JPH0870880A - タキソールの培養生産法 - Google Patents
タキソールの培養生産法Info
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- JPH0870880A JPH0870880A JP6238359A JP23835994A JPH0870880A JP H0870880 A JPH0870880 A JP H0870880A JP 6238359 A JP6238359 A JP 6238359A JP 23835994 A JP23835994 A JP 23835994A JP H0870880 A JPH0870880 A JP H0870880A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】タキソール含有植物体から誘導されたカルスの
培養によるタキソールの生産方法において、キトオリゴ
糖又はＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉによ
るカウレンの微生物変換により得られたジベレリン混合
物を用いることを特徴とするタキソールの培養生産法。 【効果】本発明の方法によれば、大量生産が困難であっ
たタキソールを、従来の方法より高収率で得ることがで
きる。
培養によるタキソールの生産方法において、キトオリゴ
糖又はＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉによ
るカウレンの微生物変換により得られたジベレリン混合
物を用いることを特徴とするタキソールの培養生産法。 【効果】本発明の方法によれば、大量生産が困難であっ
たタキソールを、従来の方法より高収率で得ることがで
きる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、カルスの培養によるタ
キソールの培養生産法に関する。
キソールの培養生産法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】タキソ
ールは、イチイ、キャラボクの樹皮や葉に含まれる抗ガ
ン性物質で、次に示す構造の化合物である。
ールは、イチイ、キャラボクの樹皮や葉に含まれる抗ガ
ン性物質で、次に示す構造の化合物である。
【０００３】
【化１】
【０００４】タキソールは重症の卵巣ガン患者や肺ガン
患者に対して優れた効果を示す（出光技報第３５巻第３
号第９４頁（１９９２））ことから、医薬としての利用
が進められている。従来、タキソールはイチイや太平洋
イチイ、西洋イチイの樹皮や葉から溶媒抽出することに
より得られてきた。しかし、これらの植物は成長が遅
く、また微量のタキソールしか単離できないため、供給
量を確保するのは困難であった。そのため、タキソール
を大量生産するために、例えば合成法や培養法が試みら
れている。
患者に対して優れた効果を示す（出光技報第３５巻第３
号第９４頁（１９９２））ことから、医薬としての利用
が進められている。従来、タキソールはイチイや太平洋
イチイ、西洋イチイの樹皮や葉から溶媒抽出することに
より得られてきた。しかし、これらの植物は成長が遅
く、また微量のタキソールしか単離できないため、供給
量を確保するのは困難であった。そのため、タキソール
を大量生産するために、例えば合成法や培養法が試みら
れている。
【０００５】合成法についていえば、ごく最近、タキソ
ールの全合成が達成された（K.C.Nicolaou et al., Nat
ure,367, 630,1994 及び Robert A. Holton et al., J.
Am.Chem.Soc., 116,1597,1994 ）。しかしながら、上記
の合成法では反応のステップが多いため、工業的レベル
での生産には問題がある。
ールの全合成が達成された（K.C.Nicolaou et al., Nat
ure,367, 630,1994 及び Robert A. Holton et al., J.
Am.Chem.Soc., 116,1597,1994 ）。しかしながら、上記
の合成法では反応のステップが多いため、工業的レベル
での生産には問題がある。
【０００６】また、培養法については、２，４−ジクロ
ロフェノキシ酢酸及びカイネチンを用いて培養すること
により、対照の２倍程度の効果が得られ（Arthur G. Fe
tt-Neto et al., Bio/Technology, 10(12), 1572, 199
2）、エリシターとしてキトサングルタメート及び光を
用いて培養することにより対照と比較して４倍の生産性
向上効果が得られている（ＷＯ ９３１７１２１号公
報）。しかしながら、工業的には一層の生産性の向上が
望まれる。
ロフェノキシ酢酸及びカイネチンを用いて培養すること
により、対照の２倍程度の効果が得られ（Arthur G. Fe
tt-Neto et al., Bio/Technology, 10(12), 1572, 199
2）、エリシターとしてキトサングルタメート及び光を
用いて培養することにより対照と比較して４倍の生産性
向上効果が得られている（ＷＯ ９３１７１２１号公
報）。しかしながら、工業的には一層の生産性の向上が
望まれる。
【０００７】本発明の目的は、タキソールを含有する植
物体の組織培養によって、従来の方法より格段に優れた
タキソールの培養生産法を提供することにある。
物体の組織培養によって、従来の方法より格段に優れた
タキソールの培養生産法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を行ったところ、キャラボクのカ
ルスの組織培養において、キトオリゴ糖又はカウレンの
微生物変換により得られたジベレリン混合物を用いるこ
とにより、対照の５〜２８．５倍量のタキソールを得る
ことができることを見出し、本発明を完成させた。
を解決すべく鋭意研究を行ったところ、キャラボクのカ
ルスの組織培養において、キトオリゴ糖又はカウレンの
微生物変換により得られたジベレリン混合物を用いるこ
とにより、対照の５〜２８．５倍量のタキソールを得る
ことができることを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】すなわち、本発明の要旨は、（１） カル
スの組織培養によるタキソールの生産方法において、キ
トオリゴ糖をを用いることを特徴とするタキソールの培
養生産法、（２） キトオリゴ糖を新鮮カルス１ｇ当た
り０．２５〜１０ｍｇ用いることを特徴とする前記
（１）記載の培養生産法、（３） キトオリゴ糖が１量
体〜９量体から選ばれる１種以上のものであることを特
徴とする前記（１）又は（２）記載の培養生産法、
（４） カルスの培養によるタキソールの生産方法にお
いて、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉによ
るカウレンの微生物変換により得られたジベレリン混合
物を用いることを特徴とするタキソールの培養生産法、
（５） さらにＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒ
ｏｉによるカウレンの微生物変換により得られたジベレ
リン混合物を用いることを特徴とする前記（１）記載の
培養生産法、（６） Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉ
ｋｕｒｏｉによるカウレンの微生物変換により得られた
ジベレリン混合物を新鮮カルス１ｇ当たり０．２５〜
２．０ｍｇ用いることを特徴とする前記（４）又は
（５）記載の培養生産法、 （７） カルスがタキソール含有植物体から誘導された
ものであることを特徴とする前記（１）〜（６）いずれ
か記載の培養生産法、（８） タキソール含有植物体が
キャラボク、キミノオンコ又はイチイであることを特徴
とする前記（７）記載の培養生産法、に関する。
スの組織培養によるタキソールの生産方法において、キ
トオリゴ糖をを用いることを特徴とするタキソールの培
養生産法、（２） キトオリゴ糖を新鮮カルス１ｇ当た
り０．２５〜１０ｍｇ用いることを特徴とする前記
（１）記載の培養生産法、（３） キトオリゴ糖が１量
体〜９量体から選ばれる１種以上のものであることを特
徴とする前記（１）又は（２）記載の培養生産法、
（４） カルスの培養によるタキソールの生産方法にお
いて、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉによ
るカウレンの微生物変換により得られたジベレリン混合
物を用いることを特徴とするタキソールの培養生産法、
（５） さらにＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒ
ｏｉによるカウレンの微生物変換により得られたジベレ
リン混合物を用いることを特徴とする前記（１）記載の
培養生産法、（６） Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉ
ｋｕｒｏｉによるカウレンの微生物変換により得られた
ジベレリン混合物を新鮮カルス１ｇ当たり０．２５〜
２．０ｍｇ用いることを特徴とする前記（４）又は
（５）記載の培養生産法、 （７） カルスがタキソール含有植物体から誘導された
ものであることを特徴とする前記（１）〜（６）いずれ
か記載の培養生産法、（８） タキソール含有植物体が
キャラボク、キミノオンコ又はイチイであることを特徴
とする前記（７）記載の培養生産法、に関する。
【００１０】本発明における培養生産法とは、タキソー
ルを含有する植物体からカルスを誘導・培養し、得られ
たカルスからタキソールを抽出することによりタキソー
ルを得る方法である。また、本発明における新鮮カルス
とは、新鮮葉から新たに培養発生させたカルスのことを
いう。
ルを含有する植物体からカルスを誘導・培養し、得られ
たカルスからタキソールを抽出することによりタキソー
ルを得る方法である。また、本発明における新鮮カルス
とは、新鮮葉から新たに培養発生させたカルスのことを
いう。
【００１１】本発明における植物体からカルスを誘導す
る方法は特に限定されるものではなく、一般的な方法で
よい。具体的には、培地としてはMurashige-Skoog 培地
（以下、ＭＳ培地と略記する）、Ｂ５培地（Gamborg,O.
L. and Watter,L.R.,Plant Tissue Culture Methods,Na
tional Research of Canada,Saskatoon, 1975 ）等が挙
げられ、ＭＳ培地が好ましい。
る方法は特に限定されるものではなく、一般的な方法で
よい。具体的には、培地としてはMurashige-Skoog 培地
（以下、ＭＳ培地と略記する）、Ｂ５培地（Gamborg,O.
L. and Watter,L.R.,Plant Tissue Culture Methods,Na
tional Research of Canada,Saskatoon, 1975 ）等が挙
げられ、ＭＳ培地が好ましい。
【００１２】また、この培地に添加する、カルスの誘導
に用いる植物成長調節物質としては２，４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸、カイネチンが挙げられる。培地中の植物
成長調節物質の濃度は、２，４−ジクロロフェノキシ酢
酸及びカイネチンを併用した場合、それぞれ０．５〜２
０．０ｍｇ／Ｌ、０．００５〜１．０ｍｇ／Ｌの範囲が
好ましく、１．０〜１０．０ｍｇ／Ｌ、０．０１〜０．
１ｍｇ／Ｌの範囲が特に好ましい。誘導の際の温度は室
温でよい。上述の培地を用いて、１か月程度毎に継代す
ることによりカルスを増殖させることができる。
に用いる植物成長調節物質としては２，４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸、カイネチンが挙げられる。培地中の植物
成長調節物質の濃度は、２，４−ジクロロフェノキシ酢
酸及びカイネチンを併用した場合、それぞれ０．５〜２
０．０ｍｇ／Ｌ、０．００５〜１．０ｍｇ／Ｌの範囲が
好ましく、１．０〜１０．０ｍｇ／Ｌ、０．０１〜０．
１ｍｇ／Ｌの範囲が特に好ましい。誘導の際の温度は室
温でよい。上述の培地を用いて、１か月程度毎に継代す
ることによりカルスを増殖させることができる。
【００１３】本発明に用いる植物体は、タキソールを含
有するものであれば特に限定されるものではない。具体
的には、太平洋イチイ、西洋イチイ、イチイ、キミノオ
ンコ、キャラボク等がある。
有するものであれば特に限定されるものではない。具体
的には、太平洋イチイ、西洋イチイ、イチイ、キミノオ
ンコ、キャラボク等がある。
【００１４】上記のようにして得られるカルスにエリシ
ター又は植物ホルモンをさらに添加することにより、よ
り多量のタキソールを得ることができる。また、エリシ
ター又は植物ホルモンは、カルスに直接添加してもよ
く、培地に添加してもよい。
ター又は植物ホルモンをさらに添加することにより、よ
り多量のタキソールを得ることができる。また、エリシ
ター又は植物ホルモンは、カルスに直接添加してもよ
く、培地に添加してもよい。
【００１５】ここでいうエリシターとは、植物成長抑制
剤存在下に培養して、従来微量にしか得られなかった化
合物を量産させる性質を持つ物質である。具体的には、
キトオリゴ糖、β−グルカン、キチン、オリガラクツロ
ン酸が挙げられ、キトオリゴ糖が好ましい。ここでいう
キトオリゴ糖とは、グルコサミンがβ１−４結合してな
るオリゴマーのことである。
剤存在下に培養して、従来微量にしか得られなかった化
合物を量産させる性質を持つ物質である。具体的には、
キトオリゴ糖、β−グルカン、キチン、オリガラクツロ
ン酸が挙げられ、キトオリゴ糖が好ましい。ここでいう
キトオリゴ糖とは、グルコサミンがβ１−４結合してな
るオリゴマーのことである。
【００１６】このキトオリゴ糖の調製方法は特に限定さ
れるものではなく、例えば、キトサン酢酸塩溶液をキト
サナーゼを用いて水解することにより得ることができる
（参照：坂井和雄、南条文雄、碓氷泰市：”キチン、キ
トサンオリゴ糖の生産と利用”澱粉化学、３７、７９
（１９９０））。
れるものではなく、例えば、キトサン酢酸塩溶液をキト
サナーゼを用いて水解することにより得ることができる
（参照：坂井和雄、南条文雄、碓氷泰市：”キチン、キ
トサンオリゴ糖の生産と利用”澱粉化学、３７、７９
（１９９０））。
【００１７】上記のようにして得られたキトオリゴ糖は
１量体〜９量体の混合物である。次に構造を示す。な
お、１量体はグルコサミンである。
１量体〜９量体の混合物である。次に構造を示す。な
お、１量体はグルコサミンである。
【００１８】
【化２】
【００１９】但し、ｎは１〜７である。
【００２０】本発明においては、この混合物をそのまま
用いてもよく、この混合物をさらに精製して単一の成分
としたものを用いてもよい。
用いてもよく、この混合物をさらに精製して単一の成分
としたものを用いてもよい。
【００２１】また、キトオリゴ糖のカルス又は培地への
添加量は、新鮮カルス１ｇ当たり０．２５〜１０ｍｇで
あり、０．５〜５ｍｇが好ましく、１〜２ｍｇが特に好
ましい。添加量がこの範囲未満の場合はカルスの増殖が
遅くなる傾向があり、この範囲をこえる場合は、カルス
の増殖が抑制されたり、カルスが褐色に変色したりする
傾向がある。
添加量は、新鮮カルス１ｇ当たり０．２５〜１０ｍｇで
あり、０．５〜５ｍｇが好ましく、１〜２ｍｇが特に好
ましい。添加量がこの範囲未満の場合はカルスの増殖が
遅くなる傾向があり、この範囲をこえる場合は、カルス
の増殖が抑制されたり、カルスが褐色に変色したりする
傾向がある。
【００２２】また、本発明における植物ホルモンとして
は、カウレンの微生物変換により得られたジベレリン混
合物（以下、ＧＡS と略記する）が用いられる。
は、カウレンの微生物変換により得られたジベレリン混
合物（以下、ＧＡS と略記する）が用いられる。
【００２３】ここで用いるＧＡS は、カウレンの微生物
変換により得られるものである。カウレンの微生物変換
は、常法（N.Takahashi, H.Kitamura, A.Kawarada, Y.S
eta,S.Tamura and Y.Sumiki, Bull.Agric.Chem.Soc.Jap
an,19,267(1955)）に従って実施することができる。即
ち、ジベレラ属に属し、ジベレリン生産能力を有する微
生物として知られているＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊ
ｉｋｕｒｏｉを、カウレンと共に培養し，ジベレリンＡ
3 （以下、ＧＡ3 と略記する）を主成分（他の成分とし
てジベレリンＡ4 、ジベレリンＡ7 等）とした混合物を
得る方法である。
変換により得られるものである。カウレンの微生物変換
は、常法（N.Takahashi, H.Kitamura, A.Kawarada, Y.S
eta,S.Tamura and Y.Sumiki, Bull.Agric.Chem.Soc.Jap
an,19,267(1955)）に従って実施することができる。即
ち、ジベレラ属に属し、ジベレリン生産能力を有する微
生物として知られているＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊ
ｉｋｕｒｏｉを、カウレンと共に培養し，ジベレリンＡ
3 （以下、ＧＡ3 と略記する）を主成分（他の成分とし
てジベレリンＡ4 、ジベレリンＡ7 等）とした混合物を
得る方法である。
【００２４】具体的には、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕ
ｊｉｋｕｒｏｉの１０日間培養物にカウレンを２００ｍ
ｇ／ｍＬの濃度で添加し、２４℃で１０日間好気条件下
で振盪培養を行うことにより達成できる（橘 燦郎、上
村 雅彦、住本 昌之、木材誌、３５、７６１、（１９
８９））。変換物は常法により抽出し、溶媒を留去し、
カラムクロマトグラフィーで分画し、ジベレリン画分を
分取し、本発明に使用する。
ｊｉｋｕｒｏｉの１０日間培養物にカウレンを２００ｍ
ｇ／ｍＬの濃度で添加し、２４℃で１０日間好気条件下
で振盪培養を行うことにより達成できる（橘 燦郎、上
村 雅彦、住本 昌之、木材誌、３５、７６１、（１９
８９））。変換物は常法により抽出し、溶媒を留去し、
カラムクロマトグラフィーで分画し、ジベレリン画分を
分取し、本発明に使用する。
【００２５】また、これら植物ホルモンのカルス又は培
地への添加量は、新鮮カルス１ｇ当たり０．２５〜２．
０ｍｇであり、０．３〜１．５ｍｇが好ましく、０．５
〜１．０ｍｇが特に好ましい。添加量がこの範囲未満の
場合はカルスの増殖が遅くなる傾向があり、この範囲を
こえる場合はカルスの増殖を抑制する効果が出たり、カ
ルスが褐色に変色したりする傾向がある。
地への添加量は、新鮮カルス１ｇ当たり０．２５〜２．
０ｍｇであり、０．３〜１．５ｍｇが好ましく、０．５
〜１．０ｍｇが特に好ましい。添加量がこの範囲未満の
場合はカルスの増殖が遅くなる傾向があり、この範囲を
こえる場合はカルスの増殖を抑制する効果が出たり、カ
ルスが褐色に変色したりする傾向がある。
【００２６】上述の培地を用いての培養時間は１５〜３
０日間程度でよい。培養終了後、増殖したカルスよりタ
キソールを抽出し、その量を定量する。
０日間程度でよい。培養終了後、増殖したカルスよりタ
キソールを抽出し、その量を定量する。
【００２７】増殖したカルスに含まれるタキソールは、
例えば、次のようにして得ることができる。培養終了後
のカルスを凍結乾燥し、メタノール：水（１：１、ｖ／
ｖ）を溶媒として室温で抽出を行う。抽出液を減圧濃縮
し、得られた抽出物をジクロロメタン：水（１：１、ｖ
／ｖ）を用いてさらに抽出操作を行い、ジクロロメタン
可溶部を得る。得られたジクロロメタン可溶部を常法に
よりクロマトグラフィーに付すことにより、タキソール
の純品を得ることができる。
例えば、次のようにして得ることができる。培養終了後
のカルスを凍結乾燥し、メタノール：水（１：１、ｖ／
ｖ）を溶媒として室温で抽出を行う。抽出液を減圧濃縮
し、得られた抽出物をジクロロメタン：水（１：１、ｖ
／ｖ）を用いてさらに抽出操作を行い、ジクロロメタン
可溶部を得る。得られたジクロロメタン可溶部を常法に
よりクロマトグラフィーに付すことにより、タキソール
の純品を得ることができる。
【００２８】
【実施例】以下、製造例、実施例、対照例及び参考例に
より本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら
の実施例等によりなんら限定されるものではない。
より本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら
の実施例等によりなんら限定されるものではない。
【００２９】製造例１ キャラボクの茎又は葉の切片を常法により無菌化し、
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２．０ｍｇ／Ｌ培
地）及びカイネチン（０．１ｍｇ／Ｌ培地）を添加した
ＭＳ培地（以下、増殖用培地と略記する）に植えつけ、
２５℃、暗所でカルスを誘導した。得られたカルスは増
殖用培地上で１か月毎に継代して明所（２５００ルク
ス）で増殖させた。
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２．０ｍｇ／Ｌ培
地）及びカイネチン（０．１ｍｇ／Ｌ培地）を添加した
ＭＳ培地（以下、増殖用培地と略記する）に植えつけ、
２５℃、暗所でカルスを誘導した。得られたカルスは増
殖用培地上で１か月毎に継代して明所（２５００ルク
ス）で増殖させた。
【００３０】実施例１ 製造例１で得られたカルス３ｇを増殖用培地５０ｍＬに
植え継ぎ、途中で継代操作することなくカルスの培養を
１５日間行った。植え継ぎ時に、エリシターとしてキト
オリゴ糖（以下、Ｃｏｓと略記する）水溶液（０．５ｍ
ｇ／ｍＬ）を、製造例１で得られたカルス１ｇあたり１
ｍＬ、シリンジを用いてカルスに直接添加した。培養終
了後、カルスに含まれるタキソールを定量した。
植え継ぎ、途中で継代操作することなくカルスの培養を
１５日間行った。植え継ぎ時に、エリシターとしてキト
オリゴ糖（以下、Ｃｏｓと略記する）水溶液（０．５ｍ
ｇ／ｍＬ）を、製造例１で得られたカルス１ｇあたり１
ｍＬ、シリンジを用いてカルスに直接添加した。培養終
了後、カルスに含まれるタキソールを定量した。
【００３１】ここで用いるＣｏｓは常法（Yuji Kikkaw
a, Tosinori Kawada, Ikuko Furukawa and Tomoyasu Sa
kuno, J.FAC.AGRIC.TOTTORI UNIV., 26,9(1990)）に従
って調製したものを用いた。
a, Tosinori Kawada, Ikuko Furukawa and Tomoyasu Sa
kuno, J.FAC.AGRIC.TOTTORI UNIV., 26,9(1990)）に従
って調製したものを用いた。
【００３２】タキソールの定量法を以下に示す。培養終
了後のカルスを凍結乾燥し、メタノール：水（１：１、
ｖ／ｖ）を溶媒として室温で４２時間抽出操作を行っ
た。抽出液を減圧濃縮し、得られた抽出物をジクロロメ
タン：水（１：１、ｖ／ｖ）を用いてさらに抽出操作を
行い、ジクロロメタン可溶部を得た。得られたジクロロ
メタン可溶部の一部をＨＰＬＣにより分析した。あらか
じめ求めておいたタキソールの検量線より生成したタキ
ソールの量を算出した。
了後のカルスを凍結乾燥し、メタノール：水（１：１、
ｖ／ｖ）を溶媒として室温で４２時間抽出操作を行っ
た。抽出液を減圧濃縮し、得られた抽出物をジクロロメ
タン：水（１：１、ｖ／ｖ）を用いてさらに抽出操作を
行い、ジクロロメタン可溶部を得た。得られたジクロロ
メタン可溶部の一部をＨＰＬＣにより分析した。あらか
じめ求めておいたタキソールの検量線より生成したタキ
ソールの量を算出した。
【００３３】ＨＰＬＣの分析条件は次のとおりである。
カラム：Ｈｉｔａｃｈｉ Ｇｅｌ＃３０５６、溶離液：
メタノール：水（１：１、ｖ／ｖ）、流速：１ｍＬ／ｍ
ｉｎ、検出：２２７ｎｍである。なお、以下の実施例等
においても、タキソールの定量法は上記と同様である。
カラム：Ｈｉｔａｃｈｉ Ｇｅｌ＃３０５６、溶離液：
メタノール：水（１：１、ｖ／ｖ）、流速：１ｍＬ／ｍ
ｉｎ、検出：２２７ｎｍである。なお、以下の実施例等
においても、タキソールの定量法は上記と同様である。
【００３４】得られた結果を図１に示す。図１において
は、以下に示す対照例１におけるタキソール量を１００
％とし、各実施例のタキソール量をそれに対する相対値
で示した。
は、以下に示す対照例１におけるタキソール量を１００
％とし、各実施例のタキソール量をそれに対する相対値
で示した。
【００３５】さらに、ジクロロメタン可溶部を精製し、
タキソールの結晶を得た。即ち、得られたジクロロメタ
ン可溶部を濃縮し、シリカゲルカラムにかけた。つい
で、クロロホルム：メタノールの勾配溶媒系を用いて、
上記シリカゲルカラムからタキソールを含むフラクショ
ンを得た。このフラクションを分取ＴＬＣ（クロロホル
ム：水＝１０：１（ｖ／ｖ））にかけ、無色結晶のタキ
ソールを得た。
タキソールの結晶を得た。即ち、得られたジクロロメタ
ン可溶部を濃縮し、シリカゲルカラムにかけた。つい
で、クロロホルム：メタノールの勾配溶媒系を用いて、
上記シリカゲルカラムからタキソールを含むフラクショ
ンを得た。このフラクションを分取ＴＬＣ（クロロホル
ム：水＝１０：１（ｖ／ｖ））にかけ、無色結晶のタキ
ソールを得た。
【００３６】上記の方法で得られた無色結晶の物性値は
以下のとおりである。 融点：２１３〜２１５℃ ＵＶλmax ｎｍ（ｌｏｇε）：２２７（４．４７） ２７３（３．２３） ＦＤ−Ｍｓ ｍ／ｚ：８５４（Ｍ+ ＋Ｈ） ８５３（Ｍ+ ） ５６８ ２１０（１００％） １０５ ４３ ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ） ：３３００−３５００、１７３０、１７１０、１６５０ｃｍ-1 1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） ：δ １．１４（ｓ，３Ｈ） １．２２（ｓ，３Ｈ） １．６７（ｓ，３Ｈ） ２．２０（ｓ，３Ｈ） １．８０（ｓ，３Ｈ） ２．３６（ｓ，３Ｈ） ３．８０（ｄ，Ｈ） ４．２４（ｓ，２Ｈ） ４．９２（ｄ，Ｈ） ５．６８（ｄ，Ｈ） ６．２０（ｔ，Ｈ） ６．２８（ｓ，Ｈ）
以下のとおりである。 融点：２１３〜２１５℃ ＵＶλmax ｎｍ（ｌｏｇε）：２２７（４．４７） ２７３（３．２３） ＦＤ−Ｍｓ ｍ／ｚ：８５４（Ｍ+ ＋Ｈ） ８５３（Ｍ+ ） ５６８ ２１０（１００％） １０５ ４３ ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ） ：３３００−３５００、１７３０、１７１０、１６５０ｃｍ-1 1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） ：δ １．１４（ｓ，３Ｈ） １．２２（ｓ，３Ｈ） １．６７（ｓ，３Ｈ） ２．２０（ｓ，３Ｈ） １．８０（ｓ，３Ｈ） ２．３６（ｓ，３Ｈ） ３．８０（ｄ，Ｈ） ４．２４（ｓ，２Ｈ） ４．９２（ｄ，Ｈ） ５．６８（ｄ，Ｈ） ６．２０（ｔ，Ｈ） ６．２８（ｓ，Ｈ）
【００３７】実施例２ Ｃｏｓ水溶液濃度を１．０ｍｇ／ｍＬとした以外は、実
施例１と同様の操作を行った。このカルスを１５日間培
養し、カルスに含まれるタキソールを定量した。得られ
た結果を図１に示す。
施例１と同様の操作を行った。このカルスを１５日間培
養し、カルスに含まれるタキソールを定量した。得られ
た結果を図１に示す。
【００３８】実施例３ Ｃｏｓ水溶液濃度を２．０ｍｇ／ｍＬとした以外は、実
施例１と同様の操作を行った。このカルスを１５日間培
養し、カルスに含まれるタキソールを定量した。得られ
た結果を図１に示す。
施例１と同様の操作を行った。このカルスを１５日間培
養し、カルスに含まれるタキソールを定量した。得られ
た結果を図１に示す。
【００３９】対照例１ Ｃｏｓ水溶液の代わりに１ｍＬの水を添加した以外は、
実施例１と同様の操作を行った。このカルスを１５日間
培養し、カルスに含まれるタキソールを定量し、コント
ロールとした。得られた結果を図１に示す。
実施例１と同様の操作を行った。このカルスを１５日間
培養し、カルスに含まれるタキソールを定量し、コント
ロールとした。得られた結果を図１に示す。
【００４０】実施例４ 製造例１で得られたカルス３ｇを増殖用培地５０ｍＬに
植え継ぎ、途中で継代操作することなくカルスの培養を
１５日間行った。植え継ぎ時に、植物ホルモンとしてＧ
ＡS アセトン水溶液（１：１、ｖ／ｖ）（０．５ｍｇ／
ｍＬ）を、製造例１で得られたカルス１ｇあたり１ｍ
Ｌ、シリンジを用いてカルスに直接添加した。培養終了
後、カルスに含まれるタキソールを定量した。得られた
結果を図２に示す。図２においても、図１と同様、以下
に示す対照例２におけるタキソール量を１００％とし、
各実施例のタキソール量をそれに対する相対値で示し
た。
植え継ぎ、途中で継代操作することなくカルスの培養を
１５日間行った。植え継ぎ時に、植物ホルモンとしてＧ
ＡS アセトン水溶液（１：１、ｖ／ｖ）（０．５ｍｇ／
ｍＬ）を、製造例１で得られたカルス１ｇあたり１ｍ
Ｌ、シリンジを用いてカルスに直接添加した。培養終了
後、カルスに含まれるタキソールを定量した。得られた
結果を図２に示す。図２においても、図１と同様、以下
に示す対照例２におけるタキソール量を１００％とし、
各実施例のタキソール量をそれに対する相対値で示し
た。
【００４１】実施例５ ＧＡS アセトン水溶液濃度を１．０ｍｇ／ｍＬとした以
外は、実施例４と同様の操作を行った。このカルスを１
５日間培養し、カルスに含まれるタキソールを定量し
た。得られた結果を図２に示す。
外は、実施例４と同様の操作を行った。このカルスを１
５日間培養し、カルスに含まれるタキソールを定量し
た。得られた結果を図２に示す。
【００４２】実施例６ ＧＡS アセトン水溶液濃度を２．０ｍｇ／ｍＬとした以
外は、実施例４と同様の操作を行った。このカルスを１
５日間培養し、カルスに含まれるタキソールを定量し
た。得られた結果を図２に示す。
外は、実施例４と同様の操作を行った。このカルスを１
５日間培養し、カルスに含まれるタキソールを定量し
た。得られた結果を図２に示す。
【００４３】対照例２ ＧＡS アセトン水溶液の代わりに１ｍＬのアセトン水溶
液（１：１、ｖ／ｖ）を添加した以外は、実施例４と同
様の操作を行った。このカルスを１５日間培養し、カル
スに含まれるタキソールを定量し、コントロールとし
た。得られた結果を図２に示す。
液（１：１、ｖ／ｖ）を添加した以外は、実施例４と同
様の操作を行った。このカルスを１５日間培養し、カル
スに含まれるタキソールを定量し、コントロールとし
た。得られた結果を図２に示す。
【００４４】参考例１ 製造例１で得られたカルス３ｇを増殖用培地５０ｍＬに
植え継ぎ、途中で継代操作することなくカルスの培養を
１５日間行った。植え継ぎ時に、植物ホルモンとしてＧ
Ａ3 の各種濃度のアセトン水溶液（１：１、ｖ／ｖ）
（０．５、１．０又は２．０ｍｇ／ｍＬ）のいずれか
を、製造例１で得られたカルス１ｇあたり１ｍＬ、シリ
ンジを用いてカルスに直接添加した。培養終了後、カル
スに含まれるタキソールを定量した。対照としては、ア
セトン水溶液（１：１、ｖ／ｖ）を、製造例１で得られ
たカルス１ｇあたり１ｍＬ添加したものを用いた。得ら
れた結果を図３に示す。図３においても、図１と同様、
対照区におけるタキソール量を１００％とし、各添加区
のタキソール量をそれに対する相対値で示した。
植え継ぎ、途中で継代操作することなくカルスの培養を
１５日間行った。植え継ぎ時に、植物ホルモンとしてＧ
Ａ3 の各種濃度のアセトン水溶液（１：１、ｖ／ｖ）
（０．５、１．０又は２．０ｍｇ／ｍＬ）のいずれか
を、製造例１で得られたカルス１ｇあたり１ｍＬ、シリ
ンジを用いてカルスに直接添加した。培養終了後、カル
スに含まれるタキソールを定量した。対照としては、ア
セトン水溶液（１：１、ｖ／ｖ）を、製造例１で得られ
たカルス１ｇあたり１ｍＬ添加したものを用いた。得ら
れた結果を図３に示す。図３においても、図１と同様、
対照区におけるタキソール量を１００％とし、各添加区
のタキソール量をそれに対する相対値で示した。
【００４５】図１より、実施例１〜３の方法によって培
養したカルスはいずれも、コントロールのカルスよりタ
キソールを多量に得ることができることが明らかになっ
た。このことより、Ｃｏｓ添加によるタキソール収量増
大効果は絶大であることがいえる。また、図２より、実
施例４〜６の方法によって培養したカルスはいずれも、
コントロールのカルスよりタキソールを多量に得ること
ができることが明らかになった。このことより、ＧＡS
添加によるタキソール収量増大効果は顕著であるといえ
る。なお、図２と図３の比較から明らかなように、ＧＡ
S 添加の効果はＧＡ3 添加のそれよりも６０％以上大き
いことがわかる。
養したカルスはいずれも、コントロールのカルスよりタ
キソールを多量に得ることができることが明らかになっ
た。このことより、Ｃｏｓ添加によるタキソール収量増
大効果は絶大であることがいえる。また、図２より、実
施例４〜６の方法によって培養したカルスはいずれも、
コントロールのカルスよりタキソールを多量に得ること
ができることが明らかになった。このことより、ＧＡS
添加によるタキソール収量増大効果は顕著であるといえ
る。なお、図２と図３の比較から明らかなように、ＧＡ
S 添加の効果はＧＡ3 添加のそれよりも６０％以上大き
いことがわかる。
【００４６】
【発明の効果】本発明の方法によれば、大量生産が困難
であったタキソールを、従来の方法より高収率で得るこ
とができる。
であったタキソールを、従来の方法より高収率で得るこ
とができる。
【図１】図１は、添加したキトオリゴ糖量とタキソール
の収量との関係をしめすグラフである。
の収量との関係をしめすグラフである。
【図２】図２は、添加したカウレンの微生物変換により
得られるジベレリン混合物の量とタキソールの収量との
関係をしめすグラフである。
得られるジベレリン混合物の量とタキソールの収量との
関係をしめすグラフである。
【図３】図３は、添加したジベレリンＡ3 の量とタキソ
ールの収量との関係をしめすグラフである。
ールの収量との関係をしめすグラフである。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/04 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｆ Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 東 昌弘 和歌山県橋本市賢堂170 (72)発明者 久保田 実 大阪府河内長野市清見台３丁目14−10
Claims (8)
- 【請求項１】 カルスの培養によるタキソールの生産方
法において、キトオリゴ糖を用いることを特徴とするタ
キソールの培養生産法。 - 【請求項２】 キトオリゴ糖を新鮮カルス１ｇ当たり
０．２５〜１０ｍｇ用いることを特徴とする請求項１記
載の培養生産法。 - 【請求項３】 キトオリゴ糖が１量体〜９量体から選ば
れる１種以上のものであることを特徴とする請求項１又
は２記載の培養生産法。 - 【請求項４】 カルスの培養によるタキソールの生産方
法において、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏ
ｉによるカウレンの微生物変換により得られたジベレリ
ン混合物を用いることを特徴とするタキソールの培養生
産法。 - 【請求項５】 さらにＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉ
ｋｕｒｏｉによるカウレンの微生物変換により得られた
ジベレリン混合物を用いることを特徴とする請求項１記
載の培養生産法。 - 【請求項６】 Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒ
ｏｉによるカウレンの微生物変換により得られたジベレ
リン混合物を新鮮カルス１ｇ当たり０．２５〜２．０ｍ
ｇ用いることを特徴とする請求項４又は５記載の培養生
産法。 - 【請求項７】 カルスがタキソール含有植物体から誘導
されたものであることを特徴とする請求項１〜６いずれ
か記載の培養生産法。 - 【請求項８】 タキソール含有植物体がキャラボク、キ
ミノオンコ又はイチイであることを特徴とする請求項７
記載の培養生産法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6238359A JPH0870880A (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | タキソールの培養生産法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6238359A JPH0870880A (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | タキソールの培養生産法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0870880A true JPH0870880A (ja) | 1996-03-19 |
Family
ID=17029021
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6238359A Pending JPH0870880A (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | タキソールの培養生産法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0870880A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7264951B1 (en) | 1992-02-20 | 2007-09-04 | Phyton, Inc. | Enhanced production of taxol and taxanes by cell cultures of Taxus species |
| US8338143B2 (en) | 1996-05-24 | 2012-12-25 | Phyton Holdings, Llc | Enhanced production of paclitaxel and taxanes by cell cultures of Taxus species |
-
1994
- 1994-09-05 JP JP6238359A patent/JPH0870880A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7264951B1 (en) | 1992-02-20 | 2007-09-04 | Phyton, Inc. | Enhanced production of taxol and taxanes by cell cultures of Taxus species |
| US8338143B2 (en) | 1996-05-24 | 2012-12-25 | Phyton Holdings, Llc | Enhanced production of paclitaxel and taxanes by cell cultures of Taxus species |
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