JPH09157128A - 化粧料 - Google Patents
化粧料Info
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- JPH09157128A JPH09157128A JP33989895A JP33989895A JPH09157128A JP H09157128 A JPH09157128 A JP H09157128A JP 33989895 A JP33989895 A JP 33989895A JP 33989895 A JP33989895 A JP 33989895A JP H09157128 A JPH09157128 A JP H09157128A
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- Japan
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- skin
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- cosmetic
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
- A61K8/27—Zinc; Compounds thereof
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- Birds (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 皮膚細胞に有害で皮膚の老化の引き金とさ
れる活性酸素（スーパーオキサイド）を皮膚表面から迅
速に除去分解するため、スーパーオキサイド・ジスムタ
ーゼ（ＳＯＤ）様活性物質を皮膚常在細菌叢に分泌促進
させる作用物質を含有する化粧料。すなわち、皮膚常在
細菌からのＳＯＤ様活性物質分泌促進性化粧料の提供を
目的とする。 【構成】 有用皮膚常在細菌の滋養成分であり、か
つ、常在菌由来ＳＯＤ様活性物質分泌促進性の成分であ
る、酸化亜鉛と塩化マンガンを適量含有する、皮膚に対
し、優しい、皮膚の酸化を間接的に抑制させる作用をも
つ化粧料。
れる活性酸素（スーパーオキサイド）を皮膚表面から迅
速に除去分解するため、スーパーオキサイド・ジスムタ
ーゼ（ＳＯＤ）様活性物質を皮膚常在細菌叢に分泌促進
させる作用物質を含有する化粧料。すなわち、皮膚常在
細菌からのＳＯＤ様活性物質分泌促進性化粧料の提供を
目的とする。 【構成】 有用皮膚常在細菌の滋養成分であり、か
つ、常在菌由来ＳＯＤ様活性物質分泌促進性の成分であ
る、酸化亜鉛と塩化マンガンを適量含有する、皮膚に対
し、優しい、皮膚の酸化を間接的に抑制させる作用をも
つ化粧料。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は本化粧料が、健全な皮膚
常在菌叢の維持・増進をはかり、その皮膚常在細菌が分
泌するＳＯＤ様活性物質を高めることにより皮膚に大敵
である皮膚表面の活性酸素を分解除去し、整肌、皮膚老
化防止に役立つ化粧料、皮膚外用剤としての利用が期待
される。
常在菌叢の維持・増進をはかり、その皮膚常在細菌が分
泌するＳＯＤ様活性物質を高めることにより皮膚に大敵
である皮膚表面の活性酸素を分解除去し、整肌、皮膚老
化防止に役立つ化粧料、皮膚外用剤としての利用が期待
される。
【０００２】
【従来の技術】生体にとって有害な活性酸素はＯ2を代
謝系に用いる生物に於いて恒常的に産生されるが、活性
酸素の一種であるスーパーオキサイドアニオン（Ｏ2 -)
の不均化反応を触媒するＳＯＤは代表的な抗酸化酵素で
あり、この酵素活性により細胞はその酸素傷害から守ら
れているといわれる。皮膚の健康科学においても、この
活性酸素が太陽光紫外線による皮膚脂質酸化に介在し、
皮膚老化の加速、また、肌のトラブルへの関与が注目さ
れ、ＳＯＤ活性物質の化粧料、或いは、皮膚外用剤への
応用が提案されてきた。（特開平1-96107）
謝系に用いる生物に於いて恒常的に産生されるが、活性
酸素の一種であるスーパーオキサイドアニオン（Ｏ2 -)
の不均化反応を触媒するＳＯＤは代表的な抗酸化酵素で
あり、この酵素活性により細胞はその酸素傷害から守ら
れているといわれる。皮膚の健康科学においても、この
活性酸素が太陽光紫外線による皮膚脂質酸化に介在し、
皮膚老化の加速、また、肌のトラブルへの関与が注目さ
れ、ＳＯＤ活性物質の化粧料、或いは、皮膚外用剤への
応用が提案されてきた。（特開平1-96107）
【０００３】しかし、動物、あるいは、植物、微生物か
ら精製される天然物由来ＳＯＤ、あるいは、ＤＮＡ組替
体由来ＳＯＤは、製造コストの上から、また、製剤の中
での保存安定性など品質管理上からも問題を残してい
た。
ら精製される天然物由来ＳＯＤ、あるいは、ＤＮＡ組替
体由来ＳＯＤは、製造コストの上から、また、製剤の中
での保存安定性など品質管理上からも問題を残してい
た。
【０００４】最近、皮膚表面に生息する皮膚常在細菌で
好気的に生育する菌は、酸素に強く、また、直接太陽の
紫外線をうけることから活性酸素に暴露されることが多
く高い抗酸化能をもっていることが示唆されている。実
際、代表的好気性常在細菌で最優勢菌スタフィロコッカ
ス・エピデルミデスは、その培養液、或いは、その培養
菌体破砕物が抗酸化性を示すことから、それらを配合す
る化粧品、外用剤の提案もなされている。（特開平6-27
1851）しかし、製剤としての不安定性において問題が残
っていた。
好気的に生育する菌は、酸素に強く、また、直接太陽の
紫外線をうけることから活性酸素に暴露されることが多
く高い抗酸化能をもっていることが示唆されている。実
際、代表的好気性常在細菌で最優勢菌スタフィロコッカ
ス・エピデルミデスは、その培養液、或いは、その培養
菌体破砕物が抗酸化性を示すことから、それらを配合す
る化粧品、外用剤の提案もなされている。（特開平6-27
1851）しかし、製剤としての不安定性において問題が残
っていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記のごとく、ＳＯＤ
あるいは培養抗酸化性物質を化粧料に直接配合すると、
臭いや色さらに使用時のＳＯＤ活性の保存安定性など品
質管理上の問題解決が課題として残っていた。このよう
にＳＯＤおよび抗酸化物質の整肌作用に永年注目されて
きたにもかかわらず化粧料への配合応用はまだ解決すべ
き点が多く残されている。本発明は、ＳＯＤ或いはＳＯ
Ｄ様活性物質を常に皮膚の上で安定的に発現確保できる
よう、直接化粧料に配合するのではなく、健常人の皮膚
上に最も多く生育している有用な皮膚常在菌のＳＯＤ活
性を効率よく分泌させる作用物質を配合することによ
り、皮膚の老化防止効果及び整肌作用を示す安価で安全
な皮膚抗酸化性化粧料を提供することにある。
あるいは培養抗酸化性物質を化粧料に直接配合すると、
臭いや色さらに使用時のＳＯＤ活性の保存安定性など品
質管理上の問題解決が課題として残っていた。このよう
にＳＯＤおよび抗酸化物質の整肌作用に永年注目されて
きたにもかかわらず化粧料への配合応用はまだ解決すべ
き点が多く残されている。本発明は、ＳＯＤ或いはＳＯ
Ｄ様活性物質を常に皮膚の上で安定的に発現確保できる
よう、直接化粧料に配合するのではなく、健常人の皮膚
上に最も多く生育している有用な皮膚常在菌のＳＯＤ活
性を効率よく分泌させる作用物質を配合することによ
り、皮膚の老化防止効果及び整肌作用を示す安価で安全
な皮膚抗酸化性化粧料を提供することにある。
【０００６】特に、健康なヒトの皮膚の上で好気性菌と
して最優勢のものは、スタフィロコッカス・エピデルミ
デスで1×104個/cm2程度で安定的常在皮膚細菌叢を形成
している。このスタフィロコッカス・エピデルミデスは
高い抗酸化能により皮膚表面に定着増殖し、ＳＯＤ様活
性物質を菌体外に分泌し、その結果紫外線などにより生
じた皮膚上のＯ2 -を消去して皮膚傷害を防止し、皮膚の
健康度を増し、他細菌の感染を防止する役割などを果た
していると考えられている。実際、アトピー性皮膚炎等
の傷害をもつ皮膚（荒れた肌）あるいは乾燥した肌では
皮膚細菌フローラのバランスが崩れ、スタフィロコッカ
ス・アウレウスやミクロコッカス属に属する有害菌が高
い割合で見られる。優勢菌としてのスタフィロコッカス
・エピデルミデスは、上記有害菌の増殖を抑制するの
で、軽度の皮膚傷害はスタフィロコッカス・エピデルミ
デスを選択的に増殖させることのできる化粧料を提供す
ることによって、病原菌の増殖を抑制し皮膚傷害の改善
効果を期待することも可能となる。
して最優勢のものは、スタフィロコッカス・エピデルミ
デスで1×104個/cm2程度で安定的常在皮膚細菌叢を形成
している。このスタフィロコッカス・エピデルミデスは
高い抗酸化能により皮膚表面に定着増殖し、ＳＯＤ様活
性物質を菌体外に分泌し、その結果紫外線などにより生
じた皮膚上のＯ2 -を消去して皮膚傷害を防止し、皮膚の
健康度を増し、他細菌の感染を防止する役割などを果た
していると考えられている。実際、アトピー性皮膚炎等
の傷害をもつ皮膚（荒れた肌）あるいは乾燥した肌では
皮膚細菌フローラのバランスが崩れ、スタフィロコッカ
ス・アウレウスやミクロコッカス属に属する有害菌が高
い割合で見られる。優勢菌としてのスタフィロコッカス
・エピデルミデスは、上記有害菌の増殖を抑制するの
で、軽度の皮膚傷害はスタフィロコッカス・エピデルミ
デスを選択的に増殖させることのできる化粧料を提供す
ることによって、病原菌の増殖を抑制し皮膚傷害の改善
効果を期待することも可能となる。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は上記問題を解決
するために鋭意研究を重ね、スタフィロコッカス・エピ
デルミデスの菌体外ＳＯＤ様比活性を高め、また貧栄養
培地においても金属イオンであるマンガンと亜鉛を添加
する事により同菌を短時間で増殖させ、長期間菌体外Ｓ
ＯＤ様活性物質を維持されることができることを見出し
本発明をするに至った。
するために鋭意研究を重ね、スタフィロコッカス・エピ
デルミデスの菌体外ＳＯＤ様比活性を高め、また貧栄養
培地においても金属イオンであるマンガンと亜鉛を添加
する事により同菌を短時間で増殖させ、長期間菌体外Ｓ
ＯＤ様活性物質を維持されることができることを見出し
本発明をするに至った。
【０００８】すなわち、本発明は皮膚上に常在するスタ
フィロコッカス・エピデルミデスを短期間で増殖させ、
菌体外ＳＯＤ様比活性を高めることのできる物質を配合
する化粧料である。また、この化粧料は、皮膚細菌叢の
正常化及びその菌体外分泌ＳＯＤ様活性物質の活性を高
めることによる整肌を達成する安定性の高い、安全な化
粧料である。本発明をよりよく説明するため、以下に実
施例を記述する。
フィロコッカス・エピデルミデスを短期間で増殖させ、
菌体外ＳＯＤ様比活性を高めることのできる物質を配合
する化粧料である。また、この化粧料は、皮膚細菌叢の
正常化及びその菌体外分泌ＳＯＤ様活性物質の活性を高
めることによる整肌を達成する安定性の高い、安全な化
粧料である。本発明をよりよく説明するため、以下に実
施例を記述する。
【０００９】（１）本発明の実効性を証明するため用い
る微生物は、以下の実施例に用いられたごとく、健常人
の皮膚に生息する代表的皮膚常在菌であるスタフィロコ
ッカス・エピデルミデスであるか、あるいは、皮膚有害
菌の代表としてスタフィロコッカス・アウレウス菌であ
る。しかし、本発明を実施するため用いる細菌は、皮膚
に存在する細菌として通過性のものも含めていずれの菌
種、菌株を問わず用いる事が出来る。
る微生物は、以下の実施例に用いられたごとく、健常人
の皮膚に生息する代表的皮膚常在菌であるスタフィロコ
ッカス・エピデルミデスであるか、あるいは、皮膚有害
菌の代表としてスタフィロコッカス・アウレウス菌であ
る。しかし、本発明を実施するため用いる細菌は、皮膚
に存在する細菌として通過性のものも含めていずれの菌
種、菌株を問わず用いる事が出来る。
【００１０】（２）本発明の実効性を証明するため用い
た培地は、通常の富栄養培地だけでなく、金属イオン要
求性を調べるため最小発育培地も用いた。すなわち、最
小発育培地では、エネルギー源としてグルコース及び酵
母エキスを添加し、pH調製のため炭酸カルシウムを添加
したものを基礎培地とした。細菌の金属要求性は知られ
ているが、あらかじめＳＯＤの活性中心となるマンガン
をはじめとする数種類の金属イオンについて基礎培地に
添加し、発育阻害の起こらない濃度を検討した。したが
って、本発明において用いる最小発育培地は細菌類の生
育可能な最少濃度の金属を添加したものと定義される。
た培地は、通常の富栄養培地だけでなく、金属イオン要
求性を調べるため最小発育培地も用いた。すなわち、最
小発育培地では、エネルギー源としてグルコース及び酵
母エキスを添加し、pH調製のため炭酸カルシウムを添加
したものを基礎培地とした。細菌の金属要求性は知られ
ているが、あらかじめＳＯＤの活性中心となるマンガン
をはじめとする数種類の金属イオンについて基礎培地に
添加し、発育阻害の起こらない濃度を検討した。したが
って、本発明において用いる最小発育培地は細菌類の生
育可能な最少濃度の金属を添加したものと定義される。
【００１１】（３）本発明の実効性を証明するため用い
た細菌の培養法は、上記菌株及び培地を用い、細菌を37
℃の好気的条件下でロータリーシェーカー（１２０rp
m）で培養した。
た細菌の培養法は、上記菌株及び培地を用い、細菌を37
℃の好気的条件下でロータリーシェーカー（１２０rp
m）で培養した。
【００１２】（４）本発明の実効性を証明するため用い
た試料調製法は、以下の通りである。まず、上記培地で
十分に発育した菌を、冷却高速遠心機（佐久間製作所
製）で10000rpm、１０分、４℃にて菌体と培養上清に分
離。ついで、培養上清のＳＯＤ活性測定にあたり以下の
ように濃縮した。培養上清に冷アセトンを最終濃度７５
％となるよう添加して−２０℃冷凍庫に静置し、形成し
た沈殿物を冷却遠心分離機によって分離回収し、少量の
精製水に溶解し凍結乾燥を行い、アセトン粉末試料を得
た。この粉末体を精製水で溶解したものを菌体外分泌性
成分試料とした。
た試料調製法は、以下の通りである。まず、上記培地で
十分に発育した菌を、冷却高速遠心機（佐久間製作所
製）で10000rpm、１０分、４℃にて菌体と培養上清に分
離。ついで、培養上清のＳＯＤ活性測定にあたり以下の
ように濃縮した。培養上清に冷アセトンを最終濃度７５
％となるよう添加して−２０℃冷凍庫に静置し、形成し
た沈殿物を冷却遠心分離機によって分離回収し、少量の
精製水に溶解し凍結乾燥を行い、アセトン粉末試料を得
た。この粉末体を精製水で溶解したものを菌体外分泌性
成分試料とした。
【００１３】（５）本発明の実効性を証明するため用い
たＳＯＤ様活性物質の測定として、ニトロブルーテトラ
ゾリウム（ＮＢＴ）法を用いた。この測定法は数ある測
定法の中で比較的簡便で、感度が高く、nｇオーダーま
で検出が可能である。キサンチンオキシダーゼによりＯ
2 -を発生させ、Ｏ2 -によるニトロブルーテトラゾリウム
の発色度を波長560nmの吸光度で測定するものである。
ＳＯＤの存在によりＯ2 -が不均化されるとＮＢＴの発色
阻害が起こり、この阻害率からＳＯＤ活性が求められ
る。この方法を用いて菌体外に分泌されるＳＯＤ様活性
物質が培養上清試料のアセトン濃縮処理と併せ用いるこ
とにより高い感度で測定が可能となった。
たＳＯＤ様活性物質の測定として、ニトロブルーテトラ
ゾリウム（ＮＢＴ）法を用いた。この測定法は数ある測
定法の中で比較的簡便で、感度が高く、nｇオーダーま
で検出が可能である。キサンチンオキシダーゼによりＯ
2 -を発生させ、Ｏ2 -によるニトロブルーテトラゾリウム
の発色度を波長560nmの吸光度で測定するものである。
ＳＯＤの存在によりＯ2 -が不均化されるとＮＢＴの発色
阻害が起こり、この阻害率からＳＯＤ活性が求められ
る。この方法を用いて菌体外に分泌されるＳＯＤ様活性
物質が培養上清試料のアセトン濃縮処理と併せ用いるこ
とにより高い感度で測定が可能となった。
【００１４】以下、実施例により本発明をさらに詳細に
説明する。しかし、本発明の範囲は以下の実施例に制限
されるものではない。
説明する。しかし、本発明の範囲は以下の実施例に制限
されるものではない。
【００１５】
【実施例】実験例１ スタフィロコッカス・エピデルミデスの発育
に及ぼす金属イオンの影響について： 一連の実験に用い
た基礎培地は、デイビス培地（リン酸水素二ナトリウム
１２水和物, 8ｇ;リン酸二水素カリウム, 2ｇ;クエン
酸ナトリウム, 0.5ｇ; 硫酸マグネシウム７水和物,
0.1ｇ; 硫酸アンモニア, 1ｇ; グルコース,0.5ｇ/蒸
留水 １リットル (ｐＨ７)）に酵母エキス 0.1％及び
炭酸カルシウムを1％添加したものを用いた。接種菌１
×１０5個/mlとし、培養は37℃の恒温槽で行った。実験
に用いた金属は硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、酸化
亜鉛、硫酸第一鉄であり、濃度はそれぞれ 100μＭ,1
ｍＭ,10ｍＭとし、培養開始前に添加した。24時間の培
養後標準寒天プレートに培養液を塗布し定法により生菌
数を計測した。その結果を表１に示す。
に及ぼす金属イオンの影響について： 一連の実験に用い
た基礎培地は、デイビス培地（リン酸水素二ナトリウム
１２水和物, 8ｇ;リン酸二水素カリウム, 2ｇ;クエン
酸ナトリウム, 0.5ｇ; 硫酸マグネシウム７水和物,
0.1ｇ; 硫酸アンモニア, 1ｇ; グルコース,0.5ｇ/蒸
留水 １リットル (ｐＨ７)）に酵母エキス 0.1％及び
炭酸カルシウムを1％添加したものを用いた。接種菌１
×１０5個/mlとし、培養は37℃の恒温槽で行った。実験
に用いた金属は硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、酸化
亜鉛、硫酸第一鉄であり、濃度はそれぞれ 100μＭ,1
ｍＭ,10ｍＭとし、培養開始前に添加した。24時間の培
養後標準寒天プレートに培養液を塗布し定法により生菌
数を計測した。その結果を表１に示す。
【表１】
【００１６】表１に示すごとく、塩化マンガン及び硫酸
亜鉛、酸化亜鉛、硫酸第一鉄に発育促進効果が見られ
た。
亜鉛、酸化亜鉛、硫酸第一鉄に発育促進効果が見られ
た。
【００１７】実験例２ 皮膚から分離した菌に対する酸
化亜鉛と塩化マンガンの生育促進及び阻害効果につい
て：実験例１においてスタフィロコッカス・エピデルミ
デス培養上清のＳＯＤ様活性物質を測定した結果、硫酸
亜鉛及び塩化マンガンを添加した実験群が対照群より高
い値を示したため、この２価金属イオンに注目した。こ
のとき硫酸亜鉛に対して化粧品に広く用いられている酸
化亜鉛を用い、硫酸第一鉄は酸化して変色し、皮膚に悪
影響を及ぼす可能性があるので除外した。したがって酸
化亜鉛及び塩化マンガンを添加した培地を用いてスタフ
ィロコッカス・エピデルミデスの増殖曲線を検討した。
両金属濃度は100μＭとし、接種菌量は１×１０6個/mｌ
とした。その結果を図１に示す。
化亜鉛と塩化マンガンの生育促進及び阻害効果につい
て：実験例１においてスタフィロコッカス・エピデルミ
デス培養上清のＳＯＤ様活性物質を測定した結果、硫酸
亜鉛及び塩化マンガンを添加した実験群が対照群より高
い値を示したため、この２価金属イオンに注目した。こ
のとき硫酸亜鉛に対して化粧品に広く用いられている酸
化亜鉛を用い、硫酸第一鉄は酸化して変色し、皮膚に悪
影響を及ぼす可能性があるので除外した。したがって酸
化亜鉛及び塩化マンガンを添加した培地を用いてスタフ
ィロコッカス・エピデルミデスの増殖曲線を検討した。
両金属濃度は100μＭとし、接種菌量は１×１０6個/mｌ
とした。その結果を図１に示す。
【００１８】図１に示すごとく、酸化亜鉛及び塩化マン
ガンとの混合物においてスタフィロコッカス・エピデル
ミデスの増殖率に顕著な増大が認められた。
ガンとの混合物においてスタフィロコッカス・エピデル
ミデスの増殖率に顕著な増大が認められた。
【００１９】また、スタフィロコッカス・エピデルミデ
ス以外の皮膚常在菌についても同様な実験を行った。代
表的なものとしてスタフィロコッカス・アウレウスIDD6
71株を用いて前述と同様な実験を行い、菌数の変化は波
長595nmの吸光度で測定した。結果は図２に示す。
ス以外の皮膚常在菌についても同様な実験を行った。代
表的なものとしてスタフィロコッカス・アウレウスIDD6
71株を用いて前述と同様な実験を行い、菌数の変化は波
長595nmの吸光度で測定した。結果は図２に示す。
【００２０】 図２に示すごとく、有害病原菌であるス
タフィロコッカス・アウレウスは、有用常在細菌スタフ
ィロコッカス・エピデルミデスと異なり、添加された酸
化亜鉛、塩化マンガンによって特段の生育促進は認めら
れず、また、阻害も認められなかった。
タフィロコッカス・アウレウスは、有用常在細菌スタフ
ィロコッカス・エピデルミデスと異なり、添加された酸
化亜鉛、塩化マンガンによって特段の生育促進は認めら
れず、また、阻害も認められなかった。
【００２１】実験例３ スタフィロコッカス・エピデル
ミデスの菌体外ＳＯＤ様活性に及ぼす酸化亜鉛、塩化マ
ンガンの影響：次に、実験例１で見出された菌体外ＳＯ
Ｄ様比活性の酸化亜鉛、塩化マンガンの添加で増加する
現象が培養時間と関係あるか以下のごとく調べた。培養
は実験例１と同様な条件で行い、ＳＯＤ様活性は時間経
過を追って測定した。各実験群につき試料数は３とし、
平均値と標準偏差を算出した。以下に実験例３の実験方
法についてさらに詳細説明する。
ミデスの菌体外ＳＯＤ様活性に及ぼす酸化亜鉛、塩化マ
ンガンの影響：次に、実験例１で見出された菌体外ＳＯ
Ｄ様比活性の酸化亜鉛、塩化マンガンの添加で増加する
現象が培養時間と関係あるか以下のごとく調べた。培養
は実験例１と同様な条件で行い、ＳＯＤ様活性は時間経
過を追って測定した。各実験群につき試料数は３とし、
平均値と標準偏差を算出した。以下に実験例３の実験方
法についてさらに詳細説明する。
【００２２】試料調製法：試料の調整は培養は100mlの
フラスコに50mlの培養液のスケールで行い、各時間毎に
5mlずつサンプリングした。培養液はただちに遠心分離
（10,000rpm,4℃,10分）して菌体と上清に分けた。集め
た上清を氷冷し、-20℃のアセトンを終濃度75%になるよ
うに攪拌しながら添加して氷冷中で2時間放置する。そ
のあと再び遠心分離（10,000rpm,4℃,10分）して沈澱物
を収集した。沈澱物を少量の精製水に溶解し、-80℃で
凍結させ凍結乾燥を行い、アセトンを除去する。得られ
た乾燥粉末を精製水で溶解したものをサンプルとして用
い、タンパク定量及びＳＯＤ様活性の測定を行った。
フラスコに50mlの培養液のスケールで行い、各時間毎に
5mlずつサンプリングした。培養液はただちに遠心分離
（10,000rpm,4℃,10分）して菌体と上清に分けた。集め
た上清を氷冷し、-20℃のアセトンを終濃度75%になるよ
うに攪拌しながら添加して氷冷中で2時間放置する。そ
のあと再び遠心分離（10,000rpm,4℃,10分）して沈澱物
を収集した。沈澱物を少量の精製水に溶解し、-80℃で
凍結させ凍結乾燥を行い、アセトンを除去する。得られ
た乾燥粉末を精製水で溶解したものをサンプルとして用
い、タンパク定量及びＳＯＤ様活性の測定を行った。
【００２３】タンパク定量法：タンパク質の定量にはLo
wry法を用いた。タンパク質を10〜100μｇを含む試料
0.4 mｌを試験管にとり、アルカリ銅溶液（1％硫酸銅1m
lと2％ロッシェル塩1mlの混合液を2％炭酸ナトリウム,
0.1Ｎ 水酸化ナトリウム 100mlに添加したもの）を2 ml
添加して攪拌し、室温で10分間放置する。その後直ちに
1Ｎフェノール試薬を0.2 ml添加攪拌した後、室温で30
分間放置する。30分後に 750 nm で比色定量した。牛血
清アルブミン(ＢＳＡ、SIGMA社製)を標準液とした。
wry法を用いた。タンパク質を10〜100μｇを含む試料
0.4 mｌを試験管にとり、アルカリ銅溶液（1％硫酸銅1m
lと2％ロッシェル塩1mlの混合液を2％炭酸ナトリウム,
0.1Ｎ 水酸化ナトリウム 100mlに添加したもの）を2 ml
添加して攪拌し、室温で10分間放置する。その後直ちに
1Ｎフェノール試薬を0.2 ml添加攪拌した後、室温で30
分間放置する。30分後に 750 nm で比色定量した。牛血
清アルブミン(ＢＳＡ、SIGMA社製)を標準液とした。
【００２４】ＳＯＤ様活性物質の測定法：試験管に試料
を50 μｌをとり ＸＯＤ（キサンチンオキシダーゼ）
液（ＸＯＤを0.5Ｍ硫酸アンモニウム,ＥＤＴＡ-２Ｎａ
1 mＭ溶液に溶解して-20℃に保存しておき、使用直前に
溶解し、1分あたりのＯＤ560nmの変化が0.0185になるよ
うに希釈したもの）を50μｌ添加し、攪拌せずに25℃水
浴下に10分間おく。25℃に加温しておいたＡ液（0.1 m
Ｍ キサンチン、 0.025 mＭ ニトロブルーテトラゾリ
ウム、 0.1 mＭ ＥＤＴＡ-２Ｎa、50 mＭ 炭酸ナトリウ
ム緩衝液(ｐＨ10.2)）を2.85 mｌ添加後、直ちに攪拌
し、25℃水浴下で5分間おいた後、塩化銅溶液（0.2％
ＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏ）を50μl添加して攪拌し、560nmで比
色定量する。対照には試料の代わりに精製水を添加し、
ブランクは試料及びＸＯＤ液を除いた0.2Ｍ硫酸アンモ
ニウム溶液のみで測定した。ＳＯＤ活性は吸光度変化が
50％阻害されるときを1単位（Ｕ）と定義し、以下の計
算式によって算出した。 SOD (U/ml)=[(対照ＯＤ - フ゛ランクＯＤ)/(試料ＯＤ - フ゛ラ
ンクＯＤ)-1]×20
を50 μｌをとり ＸＯＤ（キサンチンオキシダーゼ）
液（ＸＯＤを0.5Ｍ硫酸アンモニウム,ＥＤＴＡ-２Ｎａ
1 mＭ溶液に溶解して-20℃に保存しておき、使用直前に
溶解し、1分あたりのＯＤ560nmの変化が0.0185になるよ
うに希釈したもの）を50μｌ添加し、攪拌せずに25℃水
浴下に10分間おく。25℃に加温しておいたＡ液（0.1 m
Ｍ キサンチン、 0.025 mＭ ニトロブルーテトラゾリ
ウム、 0.1 mＭ ＥＤＴＡ-２Ｎa、50 mＭ 炭酸ナトリウ
ム緩衝液(ｐＨ10.2)）を2.85 mｌ添加後、直ちに攪拌
し、25℃水浴下で5分間おいた後、塩化銅溶液（0.2％
ＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏ）を50μl添加して攪拌し、560nmで比
色定量する。対照には試料の代わりに精製水を添加し、
ブランクは試料及びＸＯＤ液を除いた0.2Ｍ硫酸アンモ
ニウム溶液のみで測定した。ＳＯＤ活性は吸光度変化が
50％阻害されるときを1単位（Ｕ）と定義し、以下の計
算式によって算出した。 SOD (U/ml)=[(対照ＯＤ - フ゛ランクＯＤ)/(試料ＯＤ - フ゛ラ
ンクＯＤ)-1]×20
【００２５】その結果を表２に示す。
【表２】
【００２６】表２のごとく、酸化亜鉛及び塩化マンガン
を単独あるいは混合し添加すると、培養初期において顕
著な菌体外ＳＯＤ比活性の増大が認められる結果を得
た。
を単独あるいは混合し添加すると、培養初期において顕
著な菌体外ＳＯＤ比活性の増大が認められる結果を得
た。
【００２７】実施例１ 皮膚刺激性テスト（安全性につ
いて）：以上の結果にもとずいて、マンガン及び亜鉛を
配合した化粧料の刺激性テストを行った。 化粧料の配
合例として以下（表３）の溶液を濾紙に20μl浸み込ま
せ、成人男子（ｎ=1）の前腕内側部皮膚上にテープで閉
鎖貼布し、24時間後の皮膚刺激性について観察を行い、
表４に示す結果を得た。
いて）：以上の結果にもとずいて、マンガン及び亜鉛を
配合した化粧料の刺激性テストを行った。 化粧料の配
合例として以下（表３）の溶液を濾紙に20μl浸み込ま
せ、成人男子（ｎ=1）の前腕内側部皮膚上にテープで閉
鎖貼布し、24時間後の皮膚刺激性について観察を行い、
表４に示す結果を得た。
【００２８】
【表３】
【００２９】サンプル番号１，２は、マンガンと亜鉛の
配合剤及び炭酸カルシウムの刺激性について調べるた
め、サンプル番号３は対照として作成した。肉眼による
判定は、赤斑の観察及び刺激性は全く認められず安全性
になんら問題はなかった。
配合剤及び炭酸カルシウムの刺激性について調べるた
め、サンプル番号３は対照として作成した。肉眼による
判定は、赤斑の観察及び刺激性は全く認められず安全性
になんら問題はなかった。
【００３０】
【表４】
【００３１】次に、この発明にかかる化粧料の処方例を
例示する。配合割合はすべて重量％で示す。なお、この
発明は以下の処方例にかかる化粧料になんら限定されな
いのは言うまでもない。
例示する。配合割合はすべて重量％で示す。なお、この
発明は以下の処方例にかかる化粧料になんら限定されな
いのは言うまでもない。
【００３２】実施例２ 化粧水の組成
【表５】
【００３３】実施例３ カラミンローションの組成
【表６】
【００３４】実施例４ スキンローションの組成
【表７】
【００３５】実施例５ スキンクリームの組成
【表８】
【００３６】
【発明の効果】本発明による金属イオンの亜鉛とマンガ
ンを適量含有する化粧料を用いることにより、皮膚有用
常在細菌叢の健全な育成と菌体からのＳＯＤ様活性物質
分泌が促進され、皮膚有害菌の生育阻止、皮膚細胞の活
性酸素傷害防止、皮膚細胞老化防止などの効果が期待さ
れる。
ンを適量含有する化粧料を用いることにより、皮膚有用
常在細菌叢の健全な育成と菌体からのＳＯＤ様活性物質
分泌が促進され、皮膚有害菌の生育阻止、皮膚細胞の活
性酸素傷害防止、皮膚細胞老化防止などの効果が期待さ
れる。
【図１】スタフィロコッカス・エピデルミデスの発育に
及ぼす金属イオンの影響を示す図である。
及ぼす金属イオンの影響を示す図である。
【図２】スタフィロコッカス・アウレウスに対する酸化
亜鉛と塩化マンガンの生育促進及び阻害効果を示す図で
ある。
亜鉛と塩化マンガンの生育促進及び阻害効果を示す図で
ある。
Claims (4)
- 【請求項１】金属イオン 、金属塩 、金属物質の内の一
つ以上を含有することを特徴とする化粧料。 - 【請求項２】皮膚有用常在細菌叢の好気性最優勢菌スタ
フィロコッカス・エピデルミデスの発育を増進する作用
と、当該菌体が生産分泌するスーパーオキサイド・ジス
ムターゼ（ＳＯＤ）様活性物質を高める作用をもつ、金
属イオンであるマンガン、及び、亜鉛、あるいは、それ
らの塩、例えば、塩化マンガン、及び、酸化亜鉛、ある
いは、いずれか一つを微量含有することを特徴とする化
粧料。 - 【請求項３】前記マンガンイオンは、０．１〜１００ｍ
Ｍの濃度範囲であり、望ましくは、０．１〜１０ｍＭの
濃度範囲を含有する請求項２に記載の化粧料。 - 【請求項４】前記亜鉛イオンは、０．０１〜５ｍＭの濃
度範囲であり、望ましくは、０．１〜１ｍＭの濃度範囲
を含有する請求項２に記載の化粧料。
Priority Applications (2)
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|---|---|---|---|
| JP33989895A JP3608059B2 (ja) | 1995-12-05 | 1995-12-05 | 化粧料 |
| PCT/JP1996/003571 WO1997020539A1 (fr) | 1995-12-05 | 1996-12-05 | Preparation cosmetique |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33989895A JP3608059B2 (ja) | 1995-12-05 | 1995-12-05 | 化粧料 |
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|---|---|---|---|
| JP2004117240A Division JP3771242B2 (ja) | 2004-04-12 | 2004-04-12 | 化粧料 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09157128A true JPH09157128A (ja) | 1997-06-17 |
| JP3608059B2 JP3608059B2 (ja) | 2005-01-05 |
Family
ID=18331847
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33989895A Expired - Fee Related JP3608059B2 (ja) | 1995-12-05 | 1995-12-05 | 化粧料 |
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| Country | Link |
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| WO (1) | WO1997020539A1 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1155686A1 (fr) * | 2000-05-18 | 2001-11-21 | L'oreal | Utilisation du maganèse dans le traitement des rides |
| JP2002540126A (ja) * | 1999-03-26 | 2002-11-26 | パルファン クリスチァン ディオール | 肌細胞ｃｄ４４膜受容体の機能性及び／又は発現を増加するための物質を少なくとも１つ含有する化粧組成物又は皮膚科学組成物 |
| JP2005304363A (ja) * | 2004-04-20 | 2005-11-04 | Hakuto Co Ltd | 抗酸化物質分泌促進剤及び抗酸化物質の製造方法 |
| JP2011524884A (ja) * | 2008-06-20 | 2011-09-08 | アンバート ミレー イグナシオ | 皮膚炎疾患、たとえば、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、白斑、円形脱毛症、アクネ、乾癬、そう痒またはその組合せのようなものの処置のための皮膚科の製薬上の組成物 |
| WO2013073431A1 (ja) * | 2011-11-18 | 2013-05-23 | 株式会社バイオジェノミクス | 美容方法、スキンケア用組成物、菌体および乾燥菌体 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57134408A (en) * | 1981-02-13 | 1982-08-19 | Minato Sangyo Kk | Skin activating agent |
| JPS60174711A (ja) * | 1984-02-20 | 1985-09-09 | Kanebo Ltd | 日焼け止め化粧料 |
| JPS6339808A (ja) * | 1986-08-05 | 1988-02-20 | Risuburan Prod:Kk | ミネラル成分含有化粧品用組成物 |
| JPH0597645A (ja) * | 1991-10-09 | 1993-04-20 | Riyuuhoudou Seiyaku Kk | 化粧料 |
| JP3280062B2 (ja) * | 1992-04-14 | 2002-04-30 | 花王株式会社 | 撥水・撥油性粉体及びこれを含有する化粧料 |
| JP3614455B2 (ja) * | 1993-11-29 | 2005-01-26 | 東洋ビューティ株式会社 | 収斂・結着性化合物および医療用・化粧用製剤 |
-
1995
- 1995-12-05 JP JP33989895A patent/JP3608059B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-12-05 WO PCT/JP1996/003571 patent/WO1997020539A1/ja active Application Filing
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| JP2002540126A (ja) * | 1999-03-26 | 2002-11-26 | パルファン クリスチァン ディオール | 肌細胞ｃｄ４４膜受容体の機能性及び／又は発現を増加するための物質を少なくとも１つ含有する化粧組成物又は皮膚科学組成物 |
| JP4708571B2 (ja) * | 1999-03-26 | 2011-06-22 | パルファン クリスチァン ディオール | 肌細胞ｃｄ４４膜受容体の機能性及び／又は発現を増加するための物質を少なくとも１つ含有する化粧組成物又は皮膚科学組成物 |
| EP1155686A1 (fr) * | 2000-05-18 | 2001-11-21 | L'oreal | Utilisation du maganèse dans le traitement des rides |
| FR2809005A1 (fr) * | 2000-05-18 | 2001-11-23 | Oreal | Utilisation du manganese dans le traitement des rides |
| JP2005304363A (ja) * | 2004-04-20 | 2005-11-04 | Hakuto Co Ltd | 抗酸化物質分泌促進剤及び抗酸化物質の製造方法 |
| JP2011524884A (ja) * | 2008-06-20 | 2011-09-08 | アンバート ミレー イグナシオ | 皮膚炎疾患、たとえば、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、白斑、円形脱毛症、アクネ、乾癬、そう痒またはその組合せのようなものの処置のための皮膚科の製薬上の組成物 |
| WO2013073431A1 (ja) * | 2011-11-18 | 2013-05-23 | 株式会社バイオジェノミクス | 美容方法、スキンケア用組成物、菌体および乾燥菌体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3608059B2 (ja) | 2005-01-05 |
| WO1997020539A1 (fr) | 1997-06-12 |
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