JPH09165339A - ラパマイシンを付与したドナー脾細胞を用いる臓器移植の延長 - Google Patents
ラパマイシンを付与したドナー脾細胞を用いる臓器移植の延長Info
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- JPH09165339A JPH09165339A JP8308578A JP30857896A JPH09165339A JP H09165339 A JPH09165339 A JP H09165339A JP 8308578 A JP8308578 A JP 8308578A JP 30857896 A JP30857896 A JP 30857896A JP H09165339 A JPH09165339 A JP H09165339A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 哺乳動物における臓器または組織移植の生存
期間を延長する方法を提供すること。 【解決手段】 有効量のラパマイシン付与ドナー脾細胞
を臓器または組織レシピエントに注入することによっ
て、哺乳動物における臓器または組織移植の生存期間を
延長する。
期間を延長する方法を提供すること。 【解決手段】 有効量のラパマイシン付与ドナー脾細胞
を臓器または組織レシピエントに注入することによっ
て、哺乳動物における臓器または組織移植の生存期間を
延長する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ドナー反応性宿主
リンパ球集団を正確にターゲッティングすることによっ
て、臓器または組織移植体の生存を延長するために特に
規定された方法に関する。この効果は、臓器または組織
レシピエントにラパマイシン付与（rapamycin-loaded）
ドナー脾細胞を投与することによって達成される。
リンパ球集団を正確にターゲッティングすることによっ
て、臓器または組織移植体の生存を延長するために特に
規定された方法に関する。この効果は、臓器または組織
レシピエントにラパマイシン付与（rapamycin-loaded）
ドナー脾細胞を投与することによって達成される。
【０００２】
【従来の技術】ラパマイシンは、ストレプトマイセス・
ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus）に
よって産生される大環状トリエン系の抗生物質であり、
インビトロおよびインビボの両方において、抗真菌活
性、特にカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）
に対する抗真菌活性を有することが見い出されている
［シー・ヴェチーナ（C. Vezina）ら、ジャーナル・オ
ブ・アンチバイオティクス（J. Antibiot.）28, 721（1
975）；エス・エヌ・セーガル（S.N. Sehgal）ら、ジャ
ーナル・オブ・アンチバイオティクス 28, 727（197
5）；エイチ・エイ・ベイカー（H.A. Baker）ら、ジャ
ーナル・オブ・アンチバイオティクス 31, 539（197
8）；米国特許第3,929,992号；および米国特許第3,993,
749号]。
ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus）に
よって産生される大環状トリエン系の抗生物質であり、
インビトロおよびインビボの両方において、抗真菌活
性、特にカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）
に対する抗真菌活性を有することが見い出されている
［シー・ヴェチーナ（C. Vezina）ら、ジャーナル・オ
ブ・アンチバイオティクス（J. Antibiot.）28, 721（1
975）；エス・エヌ・セーガル（S.N. Sehgal）ら、ジャ
ーナル・オブ・アンチバイオティクス 28, 727（197
5）；エイチ・エイ・ベイカー（H.A. Baker）ら、ジャ
ーナル・オブ・アンチバイオティクス 31, 539（197
8）；米国特許第3,929,992号；および米国特許第3,993,
749号]。
【０００３】ラパマイシンは、単独（米国特許第4,885,
171号）またはピシバニルと組み合わせて（米国特許第
4,401,653号）、抗腫瘍活性を有することが示されてい
る。アール・マーテル（R. Martel）ら［カナディアン
・ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファー
マコロジー（Can. J. Physiol. Pharmacol.）55, 48（1
977）］は、ラパマイシンが実験的アレルギー性脳脊髄
炎モデルや多発性硬化症のモデルにおいて、アジュバン
ト関節炎モデルや慢性関節リウマチのモデルにおいて有
効であり、また、ＩｇＥ様抗体の形成を効果的に阻害し
たことを開示した。
171号）またはピシバニルと組み合わせて（米国特許第
4,401,653号）、抗腫瘍活性を有することが示されてい
る。アール・マーテル（R. Martel）ら［カナディアン
・ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファー
マコロジー（Can. J. Physiol. Pharmacol.）55, 48（1
977）］は、ラパマイシンが実験的アレルギー性脳脊髄
炎モデルや多発性硬化症のモデルにおいて、アジュバン
ト関節炎モデルや慢性関節リウマチのモデルにおいて有
効であり、また、ＩｇＥ様抗体の形成を効果的に阻害し
たことを開示した。
【０００４】ラパマイシンの免疫抑制効果は、ファセブ
（FASEB）3, 3411（1989）に開示されている。ラパマイ
シンは、移植体拒絶反応を阻害するのに有効であること
が示されている（米国特許出願第362,544号（1989年６
月６日付で出願））。他の大環状分子であるシクロスポ
リンＡおよびＦＫ−５０６についても、免疫抑制剤とし
て有効であり、それゆえ移植体拒絶反応を予防するのに
有用であることが示されている［ファセブ 3, 3411（19
89）；ファセブ 3, 5256（1989）；およびアール・ワイ
・カルネ（R.Y. Calne）ら、ランセット（Lancet）1183
（1978）］。ラパマイシン付与赤血球の投与によって免
疫抑制を誘導する方法は、共有の米国特許出願第07/99
8,065号（1992年12月22日付で出願）に開示されてい
る。
（FASEB）3, 3411（1989）に開示されている。ラパマイ
シンは、移植体拒絶反応を阻害するのに有効であること
が示されている（米国特許出願第362,544号（1989年６
月６日付で出願））。他の大環状分子であるシクロスポ
リンＡおよびＦＫ−５０６についても、免疫抑制剤とし
て有効であり、それゆえ移植体拒絶反応を予防するのに
有用であることが示されている［ファセブ 3, 3411（19
89）；ファセブ 3, 5256（1989）；およびアール・ワイ
・カルネ（R.Y. Calne）ら、ランセット（Lancet）1183
（1978）］。ラパマイシン付与赤血球の投与によって免
疫抑制を誘導する方法は、共有の米国特許出願第07/99
8,065号（1992年12月22日付で出願）に開示されてい
る。
【０００５】免疫抑制剤の評価は、移植片生存における
Ｔ細胞活性の重要性を理解するのに大いに貢献してい
る。免疫系に対するコルチコステロイドおよびシクロス
ポリンの効果については、ジェイ・エフ・バッハ（J.F.
Bach）およびティー・ビー・ストローム（T.B. Stro
m）、ザ・モード・オブ・アクション・オブ・イムノサ
プレッシブ・エージェンツ（The Mode of Action of Im
munosuppressive Agents）、ニューヨーク：エルシヴィ
アー・プレス（Elsevier Press）, 1985, 72-78頁およ
び250-254頁にそれぞれ考察されている。ヘス（Hess）
ら［ジャーナル・オブ・イムノロジー（Journal of Imm
unology）128(1), 355-367（1982）］は、インビトロで
のヒトリンパ球応答に対するシクロスポリンＡの効果を
考察している。抗リンパ球抗体の臨床上の有用性は、エ
イ・ビー・コジミ（A.B. Cosimi）［トランスプランテ
ーション・プロシーディングズ（Transplatation Proce
edings）XV(1), 583-589（1983）］によって考察されて
いる。ベイバニー（Babany）ら［ジャーナル・オブ・フ
ァーマコロジー・アンド・エクスペリメンタル・セラピ
ューティクス（J. Pharm. Exp. Ther.）244(1), 259-26
2(1988)］は、マウス心臓移植体モデルにおけるシクロ
スポリンのインビボ使用を考察している。
Ｔ細胞活性の重要性を理解するのに大いに貢献してい
る。免疫系に対するコルチコステロイドおよびシクロス
ポリンの効果については、ジェイ・エフ・バッハ（J.F.
Bach）およびティー・ビー・ストローム（T.B. Stro
m）、ザ・モード・オブ・アクション・オブ・イムノサ
プレッシブ・エージェンツ（The Mode of Action of Im
munosuppressive Agents）、ニューヨーク：エルシヴィ
アー・プレス（Elsevier Press）, 1985, 72-78頁およ
び250-254頁にそれぞれ考察されている。ヘス（Hess）
ら［ジャーナル・オブ・イムノロジー（Journal of Imm
unology）128(1), 355-367（1982）］は、インビトロで
のヒトリンパ球応答に対するシクロスポリンＡの効果を
考察している。抗リンパ球抗体の臨床上の有用性は、エ
イ・ビー・コジミ（A.B. Cosimi）［トランスプランテ
ーション・プロシーディングズ（Transplatation Proce
edings）XV(1), 583-589（1983）］によって考察されて
いる。ベイバニー（Babany）ら［ジャーナル・オブ・フ
ァーマコロジー・アンド・エクスペリメンタル・セラピ
ューティクス（J. Pharm. Exp. Ther.）244(1), 259-26
2(1988)］は、マウス心臓移植体モデルにおけるシクロ
スポリンのインビボ使用を考察している。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明によれば、ドナ
ー哺乳動物の脾細胞（脾臓から単離されたリンパ球）を
ラパマイシンと共にインキュベートし、臓器または組織
レシピエント哺乳動物に投与することによって、免疫抑
制を与え、かつ、移植片拒絶反応を予防または治療する
方法が提供される。
ー哺乳動物の脾細胞（脾臓から単離されたリンパ球）を
ラパマイシンと共にインキュベートし、臓器または組織
レシピエント哺乳動物に投与することによって、免疫抑
制を与え、かつ、移植片拒絶反応を予防または治療する
方法が提供される。
【０００７】
【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】
ここに開示する同種移植法では、ブラウン・ノルウェー
（Brown Norway）ラット由来の新生児心臓をルイス（Le
wis）ラットの耳腔に移植し、これらのルイスラットに
対し、移植後４日目および１３日目に本発明の方法に従
ってラパマイシンを付与されたブラウン・ノルウェーラ
ット由来の脾細胞を投与する。同種移植法でラパマイシ
ン付与脾細胞によって与えられる免疫抑制に加えて、こ
こに開示する免疫抑制法は、異種移植法に適用可能であ
ると考えられる。
ここに開示する同種移植法では、ブラウン・ノルウェー
（Brown Norway）ラット由来の新生児心臓をルイス（Le
wis）ラットの耳腔に移植し、これらのルイスラットに
対し、移植後４日目および１３日目に本発明の方法に従
ってラパマイシンを付与されたブラウン・ノルウェーラ
ット由来の脾細胞を投与する。同種移植法でラパマイシ
ン付与脾細胞によって与えられる免疫抑制に加えて、こ
こに開示する免疫抑制法は、異種移植法に適用可能であ
ると考えられる。
【０００８】１．レシピエント雄ルイスラットの心臓移
植 以下で詳述する方法は、本発明の方法を例示するための
ものである。本発明の方法には、ヒトを含めて他の哺乳
動物およびそれ由来の組織または臓器を用いることがで
きると考えられる。様々な解決法、外科的手法および検
査室的手法は、当業者に公知である。
植 以下で詳述する方法は、本発明の方法を例示するための
ものである。本発明の方法には、ヒトを含めて他の哺乳
動物およびそれ由来の組織または臓器を用いることがで
きると考えられる。様々な解決法、外科的手法および検
査室的手法は、当業者に公知である。
【０００９】新生児心臓移植の前に、３２５ｇの雄ルイ
スラットレシピエント（チャールズ・リバー（Charles
River））に対し、２０ｍｇのペントバルビタール（ネ
ンブタール、アボット・ラボラトリーズ（Abbott Labor
atories））を腹腔内（i.p.）注射した。滅菌綿棒を用
いて、左耳をベタジン（ポビドン-ヨード）で消毒し
た。１ｍｌの無菌ＲＰＭＩ １６４０培養培地（ギブコ
（Gibco））を耳の腹壁軟骨板と表皮との間に注射し、
隆起した水泡を生じさせた。滅菌した１１番のメスを用
いて、後縁に沿い、かつ、軟骨板の面に平行に穿刺切開
を行った。滅菌綿棒を用いて、耳腔から残存する培地を
優しく除去した。雄雌を取り混ぜて２〜５日齢の新生児
ブラウン・ノルウェー（ＢＮ）ラット（チャールズ・リ
バー）を心臓ドナーとして採用した。胸部および頸部を
７０％の２-プロパノールおよびベタジンで消毒し、ド
ナーを断頭によって犠牲に供した。肋骨枠の外縁に沿っ
て、貫通切開を２回行い、次いで、肋骨枠を尾の方向に
折り返し、胸腔を露出させた。心臓から全ての血管およ
び胸腺の接続を切り離し、無菌の氷冷ＲＰＭＩ １６４
０に入れた。この時点で、新生児の心臓を肉眼的奇形ま
たは活動度低下について評価した。この心臓を頂部から
大動脈の根部に至る正中線に沿って分割し、ほぼ等しい
２つの切片を得た。心房および心室組織からなる単一の
切片を各レシピエントラットに用い、いったん耳腔に挿
入し、皮弁を優しく閉じ、滅菌綿棒を用いて、一滴の弾
性コロジオン（シグマ（Sigma））で密閉した。
スラットレシピエント（チャールズ・リバー（Charles
River））に対し、２０ｍｇのペントバルビタール（ネ
ンブタール、アボット・ラボラトリーズ（Abbott Labor
atories））を腹腔内（i.p.）注射した。滅菌綿棒を用
いて、左耳をベタジン（ポビドン-ヨード）で消毒し
た。１ｍｌの無菌ＲＰＭＩ １６４０培養培地（ギブコ
（Gibco））を耳の腹壁軟骨板と表皮との間に注射し、
隆起した水泡を生じさせた。滅菌した１１番のメスを用
いて、後縁に沿い、かつ、軟骨板の面に平行に穿刺切開
を行った。滅菌綿棒を用いて、耳腔から残存する培地を
優しく除去した。雄雌を取り混ぜて２〜５日齢の新生児
ブラウン・ノルウェー（ＢＮ）ラット（チャールズ・リ
バー）を心臓ドナーとして採用した。胸部および頸部を
７０％の２-プロパノールおよびベタジンで消毒し、ド
ナーを断頭によって犠牲に供した。肋骨枠の外縁に沿っ
て、貫通切開を２回行い、次いで、肋骨枠を尾の方向に
折り返し、胸腔を露出させた。心臓から全ての血管およ
び胸腺の接続を切り離し、無菌の氷冷ＲＰＭＩ １６４
０に入れた。この時点で、新生児の心臓を肉眼的奇形ま
たは活動度低下について評価した。この心臓を頂部から
大動脈の根部に至る正中線に沿って分割し、ほぼ等しい
２つの切片を得た。心房および心室組織からなる単一の
切片を各レシピエントラットに用い、いったん耳腔に挿
入し、皮弁を優しく閉じ、滅菌綿棒を用いて、一滴の弾
性コロジオン（シグマ（Sigma））で密閉した。
【００１０】２．ラパマイシン付与ブラウン・ノルウェ
ー脾細胞の調製 体重３５０ｇの雄ＢＮラット３匹を過剰のネンブタール
を腹腔内（i.p.）投与して定期的に麻酔した。次いで、
脾臓を無菌条件下で取り出し、室温でＲＰＭＩ１６４０
培地（ギブコ）に入れた。次いで、各脾臓を、１０ｍｌ
の無菌ＲＰＭＩ １６４０を含有する１００ｍｍの滅菌
ペトリ皿に入れ、メッシュスクリーンによって、擦り潰
した。次いで、すべての脾臓を破砕した後、ペトリ皿を
５ｍｌの無菌ＲＰＭＩ培地で洗浄し、洗浄液を５０ｍｌ
の遠心管に添加した。次いで、粗製の調製物を、ソルヴ
ァール（Sorvall）ＲＴ６０００遠心機によって、室
温、８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で１０分間遠心した。
上澄みを取り除き、ペレットを２０ｍｌの新鮮なＲＰＭ
Ｉ １６４０に再懸濁し、前回の条件下で再び遠心し
た。上澄みを再び取り除き、ペレットを室温で１５ｍｌ
のトリス−塩化アンモニウム溶解緩衝液に再懸濁した。
４分後、３０ｍｌのＲＰＭＩ １６４０を添加し、調製
物を、室温、８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で１０分間遠
心した。上澄みを取り除き、ペレットを４０ｍｌの新鮮
なＲＰＭＩに再懸濁し、前回のように遠心した。上澄み
を再び取り除き、ペレットを２ｍｌの新鮮な培地に再懸
濁した。次いで、この２ｍｌ容量を、室温で遠心管中に
おける１０ｍｌのリンホライト（Lympholyte）Ｒ（セダ
ーレイン・ラボズ（Cedarlane Labs））上に注意深く重
ね、２,０００（８００×Ｇ）で２０分間遠心した。脾
細胞を穏やかな吸引によってリンホライト−培地界面か
ら抽出し、室温で３０ｍｌの新鮮なＲＰＭＩ培地に添加
した。この懸濁液を８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で１０
分間、２回洗浄した。第２の上澄み洗浄液を捨て、細胞
をカウント用の新鮮なＲＰＭＩ培地５ｍｌに再懸濁し
た。１２５×１０6脾細胞／ｍｌのインキュベーション
混合物を与えるように、培地の容量を調節した。ラパマ
イシンは、無水エチルアルコール（１０ｍｇ／１００μ
ｌ）中、７５℃で、完全に溶解するまでインキュベート
した。次いで、この混合物の全容量を、４.９ｍｌの脾
細胞懸濁液にゆっくり添加し、穏やかに混合し、３７℃
で３０分間インキュベートした。次いで、インキュベー
ション混合物を、室温、８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で
１０分間遠心し、上澄みを捨て、ペレットを３０ｍｌず
つの新鮮なＲＰＭＩによって８００ｒｐｍで５回の独立
サイクルで洗浄し、非結合ラパマイシンを除去した。移
植を受けたラットは、手術後４日目および１３日目にだ
け、０.２００ｍｌの付与ドナー脾細胞（５×１０6細胞
に相当）を尾静脈注入によって与えられた。
ー脾細胞の調製 体重３５０ｇの雄ＢＮラット３匹を過剰のネンブタール
を腹腔内（i.p.）投与して定期的に麻酔した。次いで、
脾臓を無菌条件下で取り出し、室温でＲＰＭＩ１６４０
培地（ギブコ）に入れた。次いで、各脾臓を、１０ｍｌ
の無菌ＲＰＭＩ １６４０を含有する１００ｍｍの滅菌
ペトリ皿に入れ、メッシュスクリーンによって、擦り潰
した。次いで、すべての脾臓を破砕した後、ペトリ皿を
５ｍｌの無菌ＲＰＭＩ培地で洗浄し、洗浄液を５０ｍｌ
の遠心管に添加した。次いで、粗製の調製物を、ソルヴ
ァール（Sorvall）ＲＴ６０００遠心機によって、室
温、８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で１０分間遠心した。
上澄みを取り除き、ペレットを２０ｍｌの新鮮なＲＰＭ
Ｉ １６４０に再懸濁し、前回の条件下で再び遠心し
た。上澄みを再び取り除き、ペレットを室温で１５ｍｌ
のトリス−塩化アンモニウム溶解緩衝液に再懸濁した。
４分後、３０ｍｌのＲＰＭＩ １６４０を添加し、調製
物を、室温、８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で１０分間遠
心した。上澄みを取り除き、ペレットを４０ｍｌの新鮮
なＲＰＭＩに再懸濁し、前回のように遠心した。上澄み
を再び取り除き、ペレットを２ｍｌの新鮮な培地に再懸
濁した。次いで、この２ｍｌ容量を、室温で遠心管中に
おける１０ｍｌのリンホライト（Lympholyte）Ｒ（セダ
ーレイン・ラボズ（Cedarlane Labs））上に注意深く重
ね、２,０００（８００×Ｇ）で２０分間遠心した。脾
細胞を穏やかな吸引によってリンホライト−培地界面か
ら抽出し、室温で３０ｍｌの新鮮なＲＰＭＩ培地に添加
した。この懸濁液を８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で１０
分間、２回洗浄した。第２の上澄み洗浄液を捨て、細胞
をカウント用の新鮮なＲＰＭＩ培地５ｍｌに再懸濁し
た。１２５×１０6脾細胞／ｍｌのインキュベーション
混合物を与えるように、培地の容量を調節した。ラパマ
イシンは、無水エチルアルコール（１０ｍｇ／１００μ
ｌ）中、７５℃で、完全に溶解するまでインキュベート
した。次いで、この混合物の全容量を、４.９ｍｌの脾
細胞懸濁液にゆっくり添加し、穏やかに混合し、３７℃
で３０分間インキュベートした。次いで、インキュベー
ション混合物を、室温、８００ｒｐｍ（１００×Ｇ）で
１０分間遠心し、上澄みを捨て、ペレットを３０ｍｌず
つの新鮮なＲＰＭＩによって８００ｒｐｍで５回の独立
サイクルで洗浄し、非結合ラパマイシンを除去した。移
植を受けたラットは、手術後４日目および１３日目にだ
け、０.２００ｍｌの付与ドナー脾細胞（５×１０6細胞
に相当）を尾静脈注入によって与えられた。
【００１１】３．心臓同種移植片生存の測定 移植された心臓組織の収縮性を移植片生存としてモニタ
ーすることは、グールド（Gould）ＲＳ３２００チャー
ト記録計を用いて行い、手術後５日目に開始し、不全を
起こす時点まで、１日おきに続行した。対照動物は、１
日目、４日目および７日目に非ラパマイシン処理のドナ
ー脾細胞だけを輸注したこと以外は、同一フォーマット
で評価した。移植片の不全は、一般的には、多重双極性
記録部位から得られるフラットラインチャート応答が４
８時間にわたって持続しうる場合として定義される。
（対照グループの平均不全時点である）６日前に移植片
不全を示す治療グループの動物は、本研究では考慮から
除外し、技術的な失敗であるとみなした。
ーすることは、グールド（Gould）ＲＳ３２００チャー
ト記録計を用いて行い、手術後５日目に開始し、不全を
起こす時点まで、１日おきに続行した。対照動物は、１
日目、４日目および７日目に非ラパマイシン処理のドナ
ー脾細胞だけを輸注したこと以外は、同一フォーマット
で評価した。移植片の不全は、一般的には、多重双極性
記録部位から得られるフラットラインチャート応答が４
８時間にわたって持続しうる場合として定義される。
（対照グループの平均不全時点である）６日前に移植片
不全を示す治療グループの動物は、本研究では考慮から
除外し、技術的な失敗であるとみなした。
【００１２】４．脾細胞におけるラパマイシン濃度の測
定 ラパマイシン付与脾細胞の２つの別個の試料を、スペル
コ（Supelco）ＬＣ-１８カラム（４.６×２５０ｍｍ）
上での高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析用
に用意した。この分析は、ラパマイシンの平均濃度が付
与脾細胞試料１ｍｌあたり１７８μｇであることを示し
た。拡張によって、これは、約３５.６μｇ/日/動物ま
たは１０１.７μｇ/ｋｇ/日の濃度が４日目および１３
日目に輸注されたことを意味する。
定 ラパマイシン付与脾細胞の２つの別個の試料を、スペル
コ（Supelco）ＬＣ-１８カラム（４.６×２５０ｍｍ）
上での高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析用
に用意した。この分析は、ラパマイシンの平均濃度が付
与脾細胞試料１ｍｌあたり１７８μｇであることを示し
た。拡張によって、これは、約３５.６μｇ/日/動物ま
たは１０１.７μｇ/ｋｇ/日の濃度が４日目および１３
日目に輸注されたことを意味する。
【００１３】５．結論 ラパマイシン３５.６μｇを含有する０.２００ｍｌの脾
細胞を尾静脈に２日間投与すると、雄ルイスレシピエン
トにおける新生児心臓同種移植片の平均的な生存期間は
１７日間（中間値は１６.５日間）であった。比較とし
て、対照動物における平均的な生存期間は６.３日間で
あった。マンテル-ヘンツェル（Mantel-Haenszel）生存
分析によると、２つのグループ間の生存期間には非常に
有意な差（ｐ＜０.００１）が見られた。ホサール（Pho
sal）中のラパマイシンを９００μｇ/ｋｇの投薬量で１
４日間経口投与された動物における平均的な生存期間
は、１５.６日間であった。ラパマイシンを付与した赤
血球を１８０μｇ/ｋｇで７日間投与された移植動物
は、平均的な生存期間が２８.１日間であった。本発明
の方法は、臓器移植の移植前または移植直後の処理期間
における重要な臨床的用途を有すると結論される。
細胞を尾静脈に２日間投与すると、雄ルイスレシピエン
トにおける新生児心臓同種移植片の平均的な生存期間は
１７日間（中間値は１６.５日間）であった。比較とし
て、対照動物における平均的な生存期間は６.３日間で
あった。マンテル-ヘンツェル（Mantel-Haenszel）生存
分析によると、２つのグループ間の生存期間には非常に
有意な差（ｐ＜０.００１）が見られた。ホサール（Pho
sal）中のラパマイシンを９００μｇ/ｋｇの投薬量で１
４日間経口投与された動物における平均的な生存期間
は、１５.６日間であった。ラパマイシンを付与した赤
血球を１８０μｇ/ｋｇで７日間投与された移植動物
は、平均的な生存期間が２８.１日間であった。本発明
の方法は、臓器移植の移植前または移植直後の処理期間
における重要な臨床的用途を有すると結論される。
【００１４】薬理学 ここに報告されたデータに基いて、ラパマイシン付与脾
細胞中におけるラパマイシンが０.０１〜１０ｍｇ/ｋｇ
/日という１日量（必要に応じて、多くの日数にわたっ
て与えられる）は、実質的に移植の生存率を延長すると
考えられる。正確な用量は、他の因子のうち、レシピエ
ント動物の年齢および状態、ならびに、その動物におけ
るラパマイシンの有効度に依存し、もちろん、資格を有
する医療関係者によって決定される。
細胞中におけるラパマイシンが０.０１〜１０ｍｇ/ｋｇ
/日という１日量（必要に応じて、多くの日数にわたっ
て与えられる）は、実質的に移植の生存率を延長すると
考えられる。正確な用量は、他の因子のうち、レシピエ
ント動物の年齢および状態、ならびに、その動物におけ
るラパマイシンの有効度に依存し、もちろん、資格を有
する医療関係者によって決定される。
【００１５】医薬組成物 ラパマイシン付与脾細胞は、治療を受ける哺乳動物と生
理学的に適合する様々な液状媒体を用いて投与すること
ができると考えられ、例えば、臓器ドナーまたは交差適
合する第三者ドナーから得たドナー血液、血漿または血
清、血液と適合する生物学的媒体（例えば、ＲＰＭＩ
１６４０、生理食塩水または５％ブドウ糖水溶液）中
に、緩衝剤、電解質、粘度調節添加剤、抗生物質、およ
び静脈内投与に用いる他の免疫抑制剤と共に、ラパマイ
シン付与脾細胞を含有する懸濁液が挙げられる。
理学的に適合する様々な液状媒体を用いて投与すること
ができると考えられ、例えば、臓器ドナーまたは交差適
合する第三者ドナーから得たドナー血液、血漿または血
清、血液と適合する生物学的媒体（例えば、ＲＰＭＩ
１６４０、生理食塩水または５％ブドウ糖水溶液）中
に、緩衝剤、電解質、粘度調節添加剤、抗生物質、およ
び静脈内投与に用いる他の免疫抑制剤と共に、ラパマイ
シン付与脾細胞を含有する懸濁液が挙げられる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ダイアナ・スーザン・メリル アメリカ合衆国07059ニュージャージー州 ウオーレン、ラウンド・トップ・ロード22 番
Claims (4)
- 【請求項１】 移植片レシピエント哺乳動物に有効量の
ラパマイシン付与ドナー脾細胞を投与することからな
る、哺乳動物における臓器または組織移植片の生存期間
を延長する方法。 - 【請求項２】 移植片レシピエント哺乳動物に有効量の
ラパマイシン付与ドナー脾細胞を投与することからな
る、臓器または組織移植体を受容する哺乳動物における
免疫抑制を与える方法。 - 【請求項３】 生理学的に許容される液状担体に懸濁し
たドナー動物由来のラパマイシン付与脾細胞からなる、
臓器または組織移植体を受容する哺乳動物における免疫
系を抑制するための医薬組成物。 - 【請求項４】 ドナー脾臓から脾細胞を単離し、該脾細
胞をラパマイシンの溶液と共にインキュベートし、非結
合ラパマイシンを除去するために脾細胞を洗浄し、ラパ
マイシン付与脾細胞を、臓器または組織レシピエントに
静脈内投与するのに生理学的に適合する液状担体に懸濁
することからなる、ラパマイシン付与脾細胞を製造する
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US593295P | 1995-10-27 | 1995-10-27 | |
| US60/005932 | 1995-10-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09165339A true JPH09165339A (ja) | 1997-06-24 |
Family
ID=21718423
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8308578A Withdrawn JPH09165339A (ja) | 1995-10-27 | 1996-10-14 | ラパマイシンを付与したドナー脾細胞を用いる臓器移植の延長 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0770393A3 (ja) |
| JP (1) | JPH09165339A (ja) |
| CA (1) | CA2187911A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001510793A (ja) * | 1997-07-28 | 2001-08-07 | アジェンデ・キミケ・リウニテ・アンジェリニ・フランチェスコ・ア・チ・エレ・ア・エフェ・ソシエタ・ペル・アチオニ | Ｍｃｐ−１タンパク質の生成を減らす際に活性がある薬剤組成物 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4628792B2 (ja) | 2002-11-29 | 2011-02-09 | ロンカルオロ，マリア，グラジア | 免疫疾患治療用ラパマイシン及びｉｌ−１０ |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5482945A (en) * | 1992-12-22 | 1996-01-09 | American Home Products Corporation | Innovative technique for immunosuppression involving administration of rapamycin loaded formed blood elements |
-
1996
- 1996-10-14 JP JP8308578A patent/JPH09165339A/ja not_active Withdrawn
- 1996-10-15 CA CA002187911A patent/CA2187911A1/en not_active Abandoned
- 1996-10-17 EP EP96307537A patent/EP0770393A3/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001510793A (ja) * | 1997-07-28 | 2001-08-07 | アジェンデ・キミケ・リウニテ・アンジェリニ・フランチェスコ・ア・チ・エレ・ア・エフェ・ソシエタ・ペル・アチオニ | Ｍｃｐ−１タンパク質の生成を減らす際に活性がある薬剤組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0770393A2 (en) | 1997-05-02 |
| MX9604840A (es) | 1997-09-30 |
| EP0770393A3 (en) | 1999-01-27 |
| CA2187911A1 (en) | 1997-04-28 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20050218 |