JPH089548B2 - プロドラツグ化合物、その製造法およびそれを含有する持続性製剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は医薬品の新規なプロドラッグ化合物、その
製造法およびそれを含有する持続性製剤に関するもので
ある。

［従来の技術］ 生体内における薬物の徐放化を目的として種々の分子
内修飾を行なったいわゆるプロドラッグが検討されてお
り、例えば抗腫瘍剤である５−フルオロウラシル と、コレステロールとをスペーサー ［−CONH（CH₂）₅CO−］ を介して結合したプロドラッグ が合成され、これをリポソームに取り込ませることによ
り、緩衝液中で親化合物である５−フルオロウラシルに
徐々に変換できることが知られている（日本薬学会第10
5年会講演要旨集（1985年）、演題No.5W1−24、題名：
コレステロールをキャリアーとする５−FUプロドラッグ
の合成とその脂質分散系製剤への応用）。

また、抗腫瘍剤であるマイトマシンＣ についても上記と同様にスペーサー［−CO−］を介して
コレステロールと結合したマイトマイシンＣ誘導体であ
るコレステリルオキシカルボニルマイトマイシンＣ の合成が試みられている［ケミカル・アンド・ファーマ
シューティカル・ブレチン（Chem.Pharm.Bull.）31（1
1）4083−4090（1983）］。

［発明が解決しようとする問題点］ 上記のマイトマイシンＣの誘導体では、化学的および
酸素的加水分解に対するマイトマイシンＣとコレステロ
ールの結合の安定性のために親化合物であるマイトマイ
シンＣにほとんど変換できないという問題点があった。

［問題点を解決するための手段］ この発明の発明者らは上記のような問題点を克服する
目的で鋭意研究した結果、マイトマイシンＣをステロイ
ド化合物と種々の新規なスペーサーを介して結合させた
誘導体を合成することにより、このプロドラッグを生体
に投与した場合に血中で親化合物であるマイトマイシン
Ｃに徐々に変換され、さらにこのプロドラッグをリポソ
ームに取り込ませたリポソーム製剤とすることにより、
リポソーム中へのその誘導体の取り込みがマイトマイシ
ンＣへの変換速度を減少し、その結果、マイトマイシン
Ｃの血中濃度を長時間に亘って持続できる上、親化合物
自体を投与した場合に比べて毒性も軽減できることを見
出した。

さらに、本発明者らは、この技術を式： で示される４−ホルミル−6,9−ジヒドロキシ−14−オ
キサ−1,11−ジアザテトラシクロ−［7.4.1.0^2,7.0
^10,12］テトラデカ−2,4,6−トリエン−８−イルメチル
カルバメート（以下、FR900482物質という）、および
式： で示されるビス（２−クロロエチル）アミン（以下、ナ
イトロジェンマスタードという）等に適用しても同様の
効果が得られることを見出し、さらに式 で示される１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン
（以下、シタラビンという）に適用した結果、上記した
効果に加えて、抗腫瘍効果が著しく向上することを見出
してこの発明を完成した。

この発明のプロドラッグ化合物は新規であり、一般式 Ａ−CO（CH₂）_ｍ（NHCO）_ｎ−Ｒ ［Ｉ］ （式中、Ａは分子中に基NHまたは−NH₂を有する医薬
化合物の残基、Ｒはステロイド化合物の残基、ｍは１〜
５の整数、ｎは０または１をそれぞれ意味する） で示される。

プロドラッグ化合物［Ｉ］において、Ａで表わされる
「分子中に基NHを有する医薬化合物の残基」における
医薬化合物としては、例えばマイトマイシンＣ、ナイト
ロジェンマスタード、FR900482物質等の抗腫瘍剤が挙げ
られる。また「分子中に基−NH₂を有する医薬化合物の
残基」における医薬化合物としては、例えばシタラビ
ン、アミノプテリン、アザシチジン、ドキソルビシン、
タウノルビシン等が挙げられる。これらの医薬化合物の
残基とは、医薬品化合物の分子中の基NHまたは−NH₂
から水素原子を除いた残基を意味する。

また、ステロイド化合物の残基としては、コレステロ
ール、コレスタノール、ラノステロール、エルゴステロ
ール、リトコール酸等のステロイド化合物の３位のヒド
ロキシ基から水素原子を除いた基が挙げられる。

この発明のプロドラッグ化合物［Ｉ］およびその塩類
は下記の方法により製造することができる。

（式中、Ａ、Ｒ、ｍおよびｎはそれぞれ前記と同じ意
味） すなわち、プロドラッグ化合物［Ｉ］およびその塩類
は化合物［II］もしくはそのカルボキシ基における反応
性誘導体またはそれらの塩類に化合物［III］またはそ
の塩類を作用させることによって製造することができ
る。

化合物［Ｉ］、［II］および［III］の好適な塩とし
ては、例えば酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタン
スルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホ
ン酸塩等の有機酸塩または塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸
塩、燐酸塩等の無機酸塩のような酸付加塩；ナトリウム
塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等の金
属塩；アンモニウム塩；トリメチルアミン塩、トリエチ
レンアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩等の有機アミ
ン塩等が挙げられる。

化合物［II］のカルボキシ基における好適な反応性誘
導体としては、酸ハロゲン化物、酸無水物、活性化アミ
ド、活性化エステル等が挙げられる。その好適な例とし
ては、酸塩化物、酸アジド、ジアルキル燐酸、フェニル
燐酸、ハロゲン化燐酸等の置換された燐酸、ピバリン
酸、ペンタン酸、等の脂肪族カルボン酸、または安息香
酸等の芳香族カルボン酸のような酸との混合酸無水物；
対称酸無水物；イミダゾール、４−置換イミダゾール、
ジメチルピラゾール、トリアゾールまたはテトラゾール
との活性化アミド；シアノメチルエステル、メトキシメ
チルエステル等の活性化エステル、N,N−ジメチルヒド
ロキシアミン、１−ヒドロキシ−２−（1H）−ピリド
ン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシフ
タルイミド、１−ヒドロキシ−６−クロロ−1H−ベンゾ
トリアゾール等のＮ−ヒドロキシ化合物とのエステル等
が挙げられる。これらの反応性誘導体は使用すべき化合
物［II］の種類に応じてそれらの中から任意に選択する
ことができる。

反応は通常、水、メタノール、エタノール、アセト
ン、ジオキサン、アセトニトリル、クロロホルム、塩化
メチレン、塩化エチレン、テトラヒドロフラン、酢酸エ
チル、N,N−ジメチルホルムアミド、ピリジンのような
慣用の溶媒中で行なわれるが、反応に悪影響を及ぼさな
い溶媒であれば、その他のいかなる溶媒中でも行なうこ
とができる。これらの慣用の溶媒は水と混合して使用し
てもよい。

化合物［II］を遊離酸の形または塩の形で反応に使用
する場合、N,N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド;N
−シクロヘシシル−Ｎ′−モルホリエチルカルボジイミ
ド;N−シクロヘキシル−Ｎ′−（４−ジエチルアミノシ
クロヘキシル）カルボジイミド;N,N′−ジエチルカルボ
ジイミド、N,N′−ジイソプロピルカルボジイミド;N−
エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボ
ジイミド;1−エチル−３−（３−ジメチル）カルボジイ
ミド塩酸塩、N,N−カルボニルビス（２−メチルイミダ
ゾール）；亜燐酸トリアルキル；ポリ燐酸エチル；オキ
シ塩化燐（塩化ホスホリル）；塩化チオニル、塩化オキ
ザリル;2−エチル−７−ヒドロキシベンズイソオキサゾ
リウム塩;1−（ｐ−クロロベンゼンスルホニルオキシ）
−６−クロロ−1H−ベンゾトリアゾール；ジメチルホル
ムアミドと塩化チオニル、ホスゲン、オキシ塩化燐等と
の反応によって生成するいわゆるビルスマイヤー試薬等
のような慣用の縮合剤の存在下に反応を行なうのが好ま
しい。

この反応はまた、アルカリ金属炭酸水素塩、トリ（低
級）アルキルアミン（例えば、トリメチルアミン、トリ
エチルアミン等）、ピリジン、Ｎ−（低級）アルキルモ
ルホリン、N,N−ジ（低級）アルキルベンジルアミン等
のような無機塩基または有機塩基の存在下に行なっても
よい。反応温度は特に限定されず、通常は冷却下または
常温で反応が行なわれる。

目的化合物［Ｉ］ならびに原料化合物［II］および
［III］に分子内の不斉炭素原子、二重結合等に基づく
１個以上の光学異性体や幾可異性体のような立体異性体
が含まれる場合、化合物［Ｉ］、［II］および［III］
のそのような異性体ならびにそれらの混合物はすべてこ
の発明の範囲内に包含されるものとする。

この発明のプロドラッグ化合物［Ｉ］およびその塩類
は、血液中でマイトマイシンＣ、FR900482物質、ナイト
ロジェンマスタードあるいはシタラビン等の親化合物に
それぞれ変換され、これらの親化合物はいずれも抗腫瘍
作用を有し、各種の癌（例えば、胃癌、肺癌、肺腺癌、
肝癌、直腸癌、膵臓癌、乳癌、子宮癌等）、白血病（例
えばリンパ性白血病、骨髄性白血病等）等の治療に有用
である。

この発明のプロドラッグ化合物［Ｉ］は常法により、
可溶化製剤、エマルジョン製剤、リポソーム製剤等とし
た後、例えば注射投与（例えば静脈注射、筋肉内注射、
腫瘍内注射等）、経口投与、直腸投与等により生体内に
投与される。そして、血液中で徐々に親化合物（例えば
マイトマイシンＣ、FR900482物質、ナイトロジェンマス
タードあるいはシタラビン等）に変換され、親化合物自
体を投与した場合に比べて、長時間親化合物の血中濃度
を持続し、その上抗腫瘍効果を向上し、毒性をも軽減す
ることができる。なお、上記の各種製剤の中でもリポソ
ーム製剤とした場合に最も血中濃度を持続させることが
できる。

リポソーム製剤を製造する場合に膜材として使用され
るリン脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジ
ルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホ
スファチジルセリン、スフィンゴミエリン等の卵黄、大
豆その他動物組織に由来するもの、これらの混合物であ
る卵黄レシチンまたは大豆レシチンまたはジパルミトイ
ルレシチン、ジステロアロイルレシチン等の合成レシチ
ンが挙げられる。これらのリン脂質には通常の添加物、
例えばコレステロール類、ジセチルホスフェートあるい
はα−トコフェロールなどを適宜添加してもよい。

リポソーム製剤は公知の方法により製造することがで
きる。すなわち、プロドラッグ化合物［Ｉ］またはその
塩類とリン脂質をクロロホルム、メタノール、エタノー
ル等の適当な溶媒に溶解し、これを適当な容器に入れ溶
媒を減圧下に留去し、次に界面活性剤（例えばコール酸
ナトリウム等）および水溶液（例えばリン酸緩衝生理食
塩水等）を添加し、振盪、可溶化した後、界面活性剤除
去装置を用いてこの溶液から界面活性剤を除去して製造
することができる。

また、リン脂質をクロロホルム、エタノール等有機溶
媒に溶解し、これを適当な容器に入れ、溶媒を減圧下に
留去し、リン脂質の薄膜を容器内面に形成させた後に、
プロドラッグ化合物［Ｉ］またはその塩類の水溶液を入
れ、振盪するかあるいは超音波処理して製造することも
できる。

さらにエーテル注入法などの慣用の方法によっても製
造することができ、リポソーム製剤の製造法は特に限定
されない。

この発明のプロドラッグ化合物［Ｉ］およびその塩類
は通常1mg〜1000mgの単位投与量で１日１〜４回投与さ
れるが、投与量は親化合物の種類、患者の年齢、体重、
症状、投与方法、他の抗腫瘍剤との併用等により適宜増
減される。また、注射投与の場合には、上記投与量の例
えば週１〜２回あるいは１〜３週間以上の間隔で投与し
てもよいい。

［発明の効果］ 以下、本発明の効果を試験例により説明する。

親化合物への変換試験１ 卵黄レシチン84μ mole、卵黄スフィンゴミエリン36
μ moleおよび後記の実施例１あるいは実施例２で得ら
れたマイトマイシンＣプロドラッグをそれぞれ６μ mol
e含有するクロロホルム溶液を丸底フラスコに分取し、
クロロホルムを留去した。これにコール酸ナトリウム25
8mgおよびpH7.4リン酸緩衝生理食塩水（以下PBSとい
う）4.8mlを添加後振盪し紫色の澄明な液を得た。次い
でリポプレップ（界面活性剤除去装置、商標、ダイアノ
ーム社製）を用いて、この液からコール酸ナトリウムを
除去して、マイトマイシンＣプロドラッグを含有するリ
ポソーム懸濁液を得た。

一方卵黄レシチン70μ mole、卵黄スフィンゴミエリ
ン30μ moleおよびFR900482物質のプロドラッグ（実施
例６）５μ moleを含有するクロロホルム溶液を丸底フ
ラスコに分取し、以下上記の方法と同様にして、FR9004
82物質のプロドラッグ含有リポソーム懸濁液を得た。

上記２種類のマイトマイシンＣプロドラッグ含有リポ
ゾーム懸濁液はPBSでそれぞれ2.5倍に希釈した。またFR
900482物質プロドラッグ含有リポソーム懸濁液は、FR90
0482物質プロドラッグ濃度が0.5μ moleとなるようにPB
Sで希釈し、millex−GV（商標、ミリポアー社製）、フ
ィルター（0.22μ）で濾過した。

マウス、ラットおよびヒトの各血清（4.5ml、37℃）
に上記のリポソーム懸濁液および各プロドラッグのエタ
ノール溶液0.5mlを添加後、経時的にサンプリングし、
サンプル中のプロドラッグ濃度を高速液体クロマトグラ
フィーにより定量した。

種々の血清中におけるそれぞれのプロドラッグから親
化合物への変換半減期（t 1/2）を各時点のそれぞれの
プロドラッグの残存量より算出した。

試験結果 表１に種々の血清中におけるそれぞれのプロドラッグ
から親化合物への変換半減期（t 1/2）を示す。

上記の試験結果から、この発明のプロドラッグがin v
itro血液中で親化合物に変換されること、およびリポソ
ーム中への各々のプロドラッグの取り込みがその変換半
減期を長くしていることがわかる。

親化合物への変換試験２ 卵黄レシチン10μ mole、卵黄スフィンゴミエリン30
μ moleおよび後記の実施例８で得られたシタラビンプ
ロドラッグ（実施例８）30μ moleを含有するクロロホ
ルム−メタノール混液（8:2v/v）を丸底フラスコに分取
し、溶媒を留去した。これにコール酸ナトリウム53.8mg
およびPBS5.0mlを添加後振とうした無色の澄明な液を得
た。次いでリポプレップを用いて、コール酸ナトリウム
を除去しシタラビンプロドラッグを含有するリポソーム
懸濁液を得た。リポソーム懸濁液は、薬物濃度が５μ m
ole/mlとなるようにPBSで希釈し、0.2、0.1および0.08
μのポリカーボネートメンブラン（ニュークリポア社
製）で順次濾過し、続いてmillex−GVフィルター（0.22
μ）で濾過した。

ラットの血清（4.0ml、37℃）に上記のリポソーム懸濁
液およびシタラビンプロドラッグのエタノール溶液0.08
mlを添加後、経時的にサンプリングし、サンプル中のシ
タラビンプロドラッグ濃度を高速液体クロマトグラフィ
ーにより定量した。

親化合物への変換の半減期（t 1/2）を各時点のシタ
ラビンプロドラッグの残存量より算出した。

試験結果 表２にプロドラッグから親化合物への変換半減期（t
1/2）を示す。

上記の試験結果から、この発明のプロドラッグがin v
itroの血液中で親化合物に変換されること、およびリポ
ソーム中へのプロドラッグの取り込みがその変換半減期
を長くしていることがわかる。

吸排試験１ 卵黄レシチン126μ mole、卵黄スフィンゴミエリン54
μ moleおよびマイトマイシンＣプロドラッグ（実施例
１）24μ moleを含有するクロロホルム溶液14.3mlを丸
底フラスコに分取し、１時間クロロホルムを留去した。
これにコール酸ナトリウム194mgおよびPBS6mlを添加後
振盪し、以下上記と同様の方法により、マイトマイシン
Ｃプロドラッグ含有リポソーム懸濁液を得た。

得られたリポソーム懸濁液をマイトマイシンＣプロド
ラッグ濃度が3.0μ mole/mlとなるようにPBSで希釈し、
ポリカーボネートメンブラン（0.1μ）により濾過し
た。SD系雄性ラット（７週齢、体重約300g、１群４匹）
にマイトマイシンＣのPBS溶液および上記の方法で調製
したマイトマイシンＣプロドラッグ含有リポソーム懸濁
液1.0ml（両者ともマイトマイシンＣとして3.0μ mole
含有）をそれぞれ静脈注射し、経時的に鎖骨下静脈より
採血した。血中のマイトマイシンＣの濃度は、遠心分離
した血漿を除タンパク後、高速液体クロマトグラフィー
により測定した。また、血中マイトマイシンＣプロドラ
ッグの濃度は、血液を凍結乾燥後エタノールで抽出し、
高速液体クロマトグラフィーにより測定した。

試験結果 表３にマイトマイシンＣおよびマイトマイシンＣプロ
ドラッグ（実施例１）の血中濃度のラット４匹の平均値
±標準偏差として示す。

上記の試験結果からプロドラッグを含有するリポソー
ム懸濁液は親化合物（マイトマイシンＣ）の血中濃度を
長時間持続することがわかる。

吸排試験２ 上記の吸排試験１で調製したマイトマイシンＣプロド
ラッグ（実施例１）含有リポソーム懸濁液をマイトマイ
シンＣプロドラッグ濃度が2.5μ mole/mlとなるようにP
BSで希釈し、ポリカーボネートメンブラン（0.1μ）に
より濾過した。次にICR系雌性マウス（８週齢、体重約2
5g、１群３匹）にマイトマイシンＣのPBS溶液およびマ
イトマイシンＣプロドラッグ含有リポソーム懸濁液0.2m
lをそれぞれ静脈注射し、一定時間経過後、エーテル麻
酔下に心臓より採血した。血中のマイトマイシンＣの濃
度およびマイトマイシンＣプロドラッグの濃度を吸排試
験１の場合と同様にして測定した。

試験結果 表４にマイトマイシンＣおよびマイトマイシンＣプロ
ドラッグ（実施例１）の血中濃度をマウス３匹の平均値
±標準偏差として示す。

上記の試験結果からプロドラッグを含有するリポソー
ム懸濁液は親化合物（マイトマイシンＣ）の血中濃度を
長時間持続することがわかる 吸排試験３ マイトマイシンＣプロドラッグ（実施例１）４μ mol
e、パナセート800（商標、日本油脂株式会社製）40mg、
卵黄レシチン14mgおよびHCO−60（商標、日光ケミカル
ズ株式会社製）8mgをそれぞれ含有するクロロホルム溶
液を丸底フラスコに合し、クロロホルムを留去した。こ
れにPBS1mlを添加し、ソニケーターによりマイトマイシ
ンＣプロドラッグエのエマルジョン製剤を得た。一方マ
イトマイシンＣプロドラッグ（実施例１）４μ moleお
よびHCO−60 24mg含有のそれぞれクロロホルム溶液を丸
底フラスコに合し、クロロホルムを留去した。残渣をPB
S1mlに分散し、激しく撹拌して澄明な溶液を得た。

このようにして得た２種類の製剤をそれぞれ0.2ml
（薬物をそれぞれ４μ mole/ml含有）吸排試験２の場合
と同様にしてマウスに静脈注射し、血中のマイトマイシ
ンＣの濃度およびマイトマイシンＣプロドラッグの濃度
を測定した。

試験結果 表５に２種類のマイトマイシンＣプロドラッグ（実施
例１）含有製剤をマウスに静脈注射した時のマイトマイ
シンＣおよびマイトマイシンＣプロドラッグの血中濃度
をマウス３匹の平均値±標準偏差として示す。

上記の試験結果から、プロドラッグをエマルジョン製
剤あるいは可溶化製剤にしたものは親化合物（マイトマ
イシンＣ）の血中濃度を長時間持続することがわかる。

吸排試験４ 卵黄レシチン147μ mole、卵黄スフィンゴミエリン63
μ moleおよびシタアラビンプロドラッグ（実施例８）4
2μ moleを含有するクロロホルム−メタノール混液（8:
2v/v、12ml）を丸底フラスコに分取し、37℃で10分間溶
媒を留去した。

これにコール酸ナトリウム262.5μ moleおよびPBS7ml
を添加後振盪し、以下前記親化合物への変換試験２に記
載した方法と同様にして、シタラビンプロドラッグの含
量が５μ mole/mlであるリポソーム懸濁液を得た。

SD系雄性ラット（７週齢、体重約250g、１群４匹）に
シタラビンの水溶液および上記の方法で調製したシタラ
ビンプロドラッグ含有リポソーム懸濁液1.0ml（両者と
も５μ mole/ml含有）をそれぞれ静脈注射し、経時的に
頚部静脈より採血した。

血中のシタラビンおよびシラタビンプロドラッグの濃
度はそれぞれ高速液体クロマトグラフィーにより測定し
た。

試験結果 表６にシタラビンおよびシタラビンプロドラッグ（実
施例８）の血中濃度をラット４匹の平均値±標準偏差と
して示す。

上記の試験結果からプロドラッグを含有するリポソー
ム懸濁液は親化合物（シタラビン）の血中濃度を長時間
持続することがわかる。

毒性試験 卵黄レシチン126μ mole、卵黄スフィンゴミエリン54
μ moleおよびマイトマイシンＣプロドラッグ（実施例
１）をそれぞれ3.75、24、37.5μ mole含有するクロロ
ホルム溶液を丸底フラスコに合し、クロロホルムを留去
し、以下上記の方法と同様にしてマイトマイシンＣプロ
ドラッグ含有リポソーム懸濁液を得た。このリポソーム
懸濁液をマイトマイシンＣプロドラッグの濃度がそれぞ
れ0.15、0.96、0.50mgマイトマイシンＣ相当/mlとなる
ようにPBSで希釈し、ポリカーボネート・メンブラン
（0.1μ）により濾過した。

ICR系雄性マウス（６週齢）に、マイトマイシンC PBS
溶液（投与量:1.0および6.4mg/kg/日）および上記のマ
イトマイシンＣプロドラッグ含有リポソーム懸濁液（投
与量：マイトマイシンＣとして1.0、6.4、10mg/kg/日）
をそれぞれマウスに１日目、３日目および５日目の計３
回静脈注射により投与し、投与１日目から15日目までの
体重を測定した。

試験結果 表７にそれぞれの製剤を静脈注射投与したときのマウ
スの体重変化を５匹の平均値±標準偏差として示す。

プロドラッグを含有するリポソーム懸濁液は親化合物
の水溶液と比べ毒性の低いことがわかる。

抗腫瘍性試験１ 卵黄レシチン245μ mole、卵黄スフィンゴミエリン15
0μ moleおよびシタラビンプロドラッグ（実施例８）を
それぞれ87.5、262.5μ moleを含有するクロロホルム−
メタノール溶液（8:2v/v）を丸底フラスコにとり、以下
上記と同様の方法によりシタラビンプロドラッグ濃度が
10および20μ moleであるリポソーム懸濁液を得た。

マウス白血病細胞L1210（10⁵個）をBDF₁系雌性マウス
（７週令）に腹腔内移植した。移植後24時間目に、シタ
ラビン水溶液（投与量:1000および3000μ mole/kg）、
上記のシタラビンプロドラッグ含有リポソーム懸濁液
（投与量:100および300μ mole/kg）、および下記の構
造式で表わされる公知のシタラビンプロドラッグ化合物
であるN⁴−ビヘノイル−１−β−アラビノフラノシルシ
トシン（以下BHACという）水溶液（投与量:100および30
0μ mole/kg）をそれぞれマウス体重20gあたり0.2mlお
よび0.3ml（シタラビンプロドラッグ300μ mole/kg投与
の場合）の割合で静脈注射投与した。投与後のマウスの
生死を調べた。

BHAC 試験結果 表８にそれぞれの製剤を投与したときのマウスの平均
生存日数、およびT/C（％） を示す。

この発明のプロドラッグを含有するリポソーム懸濁液
は、その親化合物の水溶液およびBHAC水溶液と比べ抗腫
瘍効果の優れていることがわかる。

抗腫瘍性試験２ 卵黄レシチン245μ mole、卵黄スフィンゴミエリン10
5μ moleおよびシタラビンプロドラッグ（実施例８）を
それぞれ87.5および157.5μ moleを含有するクロロホル
ム−メタノール溶液（3:1v/v）を丸底フラスコにとり、
以下前記抗腫瘍性試験１の場合と同様にしてシタラビン
プロドラッグ濃度が10および18μ mole/mlであるリポソ
ーム懸濁液を得た。

ヒト肺腺癌A549の切片をBDF₁系雌性マウス（８週令）
に腎被膜下移植した。

移植後１、５および９日目に、シタラビン水溶液（投
与量1000μ mole/kg）および上記のシタラビンプロドラ
ッグ含有リポソーム懸濁液（投与量:100および180μ mo
le/kg）をマウス体重20gあたり0.2ml静脈注射投与し
た。

投与後14日目における腫瘍体積を測定し、成長抑制率
を求めた。（この試験において各製剤の抗腫瘍効果を明
確にみるために、17−アリル−1,14−ジヒドロキシ−12
−［２−（４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシ
ル）−１−メチルビニル］−23,25−ジメトキシ−13,1
9,21,27−テトラメチル−11,28−ジオキサ−４−アザト
リシクロ［23.3.1.0^4,9］オクタコス−18−エン−2,3,1
0,16−テトラオンを免疫抑制物質として、移植後１、
２、５、７、９および12日目に各32mg/kgを皮下投与し
た。） 試験結果 表９にそれぞれの製剤を静脈注射投与した時の移植後
14日目における腫瘍体積および腫瘍の成長抑制率を示
す。

この発明のプロドラッグを含有するリポソーム懸濁液
は、その親化合物の水溶液と比べ抗腫瘍効果の優れてい
ることがわかる。

［実施例］ 以下、製造例および実施例により、この発明をさらに
詳細に説明する。

製造例１ グリシン（1.50g）の水（100ml）懸濁液中にトリエチ
ルアミン（4.04g）を加える。得られる透明な溶液にジ
オキサン（200ml）およびクロロ義酸コレステロール
（8.98g）を０℃で加え、その混合物を３時間撹拌す
る。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣に1N遠心（23m
l）およびクロロホルム（100ml）を加える。有機層を分
離し、水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥する。溶媒を
留去し粗結晶を得、次いでエタノールで洗浄したのち濾
取して白色結晶のＮ−（コレスト−５−エン−３β−オ
キシカルボニル）グリシン（6.64g）を得る。

融点:175−177℃（分解） IR（ヌジョール）:3320,1750,1665,1570cm^-1 製造例２ Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニ
ル）グリシン（2.92g）をジオキサン（40ml）とクロロ
ホルム（6ml）の混合液に溶解した液にＮ−ヒドロキシ
スクシンイミド（0.69g）とジシクロヘキシルカルボジ
イミド（1.236g）を０℃で連続的に加え、反応混合物を
16時間冷蔵庫中に放置する。

得られる沈殿都を濾取し、濾液を減圧下で濃縮してＮ
−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニル）グ
リシンのスクシンイミドエステル（3.23g）を得る。

融点:159−164℃ IR（クロロホルム）:3440,1820,1785,1740,1720cm^-1 製造例３ β−アラニン（56mg）および炭酸水素ナトリウム（84
mg）の水（10ml）溶液にテトラヒドロフラン（20ml）お
よびクロロ義酸コレステロール（449mg）を０℃で加え
混合物を１時間撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮
し、残渣に0.1N塩酸（10ml）およびクロロホルム（40m
l）を加える。有機層を分離し、水で洗浄し、硫酸マグ
ネシウムで乾燥する。溶媒を留去して粗精製物を得、こ
れをクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラムクロマト
グラフィー（40g）に付す。クロロホルムおよびメタノ
ールの混合液で溶出して白色粉末のＮ−（コレスト−５
−エン−３β−オキシカルボニル−β−アラニン（187m
g）を得る。

融点:127−130℃ IR（クロロホルム）:3450,1705cm^-1 製造例４ ６−アミノ−ｎ−カプロン酸（131mg）および炭酸水
素ナトリウム（84mg）のテトラヒドロフラン（10ml）と
水（10ml）の混液にテトラヒドロフラン（10mg）とクロ
ロ義酸コレステロール（449mg）を０℃で加え、以下製
造例３と同様にして、白色粉末のＮ−（コレスト−５−
エン−３β−オキシカルボニル）−６−アミノ−ｎ−カ
プロン酸（126mg）を得る。

IR（クロロホルム）:3440,1700cm^-1 実施例１ マイトマイシンＣ（1.00g）のN,N−ジメチルホルムア
ミド（20ml）溶液にトリエチルアミン（0.33g）および
Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニル）
グリシンのスクシンイミドエステル（1.75g）を室温で
加え、反応混合物を４時間室温で撹拌する。溶媒を留去
し、残渣にクロロホルムおよび水を加える。有機層を分
離し、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥する。溶媒
を留去し粗生成物を得、これをクロロホルムに溶解しシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（50g）に付す。ク
ロロホルムで溶出して暗紫色粉末の［1aS−（1aα,8β,
8aα,8bα）］−６−アミノ−８−カルバモイルオキシ
メチル−Ｎ′−［Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オ
キシカルボニル）グリシル］−1,1a,2,8,8a,8b−ヘキサ
ヒドロ−8a−メトキシ−５−メチルアジリジノ［２′,
3′:3,4］ピロロ［1,2−ａ］インドール−4,7−ジオン
（1.74g）を得る。

融点:250℃以上 Mass:804（M⁺） 実施例２ コレスト−５−エン−３β−オキシ酢酸［オーストラ
リアン・ジャーナル・オブ・ケミストリー（Aust.J.Che
m）24,143−151（1971）に従って製造］（667mg）のク
ロロホルム（15ml）溶液にＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ド（172mg）およびN,N′−ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（324mg）を０℃で加え、混合物を室温で一晩撹拌
する。沈殿物を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、コレス
ト−５−エン−３β−オキシ酢酸のスクシンイミドエス
テルを得る。マイトマイシンＣ（502mg）のN,N−ジチル
ホルムアミド（10ml）溶液に、上記の活性エステル、ト
リエチルアミン（152mg）および４−ジメチルアミノピ
リジン（20mg）を加える。反応混合物を60℃で一晩撹拌
し、減圧下で濃縮する。残渣にクロロホルムおよび水を
加える。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥す
る。溶媒を留去し粗生成物を得、これを少量のクロロホ
ルムに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに
付す。クロロホルムで溶出して暗紫色粉末の［1aS−（1
aα,8β,8aα,8bα）］−６−アミノ−８−カルバモイ
ルオキシメチル−Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オ
キシアセチル）−1,1a,2,8,8a,8b−ヘキサヒドロ−8a−
メトキシ−５−メチルアジリジノ［２′,3′:3,4］ピロ
ロ［1,2−ａ］インドール−4,7−ジオン（695mg）を得
る。

融点:145−150℃（分解）。

IR（ヌジョール）:3430,3320,3200,1710,1650,1600,155
0cm^-1 実施例３ 実施例２と同様にして実施例２のコレステロールの３
位のα異性体である［1aS−（1aα,8β,8aα,8bα）］
−６−アミノ−８−カルバモイルオキシメチル−Ｎ−
（コレスト−５−エン−３α−オキシアセチル）−1,1
a,2,8,8a,8b−ヘキサヒドロ−8a−メトキシ−５−メチ
ルアジリジノ［２′,3′:3,4］ピロロ［1,2−ａ］イン
ドール−4,7−ジオンを得る。

融点:118−120℃ IR（ヌジョール）:3420,3320,3200,1700,1600,1550cm^-1 実施例４ Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニ
ル）−β−アラニン（56mg）のエトラヒドロフラン（15
ml）およびクロロホルム（5ml）混合液にマイトマイシ
ンＣ（37mg）、トリエチルアミン（13mg）および１−エ
チル−３−（３−ジメチル）−カルボジイミド塩酸塩
（24mg）を加える。反応混合物を室温で一晩撹拌し、減
圧下で濃縮する。残渣にクロロホルムおよび水を加え
る。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥する。溶
媒を留去し粗生成物を得、これを少量のクロロホルムに
溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付す。
クロロホルムおよびメタノールの混液で溶出して暗紫色
粉末の［1aS−（1aα,8β,8aα,8bα）］−６−アミノ
−８−カルバモイルオキシメチル−Ｎ′−［Ｎ−（コレ
スト−５−エン−３β−オキシカルボニル）−β−アラ
ニル］−1,1a,2,8,8a,8b−ヘキサヒドロ−8a−メトキシ
−５−メチルアジリジノ［２′,3′:3,4］ピロロ［1,2
−ａ］インドール−4,7−ジオン（22mg）を得る。

IR（クロロホルム）:3500,3440,3380,1695,1600,1565cm
^-1 実施例５ Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニ
ル）−６−アミノ−ｎ−カプリン酸（63mg）のテトラヒ
ドロフラン（20ml）およびクロロホルム（5ml）混合液
にマイトマイシンＣ（37mg）、トリエチルアミン（13m
g）および１−エチル−３−（３−ジメチル）−カルボ
ジイミド塩酸塩（24mg）を加え、以下実施例４と同様に
して、暗紫色粉末の［1aS−（1aα,8β,8aα,8bα）］
−６−アミノ−８−カルバモイルオキシメチル−Ｎ′−
［Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニ
ル）−６−アミノ−ｎ−カプロイル］−1,1a,2,8,8a,8b
−ヘキサヒドロ−8a−メトキシ−５−メチルアジリジノ
［２′,3′:3,4］ピロロ［1,2−ａ］インドール−4,7−
ジオン（31mg）を得る。

IR（クロロホルム）:3500,3440,3370,1700,1600,1560cm
^-1 実施例６ ４−ホルミル−6,9−ジヒドロキシ−14−オキサ−1,1
1−ジアザテトラシクロ［7.4.1.0^2,7.0^10,12］テトラデ
カ−2,4,6−トリエン−８−イルメチルカルバメート（3
2mg）をN,N−ジメチルホルムアミド（1.0ml）に溶解す
る。この溶液によりトリエチルアミン（14μ）および
Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニル）
グリシンのスクシンイミドエステル（60mg）を加える。
混合物を常温で６時間撹拌し、減圧下で溶媒を留去す
る。残渣を薄層クロマトグラフィーに付し、クロロホル
ムとメタノールの混液で溶出して、11−［Ｎ−（コレス
ト−５−エン−３β−オキシカルボニル）グリシル］−
４−ホルミル−6,9−ジヒドロキシ−14−オキサ−1,11
−ジアザテトラシクロ［7.4.1.0^2,7.0^10,12］テトラデ
カ−2,4,6−トリエン−８−イルメチルカルバメートの
Ｃ−９位の２つの異性体（９−α−OH異性体31mgおよび
９−β−OH異性体15mg）を得る。

融点:168−170℃（分解）。（９−α−OH異性体と９−
β−OH異性体の混合物） ９−α−OH異性体 IR（クロロホルム）:3340,2950,1695,1586,1355cm^-1 SIMS:791［Ｍ＋Ｈ］⁺,813［Ｍ＋Na］^＋ ９−β−OH異性体 IR（クロロホルム）:3340,2945,1695,1583,1350cm^-1 SIMS:791［Ｍ＋Ｈ］⁺,829［Ｍ＋Ｋ］^＋ 実施例７ ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（1.347g）の
25％水酸化ナトリウム水溶液（100ml）にジクロルメタ
ン（100ml）を加えて振盪する。有機層を分取して炭酸
カリウムで乾燥し、濾過する。減圧下にジクロルメタン
を留去し、油状物質としてビス（２−クロロエチル）ア
ミン（0.52g）を得る。Ｎ−（コレスト−５−エン−３
β−オキシカルボニル）グリシン（160.8mg）の乾燥テ
トラヒドロフラン（50ml）溶液に０℃で窒素ガスを吹き
こみながら上記で得たビス（２−クロロエチル）アミン
（85.2mg）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（6
1.9mg）を加え、６時間撹拌する。冷蔵庫中で一夜（17
時間）放置した後、濾過し、減圧下に溶媒を留去する。
残渣をクロロホルム−メタノール（50:1）混液に溶解
し、調製層クロマトグラフィー（PLC）に付す。クロロ
ホルム−メタノール（50:1）の混液で展開して、目的と
する部分をかきとり、クロロホルム−メタノール（4:
1）の混液で抽出し、濾過した後減圧下に溶媒を留去し
てＮ−［Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカル
ボニル）グリシル］−ビス（２−クロロエチル）アミン
（110mg）を得る。

融点:98−100℃ 実施例８ Ｎ−（コレスト−５−エン）−３β−オキシカルボニ
ル）グリシン（2.74g）およびトリエチルアミン（0.78m
l）のエトラヒドロフラン（40ml）溶液にクロロ義酸エ
チル（0.61g）を−15℃で滴下し、その反応混合物を−1
5℃で20分間撹拌する。

その反応混合物に１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシ
トシン（1.37g）のジメチホルムアミド（30ml）溶液を
−15℃から−10℃で滴下する。滴下後、混合物を５℃で
１時間次いで室温で30分間撹拌する。反応混合物を減圧
下に濃縮する。

残渣をメタノールで洗浄し、乾燥して粗生成物を得、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製してN⁴
−［Ｎ−（コレスト−５−エン−３β−オキシカルボニ
ル）グリシル］−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシト
シン（1.8g）を白色粉末として得る。

融点:159−161℃（分解） IR（ヌジョール）:3330,2850,1690,1640,1570cm^-1 SIMS（m/z）:713［Ｍ＋Ｈ］⁺,751［Ｍ＋Ｋ］^＋

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 Ａ−CO（CH₂）_ｍ（NHCO）_ｎ−Ｒ （式中、Ａは分子中に基NHまたは−NH₂を有する医薬
   化合物の残基、Ｒはステロイド化合物の残基、ｍは１〜
   ５の整数、ｎは０または１をそれぞれ意味する） で示されるプロドラッグ化合物およびその塩類。
2. 【請求項２】ステロイド化合物がコレステロールである
   特許請求の範囲第１項に記載のプロドラッグ化合物およ
   びその塩類。
3. 【請求項３】Ａが分子中に基NHを有する医薬化合物の
   残基である特許請求の範囲第１項または第２項に記載の
   プロドラッグ化合物およびその塩類。
4. 【請求項４】医薬化合物がマイトマイシンＣである特許
   請求の範囲第３項に記載のプロドラッグ化合物およびそ
   の塩類。
5. 【請求項５】医薬化合物がナイトロジェンマスタードで
   ある特許請求の範囲第３項に記載のプロドラッグ化合物
   およびその塩類。
6. 【請求項６】医薬化合物がFR900482物質である特許請求
   の範囲第３項に記載のプロドラッグ化合物およびその塩
   類。
7. 【請求項７】Ａが分子中に基−NH₂を有する医薬化合物
   の残基である特許請求の範囲第１項または第２項に記載
   のプロドラッグ化合物およびその塩類。
8. 【請求項８】医薬化合物がシタラビンである特許請求の
   範囲第７項に記載のプロドラッグ化合物およびその塩
   類。
9. 【請求項９】一般式 Ａ−CO（CH₂）_ｍ（NHCO）_ｎ−Ｒ （式中、Ａは分子中に基NHまたは−NH₂を有する医薬
   化合物の残基、Ｒはステロイド化合物の残基、ｍは１〜
   ５の整数、ｎは０または１をそれぞれ意味する） で示されるプロドラッグ化合物またはその塩類を含有す
   る持続性製剤。
10. 【請求項１０】剤型がリポソームである特許請求の範囲
    第９項に記載の持続性製剤。