JPH09263582A - ピペラジン誘導体及びそれを構成成分とする薬物担体 - Google Patents
ピペラジン誘導体及びそれを構成成分とする薬物担体Info
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- JPH09263582A JPH09263582A JP8076331A JP7633196A JPH09263582A JP H09263582 A JPH09263582 A JP H09263582A JP 8076331 A JP8076331 A JP 8076331A JP 7633196 A JP7633196 A JP 7633196A JP H09263582 A JPH09263582 A JP H09263582A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】効率良くかつ安全に遺伝物質や薬物を細胞や病
患部へ導入できる薬物担体、およびその構成成分を得
る。 【解決手段】下記に示す化合物、およびそれを構成成分
とする薬物担体。 【化１】 式１中、Ｒ1及びＲ2は−ＮＲ3Ｒ4又は−Ｎ+Ｒ5Ｒ6Ｒ7で
あり、Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7は水素、アルキル基
等、ｍ、ｎは１〜１０の整数を示す。
患部へ導入できる薬物担体、およびその構成成分を得
る。 【解決手段】下記に示す化合物、およびそれを構成成分
とする薬物担体。 【化１】 式１中、Ｒ1及びＲ2は−ＮＲ3Ｒ4又は−Ｎ+Ｒ5Ｒ6Ｒ7で
あり、Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7は水素、アルキル基
等、ｍ、ｎは１〜１０の整数を示す。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なピペラジン
誘導体およびそれを構成成分とする薬物担体に関するも
のである。
誘導体およびそれを構成成分とする薬物担体に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】近年、リポソーム、エマルジョン、リピ
ッドマイクロスフェアなどの閉鎖小包を薬物担体として
ドラッグデリバリーシステム（以下、ＤＤＳと称す）に
応用しようとする研究が盛んに行われている。これら閉
鎖小包は一般的にリン脂質あるいはその誘導体、または
ステロールやリン脂質以外の脂質等を基本膜構成成分と
して調製される、しかしながら、これら基本構成成分の
みでは、閉鎖小包同士の凝集、体内における滞留性の低
下などの実際に応用していくうえでの様々な面での困難
を克服することはできなかった。さらに、実際にＤＤＳ
製剤として目的の部位に薬物に到達させることは非常に
困難であった。
ッドマイクロスフェアなどの閉鎖小包を薬物担体として
ドラッグデリバリーシステム（以下、ＤＤＳと称す）に
応用しようとする研究が盛んに行われている。これら閉
鎖小包は一般的にリン脂質あるいはその誘導体、または
ステロールやリン脂質以外の脂質等を基本膜構成成分と
して調製される、しかしながら、これら基本構成成分の
みでは、閉鎖小包同士の凝集、体内における滞留性の低
下などの実際に応用していくうえでの様々な面での困難
を克服することはできなかった。さらに、実際にＤＤＳ
製剤として目的の部位に薬物に到達させることは非常に
困難であった。
【０００３】そこで、薬物封入率の向上および閉鎖小包
の細胞接着性の向上を目的として、ステアリルアミン等
のカチオン化脂質を少量配合することにより、閉鎖小包
体の表面を生理的ｐＨ範囲でカチオン化する試みも行わ
れている。特にＤＮＡを含むカチオン性のリポソームは
ＤＮＡの細胞中への移動、すなわち、トランスフェクシ
ョンを促進することが知られているが、さらに導入効
率、発現率、安全性の高いものが切望されている。しか
し、カチオン化脂質として選択できる脂質は限られてお
り、安全性が高く、高機能を発現する薬物担体用カチオ
ン化脂質の開発が強く望まれている。現在のところ、そ
のようなカチオン化脂質としては、米国特許第４８９７
３５５号、米国特許第５３３４７６１号、日本特許公報
特開平２−２９２２４６号、日本特許公報特開平４−１
０８３９１号が報告されているが十分な効果は得られて
いない。
の細胞接着性の向上を目的として、ステアリルアミン等
のカチオン化脂質を少量配合することにより、閉鎖小包
体の表面を生理的ｐＨ範囲でカチオン化する試みも行わ
れている。特にＤＮＡを含むカチオン性のリポソームは
ＤＮＡの細胞中への移動、すなわち、トランスフェクシ
ョンを促進することが知られているが、さらに導入効
率、発現率、安全性の高いものが切望されている。しか
し、カチオン化脂質として選択できる脂質は限られてお
り、安全性が高く、高機能を発現する薬物担体用カチオ
ン化脂質の開発が強く望まれている。現在のところ、そ
のようなカチオン化脂質としては、米国特許第４８９７
３５５号、米国特許第５３３４７６１号、日本特許公報
特開平２−２９２２４６号、日本特許公報特開平４−１
０８３９１号が報告されているが十分な効果は得られて
いない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って、効率良くかつ
安全にＤＮＡを細胞中へ導入でき、またＤＮＡの細胞中
への移動以外の目的、例えば血管内皮損傷部位、腎炎、
腎ガン、肺炎、肺ガン、肝炎、肝ガン、膵ガン、リンパ
腫などの患部に確実に、効率良くかつ安全に薬物のター
ゲッティングが行えＤＤＳ療法に有効な薬物担体の開発
が強く望まれている。
安全にＤＮＡを細胞中へ導入でき、またＤＮＡの細胞中
への移動以外の目的、例えば血管内皮損傷部位、腎炎、
腎ガン、肺炎、肺ガン、肝炎、肝ガン、膵ガン、リンパ
腫などの患部に確実に、効率良くかつ安全に薬物のター
ゲッティングが行えＤＤＳ療法に有効な薬物担体の開発
が強く望まれている。
【０００５】従って本発明の目的は、核酸、ポリヌクレ
オチド、遺伝子およびその類縁体を細胞へ効率良くしか
も安全にトランスフェクションを行える薬物担体、およ
びそれを形成しうるカチオン化脂質を提供することであ
る。また本発明の目的は薬物、ペプチドおよびタンパク
質を目的の部位に効果的に送達する薬物担体、およびそ
れを形成しうるカチオン化脂質および薬物担体を提供す
ることである。
オチド、遺伝子およびその類縁体を細胞へ効率良くしか
も安全にトランスフェクションを行える薬物担体、およ
びそれを形成しうるカチオン化脂質を提供することであ
る。また本発明の目的は薬物、ペプチドおよびタンパク
質を目的の部位に効果的に送達する薬物担体、およびそ
れを形成しうるカチオン化脂質および薬物担体を提供す
ることである。
【０００６】
（１）下記一般式（１）で示されるピペラジン誘導体。
【０００７】
【化２】
【０００８】式１中、Ｒ1及びＲ2は、同一または異なっ
て、−ＮＲ3Ｒ4又は−Ｎ+Ｒ5Ｒ6Ｒ7であり、Ｒ3及びＲ5
は、同一または異なって、炭素数１０〜４０のアルキル
基またはアルケニル基であり、Ｒ4，Ｒ6，Ｒ7は、同一
または異なって、水素、アルキル基またはアルケニル基
であり、ｍ、ｎは、同一または異なって、１〜１０の整
数を示す。また分子内に不斉炭素が存在する場合、その
化合物は、ラセミ体、光学活性体のいずれでも良い。
て、−ＮＲ3Ｒ4又は−Ｎ+Ｒ5Ｒ6Ｒ7であり、Ｒ3及びＲ5
は、同一または異なって、炭素数１０〜４０のアルキル
基またはアルケニル基であり、Ｒ4，Ｒ6，Ｒ7は、同一
または異なって、水素、アルキル基またはアルケニル基
であり、ｍ、ｎは、同一または異なって、１〜１０の整
数を示す。また分子内に不斉炭素が存在する場合、その
化合物は、ラセミ体、光学活性体のいずれでも良い。
【０００９】（２）上記（１）に記載のピペラジン誘導
体を構成成分とする薬物担体。 （３）前記担体の内部に診断および／または治療するた
めの薬物を封入してなる上記（２）に記載の薬物担体。 （４）前記担体の径が０.０２〜２５０μｍの大きさを
有する微小粒子よりなる上記（２）乃至（３）に記載の
薬物担体。 （５）前記担体が巨大分子、微集合体、微粒子、微小
球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンのうちの
少なくとも一つから構成される上記（２）乃至（４）に
記載の薬物担体。
体を構成成分とする薬物担体。 （３）前記担体の内部に診断および／または治療するた
めの薬物を封入してなる上記（２）に記載の薬物担体。 （４）前記担体の径が０.０２〜２５０μｍの大きさを
有する微小粒子よりなる上記（２）乃至（３）に記載の
薬物担体。 （５）前記担体が巨大分子、微集合体、微粒子、微小
球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンのうちの
少なくとも一つから構成される上記（２）乃至（４）に
記載の薬物担体。
【００１０】（６）前記担体がリン脂質あるいはその誘
導体、および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその
誘導体、および／または安定化剤、および／または酸化
防止剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する
上記（２）乃至（５）に記載の薬物担体。 （７）前記診断および／または治療するための薬物が、
核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体であ
る上記（２）乃至（６）に記載の薬物担体。
導体、および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその
誘導体、および／または安定化剤、および／または酸化
防止剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する
上記（２）乃至（５）に記載の薬物担体。 （７）前記診断および／または治療するための薬物が、
核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体であ
る上記（２）乃至（６）に記載の薬物担体。
【００１１】（８）前記診断および／または治療するた
めの薬物が、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、酵素阻害剤、
抗生物質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン
剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシ
ン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小
板凝集阻害剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、
血管内皮細胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素
阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナー
ゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤ある
いはラジカルスカベンチャーである上記（２）乃至
（６）に記載の薬物担体。
めの薬物が、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、酵素阻害剤、
抗生物質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン
剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシ
ン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小
板凝集阻害剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、
血管内皮細胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素
阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナー
ゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤ある
いはラジカルスカベンチャーである上記（２）乃至
（６）に記載の薬物担体。
【００１２】（９）前記診断および／または治療するた
めの薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体で
ある上記（２）乃至（６）に記載の薬物担体。 （１０）前記診断および／または治療するための薬物
が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘導体
である上記（２）乃至（６）に記載の薬物担体。
めの薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体で
ある上記（２）乃至（６）に記載の薬物担体。 （１０）前記診断および／または治療するための薬物
が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘導体
である上記（２）乃至（６）に記載の薬物担体。
【００１３】（１１）前記診断および／または治療する
ための薬物が、タンパク質またはペプチドである上記
（２）乃至（６）に記載の薬物担体。 （１２）前記診断および／または治療するための薬物
が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核
磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である上記
（２）乃至（６）に記載の薬物担体。
ための薬物が、タンパク質またはペプチドである上記
（２）乃至（６）に記載の薬物担体。 （１２）前記診断および／または治療するための薬物
が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核
磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である上記
（２）乃至（６）に記載の薬物担体。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明の化合物は、いずれも新規
化合物であり、その合成経路の例を下記に示す。但し、
本発明はこれらに限定されるものでない。例えば化合物
（２）に、化合物（３）を反応させることにより化合物
（４）とし、次いで、化合物（４）の酸アミドを還元し
化合物（６）を製造することができる。または、化合物
（２）とカルボニル化合物（５）の還元的アミノ化反応
により化合物（６）を製造することができる。さらに必
要に応じ、化合物（６）をＮ−アルキル化により化合物
（８）および化合物（１０）を製造することができる。
化合物であり、その合成経路の例を下記に示す。但し、
本発明はこれらに限定されるものでない。例えば化合物
（２）に、化合物（３）を反応させることにより化合物
（４）とし、次いで、化合物（４）の酸アミドを還元し
化合物（６）を製造することができる。または、化合物
（２）とカルボニル化合物（５）の還元的アミノ化反応
により化合物（６）を製造することができる。さらに必
要に応じ、化合物（６）をＮ−アルキル化により化合物
（８）および化合物（１０）を製造することができる。
【００１５】
【化３】
【００１６】Ｒ8、Ｒ10、Ｒ11は、アルキル基、アルケ
ニル基であり、Ｒ9は、水素、アルキル基、アルケニル
基であり、ｌ，ｍは、同一または異なって１〜１０の整
数であり、Ｘはハロゲノ基などの脱離基を示す。このよ
うに製造されるピペラジン誘導体（１）は、自体公知の
分離、精製手段（例えば、クロマトグラフィー、再結
晶）などにより単離採取することができる。
ニル基であり、Ｒ9は、水素、アルキル基、アルケニル
基であり、ｌ，ｍは、同一または異なって１〜１０の整
数であり、Ｘはハロゲノ基などの脱離基を示す。このよ
うに製造されるピペラジン誘導体（１）は、自体公知の
分離、精製手段（例えば、クロマトグラフィー、再結
晶）などにより単離採取することができる。
【００１７】本発明の担体は、粒径が０.０２〜２５０
μｍ、とりわけ０.０５〜０.４μｍの大きさが好まし
い。また、構造としては様々な形態が考えられ、限定す
る必要はないが、特にその内部に薬物を高濃度封入する
ことのできる潜在的機能を有する、巨大分子、微集合
体、微粒子、微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマ
ルジョンのうちより少なくとも一つ以上からなることが
最も望ましい。
μｍ、とりわけ０.０５〜０.４μｍの大きさが好まし
い。また、構造としては様々な形態が考えられ、限定す
る必要はないが、特にその内部に薬物を高濃度封入する
ことのできる潜在的機能を有する、巨大分子、微集合
体、微粒子、微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマ
ルジョンのうちより少なくとも一つ以上からなることが
最も望ましい。
【００１８】本発明において、薬物担体の構成成分とし
ては、上記の形態を形成できるものであれば特にその配
合に限定する必要はないが、その安全性や、生体内にお
いて安定性を考慮すると、リン脂質あるいはその誘導
体、リン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、または安
定化剤、酸化防止剤、その他の表面修飾剤の配合が望ま
しい。リン脂質としては、ホスファチジルコリン（＝レ
シチン）、ホスファジルグリセロール、ホスファチジン
酸、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシ
トール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン等の天然
あるいは合成のリン脂質、またはこれらを常法にしたが
って水素添加したもの等を挙げることができる。
ては、上記の形態を形成できるものであれば特にその配
合に限定する必要はないが、その安全性や、生体内にお
いて安定性を考慮すると、リン脂質あるいはその誘導
体、リン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、または安
定化剤、酸化防止剤、その他の表面修飾剤の配合が望ま
しい。リン脂質としては、ホスファチジルコリン（＝レ
シチン）、ホスファジルグリセロール、ホスファチジン
酸、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシ
トール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン等の天然
あるいは合成のリン脂質、またはこれらを常法にしたが
って水素添加したもの等を挙げることができる。
【００１９】安定化剤としては、膜流動性を低下させる
コレステロールなどのステロール、あるいはグリセロー
ル、シュクロースなどの糖類が挙げられる。酸化防止剤
としては、トコフェロール同族体すなわちビタミンＥな
どが挙げられる。トコフェロールには、α、β、γ、δ
の４個の異性体が存在するが本発明においてはいずれも
使用できる。その他の表面修飾剤としては、親水性高分
子やグルクロン酸、シアル酸、デキストランなどの水溶
性多糖類の誘導体が挙げられる。
コレステロールなどのステロール、あるいはグリセロー
ル、シュクロースなどの糖類が挙げられる。酸化防止剤
としては、トコフェロール同族体すなわちビタミンＥな
どが挙げられる。トコフェロールには、α、β、γ、δ
の４個の異性体が存在するが本発明においてはいずれも
使用できる。その他の表面修飾剤としては、親水性高分
子やグルクロン酸、シアル酸、デキストランなどの水溶
性多糖類の誘導体が挙げられる。
【００２０】前記親水性高分子としては、ポリエチレン
グリコール、デキストラン、プルラン、フィコール、ポ
リビニルアルコール、スチレン−無水マレイン酸交互共
重合体、ジビニルエーテル−無水マレイン酸交互共重合
体、合成ポリアミノ酸、アミロース、アミロペクチン、
キトサン、マンナン、シクロデキストリン、ペクチン、
カラギーナンなどが挙げられる。その中でもポリエチレ
ングリコールは血中滞留性を向上させる効果が顕著であ
る。
グリコール、デキストラン、プルラン、フィコール、ポ
リビニルアルコール、スチレン−無水マレイン酸交互共
重合体、ジビニルエーテル−無水マレイン酸交互共重合
体、合成ポリアミノ酸、アミロース、アミロペクチン、
キトサン、マンナン、シクロデキストリン、ペクチン、
カラギーナンなどが挙げられる。その中でもポリエチレ
ングリコールは血中滞留性を向上させる効果が顕著であ
る。
【００２１】また前記親水性高分子は、長鎖脂肪族アル
コール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、
またはグリセリン脂肪酸エステル等の疎水性化合物と結
合させた誘導体を用いることによって、疎水性化合物部
位を薬物担体（例えばリポソーム）の膜へ安定に挿入す
ることができる。そのことにより、薬物担体表面に親水
性高分子を存在させることができる。本発明において具
体的に用いることができる親水性高分子誘導体として
は、ポリエチレングリコール−フォスファチジルエタノ
ールアミン等が挙げられる。
コール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、
またはグリセリン脂肪酸エステル等の疎水性化合物と結
合させた誘導体を用いることによって、疎水性化合物部
位を薬物担体（例えばリポソーム）の膜へ安定に挿入す
ることができる。そのことにより、薬物担体表面に親水
性高分子を存在させることができる。本発明において具
体的に用いることができる親水性高分子誘導体として
は、ポリエチレングリコール−フォスファチジルエタノ
ールアミン等が挙げられる。
【００２２】本発明において、薬物担体に封入する薬剤
としては、診断および／または治療の目的に応じて薬学
的に許容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または
診断用物質を用いることができる。封入する薬剤の性質
としては、基本的にはどの物質においても問題ないが、
担体の表面が陽電荷を持つ特徴から、電気的に中性ある
いはアニオン性である物質の方が高封入率が期待でき
る。
としては、診断および／または治療の目的に応じて薬学
的に許容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または
診断用物質を用いることができる。封入する薬剤の性質
としては、基本的にはどの物質においても問題ないが、
担体の表面が陽電荷を持つ特徴から、電気的に中性ある
いはアニオン性である物質の方が高封入率が期待でき
る。
【００２３】封入する治療するための薬剤の種類として
は、薬物担体の形成を損ねないがぎり特に限定されるも
のではない。具体的には、核酸、ポリヌクレオチド、遺
伝子およびその類縁体、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、抗
生物質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、
アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受
容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝
集阻害剤、ケミカルメデイエーターの遊離阻害剤、血管
内皮細胞の増殖促進または抑制剤、アルドース還元酵素
阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナー
ゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、ラ
ジカルスカベンチャー、タンパク質、ペプチド等が挙げ
られる。
は、薬物担体の形成を損ねないがぎり特に限定されるも
のではない。具体的には、核酸、ポリヌクレオチド、遺
伝子およびその類縁体、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、抗
生物質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、
アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受
容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝
集阻害剤、ケミカルメデイエーターの遊離阻害剤、血管
内皮細胞の増殖促進または抑制剤、アルドース還元酵素
阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナー
ゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、ラ
ジカルスカベンチャー、タンパク質、ペプチド等が挙げ
られる。
【００２４】また、封入する診断するための薬剤の種類
としては、薬物担体の形成を損ねないがぎり特に限定さ
れるものではない。具体的には、Ｘ線造影剤、放射性同
位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等が
挙げられる
としては、薬物担体の形成を損ねないがぎり特に限定さ
れるものではない。具体的には、Ｘ線造影剤、放射性同
位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等が
挙げられる
【００２５】本発明の薬物担体は常法によって容易に得
ることができるが、その一例を以下に示す。フラスコ内
に一般式（１）で示されるピペラジン誘導体およびリン
脂質等の他の担体構成成分を、クロロホルム等の有機溶
媒により混合し、有機溶媒を留去後真空乾燥することに
よりフラスコ内壁に薄膜を形成させる。次に、当該フラ
スコ内に薬物を加え、激しく攪拌することにより、リポ
ソーム分散液を得る。得られたリポソーム分散液を遠心
分離し、上清をデカンテーションし封入されなかった薬
物を除去することにより、薬物担体を分散液として得る
ことができる。また、上記の各構成成分を混合し、高圧
吐出型乳化機により高圧吐出させることにより得ること
もできる。
ることができるが、その一例を以下に示す。フラスコ内
に一般式（１）で示されるピペラジン誘導体およびリン
脂質等の他の担体構成成分を、クロロホルム等の有機溶
媒により混合し、有機溶媒を留去後真空乾燥することに
よりフラスコ内壁に薄膜を形成させる。次に、当該フラ
スコ内に薬物を加え、激しく攪拌することにより、リポ
ソーム分散液を得る。得られたリポソーム分散液を遠心
分離し、上清をデカンテーションし封入されなかった薬
物を除去することにより、薬物担体を分散液として得る
ことができる。また、上記の各構成成分を混合し、高圧
吐出型乳化機により高圧吐出させることにより得ること
もできる。
【００２６】
【実施例】次に実施例、試験例を挙げて本発明をさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例、試験例に
限定されるべきものではない。
詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例、試験例に
限定されるべきものではない。
【００２７】（実施例１） １,４−ビス（３−（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピ
ル）ピペラジンの合成 （１−１）１,４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラ
ジン１.０ｇとトリエチルアミン１.２１ｇの塩化メチレ
ン（５０ml）溶液に、氷冷下、パルミチン酸クロライド
３.０２ｇを加え、室温で６時間攪拌した。反応生成物
を濾取し、１,４−ビス（３−（ヘキサデカノイルアミ
ノ）プロピル）ピペラジン２.６５ｇを得た（収率７８
％、無色結晶）。
ル）ピペラジンの合成 （１−１）１,４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラ
ジン１.０ｇとトリエチルアミン１.２１ｇの塩化メチレ
ン（５０ml）溶液に、氷冷下、パルミチン酸クロライド
３.０２ｇを加え、室温で６時間攪拌した。反応生成物
を濾取し、１,４−ビス（３−（ヘキサデカノイルアミ
ノ）プロピル）ピペラジン２.６５ｇを得た（収率７８
％、無色結晶）。
【００２８】（１−２）水素化リチウムアルミニウム２
８０mgのテトラヒドロフラン（１０ml）溶液に１,４−
ビス（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピル）ピペ
ラジン１.０ｇのテトラヒドロフラン（１５ml）溶液を
加え、８時間還流攪拌した。希酸を加えクロロホルムで
抽出し、有機層を飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、１,４−ビス（３−
（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペラジン８３
０mgを得た（収率８６％、無色結晶、融点８２−８３
℃）。このものの機器分析データは、下記の式（１１）
の構造を支持する。
８０mgのテトラヒドロフラン（１０ml）溶液に１,４−
ビス（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピル）ピペ
ラジン１.０ｇのテトラヒドロフラン（１５ml）溶液を
加え、８時間還流攪拌した。希酸を加えクロロホルムで
抽出し、有機層を飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、１,４−ビス（３−
（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペラジン８３
０mgを得た（収率８６％、無色結晶、融点８２−８３
℃）。このものの機器分析データは、下記の式（１１）
の構造を支持する。
【００２９】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ppm）：２.
８０−２.３６（８Ｈ,ｍ），２.７３（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.
５Hz），２.６４（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.５Hz），２.４４
（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.５Hz），１.７４（４Ｈ,quintet,Ｊ
＝７.５Hz），１.５３（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.５Hz），１.１
８−１.１０（５６Ｈ,ｍ），０.８８（３Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.
５Hz） ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）：６５０
８０−２.３６（８Ｈ,ｍ），２.７３（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.
５Hz），２.６４（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.５Hz），２.４４
（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.５Hz），１.７４（４Ｈ,quintet,Ｊ
＝７.５Hz），１.５３（４Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.５Hz），１.１
８−１.１０（５６Ｈ,ｍ），０.８８（３Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.
５Hz） ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）：６５０
【００３０】
【化４】
【００３１】（実施例２）実施例１で合成した１,４−
ビス（３−（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペ
ラジンを膜構成成分として含有するリポソームを下記の
通りに調製した。実施例１で合成した１,４−ビス（３
−（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペラジンを
３μＭ、ジパルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰ
ＰＣ）を２１μＭ、コレステロールを６μＭを、容量１
０mlのナス型フラスコに秤りとり、１mlのクロロホルム
にて完全に溶解する。エバポレータによりクロロホルム
を減圧留去しフラスコ内壁に脂質薄膜を形成する。次い
で０.５μＭのカルセインを含む１０mMＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ緩衝液１mlをフラスコに加え、激しく浸透攪拌するこ
とにより、リポソーム（ＭＬＶ）分散液を得た。
ビス（３−（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペ
ラジンを膜構成成分として含有するリポソームを下記の
通りに調製した。実施例１で合成した１,４−ビス（３
−（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペラジンを
３μＭ、ジパルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰ
ＰＣ）を２１μＭ、コレステロールを６μＭを、容量１
０mlのナス型フラスコに秤りとり、１mlのクロロホルム
にて完全に溶解する。エバポレータによりクロロホルム
を減圧留去しフラスコ内壁に脂質薄膜を形成する。次い
で０.５μＭのカルセインを含む１０mMＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ緩衝液１mlをフラスコに加え、激しく浸透攪拌するこ
とにより、リポソーム（ＭＬＶ）分散液を得た。
【００３２】（試験例１） カルセインの封入率の測定 カルセインのリポソームへの封入率は、次のように求め
た。５０倍に希釈したリポソーム懸濁液４０μlを２.０
mlの１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液に添加し、蛍光強
度を測定する（励起波長４９０nm,蛍光波長５３０n
m）。この時の蛍光強度をＦｔとする。つぎに１０ｍＭ
ＣｏＣｌ2水溶液を２０μl添加しリポソームに封入され
なかったカルセインを消光させ、リポソームの内部に封
入されたカルセインの蛍光を測定する。この時の蛍光強
度をＦｉｎとする。さらに２０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０溶液を２０μl添加することにより、リポソームを破
壊し、すべてのカルセインをＣｏ2+と結合させ消光させ
る。この時の蛍光強度を、Ｆｑとする。リポソームの保
持効率は以下の式にて計算される。
た。５０倍に希釈したリポソーム懸濁液４０μlを２.０
mlの１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液に添加し、蛍光強
度を測定する（励起波長４９０nm,蛍光波長５３０n
m）。この時の蛍光強度をＦｔとする。つぎに１０ｍＭ
ＣｏＣｌ2水溶液を２０μl添加しリポソームに封入され
なかったカルセインを消光させ、リポソームの内部に封
入されたカルセインの蛍光を測定する。この時の蛍光強
度をＦｉｎとする。さらに２０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０溶液を２０μl添加することにより、リポソームを破
壊し、すべてのカルセインをＣｏ2+と結合させ消光させ
る。この時の蛍光強度を、Ｆｑとする。リポソームの保
持効率は以下の式にて計算される。
【００３３】保持効率（％）＝（Ｆｉｎ−Ｆｑ×ｒ）／
（Ｆｔ−Ｆｑ×ｒ）×１００
（Ｆｔ−Ｆｑ×ｒ）×１００
【００３４】式中のｒは、リポソーム懸濁液および薬物
の添加に伴う反応液の体積変化を補正した値で本実験で
はｒ＝（２.０＋０.０４＋０.０２＋０.０２）／２.０
＝１.０４である。結果を表１に示す。
の添加に伴う反応液の体積変化を補正した値で本実験で
はｒ＝（２.０＋０.０４＋０.０２＋０.０２）／２.０
＝１.０４である。結果を表１に示す。
【００３５】
【表１】
【００３６】（実施例３）実施例１で合成した１,４−
ビス（３−（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペ
ラジンを膜構成成分として含有するリポソームを下記の
通りに調製した。１,４−ビス（３−（Ｎ−ヘキサデシ
ルアミノ）プロピル）ピペラジンを１０μＭ、ジラウロ
イルホスファチジルコリン（DLPC）を２０μＭ、ジオレ
オイルホスファチジルエタノールアミン（DOPE）を２０
μＭ秤りとり、１mlのクロロホルム溶液Ａとする。
ビス（３−（Ｎ−ヘキサデシルアミノ）プロピル）ピペ
ラジンを膜構成成分として含有するリポソームを下記の
通りに調製した。１,４−ビス（３−（Ｎ−ヘキサデシ
ルアミノ）プロピル）ピペラジンを１０μＭ、ジラウロ
イルホスファチジルコリン（DLPC）を２０μＭ、ジオレ
オイルホスファチジルエタノールアミン（DOPE）を２０
μＭ秤りとり、１mlのクロロホルム溶液Ａとする。
【００３７】クロロホルム溶液Ａの２０μlを容量１０m
lのナス型フラスコに取りさらに１mlのクロロホルムを
加えた。エバポレータによりクロロホルムを減圧留去し
フラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、β-galac
tosodaseの遺伝子を組み込んだプラスミドｐｃＤＮＡ／
Ａｍｐ（Invitrogen社）２０μｇを溶解した水溶液１ml
をフラスコ内に加え、激しく浸透攪拌することによりDN
A封入リポソームを得た。
lのナス型フラスコに取りさらに１mlのクロロホルムを
加えた。エバポレータによりクロロホルムを減圧留去し
フラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、β-galac
tosodaseの遺伝子を組み込んだプラスミドｐｃＤＮＡ／
Ａｍｐ（Invitrogen社）２０μｇを溶解した水溶液１ml
をフラスコ内に加え、激しく浸透攪拌することによりDN
A封入リポソームを得た。
【００３８】（試験例２） 細胞の調製とトランスフェクション 細胞：大日本製薬株式会社より購入した、Ｃｏｓ−１細
胞（ATCC No. CRL-1650）を１０％牛胎児血清（FCS）を
含むIscove's modified Dulbecco's medium（IMDM）を
用いて５％ＣＯ2，９５％Ｏ2，３７℃のインキュベータ
中で継代培養した。 トランスフェクション：１０％ＦＣＳ ＩＭＤＭ培地
（１ml）を添加した、６穴マルチウェルプレートに約２
×１０4のＣｏｓ−１細胞を加え細胞培養を行った。約
２４時間培養後ＦＣＳを含まない新鮮培地と交換し、
０.２μｇのＤＮＡを含むリポソーム懸濁液を加える。
１６時間培養後、１０％ＦＣＳ ＩＭＤＭ培地にて培地
交換し、さらに４８時間培養した。細胞を、ホルムアル
デヒドで固定し、β-galactosidaseの基質である、5-br
omo-4chloro-3-indolyl-β-galactopyranoside（X-ga
l）を加え、β-galactosidaseを発現した細胞を同定し
た。発色した細胞の全体に対する割合は、画像処理によ
り測定した。結果を表２に示す。
胞（ATCC No. CRL-1650）を１０％牛胎児血清（FCS）を
含むIscove's modified Dulbecco's medium（IMDM）を
用いて５％ＣＯ2，９５％Ｏ2，３７℃のインキュベータ
中で継代培養した。 トランスフェクション：１０％ＦＣＳ ＩＭＤＭ培地
（１ml）を添加した、６穴マルチウェルプレートに約２
×１０4のＣｏｓ−１細胞を加え細胞培養を行った。約
２４時間培養後ＦＣＳを含まない新鮮培地と交換し、
０.２μｇのＤＮＡを含むリポソーム懸濁液を加える。
１６時間培養後、１０％ＦＣＳ ＩＭＤＭ培地にて培地
交換し、さらに４８時間培養した。細胞を、ホルムアル
デヒドで固定し、β-galactosidaseの基質である、5-br
omo-4chloro-3-indolyl-β-galactopyranoside（X-ga
l）を加え、β-galactosidaseを発現した細胞を同定し
た。発色した細胞の全体に対する割合は、画像処理によ
り測定した。結果を表２に示す。
【００３９】
【表２】
【００４０】（急性毒性）ＩＣＲ系雄性マウス（５週
齢）を用いて経口および静脈内投与により急性毒性試験
を行った結果、本発明の化合物のＬＤ50はいずれも３２
０mg/kg以上であり有効性に比べて高い安全性が確認さ
れた。
齢）を用いて経口および静脈内投与により急性毒性試験
を行った結果、本発明の化合物のＬＤ50はいずれも３２
０mg/kg以上であり有効性に比べて高い安全性が確認さ
れた。
【００４１】
【発明の効果】上述した通り、本発明により新規ピペラ
ジン誘導体が供給される。本発明のピペラジン誘導体を
構成成分とする薬物担体は、試験例に示されるように、
従来の薬物担体に比べ細胞への導入効率が高いことが明
らかとなった。このような特徴から、薬学的に許容し得
る薬理的活性物質、生理的活性物質または診断用物質を
封入させた本発明の薬物担体は、治療および診断という
目的に対して非常に効果的である。
ジン誘導体が供給される。本発明のピペラジン誘導体を
構成成分とする薬物担体は、試験例に示されるように、
従来の薬物担体に比べ細胞への導入効率が高いことが明
らかとなった。このような特徴から、薬学的に許容し得
る薬理的活性物質、生理的活性物質または診断用物質を
封入させた本発明の薬物担体は、治療および診断という
目的に対して非常に効果的である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 9/50 Ａ６１Ｋ 31/70 31/70 31/71 ＡＤＺ 31/71 ＡＤＺ 31/715 31/715 45/00 ＡＢＢ 38/00 ＡＢＣ 38/43 ＡＢＥ 38/55 ＡＢＮ 51/00 ＡＣＢ 45/00 ＡＢＢ ＡＤＮ ＡＢＣ ＡＤＳ ＡＢＥ ＡＤＵ ＡＢＮ ＡＤＹ ＡＣＢ ＡＥＤ ＡＤＮ ＡＥＥ ＡＤＳ ＡＥＭ ＡＤＵ ＡＥＮ ＡＤＹ ＡＥＰ ＡＥＤ ＡＥＱ ＡＥＥ 47/22 Ｄ ＡＥＭ Ｃ ＡＥＮ 48/00 ＡＥＰ 49/00 Ａ ＡＥＱ Ｃ 47/22 49/04 Ａ Ａ６１Ｋ 9/14 Ｇ 48/00 37/02 49/00 37/48 37/64 49/04 43/00 //(Ａ６１Ｋ 47/22 49/02 Ａ 47:24）
Claims (12)
- 【請求項１】下記一般式（１）で示されるピペラジン誘
導体。 【化１】 式１中、Ｒ1及びＲ2は、同一または異なって、−ＮＲ3
Ｒ4又は−Ｎ+Ｒ5Ｒ6Ｒ7であり、Ｒ3及びＲ5は、同一ま
たは異なって、炭素数１０〜４０のアルキル基またはア
ルケニル基であり、Ｒ4，Ｒ6，Ｒ7は、同一または異な
って、水素、アルキル基またはアルケニル基であり、
ｍ、ｎは、同一または異なって、１〜１０の整数を示
す。また分子内に不斉炭素が存在する場合、その化合物
は、ラセミ体、光学活性体のいずれでも良い。 - 【請求項２】請求項１に記載のピペラジン誘導体を構成
成分とする薬物担体。 - 【請求項３】前記担体の内部に診断および／または治療
するための薬物を封入してなる請求項２に記載の薬物担
体。 - 【請求項４】前記担体の径が０.０２〜２５０μｍの大
きさを有する微小粒子よりなる請求項２乃至請求項３に
記載の薬物担体。 - 【請求項５】前記担体が巨大分子、微集合体、微粒子、
微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンのう
ちの少なくとも一つから構成される請求項２乃至請求項
４に記載の薬物担体。 - 【請求項６】前記担体がリン脂質あるいはその誘導体、
および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその誘導
体、および／または安定化剤、および／または酸化防止
剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する請求
項２乃至請求項５に記載の薬物担体。 - 【請求項７】前記診断および／または治療するための薬
物が、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁
体である請求項２乃至請求項６に記載の薬物担体。 - 【請求項８】前記診断および／または治療するための薬
物が、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、酵素阻害剤、抗生物
質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、アン
ジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体
拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻
害剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮
細胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、
メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害
剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤あるいはラ
ジカルスカベンチャーである請求項２乃至請求項６に記
載の薬物担体。 - 【請求項９】前記診断および／または治療するための薬
物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体である請
求項２乃至請求項６に記載の薬物担体。 - 【請求項１０】前記診断および／または治療するための
薬物が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘
導体である請求項２乃至請求項６に記載の薬物担体。 - 【請求項１１】前記診断および／または治療するための
薬物が、タンパク質またはペプチドである請求項２乃至
６に記載の薬物担体。 - 【請求項１２】前記診断および／または治療するための
薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断
薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である
請求項２乃至請求項６に記載の薬物担体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8076331A JPH09263582A (ja) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | ピペラジン誘導体及びそれを構成成分とする薬物担体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8076331A JPH09263582A (ja) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | ピペラジン誘導体及びそれを構成成分とする薬物担体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09263582A true JPH09263582A (ja) | 1997-10-07 |
Family
ID=13602380
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8076331A Pending JPH09263582A (ja) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | ピペラジン誘導体及びそれを構成成分とする薬物担体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09263582A (ja) |
-
1996
- 1996-03-29 JP JP8076331A patent/JPH09263582A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061205 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070403 |