JPH0862218A - リウマチ因子の測定方法 - Google Patents
リウマチ因子の測定方法Info
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- JPH0862218A JPH0862218A JP22410194A JP22410194A JPH0862218A JP H0862218 A JPH0862218 A JP H0862218A JP 22410194 A JP22410194 A JP 22410194A JP 22410194 A JP22410194 A JP 22410194A JP H0862218 A JPH0862218 A JP H0862218A
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- measuring
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 従来方法に比べて、試薬調製の手間及びコス
トを軽減することができ、それでいて正確にリウマチ因
子を測定することができる、リウマチ因子の測定方法を
提供すること。 【構成】 被検血清と未感作ラテックス粒子を混合し、
インキュベートする工程と、該混合物に緩衝剤を加えて
インキュベートする工程と、次いで得られた混合物の濁
度を検出又は測定する工程を含むリウマチ因子の測定方
法を提供した。
トを軽減することができ、それでいて正確にリウマチ因
子を測定することができる、リウマチ因子の測定方法を
提供すること。 【構成】 被検血清と未感作ラテックス粒子を混合し、
インキュベートする工程と、該混合物に緩衝剤を加えて
インキュベートする工程と、次いで得られた混合物の濁
度を検出又は測定する工程を含むリウマチ因子の測定方
法を提供した。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、リウマチ因子の測定方
法に関する。
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】リウマチ因子は、自己の免疫グロブリン
のＦｃ領域に対する自己抗体であり、リウマチ様関節炎
を引き起こす病因物質である。リウマチ因子は、従来よ
り、ＲＡテスト、ＲＡＨＡテスト、ＲＡＰＡ法、免疫比
濁法、ラテックス免疫比濁法等の方法により測定されて
いる。ＲＡテストは変性ヒトγグロブリン又は精製ヒト
γグロブリンを吸着させたラテックス粒子と患者血清中
のリウマチ因子との凝集反応をスライドガラス上で検出
するものであり、定性的なスクリーニング用として広く
用いられている。ＲＡＨＡテストは熱変性したウサギＩ
ｇＧを吸着させた固定化ヒツジ赤血球と患者血清中のリ
ウマチ因子との凝集反応を測定するものであり、ＲＡＰ
Ａ法はＲＡＨＡテストにおいて固定化ヒツジ赤血球の代
わりに抗原性の乏しいゼラチン小粒子を担体として用い
る方法である。免疫比濁法は、変性ヒトγグロブリンと
患者血清中のリウマチ因子が反応すると、不溶性の抗原
抗体結合物が形成されるので、その濁度を分光光度計で
測定することによりリウマチ因子を測定する方法であ
る。また、ラテックス免疫比濁法は、変性ヒトγグロブ
リンを感作したラテックス粒子と検体中のリウマチ因子
との凝集反応の濁度を透過光の変化として光学的に測定
定量する方法である。さらに、酵素免疫分析（ＥＩＡ）
によりリウマチ因子を測定することも行われている。
のＦｃ領域に対する自己抗体であり、リウマチ様関節炎
を引き起こす病因物質である。リウマチ因子は、従来よ
り、ＲＡテスト、ＲＡＨＡテスト、ＲＡＰＡ法、免疫比
濁法、ラテックス免疫比濁法等の方法により測定されて
いる。ＲＡテストは変性ヒトγグロブリン又は精製ヒト
γグロブリンを吸着させたラテックス粒子と患者血清中
のリウマチ因子との凝集反応をスライドガラス上で検出
するものであり、定性的なスクリーニング用として広く
用いられている。ＲＡＨＡテストは熱変性したウサギＩ
ｇＧを吸着させた固定化ヒツジ赤血球と患者血清中のリ
ウマチ因子との凝集反応を測定するものであり、ＲＡＰ
Ａ法はＲＡＨＡテストにおいて固定化ヒツジ赤血球の代
わりに抗原性の乏しいゼラチン小粒子を担体として用い
る方法である。免疫比濁法は、変性ヒトγグロブリンと
患者血清中のリウマチ因子が反応すると、不溶性の抗原
抗体結合物が形成されるので、その濁度を分光光度計で
測定することによりリウマチ因子を測定する方法であ
る。また、ラテックス免疫比濁法は、変性ヒトγグロブ
リンを感作したラテックス粒子と検体中のリウマチ因子
との凝集反応の濁度を透過光の変化として光学的に測定
定量する方法である。さらに、酵素免疫分析（ＥＩＡ）
によりリウマチ因子を測定することも行われている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
従来方法は全て、測定試薬の成分として、γグロブリン
やＩｇＧ又は抗ヒトイムノグロブリン抗体（ＥＩＡの場
合）等の生物由来物質を用いる。生物由来物質を試薬に
調製するためには、厳密に管理された工程が必要であ
り、手間とコストがかかる。また、試薬の保存にも注意
しなければならない。
従来方法は全て、測定試薬の成分として、γグロブリン
やＩｇＧ又は抗ヒトイムノグロブリン抗体（ＥＩＡの場
合）等の生物由来物質を用いる。生物由来物質を試薬に
調製するためには、厳密に管理された工程が必要であ
り、手間とコストがかかる。また、試薬の保存にも注意
しなければならない。
【０００４】従って、本発明の目的は、従来方法に比べ
て、試薬調製の手間及びコストを軽減することができ、
それでいて正確にリウマチ因子を測定することができ
る、リウマチ因子の測定方法を提供することである。
て、試薬調製の手間及びコストを軽減することができ、
それでいて正確にリウマチ因子を測定することができ
る、リウマチ因子の測定方法を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、未感作のラテックス粒子を被検血清と反応さ
せた後、緩衝液を加えると、驚くべきことに、ラテック
ス粒子の凝集が被検血清中のリウマチ因子濃度に依存し
て起きることを見出し、この現象を利用して被検血清中
のリウマチ因子の測定を行うことを想到し本発明を完成
した。
究の結果、未感作のラテックス粒子を被検血清と反応さ
せた後、緩衝液を加えると、驚くべきことに、ラテック
ス粒子の凝集が被検血清中のリウマチ因子濃度に依存し
て起きることを見出し、この現象を利用して被検血清中
のリウマチ因子の測定を行うことを想到し本発明を完成
した。
【０００６】すなわち、本発明は、被検血清と未感作ラ
テックス粒子を混合し、インキュベートする工程と、該
混合物に緩衝液を加えてインキュベートする工程と、次
いで得られた混合物の濁度を検出又は測定する工程を含
むリウマチ因子の測定方法を提供する。
テックス粒子を混合し、インキュベートする工程と、該
混合物に緩衝液を加えてインキュベートする工程と、次
いで得られた混合物の濁度を検出又は測定する工程を含
むリウマチ因子の測定方法を提供する。
【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。
【０００８】本発明の方法の第１工程では、被検血清と
未感作ラテックス粒子を混合し、インキュベートする。
ここで、未感作ラテックス粒子とは、抗原や抗体で感作
していないラテックス粒子を意味する。用いるラテック
ス粒子の粒径は、特に限定されないが、通常0.8 〜0.04
μｍ程度であり、特に0.3 〜0.08μｍが好ましい。ま
た、ラテックス粒子の濃度は、特に限定されないが、被
検血清と混合した後の混合物を基準として、通常0.025
〜0.5 重量％程度であり、特に0.05〜0.2 重量％が好ま
しい。また、ラテックス粒子の構成成分は何ら限定され
るものではなく、免疫測定の分野で広く用いられている
ポリスチレンラテックス等を好ましく用いることができ
る。
未感作ラテックス粒子を混合し、インキュベートする。
ここで、未感作ラテックス粒子とは、抗原や抗体で感作
していないラテックス粒子を意味する。用いるラテック
ス粒子の粒径は、特に限定されないが、通常0.8 〜0.04
μｍ程度であり、特に0.3 〜0.08μｍが好ましい。ま
た、ラテックス粒子の濃度は、特に限定されないが、被
検血清と混合した後の混合物を基準として、通常0.025
〜0.5 重量％程度であり、特に0.05〜0.2 重量％が好ま
しい。また、ラテックス粒子の構成成分は何ら限定され
るものではなく、免疫測定の分野で広く用いられている
ポリスチレンラテックス等を好ましく用いることができ
る。
【０００９】上記第１工程におけるインキュベーション
は、通常１５〜４０℃、好ましくは２５〜３７℃の温度
下で２〜１０分間、好ましくは３〜５分間行う。
は、通常１５〜４０℃、好ましくは２５〜３７℃の温度
下で２〜１０分間、好ましくは３〜５分間行う。
【００１０】続く第２工程では、上記被検血清とラテッ
クス粒子を混合した混合物に緩衝剤を加え、インキュベ
ートする。緩衝剤は、塩化ナトリウム等の塩を含んでい
ることが好ましく、また、緩衝液として加えることが操
作上便利である。緩衝液のｐＨは７〜９が好ましく、さ
らに好ましくは７．５〜８．５である。加える緩衝液の
量は、混合物のｐＨをほぼ一定に保持できる程度の量で
あれば特に限定されるものではなく、例えば、後述の実
施例において用いている０．０５Ｍグリシン緩衝液であ
れば、上記混合物とほぼ等量加えればよい。また、緩衝
液の種類は何ら限定されるものではなく、ｐＨをほぼ一
定に保持できる、通常用いられている緩衝液であればい
ずれのものであってもよい。例えば、グリシン緩衝液、
トリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液等を挙
げることができるがこれらに限定されるものではない。
塩濃度は０．１５〜０．４Ｍ程度のものが好ましく用い
られる。第２工程におけるインキュベートの条件も特に
限定されないが、第１工程の説明で記載した条件が好ま
しい。
クス粒子を混合した混合物に緩衝剤を加え、インキュベ
ートする。緩衝剤は、塩化ナトリウム等の塩を含んでい
ることが好ましく、また、緩衝液として加えることが操
作上便利である。緩衝液のｐＨは７〜９が好ましく、さ
らに好ましくは７．５〜８．５である。加える緩衝液の
量は、混合物のｐＨをほぼ一定に保持できる程度の量で
あれば特に限定されるものではなく、例えば、後述の実
施例において用いている０．０５Ｍグリシン緩衝液であ
れば、上記混合物とほぼ等量加えればよい。また、緩衝
液の種類は何ら限定されるものではなく、ｐＨをほぼ一
定に保持できる、通常用いられている緩衝液であればい
ずれのものであってもよい。例えば、グリシン緩衝液、
トリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液等を挙
げることができるがこれらに限定されるものではない。
塩濃度は０．１５〜０．４Ｍ程度のものが好ましく用い
られる。第２工程におけるインキュベートの条件も特に
限定されないが、第１工程の説明で記載した条件が好ま
しい。
【００１１】緩衝液にはまた、ラテックス粒子の非特異
的凝集を防止するために、例えばTween 20（登録商標）
のような界面活性剤を加えることができる。この場合、
界面活性剤の濃度は特に限定されないが、被検血清と混
合後の混合物を基準として、通常０．０２〜０．１重量
％程度である。
的凝集を防止するために、例えばTween 20（登録商標）
のような界面活性剤を加えることができる。この場合、
界面活性剤の濃度は特に限定されないが、被検血清と混
合後の混合物を基準として、通常０．０２〜０．１重量
％程度である。
【００１２】また、緩衝液に、凝集増幅剤として、ヒド
ロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体を
添加することができる。この場合、加えるセルロース誘
導体の濃度は、特に限定されないが、被検血清と混合後
の混合物を基準として、通常０．０２〜０．１重量％程
度である。
ロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体を
添加することができる。この場合、加えるセルロース誘
導体の濃度は、特に限定されないが、被検血清と混合後
の混合物を基準として、通常０．０２〜０．１重量％程
度である。
【００１３】続く第３工程では、上記インキュベーショ
ン後の混合物の濁度を検出又は測定する。この工程は、
従来のラテックス凝集法と同様であり、目視で、あるい
は分光光度計を用いて容易に行うことができる。測定波
長は特に限定されないが、６００ｎｍ以上の波長が好ま
しい。
ン後の混合物の濁度を検出又は測定する。この工程は、
従来のラテックス凝集法と同様であり、目視で、あるい
は分光光度計を用いて容易に行うことができる。測定波
長は特に限定されないが、６００ｎｍ以上の波長が好ま
しい。
【００１４】上記第２工程のインキュベーションを行う
と、被検血清中にリウマチ因子が含まれる場合には、ラ
テックス粒子の凝集が起きる。これは、被検血清自体の
中に含まれるＩｇＧ等の免疫グロブリンが先ず上記第１
工程においてラテックス粒子の表面に吸着され、上記第
２工程において緩衝剤の存在下で被検血清中のリウマチ
因子とラテックス粒子とが反応して凝集が起きるものと
考えられる。従って、上記第３工程において吸光度を測
定し、それによってラテックス粒子の凝集を測定するこ
とにより、被検血清中のリウマチ因子を測定することが
できる。ラテックス粒子の凝集は、被検血清中に含まれ
るリウマチ因子の濃度に依存して起きる。すなわち、被
検血清中のリウマチ因子の濃度が高いほど測定される吸
光度は大きくなる。従って、本発明の測定方法は、定性
測定と定量測定の両方を包含する。
と、被検血清中にリウマチ因子が含まれる場合には、ラ
テックス粒子の凝集が起きる。これは、被検血清自体の
中に含まれるＩｇＧ等の免疫グロブリンが先ず上記第１
工程においてラテックス粒子の表面に吸着され、上記第
２工程において緩衝剤の存在下で被検血清中のリウマチ
因子とラテックス粒子とが反応して凝集が起きるものと
考えられる。従って、上記第３工程において吸光度を測
定し、それによってラテックス粒子の凝集を測定するこ
とにより、被検血清中のリウマチ因子を測定することが
できる。ラテックス粒子の凝集は、被検血清中に含まれ
るリウマチ因子の濃度に依存して起きる。すなわち、被
検血清中のリウマチ因子の濃度が高いほど測定される吸
光度は大きくなる。従って、本発明の測定方法は、定性
測定と定量測定の両方を包含する。
【００１５】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。
【００１６】実施例１ リウマチ因子高値（ＲＡＰＡ法）検体（試料Ａ：１０２
４０倍、試料Ｂ：２５６０倍、試料Ｃ：１２８０倍）を
陰性検体で希釈してｘ２希釈系列を作り本発明の方法に
より測定を行った。すなわち、被検血清９μｌに０．１
％ラテックス（粒径０．１２μｍ）３００μｌを加えて
３７℃、１０分間インキュベートした。ＧＢＳ−Ｔ
（０．０５Ｍグリシン−０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ
８．２、０．２％Tween 20（登録商標））３００μｌを
加えてさらに３７℃、１０分間インキュベートした。日
立ダブルビーム分光光度計により６６０ｎｍにおける吸
光度を測定した。結果を図１に示す。
４０倍、試料Ｂ：２５６０倍、試料Ｃ：１２８０倍）を
陰性検体で希釈してｘ２希釈系列を作り本発明の方法に
より測定を行った。すなわち、被検血清９μｌに０．１
％ラテックス（粒径０．１２μｍ）３００μｌを加えて
３７℃、１０分間インキュベートした。ＧＢＳ−Ｔ
（０．０５Ｍグリシン−０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ
８．２、０．２％Tween 20（登録商標））３００μｌを
加えてさらに３７℃、１０分間インキュベートした。日
立ダブルビーム分光光度計により６６０ｎｍにおける吸
光度を測定した。結果を図１に示す。
【００１７】図１に示されるように、３種類の検体は、
適切な希釈率の範囲内では、力価が高い試料ほど吸光度
が高く、また希釈率が低いほど吸光度が高くなってい
る。従って、本発明の方法により測定される吸光度は試
料中のリウマチ因子の濃度に依存して変化しており、本
発明の方法によりリウマチ因子を測定することができる
ことが証明された。
適切な希釈率の範囲内では、力価が高い試料ほど吸光度
が高く、また希釈率が低いほど吸光度が高くなってい
る。従って、本発明の方法により測定される吸光度は試
料中のリウマチ因子の濃度に依存して変化しており、本
発明の方法によりリウマチ因子を測定することができる
ことが証明された。
【００１８】実施例２ 被検血清（ＲＡＰＡ法での測定値が２５６０倍の上記試
料Ｂ）を陰性血清で希釈してｘ２希釈系列を作った。こ
の血清９μｌに熱変性ヒトＩｇＧ（ＡＨＧ）９μｌを加
え、３７℃、１０分間インキュベートした。そして、
０．１％ラテックス（粒径０．１２μｍ）３００μｌ加
え、３７℃、１０分間インキュベートした。次いで３０
０μｌのＧＢＳ−Ｔを加え、３７℃、１０分間インキュ
ベートし、６６０ｎｍにおける吸光度を測定した。ま
た、ＡＨＧに代えてヒトＩｇＧを用いて上記と同様な操
作を行った。なお、ＡＨＧとは、精製ヒトＩｇＧ（５ｍ
ｇ／ｍｌ）を６３℃、１５分間加熱し、氷水中に急速冷
却後、４℃、一晩放置したもので、それ以上の精製はし
ていないものである。この加熱変性を行っていないもの
が上記ヒトＩｇＧである。結果を図２に示す。
料Ｂ）を陰性血清で希釈してｘ２希釈系列を作った。こ
の血清９μｌに熱変性ヒトＩｇＧ（ＡＨＧ）９μｌを加
え、３７℃、１０分間インキュベートした。そして、
０．１％ラテックス（粒径０．１２μｍ）３００μｌ加
え、３７℃、１０分間インキュベートした。次いで３０
０μｌのＧＢＳ−Ｔを加え、３７℃、１０分間インキュ
ベートし、６６０ｎｍにおける吸光度を測定した。ま
た、ＡＨＧに代えてヒトＩｇＧを用いて上記と同様な操
作を行った。なお、ＡＨＧとは、精製ヒトＩｇＧ（５ｍ
ｇ／ｍｌ）を６３℃、１５分間加熱し、氷水中に急速冷
却後、４℃、一晩放置したもので、それ以上の精製はし
ていないものである。この加熱変性を行っていないもの
が上記ヒトＩｇＧである。結果を図２に示す。
【００１９】図２に示されるように、いずれの場合も希
釈率が大きくなるほど吸光度が低くなっている。リウマ
チ因子をヒトＩｇＧで吸収した場合は、図１の何も吸収
していない場合と同様の吸光度を示しているが、ＡＨＧ
で吸収した場合は、吸光度が大きく減少している。これ
はリウマチ因子がヒトＩｇＧよりもＡＨＧに対してよく
結合するという従来からの知見と一致している。よっ
て、本発明の方法によりリウマチ因子の測定ができるこ
とがここでも証明された。
釈率が大きくなるほど吸光度が低くなっている。リウマ
チ因子をヒトＩｇＧで吸収した場合は、図１の何も吸収
していない場合と同様の吸光度を示しているが、ＡＨＧ
で吸収した場合は、吸光度が大きく減少している。これ
はリウマチ因子がヒトＩｇＧよりもＡＨＧに対してよく
結合するという従来からの知見と一致している。よっ
て、本発明の方法によりリウマチ因子の測定ができるこ
とがここでも証明された。
【００２０】実施例３ 被検血清として、試料Ｂに代えて、ＲＡＰＡ法での測定
値が１２８０倍の上記試料Ｃを用いることを除き実施例
２と同じ操作を行った。結果を図３に示す。
値が１２８０倍の上記試料Ｃを用いることを除き実施例
２と同じ操作を行った。結果を図３に示す。
【００２１】図３に示されるように、図２と同様なパタ
ーンが得られた。また、図２の結果と比較すると、ＲＡ
ＰＡ法による力価が低い図３の試料Ｃの方が吸光度が低
くなっている。よって、本発明によりリウマチ因子の測
定ができることがここでも証明された。
ーンが得られた。また、図２の結果と比較すると、ＲＡ
ＰＡ法による力価が低い図３の試料Ｃの方が吸光度が低
くなっている。よって、本発明によりリウマチ因子の測
定ができることがここでも証明された。
【００２２】実施例４ 本発明の方法により測定された吸光度とＥＩＡ法による
測定値（Ｕ／ｍｌ）を比較した。この実施例では、本発
明の方法による測定は次のように行った。被検血清９μ
ｌに０．１％ラテックス（粒径０．１２μｍ）３００μ
ｌを加え、２５℃、１０分間インキュベートした。そし
て３００μｌのＧＢＳ−Ｔを加え、さらに２５℃、１０
分間インキュベートし、日立ダブルビーム分光光度計に
より６００ｎｍにおける吸光度を測定した。
測定値（Ｕ／ｍｌ）を比較した。この実施例では、本発
明の方法による測定は次のように行った。被検血清９μ
ｌに０．１％ラテックス（粒径０．１２μｍ）３００μ
ｌを加え、２５℃、１０分間インキュベートした。そし
て３００μｌのＧＢＳ−Ｔを加え、さらに２５℃、１０
分間インキュベートし、日立ダブルビーム分光光度計に
より６００ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００２３】また、ＥＩＡ法は次のように行った。９６
穴プレートの各ウェルにウサギＩｇＧ（１０μｇ／ｍ
ｌ）を１００μｌずつ分注し、４℃、一晩静置した。Ｐ
ＢＳ−Ｔｗｅｅｎで２回洗浄後、１％ＢＳＡ加ＰＢＳ−
Ｔｗｅｅｎを１００μｌ分注し、室温１時間静置した。
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで２回洗浄後、各ウェルにスタンダ
ード、４１倍希釈したコントロール及び被検血清を各１
００μｌ分注し、室温で１時間静置した。ＰＢＳ−Ｔｗ
ｅｅｎにて２回洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩ
ｇＭ抗体（カペル社製）１００μｌ加え、室温１時間静
置した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎにて３回洗浄後、オルトフ
ェニレンジアミン溶液各１００μｌ加え、室温２０分間
静置し、反応を停止させた。波長４９０ｎｍにて比色定
量した。スタンダードの吸光度からリウマチ因子のＵ／
ｍｌを求めた。結果を図４に示す。
穴プレートの各ウェルにウサギＩｇＧ（１０μｇ／ｍ
ｌ）を１００μｌずつ分注し、４℃、一晩静置した。Ｐ
ＢＳ−Ｔｗｅｅｎで２回洗浄後、１％ＢＳＡ加ＰＢＳ−
Ｔｗｅｅｎを１００μｌ分注し、室温１時間静置した。
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで２回洗浄後、各ウェルにスタンダ
ード、４１倍希釈したコントロール及び被検血清を各１
００μｌ分注し、室温で１時間静置した。ＰＢＳ−Ｔｗ
ｅｅｎにて２回洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩ
ｇＭ抗体（カペル社製）１００μｌ加え、室温１時間静
置した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎにて３回洗浄後、オルトフ
ェニレンジアミン溶液各１００μｌ加え、室温２０分間
静置し、反応を停止させた。波長４９０ｎｍにて比色定
量した。スタンダードの吸光度からリウマチ因子のＵ／
ｍｌを求めた。結果を図４に示す。
【００２４】図４に示されるように、本発明の方法によ
る吸光度とＥＩＡ法による測定結果は極めて高い相関関
係（相関係数：０．９５９）を示した。ＥＩＡ法は精度
良く濃度測定が可能な方法である。よって、本発明の方
法により、リウマチ因子の定量が可能であることが証明
された。
る吸光度とＥＩＡ法による測定結果は極めて高い相関関
係（相関係数：０．９５９）を示した。ＥＩＡ法は精度
良く濃度測定が可能な方法である。よって、本発明の方
法により、リウマチ因子の定量が可能であることが証明
された。
【００２５】実施例５ 被検血清１０μｌに０．１％ラテックス２００μｌを加
え、３７℃で１０分間インキュベートした。被検血清と
しては、ＲＡＰＡ法による測定値が６４０倍の試料５、
同じく６４０倍の試料６、８０倍の試料７及び陰性血清
の試料８を用いた。次に緩衝液としてＧＢＳ−Ｔ’
（０．０５Ｍグリシン−０．４Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ８．
２、０．２％Tween 20（登録商標））２００μｌを加
え、３７℃、１０分間インキュベートし、ベックマン分
光光度計（ＤＵ６４０）で６６０ｎｍにおける吸光度を
測定した。また、対照として、上記緩衝液に代えて何も
加えることなく同じ操作を行った（すなわち、被検血清
とラテックスを混合後、３７℃で２０分間インキュベー
ト）（対照１）。さらに、対照として、上記緩衝液ＧＢ
Ｓ−Ｔ’に代えて、精製水２００μｌ（対照２）又は
０．２％ Tween 20 含有精製水２００μｌ（対照３）を
加えて同様な操作を行った。結果を図５に示す。図５
中、○は試料５についての結果を、▲は試料６について
の結果を、△は試料７についての結果を、●は試料８に
ついての結果を示す。また、横軸の数字１は対照１につ
いての結果を、２は対照２についての結果を、３は対照
３についての結果を、４は本発明の方法による結果を示
す。
え、３７℃で１０分間インキュベートした。被検血清と
しては、ＲＡＰＡ法による測定値が６４０倍の試料５、
同じく６４０倍の試料６、８０倍の試料７及び陰性血清
の試料８を用いた。次に緩衝液としてＧＢＳ−Ｔ’
（０．０５Ｍグリシン−０．４Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ８．
２、０．２％Tween 20（登録商標））２００μｌを加
え、３７℃、１０分間インキュベートし、ベックマン分
光光度計（ＤＵ６４０）で６６０ｎｍにおける吸光度を
測定した。また、対照として、上記緩衝液に代えて何も
加えることなく同じ操作を行った（すなわち、被検血清
とラテックスを混合後、３７℃で２０分間インキュベー
ト）（対照１）。さらに、対照として、上記緩衝液ＧＢ
Ｓ−Ｔ’に代えて、精製水２００μｌ（対照２）又は
０．２％ Tween 20 含有精製水２００μｌ（対照３）を
加えて同様な操作を行った。結果を図５に示す。図５
中、○は試料５についての結果を、▲は試料６について
の結果を、△は試料７についての結果を、●は試料８に
ついての結果を示す。また、横軸の数字１は対照１につ
いての結果を、２は対照２についての結果を、３は対照
３についての結果を、４は本発明の方法による結果を示
す。
【００２６】図５に示されるように、緩衝液を加えない
対照１〜３では試料中のリウマチ因子の濃度にかかわり
なく吸光度がほぼ同じであり、リウマチ因子濃度の測定
ができないことがわかる。これに対し、緩衝液を加えた
本発明の方法では、吸光度がリウマチ因子濃度依存的に
変化し、リウマチ因子の測定が可能であることがわか
る。
対照１〜３では試料中のリウマチ因子の濃度にかかわり
なく吸光度がほぼ同じであり、リウマチ因子濃度の測定
ができないことがわかる。これに対し、緩衝液を加えた
本発明の方法では、吸光度がリウマチ因子濃度依存的に
変化し、リウマチ因子の測定が可能であることがわか
る。
【００２７】
【発明の効果】上述のように、本発明の方法によれば、
試薬として未感作ラテックス粒子を用いることにより被
検血清中のリウマチ因子が精度良く測定できる。本発明
の方法によれば、試薬として抗体のような生物由来物質
成分を用いないので、試薬の調製が従来に比較してはる
かに簡便でコストも安く、また、試薬の保存も容易にな
った。
試薬として未感作ラテックス粒子を用いることにより被
検血清中のリウマチ因子が精度良く測定できる。本発明
の方法によれば、試薬として抗体のような生物由来物質
成分を用いないので、試薬の調製が従来に比較してはる
かに簡便でコストも安く、また、試薬の保存も容易にな
った。
【図１】種々の力価のリウマチ因子を含む被検血清を系
列希釈したものを試料として本発明の方法を行って得ら
れた、被検血清の希釈率と測定された吸光度の関係を示
す図である。
列希釈したものを試料として本発明の方法を行って得ら
れた、被検血清の希釈率と測定された吸光度の関係を示
す図である。
【図２】リウマチ因子を含む被検血清を系列希釈した試
料をヒトＩｇＧ又はＡＨＧで吸収後、本発明の方法によ
り吸光度を測定して得られた希釈率と測定された吸光度
の関係を示す図である。
料をヒトＩｇＧ又はＡＨＧで吸収後、本発明の方法によ
り吸光度を測定して得られた希釈率と測定された吸光度
の関係を示す図である。
【図３】リウマチ因子を含む被検血清を系列希釈した試
料をヒトＩｇＧ又はＡＨＧで吸収後、本発明の方法によ
り吸光度を測定して得られた希釈率と測定された吸光度
の関係を示す図である。
料をヒトＩｇＧ又はＡＨＧで吸収後、本発明の方法によ
り吸光度を測定して得られた希釈率と測定された吸光度
の関係を示す図である。
【図４】本発明の方法により測定された吸光度とＥＩＡ
法により測定されたリウマチ因子濃度の関係を示す図で
ある。
法により測定されたリウマチ因子濃度の関係を示す図で
ある。
【図５】種々の力価の被検血清につき、本発明の方法又
は本発明の方法における緩衝液を加えない対照方法によ
り測定した吸光度を示す図である。
は本発明の方法における緩衝液を加えない対照方法によ
り測定した吸光度を示す図である。
Claims (1)
- 【請求項１】 被検血清と未感作ラテックス粒子を混合
し、インキュベートする工程と、該混合物に緩衝剤を加
えてインキュベートする工程と、次いで得られた混合物
の濁度を検出又は測定する工程を含むリウマチ因子の測
定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22410194A JPH0862218A (ja) | 1994-08-25 | 1994-08-25 | リウマチ因子の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22410194A JPH0862218A (ja) | 1994-08-25 | 1994-08-25 | リウマチ因子の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0862218A true JPH0862218A (ja) | 1996-03-08 |
Family
ID=16808565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22410194A Pending JPH0862218A (ja) | 1994-08-25 | 1994-08-25 | リウマチ因子の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0862218A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4950406B2 (ja) * | 2000-07-27 | 2012-06-13 | 協和メデックス株式会社 | 不溶性担体粒子を用いる免疫測定方法およびその試薬 |
-
1994
- 1994-08-25 JP JP22410194A patent/JPH0862218A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4950406B2 (ja) * | 2000-07-27 | 2012-06-13 | 協和メデックス株式会社 | 不溶性担体粒子を用いる免疫測定方法およびその試薬 |
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