JPH0856655A - 細胞致死剤および細胞死抑制剤 - Google Patents

細胞致死剤および細胞死抑制剤

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JPH0856655A
JPH0856655A JP6192403A JP19240394A JPH0856655A JP H0856655 A JPH0856655 A JP H0856655A JP 6192403 A JP6192403 A JP 6192403A JP 19240394 A JP19240394 A JP 19240394A JP H0856655 A JPH0856655 A JP H0856655A
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cell death
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cystine
cell
substance
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Hideo Namiki
秀男 並木
Takeshi Kurita
武 栗田
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Frontier Co Ltd
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Frontier Co Ltd
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    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 細胞死を誘導させるための細胞致死剤および
細胞死を抑制するための細胞死抑制剤を提供することを
目的する。 【構成】 血液中に細胞死誘導活性物質（血清アルブミ
ン、ヘモグロビン、グリシン、グルタミン酸）を加える
か、または血液中に細胞致死剤物質（システイン、シス
チン等のＳＨアミノ酸とチオール基をもった他の物質、
トリプトファン）を加える。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は細胞死を誘導するための
細胞致死剤及び細胞死を抑制するための細胞致死抑制剤
に関する。
【０００２】
【従来の技術】一般に、細胞培養には、血清が添加され
るが、この際血清濃度を一定以上に上昇させると、培養
液が細胞に対して毒性を有するようになる。これは、血
清中に細胞に対する毒性因子が存在することを意味して
いる。血清はアルブミン、グロブリン等の蛋白と、Ｎａ
Ｃｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ2 等の塩と、ビタミン類と、グ
リシン、シスチン、システィン、アラニン、トリプトフ
ァン等２０種以上からなるアミノ酸等からなる。これま
で血清中の各種成分のそれぞれの機能については十分な
解折がなされておらず、本件出願人は特願平２−２７０
７１９号（平成２年１０月９日付出願）において血清中
にシステンィン、シスチン等のアミノ酸の添加が血清中
の毒性効果を減衰させ、細胞培養を促進させることを開
示した。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来は
血清中の毒性因子については全く解明されておらず、更
に、毒性を抑制する成分の解折も不十分であった。
【０００４】本発明は、かかる点に鑑み、血清中の各成
分の機能について解折し、それらの解折に基づいて、細
胞死を誘導させるための細胞致死剤及び細胞死を抑制す
るための細胞死抑制剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明は、細胞
致死剤として、血液中に細胞死誘導活性物質（血清アル
ブミン、ヘモグロビン、グリシン、グルタミン酸）を加
えた。更に、細胞死抑制剤として、血液中に細胞死救済
物質（システイン、シスチン等のＳＨアミノ酸とチオー
ル基をもった他の物質、トリプトファン）を加えた。
【０００６】
【作用】血清中の細胞死誘導活性物質は血清アルブミ
ン、ヘモグロビン、クリシン、グルタミン酸であり、培
養液中にこれら成分が組み合わされると、血清が細胞死
を誘導し、例えば、癌細胞が発見されたときに、これら
を投与すると、癌細胞を致死させるか、あるいはその増
殖を抑制させることができる。
【０００７】逆に、血清中の細胞死救済物質は、システ
ィン、シスチン等のＳＨアミノ酸、チオール基を持った
他の物質、トリプトファンであり、これらを血清中に更
に加えると血清中に存在する細胞に対する毒性因子の毒
性効果が失われ細胞死が抑制される。
【０００８】また、脳出血、眼底出血の救急用として点
滴材料中に前記細胞死救済物質を加えたり、それを患者
の脳脊髄中に投与したり、患部に直接供給すると脳細胞
の死が有効に救済できる。
【０００９】
【実施例】本件出願人は前記先の出願において、システ
ィン（ＣｙｓＨ）、シスチン（Ｃｙｓ）は著しく細胞培
養に効果があり、ドリプトファン（Ｔｒｐ）は細胞の死
滅を防止することを開示した。更に、これに関し、実験
を繰り返した。その結果を図１に示す。実験において
は、ＴＩＧ−１細胞（ヒト胎児肺繊維細胞）を９６穴マ
ルチプレートに一穴あたり１×１０4 個で播き込み一晩
培養後、各種試薬を含んだＦＢＳ（牛胎児血清）に交換
した。図１における横軸は各種試薬を示している。ここ
において、Ｌ−ＣＹＳＣＹＳはＬ−シスチン、Ｄ−ＣＹ
ＳＣＹＳはＤ−シスチン、Ｌ−ＣＹＳはＬ−システィ
ン、Ｄ−ＣＹＳはＤ−システィン、ＧＳＨは還元型グル
タチオン、ＧＳＳＧは酸化型グルタチオン、ＤＬ−ＨＣ
はＤＬ−ホモシスチン、ＮＡＣＮ−アセチル−Ｌ−シス
ティン、２ＭＥはメルカプトエタノール、ＴＧはチオグ
リコール酸、ＤＴＴはジチオスレイト、ＤＴＮＢはジチ
オビスニトロ安息香酸、ＤＴＮはジチオナイト、Ｌ−Ｔ
ＲＰはＬ−トリプトファンを示す。培地交換後６日後に
細胞密度（縦軸）を色素溶出法により求めた。各種試薬
は、０．０１［ｍＭ］、０．１［ｍＭ］、１．０［ｍ
Ｍ］および１０［ｍＭ］の４段階に含有量を変化させて
おり、各グラフのバーは標準誤差を示し、各グラフは６
穴の測定平均を示している。この実験結果によれば、僅
かに１［ｍＭ］加えても細胞死を抑制する効果の大きな
ものは、Ｌ−ＣＹＳＣＹＳ、Ｄ−ＣＹＳＣＹＳ、Ｌ−Ｃ
ＹＳ、２−ＭＥ、ＴＧおよびＤＴＮであり、その他の試
薬も細胞死の抑制に寄与することが判明した。これら試
薬はいずれもＳＨ基を有しており、ＳＨアミノ酸とチオ
ール基を持つ他の物質が細胞死の抑制をしていることが
判る。
【００１０】次に、血清中に存在する細胞死誘導活性物
質についての実験結果を述べる。低分子画分に含まれる
細胞死誘導活性の精製のために低分子画分を凍結乾燥
し、不溶化画分を遠心分離により除いた。再び凍結乾燥
してアセトニトリル洗浄ををおこない、ミリＱ水に溶解
し、回収率１００％とした場合に元の量に換算して約２
０倍濃度のサンプル溶液を作成、０．２μｍのフィルタ
ーで濾過した。この１０倍サンプル液で１％ＦＢＳ、１
０％ＭＥＭ（最小限必要培地）を含むハンクス液に１０
％加えて２４穴マルチプレートに一穴当り５×１０3 で
播き込まれたＴＩＧ−１細胞で培養した。４８時間後に
色素溶出法で細胞密度を測定した。各試薬は１［ｍＭ］
および１０［ｍＭ］の２種類の量が加えられ、これらに
システィン（ＣＹＳ）を加えた場合においても細胞密度
が測定された。
【００１１】これによれば、１［ｍＭ］でも細胞致死作
用のあったものはグリシン、グルタミン酸およびトリプ
トファンであり、１０［ｍＭ］にすると、フェニルアラ
ニン、アスパラギン酸、アスパラギンおよびグルタミン
が細胞致死作用を果たし、致死活性はなかったが、細胞
の培養制御をしたものは、チロシン、セリンおよびグリ
シルグリシンであった。その他ヘモグロビンも同様の作
用を有することが判明した。
【００１２】
【発明の効果】本発明は以上のように構成したので、血
液中に細胞死誘導活性物質を加え、また、細胞死救済物
質を加えることにより、細胞致死剤または細胞死抑制剤
としての効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】細胞死救済物質についての実験効果を示すグラ
フである。
【図２】細胞死誘導活性物質についての実験効果を示す
グラフである。

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 血液中に細胞死誘導活性物質（血清アル
    ブミン、ヘモグロビン、グリシン、グルタミン酸）を更
    に加えたことを特徴とする細胞致死剤。
  2. 【請求項２】 血液中に細胞死救済物質（システイン、
    シスチン等のＳＨアミノ酸とチオール基をもった他の物
    質、トリプトファン）を加えたことを特徴とする細胞死
    抑制剤。
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US5792479A (en) 1998-08-11
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