JPH09124496A - 感染防御剤 - Google Patents
感染防御剤Info
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- JPH09124496A JPH09124496A JP7308359A JP30835995A JPH09124496A JP H09124496 A JPH09124496 A JP H09124496A JP 7308359 A JP7308359 A JP 7308359A JP 30835995 A JP30835995 A JP 30835995A JP H09124496 A JPH09124496 A JP H09124496A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】エンテロコッカス属に属する微生物の菌体又は
その処理物を有効成分として含有することを特徴とする
ウイルス感染防御剤。 【効果】ウイルス感染症、特にヘルペスウイルスに対し
て感染予防又は治療効果を有する。
その処理物を有効成分として含有することを特徴とする
ウイルス感染防御剤。 【効果】ウイルス感染症、特にヘルペスウイルスに対し
て感染予防又は治療効果を有する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、エンテロコッカス（En
terococcus）属に属する微生物の菌体又はその処理物を
含有することを特徴とするウイルス性感染症の感染防御
剤に関するものである。
terococcus）属に属する微生物の菌体又はその処理物を
含有することを特徴とするウイルス性感染症の感染防御
剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】伝染性を示す病気の原因菌の一つとし
て、ウイルスが存在する。ウイルス疾患は、インフルエ
ンザ、風疹、日本脳炎を始めとして多種類存在する。ウ
イルスの特徴として、ＤＮＡ又はＲＮＡのどちらか一方
の核酸を遺伝物質としていること、エネルギー代謝系も
タンパク合成系も持たないので、生きた細胞に寄生しな
いと増殖できないこと、抗生物質及び抗真菌剤が効かな
いことなどが挙げられる。
て、ウイルスが存在する。ウイルス疾患は、インフルエ
ンザ、風疹、日本脳炎を始めとして多種類存在する。ウ
イルスの特徴として、ＤＮＡ又はＲＮＡのどちらか一方
の核酸を遺伝物質としていること、エネルギー代謝系も
タンパク合成系も持たないので、生きた細胞に寄生しな
いと増殖できないこと、抗生物質及び抗真菌剤が効かな
いことなどが挙げられる。
【０００３】ウイルス感染による疾患が発症するには、
ウイルスの病原性の強さもさることながら、羅患した人
間の抵抗力の強弱によっても影響される。特に、病原性
の弱いウイルスの場合、健常人であれば、感染しても不
顕化して症状を示さないことが多いが、抗癌剤、免疫抑
制剤、ステロイド剤等の使用による、白血球を含む免疫
能の著しい低下を示す免疫不全状態のヒトが感染する
と、重篤な病状を示す例が多い。
ウイルスの病原性の強さもさることながら、羅患した人
間の抵抗力の強弱によっても影響される。特に、病原性
の弱いウイルスの場合、健常人であれば、感染しても不
顕化して症状を示さないことが多いが、抗癌剤、免疫抑
制剤、ステロイド剤等の使用による、白血球を含む免疫
能の著しい低下を示す免疫不全状態のヒトが感染する
と、重篤な病状を示す例が多い。
【０００４】ヘルペスウイルスは、ヒトを本来の宿主と
するウイルスで、健常人のキャリアも多い。初感染は、
不顕性の場合が多いが、三叉神経節に潜伏し、発熱、月
経、紫外線、及び過労などが誘発要因となって、回帰発
症を起こす。病原性の表現は、宿主の状態によって支配
されることが多く、感染像は多彩である。初感染及び回
帰発症で示される感染箇所は外胚葉系組織が主で、アフ
タ性口内炎、歯肉口内炎等の口腔粘膜、ヘルペス性角膜
炎、虹彩毛様体炎等の眼部、及び口唇ヘルペス等の皮膚
等の病状が見られる。しかし、通常の感染では、体内の
臓器が冒されることは稀である。ヘルペスウイルスは体
表が主な感染部位であるため、接触感染などによるウイ
ルスの伝搬が起こりやすい。
するウイルスで、健常人のキャリアも多い。初感染は、
不顕性の場合が多いが、三叉神経節に潜伏し、発熱、月
経、紫外線、及び過労などが誘発要因となって、回帰発
症を起こす。病原性の表現は、宿主の状態によって支配
されることが多く、感染像は多彩である。初感染及び回
帰発症で示される感染箇所は外胚葉系組織が主で、アフ
タ性口内炎、歯肉口内炎等の口腔粘膜、ヘルペス性角膜
炎、虹彩毛様体炎等の眼部、及び口唇ヘルペス等の皮膚
等の病状が見られる。しかし、通常の感染では、体内の
臓器が冒されることは稀である。ヘルペスウイルスは体
表が主な感染部位であるため、接触感染などによるウイ
ルスの伝搬が起こりやすい。
【０００５】ヘルペスウイルスは、宿主となるヒトの健
康状態によって、感染像が変化するため、各種疾患、薬
剤による副作用等で感染防御の免疫力が低下したヒトが
羅患すると重症化し、全身感染や脳炎を起こし、時には
致死的となる。また、医療機関での感染や母子間などの
垂直感染、水平感染も問題となっている。
康状態によって、感染像が変化するため、各種疾患、薬
剤による副作用等で感染防御の免疫力が低下したヒトが
羅患すると重症化し、全身感染や脳炎を起こし、時には
致死的となる。また、医療機関での感染や母子間などの
垂直感染、水平感染も問題となっている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ウイルス性感染症の治
療には、抗ウイルス剤が用いられている。抗ウイルス剤
の主流はヌクレオシド誘導体で、ビダラビン（Vidarabi
ne:Ara-A）、アシクロビル（Aciclovir:ACV）、イドク
スウリジン（Idoxuridine:ID）をはじめとして、何種類
かの薬剤が使用されている。これらの薬剤は、体内で代
謝され、その代謝物がウイルスのＤＮＡに取り込まれる
ことによって、ウイルスＤＮＡの合成を阻害したり、Ａ
ＤＰからｄ−ＡＤＰの変換を阻害する作用を有する。薬
剤の種類やＤＮＡ合成の阻害場所によっては、宿主の細
胞にも障害作用を示す。薬剤によっては、元々抗癌剤と
して開発されたが、抗ウイルス剤として効果が見出さ
れ、転用されているため、抗癌剤と類似の副作用が出現
し、重症感染時の全身投与に不向きなものもある。抗ウ
イルス剤共通のものとして、ショック症状、赤血球・白
血球減少、振戦、及び肝機能数値異常等の副作用が知ら
れている。薬剤によっては、他の種類の薬剤と併用する
ことによって、重篤な副作用を生じるものもある。ま
た、抗ウイルス剤の薬効が強力になるにつれて、薬剤耐
性ウイルスも増えてきている。ウイルスの中でも抗ウイ
ルス剤に良く反応し、効果があるといわれるヘルペスウ
イルスにも、ＩＤ耐性株やＡＣＶ耐性株であるチミジン
キナーゼ欠損株等、徐々に薬剤耐性ウイルスが出現して
いる。したがって、感染防御作用が強く、且つ、薬剤耐
性菌の出現や副作用がない予防又は治療剤が求められて
いる。
療には、抗ウイルス剤が用いられている。抗ウイルス剤
の主流はヌクレオシド誘導体で、ビダラビン（Vidarabi
ne:Ara-A）、アシクロビル（Aciclovir:ACV）、イドク
スウリジン（Idoxuridine:ID）をはじめとして、何種類
かの薬剤が使用されている。これらの薬剤は、体内で代
謝され、その代謝物がウイルスのＤＮＡに取り込まれる
ことによって、ウイルスＤＮＡの合成を阻害したり、Ａ
ＤＰからｄ−ＡＤＰの変換を阻害する作用を有する。薬
剤の種類やＤＮＡ合成の阻害場所によっては、宿主の細
胞にも障害作用を示す。薬剤によっては、元々抗癌剤と
して開発されたが、抗ウイルス剤として効果が見出さ
れ、転用されているため、抗癌剤と類似の副作用が出現
し、重症感染時の全身投与に不向きなものもある。抗ウ
イルス剤共通のものとして、ショック症状、赤血球・白
血球減少、振戦、及び肝機能数値異常等の副作用が知ら
れている。薬剤によっては、他の種類の薬剤と併用する
ことによって、重篤な副作用を生じるものもある。ま
た、抗ウイルス剤の薬効が強力になるにつれて、薬剤耐
性ウイルスも増えてきている。ウイルスの中でも抗ウイ
ルス剤に良く反応し、効果があるといわれるヘルペスウ
イルスにも、ＩＤ耐性株やＡＣＶ耐性株であるチミジン
キナーゼ欠損株等、徐々に薬剤耐性ウイルスが出現して
いる。したがって、感染防御作用が強く、且つ、薬剤耐
性菌の出現や副作用がない予防又は治療剤が求められて
いる。
【０００７】
【課題を解決するための手段】ウイルスの侵入を受けた
生体は、ウイルスを異物とみなし、免疫系を主体とする
生体の防御機構によりウイルスの排除、消滅を行う。マ
クロファージのウイルス細胞取り込みやインターフェロ
ン（interferon:IFN）に代表される非特異的防御反応、
Ｂ細胞による抗体産生やＴ細胞で感染細胞を攻撃する特
異的防御反応の二種類の反応で発病を防いでいる。
生体は、ウイルスを異物とみなし、免疫系を主体とする
生体の防御機構によりウイルスの排除、消滅を行う。マ
クロファージのウイルス細胞取り込みやインターフェロ
ン（interferon:IFN）に代表される非特異的防御反応、
Ｂ細胞による抗体産生やＴ細胞で感染細胞を攻撃する特
異的防御反応の二種類の反応で発病を防いでいる。
【０００８】本発明者らはエンテロコッカス属に属する
微生物、特にエンテロコッカス・フェカリスの菌体又
は、その処理物が、ウイルス増殖の干渉因子であるＩＦ
Ｎ産生誘導能を示すことに着目し、種々の研究を重ねた
結果、感染防御効果を示すことをみいだし、本発明を完
成させた。又、本発明剤に使用される菌種は、健常者の
腸内から分離された乳酸菌の一種であるので、副作用の
無い安全な菌種である。
微生物、特にエンテロコッカス・フェカリスの菌体又
は、その処理物が、ウイルス増殖の干渉因子であるＩＦ
Ｎ産生誘導能を示すことに着目し、種々の研究を重ねた
結果、感染防御効果を示すことをみいだし、本発明を完
成させた。又、本発明剤に使用される菌種は、健常者の
腸内から分離された乳酸菌の一種であるので、副作用の
無い安全な菌種である。
【０００９】エンテロコッカス・フェカリス菌は、レン
サ球菌に属し、腸内に存在する常在菌の一種である（Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology. 2(198
6)）。本発明においてはこの菌種に属する種々の菌株を
用いることができるが、特に感染防御効果が高い点にお
いて、ＮＦ−１０１１菌株を用いることが好ましい。該
菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
１２５６４号として寄託されている。
サ球菌に属し、腸内に存在する常在菌の一種である（Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology. 2(198
6)）。本発明においてはこの菌種に属する種々の菌株を
用いることができるが、特に感染防御効果が高い点にお
いて、ＮＦ−１０１１菌株を用いることが好ましい。該
菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
１２５６４号として寄託されている。
【００１０】以下にエンテロコッカス・フェカリスＮＦ
−１０１１の分離手段及び同菌株の菌学的及び生理学的
性質を示す。
−１０１１の分離手段及び同菌株の菌学的及び生理学的
性質を示す。
【００１１】（１）分離手段 健常者の糞便の加熱滅菌水による１０倍希釈物を適切な
選択培地（ＫＭＮ寒天平板及びＳＦ寒天平板）に塗抹
し、好気条件下３７℃で、４８〜７２時間培養し、菌集
落を出現させた。この菌集落を別の同種平板培地に画線
塗布し、同様に培養して菌集落を再び出現させた。同様
の操作を数回繰り返し、単一の菌種だけからなる単一集
落を分離した。この新分離菌株について、菌学的（形態
的、生化学的及び血清学的）性状を調べ、エンテロコッ
カス・フェカリス（Enterococcusfaecalis）に属すると
分類同定した。
選択培地（ＫＭＮ寒天平板及びＳＦ寒天平板）に塗抹
し、好気条件下３７℃で、４８〜７２時間培養し、菌集
落を出現させた。この菌集落を別の同種平板培地に画線
塗布し、同様に培養して菌集落を再び出現させた。同様
の操作を数回繰り返し、単一の菌種だけからなる単一集
落を分離した。この新分離菌株について、菌学的（形態
的、生化学的及び血清学的）性状を調べ、エンテロコッ
カス・フェカリス（Enterococcusfaecalis）に属すると
分類同定した。
【００１２】 （２）菌学的及び生理学的性質 ──────────────────────────── 性状 判定 ──────────────────────────── グラム染色性 ＋ 菌形態 球形 カタラーゼ − 溶血性 α 血清群 Ｄ 増殖性 １０℃ ＋ ４５℃ ＋ ５０℃ ＋ 熱耐性 ６０℃ ３０分 ＋ 胆汁エスクリン添加培地での生育 ＋ ｐＨ９．６培地での生育 ＋ ６．５％食塩添加培地での生育 ＋ メチレンブルー染色性 ＋ ゼラチン液化 − ０．０１％ＴＴＣ添加培地での生育 ＋ テルライト添加培地での生育 ＋ 酸生成の有無 グリセロール ＋ Ｌ−アラビノース − Ｄ−リボース ＋ Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｄ−マンノース ＋ マルトース ＋ マンニトール ＋ シュクロース ＋ Ｌ−ソルボース − Ｄ−ソルビトール ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ラクトース ＋ アミグダリン ＋ エスクリン ＋ セロビオース ＋ メリビオース − イヌリン − メレジトース ＋ ──────────────────────────── ＋；陽性、−；陰性 ＴＴＣ；２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド
【００１３】本発明に使用するエンテロコッカス・フェ
カリス菌は死菌体又は生菌体、或いは菌体を磨砕、水抽
出などの処理をしたものを用いることができる。これら
を製剤するにはデンプン、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦
形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯具剤等
の添加物を用いて周知の方法で錠剤や顆粒剤に製剤され
る。
カリス菌は死菌体又は生菌体、或いは菌体を磨砕、水抽
出などの処理をしたものを用いることができる。これら
を製剤するにはデンプン、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦
形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯具剤等
の添加物を用いて周知の方法で錠剤や顆粒剤に製剤され
る。
【００１４】使用量は、症状、年齢等により異なるが、
有効成分として１日0.002〜0.1g/kg体重を通常成人に対
して１日１回又は数回に分けて投与することができる。
有効成分として１日0.002〜0.1g/kg体重を通常成人に対
して１日１回又は数回に分けて投与することができる。
【００１５】実施例２に示したように本菌によって、Ｉ
ＦＮ−β及びＩＦＮ−γの産生が高まることが示されて
いる。このことによって、正常細胞の抗ウイルス状態へ
の誘導及びヘルパーＴ細胞依存性の免疫活性能を高めて
いることが示唆される。
ＦＮ−β及びＩＦＮ−γの産生が高まることが示されて
いる。このことによって、正常細胞の抗ウイルス状態へ
の誘導及びヘルパーＴ細胞依存性の免疫活性能を高めて
いることが示唆される。
【００１６】
【実施例】以下実施例を示すが、本発明はこれらの実施
例の記載によって何ら制限されるものではない。
例の記載によって何ら制限されるものではない。
【００１７】実施例１．（エンテロコッカスの培養） エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecali
s）ＮＦ−１０１１を、代表的培地として以下に示す組
成のロゴサ液体培地に接種し、（菌数：１０6個/ml）、
３７℃で１０〜１６時間培養し、生菌数約１０9個/mlの
培養液を得た。得られた培養液を12,000rpmで２０分間
遠心分離して集菌し、蒸留水で２回洗浄して菌体を得
た。この菌体を蒸留水で懸濁し、１１０℃で１０分間加
熱して死菌体懸濁液を得た。次に、熱風乾燥法あるいは
凍結乾燥法等適当な方法で乾燥処理し、乾燥死菌体（以
下菌体標品）を得た。
s）ＮＦ−１０１１を、代表的培地として以下に示す組
成のロゴサ液体培地に接種し、（菌数：１０6個/ml）、
３７℃で１０〜１６時間培養し、生菌数約１０9個/mlの
培養液を得た。得られた培養液を12,000rpmで２０分間
遠心分離して集菌し、蒸留水で２回洗浄して菌体を得
た。この菌体を蒸留水で懸濁し、１１０℃で１０分間加
熱して死菌体懸濁液を得た。次に、熱風乾燥法あるいは
凍結乾燥法等適当な方法で乾燥処理し、乾燥死菌体（以
下菌体標品）を得た。
【００１８】ロゴサ液体培地の組成を示す。 トリプチケース １０ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトース ３ｇ リン酸一カリウム ３ｇ リン酸二カリウム ３ｇ クエン酸三アンモニウム ２ｇ ツイーン８０（界面活性剤） １ｇ グルコース ２０ｇ システイン塩酸塩 ０．２ｇ 塩類溶液（１のとおり） ５ｍｌ 蒸留水 １０００ｍｌ （ｐＨ７．０に調整、１２１℃で１５分間加熱滅菌） （１）塩類溶液：ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １１．５ｇ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．６８ｇ ＭｎＳＯ4・２Ｈ2Ｏ ２．４ｇ 蒸留水 １００ｍｌ
【００１９】実施例２．ＩＦＮ活性の測定 （１）マウス脾細胞の調製 C3H/He N系のマウス（雌性６〜１２週齢）の脾臓を無菌
的に取り出し、5%FCS−RPMI 1640培地（以下培養液）の
入った培養皿に移し、はさみで細片にした後、ナイロン
メッシュを通して遠心管へ移した。この細胞懸濁液を遠
心分離（1,200rpm）し、沈殿した細胞を赤血球除去用ト
リス緩衝液に懸濁、再び遠心分離を行い、沈殿した細胞
を培養液に懸濁した。この細胞懸濁液の、脾細胞数が５
×１０6〜１×１０7個／mlになるように調整した。
的に取り出し、5%FCS−RPMI 1640培地（以下培養液）の
入った培養皿に移し、はさみで細片にした後、ナイロン
メッシュを通して遠心管へ移した。この細胞懸濁液を遠
心分離（1,200rpm）し、沈殿した細胞を赤血球除去用ト
リス緩衝液に懸濁、再び遠心分離を行い、沈殿した細胞
を培養液に懸濁した。この細胞懸濁液の、脾細胞数が５
×１０6〜１×１０7個／mlになるように調整した。
【００２０】（２）ＩＦＮ液の調製 ２群のC3H/He N系のマウス（雌性８週齢）の各々にシク
ロホスファミド（Cyclophosphamide:エンドキサン:シオ
ノギ製薬）200mg/kg体重を腹腔内に投与し、一方の群に
は翌日から３日間連続して実施例１で得た菌体標品を経
口投与の場合で2.4mg/g体重、腹腔内投与の場合で4.0μ
g/g体重になるように各々投与した。他方の対照群マウ
スには生理的食塩水を同様に投与した。次に（１）の方
法でマウス脾細胞懸濁液を調製し、これにＩＦＮインデ
ューサーとしてのＬＰＳを1μg/ml、又は、ＰＨＡ−Ｐ
を10μg/mlになるように添加し、ＣＯ2インキュベータ
ー内で２０時間培養して、得られた遠心上清をＩＦＮ液
として実験に使用した。
ロホスファミド（Cyclophosphamide:エンドキサン:シオ
ノギ製薬）200mg/kg体重を腹腔内に投与し、一方の群に
は翌日から３日間連続して実施例１で得た菌体標品を経
口投与の場合で2.4mg/g体重、腹腔内投与の場合で4.0μ
g/g体重になるように各々投与した。他方の対照群マウ
スには生理的食塩水を同様に投与した。次に（１）の方
法でマウス脾細胞懸濁液を調製し、これにＩＦＮインデ
ューサーとしてのＬＰＳを1μg/ml、又は、ＰＨＡ−Ｐ
を10μg/mlになるように添加し、ＣＯ2インキュベータ
ー内で２０時間培養して、得られた遠心上清をＩＦＮ液
として実験に使用した。
【００２１】（３）ＣＰＥ（細胞変性効果）阻止法によ
るＩＦＮの力価測定 ９６ウエル平底プレートに、あらかじめ５×１０5個／m
lに調製したＬ929細胞を添加し、ＣＯ2インキュベータ
ー内で６時間培養して、プレートに細胞を付着させた。
これに（２）で調製したＩＦＮ液を添加して、ＣＯ2イ
ンキュベーター内で１６時間培養した後上清を捨て、ve
sicular stomatitis virus（ＶＳＶ）を2,500PFU／ウエ
ル添加し、さらに４８時間培養した。培養終了後上清を
捨て、ＶＳＶによって変性剥離した細胞を除去した後、
ＩＦＮの抗ウイルス効果により、ＶＳＶで変性させられ
ることなく付着したまま残った細胞をクリスタルバイオ
レットで染色し、620nmでの吸光度を測定した。結果を
表１に示す。実施例１で得た菌体標品を経口投与、又
は、腹腔内投与することによって、ＩＦＮ産生が著しく
増強された。
るＩＦＮの力価測定 ９６ウエル平底プレートに、あらかじめ５×１０5個／m
lに調製したＬ929細胞を添加し、ＣＯ2インキュベータ
ー内で６時間培養して、プレートに細胞を付着させた。
これに（２）で調製したＩＦＮ液を添加して、ＣＯ2イ
ンキュベーター内で１６時間培養した後上清を捨て、ve
sicular stomatitis virus（ＶＳＶ）を2,500PFU／ウエ
ル添加し、さらに４８時間培養した。培養終了後上清を
捨て、ＶＳＶによって変性剥離した細胞を除去した後、
ＩＦＮの抗ウイルス効果により、ＶＳＶで変性させられ
ることなく付着したまま残った細胞をクリスタルバイオ
レットで染色し、620nmでの吸光度を測定した。結果を
表１に示す。実施例１で得た菌体標品を経口投与、又
は、腹腔内投与することによって、ＩＦＮ産生が著しく
増強された。
【００２２】
【表１】 ────────────────────────────── ＩＦＮの力価（IU/ml） ＬＰＳ ＰＨＡ−Ｐ ────────────────────────────── 生理的食塩水 253.0± 58.4 65.1±52.7 （対照） ────────────────────────────── NF-1011菌体標品 419.9± 98.7* 153.4±79.9* 経口投与 ────────────────────────────── NF-1011菌体標品 281.5±143.2 251.3±91.7* 腹腔内投与 ────────────────────────────── *:p<0.05（対照値に対して有意差あり）
【００２３】（４）ＩＦＮのクラス測定 ９６ウエル平底プレートに、あらかじめ５×１０5個／m
lに調製したＬ929細胞を添加し、ＣＯ2インキュベータ
ー内で６時間培養して、プレートに細胞を付着させた。
これに（２）で調製したＩＦＮ液および抗ＩＦＮ−α抗
体、抗ＩＦＮ−β抗体（共にヤマサ醤油）、抗ＩＦＮ−
γ抗体（Genzyme社）を添加して、ＣＯ2インキュベータ
ー内で１６時間培養した後上清を捨て、ＶＳＶを2,500P
FU／ウエル添加し、さらに４８時間培養した。培養終了
後上清を捨て、ＶＳＶによって変性剥離した細胞を除去
した後、付着したまま残った細胞をクリスタルバイオレ
ットで染色し、620nmでの吸光度を測定した。
lに調製したＬ929細胞を添加し、ＣＯ2インキュベータ
ー内で６時間培養して、プレートに細胞を付着させた。
これに（２）で調製したＩＦＮ液および抗ＩＦＮ−α抗
体、抗ＩＦＮ−β抗体（共にヤマサ醤油）、抗ＩＦＮ−
γ抗体（Genzyme社）を添加して、ＣＯ2インキュベータ
ー内で１６時間培養した後上清を捨て、ＶＳＶを2,500P
FU／ウエル添加し、さらに４８時間培養した。培養終了
後上清を捨て、ＶＳＶによって変性剥離した細胞を除去
した後、付着したまま残った細胞をクリスタルバイオレ
ットで染色し、620nmでの吸光度を測定した。
【００２４】ＬＰＳ刺激時に産生されたＩＦＮ約300IU/
mlは、抗ＩＦＮ−βによって、検出レベル以下になっ
た。ＰＨＡ刺激によって産生されたＩＦＮ約100IU/ml
は、抗ＩＦＮ−βによって、約40IU/mlに、抗ＩＦＮ−
γによって、約60IU/mlに低下した。このことより、Ｐ
ＨＡの刺激時はＩＦＮ−βが、ＬＰＳの刺激時はＩＦＮ
−β及びＩＦＮ−γの産生の増強がおきることが明らか
となった。
mlは、抗ＩＦＮ−βによって、検出レベル以下になっ
た。ＰＨＡ刺激によって産生されたＩＦＮ約100IU/ml
は、抗ＩＦＮ−βによって、約40IU/mlに、抗ＩＦＮ−
γによって、約60IU/mlに低下した。このことより、Ｐ
ＨＡの刺激時はＩＦＮ−βが、ＬＰＳの刺激時はＩＦＮ
−β及びＩＦＮ−γの産生の増強がおきることが明らか
となった。
【００２５】実施例３．（易感染モデルマウスにおける
単純ヘルペスウイルス感染に対する防御） C3H/He Nマウス（日本ＳＬＣ）８週齢、雌性を１群９匹
（菌体腹腔内投与群のみ６匹）で使用した。マウスの感
染防御力を低下させるために、シクロホスファミド200m
g/kg体重を腹腔内に投与した。翌日から３日間、実施例
１で調製した菌体標品20mg相当量をマウスに胃ゾンデに
よる経口投与並びに腹腔内に投与した。対照群には生理
的食塩水を経口投与した。
単純ヘルペスウイルス感染に対する防御） C3H/He Nマウス（日本ＳＬＣ）８週齢、雌性を１群９匹
（菌体腹腔内投与群のみ６匹）で使用した。マウスの感
染防御力を低下させるために、シクロホスファミド200m
g/kg体重を腹腔内に投与した。翌日から３日間、実施例
１で調製した菌体標品20mg相当量をマウスに胃ゾンデに
よる経口投与並びに腹腔内に投与した。対照群には生理
的食塩水を経口投与した。
【００２６】シクロホスファミド投与から４日後、Herp
es simplex virus-1 Miyama株（ＨＳＶ−１：チミジン
キナーゼ発現型(CG+)）1.5×104PFU／マウスを、尾静脈
内に接種した。以後２０日間にわたって、マウスの生死
を対照動物群と比較した。結果を表２に示す。菌体経口
投与群および菌体腹腔内投与群は、ＨＳＶ−１接種後２
０日の時点で対照群と比較して、有意（p<0.05）に高い
生存率を示した。
es simplex virus-1 Miyama株（ＨＳＶ−１：チミジン
キナーゼ発現型(CG+)）1.5×104PFU／マウスを、尾静脈
内に接種した。以後２０日間にわたって、マウスの生死
を対照動物群と比較した。結果を表２に示す。菌体経口
投与群および菌体腹腔内投与群は、ＨＳＶ−１接種後２
０日の時点で対照群と比較して、有意（p<0.05）に高い
生存率を示した。
【００２７】
【表２】 ──────────────────────────────────── ＨＳＶ−１接種後の日数 ───────────────────────── 0 6 7 8 9 10 11 20 ──────────────────────────────────── 対照群 9/9a) 4/9 1/9 1/9 0/9 0/9 0/9 0/9 菌体腹腔内投与群 6/6 4/6 4/6 3/6 3/6 3/6 3/6 3/6* 菌体経口投与群群 9/9 6/9 6/9 6/9 6/9 5/9 4/9 4/9* ──────────────────────────────────── a)；生存率（生存匹数／１群匹数） *:p<0.05（対照値に対して有意差あり）
【００２８】実施例４．（製剤例） （１）実施例１で得た死菌体菌末１５０ｍｇを精製でん
ぷん末１５０ｍｇ及び乳糖７００ｍｇと混合して錠剤又
は顆粒剤にする。
ぷん末１５０ｍｇ及び乳糖７００ｍｇと混合して錠剤又
は顆粒剤にする。
【００２９】（２）実施例１で得た死菌体菌末３００ｍ
ｇを大豆タンパク３００ｍｇ及び乳糖４００ｍｇと混合
して錠剤又は顆粒剤にする。
ｇを大豆タンパク３００ｍｇ及び乳糖４００ｍｇと混合
して錠剤又は顆粒剤にする。
【００３０】
【発明の効果】ヘルペスウイルスに代表されるウイルス
感染症、とりわけ薬剤投与などによる免疫不全による感
染防御能の低下に対して予防又は治療効果を有する。
感染症、とりわけ薬剤投与などによる免疫不全による感
染防御能の低下に対して予防又は治療効果を有する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山口 英世 神奈川県川崎市多摩区栗谷２丁目15番５号
Claims (3)
- 【請求項１】エンテロコッカス属に属する菌体を有効成
分とするウイルス性感染症の感染防御剤 - 【請求項２】ウイルスが単純ヘルペスウイルス（herpes
simplex virus）である請求項１記載の感染防御剤 - 【請求項３】エンテロコッカス属に属する菌体がエンテ
ロコッカス・フェカリスＮＦ−１０１１である請求項１
記載の感染防御剤
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7308359A JPH09124496A (ja) | 1995-10-31 | 1995-10-31 | 感染防御剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7308359A JPH09124496A (ja) | 1995-10-31 | 1995-10-31 | 感染防御剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09124496A true JPH09124496A (ja) | 1997-05-13 |
Family
ID=17980122
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7308359A Pending JPH09124496A (ja) | 1995-10-31 | 1995-10-31 | 感染防御剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09124496A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10139674A (ja) * | 1996-11-11 | 1998-05-26 | Yakult Honsha Co Ltd | インターロイキン１２産生促進剤 |
| JPH1192389A (ja) * | 1997-09-17 | 1999-04-06 | Nichinichi Seiyaku Kk | 免疫賦活剤 |
| JP2003063991A (ja) * | 2001-08-28 | 2003-03-05 | Japan Science & Technology Corp | 経口用サイトカイン誘導剤 |
| WO2009005123A1 (ja) * | 2007-07-03 | 2009-01-08 | Kikkoman Corporation | インターフェロンβ産生促進剤及びその製造法 |
| US8334371B2 (en) | 2007-07-04 | 2012-12-18 | Kikkoman Corporation | Lactic acid bacteria-derived double-stranded RNA |
| WO2017082181A1 (ja) * | 2015-11-10 | 2017-05-18 | キリン株式会社 | 乳酸菌の免疫賦活作用を増強する方法 |
| CN108845144A (zh) * | 2017-12-05 | 2018-11-20 | 安徽九川生物科技有限公司 | 一种猪干扰素α生物学活性检测方法 |
-
1995
- 1995-10-31 JP JP7308359A patent/JPH09124496A/ja active Pending
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