JPH09196910A - 血漿または血清試料の調製方法 - Google Patents
血漿または血清試料の調製方法Info
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- JPH09196910A JPH09196910A JP8005601A JP560196A JPH09196910A JP H09196910 A JPH09196910 A JP H09196910A JP 8005601 A JP8005601 A JP 8005601A JP 560196 A JP560196 A JP 560196A JP H09196910 A JPH09196910 A JP H09196910A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 高ヘマトクリット血液であっても溶血を
起こさせることなく高い分離率で血漿を容易に取得しう
る手段を提供する。 【解決手段】 全血に無機塩またはアミノ酸もしくはそ
の塩の水溶液を、全血の体積の２０％以下、かつ、該無
機塩またはアミノ酸もしくはその塩の濃度が全血１ｍｌ
あたり１０〜２００μｍｏｌの濃度となるように混合
し、次いで血球成分を遠心分離して回収することを特徴
とする、全血から血漿または血清試料を調製する方法。
起こさせることなく高い分離率で血漿を容易に取得しう
る手段を提供する。 【解決手段】 全血に無機塩またはアミノ酸もしくはそ
の塩の水溶液を、全血の体積の２０％以下、かつ、該無
機塩またはアミノ酸もしくはその塩の濃度が全血１ｍｌ
あたり１０〜２００μｍｏｌの濃度となるように混合
し、次いで血球成分を遠心分離して回収することを特徴
とする、全血から血漿または血清試料を調製する方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は全血から血漿または
血清試料を調製する方法に関し、特にヘマトクリット値
の高い全血から血球を破壊させることなく血漿や血清試
料を高い分離率で取得しうる方法に関するものである。
血清試料を調製する方法に関し、特にヘマトクリット値
の高い全血から血球を破壊させることなく血漿や血清試
料を高い分離率で取得しうる方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血液中の構成成分例えば代謝産物、蛋白
質、脂質、電解室、酵素、抗原、抗体などの種類や濃度
の測定は通常全血を遠心分離して得られる血漿または血
清を検体として行われている。
質、脂質、電解室、酵素、抗原、抗体などの種類や濃度
の測定は通常全血を遠心分離して得られる血漿または血
清を検体として行われている。
【０００３】遠心分離は既に確立された技術ではある
が、検体が微量のときには回収量が少なく、特に小児や
小動物を被検者とする場合には必要量の検体を確保する
ことが難しいという問題がある。また、検体のＨｃｔが
高い時にも分離が困難であった。
が、検体が微量のときには回収量が少なく、特に小児や
小動物を被検者とする場合には必要量の検体を確保する
ことが難しいという問題がある。また、検体のＨｃｔが
高い時にも分離が困難であった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、全血
から血漿を分離する際の大きな障害となる高ヘマトクリ
ット検体、具体的には新生児や、脱水状態にある患者か
らの全血で記録されることのある、ヘマトクリット値が
６０〜７０％の範囲の全血でも、確実に血漿分離ができ
る手段を提供することにある。
から血漿を分離する際の大きな障害となる高ヘマトクリ
ット検体、具体的には新生児や、脱水状態にある患者か
らの全血で記録されることのある、ヘマトクリット値が
６０〜７０％の範囲の全血でも、確実に血漿分離ができ
る手段を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】全血からの血漿分離技術
の開発における問題点は、以下の３点に要約される。 （１） 血漿分離の過程で赤血球の破壊（溶血）を起こ
させないこと。赤血球の破壊により、血球内成分、特に
Ｈｂ、ＧＯＴ、ＬＤＨ、Ｋなど血漿中よりも血球内の存
在量が血漿中よりも著しく多い成分の血漿中への放出が
起こって誤差の原因となり、また、Ｈｂの血漿中への放
出により光学的に測光の妨害となる。 （２） ヘマトクリット値が高く（５０％以上）、赤血
球の分離が難しく、且つ、より溶血を起こし易い検体に
ついても確実に血漿分離ができること。ヘマトクリット
が高くなると「血液の粘性が」急激に増加する結果分離
が著しく難しくなる。 （３） 血漿分離の過程で組成の変化が起こらないこ
と。
の開発における問題点は、以下の３点に要約される。 （１） 血漿分離の過程で赤血球の破壊（溶血）を起こ
させないこと。赤血球の破壊により、血球内成分、特に
Ｈｂ、ＧＯＴ、ＬＤＨ、Ｋなど血漿中よりも血球内の存
在量が血漿中よりも著しく多い成分の血漿中への放出が
起こって誤差の原因となり、また、Ｈｂの血漿中への放
出により光学的に測光の妨害となる。 （２） ヘマトクリット値が高く（５０％以上）、赤血
球の分離が難しく、且つ、より溶血を起こし易い検体に
ついても確実に血漿分離ができること。ヘマトクリット
が高くなると「血液の粘性が」急激に増加する結果分離
が著しく難しくなる。 （３） 血漿分離の過程で組成の変化が起こらないこ
と。
【０００６】本発明者は、上記課題を解決して、高ヘマ
トクリット値の全血検体であっても溶血を起こさせるこ
となく高い分離率で血漿を分離取得しうる手段を開発す
るべく鋭意検討の結果、全血検体にヘマトクリット値を
低下させることのできる薬剤を特定濃度範囲内になるよ
うに添加してから血漿を分離することによりこの目的を
達成することができた。
トクリット値の全血検体であっても溶血を起こさせるこ
となく高い分離率で血漿を分離取得しうる手段を開発す
るべく鋭意検討の結果、全血検体にヘマトクリット値を
低下させることのできる薬剤を特定濃度範囲内になるよ
うに添加してから血漿を分離することによりこの目的を
達成することができた。
【０００７】すなわち、本発明は、全血に無機塩または
アミノ酸もしくはその塩の水溶液を全血の体積の２０％
以下、かつ、該無機塩またはアミノ酸もしくはその塩の
濃度が全血１ｍｌあたり１０〜２００μｍｏｌの濃度と
なるように混合し、次いで遠心分離法により血球成分を
分離することを特徴とする、全血から血漿または血清試
料の調製方法に関するものである。
アミノ酸もしくはその塩の水溶液を全血の体積の２０％
以下、かつ、該無機塩またはアミノ酸もしくはその塩の
濃度が全血１ｍｌあたり１０〜２００μｍｏｌの濃度と
なるように混合し、次いで遠心分離法により血球成分を
分離することを特徴とする、全血から血漿または血清試
料の調製方法に関するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の方法が適用される全血検
体は、ヘパリン、ＮａＦ、ＥＤＴＡ、モノヨード酢酸な
どの抗凝固剤や解糖阻止剤などの有無を問わない。本発
明の方法が威力を発揮するのは高ヘマトクリット血液で
あり、ヘマトクリット値が５０〜７０％特に、５５〜７
０％のものである。
体は、ヘパリン、ＮａＦ、ＥＤＴＡ、モノヨード酢酸な
どの抗凝固剤や解糖阻止剤などの有無を問わない。本発
明の方法が威力を発揮するのは高ヘマトクリット血液で
あり、ヘマトクリット値が５０〜７０％特に、５５〜７
０％のものである。
【０００９】無機塩やアミノ酸やその塩は全血における
血球と血漿の分離を促進してヘマトクリットを低下させ
る作用を有するもの（以下、「ＨＬ剤」と称することが
ある。）である。
血球と血漿の分離を促進してヘマトクリットを低下させ
る作用を有するもの（以下、「ＨＬ剤」と称することが
ある。）である。
【００１０】無機塩、アミノ酸およびその塩であるＨＬ
剤はいずれも水溶性であって溶解度が２０℃で１００ｍ
Ｍ以上、好ましくは１Ｍ以上、さらに好ましくは３Ｍ以
上のものが適当である。無機塩の例としては１価または
２価のアルカリ金属またはアルカリ土類金属とハロゲン
元素、ＮＯ3、ＳＯ4またはＣＯ3との組合せからなるも
のを挙げることができる。代表例には、ＮａＣｌ、Ｃｓ
Ｃｌ2、Ｌｉ2ＳＯ4、ＣａＣｌ2、Ｒｂ2ＳＯ4、Ｃｓ2Ｓ
Ｏ4などがある。アミノ酸の例としては天然アミノ酸を
挙げることができる。代表例にはＧｌｙ、Ａｌａ、Ａｓ
ｐ、Ｇｌｕ、グリシンアミドアスパラギンなどがある。
無機塩やアミノ酸は水溶液のｐＨが５〜８、好ましくは
６〜７．５になるようにし、そのため、無機塩やアミノ
酸塩はＮａＨＣＯ3のように水素塩であってもよい。ま
た、アミノ酸もＡｓｐやＧｌｕのような酸性アミノ酸は
アルカリ金属やアルカリ土類金属等の塩とし、Ｌｙｓや
Ａｒｇのような塩基性アミノ酸の場合にはハロゲン元
素、ＮＯ3、ＳＯ4、ＣＯ3等の塩とすることができる。
剤はいずれも水溶性であって溶解度が２０℃で１００ｍ
Ｍ以上、好ましくは１Ｍ以上、さらに好ましくは３Ｍ以
上のものが適当である。無機塩の例としては１価または
２価のアルカリ金属またはアルカリ土類金属とハロゲン
元素、ＮＯ3、ＳＯ4またはＣＯ3との組合せからなるも
のを挙げることができる。代表例には、ＮａＣｌ、Ｃｓ
Ｃｌ2、Ｌｉ2ＳＯ4、ＣａＣｌ2、Ｒｂ2ＳＯ4、Ｃｓ2Ｓ
Ｏ4などがある。アミノ酸の例としては天然アミノ酸を
挙げることができる。代表例にはＧｌｙ、Ａｌａ、Ａｓ
ｐ、Ｇｌｕ、グリシンアミドアスパラギンなどがある。
無機塩やアミノ酸は水溶液のｐＨが５〜８、好ましくは
６〜７．５になるようにし、そのため、無機塩やアミノ
酸塩はＮａＨＣＯ3のように水素塩であってもよい。ま
た、アミノ酸もＡｓｐやＧｌｕのような酸性アミノ酸は
アルカリ金属やアルカリ土類金属等の塩とし、Ｌｙｓや
Ａｒｇのような塩基性アミノ酸の場合にはハロゲン元
素、ＮＯ3、ＳＯ4、ＣＯ3等の塩とすることができる。
【００１１】ＨＬ剤の選択に当たっては、測定目的に対
する適合性、すなわち血漿中のどのような成分を測定す
るかにより、化合物を検討する必要がある。例えば、血
中のナトリウムやクロルを測定するしようとする場合に
ＮａＣｌを使用すれば、測定値は大幅にずれてしまう
し、無機燐を測定しようとする場合に燐酸塩は使えな
い。また、測定に使用する試薬の反応性に影響を与える
化合物は使えない。例えば、カルシウムの測定の干渉物
質となるマグネシウムや鉄、銅、バリウム、亜鉛を含む
化合物は、カルシウムを測定しようとする場合には使え
ない。
する適合性、すなわち血漿中のどのような成分を測定す
るかにより、化合物を検討する必要がある。例えば、血
中のナトリウムやクロルを測定するしようとする場合に
ＮａＣｌを使用すれば、測定値は大幅にずれてしまう
し、無機燐を測定しようとする場合に燐酸塩は使えな
い。また、測定に使用する試薬の反応性に影響を与える
化合物は使えない。例えば、カルシウムの測定の干渉物
質となるマグネシウムや鉄、銅、バリウム、亜鉛を含む
化合物は、カルシウムを測定しようとする場合には使え
ない。
【００１２】上記のＨＬ剤は水溶液として使用される。
ＨＬ剤の濃度は０．１〜５Ｍ程度、好ましくは０.５〜
３Ｍ程度、さらに好ましくは１〜２.５Ｍ程度が適当で
ある。
ＨＬ剤の濃度は０．１〜５Ｍ程度、好ましくは０.５〜
３Ｍ程度、さらに好ましくは１〜２.５Ｍ程度が適当で
ある。
【００１３】ＨＬ剤水溶液にはＨＬ剤以外の成分も加え
ておくことができる。例えば、ＨＬ剤の乾燥防止を目的
としてグリセリン、エチレングリコール、ポリエチレン
グリコール等を加えても良い。また、ｐＨを調節する目
的で緩衝剤を加えても良い。さらに、分析の目的に応
じ、濾過血漿中での被検物質の分離を容易にするために
各種の化合物を加えることができる。ＨＤＬコレステロ
ール測定の分画試薬であるデキストランやリンタングス
テン酸等、ＬＤＬコレステロールとの選択的な結合試薬
がその例である。このような成分の他の例として、各種
抗原や抗体（修飾を加えたものを含む）など血漿中の特
定成分と反応性を有する化合物がある。
ておくことができる。例えば、ＨＬ剤の乾燥防止を目的
としてグリセリン、エチレングリコール、ポリエチレン
グリコール等を加えても良い。また、ｐＨを調節する目
的で緩衝剤を加えても良い。さらに、分析の目的に応
じ、濾過血漿中での被検物質の分離を容易にするために
各種の化合物を加えることができる。ＨＤＬコレステロ
ール測定の分画試薬であるデキストランやリンタングス
テン酸等、ＬＤＬコレステロールとの選択的な結合試薬
がその例である。このような成分の他の例として、各種
抗原や抗体（修飾を加えたものを含む）など血漿中の特
定成分と反応性を有する化合物がある。
【００１４】ＨＬ剤を全血に加えると赤血球膜の柔軟性
が失われて変形しにくくなる。通常、全血を濾過しよう
とすると赤血球の見かけの大きさより十分に小さな空
隙、例えば直径１〜２μｍのキャピラリーであっても通
り抜けてしまうことが知られているが、ＨＬ剤を添加す
ることにより赤血球の強度の変形はなくなるので、濾過
が非常にし易くなる。
が失われて変形しにくくなる。通常、全血を濾過しよう
とすると赤血球の見かけの大きさより十分に小さな空
隙、例えば直径１〜２μｍのキャピラリーであっても通
り抜けてしまうことが知られているが、ＨＬ剤を添加す
ることにより赤血球の強度の変形はなくなるので、濾過
が非常にし易くなる。
【００１５】ＨＬ剤によるヘマトクリット低下効果は、
ＨＬ剤を添加する全血中の血漿体積に対するＨＬ剤のモ
ル濃度に比例する。一方、ＨＬ剤の濃度が２００ｍｍｏ
ｌ／ｌ以上になると血球の破壊（溶血）が起こり易くな
り赤血球の主成分であるヘモグロビンが血漿中に溶出し
てくる。そこで、ＨＬ剤の全血への添加量はＨＬ剤の濃
度が全血１ｍｌあたり１０〜２００μｍｏｌ程度、好ま
しくは１０〜１００μｍｏｌ程度、更に好ましくは２０
〜６０μｍｏｌ程度となるようにする。ＨＬ剤水溶液の
添加量としては厳密な制限はないが、ＨＬ剤の添加量を
あまり大きくすると全血の希釈率が大きくなりずきて、
秤量誤差を大きくするので好ましくない。また、希釈倍
率が高くなると測定感度との関係で、測定時の精度や正
確度が問題となる。そこで、ＨＬ剤水溶液の添加量は容
積比で全血の２０％以下、好ましくは１０％以下、さら
に好ましくは５％以下とする。添加量の下限はＨＬ剤水
溶液におけるＨＬ剤の溶解度等に応じて決まり、通常１
％以上である。このように、ＨＬ剤を少量添加するだけ
で濾過がしやすくなるので、測定法の感度や正確度への
影響が少ない。そこで、ＨＬ剤水溶液の添加量は容積比
で全血の２０％以下、好ましくは１０％以下、さらに好
ましくは５％以下とする。添加量の下限はＨＬ剤水溶液
におけるＨＬ剤の溶解度等に応じて定まり、通常１％以
上である。
ＨＬ剤を添加する全血中の血漿体積に対するＨＬ剤のモ
ル濃度に比例する。一方、ＨＬ剤の濃度が２００ｍｍｏ
ｌ／ｌ以上になると血球の破壊（溶血）が起こり易くな
り赤血球の主成分であるヘモグロビンが血漿中に溶出し
てくる。そこで、ＨＬ剤の全血への添加量はＨＬ剤の濃
度が全血１ｍｌあたり１０〜２００μｍｏｌ程度、好ま
しくは１０〜１００μｍｏｌ程度、更に好ましくは２０
〜６０μｍｏｌ程度となるようにする。ＨＬ剤水溶液の
添加量としては厳密な制限はないが、ＨＬ剤の添加量を
あまり大きくすると全血の希釈率が大きくなりずきて、
秤量誤差を大きくするので好ましくない。また、希釈倍
率が高くなると測定感度との関係で、測定時の精度や正
確度が問題となる。そこで、ＨＬ剤水溶液の添加量は容
積比で全血の２０％以下、好ましくは１０％以下、さら
に好ましくは５％以下とする。添加量の下限はＨＬ剤水
溶液におけるＨＬ剤の溶解度等に応じて決まり、通常１
％以上である。このように、ＨＬ剤を少量添加するだけ
で濾過がしやすくなるので、測定法の感度や正確度への
影響が少ない。そこで、ＨＬ剤水溶液の添加量は容積比
で全血の２０％以下、好ましくは１０％以下、さらに好
ましくは５％以下とする。添加量の下限はＨＬ剤水溶液
におけるＨＬ剤の溶解度等に応じて定まり、通常１％以
上である。
【００１６】ＨＬ剤を加えると、ＨＬ剤は血漿に溶解し
て血漿の浸透圧を高める。ＨＬ剤の添加により血球内と
血漿中での浸透圧の間にギャップが生ずる。この血球内
外の浸透圧差を緩和させるような力が働く。すなわち、
血球内の水を血漿中に排出し、血球内の浸透圧（すなわ
ち溶質濃度）を高くし、血漿の浸透圧を下げて血球内外
の圧力差をなくすような力が働く。その結果、血球の体
積は減少し、血漿の体積が増加する。その結果として、
ヘマトクリットが低下する。
て血漿の浸透圧を高める。ＨＬ剤の添加により血球内と
血漿中での浸透圧の間にギャップが生ずる。この血球内
外の浸透圧差を緩和させるような力が働く。すなわち、
血球内の水を血漿中に排出し、血球内の浸透圧（すなわ
ち溶質濃度）を高くし、血漿の浸透圧を下げて血球内外
の圧力差をなくすような力が働く。その結果、血球の体
積は減少し、血漿の体積が増加する。その結果として、
ヘマトクリットが低下する。
【００１７】ＨＬ剤の添加により赤血球の体積が減少
し、またフリーの血漿量が増えるので、血漿の回収率が
向上する。
し、またフリーの血漿量が増えるので、血漿の回収率が
向上する。
【００１８】ＨＬ剤によるヘマトクリットの低下は、Ｈ
Ｌ剤の濃度と共に上昇するが、血球膜は強度が弱いの
で、ある程度以上濃くなると血球は破壊、溶血してしま
う。ＨＬ剤の作用は主としてその浸透圧に由来するの
で、全血中（正確には血漿中）の溶質分子数に比例す
る。ＨＬ剤の添加量が多すぎると血球内外の浸透圧差が
大きくなりすぎて、血球が破裂したり、血球膜の一部に
穴があいて、血球内成分が血漿中に漏出する。
Ｌ剤の濃度と共に上昇するが、血球膜は強度が弱いの
で、ある程度以上濃くなると血球は破壊、溶血してしま
う。ＨＬ剤の作用は主としてその浸透圧に由来するの
で、全血中（正確には血漿中）の溶質分子数に比例す
る。ＨＬ剤の添加量が多すぎると血球内外の浸透圧差が
大きくなりすぎて、血球が破裂したり、血球膜の一部に
穴があいて、血球内成分が血漿中に漏出する。
【００１９】一般に血液検査は血漿中の成分濃度の測定
を基本としている。赤血球が破壊したり血球膜の一部に
穴があくと、赤血球内成分が血漿中に漏出してしまう。
赤血球内には高濃度のＨｂ（ヘモグロビン）が詰まって
いるので、このような漏出が起こると血漿が赤くなる
（溶血という）。赤血球の破壊は僅かであってもＨｂの
漏出による血漿の着色は無視できず、項目によって測定
値に強く影響する。例えば、健常者の血液検査におい
て、全血球の０．１％が破壊したとすると、ＣＰＫ、Ａ
ＬＰなど多くの酵素の測定値は正しく測れない。赤血球
内には血漿中よりも濃度の高い成分（ＧＯＴ、ＧＰＴ、
ＬＤＨ、Ｋ）があるのでこれらの項目の測定についても
溶血の影響を直接受ける。そこで、血漿の分離、回収に
当たっては、溶血ができるだけ少ない条件で実施する必
要がある。
を基本としている。赤血球が破壊したり血球膜の一部に
穴があくと、赤血球内成分が血漿中に漏出してしまう。
赤血球内には高濃度のＨｂ（ヘモグロビン）が詰まって
いるので、このような漏出が起こると血漿が赤くなる
（溶血という）。赤血球の破壊は僅かであってもＨｂの
漏出による血漿の着色は無視できず、項目によって測定
値に強く影響する。例えば、健常者の血液検査におい
て、全血球の０．１％が破壊したとすると、ＣＰＫ、Ａ
ＬＰなど多くの酵素の測定値は正しく測れない。赤血球
内には血漿中よりも濃度の高い成分（ＧＯＴ、ＧＰＴ、
ＬＤＨ、Ｋ）があるのでこれらの項目の測定についても
溶血の影響を直接受ける。そこで、血漿の分離、回収に
当たっては、溶血ができるだけ少ない条件で実施する必
要がある。
【００２０】健常者の全血中にはおよそ１５ｇ／ｄｌの
ヘモグロビン（Ｈｂ）が含まれている。Ｈｂが血漿（血
清）中に漏洩（溶血）すると測定値に影響を与える。そ
の程度は測定法、測定項目によって異なる。
ヘモグロビン（Ｈｂ）が含まれている。Ｈｂが血漿（血
清）中に漏洩（溶血）すると測定値に影響を与える。そ
の程度は測定法、測定項目によって異なる。
【００２１】例えば、血糖やコレステロールの測定につ
いては溶血の影響を受けにくく、１５０ｍｇ／ｄｌ程度
のＨｂが血漿中に含まれていても（全体の１％が溶血し
たことに相当）正しく測定される。
いては溶血の影響を受けにくく、１５０ｍｇ／ｄｌ程度
のＨｂが血漿中に含まれていても（全体の１％が溶血し
たことに相当）正しく測定される。
【００２２】一方、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＬＤＨ、Ｋ等は溶
血の影響を受け易く、特にＬＤＨやＫではＨｂが１５ｍ
ｇ／ｄｌ（全体の０．１％の溶血に相当）であっても、
測定値は臨床診断上有意な影響を受ける。
血の影響を受け易く、特にＬＤＨやＫではＨｂが１５ｍ
ｇ／ｄｌ（全体の０．１％の溶血に相当）であっても、
測定値は臨床診断上有意な影響を受ける。
【００２３】従って、血糖やコレステロールの測定のみ
を目的とする場合は、血漿分離法として不十分であって
も良いが、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＬＤＨ、Ｋ等を含めて正し
く測ることを目的とする場合には、０．１％以上の溶血
があってはならない。
を目的とする場合は、血漿分離法として不十分であって
も良いが、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＬＤＨ、Ｋ等を含めて正し
く測ることを目的とする場合には、０．１％以上の溶血
があってはならない。
【００２４】健常者のＨｃｔは４０〜４５％であるが、
日常の臨床検査では数％の頻度でＨｃｔが５５〜６０％
を示す検体も扱う必要がある。この場合Ｈｂは２０〜２
５ｇ／ｄｌとなるので、測定法のＨｂに対する許容範囲
を１５ｍｇ／ｄｌとすると、これらの高Ｈｃｔ検体では
０．０７％以下の溶血に抑える必要がある。
日常の臨床検査では数％の頻度でＨｃｔが５５〜６０％
を示す検体も扱う必要がある。この場合Ｈｂは２０〜２
５ｇ／ｄｌとなるので、測定法のＨｂに対する許容範囲
を１５ｍｇ／ｄｌとすると、これらの高Ｈｃｔ検体では
０．０７％以下の溶血に抑える必要がある。
【００２５】従来公知の無機塩やアミノ酸およびその塩
またはレンチンなどの血球凝集素を乾燥状態で直接血液
に溶解させたり、濾紙や多孔質材料に含浸、乾燥させて
おく方法においては、血液と乾燥固体が接触し、乾燥固
体が血漿に溶解する初期の過程で局所的、一時的に溶血
を起こし易い。従って、これらの方法で得た血漿は僅か
ながらＨｂの混入を伴っていることが多く、血糖やコレ
ステロールの測定には問題がなくても、上記のＧＯＴ、
ＧＰＴ、ＬＤＨ、Ｋなどの測定には耐えないものであっ
た。この傾向はＨｃｔの高い検体ではさらに顕著であっ
た。
またはレンチンなどの血球凝集素を乾燥状態で直接血液
に溶解させたり、濾紙や多孔質材料に含浸、乾燥させて
おく方法においては、血液と乾燥固体が接触し、乾燥固
体が血漿に溶解する初期の過程で局所的、一時的に溶血
を起こし易い。従って、これらの方法で得た血漿は僅か
ながらＨｂの混入を伴っていることが多く、血糖やコレ
ステロールの測定には問題がなくても、上記のＧＯＴ、
ＧＰＴ、ＬＤＨ、Ｋなどの測定には耐えないものであっ
た。この傾向はＨｃｔの高い検体ではさらに顕著であっ
た。
【００２６】これに対して、上記化合物を適当な濃度の
水溶液にしてから血液と接触させると局所的な濃度の上
昇の程度も少なく、また血漿中の拡散も速やかに進行す
ることから溶血は非常に起こりにくくなる。
水溶液にしてから血液と接触させると局所的な濃度の上
昇の程度も少なく、また血漿中の拡散も速やかに進行す
ることから溶血は非常に起こりにくくなる。
【００２７】全血の使用量は０．３〜３ｍｌ程度、通常
０．５〜１．５ｍｌ程度でよい。全血とＨＬ剤水溶液の
混合は単に数回振盪するだけでよい。ＨＬ剤の作用は殆
ど瞬間的であって数秒のうちに平衡に達すると推定され
る。従って、混合に際しては温度や時間を特に調節する
必要はない。
０．５〜１．５ｍｌ程度でよい。全血とＨＬ剤水溶液の
混合は単に数回振盪するだけでよい。ＨＬ剤の作用は殆
ど瞬間的であって数秒のうちに平衡に達すると推定され
る。従って、混合に際しては温度や時間を特に調節する
必要はない。
【００２８】ＨＬ剤を添加後は血液を秤置しあるいは遠
心分離して血球成分を分離する。この遠心分離は常法に
従って行なうことができる。
心分離して血球成分を分離する。この遠心分離は常法に
従って行なうことができる。
【００２９】遠心分離して得た血漿や血清は常法に従っ
て分析が行なわれるが、本発明の方法は乾式分析素子を
用いて複数項目を分析する場合に有効である。
て分析が行なわれるが、本発明の方法は乾式分析素子を
用いて複数項目を分析する場合に有効である。
【００３０】
実施例１ ヘパリン添加全血２ｍｌを１ｍｌづつテストチューブ
（Ｎｏ．１、Ｎｏ．２）に分取した。
（Ｎｏ．１、Ｎｏ．２）に分取した。
【００３１】別に硫酸リチウム(Ｌｉ2ＳＯ4・Ｈ2Ｏ）
（和光純薬製）２．５６ｇを１０ｍｌの蒸留水に溶か
し、２Ｍの水溶液を調製した。
（和光純薬製）２．５６ｇを１０ｍｌの蒸留水に溶か
し、２Ｍの水溶液を調製した。
【００３２】Ｎｏ.２のテストチューブに上記２ＭのＬ
ｉ2ＳＯ4・Ｈ2Ｏ２５μｌを添加し、軽く転倒混和し
た。５分間放置後、テストチューブＮｏ.１およびＮｏ.
２の全血をヘマトクリット管に採って、遠心分離し、ヘ
マトクリットを測定した所Ｎｏ．１：４４％、Ｎｏ．
２：３４％であった。またＮｏ．１、Ｎｏ．２のテスト
チューブ中全血の全量を３０００Ｇで１０分間遠心分離
し、血漿を分離回収した。日立臨床検査自動分析機（７
１５０）を用いてＮｏ．１、Ｎｏ．２の検体を測定し
た。その結果は、表１の通りであった。無添加血漿（コ
ントロール）での測定値を１００％とした時のＬｉ2Ｓ
Ｏ4添加血漿の測定値の比率を計算し、表１にまとめ
た。表１に見られるように全項目について９０％〜１１
０％の範囲に入っていた。
ｉ2ＳＯ4・Ｈ2Ｏ２５μｌを添加し、軽く転倒混和し
た。５分間放置後、テストチューブＮｏ.１およびＮｏ.
２の全血をヘマトクリット管に採って、遠心分離し、ヘ
マトクリットを測定した所Ｎｏ．１：４４％、Ｎｏ．
２：３４％であった。またＮｏ．１、Ｎｏ．２のテスト
チューブ中全血の全量を３０００Ｇで１０分間遠心分離
し、血漿を分離回収した。日立臨床検査自動分析機（７
１５０）を用いてＮｏ．１、Ｎｏ．２の検体を測定し
た。その結果は、表１の通りであった。無添加血漿（コ
ントロール）での測定値を１００％とした時のＬｉ2Ｓ
Ｏ4添加血漿の測定値の比率を計算し、表１にまとめ
た。表１に見られるように全項目について９０％〜１１
０％の範囲に入っていた。
【００３３】
【表１】
【００３４】比較例１ 実施例１の２ＭＬｉ2ＳＯ4水溶液に代えて生理食塩水を
全血に加えて、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）の低下効果を
調べた。ヘパリン添加全血１．５ｍｌに生理的食塩水を
加えて混和後ヘマトクリットを測定した。健常者の全血
(Ｈｃｔ４４％)と高ヘマトクリット全血（５４％）の２
レベルについて調べた。結果は表２の通りであった。生
理食塩水を用いた場合は赤血球の収縮などの作用は起こ
らないので、Ｈｃｔの低下の程度は単純希釈を想定して
算出した値とほぼ一致した。これらの濃度ではＨｃｔの
低下効果は見られないことが確かめられた。
全血に加えて、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）の低下効果を
調べた。ヘパリン添加全血１．５ｍｌに生理的食塩水を
加えて混和後ヘマトクリットを測定した。健常者の全血
(Ｈｃｔ４４％)と高ヘマトクリット全血（５４％）の２
レベルについて調べた。結果は表２の通りであった。生
理食塩水を用いた場合は赤血球の収縮などの作用は起こ
らないので、Ｈｃｔの低下の程度は単純希釈を想定して
算出した値とほぼ一致した。これらの濃度ではＨｃｔの
低下効果は見られないことが確かめられた。
【００３５】
【表２】
【００３６】実施例２ 実施例１と同様の実験において、ヘマトクリット低下剤
としてＲｂ2ＳＯ4を用いて実験した。健常者のヘパリン
添加全血（Ｈｃｔ ４４％）１.５ｍｌ＝１ＭのＲｂ2Ｓ
Ｏ4水溶液６０μｌを添加した。Ｒｂ2ＳＯ4の添加後の
濃度は全血１ｍｌ当たり３８ｍｍｏｌであった。混和後
Ｈｃｔを測定したところ３６％に低下していた。Ｒｂ2
ＳＯ4添加前後の全血を遠心分離し、血漿を回収して日
立７１５０自動分析機にて測定した。
としてＲｂ2ＳＯ4を用いて実験した。健常者のヘパリン
添加全血（Ｈｃｔ ４４％）１.５ｍｌ＝１ＭのＲｂ2Ｓ
Ｏ4水溶液６０μｌを添加した。Ｒｂ2ＳＯ4の添加後の
濃度は全血１ｍｌ当たり３８ｍｍｏｌであった。混和後
Ｈｃｔを測定したところ３６％に低下していた。Ｒｂ2
ＳＯ4添加前後の全血を遠心分離し、血漿を回収して日
立７１５０自動分析機にて測定した。
【００３７】ヘマトクリットの低下率（１４％）に合わ
せて補正係数を設定して計算をし直した。赤血球膜を自
由に通過できる低分子化合物であるＧＬＵおよびＢＵＮ
についての補正係数はヘマトクリット剤の添加に基づく
希釈分のみの補正(０．９５)とし、その他の項目は０．
８５として計算した。結果は、表３の通りであった。測
定した１９項目の内測定値が僅かの差（０．０４）でも
誤差率が高く算出されるＴＢｉｌ（９２％）を除く１８
項目について、コントロール（無添加）とヘマトクリッ
ト添加サンプルの補正後の差は、±５％以内であり実用
上問題のない範囲にあることが確かめられた。
せて補正係数を設定して計算をし直した。赤血球膜を自
由に通過できる低分子化合物であるＧＬＵおよびＢＵＮ
についての補正係数はヘマトクリット剤の添加に基づく
希釈分のみの補正(０．９５)とし、その他の項目は０．
８５として計算した。結果は、表３の通りであった。測
定した１９項目の内測定値が僅かの差（０．０４）でも
誤差率が高く算出されるＴＢｉｌ（９２％）を除く１８
項目について、コントロール（無添加）とヘマトクリッ
ト添加サンプルの補正後の差は、±５％以内であり実用
上問題のない範囲にあることが確かめられた。
【００３８】
【表３】
【００３９】
【発明の効果】本発明により全血からの血漿分離の効率
を上げ回収血漿量を増やすことができる。また、ヘマト
クリットが低下し、血漿の量が増加する結果、遠心によ
る血漿の分離が容易になる。添加する試薬を適切に選択
することにより、分離回収した血漿を検体として全ての
血漿成分の定量的な測定が可能である。
を上げ回収血漿量を増やすことができる。また、ヘマト
クリットが低下し、血漿の量が増加する結果、遠心によ
る血漿の分離が容易になる。添加する試薬を適切に選択
することにより、分離回収した血漿を検体として全ての
血漿成分の定量的な測定が可能である。
Claims (2)
- 【請求項１】 全血に無機塩またはアミノ酸もしくはそ
の塩の水溶液を、全血の体積の２０％以下、かつ、該無
機塩またはアミノ酸もしくはその塩の濃度が全血１ｍｌ
あたり１０〜２００μｍｏｌの濃度となるように混合
し、次いで血球成分を遠心分離して回収することを特徴
とする、全血から血漿または血清試料を調製する方法。 - 【請求項２】 請求項１において、該無機塩またはアミ
ノ酸もしくはその塩の水溶液の濃度が０．１〜５Ｍであ
ることを特徴とする、全血から血漿または血清試料を調
製する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP00560196A JP3664278B2 (ja) | 1996-01-17 | 1996-01-17 | 血漿または血清試料の調製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP00560196A JP3664278B2 (ja) | 1996-01-17 | 1996-01-17 | 血漿または血清試料の調製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09196910A true JPH09196910A (ja) | 1997-07-31 |
| JP3664278B2 JP3664278B2 (ja) | 2005-06-22 |
Family
ID=11615749
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP00560196A Expired - Fee Related JP3664278B2 (ja) | 1996-01-17 | 1996-01-17 | 血漿または血清試料の調製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3664278B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1447665B1 (en) | 2003-02-11 | 2016-06-29 | Bayer HealthCare LLC | Method for reducing effect of hematocrit on measurement of an analyte in whole blood |
| WO2024204674A1 (ja) * | 2023-03-29 | 2024-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 血液採取容器及び単核球の分離方法 |
-
1996
- 1996-01-17 JP JP00560196A patent/JP3664278B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1447665B1 (en) | 2003-02-11 | 2016-06-29 | Bayer HealthCare LLC | Method for reducing effect of hematocrit on measurement of an analyte in whole blood |
| WO2024204674A1 (ja) * | 2023-03-29 | 2024-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 血液採取容器及び単核球の分離方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3664278B2 (ja) | 2005-06-22 |
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