方法は当業界で公知であり、その非限
定例としては、Ｎ−スクシニミジル−３−(２−ピリジ
ルチオ)プロピオネート(ＳＰＤＰ)及びスクシニミジル
４−(Ｎ−マレイミドメチル)シクロヘキサン−１−カル
ボキシレート(ＳＭＣＣ)を用いる方法がある。スルフヒ
ドリル基の欠失したポリペプチドは、システイン残基の
付加によって修飾できる。これらの試薬は、それ自体と
一方のタンパク質のペプチドシステイン残基との間にジ
スルフィド結合を形成し、あるいは一方のタンパク質の
リシンのイプシロン−アミノを介してまたは別の遊離ア
ミノ基を介してアミド結合を形成する。このようなジス
ルフィド／アミドを形成する多数の物質が公知である。
他の二官能結合剤はジスルフィド結合でなくチオエステ
ル結合を形成する。これらのチオ−エーテル形成剤は多
数市販されており、当業者に公知である。カルボキシル
基は、スクシンイミドまたは１−ヒドロキシル−２−ニ
トロ−４−スルホン酸ナトリウム塩と結合することによ
って活性化し得る。それ自体では宿主に有害な抗体の産
生を誘発しない任意の担体を使用し得る。適当な担体と
しては特に、タンパク質、ラテックス官能化セファロー
スのような多糖類、アガロース、セルロース、セルロー
スビーズ、ポリグルタミン酸のような高分子アミノ酸、
ポリリシン、アミノ酸コポリマー及び不活性ウイルス粒
子、がある。タンパク質基質の例としては、血清アルブ
ミン、スカシガイ(ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ)ヘモ
シアニン、免疫グロブリン分子、チログロブリン、オボ
アルブミン、破傷風毒素、及び当業者に公知の他のタン
パク質がある。
合 ポリペプチドの抗原性領域またはフラグメントは一般に
比較的小さく、通常は約８〜１０アミノ酸またはそれ以
下の長さである。５個という少ないアミノ酸から成るフ
ラグメントも抗原性領域を特性決定し得る。これらのセ
グメントはＨＧＢＶ抗原の領域に対応し得る。ＨＧＢＶ
のゲノム配列またはｃＤＮＡ配列に基づいて、ＨＧＢＶ
ポリペプチドの短いセグメントをコードする核酸配列を
融合タンパク質としてまたは単離ポリペプチドとして組
換え発現させ得る。これらの短いアミノ酸配列はまた、
化学合成によって得られる。化学合成された小さいポリ
ペプチドは、提供された合成ポリペプチドが抗原性であ
るにはあまりにも小さいが正しいエピトープを提供する
ような正しい構造である限り適当な担体分子に結合して
使用できる。結合方法は当業界で公知であり、その非限
定例としては、Ｎ−スクシニミジル−３−(２−ピリジ
ルチオ)プロピオネート(ＳＰＤＰ)及びスクシニミジル
４−(Ｎ−マレイミドメチル)シクロヘキサン−１−カル
ボキシレート(ＳＭＣＣ)を用いる方法がある。スルフヒ
ドリル基の欠失したポリペプチドは、システイン残基の
付加によって修飾できる。これらの試薬は、それ自体と
一方のタンパク質のペプチドシステイン残基との間にジ
スルフィド結合を形成し、あるいは一方のタンパク質の
リシンのイプシロン−アミノを介してまたは別の遊離ア
ミノ基を介してアミド結合を形成する。このようなジス
ルフィド／アミドを形成する多数の物質が公知である。
他の二官能結合剤はジスルフィド結合でなくチオエステ
ル結合を形成する。これらのチオ−エーテル形成剤は多
数市販されており、当業者に公知である。カルボキシル
基は、スクシンイミドまたは１−ヒドロキシル−２−ニ
トロ−４−スルホン酸ナトリウム塩と結合することによ
って活性化し得る。それ自体では宿主に有害な抗体の産
生を誘発しない任意の担体を使用し得る。適当な担体と
しては特に、タンパク質、ラテックス官能化セファロー
スのような多糖類、アガロース、セルロース、セルロー
スビーズ、ポリグルタミン酸のような高分子アミノ酸、
ポリリシン、アミノ酸コポリマー及び不活性ウイルス粒
子、がある。タンパク質基質の例としては、血清アルブ
ミン、スカシガイ(ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ)ヘモ
シアニン、免疫グロブリン分子、チログロブリン、オボ
アルブミン、破傷風毒素、及び当業者に公知の他のタン
パク質がある。
【００８２】ＨＧＢＶエピトープを含有するハイブリッ
ド粒子免疫原の調製 ワクチン調製 ＨＧＢＶ核酸配列または該核酸に対応するＨＧＢＶゲノ
ムに由来の１つ以上の免疫原性ポリペプチドまたは核酸
からワクチンを調製し得る。ワクチンは、ＨＧＢＶの
(１つまたは複数の)エピトープを含有する組換えポリペ
プチドから成ってもよい。これらのポリペプチドは、細
菌、酵母または哺乳類細胞中で発現されてもよく、また
はウイルス調製物から単離されてもよい。また、種々の
構造タンパク質がＨＧＢＶに対する防御抗体を生じさせ
るＨＧＢＶのエピトープを含有すると予測される。従っ
て、これらのワクチンを調製するときに合成ペプチドも
使用できる。即ち、ＨＧＢＶワクチン中ではＨＧＢＶの
少なくとも１つのエピトープを含有するポリペプチドを
単独でまたは組み合わせて使用し得る。更に、非構造タ
ンパク質及び構造タンパク質は、たとえ中和抗体の産生
を生じさせないとしても、ウイルス病原性に対する防御
作用を有すると予測される。
ド粒子免疫原の調製 ワクチン調製 ＨＧＢＶ核酸配列または該核酸に対応するＨＧＢＶゲノ
ムに由来の１つ以上の免疫原性ポリペプチドまたは核酸
からワクチンを調製し得る。ワクチンは、ＨＧＢＶの
(１つまたは複数の)エピトープを含有する組換えポリペ
プチドから成ってもよい。これらのポリペプチドは、細
菌、酵母または哺乳類細胞中で発現されてもよく、また
はウイルス調製物から単離されてもよい。また、種々の
構造タンパク質がＨＧＢＶに対する防御抗体を生じさせ
るＨＧＢＶのエピトープを含有すると予測される。従っ
て、これらのワクチンを調製するときに合成ペプチドも
使用できる。即ち、ＨＧＢＶワクチン中ではＨＧＢＶの
少なくとも１つのエピトープを含有するポリペプチドを
単独でまたは組み合わせて使用し得る。更に、非構造タ
ンパク質及び構造タンパク質は、たとえ中和抗体の産生
を生じさせないとしても、ウイルス病原性に対する防御
作用を有すると予測される。
【００８３】上記の考察に基づいて、ＨＧＢＶに対する
多価ワクチンは、１つ以上の構造タンパク質、及び／ま
たは１つ以上の非構造タンパク質から成り得る。これら
のワクチンは例えば、組換えＨＧＢＶポリペプチド及び
／またはビリオンから単離されたポリペプチド及び／ま
たは合成ペプチドから成り得る。これらの免疫原性エピ
トープを組み合わせて、即ち組換えタンパク質、合成ペ
プチド及び／またはビリオンから単離されたポリペプチ
ドの混合物として使用し得る。これらは同時に投与され
てもよくまたは異なる時期に投与されてもよい。更に、
ワクチン中に不活性化ＨＧＢＶを使用することも可能で
あろう。このような不活性化物はウイルス溶菌液から調
製されてもよく、または肝炎様ウイルスを不活性化する
当業界で公知の他の手段、例えば有機溶媒、界面活性剤
またはホルマリン処理によって得られてもよい。ＨＧＢ
Ｖ株の弱毒調製物も本発明で開示されている。ＨＧＢＶ
中のいくつかのタンパク質は他の既知のウイルスと交差
反応し、従って、ＨＧＢＶと他のウイルスとの間に共有
エピトープが存在し、このため、これらの病原性因子を
原因とする疾患に対する防御抗体が産生されると予測さ
れる。この見解に基づいて多目的ワクチンを設計するこ
とも可能であると考えられる。
多価ワクチンは、１つ以上の構造タンパク質、及び／ま
たは１つ以上の非構造タンパク質から成り得る。これら
のワクチンは例えば、組換えＨＧＢＶポリペプチド及び
／またはビリオンから単離されたポリペプチド及び／ま
たは合成ペプチドから成り得る。これらの免疫原性エピ
トープを組み合わせて、即ち組換えタンパク質、合成ペ
プチド及び／またはビリオンから単離されたポリペプチ
ドの混合物として使用し得る。これらは同時に投与され
てもよくまたは異なる時期に投与されてもよい。更に、
ワクチン中に不活性化ＨＧＢＶを使用することも可能で
あろう。このような不活性化物はウイルス溶菌液から調
製されてもよく、または肝炎様ウイルスを不活性化する
当業界で公知の他の手段、例えば有機溶媒、界面活性剤
またはホルマリン処理によって得られてもよい。ＨＧＢ
Ｖ株の弱毒調製物も本発明で開示されている。ＨＧＢＶ
中のいくつかのタンパク質は他の既知のウイルスと交差
反応し、従って、ＨＧＢＶと他のウイルスとの間に共有
エピトープが存在し、このため、これらの病原性因子を
原因とする疾患に対する防御抗体が産生されると予測さ
れる。この見解に基づいて多目的ワクチンを設計するこ
とも可能であると考えられる。
【００８４】少なくとも１つの免疫原性ペプチドを有効
成分として含有するワクチンの調製は当業界で公知であ
る。典型的には、このようなワクチンを溶液剤または懸
濁液剤のような注射液剤として調製する。注射に先立っ
て液体に溶解または懸濁させる適当な固体形態で調製し
てもよい。調製物を乳化してもよく、またはタンパク質
をリポソームに封入してもよい。免疫原性有効成分をと
きには有効成分と相溶性の薬理学的に許容される賦形剤
と混合する。適当な賦形剤の非限定例としては、水、生
理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノールなどが
ある。これらの賦形剤を種々の量で併用してもよい。ワ
クチンはまた、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤のよう
な補助物質、及び／またはワクチンの有効性を増進する
アジュバントを少量含有し得る。このようなアジュバン
トとしては例えば、水酸化アルミニウム、Ｎ−アセチル
−ムラミル−Ｌ−トリオニル−Ｄ−イソグルタミン(ｔ
ｈｒ−ＤＭＰ)、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−ア
ラニル−Ｄ−イソグルタミン(ＣＧＰ１１６８７,またｎ
ｏｒ−ＭＤＰとも呼ぶ)、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−
(１',２'−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒド
ロキシホスホリルオキシ)−エチルアミン(ＣＧＰ１９８
３５Ａ、またＭＴＰ−ＰＥとも呼ぶ)、及び２％スクア
レン／トゥイーン−８０(登録商標)エマルジョン中のＲ
ＩＢＩ(ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ)がある。アジュバント
の有効性は、ＨＧＢＶ抗原性配列を含有する免疫原性ポ
リペプチドを種々のアジュバントと共に含むワクチンを
投与したときの上記ポリペプチドに対する抗体の量を測
定することによって決定し得る。
成分として含有するワクチンの調製は当業界で公知であ
る。典型的には、このようなワクチンを溶液剤または懸
濁液剤のような注射液剤として調製する。注射に先立っ
て液体に溶解または懸濁させる適当な固体形態で調製し
てもよい。調製物を乳化してもよく、またはタンパク質
をリポソームに封入してもよい。免疫原性有効成分をと
きには有効成分と相溶性の薬理学的に許容される賦形剤
と混合する。適当な賦形剤の非限定例としては、水、生
理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノールなどが
ある。これらの賦形剤を種々の量で併用してもよい。ワ
クチンはまた、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤のよう
な補助物質、及び／またはワクチンの有効性を増進する
アジュバントを少量含有し得る。このようなアジュバン
トとしては例えば、水酸化アルミニウム、Ｎ−アセチル
−ムラミル−Ｌ−トリオニル−Ｄ−イソグルタミン(ｔ
ｈｒ−ＤＭＰ)、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−ア
ラニル−Ｄ−イソグルタミン(ＣＧＰ１１６８７,またｎ
ｏｒ−ＭＤＰとも呼ぶ)、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−
(１',２'−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒド
ロキシホスホリルオキシ)−エチルアミン(ＣＧＰ１９８
３５Ａ、またＭＴＰ−ＰＥとも呼ぶ)、及び２％スクア
レン／トゥイーン−８０(登録商標)エマルジョン中のＲ
ＩＢＩ(ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ)がある。アジュバント
の有効性は、ＨＧＢＶ抗原性配列を含有する免疫原性ポ
リペプチドを種々のアジュバントと共に含むワクチンを
投与したときの上記ポリペプチドに対する抗体の量を測
定することによって決定し得る。
【００８５】ワクチンは通常は静脈内または筋肉内注射
によって投与する。他の投与形態に適した製剤として更
に座薬剤があり、いくつかの場合には、経口製剤があ
る。座薬剤を調製するためには、ポリアルキレングリコ
ールまたはトリグリセリドを非限定例とする慣用の結合
剤及び担体を使用し得る。このような座薬剤は、有効成
分を約０.５〜約１０％、好ましくは約１％〜約２％の
範囲で含有する混合物から形成され得る。経口製剤は、
例えば医薬品質のマンニトール、ラクトース、澱粉、ス
テアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セル
ロース、炭酸マグネシウムなどのような常用の賦形剤を
含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、
カプセル剤、持続性放出製剤または粉末の形態を有し、
約１０％〜約９５％、好ましくは約２５％〜約７０％の
有効成分を含有し得る。
によって投与する。他の投与形態に適した製剤として更
に座薬剤があり、いくつかの場合には、経口製剤があ
る。座薬剤を調製するためには、ポリアルキレングリコ
ールまたはトリグリセリドを非限定例とする慣用の結合
剤及び担体を使用し得る。このような座薬剤は、有効成
分を約０.５〜約１０％、好ましくは約１％〜約２％の
範囲で含有する混合物から形成され得る。経口製剤は、
例えば医薬品質のマンニトール、ラクトース、澱粉、ス
テアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セル
ロース、炭酸マグネシウムなどのような常用の賦形剤を
含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、
カプセル剤、持続性放出製剤または粉末の形態を有し、
約１０％〜約９５％、好ましくは約２５％〜約７０％の
有効成分を含有し得る。
【００８６】ワクチン中で使用されるタンパク質は、中
性塩の形態でワクチンに配合され得る。医薬として許容
される塩としては、(ペプチドの遊離アミノ基から形成
される)酸付加塩があり、塩酸またはリン酸のような無
機酸から形成されるか、または、酢酸、シュウ酸、酒石
酸、マレイン酸のような有機酸及び当業界で公知の他の
有機酸から形成される。また、遊離カルボキシル基によ
って形成される塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニ
ウム、カルシウムまたは第二鉄などの無機塩であるか、
イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルア
ミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン及び当業者に
公知の他の有機塩である。
性塩の形態でワクチンに配合され得る。医薬として許容
される塩としては、(ペプチドの遊離アミノ基から形成
される)酸付加塩があり、塩酸またはリン酸のような無
機酸から形成されるか、または、酢酸、シュウ酸、酒石
酸、マレイン酸のような有機酸及び当業界で公知の他の
有機酸から形成される。また、遊離カルボキシル基によ
って形成される塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニ
ウム、カルシウムまたは第二鉄などの無機塩であるか、
イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルア
ミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン及び当業者に
公知の他の有機塩である。
【００８７】ワクチンは投与用製剤に適した方法で、予
防及び／または治療に有効な量で投与される。投与量は
一般に、投与あたりの抗原量が約５〜約２５０マイクロ
グラムの範囲であり、投与対象患者、患者の免疫系の抗
体合成能力、所望の防御度に基づいて選択される。有効
成分の正確な所要投与量は、処方医の判断次第であり、
各患者に特有である。ワクチンは一回投与または複数回
投与の計画で投与され得る。複数回投与では、第１サイ
クルのワクチン接種として１〜１０回の投与を実施し、
次いで免疫応答を維持及び／または強化するために必要
な期間をおいた後、例えば１〜４ケ月後に、第２サイク
ルとして更に数回の投与を実施し、個体が必要とする場
合には数カ月後に更に１回以上の投与を実施する。投与
計画は、少なくとも部分的には個体の必要性に従って決
定され、処方医の判断次第である。(１つ以上の)免疫原
性ＨＧＢＶ抗原を含有するワクチンを他の免疫調節物
質、例えば免疫グロブリンと共に投与することも考えら
れる。
防及び／または治療に有効な量で投与される。投与量は
一般に、投与あたりの抗原量が約５〜約２５０マイクロ
グラムの範囲であり、投与対象患者、患者の免疫系の抗
体合成能力、所望の防御度に基づいて選択される。有効
成分の正確な所要投与量は、処方医の判断次第であり、
各患者に特有である。ワクチンは一回投与または複数回
投与の計画で投与され得る。複数回投与では、第１サイ
クルのワクチン接種として１〜１０回の投与を実施し、
次いで免疫応答を維持及び／または強化するために必要
な期間をおいた後、例えば１〜４ケ月後に、第２サイク
ルとして更に数回の投与を実施し、個体が必要とする場
合には数カ月後に更に１回以上の投与を実施する。投与
計画は、少なくとも部分的には個体の必要性に従って決
定され、処方医の判断次第である。(１つ以上の)免疫原
性ＨＧＢＶ抗原を含有するワクチンを他の免疫調節物
質、例えば免疫グロブリンと共に投与することも考えら
れる。
【００８８】ＨＧＢＶエピトープに対する抗体の調製 本文中に記載のごとく調製された免疫原性ペプチドを使
用して、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体
を作製する。ポリクローナル抗体を調製するときは、選
択された哺乳動物(例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ウ
マなど)を、少なくとも１つのＨＧＢＶエピトープを保
有する本文中に開示した免疫原性ポリペプチドで免疫す
る。適当なインキュベーション期間後に免疫動物の血清
を収集し、公知の手順によって処理する。ＨＧＢＶエピ
トープに対するポリクローナル抗体を含有する血清が他
の抗原に対する抗体も含有している場合、例えばイムノ
アフィニティクロマトグラフィーによってポリクローナ
ル抗体を精製し得る。ポリクローナル抗体の産生及び処
理技術は、当業界で公知であり、特に、Ｍａｙｅｒａｎ
ｄ Ｗａｌｋｅｒ,ｅｄｓ.,Ｉｍｍ ｕｎｏｃｈｅｍｉｃａ
ｌ ＭｅｔｈｏｄｓＩｎ Ｃｅ ｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃ ｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ,ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ,
Ｌｏｎｄｏｎ(１９８７)に記載されている。ポリクロー
ナル抗体はまた、ＨＧＢＶを予め感染させた哺乳動物か
ら得られる。ＨＧＢＶ感染個体の血清からＨＧＢＶエピ
トープに対する抗体をアフィニティクロマトグラフィー
を用いて精製する方法の一例をここに提示する。
用して、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体
を作製する。ポリクローナル抗体を調製するときは、選
択された哺乳動物(例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ウ
マなど)を、少なくとも１つのＨＧＢＶエピトープを保
有する本文中に開示した免疫原性ポリペプチドで免疫す
る。適当なインキュベーション期間後に免疫動物の血清
を収集し、公知の手順によって処理する。ＨＧＢＶエピ
トープに対するポリクローナル抗体を含有する血清が他
の抗原に対する抗体も含有している場合、例えばイムノ
アフィニティクロマトグラフィーによってポリクローナ
ル抗体を精製し得る。ポリクローナル抗体の産生及び処
理技術は、当業界で公知であり、特に、Ｍａｙｅｒａｎ
ｄ Ｗａｌｋｅｒ,ｅｄｓ.,Ｉｍｍ ｕｎｏｃｈｅｍｉｃａ
ｌ ＭｅｔｈｏｄｓＩｎ Ｃｅ ｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃ ｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ,ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ,
Ｌｏｎｄｏｎ(１９８７)に記載されている。ポリクロー
ナル抗体はまた、ＨＧＢＶを予め感染させた哺乳動物か
ら得られる。ＨＧＢＶ感染個体の血清からＨＧＢＶエピ
トープに対する抗体をアフィニティクロマトグラフィー
を用いて精製する方法の一例をここに提示する。
【００８９】ＨＧＢＶエピトープに対するモノクローナ
ル抗体も当業者によって作製され得る。このような抗体
を作製する汎用方法は公知であり、例えばＫｏｈｌｅｒ
ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ,Ｎａｔｕｒｅ,２５６:４９
４(１９７５)に記載されており、また、Ｊ.Ｇ.Ｒ.Ｈｕ
ｒｒｅｌ,ｅｄ.,Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ:Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａ
ｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ,ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉ
ｎｃ.,Ｂｏｃｏ Ｒａｔｏｎ,ＦＬ(１９８２)に概説され
ており、また、Ｌ.Ｔ.Ｍｉｍｍｓら,Ｖｉｒｏｌｏｇｙ,
１７６:６０４−６１９(１９９０)に教示されている。
細胞融合、及び、癌ＤＮＡによるＢリンパ球の直接形質
転換またはエプスタイン・バールウイルスによるトラン
スフェクションのような他の技術によって、不死化した
抗体産生細胞系を作製し得る。Ｍ.Ｓｃｈｒｅｉｅｒら,
Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ,Ｓｃｏｐｅ
ｓ(１９８０)Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ,Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ,２
ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａ
ｇ,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ(１９８４);Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ
ら,Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎ
ｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ,(１９８１);Ｋｅ
ｎｎｅｔら,Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ(１９８０)も参照するとよい。モノクローナル抗体の
使用及び技術の例に関しては、米国特許出願第７４８,
２９２;７４８,５６３;６１０,１７５;６４８,４７３,
６４８,４７７及び６４８,４７５号に記載されている。
ル抗体も当業者によって作製され得る。このような抗体
を作製する汎用方法は公知であり、例えばＫｏｈｌｅｒ
ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ,Ｎａｔｕｒｅ,２５６:４９
４(１９７５)に記載されており、また、Ｊ.Ｇ.Ｒ.Ｈｕ
ｒｒｅｌ,ｅｄ.,Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ:Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａ
ｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ,ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉ
ｎｃ.,Ｂｏｃｏ Ｒａｔｏｎ,ＦＬ(１９８２)に概説され
ており、また、Ｌ.Ｔ.Ｍｉｍｍｓら,Ｖｉｒｏｌｏｇｙ,
１７６:６０４−６１９(１９９０)に教示されている。
細胞融合、及び、癌ＤＮＡによるＢリンパ球の直接形質
転換またはエプスタイン・バールウイルスによるトラン
スフェクションのような他の技術によって、不死化した
抗体産生細胞系を作製し得る。Ｍ.Ｓｃｈｒｅｉｅｒら,
Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ,Ｓｃｏｐｅ
ｓ(１９８０)Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ,Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ,２
ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａ
ｇ,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ(１９８４);Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ
ら,Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎ
ｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ,(１９８１);Ｋｅ
ｎｎｅｔら,Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ(１９８０)も参照するとよい。モノクローナル抗体の
使用及び技術の例に関しては、米国特許出願第７４８,
２９２;７４８,５６３;６１０,１７５;６４８,４７３,
６４８,４７７及び６４８,４７５号に記載されている。
【００９０】このように開発されたＨＧＢＶエピトープ
に対するモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体は
診断及び予後判定などの用途に有用であり、また、中和
抗体は受動免疫療法に有用である。モノクローナル抗体
は特に抗イディオタイプ抗体の産生に使用できる。これ
らの抗イディオタイプ抗体は、防御を要する感染因子の
抗原の「内部像(ｉｎｔｅｒｎｔａｌ ｉｍａｇｅ)」を
保有する免疫グロブリンである。例えば、Ａ.Ｎｉｓｏ
ｎｏｆｆら,Ｃｌｉｎ.Ｉｍ ｍｕｎｏｌ.Ｉｍｍｕｎｏｐ
ａｔｈ.２１:３９７−４０６(１９８１)及びＤｒｅｅｓ
ｍａｎら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.１５１:７６１(１９
８５)参照。このようなイディオタイプ抗体を作成する
技術は当業界で公知であり、例えば、Ｇｒｙｃｈら,Ｎ
ａｔｕｒｅ,３１６:７４(１９８５);ＭａｃＮａｍａｒ
ａら,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２２６:１３２５(１９８４)及び
Ｕｙｔｄｅｈａａｇら,Ｊ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.１３４:１２
２５(１９８５)に記載されている。これらの抗イディオ
タイプ抗体はまた、ＨＧＢＶ感染の治療、ＨＧＢＶ抗原
の免疫原性領域の解明に有用である。
に対するモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体は
診断及び予後判定などの用途に有用であり、また、中和
抗体は受動免疫療法に有用である。モノクローナル抗体
は特に抗イディオタイプ抗体の産生に使用できる。これ
らの抗イディオタイプ抗体は、防御を要する感染因子の
抗原の「内部像(ｉｎｔｅｒｎｔａｌ ｉｍａｇｅ)」を
保有する免疫グロブリンである。例えば、Ａ.Ｎｉｓｏ
ｎｏｆｆら,Ｃｌｉｎ.Ｉｍ ｍｕｎｏｌ.Ｉｍｍｕｎｏｐ
ａｔｈ.２１:３９７−４０６(１９８１)及びＤｒｅｅｓ
ｍａｎら,Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.１５１:７６１(１９
８５)参照。このようなイディオタイプ抗体を作成する
技術は当業界で公知であり、例えば、Ｇｒｙｃｈら,Ｎ
ａｔｕｒｅ,３１６:７４(１９８５);ＭａｃＮａｍａｒ
ａら,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２２６:１３２５(１９８４)及び
Ｕｙｔｄｅｈａａｇら,Ｊ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.１３４:１２
２５(１９８５)に記載されている。これらの抗イディオ
タイプ抗体はまた、ＨＧＢＶ感染の治療、ＨＧＢＶ抗原
の免疫原性領域の解明に有用である。
【００９１】イムノアッセイ及び診断キット ＨＧＢＶ抗体及びその複合体を含有する血清と免疫反応
するポリペプチドと、これらのポリペプチド中のＨＧＢ
Ｖ特異的エピトープに対して作成された抗体とはいずれ
も、試験生物サンプル中のＨＧＢＶ抗体の存在またはウ
イルス及び／またはウイルス抗原の存在を検出するイム
ノアッセイで使用し得る。これらのイムノアッセイは設
計変更が可能であり、多様なアッセイが当業界で公知で
あり、本文中でも多様なアッセイを記載した。イムノア
ッセイには、任意のＨＧＢＶ核酸配列含有クローン由
来、これらのクローン中のＨＧＢＶ核酸配列に由来の複
合核酸配列由来またはこれらのクローン中の核酸配列の
起原であるＨＧＢＶゲノムに由来のポリペプチドのよう
な１つのウイルス抗原を使用し得る。または、イムノア
ッセイは、これらのソースに由来のウイルス抗原の組み
合わせを使用し得る。イムノアッセイには例えば、同一
ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体、または種々
のウイルス抗原に対するポリクローナル抗体を使用し得
る。アッセイの非限定例としては、競合型アッセイ、直
接反応型アッセイまたはサンドイッチ型アッセイがあ
る。アッセイは固相を使用して行ってもよく、または、
免疫沈降もしくは固相を使用しない任意の他の方法で行
ってもよい。シグナル発生化合物としてラベルを使用す
るアッセイの実例及びこれらのラベルをここに記載す
る。審査中の米国特許出願第６０８,８４９;０７０,６
４７;４１８,９８１及び６８７,７８５号に記載のよう
なビオチンとアビジン、酵素ラベルまたはビオチンと抗
ビオチン系を使用してシグナルを増幅してもよい。ＨＧ
ＢＶの免疫優性領域のエピトープを含む組換えポリペプ
チドは、感染個体から採取した試験生物サンプル中のウ
イルス抗体を検出するために有用であろう。また、抗体
が急性及び非急性の感染症の識別に有用であることも予
期される。ＨＧＢＶエピトープまたはＨＧＢＶエピトー
プに対する抗体を含む本発明のポリペプチドのような適
当な材料を、その他の試薬及びアッセイの実施に必要な
材料とアッセイ用の適正な用法指示と共に適当な容器に
パッケージすることによって、適正試薬を含有する免疫
診断に適したキットを作製し得る。
するポリペプチドと、これらのポリペプチド中のＨＧＢ
Ｖ特異的エピトープに対して作成された抗体とはいずれ
も、試験生物サンプル中のＨＧＢＶ抗体の存在またはウ
イルス及び／またはウイルス抗原の存在を検出するイム
ノアッセイで使用し得る。これらのイムノアッセイは設
計変更が可能であり、多様なアッセイが当業界で公知で
あり、本文中でも多様なアッセイを記載した。イムノア
ッセイには、任意のＨＧＢＶ核酸配列含有クローン由
来、これらのクローン中のＨＧＢＶ核酸配列に由来の複
合核酸配列由来またはこれらのクローン中の核酸配列の
起原であるＨＧＢＶゲノムに由来のポリペプチドのよう
な１つのウイルス抗原を使用し得る。または、イムノア
ッセイは、これらのソースに由来のウイルス抗原の組み
合わせを使用し得る。イムノアッセイには例えば、同一
ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体、または種々
のウイルス抗原に対するポリクローナル抗体を使用し得
る。アッセイの非限定例としては、競合型アッセイ、直
接反応型アッセイまたはサンドイッチ型アッセイがあ
る。アッセイは固相を使用して行ってもよく、または、
免疫沈降もしくは固相を使用しない任意の他の方法で行
ってもよい。シグナル発生化合物としてラベルを使用す
るアッセイの実例及びこれらのラベルをここに記載す
る。審査中の米国特許出願第６０８,８４９;０７０,６
４７;４１８,９８１及び６８７,７８５号に記載のよう
なビオチンとアビジン、酵素ラベルまたはビオチンと抗
ビオチン系を使用してシグナルを増幅してもよい。ＨＧ
ＢＶの免疫優性領域のエピトープを含む組換えポリペプ
チドは、感染個体から採取した試験生物サンプル中のウ
イルス抗体を検出するために有用であろう。また、抗体
が急性及び非急性の感染症の識別に有用であることも予
期される。ＨＧＢＶエピトープまたはＨＧＢＶエピトー
プに対する抗体を含む本発明のポリペプチドのような適
当な材料を、その他の試薬及びアッセイの実施に必要な
材料とアッセイ用の適正な用法指示と共に適当な容器に
パッケージすることによって、適正試薬を含有する免疫
診断に適したキットを作製し得る。
【００９２】本文中に詳述した合成ペプチドを利用する
アッセイフォーマットを設計し得る。ヒト試験サンプル
中の特定アナライト(例えば、ウイルスのような感染因
子)に対する抗体の存在を検出するためのアッセイフォ
ーマットにおいては、ヒト試験サンプルを少なくとも１
つの合成ポリペプチドでコートした固相と接触させてイ
ンキュベートする。試験サンプル中に抗体が存在する場
合、抗体は、抗原性ポリペプチドとの複合体を形成し、
固相に結合するであろう。複合体が形成された後、固相
を洗浄することによって未結合の材料及び試薬を除去す
る。複合体を指示試薬と反応させ、第２複合体の形成に
十分な期間及び条件下でインキュベートする。
アッセイフォーマットを設計し得る。ヒト試験サンプル
中の特定アナライト(例えば、ウイルスのような感染因
子)に対する抗体の存在を検出するためのアッセイフォ
ーマットにおいては、ヒト試験サンプルを少なくとも１
つの合成ポリペプチドでコートした固相と接触させてイ
ンキュベートする。試験サンプル中に抗体が存在する場
合、抗体は、抗原性ポリペプチドとの複合体を形成し、
固相に結合するであろう。複合体が形成された後、固相
を洗浄することによって未結合の材料及び試薬を除去す
る。複合体を指示試薬と反応させ、第２複合体の形成に
十分な期間及び条件下でインキュベートする。
【００９３】(１つまたは複数の)合成ポリペプチドに対
する抗体が試験サンプル中に存在するか否かは、発生シ
グナルの検出によって判断する。カットオフ値を上回る
シグナルの発生は、試験サンプル中に存在するアナライ
トに対する抗体の存在を示す。酵素のような多くの指示
試薬の場合、抗体の存在量は発生シグナルに比例する。
試験サンプルの種類次第では、試験サンプルを適当な緩
衝試薬で希釈し、濃縮するか、または全く操作を加えず
に(「生のままで(ｎｅａｔ)」)固相と接触させる。抗体
の存在及び／または存在量を判定するために通常は例え
ば、予め希釈しておいた血清もしくは血漿サンプル、ま
たは尿のような濃縮標本を試験するのが好ましい。
する抗体が試験サンプル中に存在するか否かは、発生シ
グナルの検出によって判断する。カットオフ値を上回る
シグナルの発生は、試験サンプル中に存在するアナライ
トに対する抗体の存在を示す。酵素のような多くの指示
試薬の場合、抗体の存在量は発生シグナルに比例する。
試験サンプルの種類次第では、試験サンプルを適当な緩
衝試薬で希釈し、濃縮するか、または全く操作を加えず
に(「生のままで(ｎｅａｔ)」)固相と接触させる。抗体
の存在及び／または存在量を判定するために通常は例え
ば、予め希釈しておいた血清もしくは血漿サンプル、ま
たは尿のような濃縮標本を試験するのが好ましい。
【００９４】更に、検査すべき感染性因子のウイルスゲ
ノムの種々の抗原性エピトープに特異的に結合する合成
ペプチドを用いることによって特定の感染性因子に対す
る抗体の存在を試験するために、上記のアッセイフォー
マットで２つ以上の合成ペプチドを使用してもよい。従
って、１つのエピトープから得られるポリペプチドを用
いるアッセイよりも高感度であり恐らくは高特異性であ
るアッセイを提供するためには、特定のウイルス抗原性
領域内部のエピトープとウイルスゲノムの別の抗原性領
域のエピトープとを含む合成ポリペプチドを使用するの
が好ましい。このようなアッセイは、確認アッセイとし
て使用できる。この特定のアッセイフォーマットにおい
ては、既知量の試験サンプルと、少なくとも１つの組換
えタンパク質をコートした既知量の少なくとも１つの固
体支持体とを、合成ペプチド／抗体複合体の形成に十分
な期間及び条件下で接触させる。複合体を、既知量の適
当な(１種以上の)指示試薬と反応の発生に十分な期間及
び条件下で接触させ、その結果として発生したシグナル
を陰性試験サンプルに比較し、試験サンプル中のアナラ
イトに対する抗体の存在を判定する。更に、微粒子のよ
うないくつかの固相を使用する場合、各アッセイに最適
になるようにコートされた種々の微粒子を組み合わせる
ことによって、アッセイで使用される合成ペプチドの各
々を個別の微粒子または微粒子混合物に結合できること
が予期される。
ノムの種々の抗原性エピトープに特異的に結合する合成
ペプチドを用いることによって特定の感染性因子に対す
る抗体の存在を試験するために、上記のアッセイフォー
マットで２つ以上の合成ペプチドを使用してもよい。従
って、１つのエピトープから得られるポリペプチドを用
いるアッセイよりも高感度であり恐らくは高特異性であ
るアッセイを提供するためには、特定のウイルス抗原性
領域内部のエピトープとウイルスゲノムの別の抗原性領
域のエピトープとを含む合成ポリペプチドを使用するの
が好ましい。このようなアッセイは、確認アッセイとし
て使用できる。この特定のアッセイフォーマットにおい
ては、既知量の試験サンプルと、少なくとも１つの組換
えタンパク質をコートした既知量の少なくとも１つの固
体支持体とを、合成ペプチド／抗体複合体の形成に十分
な期間及び条件下で接触させる。複合体を、既知量の適
当な(１種以上の)指示試薬と反応の発生に十分な期間及
び条件下で接触させ、その結果として発生したシグナル
を陰性試験サンプルに比較し、試験サンプル中のアナラ
イトに対する抗体の存在を判定する。更に、微粒子のよ
うないくつかの固相を使用する場合、各アッセイに最適
になるようにコートされた種々の微粒子を組み合わせる
ことによって、アッセイで使用される合成ペプチドの各
々を個別の微粒子または微粒子混合物に結合できること
が予期される。
【００９５】上記アッセイフォーマットの変形として
は、一方(または双方)の感染性因子の存在を検出するた
めに、種々のアナライトの合成ペプチドを、いずれかの
アナライトに対する抗体の存在を検出する同じまたは異
なる固相に結合させて使用する(例えば、１つの感染性
因子のいくつかの抗原性領域に特異的な合成ペプチドを
異なる感染性因子の(１つまたは複数の)抗原性領域に特
異的な合成ペプチドまたは組換えタンパク質と共に同じ
または異なる固相にコートする)。
は、一方(または双方)の感染性因子の存在を検出するた
めに、種々のアナライトの合成ペプチドを、いずれかの
アナライトに対する抗体の存在を検出する同じまたは異
なる固相に結合させて使用する(例えば、１つの感染性
因子のいくつかの抗原性領域に特異的な合成ペプチドを
異なる感染性因子の(１つまたは複数の)抗原性領域に特
異的な合成ペプチドまたは組換えタンパク質と共に同じ
または異なる固相にコートする)。
【００９６】更に別のアッセイフォーマットにおいて
は、抗原性エピトープを含有する合成ペプチドが中和ア
ッセイのような競合アッセイで有用である。中和アッセ
イを実施するためには、ウイルスのような感染性因子の
抗原性領域のエピトープを示す合成ペプチドを可溶化
し、０.５〜５０.０μｇ／ｍｌの最終濃度に希釈したサ
ンプルと混合する。既知量(好ましくは１０μｌ)の希釈
または非希釈の試験サンプルを反応ウエルに添加し、次
いで組換えポリペプチドを含有する４００μｌの希釈サ
ンプルを添加する。所望の場合、混合物を約１５分間〜
２時間インキュベートする。次に本文中に記載の合成ペ
プチドをコートした固相を反応ウエルに添加し、約４０
℃で１時間インキュベートする。洗浄後、既知量の指示
試薬、例えば結合希釈剤中の２００μｌのペルオキシダ
ーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧを添加し、４０℃で１時間イ
ンキュベートする。洗浄後、記載のような酵素結合体を
使用したときは酵素基質、例えばＯＰＤ基質を添加し、
室温で３０分間インキュベートする。反応ウエルに１Ｎ
の硫酸のような停止試薬を加えて反応を終了させる。４
９２ｎｍの吸光度を読み取る。特異的ポリペプチドに対
する抗体を含む試験サンプルは、溶液中のこれらの抗体
に対するペプチドの競合結合によって弱められたシグナ
ルを発生する。合成ペプチドの存在下のサンプルの吸光
度の値を、同じ希釈度の組換えポリペプチドの非存在下
の検定サンプルの吸光度の値に比較することによって競
合的結合のパーセンテージを算出し得る。従って、合成
ペプチド存在サンプルと合成ペプチド非存在サンプルと
の間の発生シグナルの違いが、抗体の有無を判断するた
めに使用される測定値である。
は、抗原性エピトープを含有する合成ペプチドが中和ア
ッセイのような競合アッセイで有用である。中和アッセ
イを実施するためには、ウイルスのような感染性因子の
抗原性領域のエピトープを示す合成ペプチドを可溶化
し、０.５〜５０.０μｇ／ｍｌの最終濃度に希釈したサ
ンプルと混合する。既知量(好ましくは１０μｌ)の希釈
または非希釈の試験サンプルを反応ウエルに添加し、次
いで組換えポリペプチドを含有する４００μｌの希釈サ
ンプルを添加する。所望の場合、混合物を約１５分間〜
２時間インキュベートする。次に本文中に記載の合成ペ
プチドをコートした固相を反応ウエルに添加し、約４０
℃で１時間インキュベートする。洗浄後、既知量の指示
試薬、例えば結合希釈剤中の２００μｌのペルオキシダ
ーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧを添加し、４０℃で１時間イ
ンキュベートする。洗浄後、記載のような酵素結合体を
使用したときは酵素基質、例えばＯＰＤ基質を添加し、
室温で３０分間インキュベートする。反応ウエルに１Ｎ
の硫酸のような停止試薬を加えて反応を終了させる。４
９２ｎｍの吸光度を読み取る。特異的ポリペプチドに対
する抗体を含む試験サンプルは、溶液中のこれらの抗体
に対するペプチドの競合結合によって弱められたシグナ
ルを発生する。合成ペプチドの存在下のサンプルの吸光
度の値を、同じ希釈度の組換えポリペプチドの非存在下
の検定サンプルの吸光度の値に比較することによって競
合的結合のパーセンテージを算出し得る。従って、合成
ペプチド存在サンプルと合成ペプチド非存在サンプルと
の間の発生シグナルの違いが、抗体の有無を判断するた
めに使用される測定値である。
【００９７】別のアッセイフォーマットによれば、イム
ノドットブロットアッセイ系で合成ペプチドを使用し得
る。イムノドットブロットアッセイ系では、ニトロセル
ロース固体支持体に一列に配置された精製合成ペプチド
のパネルを使用する。準備した固体支持体をサンプルと
接触させると、合成ペプチド(他方の特異的結合成員)に
対する特異的抗体(一方の特異的結合成員)が捕獲されて
特異的結合成員対が形成される。捕獲された抗体を指示
試薬との反応によって検出する。好ましくは、１９８８
年８月２日出願の米国特許出願第０７／２２７,４０８
号に記載の器具に内蔵される反射光学アセンブリを用い
て結合体特異的反応を定量する。更に、関連米国特許出
願第０７／２２７,５８６及び０７／２２７,５９０号
(双方とも１９８８年８月２日出願)、及び、参照によっ
て本明細書に含まれるものとする共有米国特許第５,０
７５,０７７号(１９８８年８月２日出願の米国特許第０
７／２２７,２７２号)は、イムノドットアッセイを実施
するために有用な特定の方法及び装置を記載している。
簡単に説明すると、マイクロセルロースを基材とする試
験カートリッジを多数の抗原性ポリペプチドで処理す
る。各ポリペプチドは試験カートリッジの特定反応ゾー
ンにを収容される。全部の抗原性ポリペプチドをニトロ
セルロースに配置した後、ニトロセルロース上の余剰の
結合部位をブロックする。次に、試験サンプルが適正抗
体を含有するならば各反応ゾーンの各抗原性ポリペプチ
ドが該抗体と反応するように試験カートリッジを試験サ
ンプルと接触させる。反応後、試験カートリッジを洗浄
し、適当な既知の試薬を用いて抗原−抗体反応を同定す
る。本文中に引用した特許及び特許出願に記載されてい
るように、全プロセスを自動化し得る。これらの出願明
細書中のイムノドットブロットアッセイを実施するため
の方法及び装置に関する記載内容は参照によって本明細
書に含まれるものとする。
ノドットブロットアッセイ系で合成ペプチドを使用し得
る。イムノドットブロットアッセイ系では、ニトロセル
ロース固体支持体に一列に配置された精製合成ペプチド
のパネルを使用する。準備した固体支持体をサンプルと
接触させると、合成ペプチド(他方の特異的結合成員)に
対する特異的抗体(一方の特異的結合成員)が捕獲されて
特異的結合成員対が形成される。捕獲された抗体を指示
試薬との反応によって検出する。好ましくは、１９８８
年８月２日出願の米国特許出願第０７／２２７,４０８
号に記載の器具に内蔵される反射光学アセンブリを用い
て結合体特異的反応を定量する。更に、関連米国特許出
願第０７／２２７,５８６及び０７／２２７,５９０号
(双方とも１９８８年８月２日出願)、及び、参照によっ
て本明細書に含まれるものとする共有米国特許第５,０
７５,０７７号(１９８８年８月２日出願の米国特許第０
７／２２７,２７２号)は、イムノドットアッセイを実施
するために有用な特定の方法及び装置を記載している。
簡単に説明すると、マイクロセルロースを基材とする試
験カートリッジを多数の抗原性ポリペプチドで処理す
る。各ポリペプチドは試験カートリッジの特定反応ゾー
ンにを収容される。全部の抗原性ポリペプチドをニトロ
セルロースに配置した後、ニトロセルロース上の余剰の
結合部位をブロックする。次に、試験サンプルが適正抗
体を含有するならば各反応ゾーンの各抗原性ポリペプチ
ドが該抗体と反応するように試験カートリッジを試験サ
ンプルと接触させる。反応後、試験カートリッジを洗浄
し、適当な既知の試薬を用いて抗原−抗体反応を同定す
る。本文中に引用した特許及び特許出願に記載されてい
るように、全プロセスを自動化し得る。これらの出願明
細書中のイムノドットブロットアッセイを実施するため
の方法及び装置に関する記載内容は参照によって本明細
書に含まれるものとする。
【００９８】試験サンプル中のアナライトの特異的抗原
に対する抗体を検出するために、以下のような第１及び
第２の固体支持体を使用するアッセイでも合成ペプチド
を使用し得る。このアッセイフォーマットでは、試験サ
ンプルの第１アリコートと、アナライトに特異的な合成
ペプチドをコートした第１固体支持体とを、合成ペプチ
ド／アナライト抗体複合体の形成に十分な期間及び条件
下で接触させる。次いで、複合体を合成ペプチド特異的
指示試薬と接触させる。試験サンプル中の合成ペプチド
に対する抗体の存在を判定するために指示試薬を検出す
る。次いで、試験サンプルの第２アリコートと、第二抗
体に特異的な合成ペプチドをコートした第２固体支持体
とを、合成ペプチド／第二抗体複合体の形成に十分な期
間及び条件下で接触させることによって、同じアナライ
ト中の異なる抗原決定基の存在を判定する。複合体を、
複合体の抗体に特異的な第２指示試薬と接触させる。試
験サンプル中の抗体の存在を判定するためにシグナルを
検出し、一方のアナライト合成ペプチドまたは双方のア
ナライト合成ペプチドに対する抗体の存在が、試験サン
プル中の抗アナライトの存在の指標となる。また、固体
支持体の同時試験も可能であると予期される。
に対する抗体を検出するために、以下のような第１及び
第２の固体支持体を使用するアッセイでも合成ペプチド
を使用し得る。このアッセイフォーマットでは、試験サ
ンプルの第１アリコートと、アナライトに特異的な合成
ペプチドをコートした第１固体支持体とを、合成ペプチ
ド／アナライト抗体複合体の形成に十分な期間及び条件
下で接触させる。次いで、複合体を合成ペプチド特異的
指示試薬と接触させる。試験サンプル中の合成ペプチド
に対する抗体の存在を判定するために指示試薬を検出す
る。次いで、試験サンプルの第２アリコートと、第二抗
体に特異的な合成ペプチドをコートした第２固体支持体
とを、合成ペプチド／第二抗体複合体の形成に十分な期
間及び条件下で接触させることによって、同じアナライ
ト中の異なる抗原決定基の存在を判定する。複合体を、
複合体の抗体に特異的な第２指示試薬と接触させる。試
験サンプル中の抗体の存在を判定するためにシグナルを
検出し、一方のアナライト合成ペプチドまたは双方のア
ナライト合成ペプチドに対する抗体の存在が、試験サン
プル中の抗アナライトの存在の指標となる。また、固体
支持体の同時試験も可能であると予期される。
【００９９】ハプテンの使用は当業界で公知である。ア
ッセイの性能強化のために本文中に開示された合成ペプ
チドを用いるアッセイにハプテンの使用も可能であると
予期される。
ッセイの性能強化のために本文中に開示された合成ペプ
チドを用いるアッセイにハプテンの使用も可能であると
予期される。
【０１００】本発明を実施例によって以下に説明する。
これらの実施例は本発明の代表例であって本発明の範囲
はこれらの実施例に限定されないことを理解されたい。
これらの実施例は本発明の代表例であって本発明の範囲
はこれらの実施例に限定されないことを理解されたい。
【０１０１】
【実施例】ＨＧＢＶの伝播性に関する初期の研究は、米
国特許出願第０８／２８３,３１４、０８／２４２,６５
４及び０８／１９６,０３０号に記載の手順で行われ
た。これらのすべての特許出願の記載内容は参照によっ
て本発明に含まれることは前述した。感染性に関するそ
の後の研究は、これらの３つの特許出願及び米国特許出
願第０８／３４４,１８５号及び第０８／３４４,１９０
号(いずれも１９９４年１１月２３日出願)に開示されて
いる。後者の２つの特許出願も参照によって本明細書に
含まれると前述した。これらの先行特許出願はまた、Ｈ
ＧＢＶクローン配列の延長(ＨＧＢＶ配列の発生、ＨＧ
ＢＶ中の２つのＨＣＶ様ウイルスの存在の証拠、ＧＢ−
Ａ及びＧＢ−Ｂが異なる２つのＲＮＡ種及び異なるウイ
ルスを提示するという証拠、ＨＧＢＶ−Ａ及びＨＧＢＶ
−Ｂがフラビウイルス科の成員であるという証拠)を記
載する複数の実施例;免疫原性ＨＧＢＶポリペプチドの
発現及び検出のためのＣＫＳを基剤とする発現ベクター
系、組換えタンパク質を使用した血清学的試験、ポリス
チレンビーズコーティング手順を含むその精製プロトコ
ル、ＨＧＢＶ抗体検出用ＥＬＩＳＡプロトコル、ヒト及
びシシザルのような感染個体の血清中のＨＧＢＶ由来Ｒ
ＮＡの検出を詳述した１つの実施例;使用実験プロトコ
ル、カットオフ判定、補充試験、低リスク標本で得られ
た血清学的データ、全世界諸国の肝炎「危険」と考えら
れる個体に由来の試験標本及び試験から得られた血清学
的結果の統計的有意性を含むヒトの集団的ＨＧＢＶ接触
の証拠を詳述した１つの実施例;使用実験プロトコル、
カットオフ判定、補充試験、低リスク標本で得られた血
清学的データ、肝炎「危険」と考えられる個体から得ら
れた血清学的データ及び血清学的結果の統計的有意性を
含むヒトの集団的ＨＧＢＶ接触の証拠となる追加試験を
詳述した別の実施例;ヒトにおけるＧＢ近縁ウイルスの
同定を示し、その同定に至る科学的な論拠、ＨＧＢＶ−
ＣのＮＳ３−様領域の詳細なクローニング、合計５１６
３ｂｐの長さのヌクレオチド配列、ＧＢ−Ｃが外因性で
あるという結論に導く科学的実験、ＧＢ−Ｃが追加のヒ
ト血清サンプル中で検出できる実験、ＨＧＢＶ−Ｃ配列
を延長するために使用したＰＣＲウォーキング技術を詳
述した実験を示す別の実施例を、開示している。これら
はすべて核酸配列及び５２６３ｂｐの６フレーム翻訳と
して提示された。これらの配列は１９９４年１１月２３
日出願の米国特許出願第０８／３４４,１９０号に示さ
れている。該特許出願が参照によって本明細書に含まれ
ることは前述した。配列は、米国特許出願第０８／３４
４,１９０号に記載されているように既にＡ.Ｔ.Ｃ.Ｃ.
に寄託され、１９９４年１１月８日にＡ.Ｔ.Ｃ.Ｃ.寄託
番号６９７１１で受託されたクローンｐＨＧＢ−Ｃクロ
ーン＃１から得られた。これらの配列は、米国特許出願
第０８／３４４,１９０号に、配列番号７６としてその
可能な６個の読み取り枠と共に同定されている。１９９
５年１月３０日出願の米国特許出願第０８／３７７,５
５７号は(該文献が参照によって本発明に含まれること
は前述した)、５１６３ｂｐの配列を長さ８０８７ｂｐ
に延長し、更に、８０８７ｂｐの配列の順方向の３つの
読み取り枠の翻訳を示している。米国特許出願第０８／
４２４,５５０号は、ＨＧＢＶ−Ｃの８０８７ｂｐを９
０３４ｂｐに延長し、また、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−
Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃに関する追加の血清学的データを示
している。米国特許出願第０８／４１７，６２９号(出
願人文書Ｎｏ.５５２７.ＵＳ.Ｐ７)は、ＨＧＢＶ−Ｃ配
列を８８ｂｐだけ延長して、配列を９１２２ｂｐ（配列
番号２６）の長さとし、また、西アフリカの抗体検出及
びＰＣＲ結果を修正し、有志の血液ドナー、静注薬使用
者及び非Ａ−Ｅ肝炎個体中のＰＣＲ結果を総合すること
によって、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−
Ｃの血清学的データを更新した。従って、これらの実施
例は本発明の代表例であって、本発明の範囲はこれらの
実施例に限定されない。
国特許出願第０８／２８３,３１４、０８／２４２,６５
４及び０８／１９６,０３０号に記載の手順で行われ
た。これらのすべての特許出願の記載内容は参照によっ
て本発明に含まれることは前述した。感染性に関するそ
の後の研究は、これらの３つの特許出願及び米国特許出
願第０８／３４４,１８５号及び第０８／３４４,１９０
号(いずれも１９９４年１１月２３日出願)に開示されて
いる。後者の２つの特許出願も参照によって本明細書に
含まれると前述した。これらの先行特許出願はまた、Ｈ
ＧＢＶクローン配列の延長(ＨＧＢＶ配列の発生、ＨＧ
ＢＶ中の２つのＨＣＶ様ウイルスの存在の証拠、ＧＢ−
Ａ及びＧＢ−Ｂが異なる２つのＲＮＡ種及び異なるウイ
ルスを提示するという証拠、ＨＧＢＶ−Ａ及びＨＧＢＶ
−Ｂがフラビウイルス科の成員であるという証拠)を記
載する複数の実施例;免疫原性ＨＧＢＶポリペプチドの
発現及び検出のためのＣＫＳを基剤とする発現ベクター
系、組換えタンパク質を使用した血清学的試験、ポリス
チレンビーズコーティング手順を含むその精製プロトコ
ル、ＨＧＢＶ抗体検出用ＥＬＩＳＡプロトコル、ヒト及
びシシザルのような感染個体の血清中のＨＧＢＶ由来Ｒ
ＮＡの検出を詳述した１つの実施例;使用実験プロトコ
ル、カットオフ判定、補充試験、低リスク標本で得られ
た血清学的データ、全世界諸国の肝炎「危険」と考えら
れる個体に由来の試験標本及び試験から得られた血清学
的結果の統計的有意性を含むヒトの集団的ＨＧＢＶ接触
の証拠を詳述した１つの実施例;使用実験プロトコル、
カットオフ判定、補充試験、低リスク標本で得られた血
清学的データ、肝炎「危険」と考えられる個体から得ら
れた血清学的データ及び血清学的結果の統計的有意性を
含むヒトの集団的ＨＧＢＶ接触の証拠となる追加試験を
詳述した別の実施例;ヒトにおけるＧＢ近縁ウイルスの
同定を示し、その同定に至る科学的な論拠、ＨＧＢＶ−
ＣのＮＳ３−様領域の詳細なクローニング、合計５１６
３ｂｐの長さのヌクレオチド配列、ＧＢ−Ｃが外因性で
あるという結論に導く科学的実験、ＧＢ−Ｃが追加のヒ
ト血清サンプル中で検出できる実験、ＨＧＢＶ−Ｃ配列
を延長するために使用したＰＣＲウォーキング技術を詳
述した実験を示す別の実施例を、開示している。これら
はすべて核酸配列及び５２６３ｂｐの６フレーム翻訳と
して提示された。これらの配列は１９９４年１１月２３
日出願の米国特許出願第０８／３４４,１９０号に示さ
れている。該特許出願が参照によって本明細書に含まれ
ることは前述した。配列は、米国特許出願第０８／３４
４,１９０号に記載されているように既にＡ.Ｔ.Ｃ.Ｃ.
に寄託され、１９９４年１１月８日にＡ.Ｔ.Ｃ.Ｃ.寄託
番号６９７１１で受託されたクローンｐＨＧＢ−Ｃクロ
ーン＃１から得られた。これらの配列は、米国特許出願
第０８／３４４,１９０号に、配列番号７６としてその
可能な６個の読み取り枠と共に同定されている。１９９
５年１月３０日出願の米国特許出願第０８／３７７,５
５７号は(該文献が参照によって本発明に含まれること
は前述した)、５１６３ｂｐの配列を長さ８０８７ｂｐ
に延長し、更に、８０８７ｂｐの配列の順方向の３つの
読み取り枠の翻訳を示している。米国特許出願第０８／
４２４,５５０号は、ＨＧＢＶ−Ｃの８０８７ｂｐを９
０３４ｂｐに延長し、また、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−
Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃに関する追加の血清学的データを示
している。米国特許出願第０８／４１７，６２９号(出
願人文書Ｎｏ.５５２７.ＵＳ.Ｐ７)は、ＨＧＢＶ−Ｃ配
列を８８ｂｐだけ延長して、配列を９１２２ｂｐ（配列
番号２６）の長さとし、また、西アフリカの抗体検出及
びＰＣＲ結果を修正し、有志の血液ドナー、静注薬使用
者及び非Ａ−Ｅ肝炎個体中のＰＣＲ結果を総合すること
によって、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−
Ｃの血清学的データを更新した。従って、これらの実施
例は本発明の代表例であって、本発明の範囲はこれらの
実施例に限定されない。
【０１０２】実施例１.合成ペプチドの作製 Ａ.背景 複数のヒト及び実験的に感染させたシシザルが、ＨＧＢ
Ｖ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃウイルスゲノム
に由来の組換えタンパク質と反応する抗体を産生した。
免疫学的に重要な(１つまたは複数の)エピトープの位置
をより正確に限局するために合成ペプチドを作製した。
ペプチド合成は以下の手順による。２つの方法のいずれ
かを用いてペプチドを調製した。即ち、(１)Ｒａｉｎｉ
ｎ Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒにおいて、０.０２５ミリモ
ル規模の標準ｆＭＯＣ固相ペプチド合成(ＳＰＰＳ)を使
用し、各残基に４５分間の結合時間でＮ−メチル−モル
ホリンによって提供されるｉｎ ｓｉｔｕ活性化による
ＨＢＴＵ結合化学及び所定残基の二重結合によってペプ
チドを合成するか、または、(２)ＡＢＩ４３１Ａ Ｐｅ
ｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒにおいて０.２５ミ
リモル規模の標準ｆＭＯＣ固相ペプチド合成を使用し、
ＨＯＢｔ／ＤＣＣ法による活性化及び所定残基後の二重
結合によってペプチドを合成した。樹脂の標準開裂(９
０％トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)、各２.５％の水及びエ
タンジチオール、５％のチオアニソール及び１００ｍｇ
のフェノール)によって非保護ペプチドを得、次いでエ
ーテル沈殿及び洗浄処理した。
Ｖ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃウイルスゲノム
に由来の組換えタンパク質と反応する抗体を産生した。
免疫学的に重要な(１つまたは複数の)エピトープの位置
をより正確に限局するために合成ペプチドを作製した。
ペプチド合成は以下の手順による。２つの方法のいずれ
かを用いてペプチドを調製した。即ち、(１)Ｒａｉｎｉ
ｎ Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒにおいて、０.０２５ミリモ
ル規模の標準ｆＭＯＣ固相ペプチド合成(ＳＰＰＳ)を使
用し、各残基に４５分間の結合時間でＮ−メチル−モル
ホリンによって提供されるｉｎ ｓｉｔｕ活性化による
ＨＢＴＵ結合化学及び所定残基の二重結合によってペプ
チドを合成するか、または、(２)ＡＢＩ４３１Ａ Ｐｅ
ｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒにおいて０.２５ミ
リモル規模の標準ｆＭＯＣ固相ペプチド合成を使用し、
ＨＯＢｔ／ＤＣＣ法による活性化及び所定残基後の二重
結合によってペプチドを合成した。樹脂の標準開裂(９
０％トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)、各２.５％の水及びエ
タンジチオール、５％のチオアニソール及び１００ｍｇ
のフェノール)によって非保護ペプチドを得、次いでエ
ーテル沈殿及び洗浄処理した。
【０１０３】Ｃ.合成ペプチドの分析 合成ペプチドのアミノ酸組成を以下の手順で分析した。
小規模合成で得られた粗ペプチド(０.０２５ミリモル)
の品質を、Ｃ１８逆相高圧液体クロマトグラフィー(Ｈ
ＰＬＣ)において各溶媒に０.１％のＴＦＡを加えたアセ
トニトリル／水勾配を用いて分析した。分析クロマトグ
ラムから、各合成の主要ピークを収集し、流出液を質量
分析法(エレクトロスプレー及び／またはレーザー脱着
ＭＳ)によって分析した。観察された分子イオンが所望
の物質に対応したときに、粗または精製ペプチドの放射
能を検定した。ペプチドの精製(小規模及び／または大
規模)を、Ｃ１８逆相ＨＰＬＣにおいて各溶媒に０.１％
のＴＦＡを加えたアセトニトリル／水勾配を用いて行っ
た。主要ピークを収集し、凍結乾燥すると、綿毛状白色
粉末が得られた。これを質量分析法で分析した。
小規模合成で得られた粗ペプチド(０.０２５ミリモル)
の品質を、Ｃ１８逆相高圧液体クロマトグラフィー(Ｈ
ＰＬＣ)において各溶媒に０.１％のＴＦＡを加えたアセ
トニトリル／水勾配を用いて分析した。分析クロマトグ
ラムから、各合成の主要ピークを収集し、流出液を質量
分析法(エレクトロスプレー及び／またはレーザー脱着
ＭＳ)によって分析した。観察された分子イオンが所望
の物質に対応したときに、粗または精製ペプチドの放射
能を検定した。ペプチドの精製(小規模及び／または大
規模)を、Ｃ１８逆相ＨＰＬＣにおいて各溶媒に０.１％
のＴＦＡを加えたアセトニトリル／水勾配を用いて行っ
た。主要ピークを収集し、凍結乾燥すると、綿毛状白色
粉末が得られた。これを質量分析法で分析した。
【０１０４】Ｄ.１.４タンパク質内部のエピトープのマ
ッピング ＨＧＢＶゲノムのＮＳ５領域のＧＢＶ−Ｂアミノ酸配列
の内部に由来の全１６５個のアミノ酸を鑑定するため
に、(カルボキシル末端)に６個のアミノ酸オーバーラッ
プを有する８個のオーバーラッピング２５ｍｅｒを合成
した。
ッピング ＨＧＢＶゲノムのＮＳ５領域のＧＢＶ−Ｂアミノ酸配列
の内部に由来の全１６５個のアミノ酸を鑑定するため
に、(カルボキシル末端)に６個のアミノ酸オーバーラッ
プを有する８個のオーバーラッピング２５ｍｅｒを合成
した。
【０１０５】実施例２.ＥＬＩＳＡ試験 Ａ.固相の調製 １／４インチのポリスチレンビーズをこれらのペプチド
の各々でコートすることによってこれらのエピトープの
有用性を判定した。(より詳細には、ペプチドを水また
は水と氷酢酸との混合物に可溶化し、リン酸塩緩衝液
(ｐＨ７.４)中に１０μｇ.ｍｌを含有するように希釈し
た。合計６０個のポリスチレンビーズを１４ｍｌのペプ
チド溶液(１０μｇ／ｍｌ)と共にシンチレーションバイ
アルに添加し、５６℃のインキュベーターに配置した。
２時間のインキュベーション後、液体を吸引し、０.１
％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００(登録商標)／ＰＢＳを含有
する緩衝液で置換した。ビーズをこの溶液に６０分間接
触させ、次いで流体を吸引し、ビーズをＰＢＳ緩衝液で
２回洗浄した。次にビーズを５％ウシ血清アルブミン溶
液に接触させ、ＰＢＳに４０℃で６０分間希釈した。６
０分後、流体を吸引し、ビーズをＰＢＳで洗浄した。ビ
ーズをＰＢＳ緩衝液中の５％ショ糖に３０分間浸漬し
た。次に流体を吸引し、ビーズを風乾した。
の各々でコートすることによってこれらのエピトープの
有用性を判定した。(より詳細には、ペプチドを水また
は水と氷酢酸との混合物に可溶化し、リン酸塩緩衝液
(ｐＨ７.４)中に１０μｇ.ｍｌを含有するように希釈し
た。合計６０個のポリスチレンビーズを１４ｍｌのペプ
チド溶液(１０μｇ／ｍｌ)と共にシンチレーションバイ
アルに添加し、５６℃のインキュベーターに配置した。
２時間のインキュベーション後、液体を吸引し、０.１
％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００(登録商標)／ＰＢＳを含有
する緩衝液で置換した。ビーズをこの溶液に６０分間接
触させ、次いで流体を吸引し、ビーズをＰＢＳ緩衝液で
２回洗浄した。次にビーズを５％ウシ血清アルブミン溶
液に接触させ、ＰＢＳに４０℃で６０分間希釈した。６
０分後、流体を吸引し、ビーズをＰＢＳで洗浄した。ビ
ーズをＰＢＳ緩衝液中の５％ショ糖に３０分間浸漬し
た。次に流体を吸引し、ビーズを風乾した。
【０１０６】Ｂ.ＥＬＩＳＡ手順 ここに記載の手順でＥＬＩＳＡ試験を実施した。簡単に
説明すると、先ず血清または血漿を標本希釈剤に１:１
５に希釈した。１０μｌのこの希釈標本を２００μｌの
標本希釈剤と共に反応トレーのウエルに添加した。反応
トレーの各ウエルに、抗原をコートしたポリスチレンビ
ーズを１個ずつ添加し、トレーを、一定撹拌プログラム
したインキュベーター内で室温でインキュベートした。
１時間のインキュベーション後、ビーズを蒸留水に希釈
し、結合体(西洋ワサビ−ペルオキシダーゼ標識抗ヒト
ＩｇＧヤギ抗体)をビーズと反応させ、結合免疫グロブ
リンとの複合体を形成した。室温で１時間インキュベー
ション後、ビーズを蒸留水で洗浄し、基質に接触させる
と、着色産物が得られた。
説明すると、先ず血清または血漿を標本希釈剤に１:１
５に希釈した。１０μｌのこの希釈標本を２００μｌの
標本希釈剤と共に反応トレーのウエルに添加した。反応
トレーの各ウエルに、抗原をコートしたポリスチレンビ
ーズを１個ずつ添加し、トレーを、一定撹拌プログラム
したインキュベーター内で室温でインキュベートした。
１時間のインキュベーション後、ビーズを蒸留水に希釈
し、結合体(西洋ワサビ−ペルオキシダーゼ標識抗ヒト
ＩｇＧヤギ抗体)をビーズと反応させ、結合免疫グロブ
リンとの複合体を形成した。室温で１時間インキュベー
ション後、ビーズを蒸留水で洗浄し、基質に接触させる
と、着色産物が得られた。
【０１０７】Ｃ.結果 実施例１の試薬を用いて実施例２のＥＬＩＳＡを実施し
て得られた結果を以下に要約する。
て得られた結果を以下に要約する。
【０１０８】ｉ.シシザル血清 米国特許出願第０８／４２４,５５０号(参照によって本
明細書に含まれることは前述)の実施例１５に示したよ
うに、ＨＧＢＶ血清を接種した複数のシシザルが組換え
タンパク質(「ＣＫＳ１.４組換えタンパク質」)に対す
る抗体を産生した。これらの同じシシザル血清は上述の
ＥＬＩＳＡによって表１に示すペプチドのパネル(配列
番号５、６、８、９、１１及び１２)と反応した。特異
的免疫応答は配列番号１１と呼ばれるペプチドに対して
生じると判定された。
明細書に含まれることは前述)の実施例１５に示したよ
うに、ＨＧＢＶ血清を接種した複数のシシザルが組換え
タンパク質(「ＣＫＳ１.４組換えタンパク質」)に対す
る抗体を産生した。これらの同じシシザル血清は上述の
ＥＬＩＳＡによって表１に示すペプチドのパネル(配列
番号５、６、８、９、１１及び１２)と反応した。特異
的免疫応答は配列番号１１と呼ばれるペプチドに対して
生じると判定された。
【０１０９】ii.ヒト血清 複数のヒト血清が、米国特許出願第０８／４２４,５５
０号で「ＣＫＳ１.４組換えタンパク質」であると既に
同定されていたＨＧＢＶ組換えタンパク質と反応性であ
った。これらの標本のいくつかは、上述のＥＬＩＳＡに
よって表１に示すペプチドのパネル(配列番号５、６、
７、８、９、１０、１１及び１２)と反応した。特異的
免疫応答は配列番号５と呼ばれるペプチドに対して生じ
ると判定された。これらのデータを表２に示す。
０号で「ＣＫＳ１.４組換えタンパク質」であると既に
同定されていたＨＧＢＶ組換えタンパク質と反応性であ
った。これらの標本のいくつかは、上述のＥＬＩＳＡに
よって表１に示すペプチドのパネル(配列番号５、６、
７、８、９、１０、１１及び１２)と反応した。特異的
免疫応答は配列番号５と呼ばれるペプチドに対して生じ
ると判定された。これらのデータを表２に示す。
【０１１０】Ｄ.ＣＫＳ２.１７タンパク質の内部エピト
ープのマッピング 先の米国特許出願第０８／４２４,５５０号(参照によっ
て本明細書に含まれることは前述)に記載されているＣ
ＫＳ２.１７組換えタンパク質の場合には、フラグメン
ト１.２２／２.１７−３及び１.２２／２.１７−４の内
部に由来の全２００個のアミノ酸を鑑定するために、
(カルボキシル末端)に５個のアミノ酸オーバーラップを
有する８個のオーバーラッピング２５ｍｅｒを合成し
た。
ープのマッピング 先の米国特許出願第０８／４２４,５５０号(参照によっ
て本明細書に含まれることは前述)に記載されているＣ
ＫＳ２.１７組換えタンパク質の場合には、フラグメン
ト１.２２／２.１７−３及び１.２２／２.１７−４の内
部に由来の全２００個のアミノ酸を鑑定するために、
(カルボキシル末端)に５個のアミノ酸オーバーラップを
有する８個のオーバーラッピング２５ｍｅｒを合成し
た。
【０１１１】１.本質的に実施例２(Ａ)に記載の手順で
固相を調製した。
固相を調製した。
【０１１２】２.実施例２(Ｂ)に記載の手順でＥＬＩＳ
Ａを実施した。
Ａを実施した。
【０１１３】３.ヒト血清の結果。 米国特許出願第０
８／４２４,５５０号(参照によって本明細書に含まれる
ことは前述)の実施例１５に示したように、複数のヒト
標本が、ＣＫＳ２.１７組換えタンパク質と反応性であ
った。これらの標本のいくつかは、実施例２(Ｂ)に示し
たＥＬＩＳＡ後に、合成ペプチドのパネル(配列番号１
３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１
及び２２)と反応した。特異的免疫応答は配列番号１
９、２０、２１及び２２と呼ばれるペプチドに対して生
じると判定された。これらのデータを表３に示す。
８／４２４,５５０号(参照によって本明細書に含まれる
ことは前述)の実施例１５に示したように、複数のヒト
標本が、ＣＫＳ２.１７組換えタンパク質と反応性であ
った。これらの標本のいくつかは、実施例２(Ｂ)に示し
たＥＬＩＳＡ後に、合成ペプチドのパネル(配列番号１
３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１
及び２２)と反応した。特異的免疫応答は配列番号１
９、２０、２１及び２２と呼ばれるペプチドに対して生
じると判定された。これらのデータを表３に示す。
【０１１４】Ｅ.ＣＫＳ４.１タンパク質のエピトープの
マッピング 米国特許出願第０８／４２４,５５０号(参照によって本
明細書に含まれることは前述)に記載されているＣＫＳ
４.１タンパク質の内部から３つの合成ペプチドを合成
した。第１ペプチドはＧＢＶ−Ｂの推定コアタンパク質
(１.４タンパク質)の最初の３５個のアミノ酸から成
り、第２ペプチドはＨＧＢＶ−Ｂの推定コアタンパク質
のアミノ酸２７−６０から成り、第三ペプチドはＨＧＢ
Ｖ−Ｂの推定コアタンパク質のアミノ酸７２−１０２か
ら成る(夫々配列番号２３、２４及び２５)。
マッピング 米国特許出願第０８／４２４,５５０号(参照によって本
明細書に含まれることは前述)に記載されているＣＫＳ
４.１タンパク質の内部から３つの合成ペプチドを合成
した。第１ペプチドはＧＢＶ−Ｂの推定コアタンパク質
(１.４タンパク質)の最初の３５個のアミノ酸から成
り、第２ペプチドはＨＧＢＶ−Ｂの推定コアタンパク質
のアミノ酸２７−６０から成り、第三ペプチドはＨＧＢ
Ｖ−Ｂの推定コアタンパク質のアミノ酸７２−１０２か
ら成る(夫々配列番号２３、２４及び２５)。
【０１１５】１.本質的に実施例２(Ａ)に記載の手順で
固相を調製した。
固相を調製した。
【０１１６】２.実施例２(Ｂ)に記載の手順でＥＬＩＳ
Ａを実施した。
Ａを実施した。
【０１１７】３.ヒト血清の結果。 米国特許出願第０
８／４２４,５５０号(参照によって本明細書に含まれる
ことは前述)の実施例１５に示したように、複数のヒト
標本が、ＣＫＳ４.１組換えタンパク質と反応性であっ
た。これらの標本のいくつかは、実施例２(Ｂ)に示した
ＥＬＩＳＡ後に、合成ペプチドのパネル(配列番号２
３、２４及び２５)と反応した。特異的免疫応答は配列
番号２３及び２４と呼ばれるペプチドに対して生じると
判定された。これらのデータを表４に示す。
８／４２４,５５０号(参照によって本明細書に含まれる
ことは前述)の実施例１５に示したように、複数のヒト
標本が、ＣＫＳ４.１組換えタンパク質と反応性であっ
た。これらの標本のいくつかは、実施例２(Ｂ)に示した
ＥＬＩＳＡ後に、合成ペプチドのパネル(配列番号２
３、２４及び２５)と反応した。特異的免疫応答は配列
番号２３及び２４と呼ばれるペプチドに対して生じると
判定された。これらのデータを表４に示す。
【０１１８】Ｆ.ＣＫＳ Ｃ.８／１２タンパク質のエピ
トープの マッピング 米国特許出願第０８／４２４,５５０号(参照によって本
明細書に含まれることは前述)に記載されているＣＫＳ
Ｃ.８／１２タンパク質の内部から４つの合成ペプチド
を合成した。第１ペプチドはＨＧＢＶ−Ｃの推定ＮＳ５
タンパク質のアミノ酸２２１３−２２４２から成り、第
２ペプチドはＨＧＢＶ−Ｃの推定ＮＳ５タンパク質のア
ミノ酸２２８８−２３１７から成り、第三ペプチドはＨ
ＧＢＶ−ＣのＮＳ５タンパク質のアミノ酸２２１９−２
３４８から成り、第四ペプチドはＨＧＢＶ−ＣのＮＳ５
タンパク質のアミノ酸２３２９−２３５８から成る(夫
々配列番号１、２、３及び４)。
トープの マッピング 米国特許出願第０８／４２４,５５０号(参照によって本
明細書に含まれることは前述)に記載されているＣＫＳ
Ｃ.８／１２タンパク質の内部から４つの合成ペプチド
を合成した。第１ペプチドはＨＧＢＶ−Ｃの推定ＮＳ５
タンパク質のアミノ酸２２１３−２２４２から成り、第
２ペプチドはＨＧＢＶ−Ｃの推定ＮＳ５タンパク質のア
ミノ酸２２８８−２３１７から成り、第三ペプチドはＨ
ＧＢＶ−ＣのＮＳ５タンパク質のアミノ酸２２１９−２
３４８から成り、第四ペプチドはＨＧＢＶ−ＣのＮＳ５
タンパク質のアミノ酸２３２９−２３５８から成る(夫
々配列番号１、２、３及び４)。
【０１１９】１.本質的に実施例２(Ａ)に記載の手順で
固相を調製した。
固相を調製した。
【０１２０】２.実施例２(Ｂ)に記載の手順でＥＬＩＳ
Ａを実施した。
Ａを実施した。
【０１２１】３.ヒト血清の結果。 米国特許出願第０
８／４２４,５５０号(参照によって本明細書に含まれる
ことは前述)の実施例１５に示したように、複数のヒト
標本が、ＣＫＳ Ｃ.８／１２組換えタンパク質と反応性
であった。これらの標本のいくつかは、実施例２(Ｂ)に
示したＥＬＩＳＡ後に、合成ペプチドのパネル(配列番
号１、２、３及び４)と反応した。特異的免疫応答は配
列番号２と呼ばれるペプチドに対して生じると判定され
た。これらのデータを表５に示す。
８／４２４,５５０号(参照によって本明細書に含まれる
ことは前述)の実施例１５に示したように、複数のヒト
標本が、ＣＫＳ Ｃ.８／１２組換えタンパク質と反応性
であった。これらの標本のいくつかは、実施例２(Ｂ)に
示したＥＬＩＳＡ後に、合成ペプチドのパネル(配列番
号１、２、３及び４)と反応した。特異的免疫応答は配
列番号２と呼ばれるペプチドに対して生じると判定され
た。これらのデータを表５に示す。
【０１２２】上記に提示したデータは、試験した複数の
試験サンプルに対して複数の合成ペプチドが反応性であ
ることを示し、従ってこれらの合成ペプチドがＨＧＢＶ
ウイルスに接触した個体中の抗体を検出する試薬として
有効であることを示した。
試験サンプルに対して複数の合成ペプチドが反応性であ
ることを示し、従ってこれらの合成ペプチドがＨＧＢＶ
ウイルスに接触した個体中の抗体を検出する試薬として
有効であることを示した。
【０１２３】従って本発明は、試験サンプル中のＨＧＢ
Ｖ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃの存在を判定す
る試薬及び方法を提供する。本文中に記載のＨＧＢＶ−
Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃに特異的なポリヌク
レオチドもしくはポリペプチド(またはそのフラグメン
ト)またはこれらのポリペプチド及びポリヌクレオチド
から産生された抗体を常用のアッセイ試薬と併用し、こ
れらのウイルスに対する抗体を検出するための常用のア
ッセイ手順に組込めることが予期され本発明の範囲に包
含される。または、ここに記載のＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢ
Ｖ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃに特異的なポリヌクレオチドも
しくはポリペプチド(またはその(１つ以上の)フラグメ
ント)またはこれらのポリペプチド及びポリヌクレオチ
ド(またはその(１つ以上の)フラグメント)から産生され
た抗体を、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−
Ｃウイルスの検出に使用し得る。
Ｖ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃの存在を判定す
る試薬及び方法を提供する。本文中に記載のＨＧＢＶ−
Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃに特異的なポリヌク
レオチドもしくはポリペプチド(またはそのフラグメン
ト)またはこれらのポリペプチド及びポリヌクレオチド
から産生された抗体を常用のアッセイ試薬と併用し、こ
れらのウイルスに対する抗体を検出するための常用のア
ッセイ手順に組込めることが予期され本発明の範囲に包
含される。または、ここに記載のＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢ
Ｖ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃに特異的なポリヌクレオチドも
しくはポリペプチド(またはその(１つ以上の)フラグメ
ント)またはこれらのポリペプチド及びポリヌクレオチ
ド(またはその(１つ以上の)フラグメント)から産生され
た抗体を、ＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−
Ｃウイルスの検出に使用し得る。
【０１２４】本発明の他の用途または変形は本明細書の
開示を考察すれば当業者に明らかであろう。従って、特
許請求の範囲だけが本発明を限定する。
開示を考察すれば当業者に明らかであろう。従って、特
許請求の範囲だけが本発明を限定する。
【０１２５】
【表１】
【０１２６】
【表２】
【０１２７】
【表３】
【０１２８】
【表４】
【０１２９】
【表５】
【０１３０】
【配列表】
【０１３１】
【表６】
【０１３２】
【表７】
【０１３３】
【表８】
【０１３４】
【表９】
【０１３５】
【表１０】
【０１３６】
【表１１】
【０１３７】
【表１２】
【０１３８】
【表１３】
【０１３９】
【表１４】
【０１４０】
【表１５】
【０１４１】
【表１６】
【０１４２】
【表１７】
【０１４３】
【表１８】
【０１４４】
【表１９】
【０１４５】
【表２０】
【０１４６】
【表２１】
【０１４７】
【表２２】
【０１４８】
【表２３】
【０１４９】
【表２４】
【０１５０】
【表２５】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/576 Ｂ 33/576 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ // Ａ６１Ｋ 39/395 Ｓ 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者 タミ・ジエイ・パイロツト−マテイアス アメリカ合衆国、イリノイ・60048、グリ ーン・オークス、クランブルツク・ロー ド・2100 (72)発明者 ドミニク・ピー・ブライドン アメリカ合衆国、イリノイ・60053、モー トン・グローブ、カプリーナ・アベニユ ー・5717 (72)発明者 パメラ・エイ・シユローダー−ポリアク アメリカ合衆国、イリノイ・60030、ホウ ソーン・ウツズ、アロウウツド・ドライ ブ・19 (72)発明者 マーク・エフ・ナイツジ アメリカ合衆国、イリノイ・60030、グレ イズレイク、ダーラム・レーン・820 (72)発明者 キーブ・デイ・ジヤフエ アメリカ合衆国、ウイスコンシン・53179、 トレバー、トウハンドレツドセブンテイフ アースト・アベニユー・9761 (72)発明者 アイサ・ケイ・マツシヤーワー アメリカ合衆国、イリノイ・60030、グレ イズレイク、アーバー・ブールバード・ 18790
Claims (42)
- 【請求項１】 アミノ酸配列またはそのフラグメントか
ら成り、前記配列が正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされ
ていることにより特徴づけられていて、前記ゲノムがポ
リタンパク質をコードする読取り枠(ＯＲＦ)を有し、前
記ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨ
ＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたアミノ酸配
列に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸配列か
ら成るポリペプチドであって、合成手段によって調製さ
れることを特徴とする肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に由
来の精製ポリペプチド。 - 【請求項２】 前記ポリペプチドが配列番号５及び１１
から成るグループから選択されることを特徴とする請求
項１に記載の精製ポリペプチド。 - 【請求項３】 前記ポリペプチドが配列番号１９、２
０、２１及び２２から成るグループから選択されること
を特徴とする請求項１に記載の精製ポリペプチド。 - 【請求項４】 前記ポリペプチドが配列番号２３及び２
４から成るグループから選択されることを特徴とする請
求項１に記載の精製ポリペプチド。 - 【請求項５】 前記ポリペプチドが配列番号２であるこ
とを特徴とする請求項１に記載の精製ポリペプチド。 - 【請求項６】 合成手段によって調製されたポリペプチ
ドを利用して産生されることを特徴とする少なくとも１
つの肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)エピトープに対する抗
体。 - 【請求項７】 前記抗体がポリクローナル抗体であるこ
とを特徴とする請求項６に記載の抗体。 - 【請求項８】 前記抗体がモノクローナル抗体であるこ
とを特徴とする請求項６に記載の抗体。 - 【請求項９】 ＨＧＢＶ抗原中に存在する少なくとも１
つのＨＧＢＶエピトープを有するポリペプチドを収容し
た容器から成り、前記ポリペプチドが合成手段によって
調製されていることを特徴とする試験サンプル中の肝炎
ＧＢウイルス(HGBV)の抗原または抗体の存在を判定する
ためのアッセイキット。 - 【請求項１０】 前記ポリペプチドが正鎖ＲＮＡゲノム
によりコードされていることにより特徴づけられてい
て、前記ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠
(ＯＲＦ)を有し、前記ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、
ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選
択されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有
するアミノ酸配列から成ることを特徴とする請求項９に
記載のアッセイキット。 - 【請求項１１】 前記ポリペプチドが固相に結合されて
いることを特徴とする請求項１０に記載のアッセイキッ
ト。 - 【請求項１２】 前記ポリペプチドが配列番号５及び１
１から成るグループから選択されることを特徴とする請
求項１に記載のポリペプチド。 - 【請求項１３】 前記ポリペプチドが配列番号１９、２
０、２１及び２２から成るグループから選択されること
を特徴とする請求項１に記載のポリペプチド。 - 【請求項１４】 前記ポリペプチドが配列番号２３及び
２４から成るグループから選択されることを特徴とする
請求項１に記載のポリペプチド。 - 【請求項１５】 前記ポリペプチドが配列番号２である
ことを特徴とする請求項１に記載のポリペプチド。 - 【請求項１６】 ＨＧＢＶ抗原に特異的に結合する抗体
を収容した容器から成り、前記抗原がＨＧＢＶの配列に
少なくとも約６０％の配列類似性を有する配列によって
コードされるＨＧＢＶエピトープを含み、前記抗体が合
成手段によって調製されたポリペプチドを利用して産生
されていることを特徴とする試験サンプル中の肝炎ＧＢ
ウイルス(ＨＧＢＶ)の抗原または抗体の存在を判定する
キット。 - 【請求項１７】 前記抗体が固相に結合されていること
を特徴とする請求項１６に記載のキット。 - 【請求項１８】 ＨＧＢＶを含有している疑いのある試
験サンプル中の肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)抗原を検出
するために、 ａ.試験サンプルと、少なくとも１つのＨＧＢＶ抗原に
特異的に結合する抗体またはそのフラグメントとを、抗
体／抗原複合体の形成に十分な時間及び条件下で接触さ
せる段階と、 ｂ.前記抗体含有複合体を検出する段階とから成り、 前記抗体が合成手段によって調製されたポリペプチドを
利用して産生されることを特徴とする方法。 - 【請求項１９】 前記抗体が固相に結合されていること
を特徴とする請求項１８に記載の方法。 - 【請求項２０】 前記抗体がモノクローナル抗体または
ポリクローナル抗体であることを特徴とする請求項１８
に記載の方法。 - 【請求項２１】 抗体を含有している疑いのある試験サ
ンプル中の肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)抗体を検出する
ために、 ａ.試験サンプルとプローブポリペプチドとを抗原／抗
体複合体の形成に十分な時間及び条件下で接触させる段
階と、前記ポリペプチドは正鎖ＲＮＡゲノムによりコー
ドされていることにより特徴づけられていてかつアミノ
酸配列またはそのフラグメントから成る少なくとも１つ
のＨＧＢＶエピトープを含有し、前記ゲノムがポリタン
パク質をコードする読取り枠(ＯＲＦ)を有し、前記ポリ
タンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ
−Ｃから成るグループから選択されたアミノ酸配列に少
なくとも３５％の同一性を有するアミノ酸配列から成
り、 ｂ.プローブポリペプチドを含有する前記複合体を検出
する段階とから成る方法。 - 【請求項２２】 前記プローブポリペプチドが固相に結
合されていることを特徴とする請求項２１に記載の方
法。 - 【請求項２３】 前記固相がビーズ、マイクロタイター
ウエル、試験管壁、ニトロセルロース片、磁性ビーズ及
び非磁性ビーズから成るグループから選択されることを
特徴とする請求項２１に記載の方法。 - 【請求項２４】 前記ポリペプチドがＨＧＢＶの少なく
とも１つのエピトープをコードする合成ペプチドであり
かつ正鎖ＲＮＡゲノムによりコードされていることによ
り特徴づけられていて、前記ゲノムがポリタンパク質を
コードする読取り枠(ＯＲＦ)を有し、前記ポリタンパク
質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから
成るグループから選択されたアミノ酸配列に少なくとも
３５％の同一性を有するアミノ酸配列から成ることを特
徴とする請求項２１に記載の方法。 - 【請求項２５】 前記配列が正鎖ＲＮＡゲノムによりコ
ードされていることにより特徴づけられていて、前記ゲ
ノムがポリタンパク質をコードする読取り枠(ＯＲＦ)を
有し、前記ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧＢＶ−
Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択されたア
ミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有するアミノ
酸配列から成ることを特徴とする請求項２４に記載の方
法。 - 【請求項２６】 前記ポリペプチドが配列番号５及び１
１から成るグループから選択されることを特徴とする請
求項２５に記載の方法。 - 【請求項２７】 前記ポリペプチドが配列番号１９、２
０、２１及び２２から成るグループから選択されること
を特徴とする請求項２５に記載の方法。 - 【請求項２８】 前記ポリペプチドが配列番号２３及び
２４から成るグループから選択されることを特徴とする
請求項２５に記載の方法。 - 【請求項２９】 前記ポリペプチドが配列番号２である
ことを特徴とする請求項２５に記載の方法。 - 【請求項３０】 医薬として許容される賦形剤中に、薬
理学的有効用量の免疫原性ＨＧＢＶポリペプチドまたは
そのフラグメントを含み、前記ポリペプチドが正鎖ＲＮ
Ａゲノムによりコードされていることにより特徴づけら
れていて、前記ゲノムがポリタンパク質をコードする読
取り枠(ＯＲＦ)を有し、前記ポリタンパク質がＨＧＢＶ
−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループ
から選択されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一
性を有するアミノ酸配列から成り、前記ポリペプチド
は、合成手段によって調製されたポリペプチドを利用し
て産生されることを特徴とする肝炎ＧＢウイルス(ＨＧ
ＢＶ)感染治療用ワクチン。 - 【請求項３１】 少なくとも１つのＨＧＢＶエピトープ
を含む単離された免疫原性ポリペプチドまたはそのフラ
グメントを、免疫応答を生じさせるに十分な量で個体に
投与する段階から成り、前記ポリペプチドが合成手段に
よって調製されたポリペプチドを利用して産生されるこ
とを特徴とする肝炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に対する抗
体の産生方法。 - 【請求項３２】 ＨＧＢＶ配列が正鎖ＲＮＡゲノムによ
りコードされていることにより特徴づけられていて、前
記ゲノムがポリタンパク質をコードする読取り枠(ＯＲ
Ｆ)を有し、前記ポリタンパク質がＨＧＢＶ−Ａ、ＨＧ
ＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグループから選択さ
れたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同一性を有する
アミノ酸配列から成ることを特徴とするＨＧＢＶ配列ま
たはそのフラグメントから成る肝炎ＧＢウイルス(ＨＧ
ＢＶ)のエピトープをコードする合成ペプチド。 - 【請求項３３】 前記ポリペプチドが配列番号５及び１
１から成るグループから選択されることを特徴とする請
求項３２に記載のポリペプチド。 - 【請求項３４】 前記ポリペプチドが配列番号１９、２
０、２１及び２２から成るグループから選択されること
を特徴とする請求項３２に記載のポリペプチド。 - 【請求項３５】 前記ポリペプチドが配列番号２３及び
２４から成るグループから選択されることを特徴とする
請求項３２に記載のポリペプチド。 - 【請求項３６】 前記ポリペプチドが配列番号２である
ことを特徴とする請求項３２に記載の精製ポリペプチ
ド。 - 【請求項３７】 固体支持体に結合させた請求項３２に
記載の合成ポリペプチド。 - 【請求項３８】 ポリペプチドまたはフラグメントがＨ
ＧＢＶの少なくとも１つのエピトープをコードし正鎖Ｒ
ＮＡゲノムによりコードされていることにより特徴づけ
られていて、前記ゲノムがポリタンパク質をコードする
読取り枠(ＯＲＦ)を有し、前記ポリタンパク質がＨＧＢ
Ｖ−Ａ、ＨＧＢＶ−Ｂ及びＨＧＢＶ−Ｃから成るグルー
プから選択されたアミノ酸配列に少なくとも３５％の同
一性を有するアミノ酸配列から成り、前記ポリペプチド
が合成手段によって合成されていることを特徴とする肝
炎ＧＢウイルス(ＨＧＢＶ)に由来のポリペプチドまたは
フラグメントから成る診断試薬。 - 【請求項３９】 前記ポリペプチドが配列番号５及び１
１から成るグループから選択されることを特徴とする請
求項３８に記載の診断試薬。 - 【請求項４０】 前記ポリペプチドが配列番号１９、２
０、２１及び２２から成るグループから選択されること
を特徴とする請求項３８に記載の診断試薬。 - 【請求項４１】 前記ポリペプチドが配列番号２３及び
２４から成るグループから選択されることを特徴とする
請求項３８に記載の診断試薬。 - 【請求項４２】 前記ポリペプチドが配列番号２である
ことを特徴とする請求項３８に記載の診断試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/473,475 US5843450A (en) | 1994-02-14 | 1995-06-07 | Hepatitis GB Virus synthetic peptides and uses thereof |
| US473475 | 1995-06-07 |
Publications (1)
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|---|---|
| JPH0940694A true JPH0940694A (ja) | 1997-02-10 |
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8146106A Pending JPH0940694A (ja) | 1995-06-07 | 1996-06-07 | 肝炎ｇｂウイルスの合成ペプチド及びその使用 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5843450A (ja) |
| EP (1) | EP0747394A2 (ja) |
| JP (1) | JPH0940694A (ja) |
| CA (1) | CA2178538A1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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