JPH09163985A - ニューモシスチス・カリニウイルスのアクチン様蛋白遺伝子、そのタンパク質組成物及びニューモシスチス・カリニウイルスの検出法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】カリニ肺炎患者のウイルスマーカーの診断を始
めとして、これ以外の診断、治療、ワクチン開発等の可
能性をもたらす事。 【解決手段】ニューモシスチス・カリニウイルス遺伝
子がコードするアクチン様蛋白質のアミノ酸配列の一部
をコードする塩基配列を有した９２３〜１３９８個のヌ
クレオチドを含有する一本鎖ＤＮＡ又は該一本鎖ＤＮＡ
と相補ＤＮＡからなる二本鎖ＤＮＡ、配列番号５また
は塩基配列の配列番号１〜４のＤＮＡから転写されたア
ミノ酸配列のいずれか１種以上からなることを特徴とす
るタンパク質組成物、前記のＤＮＡの一部をプロー
ブとして使用する事を特徴とするニューモシスチス・カ
リニウイルスの検出法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はニューモシスチス・
カリニウイルスのＤＮＡに関し、特に相補ＤＮＡ（ｃＤ
ＮＡ）の利用法に係わる。

【０００２】

【従来の技術】日和見感染症の一つであるカリニ肺炎
は、従来、先天性免疫不全症や抗癌化学療法の経過中、
あるいは臓器移植後や抗免疫療法中に併発する重症な肺
炎であり、最近では後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ：
エイズ）患者に高率に発症して高い死亡率を示すことか
ら再び注目されている疾患である。

【０００３】この肺炎の病原体がニューモシスチス・カ
リニ（以下単に「ＰＣ」ともいう）ウイルスであり、免
疫不全症患者やエイズ患者においては、肺のみに限らず
各所の臓器に病巣を形成することもある。ところで、Ｐ
Ｃウイルスは医学的にこれ程重要であり、かつかなり多
くの専門家が長期間研究に携わっているにも拘わらず、
未だ不明な点の多いウイルスであり、その培養において
も成功例がない。このように、ＰＣウイルスが純粋、大
量に手に入らないことから、免疫、分子生物学、診断、
薬剤検定など、多くの研究が足踏み状態にとどまってい
る。

【０００４】現在までに、カリニ肺炎の診断、またはそ
の病原体であるＰＣウイルスの検出は、組織標本を用い
た（電子）顕微鏡的手法に頼っており、カンジダ、アス
ペルギルス、クリプトコッカスなどといった真菌類と鑑
別診断しなければならない。これらを解決する手段とし
て、遺伝子プローブ等の開発が強く要望されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明はラット
・カリニ肺炎組織由来のｃＤＮＡで直接ＰＣウイルスを
検出もしくはクローニングしようとするものである。こ
の一部の塩基配列を用いて近年米国シータス社によって
技術化されたポリメラーゼ連鎖反応法（以下、「ＰＣＲ
法」ともいう）を用いたカリニ肺炎患者のウイルスマー
カーの診断を始めとして、これ以外の診断、治療、ワク
チン開発等の可能性をもたらす事を目的とするものであ
る。

【０００６】本発明者等はＰＣウイルスについて鋭意検
討を重ねた結果、そのアクチン様蛋白ｃＤＮＡを得、ク
ローン化に成功し、構造決定をすることができ、かくし
て上記の課題を解決すると共に、上記の目的を達成する
に至ったのである。本発明は以下の構成からなる。 １．ニューモシスチス・カリニウイルス遺伝子がコード
するアクチン様蛋白質のアミノ酸配列の一部をコードす
る塩基配列を有した９２３〜１３９８個のヌクレオチド
を含有する一本鎖ＤＮＡ又は該一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮ
Ａからなる二本鎖ＤＮＡ。

【０００７】２．配列番号１〜４のいずれか１つである
ことを特徴とする前記１記載の一本鎖ＤＮＡ又は該一本
鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡからなる二本鎖ＤＮＡ。 ３．転写されたアミノ酸配列が配列番号５にて示される
事を特徴とする前記１記載の一本鎖ＤＮＡ又は該一本鎖
ＤＮＡと相補ＤＮＡからなる二本鎖ＤＮＡ。 ４．配列番号５の２６６番目のアミノ酸がＩｌｅに置換
されていることを特徴とする前記３記載の一本鎖ＤＮＡ
又は該一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡからなる二本鎖ＤＮ
Ａ。

【０００８】５．配列番号５または塩基配列の配列番号
１〜４のＤＮＡから転写されたアミノ酸配列のいずれか
１種以上からなることを特徴とするタンパク質組成物 ６．前記１のＤＮＡの一部をプローブとして使用する事
を特徴とするニューモシスチス・カリニウイルスの検出
法。 本発明者らが得たＤＮＡ（以下、「本発明のＤＮＡとも
いう」）は、ＰＣウイルス遺伝子がコードするアクチン
様蛋白質のアミノ酸配列の一部をコードする塩基配列を
有しており９２３〜１３９８個のヌクレオチドを含有す
る一本鎖ＤＮＡ又は該一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡからな
る二本鎖ＤＮＡである。本発明による上記のＤＮＡの一
部である配列番号１〜４は配列表および図１〜７に示し
た。図１〜７の１〜４の数字は配列番号１〜４に対応す
るもので、それらの相同性を比較するために同じ塩基配
列を示したものである。即ち、配列番号１〜４の塩基配
列の内、アクチン様蛋白質の構造配列部分を配列番号５
に示した。この構造配列は、２６６番目のアミノ酸がＩ
ｌｅに置換されたものを包含し、それに対応した配列番
号１および２を包含する。配列番号５の２６６番目のア
ミノ酸は、配列番号１の８７１〜８７３に配列番号２の
８４２〜８４４に各々対応する。また、配列番号１と２
は図１からも判る通り、アミノ酸配列においては、コド
ンの３番目を異にする部位が存在すると共に構造配列の
後に続く塩基配列を異にする。また、配列番号３および
４の塩基配列は配列番号１と同じであるが、塩基数を異
にするものである。

【０００９】本発明は、配列番号５に対応するＤＮＡま
たは塩基配列の配列番号１〜４のＤＮＡを遺伝子組換え
ベクターに組み込み、これで大腸菌、酵母等の微生物や
動物細胞を形質転換し、培養することにより、配列番号
５または配列番号１〜４のＤＮＡから転写されたアミノ
酸配列のいずれか１種以上からなるタンパク質組成物を
産生することができる。

【００１０】また、本発明は、本発明のＤＮＡの一部を
プローブとして使用するＰＣウイルスの検出法を提供す
ることができる。本発明のＤＮＡの一部をプローブとし
てＰＣウイルスを検出するには、サザンブロットハイブ
リダイゼーション等の公知の方法を用いることができ
る。ＰＣウィルスの検出には、検体の遺伝子をＰＣＲ法
により増幅して検出する事が好ましい。ＰＣＲ法による
検体の遺伝子の増幅には、配列番号１〜４の塩基配列の
一部をプライマーに用いて増幅することができる。 本
発明によれば、配列番号１〜４の４個のヌクレオチド配
列を含む二本鎖ＤＮＡは、ラット・カリニ肺炎組織由来
の画分からＤＮＡを精製し、ｉｎ ｖｉｔｒｏパッケー
ジング法によりファージ遺伝子に組み込んだ後、酵母菌
アクチン遺伝子（Ｇａｌｌｗｉｗｉｔｚ，Ｇ．，Ａｎｄ
Ｓｕｒｅｓ，Ｉ．１９８０．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏ
ｆ ａ ｓｐｌｉｔ ｙｅａｓｔ ｇｅｎｅ ：Ｃｏｍ
ｐｌｅｔｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｎｇｅｎｅ ｉｎ Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ．Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７，２５
４６−２５５０）を鋳型としてプラークハイブリダイゼ
ーション法により取得、作製したものである（分子細胞
生物学基礎実験法Ｖ．Ｄ 遺伝子のクローニング：南江
堂 参照）。

【００１１】このようにして得られた二本鎖ＤＮＡは、
自体周知の手法で、ベクター例えばファージベクターや
プラスミドベクターに組み込みクローン化することがで
きる。このためのクローニングには、ベクターとしてフ
ァージを採択する場合にはin vitroパッケージング法が
有利である。得られたクローンについては該クローンの
一部をプローブとした。

【００１２】クローンの一部をプローブとして、カリニ
肺炎ラットの組織から調製したＤＮＡを用い、既知の方
法によりサザンブロットハイブリダイゼーション法を行
うと、陽性反応が検出され、更に、健常ラットの組織か
ら調製したＤＮＡを用いた前記の方法では陽性反応が検
出されないことにより、このクローンはＰＣウイルスの
遺伝子を有しているものと推定され、このクローンが本
発明によるクローン化ＰＣウイルスＤＮＡである事が判
明した。

【００１３】

【発明の効果】本発明によれば、特にアクチン様蛋白質
をコードするＰＣ遺伝子およびそのｃＤＮＡまたはその
少なくとも一部を大量に提供することができる。従って
これらＤＮＡは、当然の事ながらこれをプローブとして
用いる事により、遺伝子レベルでのニューモシスチス・
カリニウイルスの検出に利用する事ができ、一方、上記
の二本鎖ＤＮＡは制限酵素により適宜の鎖長を有するも
のとなして構造と生理活性との相関究明等に利用するこ
とができる。

【００１４】尚、二本鎖ＤＮＡ断片の組み込まれるべき
上記のベクターは、当然の事ながら、発現ベクターであ
り、従って本発明による遺伝子組み替えベクターを大腸
菌、酵母等の微生物や動物細胞に取り込ませ、該微生物
又は動物細胞を培養すれば、ニューモシスチス・カリニ
ウイルスに起因する抗原物質を大量に生産する事がで
き、従って、この産物を研究用として豊富に供給するこ
とが可能となる。更に、この産物を動物に免疫させる事
により、抗体性物質を産生させ、これを取得すれば治療
薬、ワクチン開発の途が開かれ、該抗体性物質をモノク
ローン、ポリクローン化すれば治療薬、ワクチンとして
の安定供給が可能となる。

【００１５】

【実施例】次に、実施例等により本発明を更に詳細に且
つ具体的に説明する。 実施例１ （Ａ）カリニ肺炎発症ラットよりの相補ＤＮＡの合成 ステロイドホルモンの大量投与により、人工的に免疫不
全を起こしたラットにＰＣウイルスを感染させ、その肺
からＰＣウイルスを分離し(LUNDGRENら、Infect.Immun.
58,1990の方法)、フェノール・クロロホルム法により精
製した。

【００１６】これにより得られた精製ＤＮＡの両端にEc
oRＩリンカーを付加した。この二本鎖ＤＮＡ断片は常法
により処理することにより一本鎖のものに分離させるこ
とができる。 （Ｂ）ベクターへのＤＮＡの組み込み ベクターとしてファージベクターであるλZAPIIを採択
し、これをEcoRＩにて切断し、上記（Ａ）にて得られ且
つEcoRＩ認識部位(site)を両端に有するＤＮＡ断片を挿
入し、酵母菌アクチン遺伝子をプローブとし、Stratage
ne社製パッケージングキットを用いて、in vitroパッケ
ージング法によりスクリーニングして上記のＤＮＡイン
サートを有するクローンを単離することによりファージ
ベクタークローンを得た。 （Ｃ）塩基配列の決定 上記（Ｂ）で得たクローンの塩基配列はダイデオキシ法
を用いて調べ、その結果の一部を配列番号１〜４および
図１〜７に示した。 実施例２ カリニ肺炎ラット（図中ＰＣ）と、正常ラット（図中Ｒ
ＡＴ）の肺組織より抽出したＤＮＡを様々な制限酵素で
切断し、アガロースゲル電気泳動した後ナイロン膜に転
写したものに、既知の方法で放射性標識した配列番号１
のｃＤＮＡクローンを用いたサザンブロットを行い、Ｐ
Ｃにのみ陽性反応を得た。この結果を図８に示した。

【００１７】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１３９８ 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：ニューモシスチス・カリニウイルス 配列 ATTGAAACAA TTGTATTATT TCTTTAATAG CTATTTTTAA CAAATTATAT TGAATTGCAT 60 TAAAACATTA TAAAA ATG GAG GAC GAA ATA GCT GCT CTT GTT ATT GAC AAT 111 GGA TCT GGC ATG TGT AAG GCG GGT TTT GCA GGG GAT GAT GCT CCA AGG 159 GCT GTT TTT CCT TCT ATT GTT GGA CGC CCA CGT CAT CAG GGT ATT ATG 207 GTA GGA ATG GGT CAG AAG GAC TCA TAT GTG GGA GAT GAA GCT CAA TCA 255 AAA CGC GGA ATT TTG ACA TTA AAA TAT CCT ATT GAA CAT GGA ATC GTT 303 AGT AAT TGG GAT GAT ATG GAA AAA ATC TGG CAT CAT ACA TTT TAT AAT 351 GAA CTT CGC GTT GCA CCA GAA GAA CAT CCT GCA TTA CTT ACA GAA GCG 399 CCT CTT AAT CCA AAA TCT AAT AGA GAA AAA ATG ACC CAA ATA ATG TTC 447 GAG ACA TTT AAT ACT CCT GCA TTT TAT GTA GCA ATT CAG GCT GTT TTG 495 TCG CTT TAT GCT TCA GGA CGT ACT ACG GGT ATT GTG CTT GAT TCT GGA 543 GAT GGT GTT ACA CAT ACT GTT CCT ATT TAT GAG GGT TAT GCA CTT CCG 591 CAT GCT ATT TTG CGT CTT AAT CTT GCC GGA CGG GAC TTA ACA GAC TAT 639 CTT ATG AAA ATC TTA ACG GAG CGT GGC TAC AAT TAT ACC ACT ACA GCA 687 GAG CGC GAA ATT GTT CGT GAC ATT AAA GAA AGG CTT TGT TAT GTT GCT 735 CTA GAT TTT GAA CAA GAA ATT CAT ACA GCT TCA TCA TCT TCT AGC TTA 783 GAA AAA TCA TAT GAA TTA CCA GAT GGT CAA GTA ATA ACT ATT GGT AAT 831 GAG CGC TTC CGC GCT CCA GAA GCT CTA TTT CAA CCA TCT TTA GTC GGT 879 ATG GAA ACA TGC GGT ATT CAT GAA ACC ACT TTT AAT TCT ATT ATG AAA 927 TGT GAC GTG GAT ATT CGC AAA GAC CTT TAT AGC AAT ATT GTT ATG TCA 975 GGT GGA ACG ACA ATG TAC CCA GGT ATT GCT GAT CGT ATG CAA AAA GAA 1023 ATA ACT GCA CTT GCA CCC TCT TCA ATG AAA ATT AAA ATA GTT GCA CCT 1071 CCT GAA CGT AAA TAT TCT GTC TGG ATT GGA GGA TCT ATT CTT GCA AGC 1119 TTA TCA ACA TTT CAA CAA ATG TGG ATC AGC AAG CAA GAG TAT GAT GAG 1167 AAT GGT CCA TCT ATT GTT TAT CGT AAG TGT TTT 1200 TAAGTAAAAA ATATACATTA ATCTCATTTT TGCACTATGA GATTTACATT GTATATCTTT 1260 TCTATCTATG TTAAAAATTT TTAGTATTTT TTTTTAGATG CATAAAAATA TTTTTTTTAA 1320 ATAATTTTTT ATAAGAAAAT ACTATATTTT TAAACTTTTG TTCATTAATT TAATCCATTA 1380 TTTATTAATA ACTATAAC 1398

【００１８】配列番号：２ 配列の長さ：１３６１ 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：ニューモシスチス・カリニウイルス 配列 GCTATTTTTA ACAAATTATC TTGAATTGCA TTGAAACATT ATAAAA 46 ATG GAG GAT GAA ATA GCC GCT CTT GTT ATT GAC AAT GGA TCT GGC ATG 94 TGT AAG GCG GGC TTC GCA GGA GAT GAT GCC CCA AGG GCT GTT TTT CCT 142 TCT ATT GTT GGA CGC CCA CGT CAT CAG GGT ATT ATG GTG GGA ATG GGT 190 CAG AAA GAT TCA TAT GTA GGA GAT GAG GCT CAA TCA AAA CGC GGA ATT 238 TTG ACA TTA AAA TAC CCT ATT GAG CAC GGA ATC GTC AGT AAT TGG GAT 286 GAT ATG GAA AAA ATC TGG CAT CAT ACA TTT TAT AAT GAA CTT CGC GTT 334 GCC CCA GAA GAA CAT CCT GCA TTG CTT ACA GAG GCA CCT CTT AAT CCA 382 AAA TCT AAT AGA GAA AAA ATG ACC CAA ATA ATG TTC GAG ACA TTT AAT 430 ACT CCT GCA TTT TAT GTA GCA ATT CAG GCT GTT TTG TCG CTT TAT GCT 478 TCA GGA CGT ACT ACC GGT ATT GTT CTT GAT TCC GGA GAT GGT GTT ACA 526 CAT ACT GTT CCT ATT TAT GAG GGT TAT GCA CTT CCG CAT GCT ATT TTG 574 CGC CTT AAT CTT GCC GGA CGG GAC TTA ACA GAT TAT CTT ATG AAA ATC 622 TTA ACA GAG CGT GGT TAC AAT TAT ACT ACT ACA GCA GAG CGT GAA ATT 670 GTT CGT GAC ATT AAA GAA AGG CTT TGT TAT GTT GCT CTA GAT TTT GAA 718 CAA GAA ATT CAT ACA GCT TCA TCA TCT TCT AGC TTA GAA AAA TCA TAT 766 GAA TTA CCA GAT GGT CAA GTA ATA ACT ATT GGC AAT GAG CGC TTC CGT 814 GCT CCA GAA GCT CTT TTT CAA CCA TCT ATA GTC GGT ATG GAG ACA TGT 862 GGT ATT CAT GAA ACT ACT TTC AAT TCT ATT ATG AAA TGT GAC GTG GAT 910 ATT CGT AAA GAT CTT TAT AGC AAT ATT GTT ATG TCA GGT GGA ACA ACA 958 ATG TAC CCA GGT ATT GCT GAT CGT ATG CAA AAA GAA ATA ACT GCA CTT 1006 GCG CCC TCT TCA ATG AAA ATT AAA ATA GTC GCG CCT CCT GAA CGC AAA 1054 TAT TCT GTC TGG ATC GGA GGA TCT ATT CTT GCA AGT TTA TCA ACA TTT 1102 CAG CAA ATG TGG ATT AGT AAG CAA GAA TAT GAT GAA AAT GGT CCA TCT 1150 ATT GTC TAT CGT AAG TGC TTT TAAAAATAAG CGAGAAATAT ACATTAATCT 1201 CATTTTTGTT CTATGAGATT TACATTGTAT ATCTTTTCTA TGTTAAGTAA GATTTTTAGT 1261 ATTTTTTTTA GATGCATAAA AATAATTTTT TTAAATAAAT TTTTATAAAA AGTACTATAT 1321 TTTTAAGTTT TTATTCATTA ATTTAAGTCA TTGTTCATTT 1361

【００１９】配列番号：３ 配列の長さ：９５４ 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：ニューモシスチス・カリニウイルス 配列 CG CCT CTT AAT CCA AAA TCT AAT AGA GAA AAA ATG ACC CAA ATA ATG 47 TTC GAG ACA TTT AAT ACT CCT GCA TTT TAT GTA GCA ATT CAG GCT GTT 95 TTG TCG CTT TAT GCT TCA GGA CGT ACT ACG GGT ATT GTG CTT GAT TCT 143 GGA GAT GGT GTT ACA CAT ACT GTT CCT ATT TAT GAG GGT TAT GCA CTT 191 CCG CAT GCT ATT TTG CGT CTT AAT CTT GCC GGA CGG GAC TTA ACA GAC 239 TAT CTT ATG AAA ATC TTA ACG GAG CGT GGC TAC AAT TAT ACC ACT ACA 287 GCA GAG CGC GAA ATT GTT CGT GAC ATT AAA GAA AGG CTT TGT TAT GTT 335 GCT CTA GAT TTT GAA CAA GAA ATT CAT ACA GCT TCA TCA TCT TCT AGC 383 TTA GAA AAA TCA TAT GAA TTA CCA GAT GGT CAA GTA ATA ACT ATT GGT 431 AAT GAG CGC TTC CGC GCT CCA GAA GCT CTA TTT CAA CCA TCT TTA GTC 479 GGT ATG GAA ACA TGC GGT ATT CAT GAA ACC ACT TTT AAT TCT ATT ATG 527 AAA TGT GAC GTG GAT ATT CGC AAA GAC CTT TAT AGC AAT ATT GTT ATG 575 TCA GGT GGA ACG ACA ATG TAC CCA GGT ATT GCT GAT CGT ATG CAA AAA 623 GAA ATA ACT GCA CTT GCA CCC TCT TCA ATG AAA ATT AAA ATA GTT GCA 671 CCT CCT GAA CGT AAA TAT TCT GTC TGG ATT GGA GGA TCT ATT CTT GCA 719 AGC TTA TCA ACA TTT CAA CAA ATG TGG ATC AGC AAG CAA GAG TAT GAT 767 GAG AAT GGT CCA TCT ATT GTT TAT CGT AAG TGT TTT TAAGTAAAAA 813 ATATACATTA ATCTCATTTT TGCACTATGA GATTTACATT GTATATCTTT TCTATCTATG 873 TTAAAAATTT TTAGTATTTT TTTTTAGATG CATAAAAATA TTTTTTTTAA ATAATTTTTT 933 ATAAGAAAAT ACTATATTTT T 954

【００２０】配列番号：４ 配列の長さ：９２３ 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：ニューモシスチス・カリニウイルス 配列 G TTC GAG ACA TTT AAT ACT CCT GCA TTT TAT GTA GCA ATT CAG GCT 46 GTT TTG TCG CTT TAT GCT TCA GGA CGT ACT ACG GGT ATT GTG CTT GAT 94 TCT GGA GAT GGT GTT ACA CAT ACT GTT CCT ATT TAT GAG GGT TAT GCA 142 CTT CCG CAT GCT ATT TTG CGT CTT AAT CTT GCC GGA CGG GAC TTA ACA 190 GAC TAT CTT ATG AAA ATC TTA ACG GAG CGT GGC TAC AAT TAT ACC ACT 238 ACA GCA GAG CGC GAA ATT GTT CGT GAC ATT AAA GAA AGG CTT TGT TAT 286 GTT GCT CTA GAT TTT GAA CAA GAA ATT CAT ACA GCT TCA TCA TCT TCT 334 AGC TTA GAA AAA TCA TAT GAA TTA CCA GAT GGT CAA GTA ATA ACT ATT 382 GGT AAT GAG CGC TTC CGC GCT CCA GAA GCT CTA TTT CAA CCA TCT TTA 430 GTC GGT ATG GAA ACA TGC GGT ATT CAT GAA ACC ACT TTT AAT TCT ATT 478 ATG AAA TGT GAC GTG GAT ATT CGC AAA GAC CTT TAT AGC AAT ATT GTT 526 ATG TCA GGT GGA ACG ACA ATG TAC CCA GGT ATT GCT GAT CGT ATG CAA 574 AAA GAA ATA ACT GCA CTT GCA CCC TCT TCA ATG AAA ATT AAA ATA GTT 622 GCA CCT CCT GAA CGT AAA TAT TCT GTC TGG ATT GGA GGA TCT ATT CTT 670 GCA AGC TTA TCA ACA TTT CAA CAA ATG TGG ATC AGC AAG CAA GAG TAT 718 GAT GAG AAT GGT CCA TCT ATT GTT TAT CGT AAG TGT TTT 757 TAAGTAAAAA ATATACATTA ATCTCATTTT TGCACTATGA GATTTACATT GTATATCTTT 817 TCTATCTATG TTAAAAATTT TTAGTATTTT TTTTTAGATG CATAAAAATA TTTTTTTTAA 877 ATAATTTTTT ATAAGAAAAT ACTATATTTT TAAACTTTTG TTCATT 923

【００２１】 配列番号：５ 配列の長さ：３７４ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヌーモシスチス・カリニウイルス 配列 Met Glu Asp Glu Ile Ala Ala Leu Val Ile Asp Asn Gly Ser Gly Met 1 5 10 15 Cys Lys Ala Gly Phe Ala Gly Asp Asp Ala Pro Arg Ala Val Phe Pro 20 25 30 Ser Ile Val Gly Arg Pro Arg His Gln Gly Ile Met Val Gly Met Gly 35 40 45 Gln Lys Asp Ser Tyr Val Gly Asp Glu Ala Gln Ser Lys Arg Gly Ile 50 55 60 Leu Thr Leu Lys Tyr Pro Ile Glu His Gly Ile Val Ser Asn Trp Asp 65 70 75 80 Asp Met Glu Lys Ile Trp His His Thr Phe Tyr Asn Glu Leu Arg Val 85 90 95 Ala Pro Glu Glu His Pro Ala Leu Leu Thr Glu Ala Pro Leu Asn Pro 100 105 110 Lys Ser Asn Arg Glu Lys Met Thr Gln Ile Met Phe Glu Thr Phe Asn 115 120 125 Thr Pro Ala Phe Tyr Val Ala Ile Gln Ala Val Leu Ser Leu Tyr Ala 130 135 140 Ser Gly Arg Thr Thr Gly Ile Val Leu Asp Ser Gly Asp Gly Val Thr 145 150 155 160 His Thr Val Pro Ile Tyr Glu Gly Tyr Ala Leu Pro His Ala Ile Leu 165 170 175 Arg Leu Asn Leu Ala Gly Arg Asp Leu Thr Asp Tyr Leu Met Lys Ile 180 185 190 Leu Thr Glu Arg Gly Tyr Asn Tyr Thr Thr Thr Ala Glu Arg Glu Ile 195 200 205 Val Arg Asp Ile Lys Glu Arg Leu Cys Tyr Val Ala Leu Asp Phe Glu 210 215 220 Gln Glu Ile His Thr Ala Ser Ser Ser Ser Ser Leu Glu Lys Ser Tyr 225 230 235 240 Glu Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Thr Ile Gly Asn Glu Arg Phe Arg 245 250 255 Ala Pro Glu Ala Leu Phe Gln Pro Ser Leu Val Gly Met Glu Thr Cys 260 265 270 Gly Ile His Glu Thr Thr Phe Asn Ser Ile Met Lys Cys Asp Val Asp 275 280 285 Ile Arg Lys Asp Leu Tyr Ser Asn Ile Val Met Ser Gly Gly Thr Thr 290 295 300 Met Tyr Pro Gly Ile Ala Asp Arg Met Gln Lys Glu Ile Thr Ala Leu 305 310 315 320 Ala Pro Ser Ser Met Lys Ile Lys Ile Val Ala Pro Pro Glu Arg Lys 325 330 335 Tyr Ser Val Trp Ile Gly Gly Ser Ile Leu Ala Ser Leu Ser Thr Phe 340 345 350 Gln Gln Met Trp Ile Ser Lys Gln Glu Tyr Asp Glu Asn Gly Pro Ser 355 360 365 Ile Val Tyr Arg Lys Cys Phe 370 375

【図面の簡単な説明】

【図１】ＰＣウイルスのアクチン様蛋白ｃＤＮＡの塩基
配列を含む塩基配列を示す。左端の番号は配列番号１〜
４に対応する。図７まで一連の配列である。

【図２】図１に同じ。

【図３】図１に同じ。

【図４】図１に同じ。

【図５】図１に同じ。

【図６】図１に同じ。

【図７】図１に同じ。

【図８】ＰＣウイルスアクチン様蛋白ｃＤＮＡをプロー
ブにして、カリニ肺炎ラット（図中ＰＣ）と、正常ラッ
ト（図中ＲＡＴ）の肺組織ＤＮＡを用いたサザンブロッ
トハイブリダイゼーションの結果を示す。EcoRＩ〜EcoR
Ｖ/SphＩは制限酵素名を示す。左端がサイズマーカー、
ｋｂはキロベースを表す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｑ 1/70 7823−4Ｂ Ｃ１２Ｑ 1/70 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｍ 33/566 33/566 33/569 33/569 Ｌ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） (72)発明者 宮平 靖 東京都新宿区信濃町35 慶応義塾大学内 (72)発明者 小松 直樹 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社コ スモ総合研究所研究開発センター内 (72)発明者 金子 隆司 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社コ スモ総合研究所研究開発センター内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ニューモシスチス・カリニウイルス遺伝
   子がコードするアクチン様蛋白質のアミノ酸配列の一部
   をコードする塩基配列を有した９２３〜１３９８個のヌ
   クレオチドを含有する一本鎖ＤＮＡ又は該一本鎖ＤＮＡ
   と相補ＤＮＡからなる二本鎖ＤＮＡ。
2. 【請求項２】 配列番号１〜４のいずれか１つであるこ
   とを特徴とする請求項１記載の一本鎖ＤＮＡ又は該一本
   鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡからなる二本鎖ＤＮＡ。
3. 【請求項３】 転写されたアミノ酸配列が配列番号５に
   て示される事を特徴とする請求項１記載の一本鎖ＤＮＡ
   又は該一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡからなる二本鎖ＤＮ
   Ａ。
4. 【請求項４】 配列番号５の２６６番目のアミノ酸がＩ
   ｌｅに置換されていることを特徴とする請求項３記載の
   一本鎖ＤＮＡ又は該一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡからなる
   二本鎖ＤＮＡ。
5. 【請求項５】 配列番号５または塩基配列の配列番号１
   〜４のＤＮＡから転写されたアミノ酸配列のいずれか１
   種以上からなることを特徴とするタンパク質組成物
6. 【請求項６】 請求項１のＤＮＡの一部をプローブとし
   て使用する事を特徴とするニューモシスチス・カリニウ
   イルスの検出法。