JPH0889295A - 感染症診断用プローブ - Google Patents

感染症診断用プローブ

Info

Publication number
JPH0889295A
JPH0889295A JP6236348A JP23634894A JPH0889295A JP H0889295 A JPH0889295 A JP H0889295A JP 6236348 A JP6236348 A JP 6236348A JP 23634894 A JP23634894 A JP 23634894A JP H0889295 A JPH0889295 A JP H0889295A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
probe
dna
bacteria
infectious disease
streptococcus pneumoniae
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP6236348A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3571378B2 (ja
Inventor
Hiroyuki Karashi
宏行 芥子
Soji Eda
宗司 江田
Keiji Uehara
啓嗣 上原
Hiroshi Kamiyama
浩 上山
Akio Matsuhisa
明生 松久
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Original Assignee
Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to JP23634894A priority Critical patent/JP3571378B2/ja
Application filed by Fuso Pharmaceutical Industries Ltd filed Critical Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Priority to AU36189/95A priority patent/AU689325B2/en
Priority to EP95933618A priority patent/EP0785277B1/en
Priority to DE69529758T priority patent/DE69529758T2/de
Priority to AT95933618T priority patent/ATE233326T1/de
Priority to PCT/JP1995/002036 priority patent/WO1996010647A1/ja
Priority to DK95933618T priority patent/DK0785277T3/da
Priority to US08/809,254 priority patent/US6660852B1/en
Priority to CA002199938A priority patent/CA2199938C/en
Priority to KR1019960706982A priority patent/KR100238337B1/ko
Publication of JPH0889295A publication Critical patent/JPH0889295A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3571378B2 publication Critical patent/JP3571378B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 肺炎原因菌の検出および同定に有用な肺炎起
炎菌由来のプローブを提供する。 【構成】 ストレプトコッカス・ニューモニエ (Strept
ococcus pneumoniae) 菌が保有するDNAを抽出し、抽
出したDNAを制限酵素PstIで完全消化し、適当なベク
ターにクローニングして、ストレプトコッカス・ニュー
モニエ菌が本質的に保有するDNA断片を含むプローブ
を選抜する。 さらに、選抜したプローブの塩基配列を
解明する。 【効果】 肺炎原因菌たるストレプトコッカス・ニュー
モニエ菌を特異的に検出し、菌種を迅速に同定できる。
解明された塩基配列は、PCR用プライマー作製のた
めの指針として、また臨床検体に含まれるGenomic DN
Aとの比較参照用に適した標準配列として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、感染症疾患の原因菌、
特に、細菌性肺炎の代表的起炎菌であるストレプトコッ
カス・ニューモニエ (Streptococcus pneumoniae) 菌の
検出および同定に有用なプローブに関する。
【0002】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】病理
学的に、感染とは病原性の微生物(以下、「菌」と称す
る)が生体内に侵入し、増殖の足がかりを確立すること
を指し、生体内での菌の増殖に起因する発症は、宿主の
抵抗力と菌の毒力との相互関係に依存するものである。
【0003】感染症の中でも、ストレプトコッカス・ニ
ューモニエ菌(肺炎球菌)などの細菌を原因とする肺葉
および気管支の炎症、すなわち、細菌性肺炎の治療体系
の改善が、当該技術分野では急務とされていた。 すな
わち、細菌性肺炎は、ストレプトコッカス・ニューモニ
エ (Streptococcus pneumoniae) 菌、スタフィロコッカ
ス・アウレウス(Staphylococcus aureus) 菌などの細菌
が、肺胞腔を主な炎症の場として発症することに端を発
するものであり、臨床的には、通常、上気道炎症状に引
き続き、突然に悪寒戦慄をもって発症し、40℃前後の高
熱が弛張し、激しい咳嗽、胸痛、喀痰が出現する。 ま
た、全身倦怠感、食欲不振、頭痛といった全身症状も強
く、呼吸困難、チアノーゼを呈し、また、合併症として
菌血症、髄膜炎、関節炎を併発することもあり、時に致
死的経過をとる重篤かつ緊急な感染症である。
【0004】このように、細菌性肺炎については、特
に、的確な早期診断のもとに、適切な早期治療を実施す
ることが必要であることから、迅速な治療方法の改善が
待望されている。
【0005】さらに、肺炎を含めた感染症に羅病する
と、生体組織内では第一義的には好中球、単球及びマク
ロファージ系の食細胞がその防御機能を果たし、また、
優勢になった菌が食細胞組織から血液中に侵出したこと
により、血液中に菌が出現するものと考えられている。
【0006】一般には、細胞の食菌力が菌の毒力に及ば
ず、ストレプトコッカス・ニューモニエ菌などの細菌
が、肺葉および気管支の組織に定着して炎症を引き起こ
す現象が細菌性肺炎と定義されている。 そして、従来
の細菌性肺炎の診断においては、(1) 臨床症状、(2) 検
体の培養、(3) 検体に含まれる菌のグラム染色、および
(4) ショック状態の確認が必須であり、これらの項目が
確認されて初めて治療方針が決定される。 典型例で
は、前述の臨床症状、胸部X線所見、および好中球増
加、CRP(C-Reactive Protein:C反応性蛋白質)な
ど急性相反応性物質の増加を認めることによって推定は
できるものの、確定診断のためには、喀痰、胸水あるい
は血液などの検体から起炎菌を検索・確定した上で、菌
の種類に応じた適切な抗生物質を使用し、治療しなけれ
ばならない。 従って、臨床現場においては、迅速かつ
確実な原因菌の同定が望まれている。
【0007】また、近年は、レジオネラ肺炎、カリニ肺
炎などの新しい型の肺炎も確認されており、さらには、
MRSA(メシチリン耐性黄色ブドウ球菌)といった耐
性株の出現もみられ、起炎菌検索の重要性はさらに増大
してきている。
【0008】しかしながら、実際には、起炎菌の確定は
困難を伴うのが通常であり、特に、市中肺炎の場合、30
〜50%程度は起炎菌不明のまま治療が開始されていると
言われている。 すなわち、細菌性肺炎が疑われた患者
の起炎菌の検索方法としては、喀痰、上気道分泌物、胸
水、病巣局所、あるいは血液からの採取試料を検体とし
て使用し、まず、これを塗沫検査により炎症細胞などの
観察により検査材料としての適否を判断し、次いでグラ
ム染色を行って、陽性・陰性の別、球菌・桿菌の別を決
定する。 そして、選択培地を用いて菌を培養すること
で、起炎菌種の同定が行われるのが一般的な手順であ
る。 ところが、この方法によると、菌の培養に長時間
を要する上に、常在菌の混入が避けられず、また、細菌
性肺炎を疑われた時点で、大量に抗生物質を投与されて
いる場合には、たとえ検体中に菌が含まれていても、増
菌・増殖できない場合が多く、実際には、これら検体か
らの菌の培養の成功率は極めて低いものとなっている。
【0009】さらに、サブルーチンとしての方法に、菌
体成分や菌の代謝産物の機器分析法(辨野義己、「ガス
クロマトグラフィーによる細菌同定の迅速化」、臨床検
査、vol.29, No.12, pp.1618-1623 、1985年11月、医学
書院参照)、特異抗体を利用した方法(特開昭60−2240
68号参照) 、さらには、DNAの特異性を利用したハイ
ブリダイゼーションによる方法(特表昭61−502376号)
等があるが、いずれも、菌の分離及び増菌培養が必須と
されている。
【0010】一方、感染症における食細胞の機能に着目
したものとして、血液試料中の白血球成分が集中してい
るバフィーコート(Buffy coat)の塗抹染色標本を検鏡
する方法がある。 一般にバフィーコート標本で菌が検
出される頻度は、成人菌血症では耳朶血の頻度と同様に
30%程度にとどまるが、新生児の場合、10例中7例(70
%)で菌を検出している報告もあり、塗抹標本の検鏡に
より末梢血中菌の有無に関する情報は治療における大き
な指針となっている。
【0011】上記従来技術においては、その前処理操作
として、少なくとも検体からの菌の選択的分離に1〜2
日、増菌に1日、固定操作に1日以上、合計で3〜4日
は十分かかり、現実にはこの培養を菌が発育するまで続
けることになるので、前処理操作に一週間以上要する場
合が多く、さらに、菌の培養時に疾患の原因菌以外の菌
が混入しても区別できない場合もある。
【0012】そして重要なことは、前述した事情から、
培養すべき検体中の多くの菌は食細胞に取り込まれ、抗
生物質投与のため死んでいるか静止状態にあるため、培
養条件下でも増殖できる菌の数は少なく、臨床検体を用
いた培養による実際の菌の検出率は10%前後と、非常に
低い。 換言すれば、臨床的に肺炎の可能性が疑われた
患者の血液をさらに一昼夜以上培養して検査しても結
局、その90%は菌の存在すら判明しないのが現状であ
る。
【0013】このような状況から、現在は起炎菌の確定
と、それに即した抗生物質の選択が要求されているにも
かかわらず、臨床的に細菌性肺炎の可能性が疑われた段
階で、検出結果が出るのを待たずに治療、すなわち、起
炎菌不明のまま、最も広範囲な種類の菌に有効な抗生物
質を投与し、1、2日間様子を見て、効果が現れないと
別の抗生物質に切換えるという試行錯誤的な方法に頼っ
ているのである。
【0014】また、検体中の菌を染色により検出する方
法では、生体成分も菌と同様に染色されるため、検鏡し
て認められる形態によってのみ迅速に菌を判別するの
は、熟練が必要であり、判定が困難な場合もある。
【0015】このように、迅速・確実な診断が求められ
る疾患であるにもかかわらず、従来の診断方法では十分
対応できていなかったのが実情である。
【0016】
【課題を解決するための手段】本発明は上記当該技術分
野が抱えている課題に鑑みて完成されたものであり、そ
の要旨とするところは、感染症原因菌、特に、細菌性肺
炎の代表的起炎菌であるストレプトコッカス・ニューモ
ニエ (Streptococcus pneumoniae) 菌が保有するDNA
またはRNAと特異的な反応性を有するプローブ、およ
び、当該プローブに含まれるストレプトコッカス・ニュ
ーモニエ菌が本質的に保有している遺伝子部分の塩基配
列を解明することにある。
【0017】すなわち、本発明のプローブにより、例え
ば、食細胞に取り込まれて破壊されつつある菌において
なお維持されている菌のDNAを、その特異性に基づい
て有為に検出でき、これにより、菌を培養・増殖せず
に、感染症疾患の原因菌が迅速かつ確実に検出できる。
また、これらのプローブの塩基配列情報を参照してプ
ライマーをデザインすれば、ハイブリダイゼーションを
行わなくとも、PCR法によるDNAの増幅により、感
染症原因菌を同定することができる。
【0018】また、ハイブリダイゼーションに用いるプ
ローブを非放射性のもの、例えば、ビオチン化したプロ
ーブを用いれば、放射性同位元素使用施設のない一般検
査室でも光学顕微鏡を用いて検出でき、検出作業が迅
速、簡便に行える。
【0019】以下に、感染症疾患、特に、肺炎起炎菌で
あるストレプトコッカス・ニューモニエ (Streptococcu
s pneumoniae) 菌に由来するプローブの実施例を示す。
【0020】
【実施例】
実施例1:ストレプトコッカス・ニューモニエ(Streptoc occus pneumoniae) 菌由来DNAプ ローブ (1) Streptococcus pneumon iae菌由来DNAプローブの
調製 臨床菌株 Streptococcus pneumoniae をBHI (Brain Hea
rt Infusion)培地で一晩培養し、培養菌体を集菌して、
N-Acetylmuramidase SG を加えた上で、 Saito-Miura法
("Preparation of transforming deoxyribonucleicacid
by phenoltreatment", Biochem. Biophys. Acta vol.
72, pp.619-629 (1963))に従って、Genomic DNAを抽
出した。
【0021】抽出したDNAを、制限酵素PstIで完全消
化し、ベクターpGEM-3Z にランダムクローニングし、得
られたクローンから Streptococcus pneumoniae 菌特有
の、すなわち、天然の Streptococcus pneumoniae 菌が
保有するDNAとの特異的反応性を示したDNA断片を
含む7種のプローブを選抜した。
【0022】そして選抜された各プローブを、プローブ
SP-22 、プローブSP-23 、プローブSP-25 、プローブSP
-26 、プローブSP-5-15 、プローブSP-5-34 、およびプ
ローブSP-6-6と命名し、その制限酵素地図を図1ならび
に図2に示した。
【0023】(2) Streptococcus pneum oniae菌由来DN
Aプローブの種特異性の検討 各プローブと各種感染症原因菌株のDNAとの反応性
を、以下の方法により検討した。
【0024】まず、検討対象菌株として、下記表1に列
挙した臨床単離株および寄託菌株を準備した。 なお、
表1中の、ヒト・ゲノミックDNAおよび対照試料の入
手源として、4名の健康な成人男子から採取した白血
球、ならびにプラスミド pGem-32を含んだ Escherichia
coli K-12, JM109形質転換体をそれぞれ準備した。
【0025】
【表1】
【0026】そして、各臨床菌株を実施例1(1) に記載
の方法に従って、各菌株が保有するDNAを抽出し、こ
の抽出したDNAの一定量(例えば、5μl)をナイロン
フィルタにスポットし、アルカリ変性したものをドット
・ブロット・ハイブリダイゼーションの試料とした。
なお、ヒト・ゲノミックDNA試料は、前出のSaito-Mi
ura 法に、先に入手した白血球を適用することで調製し
た。 一方、対照試料は、後述する実施例2(1) に記載
のプラスミドDNAの調製方法に、先に入手したプラス
ミド pGem-32を含んだ Escherichia coli K-12, JM109
形質転換体を適用することで調製した。 次いで、Digo
xigenin-11-dUTP (BRL社製) でラベルしたStreptococcu
s pneumoniae菌由来のDNAプローブを、マニアティス
のマニュアル(T. Maniatis,et al., "Molecular Cloni
ng (A Laboratory Manual)",Cold Spring Harbour Labo
ratory (1982))に従い、45%ホルムアミド、5×SSC、4
2℃の条件下で、終夜ハイブリダイゼーションを実施し
た。
【0027】終夜ハイブリダイゼーションを終えた試料
を、55℃にて 0.1×SSC 、0.1%SDSによる20分間の洗浄
を2回行った後に、 Anti-Dig-ALP conjugates(BRL社
製) で検出・発色させ、ハイブリダイゼーションの状況
を確認した。
【0028】各プローブと各臨床菌株のDNAとの反応
性に関する実験結果を、下記表2に示した。
【0029】
【表2】
【0030】上記表2から明らかなように、いずれのプ
ローブもStreptococcus pneumoniae菌に由来するDNA
に対してのみ反応性を示し、Streptococcus 属以外の菌
種由来のDNAはもちろん、Streptococcus 属の他の菌
種由来のDNAに対しても反応性(ハイブリッドの形
成)が認められず、その種特異性が確認された。
【0031】実施例2:塩基配列の解析 実施例1にて種特異性が確認されたDNAプローブ(計
7本)の塩基配列を下記の方法に従って決定した。
【0032】(1) プラスミドD NAの調製 サブクローンされた(塩基配列を決定すべき)挿入断片
を pGem-3Z(Promega)に含んだEscherichia coli K-12,
JM109形質転換体を、5mlの Luria-BactaniMedium (ba
cto-tryptone, 10g/1L; bacto-yeast extract, 5g/1L;
NaCl, 10g/1L; 5N NaOH でpH 7.0に調整)に植菌し、
一晩培養した。
【0033】培養液を遠心分離(5,000rpm,5min.)して
集菌した。 沈澱物に2.5mg/mlの濃度でリゾチーム(Sig
ma) を含む 50mM グルコース/50mM Tris-HCl(pH8.0)/10
mMEDTA 溶液を 100μl 加え、室温で5分間放置した。
得られた懸濁液に1%の濃度でドデシル硫酸ナトリウ
ム(Sigma)を含む 0.2M水酸化ナトリウム水溶液を加え
て混合した。 5M酢酸カリウム水溶液(pH4.8) 150μ
l をさらに加えて混合し、15分間氷冷した。
【0034】そして、遠心分離(15,000rpm, 15min.)し
て得た上清を、フェノール/CHCl3処理し、上清に2倍量
のエタノールを加え、さらに遠心分離(12,000rpm, 5mi
n.)して沈澱を得た。 この沈澱物を、10mM Tris-HCl
(pH7.5)/0.1mM EDTA溶液 100μl に溶解し、10mg/ml RN
aseA(Sigma)溶液を加え、室温で15分間放置した。
【0035】この調製物に 0.1M 酢酸ナトリウム水溶液
(pH4.8) を 300μl 加え、フェノール/CHCl3処理し、上
清にエタノールを加えて沈澱を得た。 この沈澱物を乾
燥し、10μl の蒸留水に溶解したものをDNA試料とし
た。
【0036】(2) 塩基配列決定 の前処理 塩基配列決定の前処理を AutoRead(登録商標) Sequenci
ng Kit (Pharmasia)を用いて行った。
【0037】すなわち、鋳型となるDNAが32μl 溶液
中に5〜10μg の濃度になるように調整した。 1.5mlの
ミニチューブ(エッペンドルフ)に、鋳型DNA 32μl を
移し、2M水酸化ナトリウム水溶液を8μl 加えて穏や
かに混合した。 そして、軽く遠心した後、室温で10分
間放置した。
【0038】3M酢酸ナトリウム(pH4.8) 7μl と蒸留
水4μl を加え、さらにエタノールを 120μl 加えて混
合し、ドライアイス上で15分間放置した。 そして、15
分間遠心分離して沈澱したDNAを集め、注意しながら
上清を除去した。 得られた沈澱物を70%エタノールで
洗浄し、10分間遠心分離した。 そして、注意しながら
再度上清を除去し、減圧条件下で沈澱物を乾燥した。
【0039】沈澱物を蒸留水10μl に溶解し、螢光性の
プライマー〔Fluorescent Primer,M13 Universal Prime
r; 5'-Fluorescein-d CGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT -3'
(1.6pmol/μl; 0.42 A260 unit/ml); M13 Reverse Prim
er, 5'-Fluorescein-d CAGGAAACAGCTATGAC -3'(2.1pmol
/μl; 0.42 A260 unit/ml) 〕2μl (0.42 A260 unit/m
l, 4〜6pmol)とアニーリング用緩衝液2μl を加え
穏やかに混合した。
【0040】そして、軽く遠心した後、65℃で5分間熱
処理を行い、素早く37℃条件下に置き、そこで10分間保
温した。 保温後10分以上室温で放置し、軽く遠心し
た。そして、延長用緩衝液1μl とジメチルスルホキシ
ド3μl を加えたものを試料とした。
【0041】4本のミニチューブにA、C、GおよびT
と記入し、それぞれのチューブにAMix (ddATPをdATP、
dCTP、c7dGTPおよびdTTPと共に溶解したもの) 、C Mix
(ddCTP をdATP、dCTP、c7dGTPおよびdTTPと共に溶解し
たもの) 、G Mix (ddGTP をdATP、dCTP、c7dGTPおよび
dTTPと共に溶解したもの) およびT Mix(ddTTPをdATP、
dCTP、c7dGTPおよびdTTPと共に溶解したもの) を 2.5μ
l ずつ分注した。 なお、それぞれの溶液は使用時まで
は氷中で保存し、使用時には37℃で1分間以上保温して
から使用した。
【0042】希釈したT7DNA ポリメラーゼ(Pharmacia;
6〜8units/2μl)2μl をDNA試料に加え、ピペッ
ティングもしくは穏やかな混合により、完全に混合し
た。
【0043】混合後すぐに、この混合液を 4.5μl ずつ
保温しておいた4種の溶液に分注した。 なお、分注に
際しては新しいチップを用いた。
【0044】37℃で5分間保温し、停止溶液を5μl ず
つそれぞれの反応液に加えた。
【0045】この分注においても、新しいチップを用い
た。 90℃で2〜3分間保温し、すぐに氷中で冷却し
た。 電気泳動には1レーンあたり4〜6μl を泳動し
た。
【0046】(3) 塩基配列の決 実施例1および2に開示した、Streptococcus pneumoni
ae菌が保有するDNAに対して特異性を有するプローブ
それぞれの塩基配列の決定を、泳動温度45℃、泳動時間
6時間として、A.L.F.DNA Sequencer システム(Pharmac
ia) を用いて行った。
【0047】その結果、プローブSP-22(配列番号1)、
プローブSP-23(配列番号2) 、プローブSP-25(配列番号
3) 、プローブSP-26(配列番号4) 、プローブSP-5-15
(配列番号5)、プローブSP-5-34(配列番号6)、およ
びプローブSP-6-6(配列番号7)それぞれの塩基配列の
全容が明らかとなった。
【0048】
【発明の効果】本発明のプローブを用いれば、例えば、
食細胞に取り込まれた感染症原因菌を増殖することなく
直接検出し、かつ菌を迅速にしかも正確に同定できる。
すなわち、本発明のプローブを用いた診断では、1回
分の検体で菌の同定まで行え、診断に要する時間も従来
法の3〜4日(検出される率は低い) から、約1〜2日
と飛躍的に短縮でき、しかもその検出率は格段と高い。
それ故、細菌性肺炎の治療に対して画期的な指針を与
えるばかりでなく、感染症患者に早期の内に有効な治療
が実施でき、ひいては死亡率の低減も期待される。
【0049】また、感染症疾患起炎菌の中でも、特に、
肺炎の発症に深く関連する、Streptococcus pneumoniae
菌が保有するDNAに特異的に反応するプローブの塩基
配列を明らかにしたことにより、これらプローブを人工
的に調製することを可能とした。 さらに、解析した塩
基配列の情報の一部を利用して作製したプライマーを用
いて、臨床検体に含まれる感染症原因菌のDNAを、P
CR法によって増幅して、原因菌の迅速な診断に役立て
ることができる。
【0050】さらに、臨床検体に含まれるGenomic DN
Aの塩基配列と本発明によって解析された塩基配列とを
比較参照することにより、肺炎起炎菌種の迅速な同定が
行える。
【0051】上記したように、本発明は、所期の目的で
あった感染症診断用プローブを提供するのみならず、P
CR用プライマー作製の指針として、また臨床検体に含
まれるGenomic DNAとの比較参照用に適した標準配列
として優れた有用性が期待され、さらには感染症疾患起
炎菌(肺炎起炎菌)が保有するDNAに特異的に反応す
るプローブの今後の探究・開発における貴重な手がかり
をもたらすなどの優れた効果を奏するものである。
【0052】また、本願出願にて開示した塩基配列は、
臨床分離株のGenomic DNAをランダムにクローニング
して得られたものであり、それ故、本発明の塩基配列の
有用性はその相補鎖にまで及ぶものである。
【0053】さらに、野性株が保有するDNAに変異部
分が存在することは当然考えられるが、上記実施例の開
示から明らかなように、当該DNA変異部分が、感染症
診断のためのハイブリダイゼーションへ利用する際の本
発明プローブの特異性、あるいは本願出願にて開示した
塩基配列情報を感染症の迅速診断を目的としたPCR法
のプライマーをデザインするために利用できる等の、本
発明が奏する有用性には何ら影響を与えるものではな
い。
【0054】
【配列表】
配列番号:1 配列の長さ: 368 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:ストレフ゜トコッカス ニューモニエ (Streptococcus pneumonia
e) 株名:臨床分離株 SP-22 配列 CTGCAGCTTT CAAGGAACCT GTCAAGAGAG CCAGTTTCAA ATTGGGAAAA AGGTTCTGTA 60 AACTCTCAAA GTGTTGCTCT GCGAGGATTT CTGTTGGTAC CATTAGGGCA GCCTGATAAC 120 CTGCTGTCAC TGCCGCAAAC ATGGCCAAGC CAGCGACTAC CGTTTTTTCC ACTCCCCACA 180 TCCCCTTGTA GGAGACGATT CATGTGGTGG TCGGACTTCA TATCAGTTAA AATTTCCTGC 240 AAACTCTTTT CCTGAGCTTG GGTCAGGGCA AAAGGAAGAC TTACTTTAAC TGCTGTCACT 300 TTTTCCTGAG ACCAATTCAG AACCAGACCA CTTCCCTGAA CTCTATTTTC AGACTTGAGC 360 ATCTGCAG 368 配列番号:2 配列の長さ:1978 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:ストレフ゜トコッカス ニューモニエ (Streptococcus pneumonia
e) 株名:臨床分離株 SP-23 配列 CTGCAGGTTC CCCTGTATTT GCTGGTTTCA TTACTGGTTT AATCATGGGA GATGTGACTA 60 CTGGTTTACT TATCGGTGGT AACTTGCAAC TGTTCGTTCT TGGGGTTGGT ACCTTCGGTG 120 GTGCTTCTCG TATCGACGCA ACTTCTGGTG CGGTTCTTGC GACAGCCTTC TCTGTTTCAC 180 AAGGAATTGA TGCACCGCTT GCCATTACTA CAATCGCTGT ACCAGTAGCA GCTCTCTTGA 240 CTTACTTCGA CGTTCTTGGT CGTATGACTA CTACCTTCTT ?GCTCACCGT GTGGATGCTG 300 CAATCGAACG CTTTGACTAT AAGGTATTGA ACGCAACTAC TTGCTTGGTG CGATTCGTGG 360 GCTCTATCTC GTGCCCTTCC AGTCTTCTTT GCCCTTGCTT TTGGTGGTGC CTTTGTACAA 420 TCAGTAGTAG ACTTCGTTGA AGCCTACAAA TGGGTTGCAT ATGGCTTGAC ACTTGCAGGA 480 CGTATGCTTC CAGGTCTTGG ATTTGCAATC TTGCTTCGTT ACCTTCCAGT TAAACGTAAC 540 CTTCACTACC TTGCTATGGG ATTTGGTTTG ACAGCTATGT TGACTGTTCT TTACTCATAT 600 GTAACAGGTC TTGGTGGCGC TGTTGCTGGT ATCGTAGGTA CTCTTCCTGC TGAAGTTGCT 660 GAAAAAATTG GTTTCGTGAA CAACTTCAAA GGTTTGTCTA TGATTGGTAT TTCTATCGTA 720 GGTATTTTCC TTGCAGTGCT TCACTTCAAA AATAGCCAAA AAGTAGCTGT AGCAGCACCT 780 TCTACACCAT CAGAAAGTGG GGAAATCGAA GATGACGAAT TCTAATTACA AACTTACAAA 840 AGAAGATTTT AATCAAATCA ACAAACGTAG CTTGTTTACT TTCCAATTAG GTTGGAACTA 900 CGAACGTATG CAAGCTTCTG GTTACCTTTA CATGATCTTG CCTCAGTTGC GTAAAATGTA 960 TGGTGATGGA ACTCCTGAAT TGAAAGAAAT GATGAAAGTT CATACTCAAT TCTTCAATAC 1020 TTCACCATTC TTCCATACCA TTATCGCTGG TTTTGACCTT GCCATGGAAG AAAAAGATGG 1080 TGTAGGTTCA AAAGACGCCG TTAACGGTAT CAAGACAGGT TTGATGGGAC CATTCGCTCC 1140 TCTTGGGGAT ACAATCTTTG CTTCACTTGT ACCTGCTATC ATGGGGTCAG TCGCAGCAAC 1200 TATGGCTATC GCTGGCCAAC CTTGGGGGAT CTTCCTTTGG ATTGCAGTTG CAGTAGCGTA 1260 TGACATCTTC CGTTGGAAAC AGTTGGAATT TGCTTACAAA GAAGGGGTTA ACCTTATCAA 1320 CAACATGCAA AGTACCTTGA CAGCTTTGAT TGACGCTGCA TCTGTACTTG GTGTCTTCAT 1380 GATGGGTGCT CTTGTAGCAA CAGTGATTAA CTTTGAAATT TCTTACAAGT TGCCAATCGG 1440 TGAAAAGATG ATTGATTTCC AAGACATCTT GAATCAAATC TTCCCACGTT TGCTTCCAGC 1500 AATCTTTACT GCCTTTATCT TCTGGTTGCT TGGTAAGAAA GGTATGAACT CTACTAAAGC 1560 TATCGGTATT ATTATCGTAC TTGCTTTGGC TCTTTCTGCC CTTGGTCACT TTGCACTTGG 1620 AATGTAATTC CTTATGACTA AATCATTAAT TTTGTGAGCC ATGGTCGCTT CTGTGAGGAG 1680 CTTAGAGGTA GCACAGAAAT GATTATGGGC CCACAAGACA ACATTTACAC AGTAGCTCTT 1740 CTTCCAGAAG ATGGCCCAGA AGAATTTACT GCTAAATTTG AAGCTGTTAT TGGAGGATTG 1800 GATGATTTCC TAGTCTTTGC GGATCTTCTC GGTGGGACAC CTTGTAATGT GGTGAGTCGC 1860 TTGATCATGG AAGGTCGTGA TATTGACCTT TACGCAGGGA TGAATCTTCC AATGGTGATT 1920 GAATTTATCA ATGCGAGCCT TACAGGCGCA GATGCGGACT ACAAGAGCCG TGCTGCAG 1978 配列番号:3 配列の長さ:1124 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:ストレフ゜トコッカス ニューモニエ (Streptococcus pneumonia
e) 株名:臨床分離株 SP-25 配列 CTGCAGGTTT TGTCCTCAAC CTCCCAATCA AAGAAAATAT GAGAAATCTG CGAGTTAAGA 60 TTGAGAAAAA GACGGGCCTA CTATGGAATA GATGGCAAAC AATCTATGAA AACAGACCAA 120 TTTTAGCTCA ACCCCACCGT AAAATTACCC ATTGGGGTAC GACATTGAAT TCCAAGGTGA 180 GTGACGATGA TGTCTTGTAA TCTGATGGTA GAATGACAGT TAGTTTGTCT AGTTTATAAG 240 AAAGTACTAC CTGAGCTTGA ATAGAACTCA GGTAGCTCTC TATGAAAGAA CAAAATTAAT 300 ACTCAATGAA AATCAAAGAG CAAACTAGGA AACTAGCCGC AGTTTGCTCA AAGCACTGCT 360 TTGAGGTTGT AGATAAGACT GACGAAGTCG TCACCATATA TAATCCAAGG CGACGTTGAC 420 GTGGATTGAA GAGATTTTAG AAGAGTATAA ACAGAAAGGT AGAGCGCGTG TTCTAATTTG 480 AACACGAGTA GAAAACTTTT CTAAAAGCAA AAACGAAAGG ATGGGTAAAC TGTATTCGCT 540 GAACTGAATA CGGGCGACTC TCCTCTAAAT CAAAATTAAG AAAGGAATTG ACCCCACCCT 600 AAAAGTAGTG GGAAAAAGAT AGTTGGTCTA GCGAGCATCG CTCACTGCGC CCAACTCCTA 660 TTTTCCCTTC GCTTTTTGAT GGGTTTGGTA TCTTTCTCAA TATAAAATAT AAATAAGAAG 720 ATAGAGCGTG TGTTTTGATT TGAACACGAG CGGAAAACTC GGAAAATAGA TAATCTGACT 780 GAAAAATCAG GATTTCTCGT CAGGTTCCTA ATTTTCAGTC GTTTTCTTCT CGCTCTTTGT 840 ATCATAAATT ATGTCTATCC ATATTGCTGC TCAGCAGGGT GAAATTGCTG ATAAAATTCT 900 TCTTCCTGGG GATCCTCTTC GTGCTAAGTT TATTGCGGAG AATTTCCTTG ATGATGCTGT 960 TTGTTTTAAC GAAGTGCGTA ACATGTTTGG TTACACTGGT ACTTACAAGG GTCACTGTGT 1020 ATCTGTCATG GGAACTGGGA TGGGAATGCC ATCTATTTCG ATTTATGCGC GTGAGTTAAT 1080 CGTAGACTAC GGTGTGAAGA AATTGATTCG TGTGGGAACT GCAG 1124 配列番号:4 配列の長さ:5949 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:ストレフ゜トコッカス ニューモニエ (Streptococcus pneumonia
e) 株名:臨床分離株 SP-26 配列 CTGCAGGCTG CTCAAAACAC TGTTTTGAGG CTGTAGATGG AAGCTGACGT GGTTTGAAGA 60 GATTTTCGAA GAGTATAGAC CACAATTACT CAATACCGAA TACCCCTGAA TGGTTTCTTT 120 TTCATGCACC AATATATTAT AATAATCTTC ATCCAATAAT AAGGCTGATA AACTAGCATC 180 TTGGTCAAAA TGTAAGGGAA TTTCTCGGCC GTCCTTCTTT AATGTATATT CTGGTAAGAT 240 ACTAAATAGT TCAATCATAG AAGGAAACTC AGGATTAGTT GTTGTAAATC GAAAAAGCTG 300 CGCTTTCTCA TCTTTCCTGA CTTCCTTGAT ACTCTCCCAA TTCTAAAAAA TGATTCAAGG 360 TAGTATAAAA TTCCTTATTT TTTACTTCAT CAATGATGAC CATATCATAA TCTTTTGTTG 420 TGCGACTTTT AAATCCTTGC GAATCCAATA CGATAGAGGT AGCAGTTCCC CCAATCAGAA 480 CATAATAGTT CTGAAAATCC GCAAACGTTT CTTGAAAAAT AACTTTCGTA TTAGCTGGCA 540 TCATCTTCTC CCAGATACTG TAATATCATA TTTTCTAGTG CTTCACTCTC TTCCTCTATA 600 CGTGGGTCAT CATCATCTTT TAAGGTCAAA TAAAGAGAAA TCGGATCTAC AAATTGTTTA 660 TCATGATTAT TTTTAAAATC ATTCCAAAAC TCAGATACAA AAGGACGATA TTTCCATATC 720 TCTAGCATCT TTCCTTTTAA AATATGCTGA GAAAGTGGCA AGGATAACTG ATTGAATTTT 780 CTCTGCCATA TGACATAGCT AGTATTTTCA TCCGTTTCAG CTAAAAAAGT TGAATGCGAC 840 AAAGCATAAG CACCACCATA TAGAAGGTTA GAAACAGATT TTATCTGCTT TATATCGCCA 900 TCTGGCAATA AAATCCGTTT TTTGATGGGA TTAAATAAAC ATGACACGGA TTTTAAGAAT 960 AATTCTTTCT TTGACACCGT ATATGTGTAA AGCTTATTTT GCTTGTTTAA CCAATATAAA 1020 GCTTTAAAAG TCCTCAAACA CCTATAAATT GTTGAGTTTG GAAGTCCAGT GACTTGTGAA 1080 AGCAAATCAA CATCTACTAC TTTTTGACCT TTTGTCAATA AAAAGGCAAT CCACGTTAAT 1140 TGTTCGCTAG GTGTTAATTC CTTAGGGACT TCAGTATCAT TCGCATTGAG TACTAGTCCC 1200 AATGGAGGGA AGAAGAGGTT TCCCTTAAAG TCTACAAACG GAACTCTAGC TTGAAGTAAT 1260 TGCTTTTTTT CACTGTCTGA TAACTTCGAA AACACCAAAA CAACATCCAT ATTGGCTTTT 1320 TCACCCATAG TGCGAGCCTG AGTAACAAAT GAACTCAAAC TCCCCCTTCT CTTTTCTTTA 1380 ATCAATAAAA ATGATTCCTT ATGAAAAGTC ATTTGAGTAT ACTCAAACCT TTTTACAAAA 1440 CTGATTGATA AAGTCAAAGT CAGTTCCTCA ATACTGACAT CAACATAAAA GGATTGAAAA 1500 ATTGACATTA TCTTTTTGAC ATTCATGTTT TTTCCTTATT CTATCATTTT TATTATATTT 1560 TATCATTCGG TATAATAAAA TATAAGTTTT TTGATAAAAT AACCAAAAAC TACTCCCTAT 1620 CCCCTCTCAC ACTACCCTAC ATATCGTTTG ACATGCGACT GATAGTTCAG GAAAACTTCA 1680 AGGAGAACTT TTCTCTCATC CACTATGCAG GACTTACTAT TTCACTTCTA CTCCTATAGG 1740 CTCAATTTGA CACTTTTCTT TTTCGAATTG CTCATATGCC TCCTGAATAG TGAGTTCGAT 1800 TTATCCAAAT TTATTTTTGT CTATTTTGAT GAATACTTCC ACGAAGATAG TCTGAAAATG 1860 AATTTGCACC AATTTTCCTT CTCTTTTTAA GCATATTATT CCAGATATGA TTGCCCTCTT 1920 GTTCAGTAAT AAATTACGCT TTAAACGCTT CAATCAGTAT ATCTCCTGTT GTCATATGTT 1980 CTAAAGAAAA TTCTTCTACA TATGATTTAA CATCTCTTAG GTTATTACTT CCTAATATCC 2040 CATTATGCTT TTTCGCTAAG GAAATAGAAG CCGCTTCTCC CTTACCAATA ATCTTGTTAC 2100 TATCATGATT TCTTGTTAAA TCTCTATATA ATGCGTATTC TTCAGTTCCA ATGTCTATGC 2160 TCACAATCTC AGCTGAACCC TTAGCTACCA ACTGATCTAT CCTAGATTTT AAATGGGGAA 2220 TTGTAGGTAT ATTGATTTCA TCATACACCT CTTGTGGAAT AACAATTTTA CCCGAATAGA 2280 GCTTTTCTAA AAGATGTTCA GTACCAACCC ATAAAAATAC TGAAATACAA TCTGCATCAA 2340 TAAATACACG ACTAGTCAAA CGACAACTCC CCCCTCTTCA TCTAGCCCAT ATACAATATC 2400 ATATCTGAAA GCATCTAGTA ACAGTTCCTC ATACTTCCCT TGCGAAATTC TGCTATTTTC 2460 TAAAGTGTTC AGTCAATTAT ATATATACTA ATACCATTTC CTTTTTACTT TCTGACAAAG 2520 GACGATATAA ACTTGTATCA TAGCCTAATC TTGAAGCTGT CTCTATAACA CTAATATCCA 2580 TATTTTTAAT TTCTTCTGCA TCAAGGTATC CATCATTCCT CAATCTATAT AACATAGCTT 2640 TATGACTGAT ACCATAAAAC TGACCCAATT TTATAATATC TTCTACTTCA AGATGAGTTC 2700 TATTGGCATT TTCTCTGATT TCCTCAACCA TCCTATACAG TGAAATGGGA AAATTAAAAA 2760 ATAAGAAGCA AACTGATCCG CTTTTCTTTC AGTTTCATCT CCTTCACCAA TCAAGATAAG 2820 ACTGACTGAA CTCTTCTTCA CCTCATCATA ATAAAGATGA TACAGTTCAT GTGCTAAAGA 2880 AAATCTTTAC CTTCCTAATG GCATGTCTGA ATTGACTGCA ATGAGACTGA AATGAGTTCC 2940 TTTATAACAG ACCCCGCTAA TATTCTTTCC GAGTCCATAA AATACCAGCG TCAAATTTTC 3000 TATCTTTTGT ACCAATTTAA AAATATCTAT CGGCGATTCA CCATCAGCTC CCAACTTTTT 3060 TCTAAGATTT GGAGCTTTAT TACTTAAATC CATTCGTGAT ATTCCTTTCA CCTTTTTCCA 3120 TTTTGGCAAT CATGCTTTGA TTCAAAGACA AATACTCAGC AATCTTATCT TGAGTAAGAT 3180 TTGAAGATAT TCTAAGTTCT TTTATTCTTT TTCCAACATC ACATACATTT ATCATATACA 3240 TTTATCATAT TCATTTATCA TATTCATACA CCTCTCATAA AAAGAATAGC ACACTCTTGT 3300 CATAATTTTT TAAATAAAAA AATTATGACA AAACAAGGAA GCAATTTATT GATGCTGCTT 3360 AAAAATCTAA AATTGATGAT ATTAAACCTA TTTGATGAAT TCCTATCAAA AATCGTATCT 3420 TCAACCTCAA AACAGTACTT AAAGCTATCC GACTCGGTTT ACATTGTCAA ATTTAGATTT 3480 TATTTGAGCA TAACTTTCTA GTTTGCTTTT TGATTTTTGT TTAATATAGT AGCAAAAATT 3540 GAAGGAAATA TCTCCACAAG AAAACGCATA CTATTAAGCT TTTTCAAGAC CTAATAATAT 3600 GCGCTGTTCT GATTTGAAAG ACATTCCATT ATTATTTTAC TGTAATCAAG CCATCTGGCT 3660 CTACTGTGAA TTCTGGCTTG TCTGCCAGTG TTCCGTCTGG TTTGAGGTAG TACCAGCCTG 3720 TTCCGTCCGC TGACTGGATA AAGGCATTTG ATACCATGGC GCCTTCTTTA GCGTCTAAGT 3780 AGTACCAAGT GTCCTTGTAC TTGACCCAGC CTGTCTTCAT GGCACCTTCT TCGTTGAAAT 3840 AGTACCACTT ATCAGCGATT TTCTTCCAGC CTGTAGCCAT TTCGCCTGAG TTGTCGAACC 3900 AGTACCAGTT GCCGTCTGTG TGCTTCCTCC AGCGGTCTGC AAGCATATAG CCTGAACTGT 3960 CAAAGTAGTA CCAAGTGCCA TTGATTTTCT CAAACTTGTC TTTTGGATAA GAGCCGTCTG 4020 AGTGTACGTA CCAGTAGCCA GTGTCATTCT CCTGCCAGCC TGTTTCAATC GTCAAGCCGT 4080 TCTCAATATC ATGCTTAAAC TGCTCACGGC TAATGCCCCA TTTTGCCAAG TAAGGGTATG 4140 GATCCACATG GTCTGAGTGG TTGTTTGGTT GGTTATTCGT GCAATACTCG TGCGTTTTAA 4200 TTCCAGCTAA ACTCCCTGTA TCAAGCGTTT TCGGCAAACC TGCTTCATCT GCTAGATTGC 4260 GTAAGAGTTC GATATAAAGG CGGTAGTCCG TCATGAACTC TTCTTTAGTT GAATGGCTTT 4320 CAATCAGTTC AACCGCTGCA TAGGTCTCAG CATTCCAACC GCCCCCAACG TCCCAGGCAC 4380 CATTATCAAC AGGTCCTACC TGCATGATGC AACCGTTCCC AACAATGTGC GAGAAAAAAC 4440 TAATTCTGGG TCTTTCCGCC AGTGATAATC CGCTTCATTC TGTACGGTTG AATGCGGATT 4500 CCCAGTTGAG TGTGCGTGTA CTTGCCTATA TGGTTGCACG CCGACTTGAG GCAAATCTGT 4560 TCTTAATTTA CTCACATTAA TTTCCATATT CTACTCCTTA TCAATTAAAA CAACTCATTT 4620 TTTACAATCC AAAACCAGAA ACTCCTTTAT TTCTACCTTA CAAAGAAGAC AATCTTAGTC 4680 ACGATTAGGC TTGTAGATAG AACCTCAAAA CGCACTATTT TGACACTGTA AATAGGACTG 4740 ACAAGGTCTG CATTCTATCT ACAATAACAC CCCAGACTAA AAAGCTTTTC AAAAGTATAT 4800 TTTTACAGTC TCTATATGTC CTTTTCATAA ATACTATACT TTATTATATC ATATAAAAGA 4860 AGTCAAAAGT CTGTTAAACT ATTTTCAACA CCAAACTAAA GAAGAGAACA CAAGTTTTTT 4920 CGATGTTCAC TAGAGGAAAT GGATTTTATT CAGTAAATCC AACTAGGATT GCACTTTGGT 4980 TGCCAAAATT GCCTTTCCTT CTTTTATCAA GGGATGACGG AATAGTGAGA AGTACAGTTG 5040 AACTGTCATG GCAACCCAGA TAAGAGGTTC ACAAAGGATA ACACCCTTAT ATCCTGCCCA 5100 AGGAATAATC AAAACCACAA AAACGATTTT TCCGATTAGT TCAATAAAGC TAGAAACTAG 5160 AGGAAGGATC TTCTGCCCCA AGCCCTGCAA GCAATGCGAT AAATCAACAA GAGCTCAAAA 5220 TGGATAAAAG GCTGAACTGG ATTTGCAGAT AGAGACTTCC ATTTTCTATC AAGTAACCAT 5280 CTGTCGAACT AGCCAAGAAG GAAATCAAGG CTGGGCTGGC AAAAAAGAGG AAAATACAAA 5340 CAAAAACTGC CCAGGATATA CTTAAACGAC TGCCGATTCG AAGACCTTGA GCAATGCGGT 5400 CAGGTCGCTT AGCTCCTAGA TTCTGAGAAG CAAAGGTCGT CATTGATGCA GAAATAGCGG 5460 TCATAGGAAG AAGGGCAAAG GTCATAATGC GTCGAGCTGC CGTCTGGGCA CTAATAATCA 5520 CTGCACCAAA TGTATTAACA GAAGACTGTA AAATCACACT GCCGATAGAT ACAATTGAAC 5580 TCATCAAGCC CATAGCCAAA CCTTGCTCCA AGAGATCCGC GTACAAGCTT TTGTCCCATT 5640 TGAAATGTTT AAACTGTGGC AAGAGTTCTG GCACACTTTT ACGAATATAA TAAAAGCAGA 5700 GAACCGCTGA TAAACCTTGT GAAATAATGG TAGCAAGTCC TGCGGATTGA ACTCCCAGAT 5760 GCAATTGCGT AATAAAATAG AGATCCAGAA CCACATTAAC CAAGGCAGAG AAAATCAGAA 5820 ATCCCAGGGC TGCTAGACTG TCACCAATAG ACCGCAACAA GCCTGCAAAA AGATTATAAG 5880 CAAAGCTGAC ACCTACACAG GTCACAATCA TAGAAATATA TTGATAAGAT TGAAGAAGAA 5940 TTTCTGCAG 5949 配列番号:5 配列の長さ:3568 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:ストレフ゜トコッカス ニューモニエ (Streptococcus pneumonia
e) 株名:臨床分離株 SP-5-15 配列 CTGCAGGATA TTTCTGCCTT GTATTGCCAG TGGTTTAGCG CCACAGCCAC ATATCTTTTA 60 CGGTTTTTTA CCGAGAAAAT CAGGTCAGCA GAAGCAATTT TTTTGGCTTG AAAAAAGATT 120 ATCCTGAAAC ACAGATTTTT TATGAATCAC CTCATCGTGT AGCAGACACG TTGGAAAATA 180 TGTTAGAAGT CTACGGTGAC CGCTCCGTTG TCTCTGGTCA GGGAATTGAC CAAAATCTAT 240 GAAGAATACC AACGAGGTAC TATCTCTGAG TTATTAGAAA GCATTGCTGA AACGCCACTC 300 AAGGGCGAAT GTCTTCTCAT TGTTGAGGGT GCCAGTCAGG GTGTGGAGGA AAAGGACGAG 360 GAAGACTTGT TCGTAGAAAT TCAAACCCGC ATCCAGCAAG GTGTGAAGAA AAACCAAGCT 420 ATCAAGGGAA GTCGCTAAGA TTTACCAGTG GAATAAAAGT CAGCTCTACG CTGCCTACCA 480 CGACTGGGGA GAAAAACAAT AAAGGGAGAC AGGATGTAAT AATTCTGTCT GTTTCTGTTT 540 AACTTAATTA GTGATGATAA TATAAAGATG TATCACTTGG TATAGAAGCT TTGGTATTAA 600 GTTTTTTATT AAGCCCATAC GGAATACCGA TGGTTGGAGC AGCAGTTATA GCGTTCTTAG 660 AAGGTATAAA TAGAAAAATA AGGTCATTTT AAATCAAAGG ATTGATAAAT CAGAAAGAAG 720 GTGATTTTTT GCGAACATAC GAAAATAAAG AAGAACTAAA AGCTGAGATA GAGAAAACAT 780 TTGAGAAATA TATTTTAGAA TTTGATAATA TTCCAGAAAA TTTAAAAGAT AAGAGAGCTG 840 ATGAAGTTGA CAGAACTCCA GCAGAAAACC TTGCTTATCA GGTTGGTTGG ACCAACTTGG 900 TTCTTAAATG GGAAGAAGAT GAAAGAAAGG GGCTTCAAGT AAAAACACCA TCGGATAAAT 960 TTAAATGGAA TCAACTTGGT GAATTATATC AGTGGTTCAC AGATACCTAC GCTCATTTAT 1020 CTCTGCAAGA GTTGAAAGCA AAATTAAATG AAAATATTAA TTCTATCTCT GCAATGATTG 1080 ATTCGTTGAG TGAGGAAGAA TTATTTGAAC CGCATATGAG AAAGTGGGCT GATGAAGCGA 1140 CTAAAACAGC GACTTGGGAA GTGTATAAGT TTATTCATGT AAATACGGTT GCACTTTTTG 1200 GAACTTTCAG AACTAAAATC AGAAAATGGA AGAAGATAGT ATTATAAATT ATATTTTTAA 1260 CTTTAAAAAA TTTCATAAAA ATGGTTACCA AAGGCGATAG AAGAAAAACT ATCGTCTTTT 1320 TCTTTGCAAA TTTTTAAGAA GGGGAGGTGA TCTTGCATGG ACTTTGAATA TTTTTATAAC 1380 AGAGAAGCGG AAAGATTTAA CTTCTTAAAA GTACCGGAGA TATTAGTTGA TAGAGAAGAA 1440 TTTCGGGGCT TATCAGCAGA AGCAATTATT CCTTTATTCC ATACTTCTTA AACAGACAGG 1500 AATGTCATTT AAGAATAACT GGATAGACAA GGAAGGCAGA GTATTTATCT ATTTTACTGT 1560 CGAAGAAATT ATGAAAAGAA GAAATATCTC AAAGCCAACT GCCATAAAAA CATTAGATGA 1620 GCTTGATGTA AAAAAAGGAA TAGGACTGAT CGAAAGAGTA AGGCTTGGAC TTGGTAAGCC 1680 GAACATCATT TATGTTAAGA CTTTATGAGT ATATTTCAGG TAAAAGAAAA TGACTTACAG 1740 AAGTCAAAAA ACTTAACTTC AGAAGTAAAA GATTTTAACC TCAGAAGTAA AGAAAATGAA 1800 CTTCAAGAGG TTAAGAACCT TGACTCTAAC TATATAGAGA ATAATAAGAG TAAGTATAGT 1860 AAGAGAGAAT ATAGTTTTGG TGAAAACGGA CTTGGAACAT TTCAAAATGT GTTTTTAGCT 1920 GCTGAAGATA TATCGGATTT ACAAATCATA ATGAACTCAC AGCTTGAGAA TTACATTAGA 1980 CTTTCTGCAA AACTAGAATC CTAGTTCATG ATTGATAATA CCAGCAATCA AATTCATTCG 2040 TAATCCGAAG CGTTTACGAT GATTTTGATA GGTTGTTGAA AACATTTTAA ACGTTTTTAC 2100 TTTGGCAAAG ATGTTCTCAA CCTTGCTTCT CTCCTTAGAT AGCGCATGGT TACAGGCTTT 2160 ATCTTCAACT GTTAGCGGCT TGAGTTTGCT GGATTTACGT GAAGTTTGTG CTTGAGGATA 2220 TATCTTCATG AGCCCTTGAT AACCACTGTC AGCCAAGATT TTACCAGCTT GTCCGATATT 2280 TCTGCGACTC ATTTTGAACA ACTTCCATAT CATGACAATA GTTCACAGTG ATATCCAAAG 2340 AAACAATTCT CCCTTGACTT GTGACAATCG CTTGAGTCTT CATAGCGTGA AATTTCTTTT 2400 TACCAGAATC ATTCGCTAAT TCTTTTTTTA GGGCGATTGA TTTTTACTTC CGTCGCATCA 2460 ATCATTACCG TGTCCTCAGA GCTGAGAGGA GTTCTTGAAA TCGTAACACC ACTTTGAACA 2520 AGAGTTACTT CAACCCATTG GCTCCGACGG AGTAAAGTTG CTTTCGTGAA TACCAAAATC 2580 AGCCGCAATT TCTTCATAAG TTCGATATTC TCGCACATAT TGAAGAGTAG CCATAAGAAG 2640 GTCTTCTAGG CTTAATTTAG GTTTTCGTCC ACCTTTTGCG TGTTTAAGTT GATAAGCTGT 2700 TTTTAATACA GCTAACATCT CTTCAAAAGT CGTGCGCTGA ACACCAACAA AACGCTTAAA 2760 TCGTGCATCA GTTAGTTGTT TACTTGCTTC ATCATTCATA GAACTACTAT ACCATATTTT 2820 GTTTCGCAGG AAGTCTATTG GAAAGTAAGA AATATTGAAG CTGAGGCTAT TAGAAGAAAT 2880 TGTGAGCGTG GTGCTATTTT TTCAGGTAAA ATAAAATATC ACGAAGATTC ACAGTTTAAA 2940 GGAGATCACT ATGTTGAATG TTATGCTGTT TTAGATAATA CGGTTATAGC AAGAGATAGA 3000 ATAACAGTCC CTATCGATCC GTTATGTGGA AAAGATTTTA TAGAGTAGCA TATAATTGAT 3060 TCTTAACTGG AATACTCACT ATCTCTTTAC ATCAAGAAAA TGACTAAACA GGGAAGTTTG 3120 CCTTCTTCCC TTTTTTTGTT ATACTAGTAG AAGAAAAAAT AGAAAGATTT GTGGGAGTGA 3180 AAAGTCCTGT GGACTTTTTC AGCCTGAGCC AAGAAACTCG AAAGCTCGTA AGTCTGATTG 3240 GCTTTTTCAA TGTGAATCTT AACTTCATAC TCCCAAAGAG GTATTAGTGT CGTGTCTCAA 3300 TCTTATATCA ATGTTATCGG TGCTGGTTTG GCAGGTTCTG AAGCAGCCTA CCCAAAATCG 3360 CAGAGCGTGG GTATTCCAGT TAAACTTTAT GAAATGCGTG GTGTCAAGTC AACACCTCAG 3420 CACAAAACAG ACAATTTTGC TGAGTTGGTT TGTTCCAATT CCTTGCGTGG AGATGATTTG 3480 ACAAATGCTG TTGGCCTCCT TAAGGAAGAA ATGCGTCGCT TGGGTTCTGT GATTTTGGAA 3540 TCTGCTGAGG CTACACGTGT TCCTGCAG 3568 配列番号:6 配列の長さ:4528 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:ストレフ゜トコッカス ニューモニエ (Streptococcus pneumonia
e) 株名:臨床分離株 SP-5-34 配列 CTGCAGATTG GTATTTATCG CCACCATCTC CGTAAGTCTT AGTACCTGTA AGGACAATTT 60 TCTTAGCCTT AATTGTCTTA CCAAAATCAA TGTCTTTTGG CTTATTGTTA TCTGGCCAAT 120 CAGTTGCAGT AAAGGTATGC TCCTTGCCAG ACTCATCTGT CACAACAAGT TTCACATCAC 180 GCAAGTTACC ATTTGAACCT GATCCACGTG GAACATAACG AAGTCCAGTG ATTTCAGTTG 240 CTTCTTTCAA GACCATGGTT GCAGGCTTGC CTACATCTCC TCCGCCCCAT GATGTATGCC 300 ATAAACTAGA TAAGTTTCCA TCAAAGGCAT TTGCAAGACC TTCTTGAGCC TGAGCAGGAG 360 CTGTAAGACT TGCAAAGTCA TCTGCTACCA AAGCCGTTTT CTTCTGAACC AAAGCATTCT 420 TCAAGGCTTC AATCTTGGCA ATCTCTGCAC GCGCTTCTTC CACACTGATA TCATCATCGG 480 CCTGACTGAG GTTAAAGACC GCCTCTTTCA AAGCATCCAT AGACTCTTTG GTGTAGTTAG 540 TCATGGCAAC CGTTGGCAAG TAGTTCTTCA GAGCATTTTC TGTCAACATC TTACCTGTTA 600 GGGTAATTTC TTCGATTTGA AGATTATCCA TCATGAAGTC GTTATAACCA CGGAAGTTGG 660 CATTTCCACC AGAATCACCA CGAGTATTAC TTGCATTTCC AGTTGAGTAG ATACCTACCC 720 AAGTATCCCC TGTTTCTGCA CCTGTCACGA GGAAGGTTGC CTTCTTGGCT TTCTTAGAAT 780 CTGTCCAAGT ATTTGGCAAT TCATGCATTT CCAAGTTGCT TGCTTGAGTA CCACGACGAC 840 CTGACTGGAA TTCTCCCTTA CCGACTACAA AAGCATAGGT ATTGTCTGAA CCTGCTTCGT 900 ATTCAAAGGT TACACGGTAG GTCTTACCTG CTTCAAAACG GAAGTTTTGC GGAATAGTTT 960 GGTAAACCAA GTTACGACGG CTCACTAGTC CATTTGTCTT GAGTGACCAA TTTCCTTCGA 1020 TAACATCATC GACTTTCTTA CCATTCCAAC CACGTTGTGT ATATGGATCG TGTTTTTCAG 1080 ACAAGTGAGT GCGGTTGTCT TCGACACCTT CGACACCACC CACTACAAAT GGGAAGATAC 1140 CCTGAGCAAC ATTTTCAAAG TCTTGCTTGA AGGTGCCTTT ACCTGTATCA TGCTTGTCTC 1200 CGTACATGCT TGAATTGTTT TCAAAGGTAC GAATTTCATC AAAGTAAGTT GCTTCATCAC 1260 CAGCTTCACG ACTCAATGTC AGAGTAACAT TTGATACGTC CGATCCAGTT GTAAAGAAGG 1320 CGTACATGTT TTGGAAGTAA CTTGTATCGT CAACTGTAGC ATTGTTACGA CGTGTATTGT 1380 GGGCATAGGC TTTTACATAG TTGAGGGCGA GAGACTTATT GGTATAAGTA GTCACTTCTT 1440 TTTCACCAGT ATTTACAGTG ATGCTCGCCT TGGCATTACT ACGGTTATCG ACACCGACAT 1500 AAACGGCATA CTTGGTATTT GGTTTCAAGC CAGTTAATTT CTGAGTGAGA CTAACTTTTT 1560 CTTTGTTTCC TTGAATACGA AGCATATCGT TTGCCCCTTG AGACTTGACA ATTTCTGCCT 1620 TAGAAGCATC GCCTGAAATG GTCCAATGTT TCAAGGTACC ACTGTTAAAT CCTTGGTCAT 1680 AGATGTGCAT GCCTTCACTC CATGACATTT CAGGATTGGT TTGTTTCGAA CGATAGAGAA 1740 CGTATGGTTG ATTTGCTAGA AGATCTAGGG TAATTTTACC ATCTTTTACA GTTAGTTCTT 1800 GCTCTTCTGT CTTACCTTGG TCAGTTAGCT TGTAAAGGTA AACCTTGCTC TTTGCCCAAT 1860 CGCTTGGAAG GGTCCAAGTT GTTGCACCGG CCTGCGTATT GAAGTAGTAC ATCTTTTCCT 1920 TATCAGTAGA AAGTTTCTTA CCATTTGCAT CCCAGTTCCA AGGAGTCAAG TAAGCTGAAC 1980 CATCTTGGAT GACACGTCCG TTGAGAGTTA CTGTACGTTC GCGATATTGT GGACTATTGA 2040 CATCATTTGA CTTACGAGTT ACAACTACTT TATTATTGTC AGCATCTACC AATTCCACTC 2100 GCATTTCTGG AGTCCATTTA TAGGTGCTAC CGTTATCGGT CATAGTCCAC CGGTGTACCA 2160 TTTTCCCATT TACTTACAGT GAAGTGTTGG AAGTACTTGG TCATGACGTC ATGGGCAAAT 2220 AAGTTAGTTA CATAGCCATT GTAGTCACTT CTTCCTTGCC AGCCTTCAAA GTCTTTCATG 2280 CTGTAGCCAC CTAGCAGTGG ATAGTTGGCT GCACCACCAT AACTTCTGTA GTCCCCTACC 2340 CAAGCATCTT TTTGGTGGTT ACGTATAAAG CGGGTGATGG CACTGTTGAT ACCTTTATTG 2400 GTGTAGCCAC CGTAGGTCAA GTCAGCTGCC CAGTGATGGA AGGTAGAGTC GTACTCACCA 2460 CCATGGCCCC ACTCGATCGC AAAGCGCCAG CCTTGTTTGT TAATTTCTTT AGCAAGAACG 2520 TGGGTAGCCC AGGCACCGTT ATCACCTGAT TGACCATTAC CCCAAACGTC CACATAGATA 2580 AAGTCGAGAC CGTCACCAAG TTTTTTCTTC AAATCTTCCC AACGTGCCAA ACGACCATGA 2640 GCTAGGTCAT AGGCAGCATC AATGTTGATA CCTTGATCTA GCCAGTTCCA ACCATAGCTA 2700 TAGCTTCCAT CTGGATTCTT ACGGAGAATT TTTTCATTGA AGTATTTAGA CTCAGGATAA 2760 GTTTCTGAAG CGTTAACGTG GATACCTAGA TGAGCTCCAT ATTTCTTAGC CTTCTCAATT 2820 AGGGTCTTGA AGTCTTCGAC ACCACCGATA CGCTTACCAA TATCAGCATA GTTCAAGTGA 2880 CCAGAGTCAT GGCCTTCGCT ACCATATCCT TTAAGGAGAA CACCTTGCCC AAGACCATCT 2940 GTGTGGAGAT TGATTTTCTT GATACCATCC AAGGTCATAA GGAATGGGTT TTGTGCTTGA 3000 GAACCAAAGT TCATCGCGAT ACGGTAAGCT GTGATATCCT TAACTTTTTT CCAACCTTGA 3060 GGATTGTTCA TAATGCTACG ATAAGCAATG GCACCATCCT GCCAATCGAC TTTCTTGTCT 3120 GCATTGGCAT CTTCAGTGAT AACAACCTTA GCACTTGGAA GTTCCTTCGT GTATTCTGGG 3180 AAAACAATGC CCTTATAAGC TTTTTCCCAT TGCCATTCAG AGCTGTGGAT TCCTACATAG 3240 TTGGCATTTC CGACTGTTTC TTTATAGGCT GTCAAACGAG TCCAGTCATT CGAACCACCA 3300 CCATAGCTGT TTTGAGAGTT ACTCCAAACA CCAGCAGCAA GCTTATCTGT AGAAACAAAT 3360 CCATACATGT AACCCTTGGC TAGATCTTTC ATTGGATTGG TTACATCGAT ATGATCATCT 3420 CCGCTGACAT GCGTATTGTT TGACATGGTT GCCCCATCAA ACTTAGCACC AGTTTGATCA 3480 CTAGAAACAG AGACTAAAGC ATTGCCGAGG AAACTAATAG AAGAAAGTAG TTTTCTTTCG 3540 TCATCAATCT TTTGACCTGG AGTGACTTGA TTGTGGTTGA CAATCTTGGT CACATCAAAG 3600 TGCAATTGAT TGTCCACAAC TTGCAAGCGT ACTGTCATTT CCGCATTGAT TAAGTGAGCA 3660 TCATCGCGAA GCTTCATCAA GTACTCTGCT GTTGTCTCAT TGATTTTCTT ATAAGTGACT 3720 TCAGGGGTGA TTCGGTGGTT ATTGATAAAG ACTTGGTTGA ACTGTTGAAC CTGTCCTGGC 3780 AAAGTATGTC CATTCAAGCT GTATTCCTTG ACACGAGGGA AGGCTTGGTC AATCACTGCT 3840 TTGAGAACCT TAGACTGAAT CGTGTCATAA GTCACCTTGC TATCATCAAC TTCAGGACCT 3900 GTTTCTTTTT CAGCAGGGGT ATCCTCTGTT TTTACCCCCT CTTGGTTATC CGTTTTAACG 3960 CTAACAACTG TTCGCTCATC GTCATAAGAG CCCGCCTTGA GAAGAATCTT CTTCTCATTT 4020 TTAAGATGGT CATTGACCGC AGCTGGTAGA GTCACTGTGT CAAAGAGATT GACATCGTTA 4080 TTGCTGGCAT TTAGCTGACC GTCTGACTTG AGAGTGATAG AGAGACGGTT TGTGATCTGT 4140 TTCAGAGCAG CAACACGACT ACCTCTATAC CAAGTGCTAG TTGTTGGAGA TTTATACTCC 4200 CAGAACCAGC CATCCTTGTC ATAACCGACA AAAACATTAT TCTTGGTATC TTTAAATTTC 4260 AAGAAGACAC CAAAGCGTGA TTTGCCCTTT TCAGAATCAT CTTTGAAGGT TAAATCAACA 4320 GTTGCATTTC CATTGGCATC AACGGTCAAG CCCTTCTTTT CAAACAGGGC TGGTTTACCT 4380 GCGTTATCAT TTTGAGCAGT TGAGGATAAT TGGTTGTAGC GGACACCTTT TTCTTCTCGG 4440 ATAGTGACTG TTCCCTGTTG TTCTTTTTTC TCTACCGTTT GCCATTCAGG GGTTACCGTC 4500 TTAGGTGTTT CAGGTTTAGC AGCTGCAG 4528 配列番号:7 配列の長さ:5579 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:ストレフ゜トコッカス ニューモニエ (Streptococcus pneumonia
e) 株名:臨床分離株 SP-6-6 配列 CTGCAGGCTT CCCTTTAGCA GTTACAGCCT GTTTCTTACG GTCTTTTTCA CTCCGGCCAA 60 TCGGCGCTTC AATTACACCA CGATCATTAG GCAGATTTCC ATGAACAATC GCCCAATATT 120 TGCGGAGAGA CTTTTTATCT TTGAGTTCTT GGGCAAGTAC TAGATGCGCA TCATCGTTTT 180 TAGCAATCAT GAGAAGACCT GACGTATCCT TATCAATACG GTGAACAATC CCTGGACGCA 240 GAACCCCATT GATACCCGAC AAGTCCTTAA TATGATACAT GAGGGCATTT ACTAGGGTTC 300 CACTGGTATG ACCAGCACTC GGGTGCACAA CCATTCCCTG AGGTTTGTTA ACGACAGCCA 360 CATCCTCATC TTGGTAGACT ATTTCTAGCG GAAGATCCTC AGCCACATAC TCTAATACCT 420 CTGGTTCTGG CACATGGTAA GTGACGACAT CACCCTCTTG GACTGTGTAT TTAGCTTTCT 480 TGACTTGACC ATTGACCAAG ACCTGGCCTG ATTTAATTTG TTCATTCGCG AGACTACGTG 540 ATAATTCTGA CAAATCTGAC AAAGCCTTAT CCAAACGCAG ACCACCAGTT TCAATTTTAA 600 TTTCCATTTA TTTCCTCTTT TAGCATTGCA ATCAATAAAA TAATCACTCC AACCGTCAGA 660 TAGCTATCTG CCACATTGAA AATTGCAAAG TTGATAAAGT CAAGGTGGAA CATATCCACA 720 ACAAAGCCCT GACTGACCCT GTCAATAAAG TTTCCAAGAC CACCCGCGAT TATTAGAGTC 780 AAACCCAAGA CCATCCAGAA TGAGTCCTCC ATGTGTTTAT GTAAATACCA AATGGCACCT 840 ATCACGACAA CCAGAGTAAT GACAGCGAAT AACAGCTGCT GATCTTGTAA GATAGAAAAG 900 GCTGCACCTC GATTTTGCAG GTAGGTCAAG CTAACGAAAT TGGGAATCCA GGAGCGCACT 960 TCACCCAGTG GAATCTGCTG GACGATATAG GATTTGACCA ACTGATCCAG CCCAATTAAA 1020 AGCAGTACAA TGACTGCCAC TATTGCTCTT TTTTTCATGA TTTCCTCTTT TGATCAAAAT 1080 ATTCTTGCAT GACTTCTACG AAGAGAGTCC CAGCTTGACT AAGCTCCACT TCTTCACGTT 1140 TAACATAGAC CATGCGGTTA TCTAGGTTAT CCTTGAGACG AATAACTGTA ATGCCATTAA 1200 CACTGTCACT ATCTAAAAAT CCAGAACCTG TCGCATAGGC GTCCGTCCGC TCCAAAATAC 1260 CATTCAAGGT GGCACGGTCT GTCACATTAA ACATCTGTGA GCTAGCGCTG GTATCGACAA 1320 AGTTCTCTGA ATAATAAAGG TACTCGTCTT TCTCTTGAGT GAAACAGACC GTTGGTAAAT 1380 CCGCTAAATC CTCCATGACT AATTCCTCTT TCTGGGCTAA AGGATGACCC TCACAGAGAT 1440 AAATATGGGT ATGGAAGGAA TCAATTCGAT GACCTCCAGA CCTAACTTTT CAACCCGTTG 1500 CATAATCCCC TTTTTATTTT GATTGTGGAG GTAGATAATC CCAATCTCAC TATGCCCTTG 1560 CGCCACTTCA TCTAATATTT GAACAGTAGT TGATTCAAAA ATACGGAAGT TCTTATAGTC 1620 AGGATAGCGC TCTGAAAAGG CCGTAATAGT TGGTGGTAAG AAGTCATAGT GCTGGCTAGC 1680 AACGGAAAAT TCATCTTTTT CTTCTTCAGG ATTGGCATAC TGATTTTGAA AAATATCAAA 1740 TCCTTTAACC AATTCTTGCG CTTTTTCATA AAATTCCATC CCACGACGGG TCAAGAAAGT 1800 CCCTGAGCTG GTCCGACGGA AAATCTTAAA GCCCAACTCT TTTTCCAAAT CACGAACAGA 1860 AATAGACAGA CTCGGCTGAC TAACATACAT CTTTTCAGCA GCTTCACGAA AAGTACCACT 1920 ATTGGCAATA GCCACAACAT AGCGTAATTG TTGAATGTTC ATCTTCTACC CCCAACTTCT 1980 TTATCTTTTC ATTATACCAT ATTTTAGAAG TTTTCCAAAA AGGAAAAAAG AACATCCTAT 2040 TCTTCTTAAC TATCTTCACT ATCTGCCTTT CTCACGCCAA TCTTATTTTC AAAATCAATT 2100 CAAAAAAATA AGTGGCTACA CACCACTTCA GTATCGGAAA GAAAAACGTT GACTATTTGT 2160 GAAAAAAGAA AATGCCGGAA AATTCCGACA TTTTTTTAGT AAGCTAACTT CCTGAAAATA 2220 GGAGTAACCA AACATCCCAG AAGGCAGTGA TATTGATGAG AATATGAACT AGTATTGGAT 2280 AGTAGAGATT TTTAGTCATG CGATACAATA GAGCTAAAAT CAGACCTCCA CTAGCATAAA 2340 TGAAAAAAGC AAGAGGAGTT AAAGCAAAAT TGATATGAAT ATAACCGAAA ATAATAGCAG 2400 AAAGCAAAAC ATCTCCGTAC CAAGGTGAGT TTTTGAAAAA GGTTGTCATA AGCACACCTC 2460 GATAAATCAA TTCCTCAGCA ATAGGGGCGA TGAAGCAAAC GATGAGCAAG AAATAAGGGA 2520 ACTCCTGTCT CCCCATCATT TCTATCGTTT CATTCAAAGA AATCTGATTT GAAGACAGGG 2580 ATATGAAATA CGAAAAGAGG AAGTCAGACA TATATGAAAT GATGTAGCCC AGTAAAAGGT 2640 AGATGAAGTA CCTCAGCTGC CACTTGAAAT GAAAAATTTT CTTTCCTGCA AAAACCAGTA 2700 GATAGATGAC CGCTAAGAAA AGAACTCCGC TCTCCATCAA AAGCAGAATC TGAAAAAATT 2760 CACGACTTGC TGGTAGATAG GGCTTTGCGA GGTGATTGAA AACTCTCCAA AACCAAGTTG 2820 ATTTGTAAAA AATTAAGGAC AATGCTAGTA AAATTTGAAT AGCCCGTTTT TTCATATTAA 2880 ATTCTCTGCT TTCTCCCCTT GTTTCTTCAT ATTACTAATA AATTTTACTT AAAATCTCGC 2940 AGCACTTCCT TTGCAAAGAT GATTGCCTCC TCCAATATAT CCTAAATCAT AGGTGCCTCT 3000 GGGACAAAAT CCATGAACCG GCAGAGTTAA TACTGGTTCT ATTTCCCAAT CGTACCTACC 3060 ATTAGGATTT TTACCATATG AATCTGCTCC ACCTTGTATC AGCTCTAATT CTTCATTTGT 3120 TAGATTTATA TTTTTTGTCA TTAAAATCAT GATATATTTC CTCCATTATT CTTCAGATTA 3180 GTTGAGTAAT CTGATACTCA TACCTACTTA CAAAAAAACT ATTATATTAA GTTGGTTTTT 3240 TAATTTGTCT AGTTGCAACA TTGACAAACA TAGTATAGCA TATCTTTGCG AAATATCCTC 3300 TTCAAATCAT GAATTGTCAT CAAAACATCT TAAACTATAA AATCAATTAG TCTCAAGCTT 3360 TCTATCAATT TCTTCTCCAA AATATGCTAT AATAATAGCA AAAGATAAAG AAGGAAGACC 3420 TATGATTAAA CTACTAGCCT TGGATATGGA CGGCACCCTC CTCAATGAAG CCAAGGAAAT 3480 CCCACAAGCT CACATTACTG CTATTCACAA AGCCATTGAA AAAGGTGTCA AACTGGTTCT 3540 CTGTACGGTC GCCCCCTTTT CGGTGTTCCT CCCCTACTAC AAAAAACTGG GACTCGACCT 3600 CCAGAATGAG TATGTGATTG TTAACAACGG TTGTTCAACT CACCAGACTA GCGACTGGGG 3660 CTTGGTTGAC TGGCAAGAAC TTAGTCCAGC TGACATCGAA TACCTCTATG ACCTTGCTGA 3720 AAAGAGTGAT GTTCAGTTGA CACTTTTTGA CGAGTCACAT TATTTTGTTC TCGGTGGAAA 3780 GCCCAATCAA GTTATTGAAA ATGATGCTAA ACTAGTATTT TCAGACCTGA CTGAAATTTC 3840 TCTTGAGGAA GCGACTAGTG GAAAGTTCCG GATGTTCCAA GGTATGTTTT TAGGAACAAA 3900 AGAACAAACA GACGATTTTG AGCAGCGTTT TGCTGAAGAG CTTTGCCAAC GATTCAGTGA 3960 GTTCGTTCGC AGCCTGTCAT TTATGAAGCA ATGCCACTTG GAACGACAAA GGCTACTGCT 4020 CTTCACGACT AGCTGAGATT TTGAAGATTG ATTCCTCAGA GATTATGGCC ATGGGCGATG 4080 CTAATAACGA TATCGAAATG CTCCAGTTTG CAGGGCTTGG GATTGCAATG GGAAATGCCA 4140 GCGATTATGT CAAATCTCTT GCGGATGCCG TTACCTCAAG CAACGAAGAA GACGGCGTTG 4200 CGCGTGCTAT TGAGAAATAT ATTCTATAAA AAAGAAAAGC AAATAGACAG AAGTTACTGC 4260 TATTTGCTTT TTTGCTAATA TTTTAAAATA CGGACTAATC AATAGAGAAG AATAGCGAAT 4320 CATAAAAATC GATTTACTAG ATGCCATAGT ATCTTATAGT TGCTAATAAG AAGTTAGTCT 4380 AGCAGAATGA ATCTCTCATT TCTCCCACAC TAATCTGTAA TTTGTCTATA CATTTTCTGG 4440 TCTTCTATCT CGAAACAAGC CCCAGTTTAG GCGTTCACTT GCTCCCTTGT CTAGGTTATA 4500 AGTAGCTAAC AGAACAGCTT CTTCTTGTCT TTCAGCTCGT TCTAGAATAG CTCCTGTTTC 4560 ATCCGTCATA AAGGAGGAAC CGTAGAAGTC AAGACTGGAA CTCTGTCCGC CATTTTCCTC 4620 ACTAGGAGTA ACCTCCTCTA AACCATAACG ATTGGCTGCG ATGACTGGAA CAATATTCGC 4680 TGCTGCGTGC CCTTGCATAG TACGTTGCCA GTGACCACAA CTATCTGTAT CCAAAATTGG 4740 CTCTGAACCG ATAGCTGTAG GATAAAAGAG CAATTCAGCA CCATTCAATG CAAGACAGCG 4800 CGCTGTTTCA GGGAACCATT GATCCCAACA GATACCGATA CCAATCTTAG CATAGCGAGT 4860 ATTCCAGACC TTGAAACCAG TGTTACCAGG CGTGAAATAG AATTTTTCTT GATAATAATG 4920 GTCATCTGGT ATATGGGTCT TTCGATAAAC GCCCAGCACT TCCCCATCTG CATCAATGAC 4980 GGCAATAGAG TTATACAAGA CATTACCATC TTTTTCATAG AAACTGATTG GTAAAACAAC 5040 TTGTAGTTCC TTAGCAATCA CCTTAAAATG CTGAATGGCA GTATTTTCCG CTACAGATTG 5100 GGCATACTGG TAGTAGTCAT ACTGACGTTC CTGACAGAAA TAGGGATGTT CAAACAACTC 5160 GGGCAAGAGA ATAATTTGGG CTCCTTGCTC AGCAGCCTGA CGTACTAAAC GCTCTGCGGT 5220 TTGGATATTT GTTGCCACAT CCTTAGCGCA TTGCATCTGA ATGGTTGCAA CTCTTACATT 5280 TCTCATCTTT TTCTCCTATT CTGGAATTTG TTGGGTGATA CAGTGGATAT TGCCACCACC 5340 TAAGAGAATA TCTCTGGCTG GTATTCCGAC AACTTTACGG TCTGGGAAAC ACTTGCTGAG 5400 GATATCTAAG GCCACTTGGT CGTTTACATC CTCAAACTGT GGAACCAAGA CAGCCTTGTT 5460 GGCGATATAA AAGTTTACGT AGGAAGCTGC TAGTCGTTCA CCTGCGTATC GCTCTTCTTC 5520 TCCTTCTTCA TAGATGTAGC CTGGCAAATC TTCTTCTGTC ACAACTTGTC GAACTGCAG 5579
【図面の簡単な説明】
【図1】 ストレプトコッカス・ニューモニエ(Strepto
coccus pneumoniae)菌検出用プローブ SP-22、 SP-23、
および SP-25の制限酵素PstIの制限酵素地図である。
【図2】 ストレプトコッカス・ニューモニエ(Strepto
coccus pneumoniae)菌検出用プローブ SP-26、SP5-15、
SP5-34、および SP6-6の制限酵素PstIの制限酵素地図で
ある。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 C12Q 1/04 6807−4B //(C12N 15/09 ZNA C12R 1:46) (C12Q 1/04 C12R 1:46) C12R 1:46) (72)発明者 上山 浩 大阪府大阪市城東区森之宮二丁目9番1412 号 (72)発明者 松久 明生 大阪府大阪市東成区中本1−5−29−805

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 感染症疾患起炎菌であるストレプトコッ
    カス・ニューモニエ(Streptococcus pneumoniae) 菌が
    保有するDNAを、制限酵素PstIで処理して得られるD
    NA断片を含み、およびストレプトコッカス・ニューモ
    ニエ菌が保有するDNAと特異的に反応することを特徴
    とする感染症診断用プローブ。
  2. 【請求項2】 前記感染症診断用プローブが、配列番号
    1乃至7に記載の少なくとも一つの塩基配列を含む請求
    項1に記載の感染症診断用プローブ。
JP23634894A 1994-09-30 1994-09-30 感染症診断用プローブ Expired - Lifetime JP3571378B2 (ja)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP23634894A JP3571378B2 (ja) 1994-09-30 1994-09-30 感染症診断用プローブ
CA002199938A CA2199938C (en) 1994-09-30 1995-10-02 Probe for diagnosing infectious diseases
DE69529758T DE69529758T2 (de) 1994-09-30 1995-10-02 Sonde für die diagnose von infektiösen erkrankungen
AT95933618T ATE233326T1 (de) 1994-09-30 1995-10-02 Sonde für die diagnose von infektiösen erkrankungen
PCT/JP1995/002036 WO1996010647A1 (fr) 1994-09-30 1995-10-02 Sonde pour diagnostic des maladies infectieuses
DK95933618T DK0785277T3 (da) 1994-09-30 1995-10-02 Probe til diagnose af infektionssygdomme
AU36189/95A AU689325B2 (en) 1994-09-30 1995-10-02 Probe for diagnosing infectious diseases
EP95933618A EP0785277B1 (en) 1994-09-30 1995-10-02 Probe for diagnosing infectious diseases
KR1019960706982A KR100238337B1 (ko) 1994-09-30 1995-10-02 감염증 진단용 프로브
US08/809,254 US6660852B1 (en) 1994-09-30 1995-10-02 Probe for diagnosing infectious diseases

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP23634894A JP3571378B2 (ja) 1994-09-30 1994-09-30 感染症診断用プローブ

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH0889295A true JPH0889295A (ja) 1996-04-09
JP3571378B2 JP3571378B2 (ja) 2004-09-29

Family

ID=16999484

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP23634894A Expired - Lifetime JP3571378B2 (ja) 1994-09-30 1994-09-30 感染症診断用プローブ

Country Status (10)

Country Link
US (1) US6660852B1 (ja)
EP (1) EP0785277B1 (ja)
JP (1) JP3571378B2 (ja)
KR (1) KR100238337B1 (ja)
AT (1) ATE233326T1 (ja)
AU (1) AU689325B2 (ja)
CA (1) CA2199938C (ja)
DE (1) DE69529758T2 (ja)
DK (1) DK0785277T3 (ja)
WO (1) WO1996010647A1 (ja)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000511769A (ja) * 1996-04-02 2000-09-12 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 新規化合物
US6348328B1 (en) * 1997-05-14 2002-02-19 Smithkline Beecham Corporation Compounds
USH2071H1 (en) * 1996-12-13 2003-07-01 Eli Lilly And Company Streptococcus pneumoniae gene HI0454
CA2236441A1 (en) * 1997-07-01 1999-01-01 Smithkline Beecham Corporation Gida2
EP0890641A1 (en) * 1997-07-10 1999-01-13 Smithkline Beecham Corporation Novel IspA
AU2002230275A1 (en) * 2001-02-02 2002-08-12 Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid B.V. Environmentally regulated genes, involved in the virulence ofstreptococcus suis
EP1446140A4 (en) * 2001-10-15 2007-03-07 Novartis Vaccines & Diagnostic TREATMENT OF HEAVY PNEUMONIA BY ADMINISTRATION OF TFPI (TISSUE FACTOR PATHWAY INHIBITOR)
KR20030056628A (ko) * 2001-12-28 2003-07-04 학교법인 성균관대학 폐렴구균 알코올 탈수소효소를 이용한 폐렴구균의 동정방법
AU2003300356A1 (en) * 2002-12-20 2004-07-22 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority Disposable hand-held device for collection of exhaled breath condensate
US7828741B2 (en) * 2002-12-20 2010-11-09 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority Utilizing lipopolysaccharide in exhaled breath condensate to diagnose gram negative pneumonia
AU2005244249A1 (en) * 2004-03-17 2005-11-24 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Treatment of severe community-acquired pneumonia by admistration of tissue factor pathway inhibitor (TFPI)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01137976A (ja) * 1987-11-20 1989-05-30 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規dnaフラグメント
US5212297A (en) * 1989-05-16 1993-05-18 University Of Kansas cDNA clones encoding chicken egg white cystatin
DK0613502T3 (da) * 1991-07-31 1999-06-28 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde og reagenser til detektering af bakterier i cerebrospinalvæske
FR2687168B1 (fr) * 1992-02-10 1994-03-25 Bio Merieux Fragment de l'adn genomique de streptococcus pneumoniae, sonde d'hybridation, amorce d'amplification, reactif et procede de detection de streptococcus pneumoniae.
DE69334090T2 (de) * 1992-07-07 2007-05-10 Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus aureus

Also Published As

Publication number Publication date
DK0785277T3 (da) 2003-06-10
WO1996010647A1 (fr) 1996-04-11
JP3571378B2 (ja) 2004-09-29
AU689325B2 (en) 1998-03-26
ATE233326T1 (de) 2003-03-15
AU3618995A (en) 1996-04-26
EP0785277B1 (en) 2003-02-26
EP0785277A4 (en) 1997-09-10
KR100238337B1 (ko) 2000-03-02
EP0785277A1 (en) 1997-07-23
CA2199938A1 (en) 1996-04-11
US6660852B1 (en) 2003-12-09
DE69529758D1 (de) 2003-04-03
KR970703431A (ko) 1997-07-03
DE69529758T2 (de) 2003-11-27
CA2199938C (en) 2002-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR0159071B1 (ko) 감염증 진단용 프로브
JPH0889295A (ja) 感染症診断用プローブ
JP2558420B2 (ja) 感染症診断用プローブ
US5489513A (en) Specific gene probes and processes for the diagnostic investigation of Candida albicans
EP0974658B1 (en) Probes for the diagnosis of infections caused by streptococcus pyogenes
JP3520172B2 (ja) クレブシェラ・ニューモニエ菌に起因する感染症の診断用プローブ
JP3914914B2 (ja) ストレプトコッカス・ピオゲネス菌に起因する感染症の診断用プローブ
JP3914915B2 (ja) ストレプトコッカス・ピオゲネス菌に起因する感染症の診断用プローブ
JP3914916B2 (ja) ストレプトコッカス・ピオゲネス菌に起因する感染症の診断用プローブ
JP2005198657A (ja) ヘリコバクターピロリ菌検出用プローブhp−34
AU716843B2 (en) Probes for the diagnosis of infections caused by (bacteroides fragilis)
JP2005192571A (ja) ヘリコバクターピロリ菌検出用プローブhp−60
JP2005211073A (ja) ヘリコバクターピロリ菌検出用プローブhp−66

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20040511

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20040524

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20040622

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20040624

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090702

Year of fee payment: 5

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090702

Year of fee payment: 5

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100702

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100702

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110702

Year of fee payment: 7

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120702

Year of fee payment: 8

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130702

Year of fee payment: 9

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term