JPH0889281A - 酵素による７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法 - Google Patents
酵素による７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法Info
- Publication number
- JPH0889281A JPH0889281A JP25502994A JP25502994A JPH0889281A JP H0889281 A JPH0889281 A JP H0889281A JP 25502994 A JP25502994 A JP 25502994A JP 25502994 A JP25502994 A JP 25502994A JP H0889281 A JPH0889281 A JP H0889281A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- adca
- catalase
- amino acid
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】セファロスポリン類抗生物質の製造原料となる
７−グルタリルアミノデアセチルセファロスポラン酸及
び７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の酵素を用
いる製造法の提供。 【構成】デアセチルセファロスポリンＣをカタラーゼ及
びＤ−アミノ酸オキシダーゼと接触させる７−グルタリ
ルアミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法、及び
デアセチルセファロスポリンＣをカタラーゼ及びＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼと接触させ、得られる７−グルタリ
ルアミノデアセチルセファロスポラン酸を、脱アシル化
酵素と接触させる７−アミノデアセチルセファロスポラ
ン酸の製造法。
７−グルタリルアミノデアセチルセファロスポラン酸及
び７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の酵素を用
いる製造法の提供。 【構成】デアセチルセファロスポリンＣをカタラーゼ及
びＤ−アミノ酸オキシダーゼと接触させる７−グルタリ
ルアミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法、及び
デアセチルセファロスポリンＣをカタラーゼ及びＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼと接触させ、得られる７−グルタリ
ルアミノデアセチルセファロスポラン酸を、脱アシル化
酵素と接触させる７−アミノデアセチルセファロスポラ
ン酸の製造法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、セファロスポリン類抗
生物質の製造原料となる７−グルタリルアミノデアセチ
ルセファロスポラン酸（以下、ＧＬ−７−ＡＤＣＡと略
すこともある）及び７−アミノデアセチルセファロスポ
ラン酸（以下、７−ＡＤＣＡと略すこともある）の酵素
を用いる製造法に関する。
生物質の製造原料となる７−グルタリルアミノデアセチ
ルセファロスポラン酸（以下、ＧＬ−７−ＡＤＣＡと略
すこともある）及び７−アミノデアセチルセファロスポ
ラン酸（以下、７−ＡＤＣＡと略すこともある）の酵素
を用いる製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】７−ＡＤＣＡを出発原料として、種々の
セファロスポリン類抗生物質が製造され、医薬品として
広く実用に供されている。７−ＡＤＣＡは、デアセチル
セファロスポリンＣ（以下、ＤＣＰＣと略すこともあ
る）の７位アミノ基に結合したアシル基を除去する反応
（以下，脱アシル化と略すこともある）等を経て製造さ
れている。ＤＣＰＣの化学的脱アシル化法は今日まで多
くの方法が知られている（例えば特公昭４１−１３８６
２号および特公昭４５−４０８８９号）。また、酵素を
用いるＤＣＰＣを原料とした７−ＡＤＣＡ製造法として
は、ＧＬ−７−ＡＤＣＡを経由する方法と、直接脱アシ
ル化する方法がある。前者は、ＤＣＰＣを酸化するＤ−
アミノ酸オキシダーゼ（以下、ＡＯＤと略すこともあ
る）を用い、ＧＬ−７−ＡＤＣＡを生成した後、脱アシ
ル化酵素で切断し、７−ＡＤＣＡを得る方法である（特
開昭６３−０７４４８８号）。後者は、ＤＣＰＣを直接
脱アシル化して７−ＡＤＣＡを得る方法である（特開昭
６２−０４８３７９号公報参照）。
セファロスポリン類抗生物質が製造され、医薬品として
広く実用に供されている。７−ＡＤＣＡは、デアセチル
セファロスポリンＣ（以下、ＤＣＰＣと略すこともあ
る）の７位アミノ基に結合したアシル基を除去する反応
（以下，脱アシル化と略すこともある）等を経て製造さ
れている。ＤＣＰＣの化学的脱アシル化法は今日まで多
くの方法が知られている（例えば特公昭４１−１３８６
２号および特公昭４５−４０８８９号）。また、酵素を
用いるＤＣＰＣを原料とした７−ＡＤＣＡ製造法として
は、ＧＬ−７−ＡＤＣＡを経由する方法と、直接脱アシ
ル化する方法がある。前者は、ＤＣＰＣを酸化するＤ−
アミノ酸オキシダーゼ（以下、ＡＯＤと略すこともあ
る）を用い、ＧＬ−７−ＡＤＣＡを生成した後、脱アシ
ル化酵素で切断し、７−ＡＤＣＡを得る方法である（特
開昭６３−０７４４８８号）。後者は、ＤＣＰＣを直接
脱アシル化して７−ＡＤＣＡを得る方法である（特開昭
６２−０４８３７９号公報参照）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】一般的に用いられる化
学的脱アシル化法は、反応工程が複雑であること、反応
に用いる副原料の価格が高いこと、反応の副産物として
大量の化合物が排出されることなど工業的には問題点が
多い。また、上記酵素反応を利用した、ＤＣＰＣからの
７−ＡＤＣＡの製造法は、収率が低い。このような状況
下、ＤＣＰＣより酵素反応により効率よく７−ＡＤＣＡ
を製造する方法の開発が望まれていた。
学的脱アシル化法は、反応工程が複雑であること、反応
に用いる副原料の価格が高いこと、反応の副産物として
大量の化合物が排出されることなど工業的には問題点が
多い。また、上記酵素反応を利用した、ＤＣＰＣからの
７−ＡＤＣＡの製造法は、収率が低い。このような状況
下、ＤＣＰＣより酵素反応により効率よく７−ＡＤＣＡ
を製造する方法の開発が望まれていた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＤＣＰＣ
をカタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼと接触さ
せ、得られるＧＬ−７−ＡＤＣＡを、脱アシル化酵素と
接触させることにより、効率よく７−ＡＤＣＡを製造で
きることを見いだし、さらに鋭意検討を重ねた結果本発
明を完成するに至った。即ち本発明は、（１）デアセチ
ルセファロスポリンＣをカタラーゼ及びＤ−アミノ酸オ
キシダーゼと接触させることを特徴とする７−グルタリ
ルアミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法、
（２）デアセチルセファロスポリンＣをカタラーゼ及び
Ｄ−アミノ酸オキシダーゼと接触させ、得られる７−グ
ルタリルアミノデアセチルセファロスポラン酸を、脱ア
シル化酵素と接触させることを特徴とする７−アミノデ
アセチルセファロスポラン酸の製造法、（３）カタラー
ゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼを担体に担持せしめた
（１）及び（２）記載の製造法、（４）脱アシル化酵素
を担体に担持せしめた（２）記載の製造法、及び（５）
脱アシル化酵素がアシネトバクター属菌由来である
（２）記載の製造法に関する。本発明の製造方法で用い
られる、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼは、ＤＣＰＣに作用
して、ＧＬ−７−ＡＤＣＡを生成する能力を有する酵素
であればいかなるものでも用いることができる。Ｄ−ア
ミノ酸オキシダーゼの好ましい例として、例えば特表平
４−５０４３６２号公報記載のＤ−アミノ酸オキシダー
ゼが挙げられる。さらに好ましくは、微生物〔例、トリ
ゴノプシス(Trigonopsis)属，ロドトルラ(Rhodotorula)
属，カンジダ(Candida)属等の酵母、ペニシリウム(Peni
cillium)属, アスペルギルス(Aspergillus)属等のカ
ビ、アエロバクテル(Aerobacter)属等のバクテリアな
ど〕由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼが好ましい。さら
に、酵母由来のものが特に好ましい。該酵素の具体例を
挙げれば、例えばトリゴノプシス バリアビリス（Trigo
nopsis variabilis）由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼ
が好ましい。
をカタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼと接触さ
せ、得られるＧＬ−７−ＡＤＣＡを、脱アシル化酵素と
接触させることにより、効率よく７−ＡＤＣＡを製造で
きることを見いだし、さらに鋭意検討を重ねた結果本発
明を完成するに至った。即ち本発明は、（１）デアセチ
ルセファロスポリンＣをカタラーゼ及びＤ−アミノ酸オ
キシダーゼと接触させることを特徴とする７−グルタリ
ルアミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法、
（２）デアセチルセファロスポリンＣをカタラーゼ及び
Ｄ−アミノ酸オキシダーゼと接触させ、得られる７−グ
ルタリルアミノデアセチルセファロスポラン酸を、脱ア
シル化酵素と接触させることを特徴とする７−アミノデ
アセチルセファロスポラン酸の製造法、（３）カタラー
ゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼを担体に担持せしめた
（１）及び（２）記載の製造法、（４）脱アシル化酵素
を担体に担持せしめた（２）記載の製造法、及び（５）
脱アシル化酵素がアシネトバクター属菌由来である
（２）記載の製造法に関する。本発明の製造方法で用い
られる、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼは、ＤＣＰＣに作用
して、ＧＬ−７−ＡＤＣＡを生成する能力を有する酵素
であればいかなるものでも用いることができる。Ｄ−ア
ミノ酸オキシダーゼの好ましい例として、例えば特表平
４−５０４３６２号公報記載のＤ−アミノ酸オキシダー
ゼが挙げられる。さらに好ましくは、微生物〔例、トリ
ゴノプシス(Trigonopsis)属，ロドトルラ(Rhodotorula)
属，カンジダ(Candida)属等の酵母、ペニシリウム(Peni
cillium)属, アスペルギルス(Aspergillus)属等のカ
ビ、アエロバクテル(Aerobacter)属等のバクテリアな
ど〕由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼが好ましい。さら
に、酵母由来のものが特に好ましい。該酵素の具体例を
挙げれば、例えばトリゴノプシス バリアビリス（Trigo
nopsis variabilis）由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼ
が好ましい。
【０００５】カタラーゼは、ＡＯＤの活性を増大させる
能力を有する酵素であればいかなるものでも用いること
ができる。該カタラーゼの好ましい例として、例えば特
表平４−５０４３６２号公報記載のカタラーゼが挙げら
れる。さらに哺乳類の組織〔例、ウシ肝臓、ネズミ肝臓
等〕、微生物〔例、アスペルギルス（Aspergillus）属
等のカビなど〕由来のカタラーゼが好ましい。該酵素の
具体例を挙げれば、ウシ肝臓由来のカタラーゼが好まし
い。本発明に用いられる、脱アシル化酵素は、ＧＬ−７
−ＡＤＣＡに作用して、７−ＡＤＣＡを生成する能力を
有する酵素であればいかなるものも用いることができ
る。該脱アシル化酵素の好ましい例として、例えば特表
平４−５０４３６２号公報記載の脱アシル化酵素が挙げ
られる。さらに、微生物〔例、アシネトバクター(Acine
tobacter)属，シュードモナス（Pseudmonas）属,アルス
ロバクター（Arthrobacter）属等のバクテリアなど〕由
来の脱アシル化酵素が好ましい。さらに、アシネトバク
ター(Acinetobacter)属由来のものが特に好ましい。
能力を有する酵素であればいかなるものでも用いること
ができる。該カタラーゼの好ましい例として、例えば特
表平４−５０４３６２号公報記載のカタラーゼが挙げら
れる。さらに哺乳類の組織〔例、ウシ肝臓、ネズミ肝臓
等〕、微生物〔例、アスペルギルス（Aspergillus）属
等のカビなど〕由来のカタラーゼが好ましい。該酵素の
具体例を挙げれば、ウシ肝臓由来のカタラーゼが好まし
い。本発明に用いられる、脱アシル化酵素は、ＧＬ−７
−ＡＤＣＡに作用して、７−ＡＤＣＡを生成する能力を
有する酵素であればいかなるものも用いることができ
る。該脱アシル化酵素の好ましい例として、例えば特表
平４−５０４３６２号公報記載の脱アシル化酵素が挙げ
られる。さらに、微生物〔例、アシネトバクター(Acine
tobacter)属，シュードモナス（Pseudmonas）属,アルス
ロバクター（Arthrobacter）属等のバクテリアなど〕由
来の脱アシル化酵素が好ましい。さらに、アシネトバク
ター(Acinetobacter)属由来のものが特に好ましい。
【０００６】ＤＣＰＣを出発原料として、ＧＬ−７−Ａ
ＤＣＡを製造する工程は、反応に悪影響を及ぼさない溶
媒中で、ＤＣＰＣにカタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシ
ダーゼを接触させることにより行われる。該溶媒として
は、例えば緩衝液（例、リン酸緩衝液，酢酸緩衝液等）
などの水系の溶媒が用いられる。反応液のｐＨは、約６
から９の間に調整されることが好ましい。さらに約７．
５から８．５の間に調整されることが好ましい。ｐＨの
調整のため、反応液にアルカリ（例、水酸化カリウム，
水酸化ナトリウム等の水酸化アルカリ金属、炭酸カリウ
ム，炭酸ナトリウム等のアルカリ金属の炭酸塩、アンモ
ニア水等）を加えることも有効である。Ｄ−アミノ酸オ
キシダーゼの使用量は、ＤＣＰＣ １ｇに対し、Ｄ−ア
ミノ酸オキシダーゼ約１から２００単位を用いる。さら
に好ましくは、ＤＣＰＣ １ｇに対し、Ｄ−アミノ酸オ
キシダーゼ約５から１００単位を用いる。カタラーゼの
使用量はＤＣＰＣ １ｇに対し、約０．０１から１００
単位を用いる。さらに好ましくは、ＤＣＰＣ １ｇに対
し約０．０３から５０単位を用いる。ここで用いる酵素
の１単位とは、１μｍｏｌの基質を変換するのに必要な
酵素量を意味する。
ＤＣＡを製造する工程は、反応に悪影響を及ぼさない溶
媒中で、ＤＣＰＣにカタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシ
ダーゼを接触させることにより行われる。該溶媒として
は、例えば緩衝液（例、リン酸緩衝液，酢酸緩衝液等）
などの水系の溶媒が用いられる。反応液のｐＨは、約６
から９の間に調整されることが好ましい。さらに約７．
５から８．５の間に調整されることが好ましい。ｐＨの
調整のため、反応液にアルカリ（例、水酸化カリウム，
水酸化ナトリウム等の水酸化アルカリ金属、炭酸カリウ
ム，炭酸ナトリウム等のアルカリ金属の炭酸塩、アンモ
ニア水等）を加えることも有効である。Ｄ−アミノ酸オ
キシダーゼの使用量は、ＤＣＰＣ １ｇに対し、Ｄ−ア
ミノ酸オキシダーゼ約１から２００単位を用いる。さら
に好ましくは、ＤＣＰＣ １ｇに対し、Ｄ−アミノ酸オ
キシダーゼ約５から１００単位を用いる。カタラーゼの
使用量はＤＣＰＣ １ｇに対し、約０．０１から１００
単位を用いる。さらに好ましくは、ＤＣＰＣ １ｇに対
し約０．０３から５０単位を用いる。ここで用いる酵素
の１単位とは、１μｍｏｌの基質を変換するのに必要な
酵素量を意味する。
【０００７】反応は、約０．１から３ｖｖｍ、好ましく
は約０．２から２ｖｖｍの酸素を供給することが好まし
い。ここで用いる１ｖｖｍとは、反応容器の容積が１０
リットルとした場合、純酸素に換算して、毎分１０リッ
トルの酸素を供給することを意味する。通気方法は、目
的とする酸素量を供給し得る方法であればいかなる通気
方法も採用し得る。具体的には、例えば純酸素を通気す
る方法、酸素と空気の混合気体を通気する方法等が用い
られる。反応温度は、約１５℃からカタラーゼ及びＤ−
アミノ酸オキシダーゼが失活しない温度の範囲より適宜
選択される。好ましくは、約１５から５０℃の範囲より
選択される。反応時間は、約１５分から２日間である。
本工程により得られたＧＬ−７−ＡＤＣＡを含む反応液
は、そのままあるいは所望により酵素及び不溶物を遠心
分離または濾過によって除去した後、次の脱アシル化工
程の出発原料として用いることができる。反応液より、
ＧＬ−７−ＡＤＣＡを分別採取することも可能である。
この場合酵素及び不溶物を遠心分離または濾過により除
去した後に分別採取することが好ましい。ＧＬ−７−Ａ
ＤＣＡの分別採取は自体公知の方法により行うことがで
きる。すなわち、例えば弱酸性有機物の一般的な分別採
取法により行う。具体的には、例えばイオン交換樹脂
（例、アンバーライトＩＲ−Ａ９００等）、活性炭、セ
ルロース、シリカゲルなどを用いるクロマトグラフィー
あるいはゲル濾過法などを組み合わせることにより、Ｇ
Ｌ−７−ＡＤＣＡを分別採取する。分別採取したＧＬ−
７−ＡＤＣＡを、脱アシル化工程の出発原料として用い
ることもできる。上記本発明の製造法により製造したＧ
Ｌ−７−ＡＤＣＡから、７−ＡＤＣＡを製造するには、
反応に悪影響を及ぼさない溶媒中で、ＧＬ−７−ＡＤＣ
Ａに脱アシル化酵素を接触させることにより行われる。
該溶媒としては、例えば緩衝液（例、リン酸緩衝液，酢
酸緩衝液等）などの水系の溶媒が用いられる。反応液の
ｐＨは、約５から９の間に調整されることが好ましい。
さらに約７．５から９の間に調整されることが好まし
い。ｐＨの調整のため、反応液にアルカリ（例、水酸化
カリウム，水酸化ナトリウム等の水酸化アルカリ金属、
炭酸カリウム，炭酸ナトリウム等のアルカリ金属の炭酸
塩、アンモニア水等）を加えることも有効である。脱ア
シル化酵素の使用量は、前工程の出発原料であるＤＣＰ
Ｃ １ｇに対し、約１から１０００単位を用いる。さら
に好ましくは、ＤＣＰＣ １ｇに対し、約５から５００
単位を用いる。反応温度は、約１５℃から脱アシル化酵
素が失活しない温度の範囲より適宜選択される。好まし
くは、約１５から５０℃の範囲より選択される。反応時
間は、約１５分から２日間である。
は約０．２から２ｖｖｍの酸素を供給することが好まし
い。ここで用いる１ｖｖｍとは、反応容器の容積が１０
リットルとした場合、純酸素に換算して、毎分１０リッ
トルの酸素を供給することを意味する。通気方法は、目
的とする酸素量を供給し得る方法であればいかなる通気
方法も採用し得る。具体的には、例えば純酸素を通気す
る方法、酸素と空気の混合気体を通気する方法等が用い
られる。反応温度は、約１５℃からカタラーゼ及びＤ−
アミノ酸オキシダーゼが失活しない温度の範囲より適宜
選択される。好ましくは、約１５から５０℃の範囲より
選択される。反応時間は、約１５分から２日間である。
本工程により得られたＧＬ−７−ＡＤＣＡを含む反応液
は、そのままあるいは所望により酵素及び不溶物を遠心
分離または濾過によって除去した後、次の脱アシル化工
程の出発原料として用いることができる。反応液より、
ＧＬ−７−ＡＤＣＡを分別採取することも可能である。
この場合酵素及び不溶物を遠心分離または濾過により除
去した後に分別採取することが好ましい。ＧＬ−７−Ａ
ＤＣＡの分別採取は自体公知の方法により行うことがで
きる。すなわち、例えば弱酸性有機物の一般的な分別採
取法により行う。具体的には、例えばイオン交換樹脂
（例、アンバーライトＩＲ−Ａ９００等）、活性炭、セ
ルロース、シリカゲルなどを用いるクロマトグラフィー
あるいはゲル濾過法などを組み合わせることにより、Ｇ
Ｌ−７−ＡＤＣＡを分別採取する。分別採取したＧＬ−
７−ＡＤＣＡを、脱アシル化工程の出発原料として用い
ることもできる。上記本発明の製造法により製造したＧ
Ｌ−７−ＡＤＣＡから、７−ＡＤＣＡを製造するには、
反応に悪影響を及ぼさない溶媒中で、ＧＬ−７−ＡＤＣ
Ａに脱アシル化酵素を接触させることにより行われる。
該溶媒としては、例えば緩衝液（例、リン酸緩衝液，酢
酸緩衝液等）などの水系の溶媒が用いられる。反応液の
ｐＨは、約５から９の間に調整されることが好ましい。
さらに約７．５から９の間に調整されることが好まし
い。ｐＨの調整のため、反応液にアルカリ（例、水酸化
カリウム，水酸化ナトリウム等の水酸化アルカリ金属、
炭酸カリウム，炭酸ナトリウム等のアルカリ金属の炭酸
塩、アンモニア水等）を加えることも有効である。脱ア
シル化酵素の使用量は、前工程の出発原料であるＤＣＰ
Ｃ １ｇに対し、約１から１０００単位を用いる。さら
に好ましくは、ＤＣＰＣ １ｇに対し、約５から５００
単位を用いる。反応温度は、約１５℃から脱アシル化酵
素が失活しない温度の範囲より適宜選択される。好まし
くは、約１５から５０℃の範囲より選択される。反応時
間は、約１５分から２日間である。
【０００８】本発明の製造法では、ＤＣＰＣを含有する
醗酵終了液を出発原料として用いることもできる。その
場合、カタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼによる
処理工程においてアジ化ナトリウム及び過酸化水素を加
えることも有効である。アジ化ナトリウムの使用量は、
ＤＣＰＣ １ｇに対し約５から５００ｍＭ，好ましくは
約５０から２００ｍＭを用いる。過酸化水素の使用量
は、ＤＣＰＣ １ｇに対し、約０．０２から１ｍｇ、好
ましくは約０．１から０．５ｍｇを用いる。本発明の製
造法は、カタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼある
いは脱アシル化酵素を固定化して用いることも有効であ
る。該固定化は、例えばプラスチックまたは布等の担体
に担持せしめることにより行われる。固定化の方法は、
自体公知の方法により行うことができる。例えば、微孔
性プラスチックシートをポリエチレンイミンおよびグル
タルアルデヒドで処理して、酵素タンパク質のアミノ基
との間に化学結合を形成し、固定化することができる。
反応液より目的とする、７−ＡＤＣＡを採取するには、
酵素及び不溶物を遠心分離あるいはろ過により除去した
後に行うことが好ましい。７−ＡＤＣＡを分別採取する
には、自体公知の方法により行う。すなわち、例えば、
ろ液に酸（例、硫酸，塩酸等の無機酸、酢酸，酒石酸，
クエン酸等の有機酸等）を加え、ろ液のｐＨを約４とす
ることにより、７−ＡＤＣＡを晶出させ、これを採取す
る。また、例えば、弱酸性有機物の一般的な分別採取法
も適用できる。すなわち、イオン交換樹脂（例、アンバ
ーライトＩＲ−Ａ９００等）、活性炭、セルロース、シ
リカゲルなどを用いるクロマトグラフィーあるいはゲル
ろ過法などを組み合わせることにより、７−ＡＤＣＡを
分別採取する。
醗酵終了液を出発原料として用いることもできる。その
場合、カタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼによる
処理工程においてアジ化ナトリウム及び過酸化水素を加
えることも有効である。アジ化ナトリウムの使用量は、
ＤＣＰＣ １ｇに対し約５から５００ｍＭ，好ましくは
約５０から２００ｍＭを用いる。過酸化水素の使用量
は、ＤＣＰＣ １ｇに対し、約０．０２から１ｍｇ、好
ましくは約０．１から０．５ｍｇを用いる。本発明の製
造法は、カタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼある
いは脱アシル化酵素を固定化して用いることも有効であ
る。該固定化は、例えばプラスチックまたは布等の担体
に担持せしめることにより行われる。固定化の方法は、
自体公知の方法により行うことができる。例えば、微孔
性プラスチックシートをポリエチレンイミンおよびグル
タルアルデヒドで処理して、酵素タンパク質のアミノ基
との間に化学結合を形成し、固定化することができる。
反応液より目的とする、７−ＡＤＣＡを採取するには、
酵素及び不溶物を遠心分離あるいはろ過により除去した
後に行うことが好ましい。７−ＡＤＣＡを分別採取する
には、自体公知の方法により行う。すなわち、例えば、
ろ液に酸（例、硫酸，塩酸等の無機酸、酢酸，酒石酸，
クエン酸等の有機酸等）を加え、ろ液のｐＨを約４とす
ることにより、７−ＡＤＣＡを晶出させ、これを採取す
る。また、例えば、弱酸性有機物の一般的な分別採取法
も適用できる。すなわち、イオン交換樹脂（例、アンバ
ーライトＩＲ−Ａ９００等）、活性炭、セルロース、シ
リカゲルなどを用いるクロマトグラフィーあるいはゲル
ろ過法などを組み合わせることにより、７−ＡＤＣＡを
分別採取する。
【０００９】
【実施例】本発明を説明するために、以下に実施例を挙
げるが、本発明はそれらに限定されるものではない。 実施例１ ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）１０ｍｌに ＤＣ
ＰＣ（３４３ mg）を溶解し、固定化ＡＯＤ〔２０単
位，カタラーゼ０．０３単位を含む、ベーリンガー・マ
ンハイム（Boehringer Mannheim）社製、独〕を加え
る。２Ｎ水酸化カリウムで反応液のｐＨを８．０に調節
しながら酸素（１ｖｖｍ）を通気し、２０℃で、６０分
間撹拌した。反応後、ＡＯＤを除いた反応液に固定化脱
アシル化酵素（５０単位，ベーリンガー・マンハイム社
製，独）を加え、３Ｎアンモニア水で反応液のｐＨを
８．０に調節しながら２８℃で、４０分間撹拌した。
〔表１〕に示す通り、ＤＣＰＣから７−ＡＤＣＡを効率
よく製造できる。（いずれも、反応開始時および反応終
了時の量を１００％とした相対値で示した。）
げるが、本発明はそれらに限定されるものではない。 実施例１ ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）１０ｍｌに ＤＣ
ＰＣ（３４３ mg）を溶解し、固定化ＡＯＤ〔２０単
位，カタラーゼ０．０３単位を含む、ベーリンガー・マ
ンハイム（Boehringer Mannheim）社製、独〕を加え
る。２Ｎ水酸化カリウムで反応液のｐＨを８．０に調節
しながら酸素（１ｖｖｍ）を通気し、２０℃で、６０分
間撹拌した。反応後、ＡＯＤを除いた反応液に固定化脱
アシル化酵素（５０単位，ベーリンガー・マンハイム社
製，独）を加え、３Ｎアンモニア水で反応液のｐＨを
８．０に調節しながら２８℃で、４０分間撹拌した。
〔表１〕に示す通り、ＤＣＰＣから７−ＡＤＣＡを効率
よく製造できる。（いずれも、反応開始時および反応終
了時の量を１００％とした相対値で示した。）
【表１】
【００１０】実施例２ ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０，３００ｍｌ）にＤ
ＣＰＣ（１０．３ｇ）を溶解し、固定化ＡＯＤ（６００
単位，カタラーゼ ０．９単位を含む、ベーリンガー・
マンハイム社製，独）を加える。２Ｎ水酸化カリウムで
反応液のｐＨを８．０に調節しながら酸素（１ｖｖｍ）
を通気し、２０℃で、８０分間撹拌した。反応後、ＡＯ
Ｄを除いた反応液に固定化脱アシル化酵素（１５００単
位，ベーリンガー・マンハイム社製，独）を加え、３Ｎ
アンモニア水で反応液のｐＨを８．０に調節しながら２
８℃で、４０分間撹拌した。反応終了後、ガラスフィル
ターで固定化酵素を除去し、このろ液に１０Ｎ硫酸を加
え、ｐＨ４に調整することにより７−ＡＤＣＡを晶析さ
せた。生成した結晶をガラスフィルターで濾過し、メタ
ノールで洗浄し、真空乾燥することにより７−ＡＤＣＡ
の結晶を２．２ｇを得た。
ＣＰＣ（１０．３ｇ）を溶解し、固定化ＡＯＤ（６００
単位，カタラーゼ ０．９単位を含む、ベーリンガー・
マンハイム社製，独）を加える。２Ｎ水酸化カリウムで
反応液のｐＨを８．０に調節しながら酸素（１ｖｖｍ）
を通気し、２０℃で、８０分間撹拌した。反応後、ＡＯ
Ｄを除いた反応液に固定化脱アシル化酵素（１５００単
位，ベーリンガー・マンハイム社製，独）を加え、３Ｎ
アンモニア水で反応液のｐＨを８．０に調節しながら２
８℃で、４０分間撹拌した。反応終了後、ガラスフィル
ターで固定化酵素を除去し、このろ液に１０Ｎ硫酸を加
え、ｐＨ４に調整することにより７−ＡＤＣＡを晶析さ
せた。生成した結晶をガラスフィルターで濾過し、メタ
ノールで洗浄し、真空乾燥することにより７−ＡＤＣＡ
の結晶を２．２ｇを得た。
【００１１】実施例３ 除菌した醗酵終了液（ＤＣＰＣ 36.7 mg/mlを含む，１
０ｍｌ）に固定化ＡＯＤ（２０単位，カタラーゼ０．０
３単位を含む、ベーリンガー・マンハイム社製，独）を
加え、２Ｎ水酸化カリウムで反応液のｐＨを８．０に調
節しながら酸素（０．５ｖｖｍ）を通気し、２０℃で、
８０分間撹拌した。反応後、ＡＯＤを除いた反応液にア
ジ化ナトリウム（６５ｍｇ）、３０％（ｖ／ｖ）過酸化
水素水（３００μｌ）を添加し、２０℃で１０分間撹拌
した。さらにその反応液に脱アシル化酵素（５０単位，
ベーリンガー・マンハイム社製，独）を加え、３Ｎアン
モニア水で反応液のｐＨを８．０に調節しながら２８℃
で、８０分間撹拌した。この反応液は、７．４mg/mlの
７−ＡＤＣＡを含有していた。
０ｍｌ）に固定化ＡＯＤ（２０単位，カタラーゼ０．０
３単位を含む、ベーリンガー・マンハイム社製，独）を
加え、２Ｎ水酸化カリウムで反応液のｐＨを８．０に調
節しながら酸素（０．５ｖｖｍ）を通気し、２０℃で、
８０分間撹拌した。反応後、ＡＯＤを除いた反応液にア
ジ化ナトリウム（６５ｍｇ）、３０％（ｖ／ｖ）過酸化
水素水（３００μｌ）を添加し、２０℃で１０分間撹拌
した。さらにその反応液に脱アシル化酵素（５０単位，
ベーリンガー・マンハイム社製，独）を加え、３Ｎアン
モニア水で反応液のｐＨを８．０に調節しながら２８℃
で、８０分間撹拌した。この反応液は、７．４mg/mlの
７−ＡＤＣＡを含有していた。
【００１２】
【発明の効果】本発明の製造法によれば、デアセチルセ
ファロスポリンＣから、単一反応容器内で、酵素反応に
より、工業的に簡単かつ効率良く７−グルタリルアミノ
デアセチルセファロスポラン酸を製造することができ
る。さらに、ついで７−グルタリルアミノデアセチルセ
ファロスポラン酸は、脱アシル化酵素により、容易にま
た収率良く７−アミノデアセチルセファロスポラン酸に
変換できる。
ファロスポリンＣから、単一反応容器内で、酵素反応に
より、工業的に簡単かつ効率良く７−グルタリルアミノ
デアセチルセファロスポラン酸を製造することができ
る。さらに、ついで７−グルタリルアミノデアセチルセ
ファロスポラン酸は、脱アシル化酵素により、容易にま
た収率良く７−アミノデアセチルセファロスポラン酸に
変換できる。
フロントページの続き (72)発明者 藤本 茂 大阪府池田市石橋４丁目11番11号 (72)発明者 樽井 直樹 大阪府吹田市津雲台５丁目18番Ｄ−75− 208号
Claims (5)
- 【請求項１】デアセチルセファロスポリンＣをカタラー
ゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼと接触させることを特
徴とする７−グルタリルアミノデアセチルセファロスポ
ラン酸の製造法。 - 【請求項２】デアセチルセファロスポリンＣをカタラー
ゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼと接触させ、得られる
７−グルタリルアミノデアセチルセファロスポラン酸
を、脱アシル化酵素と接触させることを特徴とする７−
アミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法。 - 【請求項３】カタラーゼ及びＤ−アミノ酸オキシダーゼ
を担体に担持せしめた請求項１および請求項２記載の製
造法。 - 【請求項４】脱アシル化酵素を担体に担持せしめた請求
項２記載の製造法。 - 【請求項５】脱アシル化酵素がアシネトバクター属菌由
来である請求項２記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25502994A JPH0889281A (ja) | 1993-10-20 | 1994-10-20 | 酵素による７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26279193 | 1993-10-20 | ||
| JP5-262791 | 1993-10-20 | ||
| JP25502994A JPH0889281A (ja) | 1993-10-20 | 1994-10-20 | 酵素による７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0889281A true JPH0889281A (ja) | 1996-04-09 |
Family
ID=26541982
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25502994A Withdrawn JPH0889281A (ja) | 1993-10-20 | 1994-10-20 | 酵素による７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0889281A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100512774B1 (ko) * | 2001-10-06 | 2005-09-07 | 종근당바이오 주식회사 | 7-아미노세팔로스포란산의 제조를 위한 세팔로스포린ｃ배양액의 전처리방법 |
-
1994
- 1994-10-20 JP JP25502994A patent/JPH0889281A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100512774B1 (ko) * | 2001-10-06 | 2005-09-07 | 종근당바이오 주식회사 | 7-아미노세팔로스포란산의 제조를 위한 세팔로스포린ｃ배양액의 전처리방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4080259A (en) | Process of preparing L and D α-amino acids by enzyme treatment of DL-α-amino acid amide | |
| RU2136759C1 (ru) | Способ получения производного бета-лактама | |
| HU189552B (en) | Process for separating d,l-2-amino-4-methyl-phosphino-butyric acid with enzymatic method | |
| JPH022396A (ja) | セファロスポリンｃ及び類似体の一段階酵素反応による７‐アミノセファロスポラン酸及びその類似体への変換 | |
| JPH0147158B2 (ja) | ||
| JPH0889281A (ja) | 酵素による７−アミノデアセチルセファロスポラン酸の製造法 | |
| JP3131024B2 (ja) | セファロスポラン誘導体の酵素的製造方法 | |
| US3821081A (en) | Process for producing 7-amino desacetoxy cephalosporanic acid | |
| AU4846196A (en) | Process for the recovery of cephalexin | |
| JPH0453499A (ja) | デアセチル―７―アミノセファロスポラン酸の製造法 | |
| US3787288A (en) | Method for preparing alpha-aminobenzylpenicillin | |
| JP3638425B2 (ja) | 光学活性α−アミノアジピン酸−γ−セミアルデヒドエチレンアセタールの製造方法 | |
| JPS5920360B2 (ja) | ７−アミノセフアロスポラン酸および其の誘導体の製造法 | |
| JPH01199576A (ja) | α−アミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解性を有するγ−グルタミルトランスペプチダーゼ | |
| JPH04218385A (ja) | Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 | |
| JPH0714342B2 (ja) | エステラーゼの製法 | |
| GB1577087A (en) | Enzyme preparation having l-amino acyl amidase activity | |
| JP3601846B2 (ja) | グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸の製造方法 | |
| JPS58116690A (ja) | Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸の製造法 | |
| JP2005348743A (ja) | エステラーゼ非含有酵素 | |
| JPH08284A (ja) | セファロスポラン酸誘導体の製造法 | |
| JPH06315396A (ja) | セファロスポリンｃからグルタリル−７−アミノセファロスポラン酸への酵素による変換方法 | |
| JPS5876090A (ja) | 固定化酵素用担体 | |
| JPH0424992B2 (ja) | ||
| Chen et al. | Facile synthesis of L-malic acid by a consecutive enzymatic reaction |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20020115 |